RU2019138171A - Олигомерные реагенты в виде частиц и способы их применения - Google Patents

Олигомерные реагенты в виде частиц и способы их применения Download PDF

Info

Publication number
RU2019138171A
RU2019138171A RU2019138171A RU2019138171A RU2019138171A RU 2019138171 A RU2019138171 A RU 2019138171A RU 2019138171 A RU2019138171 A RU 2019138171A RU 2019138171 A RU2019138171 A RU 2019138171A RU 2019138171 A RU2019138171 A RU 2019138171A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
streptavidin
paragraphs
oligomeric
molecules
binding
Prior art date
Application number
RU2019138171A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2777989C2 (ru
RU2019138171A3 (ru
Inventor
Томас Шмидт
Кристиан ШТЕМБЕРГЕР
Том КОВСКИ
Кен ПРЕНТИС
Original Assignee
Джуно Терапьютикс Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Джуно Терапьютикс Гмбх filed Critical Джуно Терапьютикс Гмбх
Publication of RU2019138171A publication Critical patent/RU2019138171A/ru
Publication of RU2019138171A3 publication Critical patent/RU2019138171A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2777989C2 publication Critical patent/RU2777989C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/36—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Actinomyces; from Streptomyces (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4648—Bacterial antigens
    • A61K39/464818—Corynebacterium or Propionibacterium, Actinobacteria, e.g. Actinomyces, Streptomyces, Nocardia, Bifidobacterium or Gardnerella
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6891—Pre-targeting systems involving an antibody for targeting specific cells
    • A61K47/6897—Pre-targeting systems with two or three steps using antibody conjugates; Ligand-antiligand therapies
    • A61K47/6898—Pre-targeting systems with two or three steps using antibody conjugates; Ligand-antiligand therapies using avidin- or biotin-conjugated antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/02—Separating microorganisms from the culture medium; Concentration of biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A61K2039/625—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier binding through the biotin-streptavidin system or similar
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment

Claims (150)

1. Олигомерный реагент в виде частиц, содержащий множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина, при этом размер олигомерного реагента в виде частиц представляет собой i) радиус больше чем 50 нм, ii) молекулярную массу по меньшей мере 5×106 г/моль; и/или (iii) по меньшей мере 100 тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина на олигомерный реагент в виде частиц.
2. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 1, при этом молекулы стрептавидина или мутеина стрептавидина обратимо связываются или способны обратимо связываться с биотином, аналогом биотина или стрептавидин–связывающим пептидом.
3. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–2, при этом олигомерный реагент в виде частиц содержит множество молекул мутеина стрептавидина, при этом молекулы мутеина стрептавидина содержат аминокислотную последовательность Va144–Thr45–Ala46–Arg47 или lle44–Gly45–Ala46–Arg47 в позициях последовательности, соответствующих позициям 44–47 со ссылкой на позиции в стрептавидине в последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO: 1.
4. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–3, при этом олигомерный реагент в виде частиц содержит множество молекул мутеина стрептавидина, которые содержат:
a) последовательность аминокислот, приведенную в любой из SEQ ID NO: 3–6, 27, 28, 60 или 61;
b) последовательность аминокислот, которые демонстрируют по меньшей мере 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с любой SEQ ID NO: 3–6, 27, 28, 60 или 61 и содержат аминокислотную последовательность, соответствующую Va144–Thr45–Ala46–Arg47 или lle44–Gly45–Ala46–Arg47, и/или обратимо связываются с биотином, аналогом биотина или стрептавидин–связывающим пептидом; или
c) функциональный фрагмент a) или b), который обратимо связывается с биотином, аналогом биотина или стрептавидин–связывающим пептидом.
5. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–4, при этом олигомерный реагент в виде частиц содержит множество молекул мутеина стрептавидина, которые содержат последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 6 или 61.
6. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–5, при этом олигомерный реагент в виде частиц связан или способен связываться с одним или более агентами.
7. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 6, при этом один или более агентов содержат партнера по связыванию, при этом партнер по связыванию способен связываться, необязательно обратимо связываться, с одним или более участком связывания на олигомерном реагенте в виде частиц.
8. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 7, при этом партнер по связыванию содержит стрептавидин–связывающий пептид.
9. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 7 или 8, при этом партнер по связыванию содержит стрептавидин–связывающий пептид, выбираемый из группы, состоящей из Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys (SEQ ID NO: 8), Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys–(GlyGlyGlySer)3–Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys ((SEQ ID NO: 17), Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys–(GlyGlyGlySer)2–Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys (SEQ ID NO: 18) и Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys–(GlyGlyGlySer)2Gly–Gly–Ser–Ala–Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys (SEQ ID NO: 19).
10. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 7–9, при этом один или более агентов представляет собой или содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
11. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 10, при этом один или более агентов представляет собой или содержит фрагмент моновалентного антитела.
12. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 10 или 11, при этом один или более агентов представляет собой или содержит Fab.
13. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 7–12, при этом один или более агентов представляет собой рецептор–связывающий агент, который связывается или способен связываться с рецептором, экспрессированным на поверхности клетки–мишени.
14. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 7–13, при этом рецептор–связывающий агент представляет собой или содержит стимулирующий агент, способный связываться с молекулой на поверхности клетки–мишени, при этом связывание вызывает или модулирует сигнал в клетке–мишени.
15. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 13 или 14, при этом клеткой–мишенью является иммунная клетка.
16. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 13–15, при этом клетка–мишень представляет собой T–клетку.
17. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 13–16, при этом рецептор–связывающий агент способен инициировать связанный с комплексом TCR/CD3 сигнал в T–клетках, связывается с элементом комплекса TCR/CD3; и/или специфически связывается с CD3.
18. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 13–17, при этом стимулирующий агент представляет собой первый рецептор–связывающий агент, а олигомерный реагент в виде частиц содержит второй рецептор–связывающий агент, при этом второй рецептор–связывающий агент способен специфически связываться со второй молекулой на поверхности клетки–мишени, при этом связывание со второй молекулой необязательно способно индуцировать или модулировать сигнал в клетках–мишенях.
19. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 18, при этом второй рецептор–связывающий агент специфически связывается с костимулирующей молекулой, вспомогательной молекулой, молекулой иммунной контрольной точки, представляет собой член семейства TNF или рецептор семейства TNF, цитокиновый рецептор, хемокиновый рецептор или представляет собой или содержит молекулу адгезии или фактор, который вызывает выработку цитокина, выработку хемокина и/или экспрессию молекулы адгезии.
20. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 18 или 19, при этом второй рецептор–связывающий агент специфически связывается с костимулирующей молекулой, а костимулирующей молекулой является CD28.
21. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 7–20, при этом один или более агентов представляет собой антитело против CD3 и антитело против CD28, необязательно Fab против CD3 и Fab против CD28.
22. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 13–16, при этом рецептор–связывающий агент специфически связывается с костимулирующей молекулой, вспомогательной молекулой, молекулой иммунной контрольной точки, представляет собой член семейства TNF или рецептор семейства TNF, цитокиновый рецептор, хемокиновый рецептор или представляет собой или содержит молекулу адгезии или фактор, который вызывает выработку цитокина, выработку хемокина и/или экспрессию молекулы адгезии.
23. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 7–22, при этом один или более агентов представляет собой селективный агент, при этом селективный агент связывается или способен связываться с селективным маркером, который экспрессируется на поверхности клетки–мишени.
24. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 23, при этом клеткой–мишенью является иммунная клетка, необязательно T–клетка.
25. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 23 или 24, при этом селективный маркер isCCR7, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD27, CD45RA, CD45RO, CD62L и/или CD127.
26. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–25, при этом олигомерный реагент в виде частиц содержит:
радиус больше, чем 60 нм, больше, чем 70 нм, больше, чем 80 нм или больше, чем 90 нм.
27. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–26, при этом олигомерный реагент в виде частиц содержит:
радиус между 50 нм и 150 нм, между 75 нм и 125 нм, между 80 нм и 115 нм или между 90 нм и 110 нм, включительно; или
радиус 90 нм ±15 нм или 95 нм ± 20–25 нм.
28. Олигомерный реагент в виде частиц по п. 26 или 27, при этом радиус представляет собой гидродинамический радиус.
29. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–28, при этом олигомерный реагент в виде частиц имеет молекулярную массу:
по меньшей мере 5×107 г/моль или по меньшей мере 1×108 г/моль; и/или
между 5×107 г/моль и 5×108 г/моль, между 1×108 г/моль и 5×108 г/моль или между 1×108 г/моль и 2×108 г/моль.
30. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–29, при этом олигомерный реагент в виде частиц содержит по меньшей мере 500 тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина, по меньшей мере 1000 тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина, по меньшей мере 1500 тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина или по меньшей мере 2000 тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина; и/или
между 1000 и 20000 тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина, между 1000 и 10000 тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина или между 2000 и 5000 тетрамеров стрептавидина или мутеина стрептавидина.
31. Олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–30, при этом множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина содержат лизиновые остатки, при этом менее чем 20%, 10%, 5%, 1% лизиновых остатков содержат N–замещенный иминотиолан.
32. Композиция, содержащая множество олигомерного реагента в виде частиц по любому из пп. 1–31.
33. Композиция по п. 32, при этом множество олигомерных реагентов в виде частиц имеют i) средний радиус больше чем 70 нм; ii) среднюю молекулярную массу по меньшей мере 1×108 г/моль; и/или iii) среднее количество стрептавидина или тетрамеров стрептавидина на олигомерный реагент в виде частиц по меньшей мере 2000 и/или iv) распределение размеров радиуса, в котором по меньшей мере 95% множества олигомерных реагентов в виде частиц имеют радиус между 10 нм и 150 нм.
34. Композиция по п. 32 или 33, при этом множество олигомерных реагентов в виде частиц имеют средний радиус больше, чем 50 нм, больше, чем 60 нм, больше, чем 70 нм, больше, чем 80 нм, больше, чем 90 нм или больше, чем 100 нм.
35. Композиция по любому из пп. 32–34, при этом:
множество олигомерных реагентов в виде частиц имеют средний радиус между 50 нм и 150 нм, между 75 нм и 125 нм, между 80 нм и 110 нм или между 90 нм и 110 нм, включительно; или
множество олигомерных реагентов в виде частиц имеют средний радиус 90 нм ±15 нм, 95 нм ± 20–25 нм; или 97 ± 10 нм.
36. Композиция по любому из пп. 32–35, при этом по меньшей мере 95% множества олигомерных реагентов в виде частиц имеют радиус между 50 и 150 нм, между 70 нм и 140 нм, между 80 нм и 120 нм, между 80 нм и 115 нм, между 80 нм и 100 нм, между 90 нм и 110 нм и/или между 100 нм и 120 нм.
37. Композиция по любому из пп. 32–36, при этом по меньшей мере 95% олигомерных реагентов в виде частиц имеют радиус в пределах ± 50%, ± 25%, ± 20%, ± 15%, ± 10% и/или ± 5% среднего и/или медианного радиуса множества олигомерных реагентов в виде частиц.
38. Композиция по любому из пп. 32–37, при этом множество олигомерных реагентов в виде частиц имеют средний радиус между 80 нм и 115 нм, и, при этом по меньшей мере 95% олигомерных реагентов в виде частиц имеют радиус в пределах ± 25% среднего радиуса.
39. Композиция по любому из пп. 32–38, при этом множество частиц содержит:
(i) среднюю молекулярную массу между 1×108 г/моль и 5×108 г/моль или между 1×108 г/моль и 2×108 г/моль, включительно; и/или
(ii) среднее количество стрептавидина или тетрамеров стрептавидина на олигомерный реагент в виде частиц по меньшей мере 100, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 1500 или по меньшей мере 2000 или между 1000 и 20000, между 1000 и 10000 или между 2000 и 5000, всегда включительно.
40. Композиция по любому из пп. 32–39, при этом средний радиус множества олигомерных частиц не увеличивается больше чем на 25% или 10% при хранении приблизительно при или ниже –80°C, приблизительно при или ниже –20°C и/или приблизительно при или ниже 4°C в течение по меньшей мере 1 недели.
41. Способ получения олигомерного реагента в виде частиц, содержащего стрептавидин или мутеин стрептавидина, причем способ включает:
инкубацию множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина, содержащих тиол–реактивную функциональную группу, способную реагировать с тиоловой функциональной группой, и множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина, содержащих одну или более тиоловую функциональную группу, с получением таким образом композиции частиц, содержащей олигомерные частицы;
отделение олигомерных частиц от мономерных и/или меньших олигомерных молекул; и
введение олигомерных частиц в контакт со стабилизирующим агентом, получая таким образом олигомерный реагент в виде частиц.
42. Способ по п. 41, при этом множество активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина создают путем инкубации первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом, который способен преобразовывать один или более аминов в тиол–реактивную функциональную группу.
43. Способ по п. 41 или 42, при этом множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина создают путем инкубации второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом, который добавляет или способен добавлять тиоловую функциональную группу к одному или более лизиновому остатку.
