Claims (40)
1. Способ получения варианта фермента гликолипидацилтрансферазы, предусматривающий: (a) выбор исходного фермента, который представляет собой фермент липидацилтрансферазу, отличающегося тем, что фермент содержит аминокислотный мотив GDSX, где X представляет собой один или несколько из аминокислотных остатков L, A, V, I, F, Y, H, Q, T, N, M или S; (b) модификацию одной или нескольких аминокислот для получения варианта липидацилтрансферазы; (c) тестирование варианта липидацилтрансферазы на трансферазную активность и, необязательно, гидролитическую активность в отношении галактолипидного субстрата, и, необязательно, фосфолипидного субстрата и/или, необязательно, триглицеридного субстрата; (d) отбор варианта фермента с повышенной активностью в отношении галактолипидов по сравнению с исходным ферментом и, необязательно, (e) получение большого количества варианта фермента.1. A method of obtaining a variant of the glycolipid acyltransferase enzyme, comprising: (a) selecting a parent enzyme that is a lipid acyltransferase enzyme, characterized in that the enzyme contains the GDSX amino acid motif, where X represents one or more of the amino acid residues L, A, V, I , F, Y, H, Q, T, N, M, or S; (b) modifying one or more amino acids to produce a lipid acyltransferase variant; (c) testing a variant of lipid acyltransferase for transferase activity and, optionally, hydrolytic activity against a galactolipid substrate, and, optionally, a phospholipid substrate and / or, optionally, a triglyceride substrate; (d) selecting a variant of the enzyme with increased activity against galactolipids compared to the starting enzyme and, optionally, (e) obtaining a large number of variant of the enzyme.
2. Способ по п.1, где способ предусматривает тестирование варианта липидацилтрансферазы на:2. The method according to claim 1, where the method comprises testing a variant of lipid acyltransferase for:
(i) трансферазную активность в отношении галактолипидного субстрата и(i) transferase activity against galactolipid substrate and
(ii) трансферазную активность в отношении фосфолипидного субстрата, и(ii) transferase activity against a phospholipid substrate, and
отбор варианта фермента, который по сравнению с исходным ферментом обладает повышенным отношением трансферазной активности в отношении галактолипидов к трансферазной активности в отношении фосфолипидов.selection of an enzyme variant which, in comparison with the starting enzyme, has an increased ratio of transferase activity with respect to galactolipids to transferase activity with respect to phospholipids.
3. Способ по п.2, где отношение трансферазной активности в отношении галактолипидов к трансферазной активности в отношении фосфолипидов составляет по меньшей мере 3.3. The method according to claim 2, where the ratio of transferase activity against galactolipids to transferase activity against phospholipids is at least 3.
4. Способ по п.1, предусматривающий тестирование варианта липидацилтрансферазы на:4. The method according to claim 1, comprising testing a variant of lipid acyltransferase for:
(a) трансферазную активность в отношении галактолипидного субстрата и(a) transferase activity against a galactolipid substrate and
(b) гидролитическую активность в отношении галактолипидного субстрата; и(b) hydrolytic activity against a galactolipid substrate; and
отбор варианта фермента с повышенным отношением трансферазной активности для галактолипидов к ее гидролитической активности в отношении гликолипидов по сравнению с исходным ферментом.selection of an enzyme variant with an increased ratio of transferase activity for galactolipids to its hydrolytic activity with respect to glycolipids compared to the starting enzyme.
5. Способ по п.4, где повышенное отношение трансферазной активности в отношении галактолипидов к гидролитической активности в отношении галактолипидов составляет по меньшей мере 1,5.5. The method according to claim 4, where the increased ratio of transferase activity against galactolipids to hydrolytic activity against galactolipids is at least 1.5.
6. Способ по п.1, где один или несколько из следующих ниже аминокислотных остатков, идентифицированных посредством сравнения с SEQ ID NO:2 по сравнению с исходной последовательностью модифицирован в любом, одном или нескольких, аминокислотных остатках, определенных в наборе 2, или наборе 4, или наборе 6, или наборе 7.6. The method according to claim 1, where one or more of the following amino acid residues identified by comparison with SEQ ID NO: 2 compared to the original sequence is modified in any one or more amino acid residues defined in set 2, or set 4, or set 6, or set 7.
