RU2009143124A - БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-4CL, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-Xeg, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pGS, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ ПОНИЖЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЛИГНИНА, ПОВЫШЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЦЕЛЛЮЛОЗЫ И ПОВЫШЕННУЮ СКОРОСТЬ РОСТА - Google Patents
БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-4CL, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-Xeg, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pGS, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ ПОНИЖЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЛИГНИНА, ПОВЫШЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЦЕЛЛЮЛОЗЫ И ПОВЫШЕННУЮ СКОРОСТЬ РОСТА Download PDFInfo
- Publication number
- RU2009143124A RU2009143124A RU2009143124/10A RU2009143124A RU2009143124A RU 2009143124 A RU2009143124 A RU 2009143124A RU 2009143124/10 A RU2009143124/10 A RU 2009143124/10A RU 2009143124 A RU2009143124 A RU 2009143124A RU 2009143124 A RU2009143124 A RU 2009143124A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gene
- fragment
- regulatory
- binary vector
- expression
- Prior art date
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
1. Бинарный вектор pBI-4CL размером 13864 и.о., Т-ДНК которого длиной 5118 п.о. содержит: а) экспрессионную кассету, способную ингибировать экспрессию гена 4-кумарат-КоА-лигазы Populus tomentosa, причем указанная кассета включает следующие конструктивные элементы: 5'-регуляторную область, содержащую промотор CaMV35S длиной 834 п.о., инвертированный фрагмент гена 4CL длиной 210 п.о., фрагмент гена GUS длиной 401 п.о., выполняющий функцию спейсера, прямой фрагмент гена 4CL длиной 210 п.о. и 3'-регуляторную область pAnos длиной 252 п.о., представляющую терминатор транскрипции нопалинсинтазы, причем 5'- и 3'-регуляторные области оперативно связаны со шпилечной конструкцией общей длиной 821 п.о. из инвертированных фрагментов гена 4CL Populus tomentosa и фрагмента гена GUS; б) экспрессионную кассету, придающую трансгенным тканям устойчивость к канамицину, содержащую следующие конструктивные элементы: 5'-регуляторную область, содержащую промотор NOS гена нопалинсинтазы длиной 306 п.о., ген неомицинфосфотрансферазы длиной 794 п.о. и 3'-регуляторную область pAnos длиной 252 п.о., представляющую терминатор транскрипции нопалинсинтазы, причем 5'- и 3'-регуляторные области оперативно связаны с геном неомицинфосфотрансферазы. ! 2. Вектор по п.1, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность фрагмента гена 4-кумарат-КоА-лигазы Populus tomentosa содержит фрагмент as4CL (SEQ ID NO: 1, фланкированый сайтами BamHI с 5'- и 3'-концов, и фрагмент sa4CL (SEQ ID NO: 2, фланкированный сайтами SnaBI с 5'-конца и SacI с 3'-конца. ! 3. Бинарный вектор pBI-Xeg размером 13687 п.о., Т-ДНК которого размером 5121 п.о. содержит следующие элементы: а) экспрессионную кассету, содержащую химерный ген ксилоглюканазы Penicillium canescens размером 824 п.о. с сигнальным пе
Claims (17)
1. Бинарный вектор pBI-4CL размером 13864 и.о., Т-ДНК которого длиной 5118 п.о. содержит: а) экспрессионную кассету, способную ингибировать экспрессию гена 4-кумарат-КоА-лигазы Populus tomentosa, причем указанная кассета включает следующие конструктивные элементы: 5'-регуляторную область, содержащую промотор CaMV35S длиной 834 п.о., инвертированный фрагмент гена 4CL длиной 210 п.о., фрагмент гена GUS длиной 401 п.о., выполняющий функцию спейсера, прямой фрагмент гена 4CL длиной 210 п.о. и 3'-регуляторную область pAnos длиной 252 п.о., представляющую терминатор транскрипции нопалинсинтазы, причем 5'- и 3'-регуляторные области оперативно связаны со шпилечной конструкцией общей длиной 821 п.о. из инвертированных фрагментов гена 4CL Populus tomentosa и фрагмента гена GUS; б) экспрессионную кассету, придающую трансгенным тканям устойчивость к канамицину, содержащую следующие конструктивные элементы: 5'-регуляторную область, содержащую промотор NOS гена нопалинсинтазы длиной 306 п.о., ген неомицинфосфотрансферазы длиной 794 п.о. и 3'-регуляторную область pAnos длиной 252 п.о., представляющую терминатор транскрипции нопалинсинтазы, причем 5'- и 3'-регуляторные области оперативно связаны с геном неомицинфосфотрансферазы.
