RU1837888C - Способ регулировани половой де тельности млекопитающих - Google Patents

Description

сл

С

Изобретение относитс  к области животноводства , а именно к регулированию половой де тельности млекопитающих.

Цель изобретени  - повышение эффективности способа.

Пример 1. Провоцирование суперовул ции в инфантильных крысах женской особи.. . .

60 штук инфантильных самок крыс в возрасте 21 день, весом 7-8. граммов внут- рибрюшинно были подвергнуты обработке препаратам D-Phe6, Gln8-GnRH, растворенном в физиологическом растворе поваренной соли. В зависимости от вида обработки животные были разделены на несколько групп. В серии обработок, продолжавшихс  от одного дн  и до 8 дней, отпускали предварительные дозы пор дка Irg в день или дважды в день.

После завершени  обработок всех животных умертвл ли эфирным паром, их  ичники в результате операции были изь ты после наступлени  смерти. 24 часа спуст  после последней обработки. Анализ осуществл лс  визуально и на основе гистологических проб. В  ичниках контрольных животных было найдено множество фолликул , наход щихс  в развитии, однако ни один фолликул не достиг размера фолликула Граф а, не было также ни желтых тел, ни Corpus haemorrhagicum. В противоположность , этому, во всех обработанных группах можно было обнаружить гормональное действие , которое сказывалось в росте фолликул , в преобразовании в фолликулы Граф а, в овул ции больших фолликул и в образовании нормальных желтых тел. Яйцевод и матка были также увеличены. Из 60 обработанных животных всего 4 не показали реакции на обработку. У животных, которые в течение 4 дней ежедневно получали дважды дозу в количестве 2 мкг аналога GnRH и на

00

со ч

00 00 00

со

4-й день были подвергнуты обработке в течение 6 часов дозой в количестве 10 мкг после того, как они получили дозу 2 мкг. в  ичниках были в большом количестве разм гченные фолликулы Граф э, наход щиес  непосредственно перед овул цией. Число окончательно созревших фолликул Граф а в день находилось в пределах между 60 и 90, в то врем  как в случае выросших животных нормальна  величина составл ла 12. Вторую группу животных обрабатывали, подобным же образом, с тем отличием, что обработка продолжалась свыше 6 дней. В случае этой группы эффективность суперовул ции оценивали по числу нормальных желтых тел, по вившихс  в  ичниках. Аналогично результатам, описанным подробно выше, количество желтых тел на каждое животное в день здесь также находилось в пределах между 60 и 90. Гистологический анализ подтвердил этот результат в достаточно полной мере.

Пример 2. Провоцирование суперовул ции на инфантильных самках мышей.

Аналогичным образом, как это описано в примере 1, были подвергнуты обработке в общем 105 самок мышей, которые имели возраст 28 дней и вес 5-6 г. Животные, обрабатываемые в течение 1-8 дн§й, еже

г. . ..-- ,.- g -Q

дневно получали 1-5 rg D-Phe , Gin , Gly - GnRH-этиламида. Между отдельными обработками интервал составл л 4 часа. Яичники были удалены через 27 часов после последней инъекции.

Яичники контрольной группы имели ма- тово-желтый цвет и гомогенную структуру, в некоторых  ичниках находились 1-2 растущих фолликул. В группах обработанных животных на всех  ичниках, увеличенных  йцеводах и матке можно было наблюдать действие гормона, У животных, которые ежедневно один раз получали дозу 1rg, а на 3-й день, через четыре часа после получени  дозы 1 мкг названного аналога GnRH, в  ичниках были обнаружены окончательно созревшие , нащупываемые волнистые фолликулы Граф а, а именно, на каждое животное по 45-70 штук. В группе, которую обрабатывали аналогичным образом, но в течение 5 дней, на месте фолликул Граф а образовались нормальные желтые тела в вышеназванном количестве. Результат гистологического исследовани  соответствовал визуальной оценке.

Эти результаты  вились подтверждением результатов способа согласно примеру 1.

