RU2071350C1 - Peptide composition for antibody assay to hepatitis c virus - Google Patents
Peptide composition for antibody assay to hepatitis c virus Download PDFInfo
- Publication number
- RU2071350C1 RU2071350C1 RU94005164A RU94005164A RU2071350C1 RU 2071350 C1 RU2071350 C1 RU 2071350C1 RU 94005164 A RU94005164 A RU 94005164A RU 94005164 A RU94005164 A RU 94005164A RU 2071350 C1 RU2071350 C1 RU 2071350C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pro
- arg
- hepatitis
- peptide
- virus
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике гепатита С. The invention relates to medicine, namely to the diagnosis of hepatitis C.
В настоящее время для диагностики гепатита С используют иммуноферментный анализ (ИФА), позволяющий обнаружить в сыворотке или плазме крови пациентов антитела к белкам вируса. Основным действующим началом в этих тест-системах являются полипептиды. В частности, используется полипептид С-100-3, состоящий из 363 аминокислотных остатков, который разработан фирмами "Ortho" и "Abbott" (1). Currently, for the diagnosis of hepatitis C, an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is used to detect antibodies to virus proteins in the serum or plasma of patients. The main active principle in these test systems are polypeptides. In particular, the C-100-3 polypeptide consisting of 363 amino acid residues, which was developed by Ortho and Abbott (1), is used.
К недостаткам полипептида С-100-3 относятся трудность его получения, а также низкая специфичность, позволяющая диагностировать заболевание только в 50% случаев (2), что обусловлено существованием нескольких генотипов вируса гепатита С, отличающихся по структуре своих геномов на 60-70%
Наиболее близким к заявляемому являются полипептиды, разработанные фирмой "Сhiron" (3). Пептиды состоят из 70-90 аминокислот и позволяют повысить специфичность анализа до 60-70%
Недостатком указанных полипептидов является трудность синтеза и низкая специфичность диагностикума на их основе, связанная с тем, что структура пептидов отвечает последовательности только некоторых, хотя и наиболее распространенных генотипов вируса, вызывающих гепатит С. Кроме того, получение полипептидов длиною 70-90 аминокислотных остатков связано с большими технологическими трудностями, низким выходом, значительной вариабельностью их физико-химических и биологических свойств и высокой себестоимостью.The disadvantages of the C-100-3 polypeptide are the difficulty of its preparation, as well as low specificity, which allows diagnosing the disease in only 50% of cases (2), due to the existence of several hepatitis C virus genotypes that differ in the structure of their genomes by 60-70%
Closest to the claimed are polypeptides developed by the company "Chiron" (3). Peptides consist of 70-90 amino acids and can increase the specificity of the analysis to 60-70%
The disadvantage of these polypeptides is the difficulty of synthesis and the low specificity of the diagnosticum based on them, due to the fact that the structure of the peptides corresponds to the sequence of only some, although the most common virus genotypes that cause hepatitis C. In addition, the production of polypeptides with a length of 70-90 amino acid residues is associated with great technological difficulties, low yield, significant variability of their physico-chemical and biological properties and high cost.
Задачей, стоящей перед авторами, являлось создание более эффективной пептидной композиции, обладающей более высокой селективностью. The challenge facing the authors was to create a more effective peptide composition with higher selectivity.
Было найдено, что данная задача достигается применением смесей пептидов:
X(I) H-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Glu-Arg-Lys-Thr-Arg-Atg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg- Pro-Gln-Asp-Val-OH,
X(II) H-Ser-Gln-Pro-Arg-Gly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Ala-Ser-Arg-Arg- Pro-Glu=Gly-Arg-OH,
X(III) H-Tyr-Ser-Ser-Met-Pro-Pro-Leu-Glu-Gly-Glu-Pro-Gly-Asp-Pro-Asp-Leu- Ser-Asp-Gly-Ser-OH.It was found that this task is achieved by using mixtures of peptides:
X (I) H-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Glu-Arg-Lys-Thr-Arg-Atg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Asp-Val-OH,
X (II) H-Ser-Gln-Pro-Arg-Gly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Ala-Ser-Arg-Arg-Pro-Glu = Gly-Arg-OH,
X (III) H-Tyr-Ser-Ser-Met-Pro-Pro-Leu-Glu-Gly-Glu-Pro-Gly-Asp-Pro-Asp-Leu-Ser-Asp-Gly-Ser-OH.
