RU2012101475A - Улучшенные способы очистки векторов на основе рекомбинантного aav - Google Patents

Улучшенные способы очистки векторов на основе рекомбинантного aav Download PDF

Info

Publication number
RU2012101475A
RU2012101475A RU2012101475/10A RU2012101475A RU2012101475A RU 2012101475 A RU2012101475 A RU 2012101475A RU 2012101475/10 A RU2012101475/10 A RU 2012101475/10A RU 2012101475 A RU2012101475 A RU 2012101475A RU 2012101475 A RU2012101475 A RU 2012101475A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
buffer
aav
chromatography medium
apatite
raav particles
Prior art date
Application number
RU2012101475/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2588387C2 (ru
Inventor
Полин МакЛин Куигли ШЕЛДОН
Питер С. ГАНЬОН
Джина НИКОЛС
Барбара А. ТОРН
Original Assignee
Джензим Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Джензим Корпорейшн filed Critical Джензим Корпорейшн
Publication of RU2012101475A publication Critical patent/RU2012101475A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2588387C2 publication Critical patent/RU2588387C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/02—Recovery or purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/861—Adenoviral vectors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography

Abstract

1. Способ выделения популяции частиц рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) из технологических примесей в потоке исходных материалов, включающий стадии:(a) приведения потока исходных материалов, содержащего частицы rAAV, в контакт со средой хроматографии на апатите в присутствии полиэтиленгликоля (PEG), где частицы rAAV связываются со средой хроматографии на апатите; и(b) элюирования частиц rAAV, связанных со средой хроматографии на апатите с помощью буфера для элюирования, содержащего менее чем 3% (мас./об.) PEG.2. Способ по п.1, в котором среда хроматографии на апатите представляет собой керамический гидроксиапатит (CHT).3. Способ по п.1, в котором среда хроматографии на апатите представляет собой керамический фторапатит (CFT).4. Способ по п.1, в котором специфическое связывание среды хроматографии на апатите с частицами rAAV характеризуется от 10до 10устойчивых к ДНКазе частиц на миллилитр (DRP/мл).5. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию связывания частиц rAAV в потоке исходных материалов, элюированном со среды хроматографии на апатите, со средой анионной хроматографии.6. Способ по п.1, в котором поток исходных материалов, содержащий частицы rAAV, на стадии (a) приводят в контакт со средой хроматографии на апатите в присутствии полиэтиленгликоля (PEG) и основного буфера.7. Способ по п.6, в котором основной буфер характеризуется pH между 7,6 и 10.8. Способ по п.6, в котором основной буфер характеризуется pH между 8,0 и 10,0.9. Способ по п.6, в котором основной буфер характеризуется pH между 9,0 и 10,0.10. Способ по п.6, в котором основной буфер содержит борат.11. Способ по п.1, в котором PEG характеризуется средней молекулярной массой между приблизитель

Claims (42)