Пример 3. Провоцирование супер- овул ции на инфантильных кроликов,

20 молодых кроликов породы белый жемчуг, родившихс  в услови х массового

0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

содержани , в возрасте 42 дней подвергались обработке в течение 3 дней ежедневно дважды внутрибрюшинно, каждый соответственно 5 мкг D-Phe6, Gln8-GnRH. Затем животных разделили на две группы. Первую группу на 4-й день обработали биологически активным веществом в количестве 50 мкг, другую группу умертвили с помощью эфирного пара. Число зрелых фолликул Граф а в группе, умертвленной до обработки, служило в качестве контрол  при установлении изменени , наступившего вследствие дозы 50 мкг. У оставшихс  в живых животных наступление овул ции прослеживали на двух животных в результате лапароскопического исследовани  (отражение брюшной полости), осуществл емого в течение 10 часов , под наркозом. Обработка посредством 50 мкг через 26 часов привела к тому, что у каждого животного отмечалось 30-45 овул ций или Corpus haemorrhagicum в то врем  как  ичники контрольных животных были не активны.

Посредством этого способа уже из инфантильных экземпл ров кроликов можно было получить зрелые  йцеклетки и увеличить их число в расчете на физиологическую величину.

Пример 4. Провоцирование суперовул ции на инфантильных свинь х.

20 инфантильных самок порос т, в возрасте 100 дней подвергались обработке в течение 6 дней ежедневно, дважды внутримышечно посредством соответственно 10 мкг , Gin -GnRH. Дл  анализа из контрольных животных удалили соответственно  ичник, методики исследовани  соответствовали методикам, описанным в примере 3, число образованных фолликул Граф а сравнивалось с числом желтых тел, образованных после овул ции. Наступление овул ции наблюдали с помощью лапароскопа. Дозы , отпущенные на 7-й день, в количестве 100 мкг D-Phe6, Gln8-GnRH через 41 час вызвали у 10 порос т, подвергнутых обработке 15-36 овул ций. Обработка инфантильных порос т привела к такому же результату, как и в случае видов животных, названных в примерах 1-3.

Пример 5. Провоцирование суперовул ций на инфантильных овцах.

10  гн т женских особей, в возрасте 50 дней,в течение 5 дней ежедневно обрабатывали дважды внутримышечно препаратом D-Phe6, Gin8, Gly -GnRH-этиламидов в количестве 10 мкг. Дозас биологически активного вещества в количестве 70 мкг, отпущенна  на 6-й день, вызвала у каждого животного овул ций. У контрольных животных не наступило никакого изменени .

Аь ализ осуществл лс  как на обработанных животныхдак и на контрольных животных пс средством лапароскопии. Эти результаты ее ответствовали тем результатам, которые били описаны в примерах 1-3.

Пример 6. Провоцирование супер- огул ции на инфантильном крупном рога- тс м скоте.

8 инфантильных тел т, в возрасте 65 дней, были подвергнуты обработке ежедневно в течение 8 дней посредством п эепарата D-Phe6, Glne, С1у10-СпВН-этила- м/да в количестве 2 мкг. После одного дн  пэрерыва, на 10-й день животным внутримышечно вводили 100 rg биологически ак- Т1вного вещества. После последней v. нъекции были удалены оба  ичника; в общем , в каждом  ичнике были найдены примерно 5-11 развитых фолликул Граф а. Половина этих фолликул не нащупывалась больше как твердые, следовательно, они находились непосредственно перед овул цией .

Этот эксперимент доказывает, что в случае крупного рогатого скота уже из инфантильных животных можно получить несколько зрелых  йцеклеток, в то врем  как взрослое животное овулирует обычно лишь одну  йцеклетку.

Пример 7. Провоцирование сперматогенеза у зубра, олигоспермического {следствие сезонного периода, с целью г олучени  э кул та, пригодного дл  искус- (твенного охлаждени  и дл  хранени  в ус- /)ови х глубокого охлаждени .

