RU2019141853A - Варианты, композиции и способы применения эндонуклеазы cblb - Google Patents

Варианты, композиции и способы применения эндонуклеазы cblb Download PDF

Info

Publication number
RU2019141853A
RU2019141853A RU2019141853A RU2019141853A RU2019141853A RU 2019141853 A RU2019141853 A RU 2019141853A RU 2019141853 A RU2019141853 A RU 2019141853A RU 2019141853 A RU2019141853 A RU 2019141853A RU 2019141853 A RU2019141853 A RU 2019141853A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
paragraphs
cell
polypeptide
biologically active
amino acid
Prior art date
Application number
RU2019141853A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2019141853A3 (ru
RU2779097C2 (ru
Inventor
Джордан ДЖАРДЖУР
Кайл ХЕЙВЕНС
Энн-Рэйчел КРОСТАГ
Original Assignee
Блубёрд Био, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Блубёрд Био, Инк. filed Critical Блубёрд Био, Инк.
Publication of RU2019141853A publication Critical patent/RU2019141853A/ru
Publication of RU2019141853A3 publication Critical patent/RU2019141853A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2779097C2 publication Critical patent/RU2779097C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4613—Natural-killer cells [NK or NK-T]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464403—Receptors for growth factors
    • A61K39/464404—Epidermal growth factor receptors [EGFR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/405—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y307/00—Hydrolases acting on carbon-carbon bonds (3.7)
    • C12Y307/01—Hydrolases acting on carbon-carbon bonds (3.7) in ketonic substances (3.7.1)
    • C12Y307/01003—Kynureninase (3.7.1.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y406/00—Phosphorus-oxygen lyases (4.6)
    • C12Y406/01—Phosphorus-oxygen lyases (4.6.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/80—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/80—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor
    • C07K2319/81—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor containing a Zn-finger domain for DNA binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/80—Vectors containing sites for inducing double-stranded breaks, e.g. meganuclease restriction sites

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)

Claims (144)

1. Полипептид, содержащий вариант хоуминг-эндонуклеазы (HE), который расщепляет сайт-мишень в человеческом протоонкогене B (CBLB) лимфомы B-клеточной линии дифференцировки Каситас (Cbl).
2. Полипептид по п. 1, где указанный вариант HE представляет собой вариант хоуминг-эндонуклеазы LAGLIDADG (LHE).
3. Полипептид по п. 1 или 2, где указанный полипептид содержит биологически активный фрагмент варианта HE.
4. Полипептид по п. 3, где указанный биологически активный фрагмент не содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 N-концевых аминокислот по сравнению с соответствующей HE дикого типа.
5. Полипептид по п. 4, где указанный биологически активный фрагмент не содержит 4 N-концевые аминокислоты по сравнению с соответствующей HE дикого типа.
6. Полипептид по п. 4, где указанный биологически активный фрагмент не содержит 8 N-концевых аминокислот по сравнению с соответствующей HE дикого типа.
7. Полипептид по п. 3, где указанный биологически активный фрагмент не содержит 1, 2, 3, 4, 5 или 6 C-концевых аминокислот по сравнению с соответствующей HE дикого типа.
8. Полипептид по п. 7, где указанный биологически активный фрагмент не содержит C-концевую аминокислоту по сравнению с соответствующей HE дикого типа.
9. Полипептид по п. 7, где указанный биологически активный фрагмент не содержит 2 C-концевые аминокислоты по сравнению с соответствующей HE дикого типа.
10. Полипептид по любому из пп. 1-9, где указанный вариант HE представляет собой вариант LHE, выбранный из группы, состоящей из: I-AabMI, I-AaeMI, I-AniI, I-ApaMI, I-CapIII, I-CapIV, I-CkaMI, I-CpaMI, I-CpaMII, I-CpaMIII, I-CpaMIV, I-CpaMV, I-CpaV, I-CraMI, I-EjeMI, I-GpeMI, I-GpiI, I-GzeMI, I-GzeMII, I-GzeMIII, I-HjeMI, I-LtrII, I-LtrI, I-LtrWI, I-MpeMI, I-MveMI, I-NcrII, I-Ncrl, I-NcrMI, I-OheMI, I-OnuI, I-OsoMI, I-OsoMII, I-OsoMIII, I-OsoMIV, I-PanMI, I-PanMII, I-PanMIII, I-PnoMI, I-ScuMI, I-SmaMI, I-SscMI и I-Vdi141I.
11. Полипептид по любому из пп. 1-10, где указанный вариант HE представляет собой вариант LHE, выбранный из группы, состоящей из: I-CpaMI, I-HjeMI, I-OnuI, I-PanMI и SmaMI.
