RU2002801C1 - "Питательна среда "Бактофет" дл культивировани бифидобактерий" - Google Patents

Abstract

Использование: биотехнологи , питательна  среда, ростова  активность, культивирование бифи- добактерий. Сущность способа: мышечную ткань плодов коров (свиней, овец),  вл ющуюс  отходом производства сыворотки крови, подвергают легкому ферментативному гидролизу медицинским панкреатином или гомогенатом поджелудочной железы свиньи при 40 - 20°С в щелочной зоне рН 7.7 - 8.0 в течение 4 - 5 сут в присутствии хлороформа с последующим прогреванием при 90° С в течение 5 - 10 мин. осаждением из надосадочнсй жидкости высокомолекул рных соединений в изоэлектрич с- кой точке белка с последующим высушиванием препарата. Полученный препарат - основа питательной среды Бактофет дл  культивировани  би- фидобактерий содержит следующие компоненты, мас.%: лактоза 0,95 - 1.00; натрий хлористый 0,45 - 0,50, агар-агар 0,065 - 0.070; раствор ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров 6-и 8-мес чного возраста и/или свиней 2,5 - 3-мес чного возраста, и/или овец последних сроков су гности с конечной концентрацией аминного азота 100-140 мг% остальное. Питательна  среда проста в изготовлении, содержит доступные отечественные компоненты и не требует дорогосто щего оборудовани  дл  своего производства, обеспечивает рост и развитие различных штаммов бифидобактерий в титрах, несколько превышающих титры эталонной среды Блаурока 5 табл.

Description

Изобретение откоситс  к биотехнологии и микробиологической промышленности, в частности к созданию новой питательной среды (ПС) Бактофет, предназначенной дл  выращивани  бифидобактерий, которые используютс  при получении медицинского препарата - бифидумбактерина.

Известна питательна  среда дл  выращивани  бифидобактерий, котора  содержит , г:

пептон8-9

лактозу9-10

L-цистеин сол нокислый 0,1-0,2 питательный бульон сухой12-13

экстракт кормовых дрожжей7-8

аминокровин150-160

агар-агар0,70-0,80

дистиллированную воду до 1 л Однако данна  среда многокомпонентна , содержит трудноподдающиес  стандартизации ингредиенты (пептон, экстракт кормовых дрожжей), что существенно снижает воспроизводимость результатов. Недостатком этой ПС также  вл етс  сложна  технологи  приготовлени , дорогосто щие ингредиенты, дефицитные пищевые продукты . В услови х биотехнологического производства при использовании больших количеств ПС дл  получени  микробной биомассы така  среда нерентабельна.

Известна также модифицированна  питательна  среда Блаурокка, предназначенна  дл  выращивани  бифидобактерий, содержаща , г/л:

печеночный отвар1 л

натрий хлористый5

пептон сухой10

L-цистин (по ТУ 6-09-3252-80) 0,1 агар-агар0,75

рН7.2-7,4

Приведенна  питательна  среда также  вл етс  многокомпонентной, содержит печеночный отвар, источник сырь  которого нестандартизован и  вл етс  дефицитным пищевым продуктом. Технологи  приготовлени  питательной среды сложна и в услови х биотехнологического производства така  среда нерентабельна.

Задачей данного изобретени   вл етс  создание новой дешевой, унифицированной питательной среды Бактофет с повышенной ростовой активностью.

Сущность данного изобретени  заключаетс  втом, что питательна  среда Бактофет дл  культивировани  бифидобактерий в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат мышечной ткани плодов коров б- и 8-мес чного возраста

и/или свиней 2,5-3-мес чного возраста и/или овец последних сроков су гности при следующем соотношении компонентов, мас.%:

лактоза0,95-1,00

натрий хлористый0,45-0,50

агар-агар0,065-0,070

ферментативный гидролизат мышечной ткани плодов коров 6-8-мес чного возраста и/или свиней 2,5-3-х мес чного возраста и/или овец последних сроков 5 су гности с конечной

концентрацией аминного азота 100-140 мг%остальное

Ферментативный гидролизат мышечной ткани плодов коров и/или свиней и/или 0 овец получают путем ферментативного расщеплени  мышечной ткани последних медицинским панкреатином, вз тым в количестве 2,0 об,%, или гомогенатом поджелудочной железы свиньи, вз тым в количестве 5 Ю-15 об.%, в присутствии хлороформа при 40-42°С в щелочной зоне рН 7, 6-8,0 в течение 4-5 сут с последующим прогреванием биомассы при 90°С в течение 5-10 мин, осаждением высокомолекул рных соедине- 0 ний в изоэлектрической точке белка, фильт- рованием полученного препарата и высушиванием.

