RU2022121121A - Олигомерные реагенты в виде частиц и способы их применения - Google Patents
Олигомерные реагенты в виде частиц и способы их применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2022121121A RU2022121121A RU2022121121A RU2022121121A RU2022121121A RU 2022121121 A RU2022121121 A RU 2022121121A RU 2022121121 A RU2022121121 A RU 2022121121A RU 2022121121 A RU2022121121 A RU 2022121121A RU 2022121121 A RU2022121121 A RU 2022121121A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- streptavidin
- molecules
- paragraphs
- mutein
- streptavidin mutein
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims 118
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 26
- 230000003213 activating Effects 0.000 claims 13
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims 8
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims 5
- -1 sulfosuccinimidyl Chemical group 0.000 claims 5
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 claims 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims 3
- 108010018381 streptavidin-binding peptide Proteins 0.000 claims 3
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-Ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims 2
- 101700077824 CNN1 Proteins 0.000 claims 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 claims 1
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N Cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102100006947 TAGLN Human genes 0.000 claims 1
- 101710025884 TAGLN Proteins 0.000 claims 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims 1
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M caproate Chemical compound CCCCCC([O-])=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 claims 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 claims 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 claims 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000006177 thiolation reaction Methods 0.000 claims 1
Claims (54)
1. Способ получения олигомерного реагента в виде частиц, содержащего стрептавидин или мутеин стрептавидина, причем способ включает:
инкубацию множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина, содержащих тиол-реактивную функциональную группу, способную реагировать с тиоловой функциональной группой, и множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина, содержащих одну или более тиоловых функциональных групп, с получением, таким образом, композиции частиц, содержащей олигомерные реагенты в виде частиц, содержащие множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина; и
введение олигомерных реагентов в виде частиц в контакт со стабилизирующим агентом.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий получение множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина путем инкубации первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом, который способен преобразовывать один или более аминов в тиол-реактивную функциональную группу.
3. Способ по п. 1 или 2, дополнительно включающий получение множества тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина путем инкубации второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом, который способен добавлять тиоловую функциональную группу к одному или более лизиновым остаткам.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где способ осуществляют в условиях, в которых в инкубационное время инкубации множества актвированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множества тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина, множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина таковы, что:
в среднем по меньшей мере 60% остатков лизина на тетрамер тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина содержат тиоловую функциональную группу, и/или
в среднем по меньшей мере 10 остатков лизина на тетрамер тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина содержат тиоловую функциональную группу.
5. Способ по любому из пп. 2-4, где инкубацию первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом проводят при молярном отношении молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина к активирующему реагенту между 1:1 и 1:10.
6. Способ по любому из пп. 2-5, где инкубацию первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом проводят при молярном отношении молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина к активирующему реагенту 1:2 ± 2%.
7. Способ по любому из пп. 2-6, где активирующий агент содержит гетеробифункциональное сшивающее средство, необязательно сульфосукцинимидил 4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (сульфо SMCC) или сукцинимидил-6-[(β-малеимидопропионамидо)гексаноат (SMPH).
8. Способ по любому из пп. 1-7, где тиол-реактивная функциональная группа представляет собой малеимидную группу.
9. Способ по любому из пп. 2-8, где первое множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и активирующий агент инкубируют при pH между 6,8 и 7,5, между 7,0 и 7,4, всегда включительно, необязательно при или приблизительно при 7,2.
10. Способ по любому из пп. 2-9, где первое множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и активирующий агент инкубируют при комнатной температуре, необязательно между 20°C и 25°C, включительно, необязательно при или приблизительно при 23°C или 24°C.
11. Способ по любому из пп. 2-10, где первое множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и активирующий агент инкубируют в течение от 15 минут до 6 часов или от 30 минут до 2 часов, всегда включительно, необязательно в течение или приблизительно в течение 1 часа.
12. Способ по любому из пп. 3-11, где
инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом проводят при молярном отношении тиолирующего реагента к каждому первичному амину между 10:1 и 1:1, включительно, на молекулу стрептавидина или мутеина стрептавидина; и/или
инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом проводят при молярном отношении между 1:50 и 1:500, включительно, тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина к тиолирующему агенту, необязательно при или приблизительно при 1:100 тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина к активирующему реагенту.
13. Способ по любому из пп. 3-12, где тиолирующий агент представляет собой или содержит 2-иминотиолан.