От зубра, наход щегос  в зоологиче- ком саду, весом около 700 кг, в мае мес - е была вз та под наркозом проба спермы шектрическим способом. Было установ- ено, что вол находилс  в состо нии оли- оспермии, обусловленной сезоном. Симптомы были следующие: в поле зрени  шкроскопэ, обычно используемого дл  исследовани  спермы, с 1 500-кратным увеличением , число сперматозоидов было 5-20, удержание дефектных сперматозоидов составл ло 75-80%, а плотность спермы-0,5. Сперма такого качества непригодна дл  оп- юдотворени ,

Животное было подвергнуто обработке посредством инъекционного прибора, ра- Зотающего на сжатом воздухе), дважды в делю препаратом D-Phe ,Gln -GnRH в соличестве соответственно 200 мкг. На 55-й цень обработки это животное дважды, с интервалом в один час, доводили до сем из- зержени . Оба э кул та были соединены вместе; плотность составл ла 4, подвижность 55%. Сперма была подвержена глубокому охлаждению, а затем в результате

глубокого охлаждени  определ ли наступившее снижение подвижности. Оно составл ло лишь 5%.

С помощью этого способа удалось ока- 5 зывать вли ние на сперматогенез племенного животного таким образом, чтобы вместо э кулата, непригодного дл  оплодотворени , можно было получить сперму хорошего качества, пригодную как в свежем

0 состо нии, так и после хранени  в услови х низкой температуры дл  оплодотворени  нескольких коров (всего 14).

Примерв. Провоцирование сперматогенеза у красных (рыжих) лис, наход 5 щихс  в состо нии олигоспермии, обусловленной сезоном (vulpes vulpes).

На сперматогенез рыжих лис, содержащихс  в зверинцах (охотничьих угодь х), которые находились в олигоспермическом

0 состо нии, обусловленном сезоном, оказывали вли ние с той целью, чтобы обеспечить искусственное оплодотворение черно-бурых лис и голубых песцов, содержащихс  в случном пункте, дл  того, чтобы получить

5 особые и высококачественные гибридные меха. Из специальной литературы известно, что все подвиды лис лишь один раз в год наход тс  в состо нии течки, и кроме одного этого периода половые железы обоих по0 лос  вл ютс  полностью неактивными. Между течкой отдельных подвидов существует разница во времени пор дка нескольких мес цев (рыжа  лиса:  нварь; голубой песец: апрель до ма ). Результаты исследо5 ваний сравнивали с изображением спермы попул ции, наход щейс  в сезонной течке, у которой среднее количество э кулата составл ло 2 мл, плотность 3, а подвижность 50-60%. Это рассматривали как физиологи0 ческую величину.

П ть половозрелых самцов рыжих лис, весом в среднем 8 кг, обрабатывали, начина  с апрел , в течение 7 недель, дважды в неделю, посредством препарата D-Phe6,

5 Gin-GnRH в количестве 1, 5, 10, 50 мкг. На 3-й неделе после начала обработки были изъ ты пробы спермы. В этих пробах число сперматозоидов составл ло примерно 60-70% физиологической величины, число

0 дегенерированных сперматозоидов превышало 40%. Дефектные формы были в основном формы мужских особей (капли плазмы на средней части шейного отдела). На 7-й неделе после начала обработки под нарко5 зом снова собрали э кулат. От всех животных можно было успешно вз ть сперму, объем э кулата составл л пор дка 1,2 мл и 3,1 мл, плотность находилась в пределах 3. подвижность -65%, численно значительно превышала физиологическую величину4

(Самцы к этому моменту были отделены от самок, дл  опорожнени  посредством копул ции не было возможности). Пробы спермы в зависимости от качества были разделены на группы и охлаждены в услови х низкой температуры. После разведени  и глубокого охлаждени , а затем после оттаивани  (размораживани )подвижность спермы, охлажденной до -196°С, составл ла 45%. При применении спермы, подвергнутой глубокому охлаждению, можно было - при исполь- зовании программировани  GnRH (см.пример 17) и техники искусственного оплодотворени  - обеспечить нормальную беременность у голубых, песцов,

В результате однократного отбора э ку- лата, производимого у п ти лис, можно было получить 56 доз спермы, пригодной дл  оплодотворени . Така  техника приемлема дл  получени  ценных мехов на крупных фермах.

Пример 9. Стимулирование физиологической нормоспермии на бенгальском тигре дл  получени  гиперспермии, позвол ющей глубокое охлаждение.