2. Вектор по п.1, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность фрагмента гена 4-кумарат-КоА-лигазы Populus tomentosa содержит фрагмент as4CL (SEQ ID NO: 1, фланкированый сайтами BamHI с 5'- и 3'-концов, и фрагмент sa4CL (SEQ ID NO: 2, фланкированный сайтами SnaBI с 5'-конца и SacI с 3'-конца.
3. Бинарный вектор pBI-Xeg размером 13687 п.о., Т-ДНК которого размером 5121 п.о. содержит следующие элементы: а) экспрессионную кассету, содержащую химерный ген ксилоглюканазы Penicillium canescens размером 824 п.о. с сигнальным пептидом целлюлазы тополя белого, причем указанная кассета включает следующие конструктивные элементы: 5'-регуляторную область, содержащую промотор CaMV35S длиной 834 п.о., 3'-регуляторную область pAnos длиной 252 п.о., представляющую терминатор транскрипции нопалинсинтазы, причем 5'- и 3'-регуляторные области оперативно связаны с химерным геном ксилоглюканазы; б) экспрессионную кассету, придающую трансгенным тканям устойчивость к канамицину, содержащую следующие конструктивные элементы; 5'-регуляторную область, содержащую промотор NOS гена нопалинсинтазы длиной 306 п.о., ген неомицинфосфотрансферазы длиной 794 п.о. и 3'-регуляторную область pAnos длиной 252 п.о., представляющую терминатор транскрипции нопалинсинтазы, причем 5'- и 3'-регуляторные области оперативно связаны с геном неомицинфосфотрансферазы.
4. Вектор по п.3, отличающийся тем, что фрагмент гена SP-Xeg ксилоглюканазы Penicillium canescens содержит последовательность SEQ ID NO: 9.
5. Бинарный вектор pGS размером 14039 п.о., Т-ДНК которого содержит: а) конструкт экспрессии, способный направлять конститутивную экспрессию гена глутаминсинтетазы GS, причем указанный конструкт включает 5'-регуляторную область размером 834 п.о., содержащую промотор CaMV35S, последовательность гена GS длиной 1423 п.о. и 3'-регуляторную область pAnos длиной 306 п.о., представляющую терминатор транскрипции нопалинсинтазы, причем 5'- и 3'-регуляторные области оперативно связаны с кодирующей последовательностью гена GS; б) экспрессионную кассету, придающую трансгенным тканям устойчивость к канамипину, содержащую следующие конструктивные элементы: 5'-регуляторную область, содержащую промотор NOS гена нопалинсинтазы длиной 306 п.о., ген неомицинфосфотрансферазы длиной 794 п.о. и 3'-регуляторную область pAnos длиной 252 п.о., представляющую терминатор транскрипции нопалинсинтазы, причем 5'- и 3'-регуляторные области оперативно связаны с геном неомицинфосфотрансферазы.
6. Вектор по п.5, отличающийся тем, что фрагмент гена GS глутаминсинтетазы Penicillium canescens содержит последовательность SEQ ID NO: 16.