Пример. Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов 5 коров 6-8-мес чного возраста.

Мышечную ткань плодов коров 6-8-мес чного возраста разбавл ют дистиллированной водой в объемном соотношении 1:1,5 и подвергают гидролизу с помощью 0 медицинского панкреатина (МРТУ 425946- 84), вз того в количестве 2 об. %, или гомо- гената поджелудочной железы свиньи, вз того в количестве 10об.%. Процесс ведут в присутствии 3 об.% хлороформа при 40- 5 42°С в щелочной зоне рН 7,6-8,0 в течение 4-5 аут. Гидролиз прекращают прогреванием реакционной массы при 90°С в течение 5-10 мин, при этом коагулируют и выпадают в осадок неразгидролизованные белки, Ос- 0 тавшиес  в надосадочной жидкости высокомолекул рные соединени  осаждают в изоэлектрической точке белка, надосадоч- ную жидкость фильтруют, затем подвергают высушиванию методом распылени . Режим 5 высушивани  (на входе 150 160°С и на выходе 90-95°С) обеспечивает получение сухого препарата с остаточной влажностью не более 2,5-3%. Полученный ферментативный гидролизат имеет следующие физико- химические характеристики:

рН 1%-ного раствора 6,2-7,2 растворимость, % не менее5,0

массова  дол  влаги, % не более2,5-3,0

массова  дол  общего азота, % в пределах 10-11 массова  дол  аммнного азота, % в пределах 4,5-5,5 аминный коэффициент

(аминный)0,45-0,55

N ( общий ) коэффициент протео- N остат.

лиза

0,9-1,0

N общ.

аминокислотный состав 1%-ного раствора полученного ферментативного гидро- лизата, мг;%: .изолейцин 16,2; лейцин 28,5; валин 18,4; треонин 21,8: серии 26,5; мети- онин 9,5; тирозин 13.5; фенилаланин 13,2; цист(е)ин 18,9; аспарагинова  кислота 19,7; глутаминова  кислота 35,3; пролин 20,1; глицин 5,5; аланин 20,2; лизин 20,5; гистидин 8,5; аргинин 29,5; триптофан 5,0; полипептиды , мол. м. (в дальтонах) по электрофорезу 37000-24000, 6000-5500.

П р и м е р 2. Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов свиней 2,5-3-мес чного возраста.

Мышечную ткань плодов свиней 2,5-3- мес чного возраста измельчают, разбавл ют дистиллированной водой в объемном соотношении 1:1,5 и подвергают гидролизу с помои(ыо медицинского панкреатина (МРТУ 425946-84), вз того в количестве 2 об.% или гомогената поджелудочной железы свиньи, вз того в количестве 15 об.%. Процесс ведут в присутствии хлороформа при 40-42°С в щелочной зоне рН 7,6-8,0 в течение 4-5 сут. Гидролиз прекращают прогреванием реакционной массы при 90°С в течение 5-10 мин, при этом коагулируют и выпадают в осадок неразгидролизован- ные белки. Оставшиес  в надосадочной жидкости высокомолекул рные соединени  осаждают в изоэлектрической точке белка, надосадочную жидкость фильтруют, затем подвергают высушиванию методом распылени . Режим высушивани  (на входе 150- 160°С и на выходе 90-95°С) обеспечивает получение сухого препарата с остаточной влажностью не более 2,5-3%. Полученный ферментативный гидролизат имеет следующие физико-химические характеристики;

рН 1%-ного раствора 6,2-7,2

растворимость, %

не менее5,0

массова  дол  влаги,

% не более2.5-3,0

массова  дол  общего

азота, % в пределах 10-11 массова  дол  аминного азота, % в пределах 4.5-5,5 аминной коэффициент

N(аминный) N (общий ) коэффициент протеолиза

N остат.

0,45-0,55

N общ.

0аминокислотный состав 1%-ного раствора ферментативного гидролизата. мг%: изолейцмн 15,1; лейцин 25,4; валин 19,2: треонин 24.4; серии 26.2; метионин 10,2 тирозин 12,5; фенилаланин 13,0; цист(е)нн

5 20,0; аспарагинова  кислота 19,9; глутаминова  кислота 34,7; пролин 20,5; глицин 5,6; аланин 20,9; лизин 19,8; гистидин 8,9; ерги- нин 30,2; триптофан 4,9; полипептиды, мол.м. (в дзльтонах) по электрофорезу

0 37000-24000, 6000-5500.

