RU2020139055A - Новый слитый белок, специфичный для cd137 и pd-l1 - Google Patents

Новый слитый белок, специфичный для cd137 и pd-l1 Download PDF

Info

Publication number
RU2020139055A
RU2020139055A RU2020139055A RU2020139055A RU2020139055A RU 2020139055 A RU2020139055 A RU 2020139055A RU 2020139055 A RU2020139055 A RU 2020139055A RU 2020139055 A RU2020139055 A RU 2020139055A RU 2020139055 A RU2020139055 A RU 2020139055A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
ser
leu
lys
asp
fusion protein
Prior art date
Application number
RU2020139055A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2818349C2 (ru
Inventor
Марина Павлиду
Лючия Паттарини
Аликс Шолер-Даирель
Кристина Роте
Шейн ОЛВИЛЛ
Рашида Бель Айба
Марлон Хиннер
Жанет Пепер
Original Assignee
Пирис Фармасьютикалс Гмбх
Ле Лаборатуар Сервье
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пирис Фармасьютикалс Гмбх, Ле Лаборатуар Сервье filed Critical Пирис Фармасьютикалс Гмбх
Publication of RU2020139055A publication Critical patent/RU2020139055A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2818349C2 publication Critical patent/RU2818349C2/ru

Links

Claims (111)

1. Слитый белок, способный связывать как CD137, так и PD-L1, где указанный слитый белок содержит по меньшей мере две субъединицы в любом порядке, причем первая субъединица содержит полноразмерный иммуноглобулин или его антигенсвязывающий домен и является специфичной к PD-L1, и при этом вторая субъединица содержит мутеин липокалина и является специфичной к CD137.
2. Слитый белок по п. 1, дополнительно содержащий третью субъединицу, которая содержит мутеин липокалина, специфичный к CD137.
3. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен связывать PD-L1 со значением KD не более чем приблизительно 2 нМ, или значением, сопоставимым или более низким, чем значение KD иммуноглобулина или его антигенсвязывающего домена, включенного в указанную первую субъединицу, самого по себе.
4. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен связывать CD137 со значением KD не более чем приблизительно 7 нМ, или значением, сопоставимым или более низким, чем значение KD мутеина липокалина, специфичного к CD137, включенного в указанную вторую субъединицу, самого по себе.
5. Слитый белок по п. 3 или 4, отличающийся тем, что значение KD определяют с помощью анализа методом поверхностного плазмонного резонанса (SPR).
6. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен связывать PD-L1 со значением EC50 не более чем приблизительно 0,5 нМ, или значением, сопоставимым или более низким, чем значение EC50 иммуноглобулина или его антигенсвязывающего домена, включенного в указанную первую субъединицу, самого по себе.
7. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен связывать CD137 со значением EC50 не более чем приблизительно 0,6 нМ, или значением, сопоставимым или более низким, чем значение EC50 мутеина липокалина, специфичного к CD137, включенного в указанную вторую субъединицу, по отдельности.
8. Слитый белок по любому из пп. 6, 7, отличающийся тем, что значение ЕС50 определяют с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).
9. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок обладает перекрестной реактивностью с PD-L1 яванского макака.
10. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок обладает перекрестной реактивностью с CD137 яванского макака.
11. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен одновременно связывать CD137 и PD-L1 со значениями ЕС50 не более чем приблизительно 10 нМ, когда указанный слитый белок оценивают в анализе ELISA.
12. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен связывать CD137, экспрессируемый на клетке, со значениями ЕС50 не более чем приблизительно 60 нМ.
13. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен связывать PD-L1, экспрессируемый на клетке, со значениями ЕС50 не более чем приблизительно 10 нМ, когда указанный слитый белок оценивают в анализе методом проточной цитометрии.
14. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен связывать экспрессирующие PD-L1 опухолевые клетки.
15. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен связывать CD137 в присутствии лиганда CD137.
16. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен конкурировать с PD-1 за связывание с PD-L1.
17. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен конкурировать с антителом, представленным в SEQ ID NO: 28 и 29, за связывание с CD137.
18. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный слитый белок имеет перекрывающийся CD137-связывающий эпитоп с антителом, представленным в SEQ ID NO: 28 и 29.
19. Слитый белок по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен стимулировать пролиферацию и/или ответы Т-клеток.
