RU2009149633A - Композиции, применяемые для разложения целлюлозного материала - Google Patents

Композиции, применяемые для разложения целлюлозного материала Download PDF

Info

Publication number
RU2009149633A
RU2009149633A RU2009149633/10A RU2009149633A RU2009149633A RU 2009149633 A RU2009149633 A RU 2009149633A RU 2009149633/10 A RU2009149633/10 A RU 2009149633/10A RU 2009149633 A RU2009149633 A RU 2009149633A RU 2009149633 A RU2009149633 A RU 2009149633A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
seq
sequence
mature polypeptide
polypeptide
amino acid
Prior art date
Application number
RU2009149633/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2494146C2 (ru
Inventor
Сандра МЕРИНО (US)
Сандра МЕРИНО
Кейт МакФАРЛАНД (US)
Кейт МакФАРЛАНД
Джоэл ЧЕРРИ (US)
Джоэл ЧЕРРИ
Сара ТЕТЕР (US)
Сара ТЕТЕР
Original Assignee
Новозаймз, Инк. (Us)
Новозаймз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новозаймз, Инк. (Us), Новозаймз, Инк. filed Critical Новозаймз, Инк. (Us)
Priority claimed from PCT/US2008/065417 external-priority patent/WO2008151079A2/en
Publication of RU2009149633A publication Critical patent/RU2009149633A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2494146C2 publication Critical patent/RU2494146C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2445—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/16—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an alpha-1, 6-glucosidase, e.g. amylose, debranched amylopectin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
    • C12P7/08—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate
    • C12P7/10—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate substrate containing cellulosic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01021—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01091—Cellulose 1,4-beta-cellobiosidase (3.2.1.91)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

1. Клетки-хозяева нитчатых грибов, включающие: (a) первый полинуклеотид, кодирующий нативный или гетерологичный полипептид, обладающий усиливающей целлюлолитическое действие активностью; (b) второй полинуклеотид, кодирующий нативную или гетерологичную бета-глюкозидазу или ее слитый белок; и (с) один третий полинуклеотид или более (несколько) таких полинуклеотидов, кодирующих нативные или гетерологичные целлюлолитические ферменты, выбранные из группы, состоящей из целлобиогидролазы I (CEL7A) Trichoderma reesei, целлобиогидролазы II (CEL6A) Trichoderma reesei и эндоглюканазы I (CEL7B) Trichoderma reesei, и их ортологов или вариантов. ! 2. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.1, где полипептиды, обладающие усиливающей целлюлолитическое действие активностью, выбраны из группы, состоящей из: ! (а) полипептида, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащего [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], где X представляет собой любую аминокислоту, X(4,5) представляет собой любую аминокислоту в 4 или 5 смежных положениях и X(4) представляет собой любую аминокислоту в 4 смежных положениях; ! (b) полипептида, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащего [ILMV]-P-х(4,5)-G-х-Y-[ILMV]-х-R-х-[EQ]-х(3)-A-[HNQ], где x означает любую аминокислоту, x(4,5) означает любую аминокислоту в 4 или 5 смежных положениях и x(3) означает любую аминокислоту в 3 смежных положениях; ! где указанный полипептид, обладающий усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащий [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], необязательно дополнительно включает: ! H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV], ! [EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV] или ! H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV] и [EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV], ! где

Claims (29)

