RU2015152861A

RU2015152861A - Способ очистки полисиалированного инсулина человека

Info

Publication number: RU2015152861A
Application number: RU2015152861A
Authority: RU
Inventors: Сергей Сергеевич Автушенко; Кирилл Геннадиевич Сурков; Андрей Валерьевич Петров; Сергей Федорович Ян; Вячеслав Сергеевич Лазарев; Евгения Николаевна Гаврилова
Original assignee: Общество С Ограниченной Ответственностью "Синбио"
Priority date: 2015-12-09
Filing date: 2015-12-09
Publication date: 2017-06-15
Also published as: RU2015152861A3; RU2736358C2; WO2017099637A2

Claims

1. Способ получения белка, который содержит инсулин и остаток полисиаловой кислоты, включающий следующие стадии:

a) нанесение раствора, содержащего смесь свободного инсулина и конъюгатов инсулина и полисиаловой кислоты, содержащих один или более остатков полисиаловой кислоты на молекулу инсулина, на колонку, содержащую хроматографический материал PRLP-S (диаметр пор 300

, размер частиц 10 мкм), уравновешенный раствором с содержанием неполярного компонента 2-8%,

b) промывка колонки раствором с содержанием неполярного компонента 2-8% и, таким образом, удаление свободной полисиаловой кислоты,

c) промывка колонки раствором с ступенчато возрастающей концентрацией неполярного компонента до конечного значения около 80% и, таким образом, раздельное высвобождение с колонки белков, содержащих два или более остатков полисиаловой кислоты, также белка, содержащего инсулин и один остаток полисиаловой кислоты, и инсулина, при этом белок, содержащий инсулин и один остаток полисиаловой кислоты, высвобождается вторым.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что раствор с содержанием неполярного компонента 2-8% представляет собой раствор с pH, значение которого составляет 6,0-8,0.

3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что раствор с содержанием неполярного компонента представляет собой буферную систему на основе триэтиламмония ацетата.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что раствором для промывки колонки является раствор с концентрацией этанола 5%.

5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что раствором со ступенчато возрастающей концентрацией неполярного компонента является раствор со ступенчато возрастающей концентрацией этанола.

6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что раствор со ступенчато возрастающей концентрацией этанола имеет pH, значение которого составляет 6,0-8,0.

7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что инсулин представляет собой инсулин человека, полученный рекомбинантным путем.

8. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что один остаток полисиаловой кислоты имеет молекулярную массу в диапазоне от 10 кДа до 40 кДа.