RU2003104596A - Способ промышленного получения рекомбинантного инсулина человека - Google Patents
Способ промышленного получения рекомбинантного инсулина человекаInfo
- Publication number
- RU2003104596A RU2003104596A RU2003104596/13A RU2003104596A RU2003104596A RU 2003104596 A RU2003104596 A RU 2003104596A RU 2003104596/13 A RU2003104596/13 A RU 2003104596/13A RU 2003104596 A RU2003104596 A RU 2003104596A RU 2003104596 A RU2003104596 A RU 2003104596A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- carried out
- fusion protein
- insulin
- cultivation
- protein
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims 8
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims 4
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims 4
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 title claims 2
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 claims 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims 5
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 1,4-dimercaptobutane-2,3-diol Chemical compound SCC(O)C(O)CS VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 claims 2
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 claims 2
- 210000003000 Inclusion Bodies Anatomy 0.000 claims 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 2
- 239000007986 glycine-NaOH buffer Substances 0.000 claims 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims 2
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 2
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 claims 2
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 claims 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 claims 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims 1
- 230000005712 crystallization Effects 0.000 claims 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 claims 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 claims 1
Claims (5)
1. Способ промышленного получения рекомбинантного инсулина человека, включающий культивирование штамма продуцента E.coli JM109/pPINS07, разрушение клеток дезинтеграцией, отделение телец включения, содержащих гибридный белок инсулина, их растворение в буфере, содержащем мочевину, ренатурацию, кислотное осаждение и очистку гибридного белка хроматографией на КМ-сефарозе, ферментативное расщепление трипсином и карбоксипептидазой Б с последующей очисткой и выделением инсулина, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в промышленном ферментере, при этом концентрацию растворенного кислорода поддерживают на уровне 40+15%, тельца включения растворяют в буфере, содержащем 8 М мочевину, с последующим добавлением дитиотреитола, ренатурацию белка осуществляют в одну стадию путем инкубации в глицин-NaOH буфере до стадии кислотного осаждения, расщепление гибридного белка проводят последовательно при соотношении трипсин: гибридный белок и карбоксипептидаза Б: гибридный белок - 1:(500-1000), а выделение - кристаллизацией в присутствии солей цинка.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в промышленном ферментере объемом 200-1500 л.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в процессе культивирования количество вводимой глюкозы регулируют по уровню растворенного кислорода и рН.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что инкубацию гибридного белка проводят в 5-10-кратном объеме глицин-NaOH буфера, рН 9-11.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что дитиотреитол добавляют до конечной концентрации 5-10 мМ.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003104596/13A RU2232813C1 (ru) | 2003-02-18 | 2003-02-18 | Способ промышленного получения рекомбинантного инсулина человека |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003104596/13A RU2232813C1 (ru) | 2003-02-18 | 2003-02-18 | Способ промышленного получения рекомбинантного инсулина человека |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2232813C1 RU2232813C1 (ru) | 2004-07-20 |
| RU2003104596A true RU2003104596A (ru) | 2004-08-10 |
Family
ID=33413979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003104596/13A RU2232813C1 (ru) | 2003-02-18 | 2003-02-18 | Способ промышленного получения рекомбинантного инсулина человека |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2232813C1 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2451750C2 (ru) * | 2007-09-24 | 2012-05-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Герофарм" | Способ получения рекомбинантного с-пептида проинсулина человека |
-
2003
- 2003-02-18 RU RU2003104596/13A patent/RU2232813C1/ru active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103642843B (zh) | 含有尿素类氮源的发酵培养基及其用于生产次级代谢产物、酶和重组蛋白的用途 | |
| SG161210A1 (en) | Methods for expression and purification of recombinant human growth hormone | |
| RU2749884C2 (ru) | Способ улучшенной ферментации с помощью микроорганизмов | |
| CN105821066B (zh) | 一种生产α-酮戊二酸的双酶共表达菌株 | |
| Perfetto et al. | Production and covalent immobilisation of the recombinant bacterial carbonic anhydrase (SspCA) onto magnetic nanoparticles | |
| CN102296102A (zh) | 微生物法生产葡萄糖酸盐的控制方法 | |
| Dipasquale et al. | Introducing capnophilic lactic fermentation in a combined dark-photo fermentation process: a route to unparalleled H 2 yields | |
| CN105385713A (zh) | 一种菌体循环利用的葡萄糖酸钠发酵方法 | |
| ATE474060T1 (de) | Verfahren zur herstellung von polymyxin b unter verwendung von (paeni)bacillus polymyxa | |
| RU2003104596A (ru) | Способ промышленного получения рекомбинантного инсулина человека | |
| CN102864190A (zh) | γ-氨基丁酸的生产方法 | |
| CN103184236A (zh) | 一种重组胰蛋白酶的制备方法 | |
| Castro et al. | The effect of the electric field on lag-phase, ethanol and β-galactosidase production of a recombinant S. cerevisiae growing on lactose | |
| WO2017120890A1 (zh) | 一种利用磷脂酶融合表达以提高外源蛋白表达量的方法 | |
| CN107446909A (zh) | 一种大肠杆菌的固定化方法及利用固定化大肠杆菌补料发酵生产l‑赖氨酸的方法 | |
| CN102321689A (zh) | 葡萄糖酸盐半连续发酵工艺 | |
| CN107827244A (zh) | 一种用于养殖污水处理的菌藻复合剂及其制备方法 | |
| CN110452838B (zh) | 一种crm197菌种培养基、配制方法及发酵培养方法 | |
| CN114181917A (zh) | 一种改造尿酸酶、基因序列、制备方法及应用 | |
| CN112280766A (zh) | 一种大肠杆菌生产sumo酶的发酵工艺 | |
| CN107267433B (zh) | 一种腈水解酶重组表达菌株的构建及其高密度发酵方法 | |
| EA201301143A1 (ru) | ПРОДУЦЕНТ ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА ЧЕЛОВЕКА (рчЭФР) | |
| EA201070372A1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО с-ПЕПТИДА ПРОИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА | |
| SU734262A1 (ru) | Способ получени рнк-полимеразы | |
| EP2806030A1 (en) | A process for producing lipase |