1. Способ выделения популяции частиц рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) из технологических примесей в потоке исходных материалов, включающий стадии:
(a) приведения потока исходных материалов, содержащего частицы rAAV, в контакт со средой хроматографии на апатите в присутствии полиэтиленгликоля (PEG), где частицы rAAV связываются со средой хроматографии на апатите; и
(b) элюирования частиц rAAV, связанных со средой хроматографии на апатите с помощью буфера для элюирования, содержащего менее чем 3% (мас./об.) PEG.
2. Способ по п.1, в котором среда хроматографии на апатите представляет собой керамический гидроксиапатит (CHT).
3. Способ по п.1, в котором среда хроматографии на апатите представляет собой керамический фторапатит (CFT).
4. Способ по п.1, в котором специфическое связывание среды хроматографии на апатите с частицами rAAV характеризуется от 1014 до 1016 устойчивых к ДНКазе частиц на миллилитр (DRP/мл).
5. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию связывания частиц rAAV в потоке исходных материалов, элюированном со среды хроматографии на апатите, со средой анионной хроматографии.
6. Способ по п.1, в котором поток исходных материалов, содержащий частицы rAAV, на стадии (a) приводят в контакт со средой хроматографии на апатите в присутствии полиэтиленгликоля (PEG) и основного буфера.
7. Способ по п.6, в котором основной буфер характеризуется pH между 7,6 и 10.
8. Способ по п.6, в котором основной буфер характеризуется pH между 8,0 и 10,0.
9. Способ по п.6, в котором основной буфер характеризуется pH между 9,0 и 10,0.
10. Способ по п.6, в котором основной буфер содержит борат.
11. Способ по п.1, в котором PEG характеризуется средней молекулярной массой между приблизительно 5000 (PEG5000) граммов на моль и приблизительно 15000 (PEG15000) граммов на моль.
12. Способ по п.11, в котором PEG характеризуется средней молекулярной массой приблизительно 6000 (PEG6000) граммов на моль.
13. Способ по п.1, в котором поток исходных материалов, содержащий частицы rAAV, на стадии (a) приводят в контакт со средой хроматографии на апатите в присутствии между приблизительно 3% (мас./об.) и приблизительно 10% (мас./об.) PEG.
14. Способ по п.13, в котором поток исходных материалов приводят в контакт со средой хроматографии на апатите в присутствии приблизительно 5% (мас./об.) PEG6000.
15. Способ по п.13, в котором поток исходных материалов приводят в контакт со средой хроматографии на апатите в присутствии приблизительно 10% (мас./об.) PEG6000.
16. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию промывки среды хроматографии на апатите буфером для промывки после того, как поток исходных материалов приведен в контакт со средой хроматографии на апатите, но до элюирования частиц rAAV со среды хроматографии на апатите.
17. Способ по п.16, в котором среду хроматографии на апатите отмывают один или более раз буфером для промывки, содержащим приблизительно 7,5% (мас./об.) PEG, и/или буфером для промывки, содержащим приблизительно 5% (мас./об.) PEG.
18. Способ по п.17, в котором среда хроматографии на апатите далее отмывается буфером для промывки, содержащим менее чем приблизительно 3% (мас./об.) PEG, и/или буфером для промывки, не содержащим PEG.
19. Способ по п.16, в котором буфер для промывки содержит буфер, выбранный из группы, состоящей из бората, N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновой кислоты (HEPES) и Tris-HCl.
20. Способ по п.16, в котором буфер для промывки характеризуется основным pH.
21. Способ по п.20, в котором буфер для промывки содержит борат при pH между приблизительно 8,0 и приблизительно 10,0.
22. Способ по п.21, в котором буфер для промывки содержит борат при pH, приблизительно равном 8,0.
23. Способ по п.21, в котором буфер для промывки содержит борат при pH, приблизительно равном 9,0.
24. Способ по п.21, в котором буфер для промывки содержит борат при pH, приблизительно равном 10,0.
25. Способ по п.20, в котором буфер для промывки дополнительно содержит от 100 до 500 мМ фосфата.
26. Способ по п.20, в котором буфер для промывки дополнительно содержит от 50 до 250 мМ NaCl.
27. Способ по п.1, в котором частицы rAAV, связанные со средой хроматографии на апатите, элюируют буфером для элюирования, содержащим низкие концентрации PEC или не содержащим PEG.
28. Способ по п.27, в котором буфер для элюирования содержит буфер, выбранный из группы, состоящей из бората, N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновой кислоты (HEPES) и Tris-HCl, при нейтральном pH.
29. Способ по п.27, в котором буфер для элюирования содержит менее чем приблизительно 3% (мас./об.) PEG6000.
30. Способ по п.29, в котором буфер для элюирования дополнительно содержит менее 100 мМ фосфата.
31. Способ по п.30, в котором буфер для элюирования дополнительно содержит 50 мМ фосфата.
32. Способ по п.31, в котором буфер для элюирования дополнительно содержит от 50 до 250 мМ NaCl.
33. Способ отделения популяции частиц рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) от технологических примесей в потоке исходных материалов, включающий стадии:
(a) приведения потока исходных материалов, содержащего частицы rAAV, в контакт со средой хроматографии на основе гидрофобных взаимодействий (HIC) в буфере с высоким содержанием соли, где частицы rAAV и технологические примеси связываются со средой HIC; и
(b) элюирования частиц rAAV, связанных со средой HIC буфером со средним содержанием соли.
34. Способ по п.33, в котором среда HIC выбрана из группы, состоящей из смолы Tosoh Butyl 650M, Tosoh SuperButyl 650C, Tosoh Phenyl 650C, EMD Fractogel Phenyl и Tosoh Has(Butyl).
35. Способ по п.33, в котором буфер с высоким содержанием соли содержит приблизительно от 0,5 M приблизительно до 2,0 M цитрата.
36. Способ по п.35, в котором буфер с высоким содержанием соли дополнительно содержит между приблизительно 1 и приблизительно 100 мМ фосфата.
37. Способ по п.33, в котором буфер со средним содержанием соли содержит менее 0,5 M цитрата.
38. Способ по п.37, в котором буфер со средним содержанием соли дополнительно содержит между приблизительно 1 и приблизительно 100 мМ фосфата.
39. Способ по п.37, в котором буфер со средним содержанием соли содержит от 0,2 M до 0,5 M цитрата.
40. Способ по п.39, в котором популяция частиц rAAV с пустыми капсидами, частично денатурированными капсидами, менее инфекционным капсидным материалом и/или с частично полными капсидами связана со средой HIC после элюирования буфером со средним содержанием соли.
41. Способ по п.1 или 33, в котором частицы rAAV содержат белок капсида AAV из серотипа капсида AAV, выбранного из группы, состоящей из AAV-1, AAV-2, AAV-3, AAV-4, AAV-5, AAV-6, AAV-7, AAV-8, AAV-9, AAV-10, AAV-11, AAV-12, AAV-13, AAV-14, AAV-15 и AAV-16.
42. Способ по п.41, в котором частицы rAAV содержат белок капсида AAV из серотипа капсида AAV, выбранного из группы, состоящей из AAV-1, AAV-4, AAV-5 и AAV-8.
RU2012101475/10A 2009-06-16 2010-06-16 Улучшенные способы очистки векторов на основе рекомбинантного aav RU2588387C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18760109P 2009-06-16 2009-06-16
US61/187,601 2009-06-16
PCT/US2010/038897 WO2010148143A1 (en) 2009-06-16 2010-06-16 Improved methods for purification of recombinant aav vectors