7. Способ получения трансгенных растений, содержащих пониженное количество лигнина и повышенное количество целлюлозы, включающий формирование конструктов экспрессии в форме бинарных векторов, выращивание штаммов агробактерий, подготовку эксплантов, инокуляцию эксплантов в суспензии агробактерий с последующей кокультивацией эксплантов и микроорганизмов, регенерацию адвентивных побегов на селективной среде отличающийся тем, что растение одновременно трансформируют смесью конструктов экспрессии, включающих бинарные векторы, входящие в группу, состоящую из: бинарного вектора pBI-4CL, бинарного вектора pBI-Xeg, бинарного вектора pGS, и затем выращивают трансформированное растение в условиях, приводящих к экспрессии выбранных ДНК-последовательностей, при этом на стадии трансформации используют смесь трех конструктов экспрессии в пропорции 1:1:1, на стадии регенерации в среду добавляют канамицин в концентрации 25-100 мг/л, осуществляют молекулярно-биологический анализ с помощью ПЦР и отбирают линии, содержащие совместно интегрированные генетические конструкции ксилоглюканазы, глутаминсинтетазы, 4-кумарат-КоА-лигазы, проводят анализ химического состава растений и наличие нежелательных отклонений, при этом выделяют линии с пониженным содержанием лигнинов, повышенной долей целлюлозы, без сомаклональных отклонений.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что трансгенные растения выбирают из растений осины и березы.
9. Способ по п.7, отличающийся тем, что березу выбирают из группы, состоящей из видов, входящих в группу Betula pendula, Betula platyphylla, Betula papyrifera.
10. Способ по п.7, отличающийся тем, что осину выбирают из группы, состоящей из Populus tremula, Populus tomentosa, Populus tremuloides.
11. Способ по п.7, отличающийся тем, что маточные растения осины культивируют на среде WPM с добавлением 0,5 мг/л гибберреловой кислоты, а растения березы культивируют на безгормональной среде WPM.
12. Способ по п.7, отличающийся тем, что для инокуляции в качестве эксплантов используют междоузлия осины и листовые диски березы, при этом сразу перед инокуляцией наносятся повреждения.
13. Способ по п.7, отличающийся тем, что кокультивацию эксплантов с агробактериями проводят в течение 3-5 дней в темноте.
14. Способ по п.7, отличающийся тем, что экспланты осины сразу после кокультивации переносят на свет, а экспланты березы переносят на свет после 7-10 дней после инокуляции.
15. Способ по п.7, отличающийся тем, что регенерацию адвентивных побегов из инокулированных эксплантов проводят на селективной среде, при этом дополнительно используют регуляторы роста: А) зеатин 2 мг/л и ИМК 0,3 мг/л для осины, б) зеатин 5 мг/л, БАП 5 мг/л, ИМК 0,5 мг/л для березы повислой.
16. Способ по п.7, отличающийся тем, что на стадии мультипликации используют среды, выбираемые из: а) WPM с 0,5 мг/л БАП для осины, б) WPM с 0,6 мг/л БАП и 0,1 мг/л ИМК для березы.
17. Способ по п.7, отличающийся тем, что после 3-5 пассажей мультипликации из каждой каллусной группы выделяют по три микропобега и проводят их мультипликацию еще в течение 2-3 пассажей.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009143124/10A RU2009143124A (ru) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-4CL, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-Xeg, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pGS, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ ПОНИЖЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЛИГНИНА, ПОВЫШЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЦЕЛЛЮЛОЗЫ И ПОВЫШЕННУЮ СКОРОСТЬ РОСТА |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009143124/10A RU2009143124A (ru) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-4CL, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-Xeg, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pGS, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ ПОНИЖЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЛИГНИНА, ПОВЫШЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЦЕЛЛЮЛОЗЫ И ПОВЫШЕННУЮ СКОРОСТЬ РОСТА |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009143124A true RU2009143124A (ru) | 2011-05-27 |