12. Полипептид по любому из пп. 1-11, где указанный вариант HE представляет собой вариант LHE I-OnuI.
13. Полипептид по любому из пп. 1-12, где указанный вариант HE содержит одну или более замен аминокислот в поверхности распознавания ДНК в положениях аминокислот, выбранных из группы, состоящей из: 24, 26, 28, 30, 32, 34, 35, 36, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 68, 70, 72, 75, 76, 78, 80, 82, 180, 182, 184, 186, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 223, 225, 227, 229, 231, 232, 234, 236, 238 и 240 аминокислотной последовательности LHE I-OnuI, представленной в SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
14. Полипептид по любому из пп. 1-13, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более замен аминокислот в положениях аминокислот, выбранных из группы, состоящей из: 19, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 35, 36, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 59, 68, 70, 72, 75, 76 77, 78, 80, 82, 168, 180, 182, 184, 186, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 223, 225, 227, 229, 231, 232, 234, 236, 238 и 240 аминокислотной последовательности LHE I-OnuI, представленной в SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
15. Полипептид по любому из пп. 1-14, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более замен аминокислот в по меньшей мере одном положении, выбранном из группы положений, состоящей из положений: 24, 26, 28, 30, 32, 34, 35, 36, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 68, 70, 72, 78, 80, 92, 116, 138, 143, 159, 168, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 207, 223, 225, 227, 232, 236 и 238 любой из SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
16. Полипептид по любому из пп. 1-15, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более из следующих замен аминокислот: S24C, L26R, L26G, R28D, R28Y, R30H, N32A, N32S, K34D, K34V, S35L, S36R, V37A, V37S, S40R, E42R, G44A, G44S, Q46E, T48V, T48S, V68T, V68K, A70Y, S72A, S78R, K80Q, D92G, V116L, L138M, T143N, S159P, F168L, E178D, C180S, F182V, F182M, N184E, I186K, I186M, S188R, S188N, K189R, S190N, K191P, K191N, L192V, G193K, G193I, Q195G, Q195R, Q197R, V199R, S201G, T203S, K207R, Y223R, K225V, K227N, F232H, D236E и V238I любой из SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
17. Полипептид по любому из пп. 1-16, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более из следующих замен аминокислот: S24C, L26R, R28D, N32A, K34D, S35L, S36R, V37A, S40R, E42R, G44A, Q46E, T48V, V68T, A70Y, S72A, S78R, K80Q, L138M, T143N, F168L, E178D, C180S, F182V, N184E, I186K, S188R, K189R, K191P, L192V, G193K, Q195G, Q197R, V199R, K207R, Y223R, K225V, K227N, F232H, D236E и V238I любой из SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
18. Полипептид по любому из пп. 1-16, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более из следующих замен аминокислот: S24C, L26R, R28D, N32A, K34D, S35L, S36R, V37A, S40R, E42R, G44A, Q46E, T48V, V68T, A70Y, S72A, S78R, K80Q, L138M, T143N, S159P, F168L, E178D, C180S, F182M, N184E, I186M, S188N, S190N, K191N, L192V, G193I, Q195R, Q197R, V199R, T203S, K207R, Y223R, K225V, K227N, F232H, D236E и V238I любой из SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
19. Полипептид по любому из пп. 1-16, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более из следующих замен аминокислот: S24C, L26R, R28D, N32A, K34D, S35L, S36R, V37A, S40R, E42R, G44S, Q46E, T48S, V68T, A70Y, S72A, S78R, K80Q, D92G, V116L, L138M, T143N, S159P, F168L, E178D, C180S, F182M, N184E, I186M, S188N, S190N, K191N, L192V, G193I, Q195R, Q197R, V199R, T203S, K207R, Y223R, K225V, K227N, F232H, D236E и V238I любой из SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
20. Полипептид по любому из пп. 1-16, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более из следующих замен аминокислот: S24C, L26R, R28D, R30H, N32A, K34V, S35L, S36R, V37S, S40R, E42R, G44S, Q46E, T48V, V68T, V68K, A70Y, S72A, S78R, K80Q, L138M, T143N, S159P, F168L, E178D, C180S, F182M, N184E, I186M, S188N, S190N, K191N, L192V, G193I, Q195R, Q197R, V199R, T203S, K207R, Y223R, K225V, K227N, F232H, D236E и V238I любой из SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
21. Полипептид по любому из пп. 1-16, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более из следующих замен аминокислот: S24C, L26G, R28Y, R30H, N32S, K34V, S35L, S36R, V37S, S40R, E42R, G44S, Q46E, T48S, V68T, A70Y, S72A, S78R, K80Q, V116L, L138M, T143N, S159P, F168L, E178D, C180S, F182M, N184E, I186M, S188N, S190N, K191N, L192V, G193I, Q195R, Q197R, V199R, T203S, K207R, Y223R, K225V, K227N, F232H, D236E и V238I любой из SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
