RU2019136194A - В-клетки для доставки терапевтических средств in vivo и их дозы - Google Patents

В-клетки для доставки терапевтических средств in vivo и их дозы Download PDF

Info

Publication number
RU2019136194A
RU2019136194A RU2019136194A RU2019136194A RU2019136194A RU 2019136194 A RU2019136194 A RU 2019136194A RU 2019136194 A RU2019136194 A RU 2019136194A RU 2019136194 A RU2019136194 A RU 2019136194A RU 2019136194 A RU2019136194 A RU 2019136194A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
genetically modified
paragraphs
subject
composition
Prior art date
Application number
RU2019136194A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2019136194A3 (ru
RU2812477C2 (ru
Inventor
Мэттью Рейн ШОЛЬЦ
Эрик Дж. ХЕРБИГ
Р. Скотт МАКИВОР
Риан ДЕ ЛАТ
Эрик Олсон
Original Assignee
Иммусофт Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Иммусофт Корпорейшн filed Critical Иммусофт Корпорейшн
Publication of RU2019136194A publication Critical patent/RU2019136194A/ru
Publication of RU2019136194A3 publication Critical patent/RU2019136194A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2812477C2 publication Critical patent/RU2812477C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/45—Transferases (2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4612—B-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
    • A61K39/4622—Antigen presenting cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0083—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the administration regime
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0635—B lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
    • C12Y203/01—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
    • C12Y203/01043—Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase (2.3.1.43), i.e. lecithin-cholesterol acyltransferase or LCAT
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12Y301/01034—Lipoprotein lipase (3.1.1.34)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01076—L-Iduronidase (3.2.1.76)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/12—Animals modified by administration of exogenous cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/15—Animals comprising multiple alterations of the genome, by transgenesis or homologous recombination, e.g. obtained by cross-breeding
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/26—Universal/off- the- shelf cellular immunotherapy; Allogenic cells or means to avoid rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/599—Cell markers; Cell surface determinants with CD designations not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/70—Enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/90—Vectors containing a transposable element

Claims (151)

1. Способ введения генетически модифицированных В-клеток субъекту для обеспечения продуцирования терапевтического средства in vivo, предусматривающий:
введение субъекту двух или более последовательных доз генетически модифицированных В-клеток.
2. Способ по п. 1, где введение предусматривает две или более доз генетически модифицированных В-клеток при субоптимальных концентрациях однократной дозы.
3. Способ по п. 1, где введение предусматривает три или более доз генетически модифицированных В-клеток.
4. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются аутологичными по отношению к субъекту.
5. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются аллогенными по отношению к субъекту.
6. Способ по п. 1, где субъектом является человек.
7. Способ по п. 1, где терапевтическое средство представляет собой белок, полинуклеотид или малую молекулу, кодируемую ДНК.
8. Способ по п. 7, где белок представляет собой фермент, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, слитый белок, рецептор клеточной поверхности, секретируемый белок, сигнальную молекулу, антигенный фрагмент, фактор свертывания крови или молекулу адгезии.
9. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38- и CD138-.
10. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138+.
11. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138-.
12. Способ по п. 1, где введение предусматривает внутривенную, интраперитонеальную, подкожную или внутримышечную инъекцию.
13. Способ по п. 12, где введение предусматривает внутривенную инъекцию.
14. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки получают с применением транспозона Sleeping Beauty для обеспечения экспрессии терапевтического средства в В-клетках.
15. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки получают с применением рекомбинантного вирусного вектора для обеспечения экспрессии терапевтического средства в В-клетках.
16. Способ по п. 15, где рекомбинантный вирусный вектор кодирует рекомбинантный ретровирус, рекомбинантный лентивирус, рекомбинантный аденовирус или рекомбинантный аденоассоциированный вирус.
17. Способ по п. 1, где генетически модифицированные В-клетки получают путем нацеленной интеграции в геном В-клетки полинуклеотидной последовательности, кодирующей терапевтическое средство.
18. Способ по п. 17, где нацеленная интеграция предусматривает опосредованную нуклеазой с «цинковыми пальцами» интеграцию генов, опосредованную CRISPR/CAS9 интеграцию генов, опосредованную нуклеазой TALE интеграцию генов или опосредованную мегануклеазой интеграцию генов.