20. Слитый белок по любому из пп. 1-19, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен стимулировать пролиферацию CD4+ и/или CD8+ Т-клеток.
21. Слитый белок по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен индуцировать повышенную секрецию IL-2 и/или IFN-гамма.
22. Слитый белок по любому из пп. 1-21, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен индуцировать повышенную секрецию цитотоксических факторов.
23. Слитый белок по любому из пп. 1-22, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен костимулировать ответы Т-клеток PD-L1-зависимым образом.
24. Слитый белок по любому из пп. 1-23, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен костимулировать ответы Т-клеток в микроокружении опухоли.
25. Слитый белок по любому из пп. 1-24, отличающийся тем, что указанный слитый белок неспособен костимулировать ответы Т-клеток в отсутствие PD-L1.
26. Слитый белок по любому из пп. 1-25, отличающийся тем, что указанный слитый белок способен блокировать ингибирующий сигнал PD-1.
27. Слитый белок по любому из пп. 1-26, отличающийся тем, что указанный слитый белок имеет антителоподобный фармакокинетический профиль.
28. Слитый белок по любому из пп. 1-27, отличающийся тем, что указанный слитый белок имеет более благоприятный фармакокинетический профиль, чем SEQ ID NO: 147 или SEQ ID NO: 148.
29. Слитый белок по любому из пп. 1-28, отличающийся тем, что указанный мутеин липокалина содержит один или более мутированных аминокислотных остатков в положениях, соответствующих положениям 5, 26-31, 33-34, 42, 46, 52, 56, 58, 60-61, 65, 71, 85, 94, 101, 104-106, 108, 111, 114, 121, 133, 148, 150 и 153 линейной полипептидной последовательности зрелого человеческого липокалина слезной жидкости (SEQ ID NO: 1).
30. Слитый белок по п. 29, в котором аминокислотная последовательность мутеина липокалина содержит в одном или более положениях, соответствующих положениям 5, 26-31, 33-34, 42, 46, 52, 56, 58, 60-61, 65, 71, 85, 94, 101, 104-106, 108, 111, 114, 121, 133, 148, 150 и 153 линейной полипептидной последовательности зрелого hTlc (SEQ ID NO: 1), один или более из следующих мутированных аминокислотных остатков: Ala 5 → Val или Thr; Arg 26 → Glu; Glu 27 → Gly; Phe 28 → Cys; Pro 29 → Arg; Glu 30 → Pro; Met 31 → Trp; Leu 33 → Ile; Glu 34 → Phe; Thr 42 → Ser; Gly 46 → Asp; Lys 52 → Glu; Leu 56 → Ala; Ser 58 → Asp; Arg 60 → Pro; Cys 61 → Ala; Lys 65 → Arg или Asn; Thr 71 → Ala; Val 85 → Asp; Lys 94 → Arg или Glu; Cys 101 → Ser; Glu 104 → Val; Leu 105 → Cys; His 106 → Asp; Lys 108 → Ser; Arg 111 → Pro; Lys 114 → Trp; Lys 121 → Glu; Ala 133 → Thr; Arg 148 → Ser; Ser 150 → Ile и Cys 153 → Ser.