7. Способ по п.1, где исходный фермент содержит аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43 или SEQ ID NO:45, или аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична ей.7. The method according to claim 1, where the starting enzyme contains the amino acid sequence represented as SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 6 : 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28 , SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 43 or SEQ ID NO: 45, or an amino acid sequence that is at least 70% identical to it.
8. Способ по п.1, где исходный фермент представляет собой фермент, содержащий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:2 и/или SEQ ID NO:28.8. The method according to claim 1, where the starting enzyme is an enzyme containing the amino acid sequence represented as SEQ ID NO: 2 and / or SEQ ID NO: 28.
9. Способ по п.1, где X мотива GDSX предпочтительно представляет собой L.9. The method according to claim 1, where X of the GDSX motif is preferably L.
10. Способ по п.1, где способ дополнительно предусматривает одну или несколько из следующих стадий: картирование структурной гомологии или сравнение по гомологии последовательностей.10. The method according to claim 1, where the method further comprises one or more of the following stages: mapping of structural homology or comparison by sequence homology.
11. Способ по п.10, где картирование структурной гомологии предусматривает одну или несколько следующих стадий:11. The method according to claim 10, where the mapping of structural homology provides one or more of the following stages:
a) сравнение исходной последовательности со структурной моделью (1IVN.PDB), показанной на фиг.52;a) comparing the original sequence with the structural model (1IVN.PDB) shown in Fig;
b) выбор одного или нескольких аминокислотных остатков в пределах сферы 10 Е с центром в центральном углеродном атоме молекулы глицерина в активном центре (см. фиг.53); иb) the selection of one or more amino acid residues within a 10 E sphere centered on the central carbon atom of the glycerol molecule in the active center (see FIG. 53); and
c) модификацию одной или нескольких аминокислот, выбранных в соответствии со стадией (b) в указанной исходной последовательности.c) the modification of one or more amino acids selected in accordance with stage (b) in the specified source sequence.
12. Способ по п.10, где картирование структурной гомологии предусматривает одну или несколько следующих стадий:12. The method according to claim 10, where the mapping of structural homology provides one or more of the following stages:
a) сравнение исходной последовательности со структурной моделью (1IVN.PDB), показанной на фиг.52;a) comparing the original sequence with the structural model (1IVN.PDB) shown in Fig;
b) выбор одой или нескольких аминокислот в пределах сферы размером 10 Е с центром в центральном углеродном атоме молекулы глицерина в активном центре (см. фиг.53);b) selection of an ode or several amino acids within a sphere of size 10 E centered on the central carbon atom of a glycerol molecule in the active center (see FIG. 53);
c) определение того, являются ли один или несколько аминокислотных остатков, выбранных в соответствии со стадией (b), высоко консервативными (особенно являются ли они остатками активного центра, и/или частью мотива GDSX, и/или частью мотива GANDY); иc) determining whether one or more amino acid residues selected in accordance with step (b) are highly conserved (especially if they are active center residues and / or part of the GDSX motif and / or part of the GANDY motif); and
d) модификацию одной или нескольких аминокислот, выбранных в соответствии со стадией (b), за исключением консервативных областей, идентифицированных в соответствии со стадией (c) в указанной исходной последовательности.d) a modification of one or more amino acids selected in accordance with step (b), except for the conserved regions identified in accordance with step (c) in the indicated parent sequence.
13. Способ по п.10, где сравнение по гомологии последовательностей предусматривает одну или несколько следующих стадий:13. The method of claim 10, wherein the sequence homology comparison comprises one or more of the following steps:
i) выбор первой исходной липидацилтрансферазы;i) selection of a first parent lipid acyltransferase;
ii) идентификацию второй родственной липидацилтрансферазы с желаемой активностью;ii) identification of a second related lipid acyltransferase with the desired activity;
iii) сравнение указанной первой исходной липидацилтрансферазы и второй родственной липидацилтрансферазы;iii) comparing said first parent lipid acyltransferase and a second related lipid acyltransferase;
iv) идентификацию аминокислотных остатков, отличающихся у двух последовательностей; иiv) identification of amino acid residues that differ in the two sequences; and
v) модификацию в указанной исходной липидацилтрансферазе одного или нескольких из аминокислотных остатков, идентифицированных в соответствии со стадией (iv).v) a modification in the specified source lipid acyltransferase of one or more of the amino acid residues identified in accordance with stage (iv).
