RU2001101C1 - "Способ получени основы микробиологических сред и питательна среда "Автофизат" дл культивировани микроорганизмов" - Google Patents

Description

аммоний цитрат2,0

магний сернокислый0,2

марганец сернокислый0,05

твин-801 мл

воду дистиллированную до 1 л. Питательна  среда Рогозы многокомпонентна , включает нестандартизованное сырье (м сной экстракт, дрожжевой экстракт) и в услови х биотехнологического производства нерентабельна.

Дл  выращивани  лактобацилл известно также использование питательной среды МРС-1, содержащей те же компоненты, что и предыдуща  ПС, но вместо м сного экстракта в ней использован гидролизат молока .

Однако данна  ПС также многокомпонентна , содержит трудноподдающиес  стандартизации пищевые ингредиенты (дрожжевой экстракт, гидролизат молока), что существенно снижает воспроизводимость результатов.

Недостатком ПС  вл етс  сложна  технологи  приготовлени , использование дорогосто щих компонентов, дефицитных пищевых продуктов. В услови х биотехнологического производства, где требуетс  большое количество ПС дл  получени  микробной биомассы, нерентабельна.

Наиболее близкой к предложенной среде  вл етс  ПС Блаурокка дл  выращивани  бифидобактерий, содержаща  в г/л: натрий хлористый5,0

пептон10,0

лактозу10.0

L-цистин0,1

агар0,75

печеночный отвардо 1 л.

Вышеприведенна  ПС также  вл етс  многокомпонентной, содержит печеночный отвар, источник сырь  которого нестандар- тизоваи и  вл етс  дефицитным пищевым продуктом. Технологи  приготовлени  ПС сложна, о услови х биотехнологического производства така  среда нерентабельна.

Сущность объекта изобретени  заключаетс  также в том, что питательна  среда Авгофизат в качестве питательной основы содержит гидролизат внутренних органов промысловых рыб, а также лактозу, натрий хлористый и агар при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды

гилролизат внутренний органов промысловых рыб с конечной концентрацией аминового азо- тг,100-140мг%20,0-25.0

лактоза9,5-10,0

нтгрий хлористый4,5-5.0

агар065-070

Дл  увеличени  размеров колоний предпочтительно использовать модифицированную питательную среду Автофизат, котора  дополнительно содержит пептон в количестве 14,5-15,0 г/л дистиллированной воды. Питательна  среда Автофизат имеет следующие физико-химические характеристики:

-концентраци  водород0ных ионов (рН)6,8-7,0

-аминный азот100-140 мг%

-влажность (сухой

формы)не более 7%

П р и м е р 1. Внутренние органы про5 мысловых рыб (карпа, сома, осетровых и др.) промывают проточной водой, измельчают , развод т дистиллированной водой в массовом соотношении 1:1,5 и провод т гидролиз при 40°С в щелочной зоне рН 7,8

0 в присутствии хлороформа (1,5 об.%) при перемешивании в течение 2 сут. В первые сутки гидролиза строго поддерживают рН реакционной смеси. Гидролиз прекращают прогреванием при 90°С в течение 8 мин, при

5 этом коагулируют и выпадают п осадок не- разгидролизованные белки. Оставшиес  в надосадочной жидкости высокомолекул рные соединени  осаждают в изоэлектриче- ской точке белка, надосадочную жидкость

0 фильтруют, затем подвергают высушиванию в потоке гор чего воздуха в аппаратах, используемых дл  получени  сухого молока. Режим высушивани  (на входе 150-160°С и на выходе 90-95°С) обеспечивает получение

5 сухого препарата с остатг ,,;ой влажностью не более 5,0%.

Повышение темпера уры процесса гидролиза до 42°С, уоеличе, . : зоны рН до 8,0 и времени процесса до 2,5 сут не вли ют на

0 конечные физико-химические характеристики целевого продукта.

П р и м е р 2. Подобрана концентраци  полученного по примеру i гидролиза га внутренних органов промысловых рыб, ис5 пользуемого в качестве основы питательной среды, и компонентов среды - лактозы, натри  хлористого и агара, обеспечивающие оптимальные услови  роста бифидобактерий и лактобацилл. Использованы следую0 щие штаммы: B.bifidum-производственныи № 1, 791, ЛВА-3; L-plantarum 8-РЛ-З, L.plantarum 8-PA-3, L.plantarum-38 Lpermentum-39. Результаты исследовани  представлены в табл. 1.

