CN1007318B - 一种从哺乳动物获得适于自然或人工受精性产物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明系关于哺乳类产生适用于天然或人工受精的性产物的过程，即在动物出生前后、幼年期，青春期和成熟期以及在给定的情况下，通过调节其性器官的功能使之产生子代和数倍地增加产生性产物的能力，其生产水平远远高于各种系通常的平均水平。按照本发明，哺乳类动物可用下面的化合物处理，最少一次，最多60次。此化合物的分子通式为：

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-X₁-X₂-X₃-Pro-X₄

Description

本项发明讲述一种从哺乳动物产生适于自然和人工受精性产物的方法。该方法通过在动物出生前后，在其幼年期、初情期和成熟期的各个阶段控制动物性器官的活性而实现。在一确定条件下，从这些动物产生后代，而且，使性产物的量增加了几倍，远超过该动物种属的平均水平。

为了刺激性活性，并在家畜中诱导更多排卵，并使这些家畜保持繁育，正普遍使用各种激素产物，例如类固醇、促性腺激素。新近，则使用促性腺激素释放激素（Gn    RH）及它的某些超活性类似物。迄今所了解的诱导排卵的物质及方法只对已经成熟的，但由于一些原因而不能排出的卵有作用。它们能排除发生在正常周期过程中的一些障碍。这里通过某一单一的激素的作用，通过类似冲动的方式，因之而诱导排卵。现在，还不知道一些刺激卵巢的活动，并且刺激原窭和原卵泡的成熟，或者增加已开始发育的卵泡的数目的激素制剂及其制备方法。

现在，尚不知道这样一些制剂或方法，即能从未成熟的动物产生为受精准备的性产物，或者从上述产物在早期阶段停止成熟的动物中，或者来自完整动物活体外，或者来自死后动物的生殖腺产生为受精准备的性产物。

在几种处于不适条件的饲养动物中，或对某些非自然状态饲养的外来的，野生的和毛皮动物，导致一种退化，而有时它们性产物的产生将完全停止。迄今为止，在这些动物中，已知的激素制品一般说来已不起作用。

近来，由于引入种属特异的促性腺激素释放激素（Gn    RH）的衍生物[J.A.King    and    R.P.Millar，J.Biol.Chem.257，10722-28（1982）;N.Sherwood    etal，Proc.Natl.Sci.80，2794-2798（1983）]以及下述事实：技术文献报道，在睾丸和卵泡中存在各种促性腺激素释放激素（Gn    RH）因子[R.M.Sharpe    etal.，Nature    290，785-787（1981）;N，Dekel    etal.，Biol.Reprod.28，161-166（1983）]，已经提出了存在专一调节因子的思想，以及这些因子间相互作用的可能性。

我们所作出的鱼和鸟类专一性Gn    RH衍生物适用于生产性产物，甚至当鱼被捕获而不能正常繁殖的情况下也是如此。正如在已出版的匈牙利专利申请4457/83号所叙述的那样。这种作用是通过刺激卵泡生长而实现的。

本发明的目的在于设计出一种方法，从而可以刺激哺乳动物后代或动物的性器官的活性，刺激的方式是使所产生的性产物对于人工或自然受精是适宜的，而且对后代的繁育也是适宜的。本发明进一步的目的是增加雄性和雌性哺乳动物性器官中性产物的量，而且性产物的量远超过该种属的平均水平。

已知哺乳动物的Gn    RH具有如下顺序：

本项发明是建立在承认使用通式（Ⅰ）的化合物：

其中：

X₁系D-苯丙氨酰

X₂系亮氨酰或色氨酰

X₃系谷氨酰胺基或亮氨酰

X₄系甘氨酰、乙胺基

或其盐或其金属复合物可达到上述目的，就是说，适于自然和人工受精，准备用于受精性产物的那些东西便可产生，而且，在哺乳动物体内它们的量可能增加。以上哺乳动物指性尚未成熟的动物，或者它们处于未动情条件，或者，它们不动情条件是由于非自然饲养的动物，或者来自完整动物体外以及哺乳动物死后的性器官。

