RU2005104627A

RU2005104627A - Способ получения пуриновых нуклеозидов и нуклеотидов методом ферментации с использованием бактерий, принадлежащих к роду escherichia или bacillus

Info

Publication number: RU2005104627A
Application number: RU2005104627/13A
Authority: RU
Inventors: Натали Павловна Закатаева (RU); Наталия Павловна Закатаева; Виталий Аркадьевич Лившиц (RU); Виталий Аркадьевич Лившиц; Сергей Викторович Гронский (RU); Сергей Викторович Гронский; Екатерина Александровна Кутукова (RU); Екатерина Александровна КУТУКОВА; Анна Евгеньевна Новикова (RU); Анна Евгеньевна Новикова; Юрий Иванович Козлов (RU); Юрий Иванович Козлов
Original assignee: Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU); Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ)
Priority date: 2005-02-22
Filing date: 2005-02-22
Publication date: 2006-08-10
Also published as: RU2294962C2

Claims

1. Белок YdhL из Bacillus amyloliquefaciens, выбранный из группы, состоящей из:

(A) белок, включающий последовательность аминокислот, приведенную в списке последовательностей под номером 2 (SEQ ID NO:2); и

(B) белок, включающий последовательность аминокислот, содержащую делеции, замены, вставки или добавление одной или нескольких аминокислот в последовательности аминокислот, приведенной в списке последовательностей под номером 2 (SEQ ID NO:2), и обладающий активностью, придающей бактерии, принадлежащей к роду Bacillus или к роду Escherichia, устойчивость к пурину, выбранному из группы, состоящей из аналогов пуринового основания, инозина и гуанозина, когда активность указанного белка в указанной бактерии повышена.

2. Белок по п.1, отличающийся тем, что указанным пурином является инозин.

3. Фрагмент ДНК, кодирующий белок YdhL по п.1.

4. Фрагмент ДНК по п.3, включающий нуклеотидную последовательность, приведенную в списке последовательностей под номером 1 (SEQ ID NO:1).

5. Бактерия, принадлежащая к роду Bacillus или к роду Escherichia, обладающая способностью к продукции пуринового нуклеозида, отличающаяся тем, что указанная бактерия обладает повышенной активностью белка, выбранного из группы, состоящей из:

(A) белок, кодируемый геном ydhL из Bacillus amyloliquefaciens,

(B) белок, кодируемый геном ydhL из Bacillus subtilis, и

(C) белок, кодируемый ортологом любого из генов ydhL, указанных в (А) или (В).

6. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что пуриновый нуклеозид выбран из группы, состоящей из инозина, ксантозина и гуанозина.

7. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что активность указанного белка повышена путем трансформации указанной бактерии фрагментом ДНК, кодирующим указаный белок.

8. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что активность указанного белка повышена путем изменения последовательности, регулирующей экспрессию фрагмента ДНК, кодирующим указаный белок, в хромосоме бактерии.

9. Бактерия по п.7, отличающаяся тем, что указанная трансформация осуществляется с помощью низкокопийного вектора.

10. Способ получения пуринового нуклеозида, включающий следующие стадии:

(а) выращивание бактерии по любому из пп.5-9 в питательной среде, и

(б) сбор пуринового нуклеозида из культуральной жидкости.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанным пуриновым нуклеозидом является инозин.

12. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанным пуриновым нуклеозидом является ксантозин.

13. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанным пуриновым нуклеозидом является гуанозин.

14. Способ по любому из пп.10-13, отличающийся тем, что бактерия модифицированна таким образом, что экспрессия генов биосинтеза пуриновых нуклеозидов у указанной бактерии усилена.

15. Способ получения пуринового нуклеотида, включающий следующие стадии:

(а) выращивание бактерии по любому из пп.5-9 в питательной среде и выделение полученного пуринового нуклеозида,

(б) фосфорилирование полученного пуринового нуклеозида, и

(в) сбор пуринового нуклеотида.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что пуриновым нуклеотидом является 5'-инозиновая кислота.

17. Способ по п.15, отличающийся тем, что пуриновым нуклеотидом является 5'-ксантиловая кислота.

18. Способ по п.15, отличающийся тем, что пуриновым нуклеотидом является 5'-гуаниловая кислота.

19. Способ по любому из пп.15-18, отличающийся тем, что бактерия модифицированна таким образом, что экспрессия генов биосинтеза пуриновых нуклеозидов у указанной бактерии усилена.

20. Способ получения 5'-гуаниловой кислоты, включающий следующие стадии:

(а) выращивание бактерии по п.5 в питательной среде и выделение полученного ксантозина,

(б) фосфорилирование ксантозина,

(в) аминирование 5'-ксантиловой кислоты, и

(г) сбор 5'-гуаниловой кислоты.

21. Способ по п.20, отличающийся тем, что бактерия модифицированна таким образом, что экспрессия генов биосинтеза пуриновых нуклеозидов у указанной бактерии усилена.