14. Способ по п.10, где сравнение по гомологии последовательностей может предусматривать одну или несколько следующих стадий:14. The method of claim 10, where the sequence homology comparison may include one or more of the following steps:
i) выбор первой исходной липидацилтрансферазы;i) selection of a first parent lipid acyltransferase;
ii) идентификацию второй родственной липидацилтрансферазы с желаемой активностью;ii) identification of a second related lipid acyltransferase with the desired activity;
iii) сравнение указанной первой исходной липидацилтрансферазы и второй родственной липидацилтрансферазы;iii) comparing said first parent lipid acyltransferase and a second related lipid acyltransferase;
iv) идентификацию аминокислотных остатков, отличающихся у двух последовательностей;iv) identification of amino acid residues that differ in the two sequences;
v) определение того, являются ли один или несколько аминокислотных остатков, выбранных в соответствии со стадией (iv), высоко консервативными (особенно являются ли они остатками активного центра, и/или частью мотива GDSX, и/или частью мотива GANDY); иv) determining whether one or more amino acid residues selected in accordance with step (iv) are highly conserved (especially if they are active center residues and / or part of the GDSX motif and / or part of the GANDY motif); and
vi) модификацию одного или нескольких из аминокислотных остатков, идентифицированных в соответствии со стадией (iv), за исключением консервативных областей, идентифицированных в соответствии со стадией (v) в указанной исходной последовательности.vi) a modification of one or more of the amino acid residues identified in accordance with step (iv), with the exception of the conserved regions identified in accordance with step (v) in the indicated parent sequence.
15. Способ по п.1, предусматривающий модификацию одного или нескольких следующих аминокислотных остатков: -318, N215, L210, S310, E309, H180, N80, V112, Y30X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), V290, Q289, K22, G40, Y179, M209, L211, K22, P81, N87, Y117, N181, Y230X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), Q182.15. The method according to claim 1, comprising modifying one or more of the following amino acid residues: -318, N215, L210, S310, E309, H180, N80, V112, Y30X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), V290, Q289, K22, G40, Y179, M209, L211, K22, P81, N87, Y117, N181 , Y230X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), Q182.
16. Способ по п.15, предусматривающий модификацию одного или нескольких следующих аминокислотных остатков: -318, N215, L210, E309, H180, N80.16. The method according to clause 15, comprising modifying one or more of the following amino acid residues: -318, N215, L210, E309, H180, N80.
17. Способ по любому из пп.1-14, предусматривающий модификацию одного или нескольких из следующих аминокислотных остатков: -318, N215, L210, S310, E309, H180, N80, V112, Y30X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), V290, Q289, K22, G40, Y179, M209, L211, K22, P81, N87, Y117, N181, Y230X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), Q182, S3, K82.17. The method according to any one of claims 1 to 14, comprising modifying one or more of the following amino acid residues: -318, N215, L210, S310, E309, H180, N80, V112, Y30X (where X is selected from A, C, D , E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), V290, Q289, K22, G40, Y179, M209, L211, K22, P81, N87, Y117, N181, Y230X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), Q182 , S3, K82.
18. Способ по любому из пп.1-14, предусматривающий модификацию одного или нескольких из следующих аминокислотных остатков: Y230X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), S310, Y179, H180, Q289, G40, N88, N87.18. The method according to any one of claims 1 to 14, comprising modifying one or more of the following amino acid residues: Y230X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), S310, Y179, H180, Q289, G40, N88, N87.
19. Способ по любому из пп.1-14, предусматривающий модификацию одного или нескольких из следующих аминокислотных остатков: Y179, N215, L210, N80, Y30X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), N87.19. The method according to any one of claims 1 to 14, comprising modifying one or more of the following amino acid residues: Y179, N215, L210, N80, Y30X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), N87.