П р и м е р 3. Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов овец последних сроков су гности.

Мышечную ткань плодов овец послед5 них сроков су гности измельчают, разбавл ют дистиллированной водой в объемном соотношении 1:1,5 и подвергают ферментативному гидролизу и высушиванию полученного препарата в услови х, описанных

0 в примере 2. Физико-химические характеристики полученного ферментативного гидролизата наход тс  в пределах,указанных в примерах 1 и 2 дл  ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов ко5 ров 6-8-мес чного возраста и дл  ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов свиней 2,5-3-мес чного возраста соответственно. Аминокислотный состав 1%-ного раствора ферментативного гидро0 лизата мышечной ткани плодов овец последних сроков су гности следующий. мг%: изолейцин 16,4; лейцин 27,9; валин 17.9; треонин 23,1; серии 25,9; метионин 9,0; тирозин 13,2: фенилаланин 12,9; цист(е)ин

5 19,1; аспарагинова  кислота 20,0; глутаминова  кислота 33,8; пролин 19,9; глицин 6,0; аланин 20 5; лизин 20,3; гистидин 7,9; аргинин 31,4; триптофан 5,2; полипептиды, мол.м. (в дальтонах) по электрофорезу

0 37000-24000, 6000-5500.

П р и м е р 4. Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров 6-8-мес чного возраста и плодов свиней 2,5-3-мес чного возраста.

5Мышечную ткань плодов коров 6-8-мес чного возраста и плодов свиней 2,5-3-ме- ч с чного возраста измельчают, разбавл ют дистиллированной водой в объемном соотношении 1:1,5 и подвергают ферментативному гидролизу и высушиванию препарата

в услови х, описанных в примере 2. Физико-химические характеристики полученного ферментативного гидролизата наход тс  в пределах, указанных в примерах 1 и 2 дл  ферментативных гидролизатов, полученных по этим примерам.

П р и м е р 5. Получение ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов свиней 2.5-3-мес чного возраста и плодов овец последних сроков су гности.

Мышечную ткань плодов свиней 2,5- 3-мёс чного возраста и плодов овец последних сроков су гности измельчают, разбавл ют дистиллированной водой в объемном соотношении 1:1,5 и подвергают ферментативному гидролизу и высушиванию препарата в услови х, описанных в примере 2. Получают продукт, физико-химические характеристики которого наход тс  в пределах, указанных в примерах 1 и 2 дл  ферментативных гидролизатов, полученных по этим примерам.

П р и м е р 6. Подбирают концентрацию ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров и/или свиней и/или овец, обеспечивающую оптимальные услови  жизнеде тельности бифидобактерий на примере производственного штамма B.biiidum 1. Результаты исследовани  представлены в табл. 1.

Пример. При выбранной в примере 6 концентрации ферментативного гидролизата подбирают концентрации компонентов питательной среды Бактофет, обеспечивающие оптимальные услови  жизнеде тельности бифидобактерий на примере производственного тест-штамма B.bifidum 1. Результаты исследований представлены в табл, 2 и 3.

Как видно из данных табл. 1, 2 и 3, рос- т.стимулирующие свойства питательной среды Бактофет на питательной основе (ПО) из ферментативного гидролизата мышечной ткани плодов коров и/или свиней и/или овец при концентрации аминного азота 100-140 мг% несколько превышают рост- стимулирующие свойства ПС Блаурокка.

Изменение концентраций остальных компонентов в питательной среде Бактофет в указанных в формуле изобретени  пределах не вли ют на ростовые свойства исследованного вида бактерий.

Пример8. Исследуют возможность использовани  ферментативных гидролизатов (ФГ). полученных согласно примерам 1, 2 и 3 из различных видов сырь , с установленным в примере 6 диапазоном аминного азота (100-140 мг%) дл  выращивани  бифидобактерий на примере тест-штамма

B.bifidum производственный 1. Результаты представлены в табл. 4.

Из данных табл. 4 следует, что использование ФГ на основе различных видов

животного сырь  обеспечивает рост бифидобактерий в титрах, несколько превышающих контрольные данные.

