RU2044319C1 - Способ определения содержания гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления - Google Patents
Способ определения содержания гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления Download PDFInfo
- Publication number
- RU2044319C1 RU2044319C1 RU92008948A RU92008948A RU2044319C1 RU 2044319 C1 RU2044319 C1 RU 2044319C1 RU 92008948 A RU92008948 A RU 92008948A RU 92008948 A RU92008948 A RU 92008948A RU 2044319 C1 RU2044319 C1 RU 2044319C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- dodecyl sulfate
- sodium dodecyl
- hemoglobin
- reagent
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Использование: медицина. Сущность изобретения: проводят обработку пробы крови реактивом-комплексообразователем, включающим додецелсульфат натрия, измеряют оптическую плотность раствора на двух различных длинах волн, значения которых находятся в области 550-595 нм, определяют значение содержания гемоглобина по результатам этим измерений. В процессе измерения используют реактив-комплексообразователь, дополнительно содержащий додецилсульфат натрия в количестве 0,03-0,15% водный раствор хлорида натрия, рН 7-7,5. Используют раствор-калибратор, содержащий известное количество гемоглобина, растворенного в реактиве-комплексообразователе, включающем додецилсульфат натрия. 3 с. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил.
Description
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гематологии при проведении исследований крови.
Известен способ определения содержания гемоглобина в крови, согласно которому содержащиеся в крови различные формы гемоглобина трансформируют к одному устойчивому продукту гемиглобинцианиду, а концентрацию гемоглобина определяют по результатам измерения оптической плотности этого продукта. В качестве трансформирующих агентов (комплексообразователей) при этом используют токсичные вещества цианистый калий или ацетонциангидрин, что является недостатком способа.
Наиболее близким к изобретению является способ определение содержания гемоглобина в крови, согласно которому обрабатывают пробу крови реактивом-комплексообразователем, включающим додецилсульфат натрия, определяют содержание гемоглобина по результатам измерений оптической плотности полученного раствора в области длины волны 540 нм.
Способ имеет следующие недостатки: результаты измерений содержат ошибку, вызванную присутствием в растворе рассеивающих свет частиц (продукты лизиса эритроцитов, липопротеиды и т.д.) и влиянием оптических свойств реактива-комплексообразователя, значение содержания гемоглобина определяют, используя фиксированное (9860) значение коэффициента экстинкции, связывающего значение оптической плотности с содержанием гемоглобина; однако действительное значение указанного коэффициента может существенно отличаться от указанного значения, так как условия измерений контролируемого раствора, как правило, отличаются от условий, в которых был определен коэффициент экстинкции (различные размеры используемых кювет, различные спектральные характеристики используемых фотометров, различия в составе и концентрациях дозируемых веществ, различные характеристики используемых мер вместимости); на практике указанный недостаток может быть устранен, если перед определением содержания гемоглобина проводят определение калибровочного коэффициента (на том же оборудовании и с теми же реактивами), используя для этого раствор-калибратор с известным содержанием гемоглобина, при этом в качестве раствора калибратора используют раствор гемиглобинцианида; однако при использовании реактива-комплексообразователя, включающего додецилсульфат натрия, получаемый продукт имеет спектр поглощения, существенно отличающийся от спектра поглощения гемиглобинцианида, что не позволяет использовать последний в качестве калибратора.
Экспериментально установлено, что спектр оптического поглощения продукта, получаемого при обработке крови указанным реактивом, стабилен только при значении водородного показателя рН реактива в пределах 7-7,5, в случае же выхода значения рН за указанные пределы спектр конечного продукта претерпевает сильные изменения, что сильно ухудшает точность определения содержания гемоглобина.
Цель изобретения повышение точности определения содержания гемоглобина в крови.
На чертеже представлены кривые, характеризующие оптическую плотность в функции длины волны для конечного продукта, получающегося в результате обработки крови реактивом-комплексообразователем, включающим додецилсульфат натрия (пунктирная кривая) и для конечного продукта (гемиглобинцианида), получаемого известным способом.
