RU2019140335A - Способ получения биспецифических антител, биспецифические антитела и терапевтическое применение таких антител - Google Patents
Способ получения биспецифических антител, биспецифические антитела и терапевтическое применение таких антител Download PDFInfo
- Publication number
- RU2019140335A RU2019140335A RU2019140335A RU2019140335A RU2019140335A RU 2019140335 A RU2019140335 A RU 2019140335A RU 2019140335 A RU2019140335 A RU 2019140335A RU 2019140335 A RU2019140335 A RU 2019140335A RU 2019140335 A RU2019140335 A RU 2019140335A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amino acid
- acid sequence
- immunoglobulin
- affinity chromatography
- light chain
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims 21
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 32
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims 26
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims 23
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 21
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims 10
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims 10
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims 10
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims 10
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims 8
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims 7
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims 6
- 108010034143 Inflammasomes Proteins 0.000 claims 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 5
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 claims 4
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 claims 4
- 229940014144 folate Drugs 0.000 claims 4
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 claims 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 4
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims 3
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 claims 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims 3
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 claims 3
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 claims 3
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims 3
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 claims 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 3
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 claims 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims 2
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 claims 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 claims 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 claims 2
- 208000005764 Peripheral Arterial Disease Diseases 0.000 claims 2
- 208000030831 Peripheral arterial occlusive disease Diseases 0.000 claims 2
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 claims 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims 2
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 claims 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 claims 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims 2
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 claims 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 2
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 claims 2
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 claims 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims 2
- 208000037906 ischaemic injury Diseases 0.000 claims 2
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 claims 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims 2
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 claims 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 claims 2
- 201000003651 pulmonary sarcoidosis Diseases 0.000 claims 2
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 claims 2
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 claims 2
- 230000006492 vascular dysfunction Effects 0.000 claims 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims 1
- 241000223782 Ciliophora Species 0.000 claims 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 claims 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 claims 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims 1
- 108091006783 Folate transporters Proteins 0.000 claims 1
- 102000037909 Folate transporters Human genes 0.000 claims 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 claims 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 claims 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 claims 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/245—IL-1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Claims (91)
1. Биспецифическое антитело, подходящее для совместной экспрессии в общей клетке-хозяине, где антитело содержит
а. первую часть, которая представляет собой иммуноглобулин с первой вариабельной областью легкой лямбда-цепи дикого типа (VL1) и первой вариабельной областью тяжелой цепи дикого типа (VH1), которые специфично связываются с первой мишенью, и первой константной областью тяжелой цепи (CH1) с модификацией, обеспечивающей гетеродимеризацию, и
b. вторую часть, которая представляет собой иммуноглобулин со второй вариабельной областью легкой каппа-цепи дикого типа (VL2) и второй вариабельной областью тяжелой цепи дикого типа (VH2), которые специфично связываются со второй мишенью, отличной от первой мишени, и второй константной областью тяжелой цепи (CH2) с модификацией, обеспечивающей гетеродимеризацию, которая является комплементарной модификации, обеспечивающей гетеродимеризацию, первой константной области тяжелой цепи,
где первая часть и вторая часть при совместной экспрессии в общей клетке-хозяине образуют биспецифическое антитело, где первая и вторая константные области тяжелой цепи относятся к IgA, IgD, IgE, IgG или IgM человека, предпочтительно IgD, IgE или IgG, как, например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека, предпочтительно IgG1, и где первая вариабельная область легкой цепи относится к типу лямбда 1, а вторая вариабельная область легкой цепи относится к типу каппа 6.
2. Биспецифическое антитело по п. 1, где первая и вторая константные области тяжелой цепи относятся к IgG1, и где а. первая константная область тяжелой цепи содержит точечные мутации, образующие структуру выступа, а вторая константная область тяжелой цепи содержит точечные мутации, образующие структуру впадины, или b. первая константная область тяжелой цепи содержит точечные мутации, образующие структуру впадины, а вторая константная область тяжелой цепи содержит точечные мутации, образующие структуру выступа, и необязательно c. первая и вторая константные области тяжелой цепи содержат мутации, которые приводят к образованию дисульфидного мостика.
3. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих пунктов, содержащее первый домен VH1 иммуноглобулина, первый домен VL1 иммуноглобулина, второй домен VH2 иммуноглобулина и второй домен VL2 иммуноглобулина, где
а. первый домен VH1 иммуноглобулина содержит (например, последовательно):
i. гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная CDR1 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:76, указанная CDR2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:77, и указанная CDR3 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:78; или
ii. гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная CDR1 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:79, указанная CDR2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:80, и указанная CDR3 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:81;
b. первый домен VL1 иммуноглобулина содержит (например, последовательно):
i. гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная CDR1 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:92, указанная CDR2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:93, и указанная CDR3 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:94, или
ii. гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная CDR1 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:95, указанная CDR2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:96, и указанная CDR3 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:97;
c. второй домен VH2 иммуноглобулина содержит (например, последовательно):
i. гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная CDR1 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:44, указанная CDR2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:45, и указанная CDR3 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:46; или
ii. гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная CDR1 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:47, указанная CDR2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:48, и указанная CDR3 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:49;
d. второй домен VL2 иммуноглобулина содержит (например, последовательно):
i. гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная CDR1 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:60, указанная CDR2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:61, и указанная CDR3 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:62, или
ii. гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная CDR1 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:63, указанная CDR2 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:64, и указанная CDR3 имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:65.
4. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих пунктов, содержащее первый домен VH1 иммуноглобулина, первый домен VL1 иммуноглобулина, второй домен VH2 иммуноглобулина и второй домен VL2 иммуноглобулина, где
a. первый домен VH1 иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 85,
b. первый домен VL1 иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 101,
c. второй домен VH2 иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 53,
d. второй домен VL2 иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 69.
5. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих пунктов, содержащее первую тяжелую цепь иммуноглобулина, первую легкую цепь иммуноглобулина, вторую тяжелую цепь иммуноглобулина и вторую легкую цепь иммуноглобулина, где
a. первая тяжелая цепь иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 87,
b. первая легкая цепь иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 103,
c. вторая тяжелая цепь иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 55, и
d. вторая легкая цепь иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 71.
6. Способ отбора биспецифического антитела по любому из пп. 1-5, при этом указанный способ включает
а. первую стадию отбора первой части и второй части;
b. вторую стадию совместной экспрессии первой части и второй части в общей клетке-хозяине с получением в результате этого биспецифического антитела, содержащего первую часть и вторую часть;
с. третью стадию очистки биспецифического антитела путем удаления ошибочно спаренных фрагментов от биспецифического антитела с правильным спариванием.
7. Способ по п. 6, где третья стадия очистки приводит к получению биспецифического антитела, чистого на по меньшей мере 60% (по массе), 70% (по массе), 80% (по массе), 85% (по массе), как, например, чистого на по меньшей мере 90% (по массе), чистого на 95% (по массе), 96% (по массе), 97% (по массе), 98% (по массе) или 99% (по массе).
8. Способ получения биспецифического антитела по любому из пп. 1-5 путем совместной экспрессии в общей клетке-хозяине, при этом указанный способ включает
a. первую стадию получения по меньшей мере одного вектора, кодирующего первую часть и вторую часть;
b. вторую стадию введения по меньшей мере одного вектора в общую клетку-хозяина;
c. третью стадию отбора клеток, специфично экспрессирующих биспецифическое антитело;
d. четвертую стадию культивирования отобранных клеток в условиях, в которых клетки экспрессируют биспецифическое антитело; и
e. пятую стадию очистки биспецифического антитела, которое является чистым на по меньшей мере 60% (по массе), 70% (по массе), 80% (по массе) или 85% (по массе), как, например, чистым на по меньшей мере 90% (по массе), чистым на 95% (по массе), 96% (по массе), 97% (по массе), 98% (по массе) или 99% (по массе).
9. Способ по п. 8, где первая стадия включает получение первого вектора, кодирующего первую часть, и второго вектора, кодирующего вторую часть.
10. Система экспрессии, содержащая по меньшей мере один вектор, содержащий полинуклеотид, кодирующий первую часть или вторую часть биспецифического антитела по любому из пп. 1-5 и селектируемый маркер.
11. Система экспрессии по п. 10, содержащая а. полинуклеотид, кодирующий первый селектируемый маркер (sm I); b. полинуклеотид, кодирующий второй селектируемый маркер (sm II), который отличается от первого селектируемого маркера (sm I).