Бенгальский тигр, наход щийс  во владении зоопарка, в возрасте 8 лет, имеющий вес около 200 кг, регул рно спаривалс , его самка прежде каждый год была беременной . Зна  об этом, от тигра под наркозом электрическим путем в период спаривани  была вз та проба спермы. Было установлено , что плотность спермы составл ла 3, подвижность 30%, а количество э кулата 0,2мл. Э кулат показывал картину физиологической нормоспермии. Такое небольшое количество э кулата нельз  было подвергать глубокому охлаждению по техническим причинам. Дл  того, чтобы избежать повреждени  печени, наркоз можно осуществл ть максимально через каждые 4 дн  и поддерживать максимально в течение 4-5 часов. Такой способ сбора спермы  вл етс  неприемлемым.

Самца закрыли в отдельную клетку и в течение 12 дней ежедневно обрабатывали препаратом этиламида в количестве 10 мкг. Это биологически активное вещество было растворено в 1 мл физиологического раствора поваренной соли, и его примен ли внутримышечно посредством прибора дл  инъекций, работающего, на сжатом воздухе. На 12-й день это животное под наркозом, электрическим путем, дважды, с интервалом в один час, было доведено до сем извержени , при этом было получено 1 мл или . 0,8 мл спермы. Плотность соединенных проб составл ла 4, подвижность находилась в пределах 70%. Пробы спермы были охлаждены в услови х низкой температуры и разделены на 21 отдельные дозы дл  искусст- венного оплодотворени , После размораживани  спермы подвижность составл ла 60%.

Таким образом, от бенгальского тигра

можно было получить в достаточном количестве сперму, подлежащую хранению в банке спермы.

Пример 10. Яичниковое торможение

0 на львах с целью контрацептации.

В зверинцах всего мира среди крупных хищных животных показывают льва. Дл  различных панорам и Safari-парков требуетс  оба пола показывать одновременно, в

5 одном и том же жизненном пространстве. Среди крупных хищных животных лев  вл етс  единственным, который хорошо размножаетс  в неволе при достаточно хорошем питании. Вследствие абсолютного

0 насыщени  рынка львов желательным  вл етс  разработка способа предупреждени  от беременности, который будет безопасным дл  животного, не будет вызывать никаких изменений в его внешнем виде

5 и его поведении, и несмотр  на спаривание, способствующее по влению потомства, предупреждать беременность. Предохранение от беременности на основе сексуальных стероидов приводит к болезненному ожире0 нию и к потере демонстрационного значени  животного.

Интактна  плодовита  львица, наход ща с  во владении зоопарка, весом около 200 кг, котора  уже п ть раз приносила при5 плод, каждые три недели была подвергнута обработке дважды посредством D- Phe ,Gln -GnRH, а именно сначала в количестве 50 мкг, через 4 часа - в количестве 500 мкг, а затем была выдержана пауза в три

0 недели. Така  обработка, продолжающа с  каждые три недели, осуществл лась от начала течки до 50-го дн  после окончани  момента течки, характерного дл  этого вида (то есть от апрел  до августа). У животного

5 было нормальное поведение, и оно спаривалось регул рно, данный самец, согласно исследованию , был нормоспермический. Львица в течение периода обработки не была беременной, и ни в ее поведении, ни в ее

0 внешнем виде не наблюдалось отклонени  от нормы,

Пример 11. Индуцирование половой де тельности подсвинок женских особей на откорме, наход щихс  в услови х массового

5 содержани  в половом созревании, с целью первичного стимулировани  состо ни , готового дл  зачати .

В услови х массового содержани  отмечаетс  стремление к тому, чтобы животных, предусмотренных дл  сохранени  погоrv PI

П

лсвь , племенных, как можно быстрее исльзовать дл  разведени , а также синхронизировать дл  оплодотворени  и опороса в ш тересэх приспособлени  к непрерывной технологии, Активность половых, желез

дсвинок женских особей, наход щихс  на массовом содержании и расположенные в

зультате интенсивного кормлени  к быстрому росту, в препубертанный период и в

риод полового созревани   вл етс  неустойчивой (лабильной), поэтому встречает- Cf редко и рассе нно по всей попул ции, - ее сто ние, собственно, готовое к зачатию последовательно позднее от одной бере- мрнности.