Family
ID=44734529
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009143124/10A RU2009143124A (ru) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-4CL, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-Xeg, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pGS, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ ПОНИЖЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЛИГНИНА, ПОВЫШЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЦЕЛЛЮЛОЗЫ И ПОВЫШЕННУЮ СКОРОСТЬ РОСТА |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2009143124A (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106171996A (zh) * | 2016-07-21 | 2016-12-07 | 辽宁大学 | 一种野生白桦的快速繁殖方法 |
CN111235178A (zh) * | 2020-02-10 | 2020-06-05 | 黑龙江省林业科学研究所 | BpVND1基因的应用 |
-
2009
- 2009-11-24 RU RU2009143124/10A patent/RU2009143124A/ru not_active Application Discontinuation
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106171996A (zh) * | 2016-07-21 | 2016-12-07 | 辽宁大学 | 一种野生白桦的快速繁殖方法 |
CN106171996B (zh) * | 2016-07-21 | 2018-02-09 | 辽宁大学 | 一种野生白桦的快速繁殖方法 |
CN111235178A (zh) * | 2020-02-10 | 2020-06-05 | 黑龙江省林业科学研究所 | BpVND1基因的应用 |
CN111235178B (zh) * | 2020-02-10 | 2021-10-01 | 黑龙江省林业科学研究所 | BpVND1基因的应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Mauro et al. | High efficiency regeneration of grapevine plants transformed with the GFLV coat protein gene | |
US10072269B2 (en) | Synthetic promoter and methods of use thereof | |
Torregrosa et al. | Influence of Agrobacterium strain, culture medium, and cultivar on the transformation efficiency of Vitis vinifera L | |
US20150033414A1 (en) | Flowering modification in jatropha and other plants | |
WO2020052199A1 (zh) | 一种棉花长纤维高表达基因GhLFHE2及其编码的蛋白质和应用 | |
CN111118005A (zh) | 一种与稻瘟病抗性相关的miRNA、相应的前体与应用 | |
CN110938617B (zh) | 一种岷江百合LrPAL-1基因及其应用 | |
Akashi et al. | Agrobacterium-mediated transformation system for the drought and excess light stress-tolerant wild watermelon (Citrullus lanatus) | |
CN111500579A (zh) | 棉花miR164a和NAC100L及其在调控植物黄萎病抗性中的应用 | |
CN108976293B (zh) | 荔枝花色素苷生物合成负调控基因及其应用 | |
Safitri et al. | Efficiency of transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens using vacuum infiltration in rice (Oryza sativa L.) | |
RU2009143124A (ru) | БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-4CL, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pBI-Xeg, БИНАРНЫЙ ВЕКТОР pGS, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ ПОНИЖЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЛИГНИНА, ПОВЫШЕННОЕ КОЛИЧЕСТВО ЦЕЛЛЮЛОЗЫ И ПОВЫШЕННУЮ СКОРОСТЬ РОСТА | |
CN105018520B (zh) | 调控4对棉花DELLA蛋白基因GhGAIs表达的植物表达载体及其用途 | |
KR20090102825A (ko) | 식물에 있어서 이종유래 단백질의 발현 향상을 위하여 5'(5'-utr) 내에 최적화된 리더 작용기를 가진 인공 dna 서열 | |
KR20160065952A (ko) | 제아 메이스 메탈로티오네인-유사 조절 요소 및 그의 용도 | |
Hai et al. | Characterization of the Populus PtrCesA4 promoter in transgenic Populus alba× P. glandulosa | |
Lee et al. | Agrobacterium-mediated transformation via somatic embryogenesis system in Korean fir (Abies koreana Wil.), a Korean native conifer | |
Liu et al. | Establishment of an efficient plant regeneration culture protocol and achievement of successful genetic transformation in Jatropha curcas L. | |
CN110106168B (zh) | 基于转录因子间的互作关系构建双激素响应启动子的方法 | |
CN108070595B (zh) | 水稻花药特异性表达的启动子POsFT1及其应用 | |
Nishiguchi et al. | An improved transformation system for Lombardy poplar (Populus nigra var. italica) | |
JP4595631B2 (ja) | 選抜マーカー遺伝子の影響が排除された遺伝子導入細胞、組織又は植物の作成方法 | |
US10100321B2 (en) | Methods for increasing cotton fiber length | |
CN117721112B (zh) | 红树植物白骨壤的内源启动子amdrep8及其用途 | |
CN107446926B (zh) | 盐生草HgNHX基因启动子序列及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20120903 |