Сущность предложенного способа заключается в том, что проводят обработку пробы крови реактивом-комплексообразователем, включающим додецилсульфат натрия, измеряют оптическую плотность полученного раствора и определяют содержание гемоглобина по результатам измерений, при этом измерения оптической плотности проводят на двух различных длинах волн, значения которых находятся в области 550-595 нм.
Используемый реактив-комплексообразователь включает додецилсульфат натрия, при этом значение водородного показателя рН реактива находится в пределах 7-7,5.
Реактив-комплексообразователь может содержать додецилсульфат натрия и водный раствор хлорида натрия при содержании додецилсульфата натрия в пределах 0,3-0,15%
Раствор-калибратор, имеющий известное содержание гемоглобина, согласно изобретению содержит раствор гемоглобина в реактиве-комплексообразователе, включающем додецилсульфат натрия.
Раствор-калибратор, имеющий известное содержание гемоглобина, согласно изобретению содержит раствор гемоглобина в реактиве-комплексообразователе, включающем додецилсульфат натрия.
Определение содержания гемоглобина по результатам измерений оптической плотности раствора на двух длинах волн из диапазона 550-595 нм позволяет уменьшить ошибку, вызванную влиянием рассеивающих частиц.
При значении показателя рН реактива в пределах 7-7,5 спектр получаемого продукта остается практически неизменным, что исключает ошибку, связанную с нестабильностью спектра поглощения.
Состав реактива-комплексообразователя, включающий додецилсульфат натрия и водный раствор хлорида натрия при содержании додецилсульфата натрия в пределах 0,03-0,15% имеет значение показателя рН в пределах 7-7,5, что и требуется для получения стабильного спектра конечного продукта.
Использование в качестве раствора-калибратора раствора гемоглобина в реактиве-комплексообразователе, включающем додецилсульфат натрия, позволяет проводить с высокой точностью определение калибровочного коэффициента непосредственно перед определением содержания гемоглобина за счет того, что спектр поглощения указанного раствора-калибратора совпадает со спектром конечного продукта, получаемого в результате обработки крови указанным комплексообразователем.
Способ основан на соотношениях, в которых использованы следующие обозначения:
λ1,λ2- используемые длины волны;
g1, g2 коэффициенты поглощения света гемоглобином на длинах волн соответственно λ1,λ2
Сg содержание гемоглобина в контролируемом растворе;
d длина оптического пути (определяется толщиной используемой кюветы);
h1, h2 коэффициенты рассеяния света на длинах волн λ1,λ2;
Iλ1(2) исходная (падающая на кювету с контролируемым раствором) интенсивность света на длинах волн λ1,λ2;
I'λ1(2) интенсивность света после прохождения через слой контролируемого раствора.
λ1,λ2- используемые длины волны;
g1, g2 коэффициенты поглощения света гемоглобином на длинах волн соответственно λ1,λ2
Сg содержание гемоглобина в контролируемом растворе;
d длина оптического пути (определяется толщиной используемой кюветы);
h1, h2 коэффициенты рассеяния света на длинах волн λ1,λ2;
Iλ1(2) исходная (падающая на кювету с контролируемым раствором) интенсивность света на длинах волн λ1,λ2;
I'λ1(2) интенсивность света после прохождения через слой контролируемого раствора.
С учетом поглощения и рассеяния света в контролируемом растворе можно записать:
exp[-g1·Cд·d-h1·d]
(1)
exp[-g2·Cд·d-h2·d] Логарифмы отношений в левых частях соотношений (1) представляют собой не что иное, как значения оптических плотностей Е1, Е2. После логарифмирования получим:
E1= lg -g1·Cд·d-h1·d
(2)
E2= lg -g2·Cд·d-h2·d Вычитая из первого соотношения второе, получим:
E1 E2 Cg ˙d˙ (g2 g1) + d˙ (h2 h1) (3) Второй член в правой части этого соотношения не равен нулю, так как значения h1, h2 являются функциями λ, т. е. h1(λ1)≠h2 (λ2). Однако, если выбрать значения λ1,λ2 достаточно близкими друг к другу (практически целесообразно выбирать λ1,λ2 лежащими в пределах 550-595 нм), то можно придать величине d˙ (h2 h1) пренебрежимо малое значение. Если значением этой величины пренебречь, окончательно получим
Cд= (4)
Таким образом, значение Cg однозначно определяется значением разности оптических плотностей контролируемого раствора, измеренных на двух различных, но близких длинах волн (величины d, g1 и g2 постоянные при использовании одной и той же кюветы и одних и тех же длин волн). Измерение значений оптических плотностей может быть легко реализовано с использованием существующей аппаратуры для фотометрирования.
