RU2021131851A - Непрерывное получение рекомбинантных белков - Google Patents

Claims (51)

1. Непрерывный способ получения рекомбинантного белка, при этом способ включает:

(a) захват рекомбинантного белка из практически бесклеточного образца с помощью одной или множества систем для хроматографии с захватом и элюирование рекомбинантного белка из одной или множества систем для хроматографии с захватом с получением элюатов, содержащих рекомбинантный белок, где элюаты гомогенизируют с получением единой смеси, содержащей рекомбинантный белок;

(b) подвергание гомогенизированной единой смеси хроматографии с применением одной или множества систем для хроматографии после захвата и сбор полученного продукта, содержащего рекомбинантный белок, и

(c) подвергание полученного продукта ультрафильтрации и диафильтрации с очисткой рекомбинантного белка,

где способ является интегрированным и непрерывным от стадии (a) до стадии (c).

2. Способ по п. 1, дополнительно включающий подвергание гомогенизированной единой смеси инактивации вирусов после стадии (a).

3. Способ по п. 2, где инактивация вирусов включает инактивацию раствором на основе растворителя-детергента, инактивацию нагреванием или инактивацию кислым pH.

4. Способ по п. 3, где инактивация кислым pH включает:

(a) доведение pH гомогенизированной единой смеси до низкого pH поточным путем посредством добавления одного или более растворов, и

(b) инкубацию гомогенизированной единой смеси с доведенным pH при низком pH в течение периода времени, приводящего к получению смеси, предусматривающей инактивацию вирусов.

5. Способ по п. 4, где период времени составляет от 15 минут до 2 часов.

6. Способ по п. 1, дополнительно включающий подвергание продукта, полученного на стадии (b), фильтрации с удалением вирусов.

7. Способ по п. 1, где практически бесклеточный образец удаляют из перфузионного биореактора, содержащего клетки-хозяева, которые продуцируют рекомбинантный белок, при этом биореактор для периодического культивирования с подпиткой содержит клетки-хозяева, которые продуцируют рекомбинантный белок, или осветленную жидкую культуру, содержащую клетки-хозяева, которые продуцируют рекомбинантный белок.

8. Способ по п. 1, где одна или множество систем для хроматографии с захватом и одна или множество систем для хроматографии после захвата содержат среду для хроматографии, содержащую смоляные шарики, пористые мембраны или нановолокна.

9. Способ по п. 8, где среда для хроматографии функционализирована для аффинной хроматографии, катионообменной хроматографии, анионообменной хроматографии, хроматографии гидрофобных взаимодействий или хроматографии в смешанном режиме.

10. Способ по п. 9, где среда для аффинной хроматографии представляет собой смолу на основе белка А.

11. Способ по п. 1, где одна или множество систем для хроматографии с захватом и одна или множество систем для хроматографии после захвата представляют собой систему для периодической противоточной хроматографии (PCCS).

12. Способ по п. 4, где инкубацию гомогенизированной единой смеси с доведенным pH при низком pH в течение периода времени, который приводит к инактивации вирусов, осуществляют в трубчатом проточном реакторе.

13. Способ по п. 4, где добавление одного или более растворов основано на измерениях концентрации рекомбинантного белка поточным путем и измерениях скорости потока поточным путем.

14. Способ по п. 6, где фильтрацию с удалением вирусов осуществляют в контуре под давлением.

15. Способ по п. 14, где контур под давлением содержит сосуд под давлением, фильтр для удаления вирусов и стерилизующий фильтр.

16. Способ по п. 15, где сосуд под давлением представляет собой одноразовый, закрытый и стерилизуемый сосуд.

17. Способ по п. 16, где фильтр для удаления вирусов представляет собой ультрафильтр или нанофильтр.

18. Способ по п. 6, где фильтрацию с удалением вирусов осуществляют с применением тупиковой фильтрации.