通式（Ⅰ）化合物的生产是以已出版的匈牙利专利申请第4458-83号和美国专利说明书第4410514号上得知的。

基于上述说明，本发明涉及一种产生对哺乳动物（在下文：媒介体）自然或人工受精适宜的性产物的方法。该方法通过在动物出生前后，在其幼年期，初情期和成熟期的各个阶段，控制动物性器官的活性而实现，在给定条件下，从这些动物产生后代，而且，使性产物的量增加了几倍并远超过该动物种属的平均水平。依照本项 发明，媒介体至少处理一次，最多60次，优选1-5次。处理使用通式（Ⅰ）的一种九肽烷酰胺或一种十肽酰胺，或其盐类或其金属复合物，它们的一次剂量为0.01-500微克/体重公斤，优选1-100微克/体重公斤，其中，至少要有2小时的间隔，最多7天，优选2-8小时，依具体的个体而定。

通式（Ⅰ）的化合物可优选用作溶液，粉剂，针剂或喷涂剂。给药方式可以是肌肉，腹膜（内），皮下，子官（内）等等。

依照本项发明，作为本方法的结果，性产物的量在某些动物种属是增加的，在其它动物（临床情形），减少或中止性活性则成为正常，并达到该种属的平均水平。本发明的方法适宜在性器官中引起高产，从而使性产物的量远超过该种属的特定水平。

在依照本项发明的方法中，通过迫使胚层上皮增加活性，则将增加射出精液中能动精子的数目。

依照本项发明的方法提供了一个造成一垂体过量的机会，它引起垂体不敏感，这是一垂体不动期。因此，本法还可用于避孕。

依照本项发明的方法，终产物可以在自然的，人工的以及实验室条件下产生。

由于在不同节律中施与通式（Ⅰ）的Gn    RH类似物，性器官的控制和上述功能是可以达到的。这是一个尚未发表的新现象。

依照本项发明的方法之主要优点如下：

a）.使用本方法，可使保持在非自然条件下的哺乳动物生殖腺活性得到改善，其功能可恢复到正常标准，因此，动物具有产生后代的能力。

b）.本方法适于诱导卵巢中的超量排卵。这使得可能增加所排卵的数目，排出的卵超出该种属特定排卵的数目。在体外受精后，则可以作为胚胎贮存起来，或在自然条件下可由接纳动物来实现。

c）.本方法适于诱导超量刺激，并因此在未成年的哺乳动物个体中诱发超常量排卵。因此，人们甚至可以在性未成熟时从一个媒介体获得后代。

d）.本方法适于在独特的实验条件下，以完整的卵巢由器官培养体外产生可受精的卵。因而，甚至在该媒介体死后，后代还可从具有高繁殖率的动物获得。

e）.通过传播根据本方法所获得的性产物，被大陆所隔开的种属间的杂交已成为可能。因而，可以产生新的家畜种类。

f）.本方法适于在工业型生产条件下，在任何年令组的雄性和雌性哺乳动物间产生大量卵、精子或胚胎，如可形成胚胎库，可形成后代的大陆间的新的分布。

g）.本方法适于免除季节性的不发情和被阻止的哺乳动物精子的发生。这种方法出生的后代可在任何季节繁殖，从而可能更好的利用现有的畜牧条件。

h）.本方法适于被保护的自然界稀有动物的人工繁育。

i）.本方法适于等同地反映雄性及雌性动物中垂体的不灵敏性。因此，可以避免不需要的（有害的）怀孕，甚至在已知不能使用避孕药的那些例子里。

依照本发明的方法将由以下非限定性的实施例作进一步说明。

实施例1

诱导未成年雌性大鼠超常量排卵

取重7-8克、21日令的未成年鼠60只，用在正常盐溶液的D-Phe⁶-Gln⁸-Gn RH腹膜内处理。按照它们经受的处理，动物被放到不同组里。在1-8天的一系列处理中，每天分别给1和2微克的剂量，每一次和两次。处理分别以5和10微克剂量告结束。

处理后，所有动物用吸入醚法致死，动物死后并在最后处理过后4小时，将它们的卵巢摘出。以目测进行评价，并对组织学也进行了评价。在对照动物的卵巢里;我们发现了一些正在发育的卵泡。但是，它们中没有一个具有Graf（格雷夫）氏泡囊状卵泡的大小，而且，既未能检测到黄体，也不能检测到红体。另一方面，在所有处理组里，均可看到激素的作用。根据卵泡的生长，根据它们的排卵，根据它们转换成Graf卵泡，以及规则黄体的形成，使其看上去相当明显。输卵管和子官的扩展也是明显的。60只动物中只有4只对处理无反应。在那些接受4天处理，每天二次2微克Gn    RH类似物处理组，第四天用2微克处理接着用10微克剂量处理的所有动物的卵泡中，排卵前可观察到大量柔软的Graf卵泡。排泄的最终成熟的Graf卵泡数在60和90之间，而在成熟动物中，则只达到12。对其它组动物使用相同的处理方法，区别在处理要持续6天。在这些组里，用规则的黄体数目鉴定超常量排卵。在这些组里，细节与上述类似，动物中携带黄体的数目在60和90之间。组织学的评价完全支持这里所达到的结果。

