RU2024103715A - Рекомбинантные варианты белков r-спондинов и их применение - Google Patents
Рекомбинантные варианты белков r-спондинов и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2024103715A RU2024103715A RU2024103715A RU2024103715A RU2024103715A RU 2024103715 A RU2024103715 A RU 2024103715A RU 2024103715 A RU2024103715 A RU 2024103715A RU 2024103715 A RU2024103715 A RU 2024103715A RU 2024103715 A RU2024103715 A RU 2024103715A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- rspo1
- domain
- recombinant variant
- rspo2
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 6
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 claims 4
- 101001063463 Homo sapiens Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 4 Proteins 0.000 claims 3
- 102100031035 Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 4 Human genes 0.000 claims 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 3
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 claims 2
- 101000802406 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase ZNRF3 Proteins 0.000 claims 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 claims 2
- 102000006083 ZNRF3 Human genes 0.000 claims 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 claims 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims 2
- 101000825949 Homo sapiens R-spondin-2 Proteins 0.000 claims 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims 1
- 102220482798 Mitochondrial coenzyme A diphosphatase NUDT8_R66A_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 102000047209 human Rspo2 Human genes 0.000 claims 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 1
- 230000009452 underexpressoin Effects 0.000 claims 1
Claims (21)
1. Рекомбинантный вариант белка R-спондина, включающий следующие домены FU1, FU2, TSP и BR, в котором
a. FU1 представляет собой домен, имеющий по меньшей мере 80% идентичности с любым из доменов FU1 человеческих Rspo1, Rspo2, Rspo3 или Rspo4, как показано в последовательностях SEQ ID NO: 5, 9, 13 и 17, соответственно,
b. FU2 представляет собой домен, имеющий по меньшей мере 80% идентичности с любым из доменов FU2 человеческих Rspo1, Rspo2, Rspo3 или Rspo4, как показано в последовательностях SEQ ID NO: 6, 10, 14, 18 соответственно,
c. TSP представляет собой домен, имеющий по меньшей мере 80% идентичности с любым из доменов TSP человеческих Rspo1, Rspo2, Rspo3 или Rspo4, как показано в последовательностях SEQ ID NO: 7, 11, 15, 19, и
d. BR представляет собой домен, имеющий по меньшей мере 80% идентичности с любым из доменов BR человеческих Rspo1, Rspo2, Rspo3 или Rspo4, как показано в последовательностях SEQ ID NO: 8, 12, 16, 20.
2. Рекомбинантный вариант белка R-спондина по п. 1, включающий домены FU1 Rspo1 и FU2 Rspo1 с по меньшей мере аминокислотными заменами H108K и N109D, предпочтительно, указанный вариант включает или по существу состоит из, последовательность SEQ ID NO:66.
3. Рекомбинантный вариант по п. 1 или 2, который имеет не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен в каждом домене FU1 или FU2 при выравнивании с соответствующим доменом FU1 в человеческом Rspo1 последовательности SEQ ID NO:5 и доменом FU2 в Rspo1 последовательности SEQ ID NO:6, соответственно.
4. Рекомбинантный вариант по любому из пп. 1-3, который включает делецию первых 10-14 N-концевых аминокислот в области 21-33 Rspo1 или в пределах эквивалентной области в Rspo2, Rspo3 или Rspo4, обычно делецию остатков 21-31 Rspo1, предпочтительно, включающий или состоящий из белка последовательности SEQ ID NO:24.
5. Рекомбинантный вариант по любому из пп. 1-4, который включает по меньшей мере аминокислотную замену R66 в домене FU1 из человеческого Rspo1 последовательности SEQ ID NO:5 или эквивалентного остатка аргинина в последовательности домена FU1 человеческого Rspo2, Rspo3 или Rspo4, указанная аминокислотная замена, уменьшающая или устраняющая связывание ZNRF3, обычно указанный вариант включает домен FU1 Rspo1 последовательности SEQ ID NO:5, имеющий одну аминокислотную замену остатка R66, уменьшающую или отменяющую связывание ZNRF3, обычно R66A, например, указанный рекомбинантный вариант включает или по существу состоит из последовательности SEQ ID NO:23.
6. Рекомбинантный вариант по любому из пп. 1-5, в котором этом указанный вариант не включает сайт N-гликозилирования между доменами FU2 и TSP, например, он включает мутацию в остатке N137 в Rspo1 или в эквивалентном остатке в Rspo2, Rspo3 или Rspo4, для подавления N-гликозилирования в этом положении, предпочтительно, указанный рекомбинантный вариант включает или по существу состоит из последовательности SEQ ID NO:22.
7. Рекомбинантный вариант по любому из пп. 1-6, при этом указанный домен FU1 на 100% идентичен домену FU1 Rspo2 последовательности SEQ ID NO:9 и указанный FU2 выбирают из доменов FU2 из Rspo1, Rspo3, Rspo4 или их функциональных вариантов с аминокислотными заменами, сохраняющими по меньшей мере такую же аффинность связывания с LGR4, предпочтительно, указанный вариант включает домен FU1 Rspo2 последовательности SEQ ID NO:9 и домен FU2 Rspo1 последовательности SEQ ID NO:6 и, необязательно, домен TSP Rspo1 последовательности SEQ ID NO:7 и домен BR Rspo1 последовательности SEQ ID NO:8, более предпочтительно, указанный вариант включает или по существу состоит из, последовательности SEQ ID NO:25 или SEQ ID NO:26.