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016119739A Division RU2016119739A (ru) 2009-06-16 2010-06-16 Улучшенные способы очистки векторов на основе рекомбинантного aav

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012101475A true RU2012101475A (ru) 2013-07-27
RU2588387C2 RU2588387C2 (ru) 2016-06-27

Family

ID=

Also Published As

Publication number Publication date
PT3444335T (pt) 2021-07-12
MX2011013613A (es) 2012-01-19
EP2443233A1 (en) 2012-04-25
DK3444335T3 (da) 2021-07-26
DK3067417T3 (en) 2018-11-19
KR20120047213A (ko) 2012-05-11
EP3067417A3 (en) 2016-11-02
JP2012529917A (ja) 2012-11-29
RS62086B1 (sr) 2021-08-31
HRP20211120T1 (hr) 2021-10-15
CN102803478B (zh) 2016-04-27
EP3444335A1 (en) 2019-02-20
IL253205A0 (en) 2017-08-31
US20190010468A1 (en) 2019-01-10
JP2019083822A (ja) 2019-06-06
HRP20181743T1 (hr) 2019-02-22
RS57784B1 (sr) 2018-12-31
EP2443233A4 (en) 2013-05-29
JP6788056B2 (ja) 2020-11-18
TR201815937T4 (tr) 2018-11-21
CY1121442T1 (el) 2020-05-29
US10696952B2 (en) 2020-06-30
CY1117936T1 (el) 2017-05-17
IL216960A (en) 2017-07-31
JP2016195600A (ja) 2016-11-24
HK1165830A1 (zh) 2012-10-12
CA2764176A1 (en) 2010-12-23
CA3077531A1 (en) 2010-12-23
KR101812813B1 (ko) 2017-12-27
EP3919614A1 (en) 2021-12-08
EP3067417B1 (en) 2018-07-25
US11840710B2 (en) 2023-12-12
CA3077531C (en) 2022-09-20
PL2443233T3 (pl) 2017-08-31
CN105861454A (zh) 2016-08-17
IL216960A0 (en) 2012-02-29
CN105861454B (zh) 2020-03-03
IL253205B (en) 2018-07-31
HUE040636T2 (hu) 2019-03-28
BRPI1015176B1 (pt) 2019-10-29
SG176283A1 (en) 2012-01-30
BRPI1015176A2 (pt) 2017-09-26
HUE054940T2 (hu) 2021-10-28
ES2693194T3 (es) 2018-12-10
MX352986B (es) 2017-12-15
ES2881050T3 (es) 2021-11-26
WO2010148143A1 (en) 2010-12-23
JP6496684B2 (ja) 2019-04-03
PL3067417T3 (pl) 2019-02-28
US20210139860A1 (en) 2021-05-13
IL260215A (en) 2018-07-31
SI3067417T1 (sl) 2018-11-30
LT3067417T (lt) 2018-11-12
US10017746B2 (en) 2018-07-10
CN102803478A (zh) 2012-11-28
PT3067417T (pt) 2018-11-13
HUE028341T2 (en) 2016-12-28
JP5956331B2 (ja) 2016-07-27
US20150024467A1 (en) 2015-01-22
ES2588990T3 (es) 2016-11-08
SI3444335T1 (sl) 2021-08-31
EP3444335B1 (en) 2021-04-14
EP3067417A2 (en) 2016-09-14
SG10201403290SA (en) 2014-10-30
KR20180000341A (ko) 2018-01-02
EP2443233B1 (en) 2016-06-01
CA2764176C (en) 2020-06-02
LT3444335T (lt) 2021-07-26
CY1124323T1 (el) 2022-07-22
PT2443233T (pt) 2016-08-17
RU2016119739A (ru) 2018-11-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6496684B2 (ja) 組換えａａｖベクターの改良された精製方法
JP5268890B2 (ja) Ａａｖの規模適応性の製造方法
EP3256573B1 (en) Recombinant adeno-associated virus particle purification with multiple-step anion exchange chromatography
CA2329060A1 (en) Aav5 vector and uses thereof
CN111032176A (zh) Aav载体柱纯化方法
WO2013063379A1 (en) Cell line for production of adeno-associated virus
CA2379564A1 (en) Structural protein of adeno-associated virus with modified chromatographic properties, its production and use
CN115135339A (zh) 一种从完整的aav衣壳中分离或去除空的aav衣壳的方法
CN111808828A (zh) 腺相关病毒的分离纯化方法
WO2008124015A1 (en) Methods for purifying adeno-associated virus virions
US20230183656A1 (en) Methods and compositions for purifying adeno associated virus particles or adenoviruses
Youjin et al. The treatment of hemophilia A: from protein replacement to AAV-mediated gene therapy
JPWO2019173538A5 (ru)
RU2588387C2 (ru) Улучшенные способы очистки векторов на основе рекомбинантного aav
WO2024081551A1 (en) Method of purifying full recombinant aav particles