12. Система экспрессии по п. 10 или 11, где первый селектируемый маркер (sm I) представляет собой переносчик фолата или полинуклеотид, кодирующий мутантный рецептор фолата, где мутантный рецептор фолата характеризуется пониженной аффинностью связывания фолата по сравнению с рецептором фолата дикого типа, и второй селектируемый маркер (sm II) представляет собой DHFR.
13. Система экспрессии по любому из пп. 10-12, где первый селектируемый маркер (sm I) представляет собой ген устойчивости к гигромицину, а второй селектируемый маркер (sm II) представляет собой ген устойчивости к неомицину/G418.
14. Система экспрессии по любому из пп. 10-13, содержащая два вектора экспрессии, где а. первый вектор содержит полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере первый селектируемый маркер (sm I), и по меньшей мере полинуклеотиды, кодирующие первую часть; и b. второй вектор содержит полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере второй селектируемый маркер (sm II), и по меньшей мере полинуклеотиды, кодирующие вторую часть.
15. Система экспрессии по любому из пп. 10-14, содержащая стоп-кодон ниже полинуклеотидов, кодирующих тяжелую цепь, и полинуклеотид, кодирующий мембранный якорь иммуноглобулина, расположенный ниже стоп-кодона.
16. Способ отбора общей клетки-хозяина для применения в способах по любому из пп. 6-9, включающий а. первую стадию получения множества клеток-хозяев, содержащих систему экспрессии по любому из пп. 10-15; и b. культивирование указанного множества клеток-хозяев в условиях, селективных для селектируемого маркера, за счет чего обеспечивается получение клетки-хозяина, экспрессирующей продукт, представляющий интерес.
17. Способ по п. 16, где применяют селективную культуральную среду:
а. содержащую фолат в лимитирующей концентрации; и/или
b. содержащую фолиевую кислоту в концентрации 500 нМ или меньше; и/или
c. содержащую фолиевую кислоту в концентрации, выбранной из:
i. 1000 нМ - 100 пМ;
ii. 100 нМ - 1 нМ;
iii. 15 нМ - 1 нМ;
iv. 10 нМ - 1 нМ и
v. 10 нМ - 2,5 нМ; и/или
d. содержащую ингибитор DHFR; и/или
е. содержащую антифолат; и/или
f. содержащую антифолат в концентрации 500 нМ или меньше; и/или
g. содержащую MTX в концентрации, выбранной из:
i. 500 нМ - 3 нМ;
ii. 100 нМ - 10 нМ;
iii. 50 нМ - 10 нМ и
iv. 50 нМ; и/или
h. содержащую антифолат в концентрации до 20-кратной относительно концентрации фолата; и/или
i. содержащую антифолат в 10-20-кратной концентрации относительно концентрации фолата; и/или
j. содержащую фолиевую кислоту в концентрации до 15 нМ и МТХ в концентрации от эквимолярной до 20-кратной.
18. Способ по п. 16 или 17, где клетка-хозяин содержит систему экспрессии по п. 15, в которой по меньшей мере часть первой или второй части экспрессируется в виде слитого полипептида, содержащего трансмембранный якорь иммуноглобулина или его фрагмент, и где указанный слитый полипептид представляется на поверхности указанной клетки-хозяина, дополнительно включающий стадию:
а. приведения множества клеток-хозяев в контакт с детекторным соединением, связывающим слитый полипептид;
b. отбора по меньшей мере одной клетки-хозяина на основании наличия или количества детекторного соединения, связанного с клеточной поверхностью.
19. Способ по п. 18, где детекторное соединение содержит первую или вторую мишень или их производные и по меньшей мере одну детекторную метку.
20. Способ по п. 8 или 9, где пятая стадия очистки биспецифического антитела включает аффинную хроматографию и/или ионообменную хроматографию.
21. Способ по п. 20, где хроматография включает
a. первую стадию захвата;
b. вторую стадию заключительной очистки и необязательно
с. третью стадию дополнительной заключительной очистки.
