RU2054173C1 - Способ определения концентрации гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления - Google Patents
Способ определения концентрации гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления Download PDFInfo
- Publication number
- RU2054173C1 RU2054173C1 SU5036942A RU2054173C1 RU 2054173 C1 RU2054173 C1 RU 2054173C1 SU 5036942 A SU5036942 A SU 5036942A RU 2054173 C1 RU2054173 C1 RU 2054173C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- reagent
- hemoglobin
- concentration
- optical density
- blood
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Использование: в медицине, в гематологии для определения концентрации гемоглобина в крови. Сущность изобретения: способ включает обработку крови реактивом-комплексообразователем на основе додецилсульфата натрия и определение концентрации гемоглобина по результатам измерения оптической плотности получаемого продукта в области длины волны 413 нм. Реактив-комплексообразователь включает додецилсульфат натрия и буферный агент, поддерживающий значение показателя рН в пределах 7-8. Кроме того, в состав реактива может входить неионное поверхностно-активное вещество для определения калибровочного коэффициента, связывающего измеряемое значение оптической плотности с концентрацией гемоглобина в получаемом продукте, используют раствор- калибратор с известной концентрацией гемоглобина. В качестве раствора-калибратора используют раствор гемиглобинцианида (или хлорогемина) в указанном реактиве - комплексообразователе. Использование изобретения позволяет с высокой точностью производить определение концентрации гемоглобина. 3 с. и 3 з. п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гематологии при проведении исследований крови.
Известен способ определения концентрации гемоглобина в крови, согласно которому содержащиеся в крови различные формы гемоглобина трансформируют к одному устойчивому продукту метгемоглобинцианиду (гемиглобинцианиду), а концентрацию гемоглобина определяют по результатам измерения оптической плотности этого продукта. Недостатком указанного способа является необходимость использования токсичных трансформирующих агентов (цианистый калий или ацетонциангидрин).
Известен наиболее близкий к заявляемому способу определения концентрации гемоглобина в крови, включающий обработку пробы крови реактивом комплексообразователем, выполняющим функции гемолитика и трансформирующего агента, измерение оптической плотности полученного продукта в области длины волны 540 нм, при этом в качестве реактива-комплексообразователя используют додецилсульфат натpия, а концентрацию гемоглобина определяют расчетным путем, используя известное значение коэффициента экстинкции, связывающего значение оптической плотности с концентрацией гемоглобина. Недостатком известного способа является низкая точность определения концентрации гемоглобина, что обусловлено следующими обстоятельствами:
результаты измерения оптической плотности в области длины волны 540 нм содержат ошибку, вызванную присутствием в растворе рассеивающих свет частиц;
экспериментально установлено, что спектр поглощения получаемого конечного продукта имеет неизменную форму, если значение показателя рН реактива находится в пределах 7-8, а в случае выхода значения рН за указанные пределы спектр конечного продукта претерпевает значительные изменения, что ухудшает точность определения концентрации гемоглобина;
также экспериментально установлено, что при температурах ниже нормальной в растворе додецилсульфата натрия происходит его преципитация (осаждение), что снижает химическую активность реактива.
результаты измерения оптической плотности в области длины волны 540 нм содержат ошибку, вызванную присутствием в растворе рассеивающих свет частиц;
экспериментально установлено, что спектр поглощения получаемого конечного продукта имеет неизменную форму, если значение показателя рН реактива находится в пределах 7-8, а в случае выхода значения рН за указанные пределы спектр конечного продукта претерпевает значительные изменения, что ухудшает точность определения концентрации гемоглобина;
также экспериментально установлено, что при температурах ниже нормальной в растворе додецилсульфата натрия происходит его преципитация (осаждение), что снижает химическую активность реактива.
К ухудшению точности приводит также и то, что значение концентрации гемоглобина определяют умножением измеренного значения оптической плотности на значение коэффициента экстинкции, которое принимают равным 9860. Однако действительное значение коэффициента, характеризующего связь измеренного значения оптической плотности с концентрацией гемоглобина, может существенно отличаться от указанного значения в силу того, что условия измерений отличаются от тех условий, в которых было определено это значение (различные длины оптического пути используемых кювет, различные значения спектральных характеристик используемых фотометров, отличия в составе и концентрациях дозируемых веществ, приводящие к отличиям в свойствах конечного продукта, отличия в характеристиках используемых мер вместимости и т.д.). Последний недостаток может быть устранен, если перед определением концентрации гемоглобина проводят определение калибровочного коэффициента на том же оборудовании и с теми же реактивами, используя для этого раствор-калибратор с известным значением концентрации гемоглобина. При определении концентрации гемоглобина известным способом в качестве раствора-калибратора используют раствор гемиглобинцианида, однако в случае использования реактива-комлексообразователя на основе додецилсульфата натрия получаемый конечный продукт имеет форму спектра, отличную от формы спектра гемиглобинцианида, что не позволяет использовать раствор гемиглобинцианида в качестве раствора-калибратора.