22. Полипептид по любому из пп. 1-16, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более из следующих замен аминокислот: S24C, L26R, R28D, R30H, N32A, K34V, S35L, S36R, V37S, S40R, E42R, G44S, Q46E, T48V, V68T, A70Y, S72A, S78R, K80Q, V116L, L138M, T143N, S159P, F168L, E178D, C180S, F182V, N184E, I186K, S188R, K189R, K191P, L192V, G193K, Q195G, Q197R, V199R, S201G, K207R, Y223R, K225V, K227N, F232H, D236E и V238I любой из SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
23. Полипептид по любому из пп. 1-16, где указанный вариант HE содержит по меньшей мере 5, по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 25, более предпочтительно по меньшей мере 35 или даже более предпочтительно по меньшей мере 40 или более из следующих замен аминокислот: S24C, L26R, R28D, N32A, K34D, S35L, S36R, V37A, S40R, E42R, G44A, Q46E, T48V, V68T, A70Y, S72A, S78R, K80Q, D92G, L138M, T143N, S159P, F168L, E178D, C180S, F182M, N184E, I186M, S188N, S190N, K191N, L192V, G193I, Q195R, Q197R, V199R, T203S, K207R, Y223R, K225V, K227N, F232H, D236E и V238I любой из SEQ ID NO: 1-5, или его биологически активный фрагмент.
24. Полипептид по любому из пп. 1-23, где указанный вариант HE содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90% или еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 6-12, или его биологически активный фрагмент.
25. Полипептид по любому из пп. 1-24, где указанный вариант HE содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6, или его биологически активный фрагмент.
26. Полипептид по любому из пп. 1-24, где указанный вариант HE содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, или его биологически активный фрагмент.
27. Полипептид по любому из пп. 1-24, где указанный вариант HE содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, или его биологически активный фрагмент.
28. Полипептид по любому из пп. 1-24, где указанный вариант HE содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9, или его биологически активный фрагмент.
29. Полипептид по любому из пп. 1-24, где указанный вариант HE содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, или его биологически активный фрагмент.
30. Полипептид по любому из пп. 1-24, где указанный вариант HE содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11, или его биологически активный фрагмент.
31. Полипептид по любому из пп. 1-24, где указанный вариант HE содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12, или его биологически активный фрагмент.
32. Полипептид по любому из пп. 1-31, где указанный полипептид связывает полинуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20.
33. Полипептид по любому из пп. 1-32, дополнительно содержащий ДНК-связывающий домен.
34. Полипептид по п. 33, где указанный ДНК-связывающий домен выбран из группы, состоящей из ДНК-связывающего домена TALE и ДНК-связывающего домена с цинковыми пальцами.
35. Полипептид по п. 34, где указанный ДНК-связывающий домен TALE содержит от приблизительно 9,5 повторяющегося звена TALE до приблизительно 15,5 повторяющегося звена TALE.
36. Полипептид по п. 34 или п. 35, где указанный ДНК-связывающий домен TALE связывает полинуклеотидную последовательность в гене CBLB.
37. Полипептид по любому из пп. 34-36, где указанный ДНК-связывающий домен TALE связывается с полинуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 21.
38. Полипептид по п. 37, где указанный полипептид связывает и расщепляет полинуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22.
39. Полипептид по п. 34, где указанный ДНК-связывающий домен с цинковыми пальцами содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 мотивов цинкового пальца.
40. Полипептид по любому из пп. 1-39, дополнительно содержащий пептидный линкер и модифицирующий концы фермент или его биологически активный фрагмент.
41. Полипептид по любому из пп. 1-40, дополнительно содержащий вирусный саморасщепляющийся пептид 2А и модифицирующий концы фермент или его биологически активный фрагмент.
42. Полипептид по п. 40 или 41, где указанный модифицирующий концы фермент или его биологически активный фрагмент имеет 5'-3'-экзонуклеазную, 5'-3'-щелочную экзонуклеазную, 3'-5'-экзонуклеазную, 5'-флэп-эндонуклеазную, геликазную, TdT активность или независимую от матрицы ДНК-полимеразную активность.
43. Полипептид по любому из пп. 40-42, где указанный модифицирующий концы фермент содержит Trex2 или его биологически активный фрагмент.
44. Полипептид по любому из пп. 1-43, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 13-19, или его биологически активный фрагмент.