П р и м е р 9. Изучена возможность применени  ПС Бактофет дл  культивиро0 вани  различных видов и штаммов бифидобактерий при оптимальных концентраци х питательной основы. Состав ПС Бактофет идентичен составу, приведенному в примере 6. Результаты представлены в табл. 5.

5Как видно из данных табл. 5, ПС Бактофет обеспечивает рост и развитие различных штаммов бифидобактерий в титрах, несколько превышающих титры, полученные в эталонной среде Блаурокка.

0 П р и м е р 10. Проведено изучение вли ни  ПС Бактофет, состав которой представлен в примере 6, на культурально- морфологические признаки штаммов Производственный Ns 1, 791, ЛВА-3. Показано,

5 что при различных концентраци х питательной основы от 140 до 100 мг% сохран ютс  типичные культурально-морфологические особенности различных видов и штаммов B.bifidum. В мазках из культур, выросших в

0 высоком столбике полужидкой ПС Бактофет , микробы представл ют собой грампо- ложительные палочки, характерным признаком которых  вл етс  раздвоение концов. Часто палочки образуют скоплени ,

5 напоминающие китайские иероглифы или оленьи рога. При выращивании на полужидкой ПС Бактофет при 37.5-38°С микробы вызывают в первые сутки неравномерное помутнение, а через 2-3 сут формируютс 

0 палочки микроорганизмов в виде гвоздиков, комет, наход щихс  во взвешенном слое, с четким обозначением стерильной зоны.

Таким образом, описываема  питательна  среда Бактофет содержит стандарти5 зованный легкодоступный ферментативный гидролизат отходов производства сыворотки крови - плодов коров или свиней, или овец при получении каракульчи, имеющихс  в достаточно больших количествах на круп0 ных м сокомбинатах и на заготовительных пунктах получени  каракульчи, что позвол ет получать описываемую питательную основу дл  нужд микробиологического производства в больших количествах (дес тки тонн),

5 унифициру  услови  получени  медицинского препарата бифидумбактерина.

Описываема  питательна  среда проста в изготовлении, содержит доступные отечественные компоненты и не требует дорого- сто щего оборудовани  дл  своего

производства. Кроме того, данна  питательна  среда обеспечивает рост и развитие различных штаммов бифидобактерий в титрах , несколько превышающих титры эталонной среды Блаурокка.

(56) Авторское свидетельство СССР N 1513029, кл. С 12 N 1/20, 1988.

Лизько Н.Н., Шилов В.М. Лабораторное дело, 1979, № 7. с. 430-433.

Таблица 1

Содержание бифидобактерий в ПС Бактофет при соотношении лактозы, натри  хлористого и агар-агара, мас.%: 0,975, 0,475 и 0,068 соответственно в сравнении с

эталонной ПС Блаурокка

Примечание. Данные по выращиванию бифидобактерий представлены в

виде усредненных значений дл  ферментативных гидролизатов всех видов сырь  и их смесей.

Таблица 2

Содержание бифидобактерий в ПС Бактофет при соотношении лактозы, натри  хлористого и агар-агара, мас.%: 0,95, 0,45 и 0,065 соответственно

Таблица 3

Содержание бифидобактерий в ПС Бактофет при соотношении лактозы, натри  хлористого и агар-агара, мас.%: 1,00, 0,50 и 0,070 соответственно

Таблица4

Содержание бифидобактерий в ПС Бактофет, полученной на основе ферментативных гид- ролиэатов из различных видов сырь  при соотношении лактозы, натри  хлористого и агар- агара, мас.%: 0,975, 0,475 и 0,068 соответственно

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Питательна  среда дл  культивировани  бифидобактерий, содержаща  питательную основу, лактозу, натрий хлористый, агар-агар, отличающа с  тем, что в качестве питательной основы используют ферментативный гидролизат мышечной ткани плодов коров 6 - 8- и мес чного возраста, и/или свиней 2.5 - 3- мес чного возраста, и/или овец последних сроков су-  гности при следующем соотношении компонентов , мас.%:

   Таблица 5

   Лактоза

   Натрий хлористый

   Агар-агар

   Ферментативный гидролизат мышечной ткани плодов коров 6

   - 8-мес чного возраста, и/или свиней 2,5 - 3-мес чного возраста ,

   и/или овец последних сроков су гности с конечной ко нцентрацией аминного азота 100-140мг.%

   0,95-t,00 0,45 - 0,50 0,065 - 0.070

   Остальное