Дл  цели эксперимента на одной стан- щ||и по выращиванию молодн ка подсвинок 200 будущих свиноматок, имеющихс  в

спор жении. были выбраны 60 животных учетом наилучшего развити , самой луч- ш эй способности оценки кормов. Их иногда pi здел ли на две группы, соответственно, по 30 животных. Обе группы животных не кс рмили, ни поили в течение 24 часов, также в соответствии с технологией, имеющей мео на этой станции. Животных к моменту их вфбора внутримышечно обрабатывали прератом D-Phe6,Gln8-GnRH, растворенным

физиологическом растворе поваренной сс|ли. Инъекции с дозами соответственно 20 мсг названного соединени  повтор лись еме дважды с интервалом 24 часа. Как в необработанной контрольной группе, так и в бработанной группе состо ние, готовое к

чатию, наступило у первого животного через 5 дней после выбора животных. Обе rf уппы содержались в одном помещении, в

инаковом жизненном пространстве, при идентичных услови х в течение 26 дней, доскаемых технологией, В течение этого пеода из контрольной группы, которую не

двергали обработке, 3 животных (10%, а обработанной группы 21 животное (70%)

успешно достигли состо ни , способного зачатию. Успешными считались лишь1 те учаи, в которых состо ние, способное к

зачатию, последовало от нормальной €ерем гнности и родов.

В этой серии опытов цель не распрост рон лась на точное установление момента опул ции, потому что не имелось в распор - жэнии достаточного количества племенных хф ков. Поэтому цель состо ла в том, чтобы ервое успешное состо ние, способное к з|чатию, было обеспечено в течение 26 дней, Содержание 10% беременных животных а контрольной группе соответствовало средней производственной величине. Поэтому увеличение на 60%, по вившеес  в результате обработки, означает существенный экономический эффект.

Пример 12. Устранение отсутстви  течки, обусловленной сезоном, у взрослых 5 лесных котов (Fells silocstris).

Две самки лесных котов, наход щихс  во владении зверинца, имеющие средний вес 6 кг, цикл которых при естественных услови х приходитс  на мес цы фев0 раль/март, подвергали обработке в августе посредством D-Phe6,Gln8, препарата Gly10- GnRH-этилэмида. Перед обработкой дл  проверки состо ни  обоих  ичников под наркозом была открыта брюшна  полость.

5 После того, как брюшную полость снова зашили, животных, при выдерживании паузы в два дн , в общем четыре раза обрабатывали биологически активным веществом, который примен ли внутримышечно, рас0 творенным в физиологическом растворе поваренной соли. Между первой и второй инъекцией выдерживали паузу в два часа; перва  доза составл ла 100 мкг, втора  500 мкг.Через 48 часов последовала треть 

5 доза - 100 мкг, а еще через следующие два часа - четверта  доза (500 мкг). На 0-й, 2-й, 4-й и 8-й день под наркозом вскрыли брюшную полость, изменение состо ни   ичников оценивали визуально. После за0 вершени  обработки, оба  ичника были удалены в результате операции, зафиксированы и подвергнуты гистологическому анализу .

На 0-й день в случае обоих животных в

5 левом  ичнике можно было увидеть 3-4 предполагаемые вторичные фолликулы, оставшеес  старое желтое тело, и в правом  ичнике 5-6 предполагаемых вторичных, фолликул. В результате обработки через 4

0 дн  все вторичные фолликулы развились, превратившись в фолликулы Граф а, состо лась овул ци , а на месте фолликулы находились Corpora haemorrhagica, на пути превращени  в желтое тело. Нар ду с

5 Corpora haemorrhagica росли в визуально не учитываемом количестве вторичные фолликулы, которые в результате воздействи  вторичной обработки продолжали развиватьс , а после применени  последней

0 дозы в количестве 500 мкг были атретизиро- ваны посредством интрафолликул рной лю- теинизации. Визуальные доказательства в полном объеме были подтверждены гистологическим анализом.

5 Овул ци , наступивша  в результате описанной обработки, доказывает, что у вида кошачьих можно достичь оплодотворени  также и вне сезона, и вне естественном содержании также можно обеспечить получение потомства.

