RU2015127497A

RU2015127497A - Модифицированные полипептиды ACE2

Info

Publication number: RU2015127497A
Application number: RU2015127497A
Authority: RU
Inventors: Ханс Лойбнер; Бернхард ПЕБАЛЛЬ; Манфред Шустер; Стефан ШТРАННЕР
Original assignee: Апейрон Биологикс Аг
Priority date: 2013-01-14
Filing date: 2014-01-13
Publication date: 2017-02-20
Also published as: EP2943216A1; EP2943216B1; WO2014108530A1; JP6715963B2; AU2014204769B2; KR20150110607A; CA2897251C; ES2732282T3; US9757433B2; CN105263512A; JP2019070019A; US20150353910A1; AU2014204769A1; CA2897251A1; JP2016504042A

Claims

1. Группа полипептидов ангиотензинпревращающего фермента 2 (АСЕ2), имеющих пониженные уровни Zn²⁺ в активных центрах.

2. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 1, где соотношение Zn²⁺ : полипептиды АСЕ2 составляет менее 1:1, предпочтительно менее ≤0,99:1, ≤0,98:1, ≤0,95:1, ≤0,92:1 или ≤0,90:1.

3. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 2, где соотношение Zn²⁺ : полипептиды АСЕ2 составляет ≤0,50:1, ≤0,45:1, ≤0,40:1, ≤0,35:1, ≤0,30:1, ≤0,25:1, ≤0,20:1, ≤0,15:1, ≤0,10:1, ≤0,05:1, ≤0,02:1 или ≤0,01:1.

4. Группа по п. 2, где соотношение измерено с помощью ICP-MS (масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой) согласно способам, представленным в примере 4.

5. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 1 где полипептиды АСЕ2 представляют собой полипептиды АСЕ2 человека.

6. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 5, где аминокислотные последовательности полипептидов АСЕ2 состоят из аминокислот 1-740 из SEQ ID NO: 1, или аминокислот 18-740 из SEQ ID NO: 1, или аминокислот 18-615 из SEQ ID NO: 1.

7. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 1, где полипептиды АСЕ2 представлены в димерной форме.

8. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 1, где полипептиды АСЕ2 гликозилированы в одном или более сайтах, независимо выбранных из группы, состоящей из Asn53, Asn90, Asn103, Asn322, Asn432, Asn546, Asn690 из SEQ ID NO: 1.

9. Группа полипептидов ACE2 по п. 8, где полипептиды АСЕ2 имеют общее содержание сахара более 20 мас.%.

10. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 1, где активные центры, по существу, не содержат Zn²⁺.

11. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 1, где активные центры, по существу, не содержат никакого иона металла.

12. Применение группы полипептидов АСЕ2 по любому из пп. 1-11 для расщепления АСЕ2-субстрата в растворе, содержащем по меньшей мере один ион металла.

13. Применение по п. 12, где ион металла выбран из Со²⁺, Ni²⁺, Mn²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Fe³⁺, Fe²⁺, Pb²⁺ Al, Ga, In, Sn, Tl, Pb, Bi и Po, предпочтительно Co²⁺, Zn²⁺, Ni²⁺, Pb²⁺, Al³⁺, Al²⁺ и Sn²⁺, например Zn²⁺, Fe³⁺, Cu²⁺, Mn²⁺ и Al³⁺.

14. Применение по п. 12 или 13, где АСЕ2-субстрат выбран из Ang II и Mca-Ala-Pro-Lys(Dnp)-OH.

15. Способ получения группы полипептидов АСЕ2 по любому из пп. 1-11, включающий стадии:

а. экспрессии полипептидов АСЕ2 в клеточной системе;

б. выделения экспрессированных полипептидов;

в. удаления некоторых или всех ионов металла, связанных в активном центре, посредством добавления металл-хелатирующего агента.

16. Способ по п. 15, где металл-хелатирующий агент выбран из EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота), EGTA (этиленгликольтетрауксусная кислота), 8-гидроксихинолина, фенантролина и/или димеркапрола.

17. Способ по п. 16, где металл-хелатирующий агент присутствует в избытке от 10 до 1000 (по сравнению с полипептидом).

18. Композиция, содержащая группу полипептидов АСЕ2 по любому из пп. 1-11, где молярное соотношение общего цинка или другого иона металла к АСЕ2 в композиции составляет менее 1:1, менее 95:1, ≤0,50:1, ≤0,45:1, ≤0,40:1, ≤0,35:1, ≤0,30:1, ≤0,25:1, ≤0,20:1, ≤0,15:1, ≤0,10:1, ≤0,05:1, ≤0,02:1 или ≤0,01:1.

19. Композиция, содержащая группу полипептидов АСЕ2 по любому из пп. 1-11, где композиция содержит металл-хелатирующие агенты в молярном избытке от 10 до 1000 по сравнению с молярным количеством цинка в композиции.

20. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 10, где активные центры заняты ионом переходного металла или ионом постпереходного металла, выбранного из Со²⁺, Ni²⁺, Mn²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Fe³⁺, Fe²⁺, Pb²⁺ Al, Ga, In, Sn, Tl, Pb, Bi и Po, предпочтительно Co²⁺, Zn²⁺, Ni²⁺, Pb²⁺, Al³⁺, Al²⁺ и Sn²⁺, например Zn²⁺, Fe³⁺, Cu²⁺, Mn²⁺ и Al³⁺.

21. Группа полипептидов ACE2 по п. 1, где активные центры, которые не заняты цинком, заняты одним или более ионами переходного металла, или ионами постпереходного металла, выбранного из Со²⁺, Ni²⁺, Mn²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Fe³⁺, Fe²⁺, Pb²⁺ Al, Ga, In, Sn, Tl, Pb, Bi и Po, предпочтительно Co²⁺, Zn²⁺, Ni²⁺, Pb²⁺, Al³⁺, Al²⁺ и Sn²⁺, например Zn²⁺, Fe³⁺, Cu²⁺, Mn²⁺ и Al³⁺.