44. Способ получения олигомерных реагентов в виде частиц, причем способ включает:
(a) инкубацию первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом в условиях для преобразования одного или более аминов в тиол–реактивную группу, способную реагировать с тиоловой функциональной группой, с созданием таким образом множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина;
(b) инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом, который добавляет или способен добавлять тиоловую функциональную группу к одному или более лизиновому остатку, с созданием таким образом множества тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина; и
(с) инкубацию множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с множеством тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина, с получением таким образом композиции частиц, содержащей олигомерные реагенты в виде частиц;
при этом способ осуществляют в условиях, в которых во время начала инкубации в (c) множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина таковы, что в среднем по меньшей мере 60% лизинов содержат тиоловую функциональную группу, и/или в среднем по меньшей мере 10 лизинов на тиолированный тетрамер стрептавидина или мутеина стрептавидина содержат тиоловую функциональную группу.
45. Способ по п. 44, дополнительно включающий отделение олигомерных реагентов в виде частиц от мономерных и/или меньших олигомерных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина.
46. Способ по любому из пп. 41–45, при этом инкубацию первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом проводят при молярном отношении стрептавидина или мутеина стрептавидина к активирующему реагенту между 1:1 и 1:10.
47. Способ по любому из пп. 41–46, при этом инкубацию первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом проводят при молярном отношении стрептавидина или мутеина стрептавидина к активирующему реагенту 1:2 ± 2%.
48. Способ по любому из пп. 41–47, при этом активирующий агент содержит гетеробифункциональное сшивающее средство, необязательно сульфосукцинимидил 4–(N–малеимидометил)циклогексан–1–карбоксилат (сульфо SMCC) и/или сукцинимидил–6–[(β–малеимидопропионамидо)гексаноат (SMPH).
49. Способ по любому из пп. 41–48, при этом тиол–реактивная функциональная группа представляет собой малеимидную группу.
50. Способ по любому из пп. 41–49, при этом первое множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и активирующий агент инкубируют при pH между 6,8 и 7,5, между 7,0 и 7,4, всегда включительно, необязательно при или приблизительно при 7,2.
51. Способ по любому из пп. 41–50, при этом первое множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и активирующий агент инкубируют при комнатной температуре, необязательно между 20°C и 25°C, включительно, необязательно при или приблизительно при 23°C или 24°C.
52. Способ по любому из пп. 41–51, при этом первое множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и активирующий агент инкубируют в течение от 15 минут до 6 часов, от 30 минут до 2 часов, всегда включительно, необязательно в течение или приблизительно в течение 1 часа.
53. Способ по любому из пп. 43–52, при этом:
инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом проводят при молярном отношении тиолирующего реагента к каждому первичному амину между 10:1 и 1:1, включительно, на молекулу стрептавидина или мутеина стрептавидина; и/или инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом проводят при молярном отношении между 1:50 и 1:500, включительно, тетрамера стрептавидина или мутеина стрептавидина к тиолирующему агенту, необязательно при или приблизительно при 1:100 тетрамера стрептавидина или мутеина стрептавидина к активирующему реагенту.
54. Способ по любому из пп. 43–53, при этом тиолирующий агент представляет собой или содержит 2–иминотиолан.
55. Способ по любому из пп. 43–54, при этом:
второе множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и тиолирующего агента инкубируют при pH 7,0 или более, необязательно между 7,0 и 8,0, включительно, необязательно при pH приблизительно 7,7; и/или
инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и тиолирующего агента начинают в присутствии буфера с pH 8,0 или более, необязательно между 8,0 и 9,0, включительно, необязательно при или приблизительно при 8,5.
56. Способ по любому из пп. 43–55, при этом второе множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и тиолирующего агента инкубируют при комнатной температуре, необязательно между 20°C и 25°C, включительно, необязательно при или приблизительно при 23°C или при или приблизительно при 24°C.
57. Способ по любому из пп. 43–56, при этом второе множество молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и тиолирующего агента инкубируют в течение от 15 минут до 2 часов, от 15 минут до 1,5 часов или от 25 минут до 1 часа, всегда включительно, необязательно в течение или приблизительно в течение 1 часа или в течение или приблизительно в течение 25 минут.
58. Способ по любому из пп. 41–57, при этом множество активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина в процессе инкубации находятся в молярном соотношении X:1, при этом X представляет собой количество лизиновых остатков, доступных для тиолирования, на молекулу стрептавидина или мутеина стрептавидина.