14. Способ по любому из пп. 3-13, где
второе множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и тиолирующего агента инкубируют при pH от 7,0 до 8,0 включительно, необязательно при pH приблизительно 7,7; и/или
инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и тиолирующего агента начинают в присутствии буфера с pH между 8,0 и 9,0, включительно, необязательно при или приблизительно при 8,5.
15. Способ по любому из пп. 3-14, где второе множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и тиолирующего агента инкубируют при комнатной температуре, необязательно между 20°C и 25°C, включительно, необязательно при или приблизительно при 23°C или при или приблизительно при 24°C.
16. Способ по любому из пп. 3-15, где второе множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и тиолирующего агента инкубируют в течение от 15 минут до 2 часов, от 15 минут до 1,5 часов или от 25 минут до 1 часа, всегда включительно, необязательно в течение или приблизительно в течение 1 часа или в течение или приблизительно в течение 25 минут.
17. Способ по любому из пп. 1-16, где множество активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина в процессе инкубации находятся в молярном соотношении X:1, при этом X представляет собой количество лизиновых остатков, доступных для тиолирования, на молекулу стрептавидина или мутеина стрептавидина.
18. Способ по любому из пп. 1-17, где молярное отношение множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина к множеству тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина в процессе инкубации составляет от 1:1 до 8:1 или от 2:1 до 6:1, необязательно при или приблизительно при 4:1.
19. Способ по любому из пп. 1-18, где множество активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина инкубируют при pH между 6,8 и 7,5 или между 7,0 и 7,4, всегда включительно, необязательно при pH, равном или приблизительно равном 7,2.
20. Способ по любому из пп. 1-19, где множество активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина инкубируют при комнатной температуре, необязательно между 20°C и 25°C, включительно, необязательно при или приблизительно при 23°C или при или приблизительно при 24°C.
21. Способ по любому из пп. 1-20, где множество активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина инкубируют в течение от 15 минут до 6 часов или от 30 минут до 2 часов, всегда включительно, необязательно в течение или приблизительно в течение 1 часа.
22. Способ по любому из пп. 1-21, где получение композиции частиц, содержащих олигомерные реагенты в виде частиц, дополнительно включает прекращение реакции множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множества тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина путем введения молекул в контакт с N-этилмалеимидом (NEM).
23. Способ по любому из пп. 3-22, где по меньшей мере часть инкубации первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом и по меньшей мере часть инкубации второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом осуществляют отдельно в одно и то же время.
24. Способ по любому из пп. 3-23, где инкубацию первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом и инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом осуществляют в течение по существу одного и того же периода времени и/или выполняют по существу в одно и то же время.
25. Способ по любому из пп. 2-24, где перед инкубацией множества тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина способ включает:
(i) удаление активирующего агента из множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина; и/или
(ii) удаление тиолирующего агента из множества тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина.
26. Способ по любому из пп. 3-25, где инкубацию множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множества тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина начинают в пределах 15 минут после окончания инкубации второго множества молекул стрептавидина с тиолирующим агентом и/или после удаления тиолирующего агента из множества тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина.
27. Способ по любому из пп. 1-26, где стабилизирующий агент снижает количество N-замещенного иминотиолана, присутствующего на лизиновых остатках олигомерных реагентов в виде частиц.
28. Способ по любому из пп. 1-27, где стабилизирующий агент содержит гидроксиламин.
29. Способ по любому из пп. 1-28, где стабилизирующий агент удаляют из олигомерных реагентов в виде частиц с помощью хроматографии, необязательно с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC).
30. Способ по любому из пп. 1-29, дополнительно включающий фильтрующую стерилизацию олигомерных реагентов в виде частиц.
31. Способ по любому из пп. 1-30, дополнительно включающий отделение олигомерных реагентов в виде частиц от мономеров и олигомеров молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина, которые меньше порогового размера.
32. Способ по п.31, где олигомерные реагенты в виде частиц отделяют от мономеров и тетрамеров молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина.
33. Способ по п.31 или 32, где отделение осуществляют с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC).
34. Способ по п.33, где SEC имеет эксклюзионный предел, и эксклюзионный предел составляет более или приблизительно более 100 кДа, 500 кДа, 750 кДа, 1000 кДа или 2000 кДа.