1. Клетки-хозяева нитчатых грибов, включающие: (a) первый полинуклеотид, кодирующий нативный или гетерологичный полипептид, обладающий усиливающей целлюлолитическое действие активностью; (b) второй полинуклеотид, кодирующий нативную или гетерологичную бета-глюкозидазу или ее слитый белок; и (с) один третий полинуклеотид или более (несколько) таких полинуклеотидов, кодирующих нативные или гетерологичные целлюлолитические ферменты, выбранные из группы, состоящей из целлобиогидролазы I (CEL7A) Trichoderma reesei, целлобиогидролазы II (CEL6A) Trichoderma reesei и эндоглюканазы I (CEL7B) Trichoderma reesei, и их ортологов или вариантов.
2. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.1, где полипептиды, обладающие усиливающей целлюлолитическое действие активностью, выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащего [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], где X представляет собой любую аминокислоту, X(4,5) представляет собой любую аминокислоту в 4 или 5 смежных положениях и X(4) представляет собой любую аминокислоту в 4 смежных положениях;
(b) полипептида, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащего [ILMV]-P-х(4,5)-G-х-Y-[ILMV]-х-R-х-[EQ]-х(3)-A-[HNQ], где x означает любую аминокислоту, x(4,5) означает любую аминокислоту в 4 или 5 смежных положениях и x(3) означает любую аминокислоту в 3 смежных положениях;
где указанный полипептид, обладающий усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащий [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], необязательно дополнительно включает:
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV],
[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV] или
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV] и [EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV],
где X представляет собой любую аминокислоту, X(1,2) представляет собой любую аминокислоту в 1 положении или 2 смежных положениях, X(3) представляет собой любую аминокислоту в 3 смежных положениях и X(2) представляет собой любую аминокислоту в 2 смежных положениях;
(с) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8 или SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 или SEQ ID NO:14;
(d) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:13, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:11, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, содержащей последовательность SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9 или SEQ ID NO:13, кодирующую зрелый полипептид, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
(е) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:13, кодирующей зрелый полипептид;
(f) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8 или SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 или SEQ ID NO:14; и
(g) полипептида, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащего зрелый полипептид или состоящего из зрелого полипептида SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8 или SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 или SEQ ID NO:14; или его фрагмента, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью.
3. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.1, где указанный бета-глюкозидазный слитый белок содержит: (а) первую аминокислотную последовательность, содержащую сигнальный пептид; (b) вторую аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере каталитический домен эндоглюканазы; и (с) третью аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере каталитический домен бета-глюкозидазы, где С-конец первой аминокислотной последовательности присоединен с сохранением рамки считывания к N-концу второй аминокислотной последовательности, а С-конец второй аминокислотной последовательности присоединен с сохранением рамки считывания к N-концу третьей аминокислотной последовательности.
4. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.3, где указанный бета-глюкозидазный слитый белок содержит или состоит из SEQ ID NO:103 или SEQ ID NO:105.
5. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.1, где указанная гетерологичная бета-глюкозидаза кодируется полинуклеотидом, происходящим от гена бета-глюкозидазы Aspergillus fumigatus и/или гена бета-глюкозидазы Penicillium brasilianum.
6. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.1, где указанная целлобиогидролаза I (CEL7A) Trichoderma reesei содержит зрелый полипептид SEQ ID NO:52 или состоит из этого полипептида; указанная целлобиогидролаза II (CEL6A) Trichoderma reesei содержит зрелый полипептид SEQ ID NO:54 или состоит из этого полипептида; и указанная эндоглюканаза I (CEL7B) Trichoderma reesei содержит зрелый полипептид SEQ ID NO:56 или состоит из этого полипептида.
7. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.1, где указанные ортологи или варианты целлобиогидролазы I (CEL7A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:52;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:51, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:51, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:51, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:51, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:52; и
где указанные ортологи или варианты целлобиогидролазы II (CEL6A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:54;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:53, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:53, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:53, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:53, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:54; и
где указанные ортологи или варианты эндоглюканазы I (CEL7B) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:56;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:55, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:55, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:55, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:55, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:56.
8. Клетки-хозяева нитчатых грибов по любому из п.1, которые дополнительно содержат один четвертый полинуклеотид или более (несколько) таких полинуклеотидов, кодирующих целлюлолитические ферменты, выбранные из группы, состоящей из эндоглюканазы II (CEL5A) Trichoderma reesei, эндоглюканазы III (CEL12A) Trichoderma reesei и эндоглюканазы V (CEL45A) Trichoderma reesei, и их ортологов или вариантов.
9. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.8, где указанная эндоглюканаза II (CEL5A) Trichoderma reesei содержит зрелый полипептид SEQ ID NO:58 или состоит из указанного полипептида; указанная эндоглюканаза III (CEL12A) Trichoderma reesei представляет собой зрелый полипептид, включающий SEQ ID NO:60 или состоящий из SEQ ID NO:60; и эндоглюканаза V (CEL45A) Trichoderma reesei представляет собой зрелый полипептид, включающий SEQ ID NO:61 или состоящий из SEQ ID NO:61.
10. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.8, где указанные ортологи или варианты эндоглюканазы II (CEL5A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:58;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:57, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:57, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:57, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:57, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:58;
где указанные ортологи или варианты эндоглюканазы III (CEL12A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:60;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:59, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:59, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:59, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:59, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:60; и
где указанные ортологи или варианты эндоглюканазы V (CEL45A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:62;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:61, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:61, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:61, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:61, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:62.
11. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.1, которые продуцируют композицию целлюлолитического белка, содержащую полипептид, обладающий усиливающей целлюлолитическое действие активностью зрелого полипептида SEQ ID NO:8; бета-глюкозидазный слитый белок SEQ ID NO:106; целлобиогидролазу I (CEL7A) Trichoderma reesei зрелого полипептида SEQ ID NO:52, целлобиогидролазу II (CEL6A) Trichoderma reesei зрелого полипептида SEQ ID NO:54 и эндоглюканазу I (CEL7B) Trichoderma reesei зрелого полипептида SEQ ID NO:56.
12. Клетки-хозяева нитчатых грибов по п.10, которые дополнительно продуцируют один или более (несколько) ферментов, выбранных из группы, состоящей из эндоглюканазы II (CEL5A) Trichoderma reesei SEQ ID NO:58, эндоглюканазы V (CEL45A) Trichoderma reesei SEQ ID NO:62 и эндоглюканазы III (CEL12A) Trichoderma reesei SEQ ID NO:60.
13. Клетки-хозяева нитчатых грибов по любому из пп.1-12, которые дополнительно продуцируют целлобиогидролазу Thielavia terrestris зрелого полипептида SEQ ID NO:64.
14. Способ получения композиции целлюлолитического белка, включающий: (а) культивирование клеток-хозяев по любому из пп.1-13 в условиях, способствующих получению указанной композиции; и (b) выделение указанной композиции.
15. Композиция целлюлолитического белка, содержащая: (a) полипептид, обладающий усиливающей целлюлолитическое действие активностью; (b) бета-глюкозидазу или ее слитый белок; и (с) один или более (несколько) целлюлолитических ферментов, выбранных из группы, состоящей из целлобиогидролазы I (CEL7A) Trichoderma reesei, целлобиогидролазы II (CEL6A) Trichoderma reesei и эндоглюканазы I (CEL7B) Trichoderma reesei, и их ортологов или вариантов.
16. Композиция целлюлолитического белка по п.15, где полипептид, обладающий усиливающей целлюлолитическое действие активностью, выбран из группы, состоящей из:
(а) полипептида, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащего [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], где X представляет собой любую аминокислоту, X(4,5) представляет собой любую аминокислоту в 4 или 5 смежных положениях и X(4) представляет собой любую аминокислоту в 4 смежных положениях;
(b) полипептида, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащего: [ILMV]-P-х(4,5)-G-х-Y-[ILMV]-х-R-х-[EQ]-х(3)-A-[HNQ], где x означает любую аминокислоту, x(4,5) означает любую аминокислоту в 4 или 5 смежных положениях и x(3) означает любую аминокислоту в 3 смежных положениях;
где указанный полипептид, обладающий усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащий [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], дополнительно включает:
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV],
[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV] или
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV] и [EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV],
где X представляет собой любую аминокислоту, X(1,2) представляет собой любую аминокислоту в 1 положении или 2 смежных положениях, X(3) представляет собой любую аминокислоту в 3 смежных положениях и X(2) представляет собой любую аминокислоту в 2 смежных положениях;
(с) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8 или SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 или SEQ ID NO:14;
(d) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:13, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:11, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, содержащей последовательность SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9 или SEQ ID NO:13, кодирующую зрелый полипептид, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
(е) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:13, кодирующей зрелый полипептид;
(f) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8 или SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 или SEQ ID NO:14; и
(g) полипептида, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью и содержащего зрелый полипептид или состоящего из зрелого полипептида SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8 или SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 или SEQ ID NO:14; или его фрагмента, обладающего усиливающей целлюлолитическое действие активностью.
17. Композиция целлюлолитического белка по п.15, где указанный бета-глюкозидазный слитый белок содержит: (а) первую аминокислотную последовательность, содержащую сигнальный пептид; (b) вторую аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере каталитический домен эндоглюканазы; и (с) третью аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере каталитический домен бета-глюкозидазы, где С-конец первой аминокислотной последовательности присоединен, с сохранением рамки считывания, к N-концу второй аминокислотной последовательности, а С-конец второй аминокислотной последовательности присоединен, с сохранением рамки считывания, к N-концу третьей аминокислотной последовательности.
18. Композиция целлюлолитического белка по п.17, где указанный бета-глюкозидазный слитый белок содержит или состоит из SEQ ID NO:103 или SEQ ID NO:105.
19. Композиция целлюлолитического белка по п.15, где указанный гетерологичный бета-глюкозидазный белок происходит от Aspergillus fumigatus и/или Penicillium brasilianum.
20. Композиция целлюлолитического белка по п.15, где указанная целлобиогидролаза I (CEL7A) Trichoderma reesei содержит зрелый полипептид SEQ ID NO:52 или состоит из этого полипептида; указанная целлобиогидролаза II (CEL6A) Trichoderma reesei содержит зрелый полипептид SEQ ID NO:54 или состоит из этого полипептида; и указанная эндоглюканаза I (CEL7B) Trichoderma reesei содержит зрелый полипептид SEQ ID NO:56 или состоит из этого полипептида.