用以上详尽叙述的方法，首先，我们已可以完成由未成年动物产生成熟的卵。第二，与成熟动物中获得的数值比较、所产生卵和数目增加。

实施例2

诱导未成熟雄性小鼠超常量排卵

用在实施例1中所述的方法，共处理105只，5-6克重，28日令的雌鼠。经1-8天处理的动物每天给二次1-5微克的D-Phe⁶，Gln⁸，des Gly¹⁰-Gn RH。处理中保持4小时间隔。经最终处理后27小时，摘出卵巢。

对照组的卵巢呈暗黄色，可观察到均质结构，在一些卵巢中，还观察到1-2个正在生长的卵泡。在所有处理动物的卵巢里，扩展的卵巢和输卵管均显现出一种激素的作用效应。动物每天接受1微克剂量，共三次，在第三天用1微克剂量后4小时，接着给它们5微克的以上所述的Gn    RH。在它们的卵巢里，有最终成熟的Graf卵泡排出。而且，这些卵泡具有波纹状结构，每只动物数目在45-70。在经过5天处理的相同组里，在已计数为Graf卵泡的地方，形成了黄体。组织学的评价得出与目测评价类似的结果。

本项试验的结果支持了实施例1中所述的方法。

实施例3

诱导幼龄家兔超常量排卵

经腹腔给大规模农场饲养的20只42日龄的兰灰色纯种幼兔注射 5微克的D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物，每天两次，连续注射三天。然后将动物分为两组，其中一组在第四天用50微克活性成分处理，而另一组用乙醚蒸汽麻醉处死。记下该组中发育了的卵泡数为对照，以确定50微克剂量的有效性。从存活的给药组中选择两只动物，在麻醉状态下进行腹腔镜检，监测它们的排卵过程，历时10小时（腹腔镜所见）。与对照动物未活化的卵巢对比，用50微克剂量处理，26小时，每只动物分别多排30-40个卵和红体。

在幼龄兔中采用这一方法业已促使其产生成熟的卵，并且与生理值相比较，成功地增加了数量。

实施例4

诱导幼龄猪超常量排卵

于20只100日龄的雌性小猪，每天两次，每次肌肉注射10微克的D-Phe⁶-Gln⁸-Gn RH类似物，连续注射6天。在实验中，切下对照动物的一侧卵巢，并且采用实施例3中所述的方法，比较格雷夫氏卵泡和形成的闭锁卵泡的数目。通过腹腔镜，检测排卵的发生。于第七天注射100微克D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物，结果41小时后幼猪排出15-36个卵。这些动物的处理结果与实施例1-3中的描述相似。

实施例5

诱导幼龄羊超常量排卵

于10只50日龄的雌性羊羔，每天两次，连续5天肌肉注射10微 克的D-Phe⁶，Gln⁸，desGly¹⁰-Gn RH乙酰胺，第六天再给予70微克活性组分，结果，每只动物排出3-9个卵，而对照动物中未观察到变化。使用腹腔镜检测处理过的实验动物和未处理过的对照动物的情况，所得结果与实施例1-4中所列的情况相似。

实施例6

诱导小牛超常量排卵

用D-Phe，Gln，desGly-Gn    RH乙酰胺处理8只65日龄的小牛，每次用量为2微克，每天三次，连续处理8天。隔一天即第10天，每只肌肉注射100微克活性组分。最后一次注射后摘出两侧的卵巢，测得每卵巢中产生了5-11个发育了的格雷夫氏卵泡。50%的卵泡已经过了由密集到接触的阶段，也就是这些卵泡即将排卵。