35. Способ по п.33 или 34, где SEC имеет эксклюзионный предел, и эксклюзионный предел составляет от или приблизительно от 500 кДа до 1000 кДа.
36. Способ по любому из пп. 33-35, где SEC имеет эксклюзионный предел, и эксклюзионный предел составляет или составляет приблизительно 750 кДа.
37. Способ по п. 33, где SEC имеет эксклюзионный предел, и эксклюзионный предел составляет или составляет приблизительно 75 кДа.
38. Способ по любому из пп. 31-37, включающий сбор одной или более фракций, содержащих свободный объем, с отделением, таким образом, олигомерных реагентов в виде частиц от мономерных или олигомерных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина.
39. Способ по любому из пп. 1-38, где молекула мутеина стрептавидина обратимо связывается со связывающим стрептавидин пептидом.
40. Способ по п. 39, где связывающий стрептавидин пептид связывается со связывающим биотин сайтом молекулы мутеина стрептавидина.
41. Способ по п. 39 или 40, где связывающий стрептавидин пептид представляет собой последовательность аминокислот, представленную SEQ ID NO: 7 или 8.
42. Способ по любому из пп. 1-41, где молекула мутеина стрептавидина содержит аминокислотную последовательность Val44-Thr45-Ala46-Arg47 или Ile44-Gly45-Ala46-Arg47 в положениях последовательности, соответствующих 44-47 относительно положений в стрептавидине в последовательности аминокислот, представленной SEQ ID NO: 1.
43. Способ по любому из пп. 1-42, где молекула мутеина стрептавидина содержит аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 3-6, 27, 28, 60 и 61.
44. Олигомерный реагент в виде частиц, полученный с помощью способа по любому из пп. 1-43.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/491,245 | 2017-04-27 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019138171A Division RU2777989C2 (ru) | 2017-04-27 | 2018-04-27 | Олигомерные реагенты в виде частиц и способы их применения |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2022121121A true RU2022121121A (ru) | 2022-12-08 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1315699B1 (en) | Hydrazine-based and carbonyl-based bifunctional crosslinking reagents | |
| JP2020517705A5 (ru) | ||
| AU2001247697A1 (en) | Hydrazine-based and carbonyl-based bifunctional crosslinking reagents | |
| ES448668A1 (es) | Procedimiento para la preparacion de una mezcla de di(amino-fenil)metano y polimetilen-polifenil-poliaminas oligomeri- cas. | |
| AU681667B2 (en) | Method of floating calcium carbonate ore and flotation reagent therefor | |
| US20080249315A1 (en) | Multifunctional amine capture agents | |
| US5623055A (en) | Phenylboronic acid complexes derived from aminosalicylic acid for bioconjugate preparation | |
| RU2022121121A (ru) | Олигомерные реагенты в виде частиц и способы их применения | |
| Josey et al. | Novel linker for the solid-phase synthesis of guanidines | |
| JP4745331B2 (ja) | 標識用試薬、その試薬の合成方法、及び、生体分子の検出法 | |
| PT86816A (pt) | Improved process for preparing polyamines | |
| JP2012162534A (ja) | 多官能性アミン捕捉剤 | |
| WO2001025432A3 (en) | Histamine receptor | |
| CN103865916B (zh) | 磁驱固定化酶、制备方法及其在大水体催化中的应用 | |
| ES8507612A1 (es) | Un metodo para determinar la presencia de una secuencia natural de restos aminoacidos de un protenoide. | |
| CN112657681B (zh) | 阳离子捕收剂及其制备方法和应用 | |
| CA2241339A1 (en) | Polyamine transport inhibitors | |
| EP0827502B1 (en) | Methadone derivatives and protein and polypeptide methadone derivative conjugates and labels | |
| RU2019138171A (ru) | Олигомерные реагенты в виде частиц и способы их применения | |
| JP2003286289A (ja) | シランカップリング剤 | |
| NO168529B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av s-(-) og r-(+)-n-(quinuclidinyl-3)-amider. | |
| CN112912103A (zh) | 多价蛋白质复合物 | |
| Siezen | Crosslinking of α-crystallin with bisimidoesters: Evidence for polyamidine formation at pH 8 from an increase in positive charges on the polypeptide chains | |
| US11752489B2 (en) | Affinity dissolution of biomolecules for protein purification | |
| JPH08507520A (ja) | マレイミドの選択的アミノ化を使用するカップリング方法 |