21. Композиция целлюлолитического белка по п.15, где указанные ортологи или варианты целлобиогидролазы I (CEL7A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:52;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:51, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:51, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:51, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:51, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:52; и
где указанные ортологи или варианты целлобиогидролазы II (CEL6A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:54;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:53, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:53, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:53, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:53, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:54; и
где указанные ортологи или варианты эндоглюканазы I (CEL7B) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:56;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:55, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:55, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:55, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:55, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:56.
22. Композиция целлюлолитического белка по любому из пп.15-21, которая дополнительно содержит один четвертый полинуклеотид или более (несколько) таких полинуклеотидов, кодирующих целлюлолитические ферменты, выбранные из группы, состоящей из эндоглюканазы II (CEL5A) Trichoderma reesei, эндоглюканазы III (CEL12A) Trichoderma reesei и эндоглюканазы V (CEL45A) Trichoderma reesei, и их ортологов или вариантов.
23. Композиция целлюлолитического белка по п.22, где указанная эндоглюканаза II (CEL5A) Trichoderma reesei содержит зрелый полипептид SEQ ID NO:58 или состоит из указанного полипептида; указанная эндоглюканаза III (CEL12A) Trichoderma reesei представляет собой зрелый полипептид, включающий SEQ ID NO:60 или состоящий из SEQ ID NO:60; и эндоглюканаза V (CEL45A) Trichoderma reesei представляет собой зрелый полипептид, включающий SEQ ID NO:61 или состоящий из SEQ ID NO:61.
24. Композиция целлюлолитического белка по п.22, где указанные ортологи или варианты эндоглюканазы II (CEL5A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:58;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:57, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:57, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:57, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:57, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:58; и
где указанные ортологи или варианты эндоглюканазы III (CEL12A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:60;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:59, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:59, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:59, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:59, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:60; и
где указанные ортологи или варианты эндоглюканазы V (CEL45A) Trichoderma reesei выбраны из группы, состоящей из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO:62;
(b) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, который гибридизуется, предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренной жесткости, более предпочтительно, по меньшей мере в условиях умеренно-высокой жесткости и наиболее предпочтительно, по меньшей мере в условиях высокой жесткости (i) с последовательностью SEQ ID NO:61, кодирующей зрелый полипептид, (ii) с последовательностью кДНК, содержащейся в последовательности SEQ ID NO:61, кодирующей зрелый полипептид, или с последовательностью геномной ДНК, включающей указанную последовательность SEQ ID NO:61, или (iii) с полноразмерной комплементарной цепью последовательности (i) или (ii);
с) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, которая, предпочтительно, по меньшей мере на 60%, более предпочтительно, по меньшей мере на 65%, более предпочтительно, по меньшей мере на 70%, более предпочтительно, по меньшей мере на 75%, более предпочтительно, по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно, по меньшей мере на 85%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 90% и даже наиболее предпочтительно, по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO:61, кодирующей зрелый полипептид; и
(d) варианта, содержащего замену, делецию и/или инсерцию одной или более (нескольких) аминокислот зрелого полипептида SEQ ID NO:62.
25. Композиция целлюлолитического белка по п.15, которая содержит полипептид, обладающий усиливающей целлюлолитическое действие активностью зрелого полипептида SEQ ID NO:8; бета-глюкозидазный слитый белок SEQ ID NO:106; целлобиогидролазу I (CEL7A) Trichoderma reesei зрелого полипептида SEQ ID NO:52, целлобиогидролазу II (CEL6A) Trichoderma reesei зрелого полипептида SEQ ID NO:54 и эндоглюканазу I (CEL7B) Trichoderma reesei зрелого полипептида SEQ ID NO:56.
26. Композиция целлюлолитического белка по п.25, которая дополнительно содержит один или более (несколько) ферментов, выбранных из группы, состоящей из эндоглюканазы II (CEL5A) Trichoderma reesei SEQ ID NO:58, эндоглюканазы V (CEL45A) Trichoderma reesei SEQ ID NO:62 и эндоглюканазы III (CEL12A) Trichoderma reesei SEQ ID NO:60.
27. Композиция целлюлолитического белка по п.15, которая дополнительно содержит целлобиогидролазу Thielavia terrestris зрелого полипептида SEQ ID NO:64.
28. Способ разложения или преобразования материала, содержащего целлюлозу, включающий обработку материала, содержащего целлюлозу, эффективным количеством композиции целлюлолитического белка по любому из пп.15-27.
29. Способ получения продукта ферментации, включающий: (a) осахаривание материала, содержащего целлюлозу, указанной композицией целлюлолитического белка по любому из пп.15-27; (b) ферментацию содержащего целлюлозу осахаренного материала стадии (a) одним или более (несколькими) сбраживающими микроорганизмами с получением продукта ферментации; и (c) выделение продукта ферментации, полученного в результате реакции ферментации.
RU2009149633/10A 2007-05-31 2008-05-30 КЛЕТКА-ХОЗЯИН Trichoderma reesei ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКОЙ БЕЛКОВОЙ КОМПОЗИЦИИ, ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКАЯ БЕЛКОВАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБЫ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ RU2494146C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US94125107P 2007-05-31 2007-05-31
US60/941,251 2007-05-31
PCT/US2008/065417 WO2008151079A2 (en) 2007-05-31 2008-05-30 Compositions for degrading cellulosic material