Лучшие результаты достигаются при применении композиции указанных трех пептидов в весовом соотношении I:II:III 2,5-3,5:0,8-1,2:8-10. Такое соотношение полипептидов, как установили авторы, определяется статистическим анализом соотношения отдельных генотипов вирусов и близко к соотношение I:II:III 3:1:9 и определяется особенностями, связанными с группами риска обследуемых. The best results are achieved when applying the composition of these three peptides in a weight ratio of I: II: III 2.5-3.5: 0.8-1.2: 8-10. This ratio of polypeptides, as the authors established, is determined by a statistical analysis of the ratio of individual genotypes of viruses and is close to the ratio of I: II: III 3: 1: 9 and is determined by the characteristics associated with the risk groups of the subjects.
Указанная композиция является дальнейшим усовершенствованием предыдущей разработки авторов (заявка изобретения "Пептиды, взаимодействующие с антителами к вирусу гепатита С", N 93044257 от 8.09.93 г.), позволяющим создать более универсальные пространственные структуры, способные взаимодействовать с антителами к различным генотипам вируса гепатита С. Предложенная композиция обеспечивает практически 100% выявляемость антител к различным генотипам вируса гепатита С. The specified composition is a further improvement of the previous development of the authors (application of the invention "Peptides interacting with antibodies to hepatitis C virus", N 93044257 from 8.09.93), which allows to create more universal spatial structures that can interact with antibodies to different genotypes of hepatitis C virus The proposed composition provides almost 100% detectability of antibodies to various genotypes of hepatitis C.
Пептиды X(I)-(III) получают общепринятыми методами стандартного твердофазного синтеза на основе последовательного наращивания пептидной цепи на сополимере стирола с 1% дивинилбензолом (4). Для защиты боковых радикалов трифункциональных аминокислот использовали следующие группы: для лизина - 2-хлорбензилксикарбонильную, для гистидина тозильную, для серина, треонина, аспаргиновой и глютаминовой кислот соответствующие бензиловые эфиры, для аргинина мезитиленсульфонильную, для тирозина 2,6-дихлорбензильную. Peptides X (I) - (III) are obtained by conventional methods of standard solid-phase synthesis based on the sequential growth of the peptide chain on a copolymer of styrene with 1% divinylbenzene (4). The following groups were used to protect the side radicals of trifunctional amino acids: for lysine, 2-chlorobenzyl hydroxycarbonyl, for tosid histidine, corresponding benzyl esters for serine, threonine, aspartic and glutamic acids, mesitylenesulfonyl for arginine, and 2,6-dichlorobenzyl for tyrosine.
Анализы на эффективность пептидной композиции проводили на примере 50 сывороток здоровых доноров и больных гепатитом С с помощью непрямого варианта иммуноферментного анализа. Результаты испытаний показали, что процент выявления положительных проб с использованием указанной композиции пептидов составляет 100%
Пример 1. Синтез пептида Х(I).Analysis of the effectiveness of the peptide composition was carried out on the example of 50 sera of healthy donors and patients with hepatitis C using an indirect enzyme-linked immunosorbent assay. The test results showed that the percentage of detection of positive samples using the specified peptide composition is 100%
Example 1. The synthesis of peptide X (I).
Для синтеза пептида Х(I) в реакционный сосуд загружают 5 г трет-бутилоксикарбонил-валинполимера. Содержание валина составляет 0,50 ммоль/г. Пептидную цепь далее наращивают по следующей программе (на присоединение одной аминокислоты) (см. табл. 1). To synthesize peptide X (I), 5 g of a tert-butyloxycarbonyl valine polymer are loaded into the reaction vessel. The valine content is 0.50 mmol / g. The peptide chain is further expanded according to the following program (for the addition of one amino acid) (see table. 1).