31. Слитый белок по п. 29 или 30, в котором аминокислотная последовательность мутеина липокалина содержит один из следующих наборов мутированных аминокислотных остатков по сравнению с линейной полипептидной последовательностью зрелого человеческого липокалина слезной жидкости (SEQ ID NO: 1):
(a) Arg 26 → Glu; Glu 27 → Gly; Phe 28 → Cys; Pro 29 → Arg; Glu 30 → Pro; Met 31 → Trp; Leu 33 → Ile; Glu 34 → Phe; Leu 56 → Ala; Ser 58 → Asp; Arg 60 → Pro; Cys 61 → Ala; Cys 101 → Ser; Glu 104 → Val; Leu 105 → Cys; His 106 → Asp; Lys 108 → Ser; Arg 111 → Pro; Lys 114 → Trp; и Cys 153 → Ser;
(b) Ala 5 → Thr; Arg 26 → Glu; Glu 27 → Gly; Phe 28 → Cys; Pro 29 → Arg; Glu 30 → Pro; Met 31 → Trp; Leu 33 → Ile; Glu 34 → Phe; Leu 56 → Ala; Ser 58 → Asp; Arg 60 → Pro; Cys 61 → Ala; Lys 65 → Arg; Val 85 → Asp; Cys 101 → Ser; Glu 104 → Val; Leu 105 → Cys; His 106 → Asp; Lys 108 → Ser; Arg 111 → Pro; Lys 114 → Trp; Lys 121 → Glu; Ala 133 → Thr; и Cys 153 → Ser;
(c) Arg 26 → Glu; Glu 27 → Gly; Phe 28 → Cys; Pro 29 → Arg; Glu 30 → Pro; Met 31 → Trp; Leu 33 → Ile; Glu 34 → Phe; Leu 56 → Ala; Ser 58 → Asp; Arg 60 → Pro; Cys 61 → Ala; Lys 65 → Asn; Lys 94 → Arg; Cys 101 → Ser; Glu 104 → Val; Leu 105 → Cys; His 106 → Asp; Lys 108 → Ser; Arg 111 → Pro; Lys 114 → Trp; Lys 121 → Glu; Ala 133 → Thr; и Cys 153 → Ser;
(d) Ala 5 → Val; Arg 26 → Glu; Glu 27 → Gly; Phe 28 → Cys; Pro 29 → Arg; Glu 30 → Pro; Met 31 → Trp; Leu 33 → Ile; Glu 34 → Phe; Leu 56 → Ala; Ser 58 → Asp; Arg 60 → Pro; Cys 61 → Ala; Lys 65 → Arg; Lys 94 → Glu; Cys 101 → Ser; Glu 104 → Val; Leu 105 → Cys; His 106 → Asp; Lys 108 → Ser; Arg 111 → Pro; Lys 114 → Trp; Lys 121 → Glu; Ala 133 → Thr; и Cys 153 → Ser;
(e) Arg 26 → Glu; Glu 27 → Gly; Phe 28 → Cys; Pro 29 → Arg; Glu 30 → Pro; Met 31 → Trp; Leu 33 → Ile; Glu 34 → Phe; Thr 42 → Ser; Leu 56 → Ala; Ser 58 → Asp; Arg 60 → Pro; Cys 61 → Ala; Cys 101 → Ser; Glu 104 → Val; Leu 105 → Cys; His 106 → Asp; Lys 108 → Ser; Arg 111 → Pro; Lys 114 → Trp; Ser 150 → Ile; и Cys 153 → Ser;
(f) Arg 26 → Glu; Glu 27 → Gly; Phe 28 → Cys; Pro 29 → Arg; Glu 30 → Pro; Met 31 → Trp; Leu 33 → Ile; Glu 34 → Phe; Lys 52 → Glu; Leu 56 → Ala; Ser 58 → Asp; Arg 60 → Pro; Cys 61 → Ala; Thr 71 → Ala; Cys 101 → Ser; Glu 104 → Val; Leu 105 → Cys; His 106 → Asp; Lys 108 → Ser; Arg 111 → Pro; Lys 114 → Trp; Ala 133 → Thr; Arg 148 → Ser; Ser 150 → Ile; и Cys 153 → Ser; и
(g) Ala 5 → Thr; Arg 26 → Glu; Glu 27 → Gly; Phe 28 → Cys; Pro 29 → Arg; Glu 30 → Pro; Met 31 → Trp; Leu 33 → Ile; Glu 34 → Phe; Gly 46 → Asp; Leu 56 → Ala; Ser 58 → Asp; Arg 60 → Pro; Cys 61 → Ala; Thr 71 → Ala; Cys 101 → Ser; Glu 104 → Val; Leu 105 → Cys; His 106 → Asp; Lys 108 → Ser; Arg 111 → Pro; Lys 114 → Trp; Ser 150 → Ile; и Cys 153 → Ser.
32. Слитый белок по любому из пп. 29-31, в котором аминокислотная последовательность мутеина липокалина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 34-40 или их фрагмента или варианта.
33. Слитый белок по любому из пп. 29-32, в котором аминокислотная последовательность мутеина липокалина обладает по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 34-40.
34. Слитый белок по любому из пп. 1-28, в котором мутеин липокалина содержит один или более мутированных аминокислотных остатков в положениях, соответствующих положениям 28, 36, 40-41, 49, 52, 65, 68, 70, 72-73, 77, 79, 81, 83, 87, 94, 96, 100, 103, 106, 125, 127, 132 и 134 линейной полипептидной последовательности зрелого человеческого липокалина, ассоциированного с желатиназой нейтрофилов (hNGAL) (SEQ ID NO: 2).