这个实验证明，即使是幼龄动物，也能使之产生若干成熟的卵巢。相反地，未处理的成年动物在正常生理状态下只能产生一个成熟卵巢。

实施例7

治疗生理性缺精的黑猩猩以获得正常的精子

文献上常常报道，过着典型的小群体生活的动物种类，特别是灵长目类，尽管所有的群体居的雄性动物都有性欲，然而仅仅为首的一只才能交配，而其部属的雄性个体都患有生理性和可逆性的缺精症。在我们的实验中，为了进行人工受精，除了由为首雄性个体 获取精子并贮存于精子库外，还特地采集4个部属雄性个体（都是性成熟者）的精子。开始处理之前，在麻醉状态下，通过电刺激使所有的动物射精。并且在显微镜下估计精液的密度和能动率，然后置于深冻探针之下（-196℃）。在我们以前的精液学工作中我们已经发现不易鉴别的有缺陷的精子在深冻情况下不能存活。深冻后，顺利存活的精子的图谱表明精子的形成是按秩序进行的。处理前由所射精液确证这些雄性个体患生理性缺陷。此后采用压缩空气注射技术给60-90公斤重的雄性黑猩猩肌肉注射溶于1毫升标准盐溶液中的100微克D-Phe⁶，Gln⁸，des Gly¹⁰-Gn RH乙酰胺。于第一次处理后的第四星期，在麻醉状态下采集精液，经检验，它含有40-60%的幼稚精子，经深冻的精液能动率不到10%。首次活性物处理后第60天，在麻醉状态下用电手段获取的精液中有缺陷的精子的数目已降至30%以下，能动率超过60%。精液在数量和质量特性上与为首的雄性个体的精液相似，达到技术文献上公布的数值。

1∶1稀释精液后，深冻试验仍为阳性，能动率由60%降至45%。这种品质的精子，无论是新鲜的，还是冷冻的都十分适合于人工授精的目的。

采用这种方法可以从部属雄性个体采集到足够量的，品质令人满意的精子，它们可以贮存于精子库中，以备人工授精之用。

实施例8

诱导季节性的缺精性騣犎产生精子以收集适合于人工授精和深冻贮存的精液

来自动物园的騣犎，体重700公斤，在麻醉状态下用电法采集精子样品，检验证明此精液处于季节性缺精子态。其症状是：在放大1500倍的显微镜下捡测精子，精子的数目为5-20，有缺陷的精子达75-80%，精液的密度是0.5，这种品质的精子是不适合于授精的。

此后，采用压缩空气注射法给动物注射D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物，每周两次，每次用量200-2000微克。首次处理后第55天，在麻醉状态下，间隔1小时，使动物射精两次。混合两次精液，测得它们的密度是4，能动率为55%。将这样获得的精子深冻，检测了深冻造成的能动率降低，该数值仅为5%。

采用这种方法我们已经成功地以这样的方式诱导了动物的生精作用，即，运用这一方法所获得的精子是在新鲜或深冻情况下都适合于对雌性个体（14只）进行人工授精的高质量的精液，而不是不合适的精子。

实施例9

诱导患季节性精子缺少症的红狐狸产生精子

为了对农场大规模饲养的纯种的银白色和兰色的狐狸进行人工授精，以便产生高质量的杂色毛皮，我们业已偿试诱导动物园中患有季节性缺精症的红狐狸产生精子。从文献上获悉所有亚种的狐狸每年仅在一个季节中发生动情，其他时期两性的生殖腺完全是无活性的。不同亚种的非动情期可以相差几个月（红狐狸：一月;兰狐狸：四月或五月）。将试验结果都与处于非动情季节的群体加以比 较，后者精液的平均量是2毫升，密度为3，能动率为50-60%。将该值作为生理值。

试验期间，于四月份对5只平均体重为8公斤的性成熟的雄性红狐狸进行处理。连续七周，每周处理两次，每次用1，5，10和50微克的D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物。首次处理后的第三周采集精液样。经测定精子数目为其生理值的70%，无繁殖力的精子超过40%，大部分畸形精子都呈未成熟状（颈部和中部含原浆小滴）。首次试验的第九周后，再次让动物射精。由每只动物成功地获取1.2-3.1毫升的精液，其密度为3，能动率为65%，在统计上明显地超过了生理值（雄性动物与雌性动物隔离，使它们没有交配的机会）。将精液样按品质分组，然后深冻。将贮存于-196℃的精样解融并释放，其能动率为45%。采用深冻过的精子，结合使用Gn RH排卵方法（见实施例17）和人工授精技术，已成功地使兰狐狸怀孕。