Если нингидриновый тест положителен, то конденсацию повторяют, начиная с п. 5. В случае отрицательного теста присоединение следующего аминокислотного остатка производят, начиная с п. 1 указанной программы. If the ninhydrin test is positive, then the condensation is repeated starting from
После завершения синтеза пептидил-полимер высушивают в вакуум-эксикаторе над пятиокисью фосфора до постоянной массы. 1 г пептидил-полимера переносят в реактор установки для работы с жидким фтористым водородом, добавляют 1 мл тиоаниазола и 1 мл мета-крезола, охлаждают до температуры минус 78oC и в течение 10 мин перегоняют 10 мл безводного фтористого водорода. Остаток переносят на фильтр Шотта и промывают этилацетатом и эфиром. Пептид экстрагируют 50 мл 25% уксусной кислотой, разбавляют водой. После обессоливания на колонке с Sephadex G-10 (элюент 50% уксусная кислота) продукт очищают на колонке Altech Rsil C18 в 0,1% трифторуксусной кислоте в градиенте 10-40% ацетонитрила. Фракции, содержащие пептид, собирают и лиофилизируют. Выход с 1 г пептидил-полимера составляет 324 г (79%).After the synthesis is completed, the peptidyl polymer is dried in a vacuum desiccator over phosphorus pentoxide to constant weight. 1 g of the peptidyl polymer is transferred to the reactor of the plant for working with liquid hydrogen fluoride, 1 ml of thioaniazole and 1 ml of meta-cresol are added, cooled to minus 78 ° C and 10 ml of anhydrous hydrogen fluoride are distilled for 10 minutes. The residue was transferred to a Schott filter and washed with ethyl acetate and ether. The peptide is extracted with 50 ml of 25% acetic acid, diluted with water. After desalting on a Sephadex G-10 column (eluent 50% acetic acid), the product is purified on an Altech Rsil C18 column in 0.1% trifluoroacetic acid in a gradient of 10-40% acetonitrile. Fractions containing the peptide are collected and lyophilized. The yield from 1 g of the peptidyl polymer is 324 g (79%).
Однородность пептида определяют по данным высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонке Delta PAC C18, (0,4х15,0) см со скоростью потока 1 мл/мин при элюции 0,1% трифторуксусной кислотой в градиенте 10-40% ацетонитрила. Время удерживания 6,44 мин. The peptide homogeneity is determined by high performance liquid chromatography (HPLC) on a Delta PAC C18 column, (0.4 × 15.0) cm at a flow rate of 1 ml / min with elution with 0.1% trifluoroacetic acid in a gradient of 10-40% acetonitrile. Retention time 6.44 minutes
Пример 2. Синтез пептида Х(II). Example 2. The synthesis of peptide X (II).
Синтез, деблокирование, очистку и характеристику пептида Х(II) осуществляют теми же способами, что и пептида Х(I), за исключением того, что в реакционный сосуд загружают 5 г трет-бутилоксикарбонил-тозил-аргининполимера. Выход пептида после деблокирования 1 г пептидполимера составляет 384 г (84% ). Время удерживания в ВЭЖХ 7 мин. The synthesis, deblocking, purification and characterization of peptide X (II) is carried out in the same manner as peptide X (I), except that 5 g of tert-butyloxycarbonyl-tosyl-arginine polymer are loaded into the reaction vessel. The peptide yield after the release of 1 g of the peptide polymer is 384 g (84%). Retention time in
Пример 3. Синтез пептида Х(III). Example 3. The synthesis of peptide X (III).
Синтез, деблокирование, очистку и характеристику пептида Х(III) осуществляют теми же способами, что и пептида Х(I), за исключением того, что в реакционный сосуд загружают 5 г трет-бутилоксикарбонил-тозил-серилполимера. Выход пептида после деблокирования 1 г пептидполимера составляет 315 г (76% ). Время удерживания в ВЭЖХ 6,8 мин. The synthesis, deblocking, purification and characterization of peptide X (III) is carried out in the same manner as peptide X (I), except that 5 g of tert-butyloxycarbonyl-tosyl-serialyl polymer are loaded into the reaction vessel. The peptide yield after the release of 1 g of the peptide polymer is 315 g (76%). Retention time in HPLC 6.8 min.