35. Слитый белок по п. 34, в котором аминокислотная последовательность мутеина липокалина содержит в положениях, соответствующих положениям 28, 36, 40-41, 49, 52, 65, 68, 70, 72-73, 77, 79, 81, 83, 87, 94, 96, 100, 103, 106, 125, 127, 132 и 134 линейной полипептидной последовательности зрелого человеческого липокалина, ассоциированного с желатиназой нейтрофилов (hNGAL) (SEQ ID NO: 2), один или более из следующих мутированных аминокислотных остатков: Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Arg или Lys; Gln 49 → Val, Ile, His, Ser или Asn; Tyr 52 → Met; Asn 65 → Asp; Ser 68 → Met, Ala или Gly; Leu 70 → Ala, Lys, Ser или Thr; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Met, Arg, Thr или Asn; Trp 79 → Ala или Asp; Arg 81 → Met, Trp или Ser; Phe 83 → Leu; Cys 87 → Ser; Leu 94 → Phe; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu и Lys 134 → Tyr.
36. Слитый белок по любому из пп. 1-28, в котором мутеин липокалина содержит один или более мутированных аминокислотных остатков в положениях, соответствующих положениям 20, 25, 28, 33, 36, 40-41, 44, 49, 52, 59, 68, 70-73, 77-82, 87, 92, 96, 98, 100, 101, 103, 122, 125, 127, 132 и 134 линейной полипептидной последовательности зрелого человеческого липокалина, ассоциированного с желатиназой нейтрофилов (hNGAL) (SEQ ID NO: 2).
37. Слитый белок по п. 36, в котором аминокислотная последовательность мутеина липокалина содержит в положениях, соответствующих положениям 20, 25, 28, 33, 36, 40-41, 44, 49, 52, 59, 68, 70-73, 77-82, 87, 92, 96, 98, 100, 101, 103, 122, 125, 127, 132 и 134 линейной полипептидной последовательности зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 2), один или более из следующих мутированных аминокислотных остатков: Gln 20 → Arg; Asn 25 → Tyr или Asp; Gln 28 → His; Val 33 → Ile; Leu 36 →Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Glu 44 → Val или Asp; Gln 49 → His; Tyr 52 →Ser или Gly; Lys 59 → Asn; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Phe 71 → Leu; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln или His; Tyr 78 → His; Trp 79 → Ile; Ile 80 → Asn; Arg 81 → Trp или Gln; Thr 82 → Pro; Cys 87 → Ser; Phe 92 → Leu или Ser; Asn 96 → Phe; Lys 98 → Arg; Tyr 100 → Asp; Pro 101 → Leu; Leu 103 → His или Pro; Phe 122 → Tyr; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly.
38. Слитый белок по любому из пп. 34-37, в котором аминокислотная последовательность мутеина липокалина содержит один из следующих наборов мутированных аминокислотных остатков по сравнению с линейной полипептидной последовательностью зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 2):
(a) Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Lys; Gln 49 → Asn; Tyr 52 → Met; Ser 68 → Gly; Leu 70 → Thr; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Thr; Trp 79 → Ala; Arg 81 → Ser; Cys 87 → Ser; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu; и Lys 134 → Tyr;
(b) Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Arg; Gln 49 → Ile; Tyr 52 → Met; Asn 65 → Asp; Ser 68 → Met; Leu 70 → Lys; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Met; Trp 79 → Asp; Arg 81 → Trp; Cys 87 → Ser; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu; и Lys 134 → Tyr;
(c) Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Arg; Gln 49 → Asn; Tyr 52 → Met; Asn 65 → Asp; Ser 68 → Ala; Leu 70 → Ala; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Thr; Trp 79 → Asp; Arg 81 → Trp; Cys 87 → Ser; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu; и Lys 134 → Tyr;
(d) Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Lys; Gln 49 → Asn; Tyr 52 → Met; Asn 65 → Asp; Ser 68 → Ala; Leu 70 → Ala; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Thr; Trp 79 → Asp; Arg 81 → Trp; Cys 87 → Ser; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu; и Lys 134 → Tyr;
(e) Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Lys; Gln 49 → Ser; Tyr 52 → Met; Asn 65 → Asp; Ser 68 → Gly; Leu 70 → Ser; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Thr; Trp 79 → Ala; Arg 81 → Met; Cys 87 → Ser; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu; и Lys 134 → Tyr;