19. Способ по п. 18, где нацеленную интеграцию полинуклеотида осуществляют посредством гомологичной рекомбинации.
20. Способ по п. 17, где нацеленная интеграция предусматривает опосредованную вирусным вектором доставку нуклеазы, способной индуцировать расщепление ДНК в сайте-мишени ДНК.
21. Способ по п. 20, где нуклеаза представляет собой нуклеазу с «цинковыми пальцами», нуклеазу CAS9, нуклеазу TALE или мегануклеазу.
22. Способ по любому из пп. 1-21, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, характеризующийся последовательностью, идентичной SEQ ID NO: 1.
23. Способ по любому из пп. 1-21, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, характеризующийся последовательностью, которая на по меньшей мере приблизительно 85% идентична SEQ ID NO: 1 или на по меньшей мере приблизительно 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более чем 99% идентична SEQ ID NO: 1.
24. Способ по любому из пп. 1-23, где генетически модифицированные В-клетки конструируют в день 2 или день 3 после культивирования.
25. Способ по п. 24, где генетически модифицированные В-клетки конструируют с применением способа, предусматривающего электропорацию.
26. Способ по любому из пп. 1-25, где генетически модифицированные В-клетки собирают для введения субъекту в день 4, день 5, день 6 или день 7 культивирования после конструирования.
27. Способ по любому из пп. 1-25, где генетически модифицированные В-клетки собирают для введения субъекту в день 8 культивирования после конструирования или позже.
28. Способ по п. 27, где генетически модифицированные В-клетки собирают для введения субъекту в день 10 культивирования после конструирования или раньше.
29. Способ по любому из пп. 1-28, где собранные генетически модифицированные В-клетки не продуцируют значительных уровней воспалительных цитокинов.
30. Способ по любому из пп. 1-28, где генетически модифицированные В-клетки собирают в момент времени культивирования, в который определено, что они не продуцируют значительных уровней воспалительных цитокинов.
31. Способ по любому из пп. 1-30, где генетически модифицированные В-клетки выращивают в культуральной системе, которая предусматривает каждый из IL-2, IL-4, IL-10, IL-15, IL-31 и мультимеризованного лиганда CD40, на протяжении всего периода культивирования до и после конструирования.
32. Способ по п. 31, где мультимеризованный лиганд CD40 представляет собой меченный HIS лиганд CD40, который мультимеризован с применением антитела к his-метке.
33. Способ по любому из пп. 1-32, дополнительно предусматривающий размножение генетически модифицированных В-клеток перед введением субъекту.
34. Способ по п. 33, где конечная популяция размноженных генетически модифицированных В-клеток демонстрирует высокую степень поликлональности.
35. Способ по п. 33, где какой-либо конкретный клон B-клеток в конечной популяции размноженных генетически модифицированных B-клеток составляет менее 0,2% от общей популяции B-клеток.
36. Способ по п. 33, где какой-либо конкретный клон B-клеток в конечной популяции размноженных генетически модифицированных B-клеток составляет менее 0,05% от общей популяции B-клеток.
37. Способ по любому из пп. 1-36, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, кодирующий ген DHFR человека, который придает повышенную устойчивость к метотрексату.
38. Способ по п. 37, где ген DHFR человека, который придает повышенную устойчивость к метотрексату, содержит мутации по типу замены лейцина на тирозин по аминокислоте 22 и фенилаланина на серин по аминокислоте 31.
39. Способ по любому из пп. 1-38, предусматривающий обработку генетически модифицированных В-клеток с помощью метотрексата перед сбором для введения.
40. Способ по п. 39, где обработка с помощью метотрексата предусматривает от 100 нМ до 300 нМ.
41. Способ по п. 40, где обработка с помощью метотрексата предусматривает 200 нМ.
42. Способ по любому из пп. 1-41, где генетически модифицированные В-клетки мигрируют в различные ткани после введения субъекту.
43. Способ по любому из пп. 1-41, где по меньшей мере одна генетически модифицированная B-клетка из популяции генетически модифицированных B-клеток, которые вводят субъекту, мигрирует в одну или более тканей, выбранных из группы, состоящей из костного мозга, кишечника, мышцы, селезенки, почки, сердца, печени, легкого и головного мозга.