Изобретение направлено на повышение точности определения концентрации гемоглобина в крови.
Сущность изобретения заключается в том, что в способе определения концентрации гемоглобина, включающем обработку пробы крови реактивом-комплексообразователем на основе додецилсульфата натрия и определение концентрации гемоглобина по результатам измерения оптической плотности полученного продукта, согласно изобретению измерение оптической плотности проводят в области длины волны 413 нм.
Реактив-комплексообразователь, включающий додецилсульфат натрия, согласно изобретению дополнительно содержит буферный агент для поддержания значения показателя рН в пределах 7-8.
Кроме того, реактив-комплексообразователь может дополнительно содержать неионное поверхностно-активное вещество, в качестве которого может быть использован Тriton X-100.
Раствор-калибратор с известной концентрацией гемоглобина содержит согласно изобретению раствор гемиглобинцианида в реактиве-комплексообразователе на основе додецилсульфата натрия.
Измерение оптической плотности в области длины волны 413 нм обусловлено тем, что, во-первых, был экспериментально обнаружен явно выраженный максимум поглощения на данной длине волны, и, во-вторых, также экспериментально была обнаружена высокая корреляция между результатами определения концентрации гемоглобина предложенным и известным референтным способами. При этом измерение оптической плотности в области длины волны 413 нм позволяет уменьшить ошибку, связанную с рассеянием света на рассеивающих частицах, так как значение оптической плотности при фотометрировании на этой длине волны существенно выше, чем на длине волны 540 нм, при одном и том же вкладе указанного рассеяния.
Использование буферного агента позволяет поддерживать значение показателя рН в пределах 7-8, при которых спектр поглощения конечного продукта имеет неизменную форму.
Использование неионного поверхностно-активного вещества, как было установлено экспериментально, предотвращает преципитацию додецилсульфата натрия в широком диапазоне рабочих температур и позволяет использовать реактив с высоким содержанием додецилсульфата натрия, что повышает его химическую активность.
Как установлено экспериментально, предложенный раствор-калибратор имеет спектр, совпадающий по форме со спектром конечного продукта, получаемого в результате обработки крови используемым реактивом-комплексообразователем, что позволяет повысить точность определения концентрации гемоглобина путем проведения калибровки непосредственно перед измерениями.
На фиг. 1 представлен спектр поглощения получаемого конечного продукта; на фиг. 2 корреляционная зависимость между результатами определения концентрации гемоглобина предложенным и известным референтным способами.
Способ осуществляют следующим образом. К пробе крови добавляют реактив-комплексообразователь, через 30 с измеряют оптическую плотность Е раствора в области длины волны 413 нм, а концентрацию Нb гемоглобина определяют из соотношения:
Hb E · K · N, где К коэффициент разведения крови;
N градуировочный коэффициент.
Hb E · K · N, где К коэффициент разведения крови;
N градуировочный коэффициент.
Градуировочный коэффициент определяют, измеряя на указанной длине волны, в тех же условиях и на том же оборудовании оптическую плотность Ео раствора-калибратора, получаемого добавлением реактива-комплексообразователя на основе додецилсульфата натрия к гемиглобинцианиду (или хлорогемину), из соотношения:
N C/Eo, где С эквивалентная концентрация гемоглобина в растворе-калибраторе.
N C/Eo, где С эквивалентная концентрация гемоглобина в растворе-калибраторе.
Для приготовления раствора-калибратора может быть использован гемиглобинцианид, промышленно выпускаемый в растворе с точно известной эквивалентной концентрацией гемоглобина (1 г/л), или хлорогемин, приготавливаемый в лабораторных условиях. Преимуществом последнего является способность хлорогемина длительно храниться в сухом виде с возможностью приготовления раствора-калибратора весовым методом непосредственно перед калибровкой.
В таблице приведен пример количественного состава предложенного реактива-комплексообразователя.
Концентрация додецилсульфата натрия должна быть не менее пороговой величины 0,8 г/л, при которой возможно проведение реакции за время, не превышающее 30 с.