Пример 4. Иммуноферментный анализ сывороток с использованием отдельных пептидов и композиции из 3 пептидов Х(I-III). Example 4. Enzyme-linked immunosorbent assay using individual peptides and a composition of 3 peptides X (I-III).
Синтезированные пептиды были использованы в твердофазном иммуноферментном анализе при исследовании сывороток от 50 больных гепатитом С и 50 здоровых доноров с целью обнаружения специфических антител. Предварительно сыворотки были проанализированы с помощью коммерческой скриннинговой ИФА тест-системой 2-ой генерации фирмы "Abbott" (Abbott HCV EIA 2,0, США). The synthesized peptides were used in enzyme-linked immunosorbent assay in the study of sera from 50 patients with hepatitis C and 50 healthy donors in order to detect specific antibodies. Previously, the sera were analyzed using a commercial ELISA screening test system of the 2nd generation of the company "Abbott" (Abbott HCV EIA 2.0, USA).
Методика проведения ИФА включала следующие этапы:
1. Получение иммуносорбента.The ELISA procedure included the following steps:
1. Getting immunosorbent.
Пептиды растворяют в 0,05 М карбонатно-бикарбонатном буферном растворе, рН 9,5 до следующих конечных концентраций: X(I) 13,5 мкг/мл; Х(II) 4,5 мкг/мл; Х(III) 40,5 мкг/мл и готовят следующие растворы пептидов (см. табл. 2). Peptides are dissolved in 0.05 M carbonate-bicarbonate buffer solution, pH 9.5 to the following final concentrations: X (I) 13.5 μg / ml; X (II) 4.5 μg / ml; X (III) 40.5 μg / ml and prepare the following solutions of peptides (see table. 2).
Растворы вносят по 0,1 мл в лунки планшетов и инкубируют при (4-6)oC в течение 24 ч. Затем лунки промывают 1 раз раствором ФСБТ.The solutions are added 0.1 ml to the wells of the plates and incubated at (4-6) o C for 24 hours. Then the wells are washed once with a solution of FSBT.
2. Связывание антител с иммуносорбентом (получение комплекса /-Аг-Ат). 2. Binding of antibodies to immunosorbent (obtaining complex / -Ag-At).
Сыворотки крови, разведенные предварительно в 20 раз на ФСБТ, вносят в лунки планшета по 0,1 мл и инкубируют при 37oC в течение 20 мин. Затем лунки промывают 3 раза раствором ФСБТ.Blood serum, previously diluted 20 times on FSBT, contribute 0.1 ml to the plate wells and incubated at 37 ° C for 20 minutes. Then the wells are washed 3 times with a solution of FSBT.
3. Связывание универсального конъюгата (белок А пероксидаза) с комплексом на твердой фазе (образование комплекса (-Аг-Ан-Конъюгат). 3. The binding of the universal conjugate (protein A peroxidase) to the complex on the solid phase (complex formation (-Ag-An-Conjugate).
В лунки планшета вносят по 0,1 мл раствора конъюгата (коммерческий препарат, производства предприятия бакпрепаратов НИИЭМ им. Пастера) в разведении 1: 20 на ФСБТ. Планшет инкубируют при 37oC в течение 20 мин, затем промывают 5 раз раствором ФСБТ.0.1 ml of the conjugate solution (a commercial preparation, manufactured by the Pasteur Research Institute of Nuclear Medicine and Chemical Engineering) at a dilution of 1: 20 on FSBT is added to the wells of the plate. The plate is incubated at 37 o C for 20 minutes, then washed 5 times with a solution of FSBT.
4. Выявление комплекса (Аг-Ат-Конъюгат). 4. Detection of the complex (Ag-At-Conjugate).
