RU2018141179A - Рекомбинантная плазмидная ДНК pET32a-DomIII-E-ZIKV, обеспечивающая экспрессию фрагмента гена Е, кодирующего домен III структурного гликопротеина Е вируса Зика и рекомбинантный белок Dom III-E-ZIKV, предназначенный для индукции специфического иммунитета против вируса Зика - Google Patents

Claims (11)

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pЕТ32a-DomIII-E-ZIKV, обеспечивающая экспрессию фрагмента гена Е, кодирующего домен III структурного гликопротеина Е вируса Зика, предназначенная для получения рекомбинантного белка DomIII-E-ZIKV, обеспечивающего индукцию специфического иммунитета против вируса Зика, имеющая размер 6364 п.н. и содержащая в своем составе:

ген bla (координаты с 599 по 1459 п.н), в качестве генетического маркера, определяющего устойчивость к ампициллину клеток бактерии E.coli, трансформированных рекомбинантной плазмидой pЕТ32a-DomIII-E-ZIKV;

участок начала репликации ori (координаты с 1630 по 2218 п.н.)

промотор фага T7 (координаты с 5121 по 5139 п.н.), обеспечивающий экспрессию последовательности фрагмента гена Е ZIKV в прокариотических клетках E.coli;

лактозный репрессор (координаты с 3648 п.н. по 4730 п.н.) - ДНК - связывающий белок, который ингибирует экспрессию генов E.coli и обеспечивает экспрессию целевого рекомбинантного белка после добавления индуктора изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид (IPTG);

уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющие следующие координаты: Bsp19I (5684 п.н.) и Sfr274I (6202 п.н.);

фрагмент гена Е (537 п.н.), встроенный в экспрессионную кассету по сайтам рестрикции Bsp19I (5684 п.н.) и Sfr274I (6202 п.н.), имеющий 518 пар нуклеотидов (п.н.) и кодирующий домен III структурного гликопротеина Е вируса Зика;

ген тиоредоксина (с 5209 п.н. по 5535 п.н.), состоящий из 326 п.н., который необходим для рефолтинга целевого белка и поддержания химерного белка в растворимой форме в цитоплазме E.coli;

политракт, имеющий 18 п.н. и состоящий из шести гистидинов (6x His) на N-конце кодируемого белка для последующей очистки его с помощью метода аффинной никель - хроматографии.

2. Рекомбинантный белок DomIII-E-ZIKV, полученный в результате экспрессии фрагмента гена Е вируса Зика в бактериальной системе E.coli в составе рекомбинантной плазмидной ДНК pЕТ32a-DomIII-E-ZIKV по п. 1 формулы, имеющий молекулярную массу 36,5 кДа и аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1 длиной 333 а.к.о.:

GGACCTTGCAAGGTTCCAGCTCAG ATGGCGGTGGACATGCA AACTCTGACCCCAGTTGGGAGGTTGAT AACCGCTAACCCCGTAATCACTGAAA GCACTGAGAACTCTAAGAT GATGCTGGAACTTGATCCAC CATTTGGGGACTCTTACATT GTCATAGGAGTCGGGG AGAAGAAGATCACCCACC ACTGGCACAGGAGTGG CAGCACCATTGGAAAA GCATTTGAAGCCACTGTGA GAGGTGCCAAGAGAATGGCA GTCTTGGGAGACACAGCCTG GGACTTTGGATCAGTTGGAG GCGCTCTCAACTCATTGGG CAAGGGCATCCATCAA, обладающий антигенными и иммуногенными свойствами и предназначенный для индукции специфического иммунитета против вируса Зика.