exp[-g1·Cд·d-h1·d]
(1)
exp[-g2·Cд·d-h2·d] Логарифмы отношений в левых частях соотношений (1) представляют собой не что иное, как значения оптических плотностей Е1, Е2. После логарифмирования получим:
E1= lg -g1·Cд·d-h1·d
(2)
E2= lg -g2·Cд·d-h2·d Вычитая из первого соотношения второе, получим:
E1 E2 Cg ˙d˙ (g2 g1) + d˙ (h2 h1) (3) Второй член в правой части этого соотношения не равен нулю, так как значения h1, h2 являются функциями λ, т. е. h1(λ1)≠h2 (λ2). Однако, если выбрать значения λ1,λ2 достаточно близкими друг к другу (практически целесообразно выбирать λ1,λ2 лежащими в пределах 550-595 нм), то можно придать величине d˙ (h2 h1) пренебрежимо малое значение. Если значением этой величины пренебречь, окончательно получим
Cд= (4)
Таким образом, значение Cg однозначно определяется значением разности оптических плотностей контролируемого раствора, измеренных на двух различных, но близких длинах волн (величины d, g1 и g2 постоянные при использовании одной и той же кюветы и одних и тех же длин волн). Измерение значений оптических плотностей может быть легко реализовано с использованием существующей аппаратуры для фотометрирования.
Необходимо отметить, что чувствительность описанного способа определяется, как следует из выражения (4), значением d ˙(g2 g1). Поскольку значения λ1, λ2 должны быть близкими для уменьшения влияния рассеяния, то для получения удовлетворительной чувствительности необходимо выбирать λ1,λ2 в области, где характеристика поглощения света конечным продуктом имеет наибольшую крутизну. Исследования спектра конечного продукта (см. чертеж) показали, что спектральная характеристика имеет крутой спад в области правее 540 нм. Поэтому выбор значений λ1,λ2 в пределах 550-595 нм (практически лучшие результаты достигаются при выборе длин волн соответственно 570 нм и 595 нм) позволяет, с одной стороны, получить удовлетворительную чувствительность, и с другой стороны, уменьшить ошибку из-за рассеяния.
Способ осуществляют следующим образом.
К пробе крови добавляют реактив-комплексообразователь, через 30 с измеряют значения оптических плотностей раствора Е1, Е2 на двух различных длинах волн (например, 570 и 595 нм), содержание гемоглобина в крови определяют из соотношения:
Cg (E1 E2) ˙N ˙K (5) где N коэффициент разведения крови (практически целесообразно выбирать значения N порядка 250, так как при этом возможные значения оптической плотности составляют 0,3-0,4 и могут быть измерены с высокой точностью на существующих фотометрах);
К калибровочный коэффициент.
Cg (E1 E2) ˙N ˙K (5) где N коэффициент разведения крови (практически целесообразно выбирать значения N порядка 250, так как при этом возможные значения оптической плотности составляют 0,3-0,4 и могут быть измерены с высокой точностью на существующих фотометрах);
К калибровочный коэффициент.
Калибровочный коэффициент определяют, измеряя на указанных длинах волн в тех же условиях и на том же оборудовании оптические плотности Ео1, Ео2 раствора-калибратора
K
Для приготовления раствора-калибратора может быть использована консервированная кровь, из которой выделяют эритроциты (например, центрифугированием), отмывают из изотоническим раствором, к полученной эритроцитарной массе добавляют примерно равный объем изотонического раствора и получают модельный образец крови. Данный образец обрабатывают реактивом-комплексообразователем, включающим додецилсульфат натрия, и получают реактив-калибратор. Точное содержание гемоглобина в реактиве-калибраторе устанавливают путем измерения содержания гемоглобина в модельном образце крови референтным методом.