44. Способ по п. 43, где по меньшей мере одна генетически модифицированная В-клетка из популяции генетически модифицированных В-клеток, которые вводят субъекту, мигрирует в костный мозг, кишечник, мышцу, селезенку, почку, сердце, печень, легкое и головной мозг субъекта.
45. Способ по любому из пп. 1-44, где терапевтическое средство, продуцируемое генетически модифицированными В-клетками, представляет собой идуронидазу (IDUA).
46. Способ по п. 45, где введение генетически модифицированных В-клеток субъекту приводит к снижению уровней гликозаминогликанов (GAG) в различных тканях субъекта.
47. Способ по п. 45, где введение генетически модифицированных В-клеток субъекту приводит к снижению уровней GAG в одной или более тканях субъекта, выбранных из группы, состоящей из костного мозга, кишечника, мышцы, селезенки, почки, сердца, печени, легкого и головного мозга.
48. Способ по п. 47, где введение генетически модифицированных В-клеток субъекту приводит к снижению уровней GAG в костном мозге, кишечнике, мышце, селезенке, почке, сердце, печени, легком и головном мозге субъекта.
49. Способ по любому из пп. 1-48, где у субъекта имеется мукополисахаридоз типа I (MPS I).
50. Способ по п. 49, где введение генетически модифицированных В-клеток обеспечивает лечение MPS I у субъекта.
51. Способ доставки терапевтического средства во множество тканей in vivo, предусматривающий введение субъекту двух или более доз генетически модифицированных В-клеток.
52. Способ лечения MPS I у субъекта, предусматривающий введение субъекту с MPS I двух или более последовательных доз B-клеток, генетически модифицированных с обеспечением продуцирования IDUA.
53. Способ снижения количества гликозаминогликана (GAG) у субъекта с MPS I, предусматривающий введение субъекту двух или более последовательных доз В-клеток, генетически модифицированных с обеспечением продуцирования IDUA.
54. Модифицированная В-клетка, содержащая бифункциональный трансген pKT2/EEK-IDUA-DHFR.
55. Способ доставки терапевтического средства в одну или более тканей in vivo, предусматривающий введение субъекту одной или более доз генетически модифицированных В-клеток, где генетически модифицированные В-клетки являются мигрирующими.
56. Способ по п. 55, где по меньшей мере приблизительно 20% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL12.
57. Способ по п. 55, где по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45% или по меньшей мере приблизительно 50% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL12.
58. Способ по любому из пп. 55-57, где по меньшей мере приблизительно 20% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL13.
59. Способ по любому из пп. 55-58, где по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45% или по меньшей мере приблизительно 50% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL13.
60. Способ по п. 55, где по меньшей мере приблизительно 40% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL12, и по меньшей мере приблизительно 40% В-клеток мигрируют в анализе хемотаксиса с применением CXCL13.
61. Способ по любому из пп. 55-60, где модифицированные В-клетки генетически сконструированы с обеспечением экспрессии терапевтического средства.
62. Способ по любому из пп. 55-61, где модифицированные В-клетки генетически сконструированы с обеспечением секреции терапевтического средства.
63. Способ по п. 55, где генетически модифицированные В-клетки вводят после пребывания В-клеток в культуре в течение периода менее приблизительно 7 дней после конструирования.
64. Способ по п. 55, где генетически модифицированные В-клетки вводят после пребывания В-клеток в культуре в течение периода 4-9 дней.
65. Способ по п. 55, где генетически модифицированные В-клетки вводят после пребывания В-клеток в культуре в течение периода 5, 6 или 7 дней после конструирования.
66. Способ по любому из пп. 55-65, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
67. Способ по любому из пп. 55-65, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
68. Способ по любому из пп. 55-67, где способ предусматривает введение по меньшей мере двух доз модифицированных В-клеток.
69. Способ по любому из пп. 55-68, где введение предусматривает внутривенную инъекцию.
70. Способ введения генетически модифицированных В-клеток субъекту с обеспечением синергетического продуцирования in vivo терапевтического средства, предусматривающий: определение оптимальной концентрации однократной дозы модифицированных В-клеток для индуцирования наибольшего продуцирования in vivo терапевтического средства; уменьшение оптимальной концентрации однократной дозы модифицированных B-клеток с получением субоптимальной концентрации однократной дозы модифицированных B-клеток и введение субъекту двух или более доз при субоптимальной концентрации однократной дозы модифицированных В-клеток.