59. Способ по любому из пп. 41–58, при этом молярное отношение множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина к множеству тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина в процессе инкубации составляет от 1:1 до 8:1 или от 2:1 до 6:1, необязательно при или приблизительно при 4:1.
60. Способ по любому из пп. 41–59, при этом множество активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина инкубируют при pH между 6,8 и 7,5 или между 7,0 и 7,4, всегда включительно, необязательно при pH равном или приблизительно равном 7,2.
61. Способ по любому из пп. 41–60, при этом множество активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множество тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина инкубируют при комнатной температуре, необязательно между 20°C и 25°C, включительно, необязательно при или приблизительно при 23°C или при или приблизительно при 24°C.
62. Способ по любому из пп. 41–61, при этом множество активированных молекул стрептавидина и множество тиолированных молекул стрептавидина инкубируют в течение от 15 минут до 6 часов или от 30 минут до 2 часов, всегда включительно, необязательно в течение или приблизительно в течение 1 часа.
63. Способ по любому из пп. 41–62, при этом получение композиции частиц, содержащих олигомерные частицы стрептавидина или мутеина стрептавидина, дополнительно включает прекращение реакции активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина путем введения молекул в контакт с N–этилмалеимидом (NEM).
64. Способ по любому из пп. 44–63, при этом по меньшей мере часть инкубации первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом и по меньшей мере часть инкубации второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом осуществляют отдельно в одно и то же время.
65. Способ по п. 64, при этом инкубацию первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с активирующим агентом и инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с тиолирующим агентом осуществляют в течение по существу одного и того же периода времени и/или выполняют по существу в одно и то же время.
66. Способ по любому из пп. 44–65, при этом перед инкубацией тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина способ включает:
(i) удаление активирующего агента из композиции, содержащей активированные молекулы стрептавидина или мутеина стрептавидина; и/или
(ii) удаление тиолирующего агента из композиции, содержащей тиолированные молекулы стрептавидина или мутеина стрептавидина.
67. Способ по любому из пп. 44–66, при этом инкубацию множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина и множества тиолированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина начинают в пределах 15 минут после окончания инкубации второго множества молекул стрептавидина с тиолирующим агентом и/или после удаления тиолирующего агента из композиции, содержащей тиолированные молекулы стрептавидина или мутеина стрептавидина.
68. Способ получения олигомерных реагентов в виде частиц, включающий:
инкубацию первого множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с сукцинимидил–6–[(β–малеимидопропионамидо)гексаноатом (SMPH) в течение или приблизительно в течение 1 часа при pH равном или приблизительно равном 7,2 с созданием таким образом множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина, содержащих малеимидную реагирующую с тиолом функциональную группу;
инкубацию второго множества молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с 2–иминотиоланом в течение или приблизительно в течение 1 часа при pH между 7,5 и 8,5, включительно, с созданием таким образом множества тиолированных молекул стрептавидина, содержащих одну или более тиоловых функциональных групп; и
инкубацию множества активированных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с множеством тиолированных молекул стрептавидина в течение или приблизительно в течение 1 часа при pH равном или приблизительно равном 7,2 с получением таким образом композиции частиц, содержащей олигомерные реагенты в виде частиц;
при этом инкубацию множества активированных молекул стрептавидина с множеством тиолированных молекул стрептавидина начинают в пределах 10 минут после инкубации второго множества молекул стрептавидина с 2–иминотиолановыми концами.
69. Способ по любому из пп. 44–68, при этом способ дополнительно включает введение олигомерных реагентов в виде частиц в контакт со стабилизирующим агентом.
70. Способ по любому из пп. 41–43 и 69, при этом стабилизирующий агент снижает количество N–замещенного иминотиолана, присутствующего на лизиновых остатках олигомерных реагентов в виде частиц.
71. Способ по любому из пп. 41–43, 69 и 70, при этом стабилизирующий агент содержит гидроксиламин.
72. Способ по любому из пп. 41–43 и 69–71, при этом стабилизирующий агент удаляют из олигомерных реагентов в виде частиц с помощью хроматографии, необязательно с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC).
73. Способ по любому из пп. 41–72, дополнительно включающий фильтрующую стерилизацию олигомерных реагентов в виде частиц.
74. Способ по любому из пп. 41–43 и 45–73, при этом олигомерные реагенты в виде частиц отделяют от мономерных или меньших олигомерных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC).