(f) Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Lys; Gln 49 → Val; Tyr 52 → Met; Asn 65 → Asp; Ser 68 → Gly; Leu 70 → Thr; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Arg; Trp 79 → Asp; Arg 81 → Ser; Cys 87 → Ser; Leu 94 → Phe; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu; и Lys 134 → Tyr;
(g) Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Arg; Gln 49 → His; Tyr 52 → Met; Asn 65 → Asp; Ser 68 → Gly; Leu 70 → Thr; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Thr; Trp 79 → Ala; Arg 81 → Ser; Cys 87 → Ser; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu; и Lys 134 → Tyr;
(h) Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Lys; Gln 49 → Asn; Tyr 52 → Met; Asn 65 → Asp; Ser 68 → Gly; Leu 70 → Thr; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Thr; Trp 79 → Ala; Arg 81 → Ser; Phe 83 → Leu; Cys 87 → Ser; Leu 94 → Phe; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu; и Lys 134 → Tyr;
(i) Gln 28 → His; Leu 36 → Gln; Ala 40 → Ile; Ile 41 → Arg; Gln 49 → Ser; Tyr 52 → Met; Asn 65 → Asp; Ser 68 → Ala; Leu 70 → Thr; Arg 72 → Asp; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Asn; Trp 79 → Ala; Arg 81 → Ser; Cys 87 → Ser; Asn 96 → Lys; Tyr 100 → Phe; Leu 103 → His; Tyr 106 → Ser; Lys 125 → Phe; Ser 127 → Phe; Tyr 132 → Glu; и Lys 134 → Tyr;
(j) Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Gln 49 → His; Tyr 52 → Ser; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln; Trp 79 → Ile; Arg 81 → Trp; Asn 96 → Phe; Tyr 100 → Asp; Leu 103 → His; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly;
(k) Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Gln 49 → His; Tyr 52 → Ser; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln; Trp 79 → Ile; Arg 81 → Trp; Phe 92 → Leu; Asn 96 → Phe; Lys 98 → Arg; Tyr 100 → Asp; Pro 101 → Leu; Leu 103 → His; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly;
(l) Asn 25 → Tyr; Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Gln 49 → His; Tyr 52 → Gly; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Phe 71 → Leu; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln; Trp 79 → Ile; Arg 81 → Gln; Phe 92 → Ser; Asn 96 → Phe; Tyr 100 → Asp; Leu 103 → His; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly;
(m) Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Gln 49 → His; Tyr 52 → Gly; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln; Tyr 78 → His; Trp 79 → Ile; Arg 81 → Trp; Phe 92 → Leu; Asn 96 → Phe; Tyr 100 → Asp; Leu 103 → His; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly;
(n) Asn 25 → Asp; Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Gln 49 → His; Tyr 52 → Gly; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln; Trp 79 → Ile; Arg 81 → Trp; Phe 92 → Leu; Asn 96 → Phe; Tyr 100 → Asp; Leu 103 → His; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly;
(o) Val 33 → Ile; Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Gln 49 → His; Tyr 52 → Gly; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln; Trp 79 → Ile; Arg 81 → Trp; Phe 92 → Leu; Asn 96 → Phe; Tyr 100 → Asp; Leu 103 → His; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly;
(p) Gln 20 → Arg; Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Glu 44 → Val; Gln 49 → His; Tyr 52 → Gly; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln; Trp 79 → Ile; Arg 81 → Trp; Phe 92 → Leu; Asn 96 → Phe; Tyr 100 → Asp; Leu 103 → His; Phe 122 → Tyr; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly;
(q) Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Gln 49 → His; Tyr 52 → Ser; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln; Trp 79 → Ile; Ile 80 → Asn; Arg 81 → Trp; Thr 82 → Pro; Asn 96 → Phe; Tyr 100 → Asp; Pro 101 → Leu; Leu 103 → Pro; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly;
(r) Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Gln 49 → His; Tyr 52 → Gly; Lys 59 → Asn; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → Gln; Trp 79 → Ile; Arg 81 → Trp; Phe 92 → Leu; Asn 96 → Phe; Tyr 100 → Asp; Leu 103 → His; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly; и
(s) Leu 36 → Met; Ala 40 → Asn; Ile 41 → Leu; Glu 44 → Asp; Gln 49 → His; Tyr 52 → Ser; Ser 68 → Asp; Leu 70 → Met; Phe 71 → Leu; Arg 72 → Leu; Lys 73 → Asp; Asp 77 → His; Trp 79 → Ile; Arg 81 → Trp; Phe 92 → Leu; Asn 96 → Phe; Tyr 100 → Asp; Leu 103 → His; Lys 125 → Ser; Ser 127 → Ile; Tyr 132 → Trp; и Lys 134 → Gly.