71. Способ по п. 70, где проводят исследование с использованием множества однократных доз модифицированных B-клеток, в результате чего определяют оптимальную концентрацию однократной дозы модифицированных B-клеток.
72. Способ по п. 71, где увеличение дозы модифицированных В-клеток, присутствующих в некоторой концентрации однократной дозы модифицированных В-клеток, приводит к линейному повышению продуцирования терапевтического средства.
73. Способ по п. 70, где проводят исследование с использованием множества субоптимальных концентраций однократной дозы модифицированных В-клеток, в результате чего определяют оптимальную дозу, при этом полученная в результате доза приводит к большему, чем линейное, повышению по сравнению с более низкими дозами.
74. Способ по п. 70, где субоптимальная концентрация однократной дозы составляет половину или одну треть дозы при оптимальной концентрации однократной дозы.
75. Способ по п. 70, где субоптимальная концентрация однократной дозы составляет менее одной трети дозы при оптимальной концентрации однократной дозы.
76. Способ по любому из пп. 70-75, где синергетическое продуцирование терапевтического средства in vivo, которое является результатом введения субъекту двух или более доз при субоптимальной концентрации однократной дозы модифицированных В-клеток, происходит в результате внутривенной инъекции продукта на основе В-клеток.
77. Способ по любому из пп. 70-76, где В-клетки сконструированы с обеспечением экспрессии терапевтического средства.
78. Способ по п. 77, где модифицированные В-клетки генетически сконструированы с обеспечением секреции терапевтического средства.
79. Способ по любому из пп. 70-78, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
80. Способ по любому из пп. 70-78, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
81. Генетически модифицированная В-клетка, которая сконструирована с обеспечением продуцирования терапевтического средства.
82. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные B-клетки являются аутологичными по отношению к субъекту, которому вводятся генетически модифицированные B-клетки.
83. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные B-клетки являются аллогенными по отношению к субъекту, которому вводятся генетически модифицированные B-клетки.
84. Генетически модифицированная В-клетка по п. 82 или п. 83, где субъектом является человек.
85. Генетически модифицированная В-клетка по п. 81, где терапевтическое средство представляет собой белок, полинуклеотид или малую молекулу, кодируемую ДНК.
86. Генетически модифицированная В-клетка по п. 85, где белок представляет собой фермент, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, слитый белок, рецептор клеточной поверхности, секретируемый белок, сигнальную молекулу, антигенный фрагмент, фактор свертывания крови или молекулу адгезии.
87. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
88. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
89. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38- и CD138-.
90. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138+.
91. Генетически модифицированная B-клетка по п. 81, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138-.
92. Композиция, содержащая популяцию генетически модифицированных B-клеток, которые сконструированы с обеспечением продуцирования терапевтического средства, где генетически модифицированные B-клетки характеризуются оптимальной миграционной способностью.
93. Композиция по п. 92, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
94. Композиция по п. 92, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
95. Композиция, содержащая популяцию генетически модифицированных B-клеток, которые сконструированы с обеспечением продуцирования терапевтического средства, где генетически модифицированные B-клетки в композиции собраны из культуры в момент времени, когда они не продуцируют значительных количеств воспалительных цитокинов.
96. Композиция по любому из пп. 92-95, где генетически модифицированные В-клетки являются аутологичными по отношению к субъекту, которому вводятся генетически модифицированные В-клетки.
97. Композиция по любому из пп. 92-95, где генетически модифицированные В-клетки являются аллогенными по отношению к субъекту, которому вводятся генетически модифицированные В-клетки.
98. Композиция по любому из пп. 96-97, где субъектом является человек.
99. Композиция по п. 92 или п. 95, где терапевтическое средство представляет собой белок, полинуклеотид или малую молекулу, кодируемую ДНК.
100. Композиция по п. 99, где белок представляет собой фермент, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, слитый белок, рецептор клеточной поверхности, секретируемый белок, сигнальную молекулу, антигенный фрагмент, фактор свертывания крови или молекулу адгезии.
101. Композиция по любому из пп. 92-100, где терапевтическое средство представляет собой IDUA.
102. Композиция по любому из пп. 92-100, где терапевтическое средство представляет собой FIX, LPL или LCAT.
103. Композиция по любому из пп. 92-102, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38- и CD138-.
104. Композиция по любому из пп. 92-102, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138+.
105. Композиция по любому из пп. 92-102, где генетически модифицированные В-клетки являются CD20-, CD38+ и CD138-.
106. Композиция по любому из пп. 92-105, где генетически модифицированные В-клетки получены с применением транспозона Sleeping Beauty с обеспечением экспрессии терапевтического средства в В-клетках.
107. Композиция по любому из пп. 92-105, где генетически модифицированные В-клетки получены с применением рекомбинантного вирусного вектора с обеспечением экспрессии терапевтического средства в В-клетках.
108. Композиция по п. 107, где рекомбинантный вирусный вектор кодирует рекомбинантный ретровирус, рекомбинантный лентивирус, рекомбинантный аденовирус или рекомбинантный аденоассоциированный вирус.
109. Композиция по любому из пп. 92-105 и пп. 106-108, где генетически модифицированные В-клетки получены с помощью нацеленной интеграции в геном В-клетки полинуклеотидной последовательности, кодирующей терапевтическое средство.
110. Композиция по п. 109, где нацеленная интеграция предусматривает опосредованную нуклеазой с «цинковыми пальцами» интеграцию генов, опосредованную CRISPR/CAS9 интеграцию генов, опосредованную нуклеазой TALE интеграцию генов или опосредованную мегануклеазой интеграцию генов.
111. Композиция по п. 110, где нацеленная интеграция полинуклеотида осуществлена посредством гомологичной рекомбинации.
112. Композиция по п. 109, где нацеленная интеграция предусматривает опосредованную вирусным вектором доставку нуклеазы, способной индуцировать расщепление ДНК в сайте-мишени ДНК.
113. Композиция по п. 112, где нуклеаза представляет собой нуклеазу с «цинковыми пальцами», нуклеазу CAS9, нуклеазу TALE или мегануклеазу.
114. Композиция по любому из пп. 92-113, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, характеризующийся последовательностью, идентичной SEQ ID NO: 1.
115. Композиция по любому из пп. 92-113, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, характеризующийся последовательностью, которая на по меньшей мере приблизительно 85% идентична SEQ ID NO: 1 или на по меньшей мере приблизительно 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более чем 99% идентична SEQ ID NO: 1.
116. Композиция по любому из пп. 92-115, где генетически модифицированные В-клетки сконструированы в день 2 или день 3 после культивирования.
117. Композиция по п. 116, где генетически модифицированные В-клетки сконструированы с применением способа, предусматривающего электропорацию.
118. Композиция по любому из пп. 92-117, где генетически модифицированные В-клетки собраны для введения субъекту в день 4, день 5, день 6 или день 7 культивирования после конструирования.
119. Композиция по любому из пп. 92-117, где генетически модифицированные В-клетки собраны для введения субъекту в день 8 культивирования после конструирования или позже.
120. Композиция по любому из пп. 92-119, где генетически модифицированные В-клетки собраны для введения субъекту в день 10 культивирования после конструирования или раньше.
121. Композиция по любому из пп. 92-120, где собранные генетически модифицированные В-клетки не продуцируют значительных уровней воспалительных цитокинов.
122. Композиция по любому из пп. 92-121, где генетически модифицированные В-клетки собраны в момент времени культивирования, в который определено, что они не продуцируют значительных уровней воспалительных цитокинов.
123. Композиция по любому из пп. 92-122, где генетически модифицированные В-клетки выращены в культуральной системе, которая предусматривает каждый из IL-2, IL-4, IL-10, IL-15, IL-31 и мультимеризованного лиганда CD40 на протяжении всего периода культивирования до и после конструирования.
124. Композиция по п. 123, где мультимеризованный лиганд CD40 представляет собой меченный HIS лиганд CD40, который мультимеризован с применением антитела к his-метке.
125. Композиция по любому из пп. 92-124, где генетически модифицированные В-клетки размножены перед введением субъекту.
126. Композиция по п. 125, где конечная популяция размноженных генетически модифицированных В-клеток демонстрирует высокую степень поликлональности.
127. Композиция по п. 126, где какой-либо конкретный клон B-клеток в конечной популяции размноженных генетически модифицированных B-клеток составляет менее 0,2% от общей популяции B-клеток.
128. Композиция по п. 126, где какой-либо конкретный клон B-клеток в конечной популяции размноженных генетически модифицированных B-клеток составляет менее 0,05% от общей популяции B-клеток.
129. Композиция по любому из пп. 92-128, где генетически модифицированные В-клетки содержат полинуклеотид, кодирующий ген DHFR человека, который придает повышенную устойчивость к метотрексату.
130. Композиция по п. 129, где ген DHFR человека, который придает повышенную устойчивость к метотрексату, содержит мутации по типу замены лейцина на тирозин по аминокислоте 22 и фенилаланина на серин по аминокислоте 31.
131. Композиция по любому из пп. 92-130, где генетически модифицированные В-клетки обработаны с помощью метотрексата перед сбором для введения.
132. Композиция по п. 131, где обработка с помощью метотрексата предусматривает от 100 нМ до 300 нМ.
133. Композиция по п. 132, где обработка с помощью метотрексата предусматривает 200 нМ.
134. Композиция по любому из пп. 92-133, где генетически модифицированные В-клетки, содержащиеся в композиции, мигрируют в различные ткани после введения субъекту.
135. Композиция по любому из пп. 92-133, где по меньшей мере одна генетически модифицированная В-клетка из популяции генетически модифицированных В-клеток, содержащихся в композиции, мигрирует в одну или более тканей, выбранных из группы, состоящей из костного мозга, кишечника, мышцы, селезенки, почки, сердца, печени, легкого и головного мозга, если композиция на основе генетически модифицированных В-клеток вводится субъекту.
136. Композиция по п. 135, где по меньшей мере одна генетически модифицированная В-клетка из популяции генетически модифицированных В-клеток, содержащихся в композиции, мигрирует в костный мозг, кишечник, мышцу, селезенку, почку, сердце, печень, легкое и головной мозг субъекта, если композиция на основе генетически модифицированных В-клеток вводится субъекту.
137. Композиция по любому из пп. 92-136, где терапевтическое средство, продуцируемое с помощью генетически модифицированных В-клеток, представляет собой идуронидазу (IDUA).
138. Композиция по п. 137, где введение субъекту композиции, содержащей генетически модифицированные В-клетки, приводит к снижению уровней гликозаминогликанов (GAG) в различных тканях субъекта.
139. Композиция по п. 137, где введение субъекту композиции, содержащей генетически модифицированные В-клетки, приводит к снижению уровней GAG в одной или более тканях субъекта, выбранных из группы, состоящей из костного мозга, кишечника, мышцы, селезенки, почки, сердца, печени, легкого и головного мозга.
140. Композиция по любому из пп. 92-139, где композиция вводится субъекту, у которого имеется мукополисахаридоз типа I (MPS I).
141. Композиция по п. 140, где введение композиции, содержащей генетически модифицированные В-клетки, обеспечивает лечение MPS I у субъекта.
142. Композиция по любому из пп. 92-136, где терапевтическое средство, продуцируемое с помощью генетически модифицированных В-клеток, выбрано из FIX, LPL и LCAT.
143. Способ введения композиции по п. 137 субъекту, где указанное введение приводит к снижению уровней GAG в костном мозге, кишечнике, мышце, селезенке, почке, сердце, печени, легком и головном мозге субъекта.
144. Способ введения генетически модифицированных В-клеток субъекту для обеспечения продуцирования терапевтического средства in vivo, предусматривающий введение субъекту оптимальной однократной дозы генетически модифицированных В-клеток.
145. Способ по п. 144, где субъектом является человек.
146. Способ по п. 145, где оптимальная однократная доза является эквивалентной 3 x 107 модифицированных В-клеток/кг для человека.
147. Способ по любому из пп. 144-146, где доза составляет 1,5 x 109 генетически модифицированных В-клеток/кг.