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2009149633A true RU2009149633A (ru) 2011-07-10
RU2494146C2 RU2494146C2 (ru) 2013-09-27

Family

ID=40088716

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2009149633/10A RU2494146C2 (ru) 2007-05-31 2008-05-30 КЛЕТКА-ХОЗЯИН Trichoderma reesei ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКОЙ БЕЛКОВОЙ КОМПОЗИЦИИ, ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКАЯ БЕЛКОВАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБЫ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Country Status (8)

Country Link
US (2) US9969993B2 (ru)
JP (1) JP2010528624A (ru)
KR (1) KR20100029088A (ru)
CN (1) CN101970651B (ru)
BR (1) BRPI0812267A2 (ru)
MX (1) MX2009012844A (ru)
NZ (1) NZ581257A (ru)
RU (1) RU2494146C2 (ru)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9969993B2 (en) * 2007-05-31 2018-05-15 Novozymes, Inc. Filamentous fungal host cells and methods of recombinantly producing proteins
US20090246844A1 (en) * 2007-10-26 2009-10-01 Arbor Fuel Inc. Methods for the production of ethanol
US8338121B2 (en) * 2008-12-19 2012-12-25 Novozymes, Inc. Methods for determining cellulolytic enhancing activity of a polypeptide
JP5618478B2 (ja) * 2008-12-25 2014-11-05 Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社 新規セルラーゼ遺伝子
WO2010096488A1 (en) * 2009-02-17 2010-08-26 The Regents Of The University Of California Method of reducing acetylation in plants to improve biofuel production
US20100233775A1 (en) * 2009-03-13 2010-09-16 Tech V, LLC System for the production of methane and other useful products and method of use
US20100248344A1 (en) * 2009-03-27 2010-09-30 Tech V, LLC Methanogenic reactor
WO2010110773A1 (en) * 2009-03-27 2010-09-30 Tech V. Llc Methanogenic reactor
WO2010129287A2 (en) 2009-04-27 2010-11-11 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Hemicellulose-degrading enzymes
EP2478096B1 (en) 2009-09-17 2017-05-24 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
CN102791853B (zh) 2009-09-23 2015-08-12 丹尼斯科美国公司 新型糖基水解酶及其用途
BR112012006982B1 (pt) 2009-09-29 2021-12-21 Novozymes, Inc. Célula hospedeira microbiana transgênica, métodos para produzir um polipeptídeo, para produzir um mutante de uma célula precursora, para inibir a expressão de um polipeptídeo, para produzir uma proteína, para degradar ou converter um material celulósico, para produzir um produto de fermentação, para fermentar um material celulósico, construções de ácido nucleico, vetor de expressão, polipeptídeo isolado tendo atividade intensificadora celulolítica, polinucleotídeo isolado que codifica o mesmo, e, composição detergente
CN102918200A (zh) 2009-12-04 2013-02-06 佐治亚技术研究公司 用于酶促水解的改良的处理生物质的方法
KR20120106774A (ko) 2009-12-23 2012-09-26 다니스코 유에스 인크. 동시 당화 발효 반응의 효율을 향상시키는 방법
US20120058534A1 (en) * 2010-03-09 2012-03-08 Stover & Associates, Inc. Optimized biogas (biomethane) production process
US10053679B2 (en) 2010-03-31 2018-08-21 Meiji Seika Pharma Co., Ltd. Cellulase gene
CN107435058A (zh) * 2010-08-06 2017-12-05 诺维信公司 降解或水解多糖的方法
WO2012042544A1 (en) * 2010-09-29 2012-04-05 Beta Renewables S.P.A. Pre-treated biomass having enhanced enzyme accessibility
EP2686434B1 (en) 2011-03-17 2021-07-14 Danisco US Inc. Method for reducing viscosity in saccharification process
MX2013010510A (es) * 2011-03-17 2013-10-07 Danisco Inc Enzimas glocosil hidrolasa y usos de estas para la hidrolisis de biomasa.
CN109371002A (zh) * 2011-03-17 2019-02-22 丹尼斯科美国公司 纤维素酶组合物和使用相同组合物用于改善木质纤维素生物质转化成可发酵糖的方法