39. Слитый белок по любому из пп. 34-38, в котором аминокислотная последовательность мутеина липокалина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 41-59 или их фрагмента или варианта.
40. Слитый белок по любому из пп. 34-38, в котором аминокислотная последовательность мутеина липокалина обладает по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 41-59.
41. Слитый белок по любому из пп. 1-40, в котором одна субъединица связана с другой субъединицей посредством линкера.
42. Слитый белок по любому из пп. 1-41, в котором вторая субъединица связана на N-конце посредством линкера с N- или C-концом константной области каждой тяжелой цепи (CH) первой субъединицы или N- или С-концом константной области каждой легкой цепи (CL) первой субъединицы.
43 Слитый белок по любому из пп. 1-42, в котором третья субъединица связана на N-конце посредством линкера с N- или C-концом константной области каждой тяжелой цепи (CH) первой субъединицы, N- или С-концом константной области каждой легкой цепи (CL) первой субъединицы или С-концом каждой второй субъединицы.
44. Слитый белок по любому из пп. 41-43, в котором линкер представляет собой неструктурированный линкер (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3 (SEQ ID NO: 13).
45. Слитый белок по любому из пп. 41-43, в котором линкер представляет собой неструктурированный глицин-сериновый линкер, полипролиновый линкер, пролин-аланин-сериновый полимер или линкер, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 13-23.
46. Слитый белок по любому из пп. 1-45, в котором первая субъединица представляет собой антитело.
47. Слитый белок по п. 46, в котором вариабельная область тяжелой цепи антитела выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 75-79, и в котором вариабельная область легкой цепи моноклонального антитела выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 80-84.
48. Слитый белок по п. 46, в котором антитело содержит тяжелую цепь, представляющую собой любую из последовательностей SEQ ID NO: 85-86, и легкую цепь с последовательностью SEQ ID NO: 87.
49. Слитый белок по п. 46, в котором антитело содержит следующие вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соответственно: SEQ ID NO: 75 и 80, SEQ ID NO: 76 и 81, SEQ ID NO: 77 и 82, SEQ ID NO: 78 и 83 или SEQ ID NO: 79 и 84.
50. Слитый белок по п. 46, в котором антитело содержит следующие тяжелую цепь и легкую цепь, соответственно: SEQ ID NO: 85 и 87 и SEQ ID NO: 86 и 87.
51. Слитый белок по п. 46, в котором тяжелая цепь антитела содержит один из следующих наборов последовательностей CDR:
(a) GFSLSNYD (HCDR1, SEQ ID NO: 59), IWTGGAT (HCDR2, SEQ ID NO: 60), VRDSNYRYDEPFTY (HCDR3; SEQ ID NO: 61);
(b) GFDIKDTY (HCDR1, SEQ ID NO: 65), IDPADGNT (HCDR2, SEQ ID NO: 66), ARGLGAWFAS (HCDR3; SEQ ID NO: 67); и
(c) GFNIKDTY (HCDR1, SEQ ID NO: 70), IDPANGNT (HCDR2, SEQ ID NO: 71), SRGPPGGIGEYIYAMDY (HCDR3; SEQ ID NO: 72).
52. Слитый белок по п. 46, в котором легкая цепь антитела содержит один из следующих наборов последовательностей CDR:
(a) QSIGTN (LCDR1, SEQ ID NO: 63), YAS (LCDR2), QQSNSWPYT (LCDR3; SEQ ID NO: 64);
(b) QDITNS (LCDR1, SEQ ID NO: 68), YTS (LCDR2), QQGHTLPPT (LCDR3; SEQ ID NO: 69); и
(c) SSVSSSY (LCDR1, SEQ ID NO: 73), STS (LCDR2), HQYHRSPPT (LCDR3; SEQ ID NO: 74).