20. Способ по любому из пп.1-14, предусматривающий модификацию одного или нескольких из следующих аминокислотных остатков: Y179, N215, L210, N80, Y30X (где X конкретно выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), N87, H180, M209, R211, S18X (где X конкретно выбран из A, C, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, T, W или Y), G40, N88, N87.20. The method according to any one of claims 1 to 14, comprising modifying one or more of the following amino acid residues: Y179, N215, L210, N80, Y30X (where X is specifically selected from A, C, D, E, G, H, I , K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), N87, H180, M209, R211, S18X (where X is specifically selected from A, C, D, E, F, H , I, K, L, M, N, P, Q, R, T, W or Y), G40, N88, N87.
21. Вариант фермента гликолипидацилтрансферазы, отличающийся тем, что фермент содержит аминокислотный мотив GDSX, где Х представляет собой один или несколько из аминокислотных остатков L, A, V, I, F, Y, H, Q, T, N, M или S, где вариант обладает повышенной активностью в отношении галактолипидов по сравнению с исходным ферментом и где вариант фермента содержит одну или несколько модификаций аминокислот по сравнению с исходной последовательностью в любых одном или нескольких из аминокислотных остатков, определенных в наборе 2, или наборе 4, или наборе 6, или наборе 7.21. A variant of the glycolipid acyltransferase enzyme, characterized in that the enzyme contains the GDSX amino acid motif, where X represents one or more of the amino acid residues L, A, V, I, F, Y, H, Q, T, N, M, or S, where the variant has increased activity against galactolipids compared to the parent enzyme and where the enzyme variant contains one or more modifications of amino acids compared to the parent sequence in any one or more of the amino acid residues defined in set 2, or set 4, or set 6, silt set 7.
22. Вариант фермента гликолипидацилтрансферазы по п.21, где вариант фермента содержит аминокислотную последовательность, где аминокислотная последовательность, представлена как SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43 или SEQ ID NO:45, за исключением одной или нескольких модификаций аминокислот в любых одном или нескольких из аминокислотных остатков, определенных в наборе 2, или наборе 4, или наборе 6, или наборе 7.22. The glycolipid acyltransferase enzyme variant according to claim 21, wherein the enzyme variant contains an amino acid sequence, where the amino acid sequence is represented as SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 5 : 6, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26 , SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 43 or SEQ ID NO: 45, with the exception of one or more modifications of the amino acids in any one or more of the amino acid residues defined in set 2, or set 4, or set 6, or set 7.
23. Вариант гликолипидацилтрансферазы по п.21 или 22, где фермент содержит одну или несколько модификаций аминокислот по любой одной или нескольким из следующих аминокислот: -318, N215, L210, S310, E309, H180, N80, V112, Y30X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), V290, Q 289, K22, G40, Y179, M209, L211, K22, P81, N87, Y117, N181, Y230X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), V290, N87, Q182.23. The glycolipid acyltransferase variant of claim 21 or 22, wherein the enzyme contains one or more amino acid modifications of any one or more of the following amino acids: -318, N215, L210, S310, E309, H180, N80, V112, Y30X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), V290, Q 289, K22, G40, Y179, M209 , L211, K22, P81, N87, Y117, N181, Y230X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T , V or W), V290, N87, Q182.
24. Вариант гликолипидацилтрансферазы по п.23, где фермент содержит одну или несколько модификаций аминокислот по любому одному или нескольким из следующих аминокислотных остатков: -318, N215, L210, E309, H180, N80.24. The glycolipid acyltransferase variant of claim 23, wherein the enzyme contains one or more amino acid modifications of any one or more of the following amino acid residues: -318, N215, L210, E309, H180, N80.
25. Вариант гликолипидацилтрансферазы по п.21 или 22, где фермент содержит одну или несколько модификаций аминокислот по любой одной или нескольким из следующих аминокислот: -318, N215, L210, S310, E309, H180, N80, V112, Y30X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), V290, Q 289, K22, G40, Y179, M209, L211, K22, P81, N87, Y117, N181, Y230X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), V290, N87, Q182, S3, S310, K82, E309.25. The glycolipid acyltransferase variant according to claim 21 or 22, wherein the enzyme contains one or more modifications of amino acids for any one or more of the following amino acids: -318, N215, L210, S310, E309, H180, N80, V112, Y30X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), V290, Q 289, K22, G40, Y179, M209 , L211, K22, P81, N87, Y117, N181, Y230X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T , V or W), V290, N87, Q182, S3, S310, K82, E309.