AU2012298799B2 (en) * 2011-08-24 2018-02-01 Novozymes, Inc. Methods for producing multiple recombinant polypeptides in a filamentous fungal host cell
CN103930438A (zh) * 2011-09-30 2014-07-16 诺维信股份有限公司 具有β-葡糖苷酶活性的嵌合多肽和对其进行编码的多核苷酸
US9611462B2 (en) * 2011-12-20 2017-04-04 Codexis, Inc. Endoglucanase 1B (EG1B) variants
BR112015013647A2 (pt) 2012-12-12 2017-11-14 Danisco Us Inc variante isolada de uma enzima celobio-hidrolase (cbh) parental, polinucleotídeo isolado, vetor, célula hospedeira, composição detergente, aditivo alimentar, método para hidrolisar um substrato celulósico, sobrenadante de cultura celular, métodos de produção de um polipeptídeo cbh variante e sobrenadante de cultura celular
CN106190874B (zh) * 2015-05-06 2020-06-26 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种强化丝状真菌蛋白质生产的方法
CN107988127B (zh) * 2017-11-02 2021-09-03 南京农业大学 里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合在调制优质苜蓿青贮饲料中的应用
EP3488854A1 (en) * 2017-11-22 2019-05-29 Technische Universität München Method for preparing xyloglucan-oligosaccharides
CN108048430B (zh) * 2018-01-08 2021-03-26 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 内切葡聚糖酶NfEG12A突变体及其编码基因和应用
AU2019200694B2 (en) * 2018-02-09 2019-10-10 Department Of Biotechnology Additive composition useful for improved production of fermentable sugars from lignocellulosic biomass
RU2696074C1 (ru) * 2018-11-16 2019-07-30 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи Штамм мицелиального гриба trichoderma reesei - продуцент комплекса эндоглюканазы, ксиланазы и пектиназ для получения белковых добавок на основе зернового и зернобобового сырья для применения в кормопроизводстве
CN110819582B (zh) * 2019-11-28 2021-04-06 华派生物工程集团有限公司 大肠杆菌表达口蹄疫病毒样颗粒抗原的发酵培养基及培养方法
CN112062616A (zh) * 2020-09-29 2020-12-11 东北农业大学 一种促进农作物秸秆原位还田的腐熟剂及其应用
WO2023225459A2 (en) 2022-05-14 2023-11-23 Novozymes A/S Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5275944A (en) * 1989-09-26 1994-01-04 Midwest Research Institute Thermostable purified endoglucanas from acidothermus cellulolyticus ATCC 43068
EP0976838A1 (en) * 1998-05-06 2000-02-02 Rhone-Poulenc Nutrition Animale Enzymes mixture
US7375197B2 (en) * 2002-01-14 2008-05-20 Midwest Research Institute Cellobiohydrolase I gene and improved variants
WO2002000858A2 (en) * 2000-06-26 2002-01-03 University Of Florida Research Foundation, Inc. Methods and compositions for simultaneous saccharification and fermentation
EP2322607B1 (en) * 2002-08-16 2015-09-16 Danisco US Inc. Novel variant Hyprocrea jecorina CBH1 cellulases with increase thermal stability comprising substitution or deletion at position S113
WO2004099228A2 (en) * 2003-05-02 2004-11-18 Novozymes Inc. Variants of beta-glucosidases
WO2005030926A2 (en) 2003-08-25 2005-04-07 Novozymes Inc. Variants of glycoside hydrolases
DK1702059T3 (da) 2003-12-09 2013-03-04 Novozymes Inc Fremgangsmåder til eliminering og reduktion af ekspression af gener i filamentøse svampestammer
EP2305702B1 (en) * 2004-01-30 2014-03-19 Novozymes Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
WO2005074656A2 (en) * 2004-02-06 2005-08-18 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
RU2441912C2 (ru) * 2005-09-30 2012-02-10 Новозаймз, Инк. Способы усиления деградации или превращения целлюлозного материала
US9969993B2 (en) * 2007-05-31 2018-05-15 Novozymes, Inc. Filamentous fungal host cells and methods of recombinantly producing proteins