75. Способ по п. 74, при этом SEC имеет эксклюзионный предел, и эксклюзионный предел составляет более или приблизительно более 100 кДа, 500 кДа, 750 кДа, 1000 кДа или 2000 кДа.
76. Способ по п. 75, при этом эксклюзионный предел составляет от или приблизительно от 500 кДа до 1000 кДа, необязательно составляет или приблизительно составляет 75 кДа.
77. Способ по любому из пп. 41–43 и 45–76, включающий сбор одной или более фракций, содержащих свободный объем, с отделением таким образом олигомерных реагентов в виде частиц от мономерных или меньших олигомерных молекул стрептавидина или мутеина стрептавидина.
78. Способ по любому из пп. 41–77, дополнительно включающий смешивание олигомерных реагентов в виде частиц с одним или более агентами в условиях для обратимого связывания одного или более агентов с олигомерными реагентами в виде частиц.
79. Олигомерный реагент в виде частиц, полученный с помощью способа по любому из пп. 41–78.
80. Способ мультимеризации одного или более агента с олигомерным реагентом в виде частиц, причем способ включает смешивание олигомерного реагента в виде частиц по любому из пп. 1–31, композиции, содержащей множество олигомерных реагентов в виде частиц по любому из пп. 32–40 или олигомерного реагента в виде частиц, полученного с помощью способа по любому из пп. 41–78, с одним или более агентами в условиях для обратимого связывания одного или более агентов с олигомерными реагентами в виде частиц.
81. Способ по п. 78 или 80, при этом один или более агентов содержат партнера по связыванию, при этом партнер по связыванию способен связываться с одним или более участком связывания на олигомерном реагенте в виде частиц.
82. Способ по п. 81, при этом партнер по связыванию содержит стрептавидин–связывающий пептид.
83. Способ по п. 81 или 82, при этом партнер по связыванию содержит стрептавидин–связывающий пептид, выбираемый из группы, состоящей из Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys (SEQ ID NO: 8), Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys–(GlyGlyGlySer)3–Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys ((SEQ ID NO: 17), Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys–(GlyGlyGlySer)2–Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys (SEQ ID NO: 18) и Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys–(GlyGlyGlySer)2Gly–Gly–Ser–Ala–Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys (SEQ ID NO: 19).
84. Способ по любому из пп. 80–83, при этом один или более агентов представляет собой или содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
85. Способ по п. 84, при этом один или более агентов представляет собой или содержит фрагмент моновалентного антитела.
86. Способ по п. 84 или 85, при этом один или более агентов представляет собой или содержит Fab.
87. Способ по любому из пп. 80–86, при этом один или более агентов представляет собой рецептор–связывающий агент, который связывается или способен связываться с рецептором, экспрессированным на поверхности клетки–мишени.
88. Способ по п. 87, при этом рецептор–связывающий агент представляет собой или содержит стимулирующий агент, способный связываться с молекулой на поверхности клетки–мишени, при этом связывание вызывает или модулирует сигнал в клетке–мишени.
89. Способ по п. 87 или 88, при этом клеткой–мишенью является иммунная клетка.
90. Способ по любому из пп. 87–89, при этом клетка–мишень представляет собой T–клетку.
91. Способ по любому из пп. 87–90, при этом рецептор–связывающий агент способен инициировать связанный с комплексом TCR/CD3 сигнал в T–клетках, связывается с элементом комплекса TCR/CD3; и/или специфически связывается с CD3.
92. Способ по любому из пп. 87–91, при этом стимулирующий агент представляет собой первый рецептор–связывающий агент, а способ дополнительно включает обратимое связывание с олигомерным реагентом в виде частиц второго рецептор–связывающего агента, при этом второй рецептор–связывающий агент способен специфически связываться со второй молекулой на поверхности клетки–мишени, причем это связывание со второй молекулой необязательно способно индуцировать или модулировать сигнал в клетках–мишенях.
93. Способ по п. 92, при этом второй рецептор–связывающий агент специфически связывается с костимулирующей молекулой, вспомогательной молекулой, молекулой иммунной контрольной точки, представляет собой член семейства TNF или рецептор семейства TNF, цитокиновый рецептор, хемокиновый рецептор или представляет собой или содержит молекулу адгезии или фактор, который вызывает выработку цитокина, выработку хемокина и/или экспрессию молекулы адгезии.