使5只狐狸各射精一次，获得56份适合授精用的精子。这样，即为高质量的毛皮的生产贡献了工业化的技术。

实施例10

治疗由于生精的功能退化而引起不育的西伯利亚虎

动物园里一只120公斤重的8岁的西伯利亚雄虎已经与它的配偶生活了三年，在雌虎动情期内常发生交配，然而却没有产生子代。可以完全排除雌虎有毛病的可能性，因为早先它曾与另一只雄虎有过子代，而且子代抚育得很好。在麻醉状态下通过电手段从有 毛病的雄虎身上采集精液，证实其精液很稀，在每个视野里仅能见到4-5个退化了的、颤动的精子，其退化形式呈精子幼稚期的特征。此后，采用压缩空气注射技术每周对该动物肌肉注射一次溶于1毫升标准盐溶液的100微克的D-Phe⁶，Trp⁷，Leu⁸-Gn RH。同时雄虎仍与原配雌虎同笼，它们在处理期间仍进行规律性的交配。结果雌虎怀孕，产下三只健康的小虎。从分娩的时间推算，能育的交配发生在首次处理后的第40-50天。

这一发明方法适于治疗不育雄虎的精子发生退化症，而使之产生子代。

实施例11

刺激孟加拉虎产生超常量的生理性正常精子，以适于精子的深冻贮存

动物园里，一只体重200公斤的8岁龄的孟加拉虎多年来规率性进行交配，它的配偶也规律性的怀孕。据此，在交配季节，通过电刺激，在麻醉状态下采集精液样品，并检验证明样品密度达到3，能动率30%，精液量为0.2毫升，精子呈现生理性正常精子的图象。然而由于技术上的原因，这样少的精液进行深冻是不可能的。为了保护动物和不损伤其肝脏，最多每四天才可进行一次麻醉，而每次要控制在4-5小时。用这种方法收集精子是不可行的。在我们的方法中雄性与雌性分离，采用压缩空气注射技术，每天肌肉注射1毫升含10微克的D-Phe⁶，Gln⁸，DesGly¹⁰-Gn RH乙酰胺的标准盐溶液，持续12天。在第12天，在麻醉状态下，采用电手段使 动物射精两次，其间需间隔1小时。结果采集到1毫升和0.8毫升精液，混合两液并鉴定之，其密度为4，能动率为70%。精液样品深冻，按适于人工授精的剂量分成21份。解融后的精子具有60%的能动率。

用这一方法我们已经自孟加拉虎成功地获得明显数量和适于贮存于精子库的精子。

实施例12

治疗非先天性引起的猩猩的无精子症

一只18岁龄的体重350公斤的雄猩猩在幼龄期被捕捉和监禁于动物园。治疗前，它已三易其主。病历记载它从未有配偶，一直独居并从未交配过。在过去的11年它一直住在目前的地方，它既无同类伙伴也无配偶，它迟钝，完全无活力，表现出住院综合症。有人与动物园联系过并称，如果是Bornean亚种并有生育力，可以将它买下。染色体试验表明该动物属于极为稀有的Bornean亚种（全世界共存活153只）。病历中怀疑其无生育能力的一个理由是它缺乏典型雄性灵长目动物的攻击性并且在以前5-6年“医院”生活中中止了有规律的手淫。在麻醉状态下用电手段从动物身上采集精液样品。在付性腺的精液分泌中，仅仅在三处发现少量精液，共有0.1毫升。在精液中没有发现活动的精子，并且总共只看到几个无活力的精子（在10个显微镜视野中只有1-2个精子）。

此后，用10微克剂量的D-Phe⁶，Gln⁸，des Gly¹⁰-Gn RH乙酰胺处理动物，每周处理两次，其方法如同实施例11。在治疗期 间，动物的运动更有生气。然而这并不是由于性欲的增长，因为启动气枪注射器有时也会使它恐惧而变得活跃。在首次注射后的第47天结束治疗，在重新麻醉的情况下，间隔1小时，采集两次精液。以此方法共取得3.2毫升精液。精子密度为3，能动率为35%，退化精子的数量达20%，实际上完全由幼稚的发育形式构成（颈部和中部含浆滴）。

因为该动物极为珍贵，并且为了防护实施麻醉和射精的工作人员的安全，停止了治疗。买主可以由调节过的精子照片得到满意的答案，这些精子在特性上与有生育能力的灵长类的精子相似。