45. Полипептид по п. 44, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 13, или его биологически активный фрагмент.
46. Полипептид по п. 44, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14, или его биологически активный фрагмент.
47. Полипептид по п. 44, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, или его биологически активный фрагмент.
48. Полипептид по п. 44, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16, или его биологически активный фрагмент.
49. Полипептид по п. 44, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17, или его биологически активный фрагмент.
50. Полипептид по п. 44, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, или его биологически активный фрагмент.
51. Полипептид по п. 44, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19, или его биологически активный фрагмент.
52. Полипептид по любому из пп. 1-51, где указанный полипептид расщепляет человеческий ген CBLB в полинуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 20 или 22.
53. Полинуклеотид, кодирующий полипептид по любому из пп. 1-52.
54. иРНК, кодирующая полипептид по любому из пп. 1-52.
55. кДНК, кодирующая полипептид по любому из пп. 1-52.
56. Вектор, содержащий полинуклеотид, кодирующий полипептид по любому из пп. 1-52.
57. Клетка, содержащая полипептид по любому из пп. 1-52.
58. Клетка, содержащая полинуклеотид, кодирующий полипептид по любому из пп. 1-52.
59. Клетка, содержащая вектор по п. 56.
60. Клетка, содержащая одну или более модификаций генома, введенных с помощью полипептида по любому из пп. 1-52.
61. Клетка по любому из пп. 57-60, отличающаяся тем, что указанная клетка содержит полинуклеотид, кодирующий один или более из усилителя иммунопотенции, подавителя иммуносупрессорного сигнала или модифицированного антигенного рецептора.
62. Клетка по п. 61, отличающаяся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит промотор РНК-полимеразы II, функционально соединенный с полинуклеотидом, кодирующим усилитель иммунопотенции, подавитель иммуносупрессорного сигнала или модифицированный антигенный рецептор.
63. Клетка по п. 62, отличающаяся тем, что указанный промотор РНК-полимеразы II выбран из группы, состоящей из короткого промотора EF1α, длинного промотора EF1α, промотора человеческого локуса ROSA26, промотора убиквитина С (UBC), промотора фосфоглицераткиназы-1 (PGK), энхансера цитомегаловируса/промотора β-актина курицы (CAG), промотора β-актина и промотора с энхансером вируса миелопролиферативной саркомы, с удаленным участком отрицательного контроля и с сайтом связывания праймера, замещенным на последовательность из dl587rev (MND).
64. Клетка по любому из пп. 61-63, отличающаяся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно кодирует один или более саморасщепляющихся вирусных пептидов, функционально соединенных с, расположенных между ними и/или фланкирующих усилитель иммунопотенции, подавитель иммуносупрессорного сигнала или модифицированный антигенный рецептор.
65. Клетка по п. 64, отличающаяся тем, что указанный саморасщепляющийся вирусный пептид представляет собой пептид 2А.
66. Клетка по любому из пп. 61-65, отличающаяся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит гетерологичный сигнал полиаденилирования.
67. Клетка по любому из пп. 61-66, отличающаяся тем, что указанный подавитель иммуносупрессорного сигнала обладает ферментативной функцией, которая противодействует иммуносупрессорному фактору.
68. Клетка по п. 67, отличающаяся тем, что указанный подавитель иммуносупрессорного сигнала обладает кинурениназной активностью.
69. Клетка по любому из пп. 61-66, отличающаяся тем, что указанный подавитель иммуносупрессорного сигнала содержит:
(a) экзодомен, который связывает иммуносупрессорный фактор, причем необязательно указанный экзодомен представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент;
(b) экзодомен, который связывает иммуносупрессорный фактор, и трансмембранный домен; или
(c) экзодомен, который связывает иммуносупрессорный фактор, трансмембранный домен и модифицированный эндодомен, который не способен передавать иммуносупрессорные сигналы к клетке.
70. Клетка по любому из пп. 61-66, отличающаяся тем, что указанный усилитель иммунопотенции выбран из группы, состоящей из биспецифической молекулы, активирующей T-клетки (BiTE), иммунопотенциирующего фактора и переключающего рецептора.
71. Клетка по п. 70, отличающаяся тем, что указанный иммунопотенциирующий фактор выбран из группы, состоящей из цитокина, хемокина, цитотоксина, рецептора цитокина и их вариантов.
72. Клетка по п. 70, отличающаяся тем, что указанный переключающий рецептор содержит экзодомен и трансмембранный домен TGFβRII; и эндодомен из TLR4, CD28, CD134, CD137, CD278 и/или CD3ζ, гибридизованный в пределах рамки считывания с C-концевой частью трансмембранного домена TGFβRII.