94. Способ по п. 92 или 93, при этом второй рецептор–связывающий агент специфически связывается с костимулирующей молекулой, а костимулирующей молекулой является CD28.
95. Способ по любому из пп. 78 и 80–94, при этом один или более агентов представляет собой антитело против CD3 и антитело против CD28, необязательно Fab против CD3 и Fab против CD28.
96. Способ по любому из пп. 87–90, при этом рецептор–связывающий агент специфически связывается с костимулирующей молекулой, вспомогательной молекулой, молекулой иммунной контрольной точки, представляет собой член семейства TNF или рецептор семейства TNF, цитокиновый рецептор, хемокиновый рецептор или представляет собой или содержит молекулу адгезии или фактор, который вызывает выработку цитокина, выработку хемокина и/или экспрессию молекулы адгезии.
97. Способ по любому из пп. 78 и 80–96, при этом один или более агентов представляет собой селективный агент, при этом селективный агент связывается или способен связываться с селективным маркером, который экспрессируется на поверхности клетки–мишени.
98. Способ по п. 97, при этом клеткой–мишенью является иммунная клетка, необязательно T–клетка.
99. Способ по п. 97 или 98, при этом селективным маркером является CCR7, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD27, CD45RA, CD45RO, CD62L и/или CD127.
100. Композиция, содержащая множество олигомерных реагентов в виде частиц, полученных с помощью способа по любому из пп. 41–78 и 80–99.
101. Готовое изделие, содержащее олигомерный реагент в виде частиц по любому из пп. 1–31, композицию, содержащую множество олигомерных реагентов по любому из пп. 32–40 и 100, или олигомерный реагент, полученный с помощью способа по любому из пп. 41–78 и 80–99.
102. Способ модулирования клеток, причем способ включает инкубацию композиции клеток, содержащей клетки–мишени, в присутствии олигомерного реагента в виде частиц по любому из пп. 1–31, композиции, содержащей множество олигомерных реагентов по любому из пп. 32–40 и 100 или олигомерный реагент, полученный с помощью способа по любому из пп. 41–78 и 80–99, модулируя таким образом клетки–мишени.
103. Способ культивирования клеток, причем способ включает инкубацию композиции клеток, содержащей клетки–мишени, в присутствии олигомерного реагента в виде частиц по любому из пп. 1–31, композиции, содержащей множество олигомерных реагентов по любому из пп. 32–40 и 100 или олигомерный реагент, полученный с помощью способа по любому из пп. 41–78 и 80–99.
104. Способ по п. 102 или 103, при этом олигомерный реагент в виде частиц обратимо связан с одним или более рецептор–связывающим агентом, который связывается или способен связываться с рецептором, экспрессированным на поверхности клетки–мишени.
105. Способ по п. 104, при этом один или более рецептор–связывающих агентов содержат партнера по связыванию, при этом партнер по связыванию обратимо связан с одним или более участком связывания на олигомерном реагенте в виде частиц.
106. Способ по п. 105, при этом партнер по связыванию содержит стрептавидин–связывающий пептид.
107. Способ по п. 105 или 106, при этом партнер по связыванию содержит стрептавидин–связывающий пептид, выбираемый из группы, состоящей из Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys (SEQ ID NO: 8), Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys–(GlyGlyGlySer)3–Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys ((SEQ ID NO: 17), Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys–(GlyGlyGlySer)2–Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys (SEQ ID NO: 18) и Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys–(GlyGlyGlySer)2Gly–Gly–Ser–Ala–Trp–Ser–His–Pro–Gln–Phe–Glu–Lys (SEQ ID NO: 19).
108. Способ по любому из пп. 87–99, 102-107, при этом один или более рецептор–связывающих агентов содержат антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
109. Способ по п. 108, при этом один или более рецептор–связывающих агентов представляет собой или содержит фрагмент моновалентного антитела.
110. Способ по п. 108 или 109, при этом один или более агентов представляет собой или содержит Fab.
111. Способ по любому из пп. 102–110, при этом клеткой–мишенью является иммунная клетка.
112. Способ по любому из пп. 102–111, при этом клетка–мишень представляет собой T–клетку.
113. Способ по любому из пп. 104–112, при этом рецептор–связывающий агент представляет собой или содержит стимулирующий агент, способный связываться с молекулой на поверхности клетки–мишени, при этом связывание вызывает или модулирует сигнал в клетке–мишени.