5 Как видно из табл. 1, питательна  среда на основе гидролизата внутренних органов промысловых рыб при его концентрации в среде от 20 до 30 г/л и концентраци х лактозы -9,75 г/л, натри  хлористого-4,75 г/л, агара - 0,68 г/л обеспечивают оптимальные

ус ЮРИЯ дл  культивировани  бифидобакте- рий и лактобацилл.

Ростстимулирующие свойства этой среды наход тс  на уровне ростстимулирую- щих свойств известных питательных сред. Причем при концентрации гидролизата 30 г/л рост бифидобактерий и лактобацилл аналогичен росту бифидобактерий и лактобацилл при добавлении в ПС гидролизата в концентрации 25 г/л. При концентрации гидролизата 15 г/л количество биомассы не уменьшаетс , однако размер колоний мельче , следовательно оптимальна  концентраци  гидролизата внутренних органов промысловых рыб в составе ПС 20-25 г/л.

П р и м е р 3. Подобраны концентрации лактозы, натри  хлористого, агара и пептона в составе ПС дл  культивировани  бифидобактерий и лактобацилл.

Концентрации компонентов отрабатывали на шести вариантах ПС. Использованы штаммы B.blfldum 791 и L plantarum 8-РА- 3.

Из полученных результатов, представленных в табл. 3, видно, что питательна  среда на основе гидролизата внутренних органов промысловых рыб по вариантам ПС с 1 по III обеспечивает оптимальные услови  культивировани  дл  бифидобактерий и лактобацилл, не отличающихс  от контрол , добавление в эту ПС пептона в количествах, указанных в табл. 2 (ПС по вариантам с IV по VI), увеличивает размеры колоний микроорганизмов при том же количестве биомассы . Таким образом, оптимальные соотнош.ни  компонентов в описываемой ПС Автофизат дл  культивировани  бифидобактерий и лактобацилл следующее, г/л дистиллированной воды:

лактоза9,5-10,0

лактоза9,5-10,0

натрий хлористый4,5-5,0

натрий хлористый4,5-5,0

гидролизат внутренних органов промысловых рыб20,0-25,0

гидролизат внутренних органов промысловых рыб 20,0-25,0 агар0,65-0,70

агар0,65-0,70

пептон14,5-15,0

П р и м е р 4. Питательную среду Автофизат приготавливают следующим образом: к 22,5 г гидролизата внутренних органов промыслов рыб добавл ют 9,75 г лактозы, 4,75 г натри  хлористого, смесь раствор ют в 700 мл дистиллированной воды , затем к ней добавл ют 0,68 г агара, растворенного в 200 мл воды, общий объм довод т дистиллированной водой до 1 л,

Тщательно перемешивают, устанавливают рН раствора 7,0-7.2 и подвергают стерилизации при 110°С в течение 20 мин (автокла- вирование). После стерилизации рН

питательной среды снижаетс  и становитс  равным 6,8-7,0.

П р и м е р 5. Модифицированную среду Автофизат готов т следующим образом: к 22,5 г гидролизата внутренних органов про0 мысловых рыб добавл ют 9,75 г лактазы, 4,75 г натри  хлористого, 14,5 г пептона, смесь раствор ют в 700 мл дистиллированной воды, затем к ней добавл ют 0,68 г агара , растворенного в 200 мл воды, общий

5 объем довод т дистиллированной водой до 1 л. Тщательно перемешивают, устанавливают рН раствора, равное 7,0-7,2, и подвергают стерилизации при 110°С в течение 20 мин (автоклавирование). После стерилиза0 ции рН питательной среды 6,8-7,0.

П р и м е р 6. Проведено изучение вли ни  ПС Автофизат, состав которой представлен в примере 4, на культурально-морфологические признаки

5 производчтвенных штаммов B.bifidum Ms 1, 791, ЛВА-3. В мазках культур, выросших в высоком столбике ПС Автофизат, микробы представл ют собой грамположительные палочки, характерным признакам которых

0  вл етс  раздвоение концов. Часто палочки образуют скоплени , напоминающие китайские иероглифы или оленьи рога. При выра- щивании на ПС Автофизат при температуре 37,5-38,0°С в первые сутки не

5 обнаруживаетс  роста, через 2-3 сут формируютс  колонии бифидобактерий в виде гвоздиков или комет, наход щихс  во взвешенном состо нии. При испытании модифицированной ПС Автофизат (добавление

0 пептона) обнаружено, что размер регистрируемых колоний бифидобактерий более крупный (пример 5).