73. Клетка по п. 70, отличающаяся тем, что указанный переключающий рецептор содержит экзодомен TGFβRII; трансмембранный домен, выделенный из полипептида TLR4, CD3, CD4, CD8α, CD28, CD134 или CD137; и эндодомен из TLR4, CD28, CD134, CD137, CD278 и/или CD3ζ, гибридизованный в пределах рамки считывания с C-концевой частью экзодомена TGFβRII.
74. Клетка по п. 70, отличающаяся тем, что указанный переключающий рецептор содержит экзодомен TGFβRII; а также трансмембранный домен и эндодомен, выделенные из полипептида TLR4, CD3, CD4, CD8α, CD28, CD134 или CD137, гибридизованные в пределах рамки считывания с C-концевой частью экзодомена TGFβRII.
75. Клетка по любому из пп. 61-66, отличающаяся тем, что указанный модифицированный антигенный рецептор выбран из группы, состоящей из модифицированного ТКР, CAR, Daric или зетакина.
76. Клетка по п. 75, отличающаяся тем, что указанный модифицированный рецептор не интегрирован в ген CBLB.
77. Клетка по любому из пп. 61-66, отличающаяся тем, что указанный полинуклеотид, кодирующий один или более из усилителя иммунопотенции, подавителя иммуносупрессорного сигнала или модифицированного антигенного рецептора, интегрирован в ген CBLB.
78. Клетка по любому из пп. 61-66, отличающаяся тем, что донорная матрица для восстановления, содержащая полинуклеотид, кодирующий один или более из усилителя иммунопотенции, подавителя иммуносупрессорного сигнала или модифицированного антигенного рецептора, интегрирована в ген CBLB в сайт двухцепочечного разрыва ДНК, введенный с помощью полипептида по любому из пп. 1-52.
79. Клетка по любому из пп. 57-78, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой гемопоэтическую клетку.
80. Клетка по любому из пп. 57-79, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой T-клетку.
81. Клетка по любому из пп. 57-80, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой CD3+, CD4+ и/или CD8+ клетку.
82. Клетка по любому из пп. 57-81, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой иммунную эффекторную клетку.
83. Клетка по любому из пп. 57-82, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой цитотоксический Т-лимфоцит (ЦТЛ), инфильтрирующий опухоль лимфоцит (ТИЛ) или хелперную T-клетку.
84. Клетка по любому из пп. 57-82, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой клетку природного киллера (NK) или клетку природного T-киллера (NKT).
85. Клетка по любому из пп. 57-84, отличающаяся тем, что источник указанной клетки представляет собой мононуклеарные клетки периферической крови, костный мозг, ткань лимфатических узлов, пуповинную кровь, ткань тимуса, ткань из очага инфекции, асциты, плевральный выпот, ткань селезенки или опухоли.
86. Клетка по любому из пп. 57-85, отличающаяся тем, что указанная клетка содержит один или более модифицированных аллелей CBLB.
87. Клетка по п. 72, отличающаяся тем, что указанный один или более модифицированных аллелей CBLB являются нефункциональными или имеют по существу сниженную функцию и/или активность CBLB.
88. Клетка по любому из пп. 57-87, отличающаяся тем, что указанная клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую усилитель иммунопотенции или подавитель иммуносупрессорного сигнала, введенный в один или более модифицированных аллелей CBLB, и указанная клетка дополнительно содержит модифицированный антигенный рецептор, который не введен в один или более модифицированных аллелей CBLB.
89. Множество клеток, содержащее одну или более клеток по любому из пп. 57-88.
90. Композиция, содержащая одну или более клеток по любому из пп. 57-88.
91. Композиция, содержащая одну или более клеток по любому из пп. 57-88 и физиологически приемлемый носитель.
92. Способ редактирования человеческого гена CBLB в клетке, включающий: введение в указанную клетку полинуклеотида, кодирующего полипептид по любому из пп. 1-52, причем экспрессия указанного полипептида создает двухцепочечный разрыв в сайте-мишени в человеческом гене CBLB.
93. Способ редактирования человеческого гена CBLB в клетке, включающий: введение в указанную клетку полинуклеотида, кодирующего полипептид по любому из пп. 1-52, причем экспрессия указанного полипептида создает двухцепочечный разрыв в сайте-мишени в человеческом гене CBLB, при этом разрыв восстанавливается с помощью негомологичного соединения концов (NHEJ).