114. Способ по любому из пп. 104–113, при этом рецептор–связывающий агент способен инициировать связанный с комплексом TCR/CD3 сигнал в T–клетках, связывается с элементом комплекса TCR/CD3; и/или специфически связывается с CD3.
115. Способ по п. 113 или 114, при этом стимулирующий агент представляет собой первый рецептор–связывающий агент, а олигомерный реагент в виде частиц содержит второй рецептор–связывающий агент, при этом второй рецептор–связывающий агент способен специфически связываться со второй молекулой на поверхности клетки–мишени, при этом связывание со второй молекулой необязательно способно индуцировать или модулировать сигнал в клетках–мишенях.
116. Способ по п. 115, при этом второй рецептор–связывающий агент специфически связывается с костимулирующей молекулой, вспомогательной молекулой, молекулой иммунной контрольной точки, представляет собой член семейства TNF или рецептор семейства TNF, цитокиновый рецептор, хемокиновый рецептор или представляет собой или содержит молекулу адгезии или фактор, который вызывает выработку цитокина, выработку хемокина и/или экспрессию молекулы адгезии.
117. Способ по п. 115 или 116, при этом второй рецептор–связывающий агент специфически связывается с костимулирующей молекулой, а костимулирующей молекулой является CD28.
118. Способ по любому из пп. 104–117, при этом один или более агентов представляет собой антитело против CD3 и антитело против CD28, необязательно Fab против CD3 и Fab против CD28.
119. Способ по любому из пп.102–118, при этом клетки–мишени экспрессируют рекомбинантный рецептор, необязательно рекомбинантный T–клеточный рецептор и/или химерный антигенный рецептор (CAR).
120. Способ по любому из пп. 104–119, дополнительно включающий разрыв обратимой связи между одним или более агентами и олигомерным реагентом в виде частиц, причем указанный разрыв включает в себя введение в клетки–мишени вещества, способного изменить направление или конкурировать со связью между одним или более агентами и олигомерным реагентом в виде частиц.
121. Способ по п. 120, при этом вещество содержит биотин или аналог биотина, необязательно D–биотин.
RU2019138171A 2017-04-27 2018-04-27 Олигомерные реагенты в виде частиц и способы их применения RU2777989C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762491245P 2017-04-27 2017-04-27
US62/491,245 2017-04-27
PCT/IB2018/000507 WO2018197949A1 (en) 2017-04-27 2018-04-27 Oligomeric particle reagents and methods of use thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2022121121A Division RU2022121121A (ru) 2017-04-27 2018-04-27 Олигомерные реагенты в виде частиц и способы их применения

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019138171A true RU2019138171A (ru) 2021-05-27
RU2019138171A3 RU2019138171A3 (ru) 2022-01-24
RU2777989C2 RU2777989C2 (ru) 2022-08-12

Family

ID=

Also Published As

Publication number Publication date
KR20200019126A (ko) 2020-02-21
MA49288A (fr) 2020-03-04
PH12019502415A1 (en) 2020-09-14
AR111625A1 (es) 2019-07-31
JP2023159346A (ja) 2023-10-31
JP2020517705A (ja) 2020-06-18
AU2018260380A1 (en) 2019-11-07
NZ758485A (en) 2024-02-23
US20240101613A1 (en) 2024-03-28
JP7339160B2 (ja) 2023-09-05
US20210032297A1 (en) 2021-02-04
BR112019022356A2 (pt) 2020-05-26
WO2018197949A1 (en) 2018-11-01
AR127020A2 (es) 2023-12-13
TW201842335A (zh) 2018-12-01
CN111032850A (zh) 2020-04-17
EP3615653A1 (en) 2020-03-04
KR20230164219A (ko) 2023-12-01
US11866465B2 (en) 2024-01-09
RU2019138171A3 (ru) 2022-01-24
CA3060526A1 (en) 2018-11-01
KR102606210B1 (ko) 2023-11-24
SG11201909931PA (en) 2019-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220195388A1 (en) Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells
JP2020517705A5 (ru)
US20240101613A1 (en) Oligomeric particle reagents and methods of use thereof
US20230295567A1 (en) Methods for culturing cells and kits and apparatus for same
AU2016341533B2 (en) Methods for culturing cells and kits and apparatus for same
JP2023027240A5 (ru)
RU2018118574A (ru) Способы, наборы, средства и устройства для трансдукции
NZ763583B2 (en) Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells
NZ725213B2 (en) Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells
NZ763585B2 (en) Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells
JPWO2020219843A5 (ru)
NZ763587B2 (en) Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells