RU2018143867A - Способ получения модели вируса гепатита с, связывающейся с рецептором сd81 - Google Patents

Claims (11)

1. Способ получения модели вируса гепатита С, связывающейся с рецептором CD81, включающий:

создание плазмиды, обеспечивающей экспрессию гена, включающего в одной рамке считывания нуклеотидную последовательность, кодирующую фрагмент белка E2 вируса гепатита С (аминокислотные остатки 412-645) и нуклеотидную последовательность, кодирующую белок superfolder GFP;

трансформацию полученной плазмидой клеток Escherichia coli;

культивирование полученных клеток в культуральной среде с обеспечением индукции синтеза рекомбинантного белка изопропил-β-D-тиогалактопиранозидом;

растворение телец включения полученных клеток Escherichia coli в денатурирующем растворе, содержащем мочевину;

очистку целевого модельного белка на аффинном сорбенте с применением элюирующего раствора, содержащего мочевину; и

ступенчатый диализ очищенного целевого модельного белка против растворов мочевины.

2. Способ по п. 1, согласно которому указанный ген кодирует белок superfolder GFP с 6 аминокислотными остатками гистидина на С-конце.

3. Способ по п. 2, согласно которому в качестве аффинного сорбента используют никель-агарозу.

4. Способ по любому из пп. 1-3, согласно которому указанный денатурирующий раствор и указанный элюирующий раствор содержат 8 моль/л мочевины.

5. Способ по п. 4, согласно которому для указанного ступенчатого диализа указанный очищенный белок предварительно растворяют в растворе, содержащем 8 моль/л мочевины, и указанный ступенчатый диализ проводят в следующем порядке: сначала против раствора для диализа, содержащего 7 моль/л мочевины, затем против раствора для диализа, содержащего 6 моль/л мочевины, затем против раствора для диализа, содержащего 5 моль/л мочевины, затем против раствора для диализа, содержащего 4 моль/л мочевины, затем против раствора для диализа, содержащего 3 моль/л мочевины, затем против раствора для диализа, содержащего 2 моль/л мочевины, и затем против раствора для диализа, не содержащего мочевину.