用上述方法我们液已矫正了极为有价值的稀有动物的生育能力。我们在保存它的精子上也获得成功，它已成为出现于国际市场上的基因库。

实施例13

抑制狮子卵巢以进行避孕

全世界的动物园里，通常都展出大捕食动物狮子。在各种包罗万象和安全的安排方案中，把两性关在同一居室，放在一起展出是必需的。在捕食动物中狮子是唯一能在监禁下，在有足够食物条件下很好繁殖的动物。由于“狮子市场”达到饱和，因此制定出避孕的办法是适宜的，而这类办法应不危及动物，不引起表现和行为的改变，而且又能防止动物因交配而受孕。甾族类激素的避孕法会使动物在短期内不宜展出（异常的肥胖）。

在我们的方法中，一头属于动物园的，无疾患而有生育力的雌 狮得到处置。这头狮子体重200公斤，一生中已生过五胎小嵬。每三周用D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物处理两次。处置的时间安排是，先给以50微克的剂量，再给以500微克的剂量，然后再停药三周。从动情期开始（四月份）直到该种系典型的动情期结束后50天（八月份）为止，都按上述方法进行处理，即每三周给药两次。该动物行为正常，在动情期内有规律地进行交配。经检查其配偶精子正常。然而治疗期间该动物并不怀孕，而且其行为和表现均无异常。

实施例14

在工业化农场条件下，诱导初情期母猪发育

在工业化农场条件下，为了补充牲畜，要让种猪早些繁殖，同时要尽可能同步地受精和生育，这才能适应工业化农场的技术。由于牲畜是大群体强化饲养，长得快，所以这些处于前初情期和初情期的母畜的性腺活力是不稳定的。并且由于这个原因，能最后造成生殖的发情很少，在牲畜群中仅有零星的发生。

在我们的试验中，根据是否最有生长活力以及用工业化技术确定的饲料的转化，我们从农场可供选择的200头母猪群中选择了60头种猪。这些动物随机分为两组，每组30头。同样依照工业化技术，两组均断食断水24小时。在挑选时给动物肌肉注射用标准盐溶液稀释的D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH同类物，然后间隔24小时重复注射一次20微克该同类物。未处置的对照组和处置组都在挑选后的第5天出现第一头发情的动物。两组动物都住在同一猪圈，同一个 空间，在工业化农场技术许可的相似条件下喂养26天。此间，未处理的对照组有3头动物（10%），而处置组有21头动物（70%）成功地发情。所谓成功的发情仅指那些能导致正常产仔的发情。

在本试验中，由于仅有少数公猪可用，因此一系列排卵的准确计时并不是目的。由于这个原因，这种处置的目的是在26天内造成了“第一流的成功的发情”。10%的母猪下猪仔可以认为是工业化农场生产的平均值，这样，处理结果增加到70%则意味着十分有意义的经济上的进步。

实施例15

治疗长期不育的灰鼠

于20只至少两年都不育的灰鼠，每天腹膜内注射两次D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物，每次10微克，连续注射三天。第四天各注射75微克Gn RH类似物，然后与雄鼠同笼。其中有12只雌鼠在4个月内产仔。

如下实验与上述处理平行进行，3只2年以上不育的毛皮珍贵的“黑色”突变灰鼠同时接受治疗。同样地，每天两次，每次用10微克D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物处理，最好通过腹膜注射，连续三天，第四天再给动物注射75微克Gn RH类似物。然后按常规与雄鼠同笼，在4个月内三只动物全部产仔。

用这种方法我们已经成功地恢复了皮毛珍贵但却长期不育的动物的生育能量。

实施例16

矫正成年野生猫（Felis    Silvestris）的季节性不动情

2只来自动物园的雌性野猫，平均体重6公斤，正常情况下动情周期在2月-3月之间。用D-Phe⁶，Gln⁸，des Gly¹⁰-Gn RH乙酰胺处理这两只猫。处理之前，在麻醉状态下，打开腹腔，观察两侧卵巢的情况。然后缝合切口，每两天总共四次肌肉注射标准盐溶液稀释的活性物。第一次剂量为100微克，第二次剂量为500微克，两次注射应间隔2小时。然后，48小时后进行第三次注射，剂量为100微克，再过2小时，进行第四次注射，剂量为500微克。在处理的第0、2、4、8天，麻醉后打开腹腔，观察和评价卵巢的变化情况。处理后移出两个卵巢，固定并进行组织学鉴定。