K
Для приготовления раствора-калибратора может быть использована консервированная кровь, из которой выделяют эритроциты (например, центрифугированием), отмывают из изотоническим раствором, к полученной эритроцитарной массе добавляют примерно равный объем изотонического раствора и получают модельный образец крови. Данный образец обрабатывают реактивом-комплексообразователем, включающим додецилсульфат натрия, и получают реактив-калибратор. Точное содержание гемоглобина в реактиве-калибраторе устанавливают путем измерения содержания гемоглобина в модельном образце крови референтным методом.
На практике в качестве раствора-калибратора удобно использовать стандартный раствор гемиглобинцианида. Это возможно, если описанным способом измерения оптической плотности проводит в области 570-595 нм. Как видно из чертежа, в целом спектр гемиглобинцианида отличен от спектра конечного продукта, получаемого описанным способом, однако в области длин волн 570-595 нм спектры практически совпадают, что и позволяет использовать гемиглобинцианид в качестве калибратора.
Практически используемый состав реактива-комплексообразователя следующий: додецилсульат натрия 1 г и водный (0,9%-ный раствор хлорида натрия до 1 л. Указанный состав реактива-комплексообразователя имеет значение водородного показателя рН 7,4.
Результаты экспериментальных исследований подтвеpждают высокую точность определения содержания гемоглобина в крови с использованием описанных способа, реактива-комлексообразователя и раствора-калибратора. Погрешность определения содержания гемоглобина в крови не превышает 1-2%
Claims (5)
1. Способ определения содержания гемоглобина в крови, согласно которому осуществляют обработку пробы крови реактивом-комплексообразователем на основе додецилсульфата натрия, измеряют оптическую плотность полученного раствора и определяют содержание гемоглобина по результатам измерений, отличающийся тем, что проводят измерение оптической плотности на двух различных длинах волн λ1 и λ2 значения которых лежат в диапазоне 550 595 нм, а содержание C гемоглобина рсссчитывают из соотношения
C (E1 E2)·N·K,
где E1, E2 значение оптических плотностей раствора на длинах волн λ1 и λ2;
N коэффициент разведения крови;
K калибровочный коэффициент.
C (E1 E2)·N·K,
где E1, E2 значение оптических плотностей раствора на длинах волн λ1 и λ2;
N коэффициент разведения крови;
K калибровочный коэффициент.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что калибровочный коэффициент определяют по результатам измерений на указанных длинах волн оптической плотности раствора калибратора из выражения
где E0 1, E0 2 значения оптических плотностей раствора на длинах волн соответственно λ1 и λ2
C0 эквивалентное содержание гемоглобина в растворе-калибраторе.
где E0 1, E0 2 значения оптических плотностей раствора на длинах волн соответственно λ1 и λ2
C0 эквивалентное содержание гемоглобина в растворе-калибраторе.
3. Реактив-комплексообразователь для определения содержания гемоглобина в крови, включающий додецилсульфат натрия, отличающийся тем, что содержание додецилсульфата натрия находятся в пределах 0,03 0,15% а значение водородного показателя рН реактива находится в пределах 7,0 7,5.
4. Реактив-комплексообразователь по п.3, отличающийся тем, что содержит 0,1% -ный раствор додецилсульфата натрия и водный 0,9%-ный раствор хлорида натрия.