Изучено также вли ние ПС Автофизат (состав указан в примере 4) на культураль5 но-морфологические особенности лактобацилл (Lplantarum 8-PA-3). Показано, что сохран ютс  типичные культурально-морфологические признаки данного штамма: грамположительные, в основном, пр мые

0 палочки с закругленными концами, расположенные беспор дочными скоплени ми и отдельными цепочками по 3-5. При выращивании в ПС Автофизат при температуре 37,5-38,0°С в первые сутки наблюдаетс  по5  вление точечных колоний, через 2-3 сут организмы образуют кометообразные колонии .

Таким образом, описываемый способ получени  основы микробиологических сред (на основе гидролизата внутренних орг;жов промысловых рыб) предусматривает использование дешевого отечественного сырь  - (Зелоксодержащих неутилизируемых непищевых отходов рыболовных промыслов , имеющихс  в стране в больших количествах (тыс чи тонн), процесс технологически прост, так как исключает использование дорогосто щих ферментов, предусмотренных способом-прототипом.

Описываема  питательна  среда Авто- физат проста в изготовлении, содержит доступные отечественные компоненты, не требует дорогосто щего оборудовани  дл  своего изготовлени , обладает свойствами

эталонных питательных сред дл  выращивани  бифидобактерийилакгоСацилл. (56) Справочник по микробиологическим питательным средам. Под редакцией М.М.Меджидова, Махачкала, 1989, с. 104.

Авторское свидетельство № 1513029, кл. С 12 11 1/20, 1988.

De Man P.S.Rogosa, M.Sharpe M.E.. J.Appl. Bacterlol, 1960, N 23, p. 130-135.

Ленцнер А.А., Лабораторное дело. 1967, №5, с. 301-302.

Лизько Н.Н., Шилов В.М., Лабораторное дело, 1979, № 7. с. 430-423.

Количество биомассы бифидобактерий и лактобацилл в ПС на основе гидролизата внутренних органов промысловых рыб в сравнении с контрольной ПС

Таблица 1

Таблица 2

Составы ПС, использованные дл  выбора оптимальных концентраций при выращивании бифидобактерий и лактобацилл

- Концентраци  гидролизата внутренних органов промысловых рыб в составе ПС представлена в средних значени х, полученных на основании данных примера 2.

Продолжение табл. 1

Таблица 3

Количество биомассы бифидобактерий и лактобацилл в ПС Автофизат в сравнении с эталонными ПС

Claims (3)

1. Способ получени  основы микробиологических сред, предусматривающий измельчение белоксодержащего сырь  промысловых рыб. гидролиз полученного гомогената о щелочной зоне в присутствии хлороформа при нагревании, последующее прогревание биомассы, осаждение нерэз- гидролизооанных белков и высушивание, отличающийс  тем, что в качестве белоксо- держэщего сырь  используют внутренние органы промысловых рыб. гомогенат которых смешивают с водой в массовом соотношении 1 : 1,5, и гидролиз ведут при 40 - 42 С в течение 2 - 2,5 сут. а прогревание - при 90 С в течение 5-10 мин.

2. Питательна  среда дл  культивиро- плни  микроорганизмов, содержаща  пи

тательную основу, лактозу, натрий хлористый, агар и водную основу, отличающа с  тем, что в качестве питательной основы она содержит гидролизат внутренних органов промысловых рыб с содержанием аминного азота 100 - 140 мг%, а в качестве водной основы - воду дистиллированную при следующем соотношении компонентов , г/л:

Гидролизат внутренних органов промысловых рыб с содержанием аминного азота 100-140 мг %20,0-25,0

Лактоза9,5-10,0

Натрий хлористый4,5 - 5,0

Агар0.65-0.70

Вода дистиллированна Остальное

3. Питательна  среда по п.2, отличающа с  тем, что она дополнительно содержит пептон в количестве 14,5 - 15,0 г/л.