26. Вариант гликолипидацилтрансферазы по п.21 или 22, где фермент содержит одну или несколько модификаций аминокислот по любой одной или нескольким из следующих аминокислот: Y230X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), S310, Y179, H180, Q289, G40, N88, N87.26. The glycolipid acyltransferase variant according to claim 21 or 22, wherein the enzyme contains one or more modifications of amino acids for any one or more of the following amino acids: Y230X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), S310, Y179, H180, Q289, G40, N88, N87.
27. Вариант гликолипидацилтрансферазы по п.21 или 22, где фермент содержит одну или несколько модификаций аминокислот по любой одной или нескольким из следующих аминокислот: Y179, N215, L210, N80, Y30X (где X выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), N87.27. The glycolipid acyltransferase variant according to claim 21 or 22, wherein the enzyme contains one or more modifications of amino acids for any one or more of the following amino acids: Y179, N215, L210, N80, Y30X (where X is selected from A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), N87.
28. Вариант гликолипидацилтрансферазы по п.21 или 22, где фермент содержит одну или несколько модификаций аминокислот по любой одной или нескольким из следующих аминокислот: Y179, N215, L210, N80, Y30X (где X конкретно выбран из A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V или W), N87, H180, M209, R211, S18X (где X конкретно выбран из A, C, D, E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, T, W или Y), G40, N88, N87.28. The glycolipid acyltransferase variant of claim 21 or 22, wherein the enzyme contains one or more amino acid modifications of any one or more of the following amino acids: Y179, N215, L210, N80, Y30X (where X is specifically selected from A, C, D, E , G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V or W), N87, H180, M209, R211, S18X (where X is specifically selected from A, C, D , E, F, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, T, W or Y), G40, N88, N87.
29. Вариант фермента гликолипидацилтрансферазы по п.21 или 22, где вариант фермента обладает повышенным отношением активности для галактолипидов к активности в отношении фосфолипидов и/или триглицеридов по сравнению с исходным ферментом.29. The glycolipid acyltransferase enzyme variant according to claim 21 or 22, wherein the enzyme variant has an increased ratio of activity for galactolipids to activity against phospholipids and / or triglycerides compared to the starting enzyme.
30. Вариант гликолипидацилтрансферазы по п.21 или 22, где вариант фермента обладает повышенной галактолипидтрансферазной активностью по сравнению с ее галактолипидгидролитической активностью по сравнению с исходным ферментом.30. The glycolipid acyltransferase variant according to claim 21 or 22, wherein the enzyme variant has increased galactolipid transferase activity compared to its galactolipid hydrolytic activity compared to the starting enzyme.
31. Вариант фермента гликолипидацилтрансферазы по п.21 или 22, где вариант фермента представляет собой фермент, содержащий аминокислотную последовательность, где аминокислотная последовательность представлена как SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:28, за исключением одной или нескольких модификаций аминокислот в любом, одном или нескольких, аминокислотных остатках, определенных в наборе 2, или наборе 4, или наборе 6, или наборе 7.31. A variant of the glycolipid acyltransferase enzyme according to claim 21 or 22, wherein the enzyme variant is an enzyme comprising an amino acid sequence, wherein the amino acid sequence is represented as SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 28, with the exception of one or more modifications of the amino acids in any one or more amino acid residues defined in set 2, or set 4, or set 6, or set 7.
32. Применение варианта фермента гликолипидацилтрансферазы по любому из пп.21-31 или полученной способом по любому из пп.1-20 в субстрате для получения лизогликолипида, например дигалактозилмоноглицерида (DGMG) или моногалактозилмоноглицерида (MGMG), посредством обработки гликолипида (например, дигалактозилдиглицерида (DGDG) или моногалактозилдиглицерида (MGDG)) вариантом липолитического фермента по настоящему изобретению или полученного способом по настоящему изобретению для получения продукта частичного гидролиза, т.е. лизогликолипида.32. The use of a variant of the glycolipid acyltransferase enzyme according to any one of claims 21-31 or obtained by the method according to any of claims 1 to 20 in a substrate for producing a lysoglycolipid, for example digalactosyl monoglyceride (DGMG) or monogalactosyl monoglyceride (MGMG), for example DGDG) or monogalactosyl diglyceride (MGDG)) a variant of the lipolytic enzyme of the present invention or obtained by the method of the present invention to obtain a partial hydrolysis product, i.e. lysoglycolipid.
