RU2006146922A - Обнаружение туберкулеза и заражения туберкулезными микробактериями с использованием нвна - Google Patents

Claims (42)

1. Способ обнаружения и различения in vitro млекопитающего, которое имеет скрытую форму туберкулеза, и млекопитающего с активной формой туберкулеза, при этом указанный способ включает

а) получение биологического образца от указанного млекопитающего;

б) измерение количества антител (IgG), направленных против двух различных форм белка НВНА, которые присутствуют в указанном биологическом образце в условиях, при которых возможно взаимодействие антитела и НВНА;

в) сравнение титров антител, полученных для указанных двух различных форм белка НВНА,

при этом относительные количества антител, полученных для двух указанных различных форм у млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, отличаются от указанного относительного количества у млекопитающего, которое с активной формой туберкулеза.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанные две формы отличаются по степени их метилирования.

3. Способ по любому из п.1 или 2, отличающийся тем, что две указанные различные формы белка НВНА представляют собой нативную форму НВНА и рекомбинантную форму НВНА.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что биологический образец от млекопитающего с активной формой туберкулеза содержит соизмеримые количества антител, направленных против указанных двух форм НВНА.

5. Способ по п.3, отличающийся тем, что биологический образец от млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, содержит количество антител, направленных против нативной формы НВНА, которое больше, чем количество антител, направленных против рекомбинантной формы НВНА.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что две указанные различные формы белка НВНА представляют собой фрагмент rHBHAΔС и метилированный С-концевой фрагмент НВНА.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что биологический образец от млекопитающего с активной формой туберкулеза, содержит количество антител, направленных против фрагмента rHBHAΔС, которое больше, чем количество антител, направленных против метилированного С-концевого фрагмента НВНА.

8. Способ по п.6, отличающийся тем, что биологический образец от млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, содержит количество антител, направленных против метилированного С-концевого фрагмента НВНА, которое больше, чем количество антител, направленных против фрагмента rHBHAΔС.

9. Способ по любому из пп.1, 2 или 4-8, отличающийся тем, что биологический образец представляет собой сыворотку крови.

10. Набор для обнаружения и различения млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза и млекопитающего, с активной формой туберкулеза, указанный набор содержит:

две различные формы НВНА, выбранные из группы, включающей:

а) нативную НВНА и рекомбинантную НВНА, или

б) фрагмент rHBHAΔС и метилированный С-концевой фрагмент НВНА,

реагенты, требуемые для создания среды для осуществления иммунологической реакции между антителами, которые содержатся в биологическом образце от упомянутого млекопитающего и указанных различных форм НВНА и

реагенты, позволяющие обнаружить иммунологические комплексы, образованные в ходе указанной иммунологической реакции.

11. Набор по п.10, отличающийся тем, что дополнительно включает по меньшей мере один референтный образец ткани или биологический образец.

12. Способ обнаружения и различения in vitro млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, и млекопитающего, с активной формой туберкулеза, или выявления млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза среди здоровой популяции, указанный способ включает:

а) получение биологического образца от указанного млекопитающего;

б) приведение указанного биологического образца независимым образом в контакт с нативной формой НВНА и с ESAT-6 в условиях, при которых возможна секреция IFN-γ;

в) измерение уровней НВНА-специфической секреции IFN-γ и ESAT-6-специфической секреции IFN-γ; и

г) вычисление отношения между уровнем НВНА-специфической секреции IFN-γ и ESAT-6-специфической секреции IFN-γ,

при котором указанное отношение, полученное для млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, больше, чем указанное отношение, полученное для млекопитающего, которое имеет активную форму туберкулеза, или полученное для млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium tuberculesis.

13. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанное отношение величин секреции, полученное для образца от млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, или от млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium tuberculosis, больше, чем 1.

14. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанное отношение величин секреции, полученное для образца от млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, или от млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium, находится в интервале 100-400.

15. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанное отношение величин секреции, полученное для образца от млекопитающего, которое имеет активную форму туберкулеза, меньше, чем 1.

16. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанное отношение величин секреции, полученное для образца от млекопитающего, которое имеет активную форму туберкулеза меньше, чем 0.5.

17. Способ по любому из пп.12-16, отличающийся тем, что указанный биологический образец выбирают из группы, включающей: бронхиальное выделение, бронхо-альвеолярный лаваж (BAL), желудочный лаваж, мокроту, образец выпотов, в частности, плевральной, абдоминальной и суставной жидкости, цереброспинальной жидкости, спинно-мозговой жидкости, синовиальной жидкости, брюшинной жидкости, перикардиальной жидкости и другой жидкости тела, биопсию лимфатических узлов, трансбронхиальную биопсию, плевральную и печеночную биопсию, медуллярную и поясничную пункцию, пробу мочи или крови и гнойное выделение.

18. Способ по любому из пп.12-16, отличающийся тем, что стадия б) включает приведение нативной формы НВНА и ESAT-6 независимым образом в контакт с РВМС.

19. Способ по любому из пп.12-16, включающий перед стадией б) дополнительную стадию поддержания биологического образца в культуре.