22. Группа полипептидов АСЕ2 по п. 20 или 21, где молярное соотношение ионы металла : полипептид АСЕ2 составляет ≥0,10:1, ≥0,15:1, ≥0,20:1, ≥0,25:1, ≥0,30:1, ≥0,35:1, ≥0,40:1, ≥0,45:1, ≥0,50:1, ≥0,55:1, ≥0,60:1, ≥0,65:1, ≥0,75:1, ≥0,80:1, ≥0,85:1, ≥0,90:1, ≥0,92:1, ≥0,95:1, ≥0,98:1, ≥0,99:1 или примерно 1,00:1.

23. Группа полипептидов АСЕ2 по любому из пп. 20-21, где полипептиды АСЕ2 представляют собой полипептиды АСЕ2 человека.

24. Группа полипептидов АСЕ2 по любому из пп. 20 и 21, где аминокислотные последовательности полипептидов АСЕ2 состоят из аминокислот 1-740 из SEQ ID NO: 1, или аминокислот 18-740 из SEQ ID NO: 1, или аминокислот 18-615 из SEQ ID NO: 1.

25. Группа полипептидов АСЕ2 по любому из пп. 20 и 21, где полипептиды АСЕ2 присутствуют в димерной форме.

26. Группа полипептидов АСЕ2 по любому из пп. 20 и 21, где полипептиды АСЕ2 гликозилированы в одном или более сайтах, независимо выбранных из группы, состоящей из Asn53, Asn90, Asn103, Asn322, Asn432, Asn546, Asn690 из SEQ ID NO: 1.

27. Группа полипептидов ACE2 по любому из пп. 20 и 21, где полипептиды АСЕ2 имеют общее содержание сахара более 20 мас.% .

28. Способ получения группы полипептидов АСЕ2 по любому из пп. 20-27, включающий стадии:

а. экспрессии полипептида АСЕ2 в клеточной системе;

в. удаления некоторых или всех ионов металлов, связанных в активном центре, путем добавления металл-хелатирующего агента;

г. приведения полученного полипептида АСЕ2 в контакт с раствором, содержащим ионы переходного металла или ионы постпереходного металла, выбранного из Со²⁺, Ni²⁺, Mn²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Fe³⁺, Fe²⁺, Pb²⁺ Al, Ga, In, Sn, Tl, Pb, Bi и Po, предпочтительно Co²⁺, Zn²⁺, Ni²⁺, Pb²⁺, Al³⁺, Al²⁺ и Sn²⁺, например Zn²⁺, Fe³⁺, Cu²⁺, Mn²⁺ и Al³⁺.

29. Применение группы полипептидов ACE2 по любому из пп. 20-27 для расщепления субстрата.

30. Фармацевтическая композиция, содержащая группу полипептидов АСЕ2, как определено в любом из пп. 1-11 или пп. 20-27, и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.

31. Группа полипептидов АСЕ2, как определено в любом из пп. 1-11 или пп. 20 и 21, для использования в терапии.

32. Группа полипептидов АСЕ2, как определено в любом из пп. 1-11 или пп. 20 и 21, для использования в лечении или предупреждении заболевания, выбранного из гипертензии (включая высокое кровяное давление), застойной сердечной недостаточности, хронической сердечной недостаточности, острой сердечной недостаточности, недостаточности сократительной способности сердечной мышцы, инфаркта миокарда, артериосклероза, почечной недостаточности, декомпенсированной почечной недостаточности и заболевания легких, например респираторного дистресс-синдрома взрослых (ARDS), синдрома острого повреждения легких (ALI), хронического обструктивного заболевания легких (COPD), легочной гипертензии, почечного фиброза, хронической почечной недостаточности, острой декомпенсированной почечной недостаточности, хронической декомпенсированной почечной недостаточности, острого повреждения почек и синдрома мультиорганной дисфункции.

33. Применение группы полипептидов АСЕ2, как определено в любом из пп. 1-11 или пп. 20-27, в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания, выбранного из гипертензии (включая высокое кровяное давление), застойной сердечной недостаточности, хронической сердечной недостаточности, острой сердечной недостаточности, недостаточности сократительной способности сердечной мышцы, инфаркта миокарда, артериосклероза, почечной недостаточности, декомпенсированной почечной недостаточности и заболевания легких, например респираторного дистресс-синдрома взрослых (ARDS), синдрома острого повреждения легких (ALI), хронического обструктивного заболевания легких (COPD), легочной гипертензии, почечного фиброза, хронической почечной недостаточности, острой почечной недостаточности, хронической декомпенсированной почечной недостаточности, острого повреждения почек и синдрома мультиорганной дисфункции.

34. Способ лечения или предупреждения заболевания, выбранного из гипертензии (включая высокое кровяное давление), застойной сердечной недостаточности, хронической сердечной недостаточности, острой сердечной недостаточности, недостаточности сократительной способности сердечной мышцы, инфаркта миокарда, артериосклероза, почечной недостаточности, декомпенсированной почечной недостаточности и заболевания легких, например респираторного дистресс-синдрома взрослых (ARDS), синдрома острого повреждения легких (ALI), хронического обструктивного заболевания легких (COPD), легочной гипертензии, почечного фиброза, хронической почечной недостаточности, острой декомпенсированной почечной недостаточности, хронической декомпенсированной почечной недостаточности, острого повреждения почек и синдрома мультиорганной дисфункции, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества группы полипептидов АСЕ2, как определено в любом из пп. 1-11 или пп. 20-27.