5. Раствор-калибратор для определения содержание гемоглобина в крови, имеющий заданное содержание гемоглобина, отличающийся тем, что он содержит раствор заданного количества гемоглобина в реактиве-комплексообразователе на основе додецилсульфата натрия.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU92008948A RU2044319C1 (ru) | 1992-11-30 | 1992-11-30 | Способ определения содержания гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU92008948A RU2044319C1 (ru) | 1992-11-30 | 1992-11-30 | Способ определения содержания гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU92008948A RU92008948A (ru) | 1995-05-20 |
RU2044319C1 true RU2044319C1 (ru) | 1995-09-20 |
Family
ID=20132753
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU92008948A RU2044319C1 (ru) | 1992-11-30 | 1992-11-30 | Способ определения содержания гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2044319C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2497456C1 (ru) * | 2012-07-05 | 2013-11-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России) | Способ экспресс-диагностики отравлений гемолитическими ядами |
RU2576843C2 (ru) * | 2014-04-08 | 2016-03-10 | Тахир Хусанович Холматов | Глюкозооксидазный способ неинвазивного определения сахара в крови, глюкозооксидазный способ калибровки реагентов для неинвазивного определения сахара в крови. |
RU2598343C2 (ru) * | 2014-04-08 | 2016-09-20 | Тахир Хусанович Холматов | Гексокиназный способ неинвазивного определения сахара в крови. гексокиназный способ калибровки реагентов для неинвазивного определения сахара в крови |
-
1992
- 1992-11-30 RU RU92008948A patent/RU2044319C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР N 1386901, кл. G 01 33/ 48, 1990. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2497456C1 (ru) * | 2012-07-05 | 2013-11-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России) | Способ экспресс-диагностики отравлений гемолитическими ядами |
RU2576843C2 (ru) * | 2014-04-08 | 2016-03-10 | Тахир Хусанович Холматов | Глюкозооксидазный способ неинвазивного определения сахара в крови, глюкозооксидазный способ калибровки реагентов для неинвазивного определения сахара в крови. |
RU2598343C2 (ru) * | 2014-04-08 | 2016-09-20 | Тахир Хусанович Холматов | Гексокиназный способ неинвазивного определения сахара в крови. гексокиназный способ калибровки реагентов для неинвазивного определения сахара в крови |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2002359193B2 (en) | Method for quantitative hemoglobin determination in undiluted unhemolyzed whole blood | |
EP2016390B1 (en) | A method and a system for quantitative hemoglobin determination | |
Pittman et al. | A new method for the measurement of percent oxyhemoglobin | |
EP1903327B2 (en) | Cuvette | |
US5064282A (en) | Photometric apparatus and method for measuring hemoglobin | |
JP6289517B2 (ja) | 体液試料中の脂質および他の干渉物質(interferingsubstance)を決定するための方法 | |
Siggaard-Andersen et al. | Hemoglobin pigments. Spectrophotometric determination of oxy-, carboxy-, met-, and sulfhemoglobin in capillary blood | |
US4303336A (en) | Method and apparatus for making a rapid measurement of the hematocrit of blood | |
De Lauder et al. | pH dependence of the fluorescence decay of tryptophan | |
WO1992007244A1 (en) | An hplc light-scattering detector for biopolymers | |
JP3203798B2 (ja) | クロモゲンの測定方法 | |
EP0282505A1 (en) | Method and apparatus for determining the level of an analyte in a sample of whole blood | |
RU2044319C1 (ru) | Способ определения содержания гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления | |
JPS6332132B2 (ru) | ||
Taulier et al. | Determining methemoglobin in blood by zero-crossing-point first-derivative spectrophotometry. | |
Ringbom et al. | Differential method for precision colorimetric analysis | |
JPS6118135B2 (ru) | ||
US3477818A (en) | Method for the determination of the bilirubin content of body liquids | |
Falholt | Blood oxygen saturation determined spectrophotometrically | |
RU2054173C1 (ru) | Способ определения концентрации гемоглобина в крови, реактив-комплексообразователь и раствор-калибратор для его осуществления | |
SU1213394A1 (ru) | Способ определени показател отражени углей | |
SU1116366A1 (ru) | Способ определени влагосодержани нефти и нефтепродуктов | |
Muraoka et al. | New sensitive method for the spectral analysis of respiratory-chain components in mitochondria | |
JPS60159635A (ja) | 濁り度測定方法 | |
SU711441A1 (ru) | Спектральный способ определени концентрации веществ |