53. Слитый белок по п. 46, в котором тяжелая цепь антитела содержит следующий набор последовательностей CDR: GFSLSNYD (HCDR1, SEQ ID NO: 59), IWTGGAT (HCDR2, SEQ ID NO: 60) и VRDSNYRYDEPFTY (HCDR3; SEQ ID NO: 61), и легкая цепь антитела содержит следующий набор последовательностей CDR: QSIGTN (LCDR1, SEQ ID NO: 62), YAS (LCDR2) и QQSNSWPYT (LCDR3; SEQ ID NO: 63).
54. Слитый белок по п. 46, в котором моноклональное антитело имеет остов IgG4.
55. Слитый белок по п. 54, в котором остов IgG4 имеет одну или более из следующих мутаций: S228P, N297A, F234A, L235A, M428L, N434S, M252Y, S254T и T256E.
56. Слитый белок по любому из пп. 1-55, отличающийся тем, что указанный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 86-94, или указанный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или более высокой идентичностью последовательности с аминокислотными последовательностями, представленными в любой из SEQ ID NO: 88-94.
57. Слитый белок по любому из пп. 1-56, отличающийся тем, что указанный слитый белок содержит аминокислоты, представленные в SEQ ID NO: 90 и 87, аминокислоты, представленные в SEQ ID NO: 86 и 91, аминокислоты, представленные в SEQ ID NO: 92 и 87, аминокислоты, представленные в SEQ ID NO: 86 и 93, аминокислоты, представленные в SEQ ID NO: 94 и 87 или аминокислоты, представленные в SEQ ID NO: 90 и 91.
58. Слитый белок по любому из пп. 1-56, отличающийся тем, что указанный слитый белок содержит аминокислотные последовательности, обладающие по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или более высокой идентичностью последовательности с аминокислотными последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 90 и 87, SEQ ID NO: 86 и 91, SEQ ID NO: 92 и 87, SEQ ID NO: 86 и 93, SEQ ID NO: 94 и 87 или SEQ ID NO: 90 и 91.
59. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок по любому из пп. 1-58.
60. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 59, отличающаяся тем, что указанная молекула нуклеиновой кислоты функционально связана с регуляторной последовательностью для обеспечения возможности экспрессии указанной молекулы нуклеиновой кислоты.
61. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 59 или 60, отличающаяся тем, что указанная молекула нуклеиновой кислоты содержится в векторе или в фагмидном векторе.
62. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 59, 60.
63. Способ получения слитого белка по любому из пп. 1-58, согласно которому слитый белок получают, начиная с нуклеиновой кислоты, кодирующей слитый белок.
64. Способ по п. 63, согласно которому слитый белок продуцируют в бактериальном или эукариотическом организме-хозяине и выделяют из этого организма-хозяина или его культуры.
65. Применение слитого белка по любому из пп. 1-58 или композиции, содержащей такой слитый белок, для одновременной активации нисходящих сигнальных путей CD137 и связывания PD-L1-положительных опухолевых клеток.
66. Способ одновременной активации нисходящих сигнальных путей CD137 и связывания PD-L1-положительных опухолевых клеток, включающий применение одного или более слитых белков по любому из пп. 1-58 или одной или более композиций, содержащих такой слитый белок, к ткани, содержащей опухоль.
67. Способ одновременной костимуляции T-клеток и связывания PD-L1-положительных опухолевых клеток, включающий применение одного или более слитых белков по любому из пп. 1-58 или одной или более композиций, содержащих такой слитый белок, к ткани, содержащей опухоль.
68. Способ одновременной индукции активности лимфоцитов и связывания PD-L1-положительных опухолевых клеток, включающий применение одного или более слитых белков по любому из пп. 1-58 или одной или более композиций, содержащих такой слитый белок, к ткани, содержащей опухоль.
69. Способ индукции кластеризации и активации CD137 на T-клетках и направления указанных T-клеток на PD-L1-положительные опухолевые клетки, включающий применение одного или более слитых белков по любому из пп. 1-58 или одной или более композиций, содержащих такой слитый белок, к ткани, содержащей опухоль.
70. Способ индукции локализованного ответа лимфоцитов вблизи PD-L1-положительных опухолевых клеток, включающий применение одного или более слитых белков по любому из пп. 1-58 или одной или более композиций, содержащих такой слитый белок, к ткани, содержащей опухоль.