148. Способ по любому из пп. 144-147, где оптимальная однократная доза генетически модифицированных В-клеток приводит к большему, чем линейное, повышению уровней терапевтического средства после инфузии клеток по сравнению с дозой, которая составляет две трети или меньше от оптимальной дозы.
149. Способ по любому из пп. 144-148, где оптимальная однократная доза генетически модифицированных В-клеток приводит к наибольшим уровням in vivo терапевтического средства в пересчете на клетку в контексте однократной инфузии В-клеток.
150. Способ по любому из пп. 144-149, где средство представляет собой IDUA.
RU2019136194A 2017-04-27 2018-04-27 В-клетки для доставки терапевтических средств in vivo и их дозы RU2812477C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762491151P 2017-04-27 2017-04-27
US62/491,151 2017-04-27
PCT/US2018/029993 WO2018201071A1 (en) 2017-04-27 2018-04-27 B cells for in vivo delivery of therapeutic agents and dosages thereof

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019136194A true RU2019136194A (ru) 2021-05-27
RU2019136194A3 RU2019136194A3 (ru) 2021-08-02
RU2812477C2 RU2812477C2 (ru) 2024-01-30

Family

ID=

Also Published As

Publication number Publication date
RU2019136194A3 (ru) 2021-08-02
WO2018201071A1 (en) 2018-11-01
AU2018256887A1 (en) 2019-11-07
EP3615045A4 (en) 2021-01-13
JP2023093703A (ja) 2023-07-04
CA3061048A1 (en) 2018-11-01
US20220193129A1 (en) 2022-06-23
EP3615045A1 (en) 2020-03-04
CN110709090A (zh) 2020-01-17
BR112019022473A2 (pt) 2020-10-20
JP2020517692A (ja) 2020-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106659742B (zh) 表达免疫应答刺激细胞因子以吸引和/或激活免疫细胞的基因修饰间充质干细胞
Jian et al. Insights into the role of progranulin in immunity, infection, and inflammation
CN105008521B (zh) 调节干细胞的免疫调节作用的方法
JP2020011966A (ja) 増強された養子細胞療法
JP2020517692A5 (ru)
JP5773366B2 (ja) 生物学的又は化学的作用物質に対する予防又はそれらの治療のために遺伝子改変されたヒト臍帯血管周囲細胞
CA2889299C (en) Novel method for treating spinal cord injury using hmgb1 fragment
CN106167789B (zh) 低氧处理的间充质干细胞及其应用
JP2014509197A (ja) 標的性治療人腫瘍治療の腫瘍溶解性アデノウイルス及びその応用
EP3703735A1 (en) Nk-92 cells to stimulate anti-cancer vaccine
JPH09508116A (ja) 末梢血単核細胞溶解活性を刺激するためのｉｌ−１０の使用
CN106520778A (zh) 改造的白介素12及其在制备治疗肿瘤的药物中的用途
US20190224241A1 (en) Nonviral minicircle vector carrying sox gene and construction method therefor
US20220127575A1 (en) Genetically modified hematopoietic stem and progenitor cells (hspcs) and mesenchymal cells as a platform to reduce or prevent metastasis, treat autoimmune and inflammatory disorders, and rebalance the immune milieu and dysregulated niches
KR20230018378A (ko) 골수 세포 및 미세아교세포에서 치료 단백질을 특이적으로 발현하는 바이러스 벡터
Yalvac et al. VIP-expressing dendritic cells protect against spontaneous autoimmune peripheral polyneuropathy
RU2019136194A (ru) В-клетки для доставки терапевтических средств in vivo и их дозы
CN111499766B (zh) 针对慢性淋巴细胞白血病的免疫效应细胞、其制备方法和应用
JP2011502162A5 (ru)
KR101815187B1 (ko) 손상 조직으로 이동 능력이 향상된 중간엽 줄기세포 및 이의 제조 방법
US11903969B2 (en) Genome editing of graft-derived T-cells for post-transplant immunotherapy
JPWO2019178613A5 (ru)
Aviña et al. IL-10 modified mRNA monotherapy prolongs survival after composite facial allografting through the induction of mixed chimerism
WO2018102642A1 (en) Marburgvirus consensus antigens, nucleic acid constructs and vaccines made therefrom, and methods of using same
CN116391030A (zh) 诱导异质免疫细胞趋化的转化免疫细胞