94. Способ редактирования человеческого гена CBLB в клетке, включающий: введение в указанную клетку полинуклеотида, кодирующего полипептид по любому из пп. 1-52, и донорной матрицы для восстановления, причем экспрессия указанного полипептида создает двухцепочечный разрыв в сайте-мишени в человеческом гене CBLB и донорная матрица для восстановления встраивается в ген человеческого CBLB с помощью направляемого гомологией восстановления (HDR) в сайте двухцепочечного разрыва (ДЦР).
95. Способ по любому из пп. 92-94, отличающийся тем, что указанная клетка представляет собой гемопоэтическую клетку.
96. Способ по любому из пп. 92-95, отличающийся тем, что указанная клетка представляет собой T-клетку.
97. Способ по любому пп. 92-96, отличающийся тем, что указанная клетка представляет собой CD3+, CD4+ и/или CD8+ клетку.
98. Способ по любому из пп. 92-97, отличающийся тем, что указанная клетка представляет собой иммунную эффекторную клетку.
99. Способ по любому из пп. 92-98, отличающийся тем, что указанная клетка представляет собой цитотоксический Т-лимфоцит (ЦТЛ), инфильтрирующий опухоль лимфоцит (ТИЛ) или хелперную T-клетку.
100. Способ по любому из пп. 92-98, отличающийся тем, что указанная клетка представляет собой клетку природного киллера (NK) или клетку природного T-киллера (NKT).
101. Способ по любому из пп. 92-100, отличающийся тем, что источник указанной клетки представляет собой мононуклеарные клетки периферической крови, костный мозг, ткань лимфатических узлов, пуповинную кровь, ткань тимуса, ткань из очага инфекции, асциты, плевральный выпот, ткань селезенки или опухоли.
102. Способ по любому из пп. 92-101, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид, кодирующий указанный полипептид, представляет собой иРНК.
103. Способ по любому из пп. 92-102, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид, кодирующий 5'-3'-экзонуклеазу, вводят в клетку.
104. Способ по любому из пп. 92-103, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид, кодирующий Trex2 или его биологически активный фрагмент, вводят в клетку.
105. Способ по любому из пп. 94-104, отличающийся тем, что указанная донорная матрица для восстановления кодирует ген CBLB или его часть, содержащую одну или более мутаций по сравнению с геном CBLB дикого типа.
106. Способ по любому из пп. 94-105, отличающийся тем, что указанная донорная матрица для восстановления кодирует один или более из усилителя иммунопотенции, подавителя иммуносупрессорного сигнала или модифицированного антигенного рецептора.
107. Способ по п. 106, отличающийся тем, что указанная донорная матрица для восстановления дополнительно содержит промотор РНК-полимеразы II, функционально соединенный с усилителем иммунопотенции, подавителем иммуносупрессорного сигнала или модифицированным антигенным рецептором.
108. Способ по п. 107, отличающийся тем, что указанный промотор РНК-полимеразы II выбран из группы, состоящей из короткого промотора EF1α, длинного промотора EF1α, промотора человеческого локуса ROSA26, промотора убиквитина С (UBC), промотора фосфоглицераткиназы-1 (PGK), энхансера цитомегаловируса/промотора β-актина курицы (CAG), промотора β-актина и промотора с энхансером вируса миелопролиферативной саркомы, с удаленным участком отрицательного контроля и с сайтом связывания праймера, замещенным на последовательность из dl587rev (MND).
109. Способ по любому из пп. 106-108, отличающийся тем, что указанная донорная матрица для восстановления дополнительно кодирует один или более саморасщепляющихся вирусных пептидов, функционально соединенных с, расположенных между ними и/или фланкирующих усилитель иммунопотенции, подавитель иммуносупрессорного сигнала или модифицированный антигенный рецептор.
110. Способ по п. 109, отличающийся тем, что указанный саморасщепляющийся вирусный пептид представляет собой пептид 2А.
111. Способ по любому из пп. 106-108, отличающийся тем, что указанная донорная матрица для восстановления дополнительно содержит гетерологичный сигнал полиаденилирования.
112. Способ по любому из пп. 106-111, отличающийся тем, что указанный подавитель иммуносупрессорного сигнала обладает ферментативной функцией, которая противодействует иммуносупрессорному фактору.
113. Способ по п. 112, отличающийся тем, что указанный подавитель иммуносупрессорного сигнала обладает кинурениназной активностью.
114. Способ по любому из пп. 106-111, отличающийся тем, что указанный подавитель иммуносупрессорного сигнала содержит:
(a) экзодомен, который связывает иммуносупрессорный фактор, причем необязательно указанный экзодомен представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент;
(b) экзодомен, который связывает иммуносупрессорный фактор, и трансмембранный домен; или
(c) экзодомен, который связывает иммуносупрессорный фактор, трансмембранный домен и модифицированный эндодомен, который не способен передавать иммуносупрессорные сигналы к клетке.
115. Способ по п. 114, отличающийся тем, что указанный экзодомен и/или трансмембранный домен подавителя иммуносупрессорного сигнала представляет собой экзодомен и/или трансмембранный домен TGFβRII.
116. Способ по любому из пп. 106-111, отличающийся тем, что указанный усилитель иммунопотенции выбран из группы, состоящей из биспецифической молекулы, активирующей T-клетки (BiTE), иммунопотенциирующего фактора и переключающего рецептора.
117. Способ по п. 116, отличающийся тем, что указанный иммуностимулирующий фактор выбран из группы, состоящей из цитокина, хемокина, цитотоксина, рецептора цитокина и их вариантов.
118. Способ по п. 116, отличающийся тем, что указанный переключающий рецептор содержит экзодомен и трансмембранный домен TGFβRII; и эндодомен из TLR4, CD28, CD134, CD137, CD278 и/или CD3ζ, гибридизованный в пределах рамки считывания с C-концевой частью трансмембранного домена TGFβRII.
119. Способ по п. 116, отличающийся тем, что указанный переключающий рецептор содержит экзодомен TGFβRII; трансмембранный домен, выделенный из полипептида TLR4, CD3, CD4, CD8α, CD28, CD134 или CD137; и эндодомен из TLR4, CD28, CD134, CD137, CD278 и/или CD3ζ, гибридизованный в пределах рамки считывания с C-концевой частью экзодомена TGFβRII.
120. Способ по п. 116, отличающийся тем, что указанный переключающий рецептор содержит экзодомен TGFβRII; а также трансмембранный домен и эндодомен, выделенные из полипептида TLR4, CD3, CD4, CD8α, CD28, CD134 или CD137, гибридизованные в пределах рамки считывания с C-концевой частью экзодомена TGFβRII.
121. Способ по любому из пп. 106-111, отличающийся тем, что указанный модифицированный антигенный рецептор выбран из группы, состоящей из модифицированного ТКР, CAR, Daric или зетакина.
122. Способ по любому из пп. 94-121, отличающийся тем, что указанная донорная матрица для восстановления содержит 5'-плечо гомологии, гомологичное последовательности человеческого гена CBLB, расположенной в 5´-направлении от ДЦР, и 3'-плечо гомологии, гомологичное последовательности человеческого гена CBLB, расположенной в 3´-направлении от ДЦР.
123. Способ по п. 122, отличающийся тем, что длины 5'- и 3'-плеч гомологии независимо выбраны из диапазона от приблизительно 100 п.о. до приблизительно 2500 п.о.
124. Способ по п. 122 или 123, отличающийся тем, что длины 5´- и 3´-плеч гомологии независимо выбраны из диапазона от приблизительно 600 п.о. до приблизительно 1500 п.о.
125. Способ по любому из пп. 122-124, отличающийся тем, что указанное 5'-плечо гомологии составляет приблизительно 1500 п.о., и 3'-плечо гомологии составляет приблизительно 1000 п.о.
126. Способ по любому из пп. 122-125, отличающийся тем, что указанное 5'-плечо гомологии составляет приблизительно 600 п.о., и 3'-плечо гомологии составляет приблизительно 600 п.о.
127. Способ по любому из пп. 94-126, отличающийся тем, что вирусный вектор применяют для введения донорной матрицы для восстановления в клетку.
128. Способ по п. 127, отличающийся тем, что указанный вирусный вектор представляет собой вектор на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) или ретровирус.
129. Способ по п. 128, отличающийся тем, что указанный rAAV имеет один или более ITR из AAV2.
130. Способ по п. 128 или п. 129, отличающийся тем, что указанный rAAV имеет серотип, выбранный из группы, состоящей из: AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9 и AAV10.
131. Способ по любому из пп. 128-130, отличающийся тем, что указанный rAAV имеет серотип AAV2 или AAV6.
132. Способ по п. 128, отличающийся тем, что указанный ретровирус представляет собой лентивирус.
133. Способ по п. 132, отличающийся тем, что указанный лентивирус представляет собой лентивирус, дефицитный по интегразе (IDLV).
134. Способ лечения, предотвращения или уменьшения по меньшей мере одного симптома рака, инфекционного заболевания, аутоиммунного заболевания, воспалительного заболевания и иммунодефицита или состояния, ассоциированного с ними, включающий введение субъекту эффективного количества композиции по п. 90 или 91.
135. Способ лечения солидного рака, включающий введение субъекту эффективного количества композиции по п. 90 или 91.