20. Набор для обнаружения и различения млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза и млекопитающего, с активной формой туберкулеза, или для идентификации млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза среди здоровой популяции; указанный набор содержит:

нативные формы НВНА и ESAT-6;

реагенты для создания среды для осуществления независимым образом контакта клеток, присутствующих в биологическом образце от упомянутого млекопитающего с нативными формами НВНА и ESAT-6; и

реагенты для обнаружения секреции IFN-γ, следующей за контактом.

21. Набор по п.20, отличающийся тем, что дополнительно содержит по меньшей мере один референтный образец ткани или биологический образец.

22. Набор по любому из п.20 или 21, отличающийся тем, что дополнительно содержит среду для культивирования биологического образца.

23. Способ для обнаружения и различения in vitro млекопитающего, которое имеет активную форму туберкулеза, и млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium tuberculosis, или млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза; указанный способ включает:

а) получение биологического образца из очага локальной инфекции у указанного млекопитающего;

б) приведение указанного биологического образца в контакт с нативной или рекомбинантной формой НВНА в условиях, при которых достигается влияние на IFN-γ;

в) измерение влияния указанного контакта на НВНА-специфическую секрецию IFN-γ;

причем влияние на НВНА-специфическую секрецию IFN-γ больше у млекопитающего с активной формой туберкулеза, чем у млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium tuberculosis, или млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза.

24. Способ по п.23, отличающийся тем, что стадия в) включает измерение количества IFN-γ, секретированного, в результате контакта указанного биологического образца с нативной или рекомбинантной формой НВНА.

25. Способ по п.24, отличающийся тем, что количество секретированного НВНА-специфического IFN-γ больше у млекопитающего, с активной формой туберкулеза, по сравнению с указанными количеством, полученным для млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium tuberculosis или млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза.

26. Способ по п.25, отличающийся тем, что количество НВНА-специфического IFN-γ, секретированного биологическим образцом от млекопитающего, с активной формой туберкулеза, больше, чем 1000 пг/мл.

27. Способ по п.25, отличающийся тем, что количество НВНА-специфического IFN-γ, секретированного биологическим образцом от млекопитающего с активной формой туберкулеза, больше, чем 5000 пг/мл.

28. Способ по п.25, отличающийся тем, что количество НВНА-специфического IFN-γ, секретированного биологическим образцом от млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium tuberculosis или млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, меньше, чем 1000 пг/мл.

29. Способ по п.25, отличающийся тем, что количество НВНА-специфического IFN-γ, секретированного биологическим образцом от млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium tuberculosis, или млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, меньше, чем 100 пг/мл.

30. Способ по п.23, отличающийся тем, что стадия в) включает вычисление доли клеток в указанном биологическом образце, которые содержат внутрицитоплазматический IFN-γ, после приведения указанных клеток в контакт с НВНА совместно с лимфоцитами или их субпопуляцией.

31. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанная доля клеток у млекопитающего, с активной формой туберкулеза, больше, чем указанная доля, млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium tuberculosis, или млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза.

32. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанная доля клеток, биологического образца от млекопитающего, с активной формой туберкулеза, больше, чем 0,3%.

33. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанная доля клеток, биологического образца от млекопитающего, с активной формой туберкулеза, больше, чем 0,5%.

34. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанная доля клеток, биологического образца от млекопитающих, не инфицированных Mycobacterium tuberculosis, или млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, меньше, чем 0,3%.

35. Способ по любому из пп.23-34, включающий перед стадией б) дополнительную стадию поддержания указанного биологического образца в культуре.

36. Способ по любому из пп.23-34, отличающийся тем, что указанный биологический образец выбирают из группы, включающей: бронхиальное выделение, бронхо-альвеолярный лаваж (BAL), желудочный лаваж, мокроту, образец выпотов, в частности, плевральной, абдоминальной и суставной жидкости, цереброспинальной жидкости, спинно-мозговой жидкости, синовиальной жидкости, брюшинной жидкости, перикардиальной жидкости и другой жидкости тела, биопсию лимфатических узлов, трансбронхиальную биопсию, плевральную и печеночную биопсию, медуллярную и поясничную пункцию, образец мочи или крови и гнойное выделение.

37. Способ по любому из пп.23-34, отличающийся тем, что клетки представляют собой CD3+ CD4+ Т-лимфоциты.

38. Набор для обнаружения различения млекопитающего, которое имеет активную форму туберкулеза, и млекопитающего, не инфицированного Mycobacterium tuberculosis, или млекопитающего, которое имеет латентную форму туберкулеза, указанный набор содержит:

нативную или рекомбинантную форму НВНА;

реагенты для создания подходящей среды для приведения клеток, присутствующих в указанном биологическом образце от упомянутого млекопитающего в контакт с НВНА;

реагенты для обнаружения IFN-γ после указанного контакта.

39. Набор по п.38, отличающийся тем, что дополнительно содержит по меньшей мере один референтный образец ткани или биологический образец.

40. Набор по любому из п.38 или 39, отличающийся тем, что дополнительно содержит среду для культивирования биологического образца.

41. Набор по любому из п.38 или 39, отличающийся тем, что реагенты для обнаружения позволяют количественно определять секрецию IFN-γ.

42. Набор по любому из п.38 или 39, отличающийся тем, что реагенты для обнаружения позволяют определять количество внутрицитоплазматического IFN-γ.