71. Способ индукции повышенной секреции IL-2 и/или цитотоксических факторов T-клетками вблизи PD-L1-положительных опухолевых клеток, включающий применение одного или более слитых белков по любому из пп. 1-58 или одной или более композиций, содержащих такой слитый белок, к ткани, содержащей опухоль.
72. Способ по п. 71, согласно которому цитотоксические факторы выбраны из группы, состоящей из перфорина, гранзима B и гранзима A.
73. Способ индукции повышенной секреции цитотоксических факторов T-клетками вблизи PD-L1-положительных опухолевых клеток, включающий применение одного или более слитых белков по любому из пп. 1-58 или одной или более композиций, содержащих такой слитый белок, к ткани, содержащей опухоль.
74. Фармацевтическая композиция, содержащая один или более слитых белков по любому из пп. 1-58.
75. Способ предупреждения, облегчения или лечения PD-L1-положительных раковых заболеваний, включающий применение слитого белка по любому из пп. 1-58 или одной или более композиций, содержащих такой слитый белок, к ткани, содержащей опухоль.
76. Слитый белок по любому из пп. 1-58 для применения в терапии.
77. Слитый белок для применения по п. 76, отличающийся тем, что применение предназначено для лечения рака.
78. Применение слитого белка по любому из пп. 1-58 для производства лекарственного средства.
79. Применение по п. 78, согласно которому лекарственное средство предназначено для лечения рака.
RU2020139055A 2018-07-31 2019-07-31 Новый слитый белок, специфичный для cd137 и pd-l1 RU2818349C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP18186445.5 2018-07-31
EP18204548.4 2018-11-06

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2020139055A true RU2020139055A (ru) 2022-09-01
RU2818349C2 RU2818349C2 (ru) 2024-05-02

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102469286B1 (ko) 항-pd1 단일클론 항체, 이의 약제학적 조성물 및 이의 용도
US11377477B2 (en) PD-1 targeted IL-15/IL-15RALPHA fc fusion proteins and uses in combination therapies thereof
TWI754800B (zh) 新型抗ox40/pd-l1雙特異性抗體分子、新型抗vegf/gitr雙特異性抗體分子及其用途
RU2018107991A (ru) Новый слитый полипептид, специфичный в отношении lag-3 и pd-1
AU2015308527C1 (en) Combination therapy of tumor-targeted IL-2 variant immunocytokines and antibodies against human PD-L1
EP3988577A1 (en) Anti-cd137 antibodies
CN111511766B (zh) 修饰的抗SIRPa抗体及其应用
KR102247704B1 (ko) 항 pd-1/항 her2 천연항체 구조 형태의 헤테로다이머 계의 이중특이성 항체 및 그 제조방법
AU2018247270A1 (en) Anti-CTLA4 monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof, medicinal composition and use
JP2018515085A5 (ru)
AU2017271601A1 (en) Bispecific binding proteins binding an immunomodulatory protein and a tumor antigen
US20170304437A1 (en) Bispecific molecules capable of specifically binding to both ctla-4 and cd40
RU2017135596A (ru) Слитый полипептид с противораковой активностью
CN111328286A (zh) Pd-1和pd-l1结合剂
CN110709421A (zh) 针对ox40和ctla-4的双特异性抗体
RU2017135539A (ru) Слитый полипептид с противораковой активностью
JP2018519803A5 (ru)
WO2019184909A1 (zh) 新型抗体分子、其制备方法及其用途
FI3830120T3 (fi) CD137:lle ja PD-L1:lle spesifinen uusi fuusioproteiini
WO2018217988A1 (en) MODIFIED IgG1 Fc DOMAINS AND ANTI-CD40 DOMAIN ANTIBODY FUSIONS THEREWITH
EP3927728A2 (en) Untargeted and targeted il-10 fc-fusion proteins
JP2022552183A (ja) 特性が改善されたｐｄ－１標的化ｉｌ－１５／ｉｌ－１５ｒαｆｃ融合タンパク質
KR20200120648A (ko) 항pd-1/항her2 천연항체 구조 헤테로다이머계의 이중특이성 항체 및 그 제조방법
CA3147044A1 (en) Agents that interfere with thymic stromal lymphopoietin (tslp)-receptor signaling
JP2023550419A (ja) 二機能性分子