8. Рекомбинантный вариант по любому из пп. 1-7, который проявляет одно или несколько из следующих свойств на уровне по меньшей мере аналогичном белку Rspo1 последовательности SEQ ID NO: 41:
(i) он связывается с рецептором LGR4 по меньшей мере с такой же аффинностью, как и эталонный человеческий Rspo1 последовательности SEQ ID NO:41, как измерено в анализе аффинности связывания Rspo1/LGR4 in vitro, например, как определено анализом SPR;
(ii) он индуцирует пролиферацию функциональных бета-клеток по меньшей мере до уровня, аналогичного эталонному человеческому Rspo1 последовательности SEQ ID NO:41, например, как определено в анализе пролиферации бета-клеток Min6 in vitro; и/или,
(iii) он индуцирует пролиферацию функциональных бета-клеток по меньшей мере до уровня, аналогичного эталонному человеческому Rspo1 последовательности SEQ ID NO:41, например, как определено в анализе пролиферации бета-клеток in vivo.
9. Слитый белок Fc, который включает рекомбинантный вариант по любому из пп. 1-8, при этом фрагмент Fc слит прямо или опосредованно через пептидный линкер с указанным рекомбинантным вариантом, что означает, что указанный слитый белок Fc включает или по существу состоит из последовательности SEQ ID NO:42, 43, 92 или 93.
10. Рекомбинантный вариант по любому из пп. 1-8 или слитый белок по п. 9 для применения в качестве лекарственного средства, в частности, для лечения диабета, более предпочтительно, диабета типа I или II.
11. Нуклеиновая кислота, кодирующая рекомбинантный вариант по любому из пп. 1-8 или слитый белок по п. 9.
12. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п. 11.
13. Клетка-хозяин, включающая нуклеиновую кислоту по п. 11.
14. Способ получения рекомбинантного варианта по любому из пп. 1-8 или слитого белка по п. 9, включающий (i) культивирование клетки-хозяина по п. 13 в условиях экспрессии указанного рекомбинантного варианта или слитого белка, (ii) выделение указанного рекомбинантного варианта или слитого белка, (iii) необязательную очистку указанного рекомбинантного варианта или слитого белка.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP21305993.4 | 2021-07-15 | ||
| FR22305328.1 | 2022-03-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2024103715A true RU2024103715A (ru) | 2024-03-28 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11072640B2 (en) | Methods of treating non-alcoholic steatohepatitis using FGF21 mutants | |
| AU2002254683C1 (en) | Binding molecules for Fc-region polypeptides | |
| Chung et al. | Entactin: structure and function | |
| RU2010122053A (ru) | Иммуносупрессорные полипептиды и нуклеиновые кислоты | |
| JP2005046146A5 (ru) | ||
| JP2014510518A5 (ru) | ||
| JP6605593B2 (ja) | 第ｖｉｉｉ因子およびフォン・ヴィルブランド因子ペプチドを含む製剤 | |
| WO2003062370B1 (en) | Multimeric proteins and methods of making and using same | |
| WO2017059371A1 (en) | Treatment of bile acid disorders | |
| RU2024103715A (ru) | Рекомбинантные варианты белков r-спондинов и их применение | |
| US20170198014A1 (en) | Polypeptides and their use for treating influenza | |
| Aatsinki et al. | An alternative use of basic pGEX vectors for producing both N-and C-terminal fusion proteins for production and affinity purification of antibodies | |
| US20040137588A1 (en) | Purification of vascular endothelial growth factor-b | |
| Wang et al. | Efficient expression and immunoaffinity purification of human trace amine-associated receptor 5 from E. coli cell-free system | |
| EP3207375B1 (en) | Detection of igm antibodies using an immune complex (ic) elisa | |
| JP7307178B2 (ja) | 改善された安定性およびリガンド結合親和性を有するｒａｇｅ融合タンパク質ならびにその使用 | |
| WO2021247675A9 (en) | Coronavirus-binding agents and uses thereof | |
| JP2007503820A (ja) | 細胞レセプタードメインを含むコイルドコイル融合タンパク質 | |
| EP4046653A1 (en) | Immunogenic polypeptides and uses thereof | |
| US9012602B2 (en) | Macaca fascicularis CCL17 | |
| Perotti et al. | A versatile ionic strength sensitive tag from a human GM-CSF-derived linear epitope | |
| WO2023212629A2 (en) | De novo designed binders targeting human epcam and pdl1 receptors | |
| RU2021136703A (ru) | Новый модифицированный слитый белок fc-фрагмента иммуноглобулина и его применение | |
| Yamaguchi et al. | Characterization and application of monoclonal antibodies against human endothelin B receptor expressed in insect cells | |
| CN116769014A (zh) | 一种牛IgG Fc受体boFcγRI的线性配体结合表位 |