Пример 13. Обработка самки голубого песца, наход щегос  в периоде отсутстви  течки, обусловленной сезоном, с целью стимулировани  течки, обеспечивающей получение потомства.

Самка голубого песца, наход ща с  в периоде отсутстви  течки, обусловленной сезоном, была подвергнута исследованию в декабре, под наркозом, посредством лапароскопа . Было установлено, что оба  ичника были неактивными и не содержали развивающихс  фолликул или фолликул Граф а.

Это животное в течение 10 дней ежедневно обрабатывали дважды внутримышечно посредством D-Phe , Gin -GnRH в количестве 1-5 мкг. На 10-й день под наркозом снова повторили лапароскопическое исследование. В обоих  ичниках находились большие желтые тела, число которых - вследствие недостаточности технических возможностей можно было оценивать лишь приблизительно - составл ло 10-20. Одновременно было установлено, что шейка матки была открыта.

Точно также в декабре подвергали обработке самку, которую вследствие грудной атрофии нужно было исключить из числа выращиваемых животных; обработку осуществл ли аналогичным образом, ежедневно дважды посредством соответственно 2 мкг препарата D-Phe6, Gin -GnRH. Действие обработки прослеживали по изменению состо ни  шейки матки. На 6-й день после первой обработки шейка матки открылась. Потом была отпущена доза в количестве 50 мкг. Через 16 часов состо ние  ичников исследовали посредством отражени ; овул ци  предсто ла непосредственно. Теперь брюшную полость полностью открыли,  ичники были удалены в ходе операции, а из общего количества 11 фолликул Граф а  йцеклетки были удалены в результате пункции . Было найдено 6 нормальных  йцеклеток , покрытых нормальной.

С помощью этого способа было обеспечено получение  йцеклеток, пригодных к оплодотворению в лабораторных услови х, эмбрионов в период отсутстви  течки в половом цикле, обусловленного сезоном, без нарушени  нормального годового цикла. Это позвол ет получать особое гибридное потомство при использовании менее ценных животных - реципиентов,

Пример 14. Стимулирование функции  ичников инфантильных домашних кошек (Felts cattus domestlcus) посредством D- Phe6,G ne-GnRH.

5 молодых кошек в возрасте 45 дней, вес которых составл л примерно 0,3 кг, были подвергнуты обработке, через интервал в

два дн , четыре раза посредством препарата D-Phe6,Gln8-GnRH в количестве, соответственно . 100 мкг. Биологически активное вещество было растворено в физиологическом растворе поваренной соли и примен лось внутримышечно. После окончани  обработки под наркозом оперативным путем удалены оба  ичника и подвергнуты визуальному анализу. Затем  ичники

0 фиксировали в формалине и подвергали гистологическим исследовани м. В обоих  ичниках имелось 5-7 штук Corpus haemorraglcum. Под корой были найдены хорошо отдел емые от светлого цвета сливоч5 ного масла,  ичника, находившиес  в развитии фолликулы, некоторые из них имели размер фолликул Граф а.

Эти результаты однозначно свидетельствуют о том, что  ичник еще инфантильных

0 домашних кошек в результате действи  описанного способа обладает гистологическими и морфологическими свойствами, характерными дл  половозрелых животных. Таким образом, животное перед биологиче5 половой зрелостью, понимаемой в обычном смысле, становитс  пригодным дл  того, чтобы получить (от него)  йцеклетки , способные к оплодотворению In vitro (в лабораторных услови х),

0 Пример 15, Стимулирование функции  ичников инфантильных домашних кошек посредством D-Phe6, Trp , leu8-GnRH.

5 молодых кошек в возрасте 45 дней, имеющих вес около 0,3 кг, были обработаны

5 с помощью препарата D-Phe6,Trp, Leu8- GnRH, Перед обработкой левый  ичник был . удален оперативным путем. Животным через интервал в 2 дн  в общем трижды отпускали дозы соответственно 100 мкг в виде

0 раствора, приготовленного в физиологическом растворе поваренной соли; дозы вводили внутримышечно. После завершени  обработки был удален в результате операции оставшийс  (правый)  ичник, подверг5 нут визуальному анализу, а после фиксировани  - гистологическим исследовани м .