33. Применение по п.32, где субстрат представляет собой пищевой продукт.33. The application of clause 32, where the substrate is a food product.
34. Способ получения пищевого продукта, где способ предусматривает добавление варианта фермента гликолипидацилтрансферазы по любому из пп. 21-31 или полученного способом по любому из пп. 1-20 к одному или нескольким ингредиентам пищевого продукта.34. A method of obtaining a food product, where the method comprises adding a variant of the glycolipid acyltransferase enzyme according to any one of claims. 21-31 or obtained by the method according to any one of paragraphs. 1-20 to one or more food ingredients.
35. Способ получения выпеченного из теста продукта, где способ предусматривает добавление варианта фермента гликолипидацилтрансферазы по любому из пп.21-31 или полученного способом по любому из пп. 1-20 в тесто.35. A method of obtaining a product baked from dough, where the method comprises adding a variant of the glycolipid acyltransferase enzyme according to any one of claims 21-31 or obtained by the method according to any one of claims. 1-20 to the dough.
36. Применение варианта фермента гликолипидацилтрансферазы по любому из пп.21-31 или полученного способом по любому из пп.1-20 в способе обработки яичных или основанных на яичных продуктов для получения лизофосфолипидов.36. The use of a variant of the glycolipid acyltransferase enzyme according to any one of paragraphs.21-31 or obtained by the method according to any one of claims 1 to 20 in a method for processing egg or egg-based products to produce lysophospholipids.
37. Способ ферментативного рафинирования растительных или пищевых масел, включающий в себя обработку пригодного в пищу или растительного масла вариантом фермента гликолипидацилтрансферазы по любому из пп.21-31 или полученного способом по любому из пп.1-20 так, чтобы гидролизовать основную часть полярных липидов (например, фосфолипид и/или гликолипид).37. A method for the enzymatic refinement of vegetable or edible oils, comprising treating edible or vegetable oil with a variant of the glycolipid acyltransferase enzyme according to any one of claims 21-31 or obtained by the method according to any one of claims 1 to 20 so as to hydrolyze the bulk of the polar lipids (e.g. phospholipid and / or glycolipid).
38. Применение варианта фермента гликолипидацилтрансферазы по любому из пп.21-31 или полученного способом по любому из пп.1-20 в способе уменьшения содержания фосфолипидов в пищевом масле, предусматривающее обработку масла указанным вариантом липолитического фермента так, чтобы гидролизовать большую часть фосфолипидов, и отделение водной фазы, содержащей гидролизованные фосфолипиды от масла.38. The use of a variant of the glycolipid acyltransferase enzyme according to any one of paragraphs.21-31 or obtained by the method according to any one of claims 1 to 20 in a method for reducing the phospholipid content in edible oil, comprising treating the oil with said lipolytic enzyme variant so as to hydrolyze most of the phospholipids, and separation of the aqueous phase containing hydrolyzed phospholipids from the oil.
39. Применение варианта фермента гликолипидацилтрансферазы по любому из пп.21-31 или полученного способом по любому из пп.1-20 для биоконверсии полярных липидов (предпочтительно гликолипиды) для получения высокоценных продуктов, таких как сложные эфиры углеводов, и/или сложные эфиры белков, и/или сложные эфиры белковых субъединиц, и/или сложные эфиры оксикислот.39. The use of a variant of the glycolipid acyltransferase enzyme according to any one of claims 21-31 or obtained by the method according to any of claims 1 to 20 for bioconversion of polar lipids (preferably glycolipids) to produce high-value products such as carbohydrate esters and / or protein esters and / or esters of protein subunits and / or esters of hydroxy acids.
40. Иммобилизованный вариант фермента гликолипидацилтрансферазы по любому из пп.21-31 или полученный способом по любому из пп.1-20.40. An immobilized version of the glycolipid acyltransferase enzyme according to any one of claims 21-31 or obtained by the method according to any one of claims 1 to 20.