19. Способ по п. 18, где тупиковую фильтрацию осуществляют с применением ультрафильтра или нанофильтра.

20. Способ по п. 1, в котором ультрафильтрацию осуществляют посредством однопроходной тангенциальной поточной фильтрации.

21. Способ по п. 1, где диафильтрацию осуществляют с применением кассеты для однопроходной диафильтрации.

22. Способ по п. 1, где рекомбинантный белок представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

23. Способ по п. 1, дополнительно включающий добавление одного или более вспомогательных веществ после стадии (c) с получением терапевтического лекарственного вещества.

24. Производственная система для получения рекомбинантного белка, при этом производственная система предусматривает:

(a) первую технологическую секцию, предусматривающую биореактор, содержащий клетки-хозяева, которые продуцируют рекомбинантный белок;

(b) вторую технологическую секцию, предусматривающую одну или множество систем для хроматографии с захватом;

(c) третью технологическую секцию, предусматривающую одну или множество систем для хроматографии после захвата, и

(d) четвертую технологическую секцию, предусматривающую систему для ультрафильтрации и систему для диафильтрации.

25. Система по п. 24, дополнительно предусматривающая пятую технологическую секцию, расположенную между первой технологической секцией и второй технологической секцией, где пятая технологическая секция предусматривает подсистему для предварительной инактивации вирусов.

26. Система по п. 25, где подсистема представляет собой трубчатый проточный реактор.

27. Система по п. 24, дополнительно предусматривающая шестую технологическую секцию, расположенную между третьей технологической секцией и четвертой технологической секцией, где шестая технологическая секция предусматривает вторую подсистему для предварительной фильтрации с удалением вирусов.

28. Система по п. 24, где одна или множество систем для хроматографии с захватом и одна или множество систем для хроматографии после захвата содержат среду для хроматографии, содержащую смоляные шарики, пористые мембраны или нановолокна.

29. Система по п. 28, где среда для хроматографии функционализирована для аффинной хроматографии, катионообменной хроматографии, анионообменной хроматографии, хроматографии гидрофобных взаимодействий или хроматографии в смешанном режиме.

30. Система по п. 29, где среда для аффинной хроматографии представляет собой смолу на основе белка А.

31. Система по п. 24, где одна или множество колонок для хроматографии с захватом и одна или множество систем для хроматографии после захвата представляют собой систему для периодической противоточной хроматографии (PCCS).

32. Система по п. 26, где трубчатый проточный реактор характеризуется определенным минимальным временем удержания, составляющим по меньшей мере 30 минут.

33. Система по п. 27, где вторая подсистема для осуществления фильтрации с удалением вирусов представляет собой контейнер под давлением, содержащий фильтр для удаления вирусов и стерилизующий фильтр.

34. Система по п. 33, где контейнер под давлением представляет собой одноразовый, закрытый и стерилизуемый контейнер.

35. Система по п. 33, где фильтр для удаления вирусов представляет собой ультрафильтр или нанофильтр.

36. Система по п. 24, где первая технологическая секция предусматривает выпускное отверстие, которое соединено с впускным отверстием во второй технологической секции, где вторая технологическая секция предусматривает выпускное отверстие, которое соединено с впускным отверстием в третьей технологической секции, где третья технологическая секция предусматривает выпускное отверстие, которое соединено с впускным отверстием в четвертой технологической секции.

37. Система по п. 24, дополнительно содержащая сосуд для гашения пульсаций потока между каждой из первой технологической секции, второй технологической секции, третьей технологической секции и четвертой технологической секции.

38. Система по п. 24, где рекомбинантный белок представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

39. Система по п. 24, где система находится на подставке.

40. Система по п. 24, где система является закрытой.

41. Система по п. 24, дополнительно предусматривающая седьмую технологическую секцию, предусматривающую третью подсистему, где третья подсистема содержит поточные вспомогательные вещества для составления терапевтического лекарственного вещества.