22. Способ по п. 21, где первую стадию захвата выполняют согласно принципу, выбранному из группы, состоящей из аффинной хроматографии на основе связывания с Fc-фрагментом, как, например, с использованием белка A или белка G, аффинной хроматографии на основе специфичного связывания с легкой лямбда-цепью, как, например, с использованием LambdaFabSelect™, аффинной хроматографии на основе специфичного связывания с легкой каппа-цепью, как, например, с использованием KappaSelect™, аффинной хроматографии с использованием антиидиотипических антител, как, например, на основе связывания с первой частью или второй частью, аффинной хроматографии с использованием мишеней, такой как аффинная хроматография с использованием первой мишени или второй мишени, ионообменной хроматографии, как, например, с использованием Capto™ Adhere или Fractogel™ EMD SO3, и хроматографии гидрофобных взаимодействий.
23. Способ по п. 21 или 22, где вторую стадию заключительной очистки выполняют согласно принципу, выбранному из группы, состоящей из аффинной хроматографии на основе связывания с Fc-фрагментом, как, например, с использованием белка A или белка G, аффинной хроматографии на основе специфичного связывания с легкой лямбда-цепью, как, например, с использованием LambdaFabSelect™, аффинной хроматографии на основе специфичного связывания с легкой каппа-цепью, как, например, с использованием KappaSelect™, аффинной хроматографии с использованием антиидиотипических антител, как, например, на основе связывания с первой частью или второй частью, аффинной хроматографии с использованием мишеней, такой как аффинная хроматография с использованием первой мишени или второй мишени, ионообменной хроматографии, как, например, с использованием Capto™ Adhere или Fractogel™ EMD SO3, хроматографии гидрофобных взаимодействий и инактивации вирусов.
24. Способ по п. 23, где третью стадию дополнительной заключительной очистки выполняют согласно принципу, выбранному из группы, состоящей из аффинной хроматографии на основе связывания с Fc-фрагментом, как, например, с использованием белка A или белка G, аффинной хроматографии на основе специфичного связывания с легкой лямбда-цепью, как, например, с использованием LambdaFabSelect™, аффинной хроматографии на основе специфичного связывания с легкой каппа-цепью, как, например, с использованием KappaSelect™, аффинной хроматографии с использованием антиидиотипических антител, как, например, на основе связывания с первой частью или второй частью, аффинной хроматографии с использованием мишеней, такой как аффинная хроматография с использованием первой мишени или второй мишени, ионообменной хроматографии, как, например, с использованием Capto™ Adhere или Fractogel™ EMD SO3, хроматографии гидрофобных взаимодействий и инактивации вирусов, в отдельности или в комбинации.
25. Способ по п. 21, выбранный из
а. первой стадии захвата белком А, таким как MabSelect™ SuRe™, второй стадии аффинной хроматографии на основе связывания с легкой лямбда-цепью, как, например, с использованием LambdaFabSelect™, и третьей стадии аффинной хроматографии на основе связывания с легкой каппа-цепью, как, например, с использованием KappaSelect™; или
b. первой стадии с использованием белка А, такого как MabSelect™ SuRe™, второй стадии аффинной хроматографии на основе связывания с легкой каппа-цепью, как, например, с использованием KappaSelect™, и третьей стадии аффинной хроматографии на основе связывания с легкой лямбда-цепью, как, например, с использованием LambdaFabSelect™; или
с. первой стадии аффинной хроматографии на основе связывания с легкой каппа-цепью, как, например, с использованием KappaSelect™, и второй стадии аффинной хроматографии на основе связывания с легкой лямбда-цепью, как, например, с использованием LambdaFabSelect™; или
d. первой стадии аффинной хроматографии на основе связывания с легкой лямбда-цепью, как, например, с использованием LambdaFabSelect™, и второй стадии аффинной хроматографии на основе связывания с легкой каппа-цепью, как, например, с использованием KappaSelect™.
26. Способ по любому из пп. 6-9 или 16-25, где линия клеток выбрана из группы, состоящей из клеток CHO, непродуцирующей гибридомы, такой как Sp 2/0 или NS0, линии клеток человеческого происхождения, такой как HEK или PER.C6, линии клеток, полученной из почки новорожденного хомячка (BHK), линии клеток дрожжей или нитчатых грибов, прокариотических бактерий, таких как E. coli или Pseudomonas fluorescens, линии клеток растительного происхождения, линии клеток водорослей и инфузорий.
27. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп. 1-5 и фармацевтически приемлемый носитель.