136. Способ по п. 135, отличающийся тем, что указанный солидный рак включает рак печени, рак поджелудочной железы, рак легких, рак молочной железы, рак яичников, рак предстательной железы, рак яичка, рак мочевого пузыря, рак мозга, саркому, рак головы и шеи, рак костей, рак щитовидной железы, рак почек или рак кожи.
137. Способ лечения гематологической злокачественной опухоли, включающий введение субъекту эффективного количества композиции по п. 90 или п. 91.
138. Способ по п. 137, отличающийся тем, что указанная гематологическая злокачественная опухоль представляет собой лейкоз, лимфому или множественную миелому.
RU2019141853A 2017-05-25 2018-05-25 Варианты, композиции и способы применения эндонуклеазы cblb RU2779097C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762511194P 2017-05-25 2017-05-25
US62/511,194 2017-05-25
US201762567417P 2017-10-03 2017-10-03
US62/567,417 2017-10-03
PCT/US2018/034726 WO2018218194A1 (en) 2017-05-25 2018-05-25 Cblb endonuclease variants, compositions, and methods of use

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019141853A true RU2019141853A (ru) 2021-06-25
RU2019141853A3 RU2019141853A3 (ru) 2021-08-09
RU2779097C2 RU2779097C2 (ru) 2022-08-31

Family

ID=

Also Published As

Publication number Publication date
US20210214714A1 (en) 2021-07-15
IL270776A (en) 2020-01-30
WO2018218194A1 (en) 2018-11-29
MA48797A (fr) 2020-04-08
AU2018273979B2 (en) 2024-10-17
KR20200011953A (ko) 2020-02-04
KR20230147767A (ko) 2023-10-23
US10927367B2 (en) 2021-02-23
JP2022183262A (ja) 2022-12-08
JP2024055980A (ja) 2024-04-19
IL313037A (en) 2024-07-01
CA3064014A1 (en) 2018-11-29
CN110799644A (zh) 2020-02-14
JP2020521456A (ja) 2020-07-27
MX2019014100A (es) 2020-02-07
EP3630962A4 (en) 2021-01-20
AU2018273979A1 (en) 2019-12-12
US20210147818A1 (en) 2021-05-20
US11732255B2 (en) 2023-08-22
EP3630962A1 (en) 2020-04-08
JP7450683B2 (ja) 2024-03-15
RU2019141853A3 (ru) 2021-08-09
KR102590466B1 (ko) 2023-10-19
JP7191042B2 (ja) 2022-12-16
US20200087653A1 (en) 2020-03-19
IL270776B1 (en) 2024-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2020521456A5 (ru)
JP2019526268A5 (ru)
JP2020507342A5 (ru)
JP2019535240A5 (ru)
JP7191042B2 (ja) Ｃｂｌｂエンドヌクレアーゼバリアント、組成物、および使用方法
JP7553440B2 (ja) 抗ｃｄ３３免疫細胞癌療法
JP2019510503A5 (ru)
WO2015179801A1 (en) Car based immunotherapy
WO2019089884A2 (en) Methods, compositions and components for crispr-cas9 editing of tgfbr2 in t cells for immunotherapy
RU2019114035A (ru) ВАРИАНТЫ ХОМИНГ-ЭНДОНУКЛЕАЗЫ ТКРα
JP7412666B2 (ja) ＨＰＫ１を標的とするｇＲＮＡ及びＨＰＫ１遺伝子の編集方法
KR20160105882A (ko) 신규한 합성 생물학에 기반한 adcc 기술
EP3612624A1 (en) Gene therapy
WO2019090202A1 (en) Methods, compositions and components for crispr-cas9 editing of cblb in t cells for immunotherapy
CN113366479A (zh) 二聚化剂调节的免疫受体复合物
KR20200110326A (ko) Daric 인터류킨 수용체
KR20200108285A (ko) Nkg2d daric 수용체
CN114206928A (zh) Cd33靶向免疫疗法
KR20210141573A (ko) 항-bcma 키메라 항원 수용체
CN110819596B (zh) 具有增强的迁移能力的修饰的细胞
JP2022531718A (ja) Ｃｄ１２３標的免疫療法
EP4289867A1 (en) Chimeric antigen receptor with endogenous protein molecule replacing single domain antibody
AU2022312508A1 (en) Polycistronic vectors for cell-based therapies
RU2019110065A (ru) Варианты, композиции и методы применения хоминг-эндонуклеазы pd-1
AU2021300358A1 (en) Methods and compositions for editing the B2M locus in B cells

Legal Events

Date Code Title Description
HZ9A Changing address for correspondence with an applicant