Also Published As

Publication number Publication date
US20180237759A1 (en) 2018-08-23
KR20100029088A (ko) 2010-03-15
RU2494146C2 (ru) 2013-09-27
NZ581257A (en) 2012-03-30
US9969993B2 (en) 2018-05-15
BRPI0812267A2 (pt) 2014-10-14
CN101970651B (zh) 2013-10-09
JP2010528624A (ja) 2010-08-26
MX2009012844A (es) 2009-12-15
CN101970651A (zh) 2011-02-09
US20080299613A1 (en) 2008-12-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2009149633A (ru) Композиции, применяемые для разложения целлюлозного материала
Kuhad et al. Revisiting cellulase production and redefining current strategies based on major challenges
RU2008117116A (ru) Способы усиления деградации или превращения целлюлозного материала
US10689636B2 (en) Methods of increasing the cellulolytic enhancing activity of a polypeptide
Duan et al. Mining metagenomes for novel cellulase genes
Peng et al. Characterization of hemicellulase and cellulase from the extremely thermophilic bacterium Caldicellulosiruptor owensensis and their potential application for bioconversion of lignocellulosic biomass without pretreatment
Valencia et al. Mini-review: Brazilian fungi diversity for biomass degradation
JP2009509546A5 (ru)
Sheehan et al. Enzymes, energy, and the environment: a strategic perspective on the US Department of Energy's research and development activities for bioethanol
Dashtban et al. Fungal bioconversion of lignocellulosic residues; opportunities & perspectives
Edeh Bioethanol production: An overview
Chandel et al. Key drivers influencing the commercialization of ethanol-based biorefineries
Pabbathi et al. Role of metagenomics in prospecting novel endoglucanases, accentuating functional metagenomics approach in second-generation biofuel production: a review
EP2670853B1 (en) Processes for enzymatic refining of pretreated cellulosic material for saccharification
CN101100659A (zh) 一种β-葡萄糖苷酶及其编码基因与应用
Orencio-Trejo et al. Assessing the performance of bacterial cellulases: the use of Bacillus and Paenibacillus strains as enzyme sources for lignocellulose saccharification
Guo et al. A lytic polysaccharide monooxygenase from Myceliophthora thermophila C1 and its characterization in cleavage of glycosidic chain of cellulose
Bhatia et al. Biotechnological advances in lignocellulosic ethanol production
CN104140977B (zh) Cdt-2的新用途以及利用其促进微生物细胞转运木寡糖的方法及其应用
Watanabe Introduction: potential of cellulosic ethanol
AU2012205191B2 (en) Compositions for degrading cellulosic material
Pandey Prospects of metagenomic cellulases for converting lignocellulosic biomass into bio-ethanol
SUNG et al. Omics applications to biofuel research
Karri et al. Fiber degradation strategies of bacteria in rumen ecosystem
Thankappan et al. Functional Metagenomics for Bioprospecting Novel Glycosyl Hydrolases in 2G Biofuel Production from Lignocellulosics

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20170531