Результаты проведенных экспериментальных исследований подтверждают высокую точность определения концентрации гемоглобина в крови с использованием предложенных способа, реактива-комплексообразователя и раствора-калибратора. Коэффициент корреляции результатов определения концентрации гемоглобина предложенным и известным референтным способами составляет не менее 0,95.
Claims (6)
1. Способ определения концентрации гемоглобина в крови, включающий обработку пробы крови реактивом-комплексообразователя на основе додецилсульфата натрия и определение концентрации гемоглобина по результатам измерений оптической плотности полученного продукта, отличающийся тем, что используют реактив-комплексообразователь, имеющий значение рН в пределах 7 - 8, измерение оптической плотности проводят в области длины волны 413 нм, а концентрацию гемоглобина (HB) определяют из соотношения
HB = E • K - N,
где K - коэффициент разведения крови;
E - измеренное значение оптической плотности;
N - калибровочный коэффициент.
HB = E • K - N,
где K - коэффициент разведения крови;
E - измеренное значение оптической плотности;
N - калибровочный коэффициент.
3. Реактив-комплексообразователь, включающий додецилсульфат натрия, отличающийся тем, что он дополнительно содержит буферный агент для поддержания значения показателя рН в пределах 7 - 8.
4. Реактив-комплексообразователь по п.2, отличающийся тем, что он дополнительно содержит неионное поверхностно-активное вещество.
5. Реактив-комплексообразователь по п. 3, отличающийся тем, что в качестве неионного поверхностно-активного вещества он содержит Triton Х-100.
6. Раствор-калибратор с известной концентрацией гемоглобина, отличающийся тем, что он содержит раствор гемиглобинцианида или хлорогемина в реактиве-комплексообразователе на основе додецилсульфата натрия.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5036942 RU2054173C1 (ru) | 1992-04-10 | 1992-04-10 | Способ определения концентрации гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5036942 RU2054173C1 (ru) | 1992-04-10 | 1992-04-10 | Способ определения концентрации гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2054173C1 true RU2054173C1 (ru) | 1996-02-10 |
Family
ID=21601673
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU5036942 RU2054173C1 (ru) | 1992-04-10 | 1992-04-10 | Способ определения концентрации гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2054173C1 (ru) |
-
1992
- 1992-04-10 RU SU5036942 patent/RU2054173C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР N 1386901, кл. G 01N 33/48, 1990. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP1903327B1 (en) | Cuvette | |
US9594076B2 (en) | Method for determining lipids and other interfering substances in body fluid samples | |
JP4532905B2 (ja) | 分析法及びそのための装置 | |
JP5118126B2 (ja) | 蛍光分析 | |
EP1023583B1 (en) | Method for measurement of blood substitutes | |
EP0517914A1 (en) | REAGENT AND CALCIUM DETERMINATION METHOD. | |
EP0097472B1 (en) | Method of determining calcium in a fluid sample | |
JP4115588B2 (ja) | 改良された蛍光偏光免疫測定法 | |
RU2054173C1 (ru) | Способ определения концентрации гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления | |
JPH04181159A (ja) | 補正用紙片を有する呈色試験紙 | |
RU2298171C1 (ru) | Способ фотометрического определения железа (ii) в растворах чистых солей и искусственных смесей | |
DE3885642T2 (de) | Reagens und Verfahren zur Bestimmung von Hämoglobin im Blut. | |
CZ391098A3 (cs) | Způsob analýzy medicínských vzorků, které obsahují hemoglobin | |
RU2252413C1 (ru) | Способ количественного определения концентрации гидрохлорида полигексаметиленгуанидина в воде | |
Beale et al. | Rapid incremental methods for the determination of serum iron and iron-binding capacity | |
RU2044319C1 (ru) | Способ определения содержания гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления | |
Matioli et al. | Microspectrophotometric determination of differentially extracted haemoglobin in single erythrocytes | |
Leard et al. | The effect of haemolysis on certain canine serum chemistry parameters | |
JP4448685B2 (ja) | 総蛋白質定量方法および試薬 | |
Pesce et al. | Nephelometric measurement of ceruloplasmin with a centrifugal analyzer. | |
US4725555A (en) | Zinc protoporphyrin test system | |
JPH0812197B2 (ja) | 体液中のリンの定量方法 | |
RU2053501C1 (ru) | Способ количественного определения сероуглерода в воздухе | |
JPH09133629A (ja) | 分光測定におけるスペクトルの処理方法およびそれを 用いた定量方法 | |
SU979968A1 (ru) | Способ определени присадок на основе нафтената кали в воздухе |