В лунки планшета вносят по 0,1 мл раствора субстратной смеси, состоящей из 0,05% орто-фенилендиамина, 0,005% перекиси водорода в 0,05 М фосфатно-цитратном буферном растворе, рН 5,0. Планшет инкубируют 15 мин при температуре (15-25)oC.0.1 ml of a solution of a substrate mixture consisting of 0.05% ortho-phenylenediamine, 0.005% hydrogen peroxide in 0.05 M phosphate-citrate buffer solution, pH 5.0, is added to the wells of the plate. The plate is incubated for 15 minutes at a temperature of (15-25) o C.
5. Остановка реакции и учет результатов. 5. Stop the reaction and record the results.
В лунки планшета добавляют по 0,05 мл 2 М раствора серной кислоты. Учет результатов осуществляют с помощью вертикального фотометра "Minireader-11" при длине волны 490 нм. 0.05 ml of a 2 M sulfuric acid solution is added to the wells of the plate. Analysis of the results is carried out using a vertical photometer "Minireader-11" at a wavelength of 490 nm.
В качестве обязательного контроля для исключения неспецифических результатов при постановке реакции с каждым составом пептидов используют контроль субстратной смеси (пептиды + субстрат), контроль конъюгата (пептиды + конъюгат + субстрат), контроль сыворотки, не содержащей антител к вирусу гепатита С (НК) по данным тестирования в скриннинговых зарубежных тест-системах 2-ой генерации (Liatek HCV, Оrganon Teknika, Нидерланды). As a mandatory control to exclude nonspecific results when setting up a reaction with each peptide composition, control of the substrate mixture (peptides + substrate), conjugate control (peptides + conjugate + substrate), control of serum that does not contain antibodies to hepatitis C virus (NK) according to testing in screening foreign test systems of the 2nd generation (Liatek HCV, Organon Teknika, Netherlands).
Исследуемую пробу считают реагирующей с пептидами специфично, если оптическая плотность (ОП) раствора в лунках с исследуемой сывороткой превышала контрольный уровень (КУ), рассчитываемый по формуле:
КУ 0,1 + ОП(НК),
где ОП(НК) оптическая плотность для НК.The test sample is considered reactive with peptides specifically if the optical density (OD) of the solution in the wells with the test serum exceeded the control level (KU), calculated by the formula:
KU 0.1 + OP (NK),
where OP (NK) is the optical density for NK.
При ОП исследуемой пробы больше КУ пробу считают содержащей антитела к вирусу гепатита С. In the case of an OP of a test sample, more KU samples are considered to contain antibodies to hepatitis C.
Результаты эксперимента представлены в табл. 3. The experimental results are presented in table. 3.
Результаты проведенных испытаний показали, что заявляемая композиция обеспечивает более высокую эффективность по сравнению с ее отдельными компонентами. The results of the tests showed that the claimed composition provides higher efficiency compared to its individual components.
Предлагаемая смесь пептидов обеспечивает практически 100% диагностику заболевания гепатитом С. The proposed mixture of peptides provides almost 100% diagnosis of hepatitis C.
Выпуск нового диагностикума осуществляется в ТОО "Аквапаст". The release of a new diagnosticum is carried out in Aquapast LLP.