Перед обработкой  ичники, удаленные оперативным путем, были полностью гомо0 генные и имели цвет сливочного масла, развивающиес  фолликулы было невозможно заметить в них ни визуально, ни в результате гистологического исследовани . После обработки в  ичниках были найдены 7-8

5 штук Corpus haemorrhaglcum и много (не поддающиес  учету) фолликул , наход щихс  в развитии.

Этот результат подтвердили данные, полученные согласно примеру 14, в полной мере также и дл  другого аналога гормона,

способствовал углублению практических аний относительно физиологии следуюго цикла  ичников.

Пример 16. Стимулирование примор- альных (первичных) фолликул инфантиль- 5 х домашних кошек.женских особей. (Fells ttus domesticum).

5 молодых кошек в возрасте 45 дней, торые имели вес приблизительно 0,3 кг жда , обрабатывали посредством D- 10 е , Gln8-GnRH. Перед обработкой под ркозом был оперативным путем удален вый  ичник. Затем эти животные в тече- е 3-х дней, ежедневно, три раза через тервзлы в А часа, в общем дев ть раз, лучали соответственно 0,1 мкг биологиче- и активное вещество, внутримышечно, в де суспензии, приготовленной с физио- гическим раствором поваренной соли и опиленгликол . После завершени  обра- 20 тки оставшийс   ичник был удален опера- вным путем, подвергнут визуальному ализу, а после фиксации-гистологиче- им исследовани м. Визуально оба  ични- были гомогенны, и имели цвет сливочного 25 ела, обработанный  ичник был несколько льше. В необработанных  ичниках гисто- гически можно было восприн ть только шь примордиальные фолликулы, в то вре- как на поверхности разреза обработан- 30 ix  ичников было зарегистрировано исчислимое количество (несколько сотен) ход щихс  в развитии фолликул, показы- ющих различные стадии образовани  ан

15

ума.

С помощью этого способа удалось обес- чить одновременную стимул цию не- ольких сотен примордиальных фолликул чника.

Пример 21. Получение  йцеклеток упного рогатого скота с целью выращива-   эмбрионов в лабораторных услови х (in го) из культуры органа post mortum.

5

10 0 5 0

Из животных, 30-55 минут спуст  после того, как их убили и обескровили на бойне, были удалены интактные (неповрежденные)  ичники, и в лабораторных услови х уложили в комплексный; Adjuvant.

К питательной жидкости в концентрации до г/мл добавили D-Phe6, Glri8, препарата GlylO-GnRH-этиламидэ. Яичники , выдерживаемые в культуре органа, ову- лировали в течение 16-43 часов. Из  йцеклеток, полученных из  ичников в результате in vitro спонтанно осуществл емых овул ций и последующей пункции, 85% были способны дл  продолжени  мейоза (вос- 15 становительного делени  клетки), и их можно было успешно оплодотвор ть посредством хранимой спермы крупного рогатого скота in vitro. Первые два делени  клетки оплодотворенных in vitro  йцеклеток можно было наблюдать в культуре.

С помощью этого способа была создана возможность так же, как и при распространенной в мире технологии искусственного оплодотворени  у крупного рогатого скота, искусственно оплодотвор ть непосредственно живые эмбрионы, то есть трансплантировать . На бойн х имеетс  возможность получени  такого количества эмбрионов, которое в значительной мере превышает потребность .

Claims (1)

1. Формула изоСретени 

   Способ регулировани  половой де тельности млекопитающих путем введени  соединений GnRH-типа, отличающий- с   тем, что, с целью повышени  эффективности способа, в качестве соединений GnRH-типа используют полипептид ylp- His-Trp-Ser-Tyr-Xi-X2-X3-Pro-X4, где Xi - D-Phe; Ха - Тгр или Leu; Хз - Leu или Gin; Хд - Gly-NH2 или -NH-Et, (который ввод т в количестве 0,01-500 мг/кг с кратностью введени  1-25 раз и с интервалом введени  2 ч - 7 дней.

   5

   0