28. Применение биспецифического антитела по любому из пп. 1-5 или фармацевтической композиции по п. 27 в качестве лекарственного препарата.
29. Применение биспецифического антитела по любому из пп. 1-5 или фармацевтической композиции по п. 27 для лечения заболевания, связанного с инфламмасомами.
30. Применение по п. 29, где заболевание, связанное с инфламмасомами, выбрано из группы, состоящей из серповидноклеточной анемии, васкулопатии, ишемического/реперфузионного повреждения, сердечно-сосудистого заболевания, заболевания периферических артерий, атеросклероза, сосудистой дисфункции, ишемии скелетных мышц, легочного саркоидоза, фиброза, малярии, гемодиализ-зависимого хронического заболевания почек и болезни Крона.
31. Способ лечения нарушения, связанного с инфламмасомами, включающий введение субъекту, страдающему нарушением, связанным с инфламмасомами, эффективного количества биспецифического антитела по пп. 1-5 или фармацевтической композиции по п. 29.
32. Способ по п. 31, где нарушение, связанное с инфламмасомами, представляет собой серповидноклеточную анемию, васкулопатию, ишемическое/реперфузионное повреждение, сердечно-сосудистое заболевание, заболевание периферических артерий, атеросклероз, сосудистую дисфункцию, ишемию скелетных мышц, легочный саркоидоз, фиброз, малярию, гемодиализ-зависимое хроническое заболевание почек или болезнь Крона.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762518090P | 2017-06-12 | 2017-06-12 | |
| US62/518,090 | 2017-06-12 | ||
| PCT/IB2018/054140 WO2018229612A1 (en) | 2017-06-12 | 2018-06-08 | Method of manufacturing bispecific antibodies, bispecific antibodies and therapeutic use of such antibodies |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019140335A true RU2019140335A (ru) | 2021-07-13 |
| RU2019140335A3 RU2019140335A3 (ru) | 2021-10-04 |
| RU2795240C2 RU2795240C2 (ru) | 2023-05-02 |
Family
ID=
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI826377B (zh) | 製備雙特異性抗體的方法、雙特異性抗體及此等抗體的治療用途 | |
| US8497358B2 (en) | Antibody purification method | |
| RU2558301C2 (ru) | Полипептиды для связывания с "рецептором конечных продуктов гликирования", а также их композиции и способы, в которых они принимают участие | |
| WO2018089508A2 (en) | Anti-cd47 antibodies | |
| RU2019120720A (ru) | Улучшенные отдельные вариабельные домены иммуноглобулина, связывающиеся с сывороточным альбумином | |
| JP2018537421A5 (ru) | ||
| US20210171625A1 (en) | Anti-interferon gamma antibodies and uses thereof | |
| TW200840821A (en) | Methods of purifying anti A beta antibodies | |
| JP2019089772A (ja) | 改変抗体及びその作製方法 | |
| US11180536B2 (en) | Antibodies to royalactin and uses thereof | |
| KR102058381B1 (ko) | 인간 ｌ１ｃａｍ에 대한 인간화 항체 및 그의 제조 방법 | |
| JP7221352B2 (ja) | 抗ｐａｃａｐ抗体 | |
| TWI681971B (zh) | 新穎抗人類Ｉｇβ抗體 | |
| US20170362313A1 (en) | Use of binding molecule specifically binding to precursor of brain-derived neurotrophic factor | |
| JP2018522888A5 (ru) | ||
| US20240132626A1 (en) | Fab-Based Trispecific Antibodies | |
| US10449250B2 (en) | Anti-sclerostin antibody, antigen binding fragment and medical use thereof | |
| US20160347833A1 (en) | Antibody process | |
| JP2018532427A (ja) | 抗ｃｄ９５ｌ抗体 | |
| RU2012106891A (ru) | Гуманизированные антитела, специфические для пептида-6, полученного из hsp65, способы и их использование | |
| US20220127375A1 (en) | Producing compositions comprising two or more antibodies | |
| US20220340674A1 (en) | Method for the production of bispecific fcyriii x cd30 antibody construct | |
| WO2021020416A1 (ja) | 二重特異性抗体 | |
| CN110938146B (zh) | Tim-3单域抗体及其应用 | |
| KR20220024513A (ko) | 다단 크로마토그래피 공정 동안 원치 않는 성분을 제거하기 위한 방법 |