Claims (1)
Х(1) H-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Glu- Arg-Lys-Thr-Arg-Arg-Asn- Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Asp-Val-OH;
Х(2) H-Ser-Gln-Pro-Arg-Gly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Ala-Ser- Arg-Arg-Pro-Glu-Gly-Arg-OH;
Х(3) H-Tyr-Ser-Ser-Met-Pro-Pro-Leu-Glu-Gly-Glu-Pro-Gly- Asp-Pro-Asp-Leu-Ser-Asp-Gly-Ser-OH
при следующем соотношении компонентов, мас. Х(1) Х(2) Х(3) 17 - 22 7 9 68 70.1. The peptide composition for determining antibodies to hepatitis C virus, including peptides that interact with antibodies to hepatitis C virus, characterized in that it includes peptides
X (1) H-Thr-Asn-Pro-Lys-Pro-Glu-Arg-Lys-Thr-Arg-Arg-Asn-Thr-Asn-Arg-Arg-Pro-Gln-Asp-Val-OH;
X (2) H-Ser-Gln-Pro-Arg-Gly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Ala-Ser-Arg-Arg-Pro-Glu-Gly-Arg-OH;
X (3) H-Tyr-Ser-Ser-Met-Pro-Pro-Leu-Glu-Gly-Glu-Pro-Gly-Asp-Pro-Asp-Leu-Ser-Asp-Gly-Ser-OH
in the following ratio of components, wt. X (1) X (2) X (3) 17 - 22 7 9 68 70.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94005164A RU2071350C1 (en) | 1994-02-14 | 1994-02-14 | Peptide composition for antibody assay to hepatitis c virus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94005164A RU2071350C1 (en) | 1994-02-14 | 1994-02-14 | Peptide composition for antibody assay to hepatitis c virus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94005164A RU94005164A (en) | 1996-07-27 |
| RU2071350C1 true RU2071350C1 (en) | 1997-01-10 |
Family
ID=20152460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94005164A RU2071350C1 (en) | 1994-02-14 | 1994-02-14 | Peptide composition for antibody assay to hepatitis c virus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2071350C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD302Z (en) * | 2010-06-30 | 2011-07-31 | Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова | Method for diagnosis of chronic viral hepatites B and C |
| MD319Z (en) * | 2010-06-30 | 2011-08-31 | Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова | Method for diagnosis of chronic viral hepatitis D and mixed hepatitis B+C |
-
1994
- 1994-02-14 RU RU94005164A patent/RU2071350C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Заявка РСТ 90/01348, кл. A 61 K 39/12, 1990. 2. Ann.inter.Med.- 1991, v.114, p.227 - 281. 3. Science.- 1989, v.244, p.359 - 362. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD302Z (en) * | 2010-06-30 | 2011-07-31 | Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова | Method for diagnosis of chronic viral hepatites B and C |
| MD319Z (en) * | 2010-06-30 | 2011-08-31 | Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова | Method for diagnosis of chronic viral hepatitis D and mixed hepatitis B+C |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94005164A (en) | 1996-07-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5539084A (en) | Method for the use and synthesis of peptides | |
| CA1220420A (en) | Method of determining antigenically active amino acid sequences | |
| DE69029092T2 (en) | Synthetic antigens for the detection of antibodies against the hepatitis C virus | |
| CS256960B1 (en) | Peptides with properties of antigenic determinants and method of their production | |
| JP4130505B2 (en) | Elimination of diagnostic method interference by peptides consisting of D-amino acids | |
| RU2071350C1 (en) | Peptide composition for antibody assay to hepatitis c virus | |
| US5340718A (en) | Method for assaying a human muscular dystrophy protein | |
| JPH08245693A (en) | Synthetic peptide to detect hiv antibody, and its mixture | |
| JP4120846B2 (en) | Activating peptides and conjugates | |
| DE69025023T2 (en) | Peptides and their use | |
| EP0293471A1 (en) | Primary biliary cirrhosis autoantigen. | |
| RU2071349C1 (en) | Composition for hepatitis c diagnosis | |
| US4327075A (en) | Synthetic antigenically-active polypeptide and a process for its preparation | |
| Winkler et al. | Protein labeling and biotinylation of peptides during spot synthesis using biotin p‐nitrophenyl ester (biotin‐ONp) | |
| EP0620231B1 (en) | Human parvovirus B19 epitope-related peptide | |
| JP3754611B2 (en) | Human aging marker and stress marker test method | |
| JP2002540768A (en) | Synthetic peptide of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) viral regulatory protein R (Vpr) and its application | |
| CN113621034A (en) | Novel coronavirus B-cell antigens with immunoreactivity | |
| US5436127A (en) | Epitope-related peptides of human parvovirus | |
| DE69613086T2 (en) | Antigenic peptides with glycine substitution | |
| JP4258271B2 (en) | Polyamino acid carrier | |
| JPH05301889A (en) | Non-a, non-b peptide | |
| RU2356576C1 (en) | SYNTHETIC ANTIGEN ABILITY TO BIND β1-ADRENORECEPTOR AUTOANTIBODIES | |
| KR20050007454A (en) | Organic molecules | |
| JPH02111791A (en) | Synthetic polypeptide immunochemically reacting with hiv antibody |