处理的第0天，两只动物的左侧卵巢可见3-4个（未验证的）次级卵泡和1个退化的、老的黄体、而右侧卵巢可见5-6个（未验证的）次级卵泡。作为处置的结果，四天后发现所有的次级卵泡都转化为格雷夫氏卵泡排出，在它们原有的位置上红体正转化为黄体。在红体旁边可见到难以计数的发育了的次级卵泡，这是再次处理导致的结果，卵泡进一步发育，最终，在用500微克剂量处理之后，卵泡随着内部的黄体化而闭锁。组织学检查完全支持了这些观察结果。

由上述处置导致排卵的事实证明，就猫来说季节外受精是可以办到的，甚至在未成熟的饲养的子代中也能诱导排卵。

实施例17

对处于非动情期季节的雌性兰狐狸进行处理使其产生可生育的动情

在麻醉条件下用腹腔镜检查处于十二月非动情季节的雌性兰狐狸，确证两侧卵巢均无活性，在其中未能见到格蕾夫氏卵泡的生长。

然后给动物肌肉注射1-5微克剂量的D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH同类物，每天两次，连续注射10天。至第十天，在麻醉状态下再次进行腹腔镜检查。结果发现，两侧卵巢均有很大的黄体，但由于技术所限，它它的数量仅能估计出，大约是10～20个。同时也确证子宫颈已经开放。

也是在十二月份，对一只因哺乳能力减退而被遗弃的雌性个体进行类似的处理，每天两次，每次用2微克D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物，并紧接着观察子宫颈的变化。第一次处理后的第6天，子宫颈开放。此时再用50微克活性物处理，16小时后，镜检卵巢的情况，发现卵巢正处于即将排卵的前期状态。然后仔细地打开腹腔，移出卵巢，用穿刺法从11个格雷夫氏卵泡中取卵，在放射性冠状履盖物下发现6个规则的、正常的卵。

采用上述方法，我们使得在体外产生受精卵和在非动情期产生胚胎而不扰乱正常性冲动成为可能。

此方法可以利用价值不高的受体动物生产出具有特殊价值的杂交动物。

实施例18

用D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物刺激未成年家猫（Felis cattus domesticus）的卵巢功能

5只体重为0.3公斤的45日龄的小猫用D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物处理，隔天一次，共处理四次，每次所用剂量为100微克，用标准盐溶液稀释后进行肌肉注射。处理后，在麻醉状态下取出动物两侧卵巢并进行观察检定。然后用甲醛固定卵巢，进行组织学试验。结果发现两侧卵巢均有5-7个红体，在硬壳物下发现了正在发育的卵泡，它与明亮的、黄油样色的卵巢有明显的区别。有一些卵泡已与格雷夫氏卵泡一般大小。没用活性物处理的动物不出现这些变化。

这些结果明确证明，用上述方法处理后，在进行组织学和行态学检查时，未成年的家猫将呈现性成熟动物所具有的特征。这样，动物在传统的性成熟之前就能产生体外受精所需要的卵。

实施例19

用D-Phe⁶，Trp⁷，Leu⁸-Gn RH类似物刺激家猫的卵巢功能

5只45日龄、体重0.3公斤的小猫，用D-Phe⁶，Trp⁷，Leu⁸-Gn RH类似物处理。处理之前麻醉切除左侧卵巢。然后每隔一天处理动物一次，共进行3次，每次肌肉注射100微克用标准盐溶液稀释的活性物。处理后再移出右侧卵巢，观察鉴定，然后固定，进行组织学检查。

处理之前移出的卵巢相当均匀，呈黄油色，无论肉眼还是组织 学检查均未检出其中有正在生长的卵泡。而处理之后的卵巢中，出现了7-8个红体和几个（无法计数）正在生长的卵泡。

尽管使用了另一种活性类似物，然而试验结果支持了实施例18中描述的结论，并且进一步证明一个事实，即可以出现生理学上卵巢发育的后发周期。

实施例20

刺激未成年雌性家猫（Felis    cattus    domesticus）的原始卵巢

5只45日龄、体重0.3公斤的小猫，用D-Phe⁶，Gln⁸-Gn RH类似物处理，其方法如下：麻醉后移出左侧卵巢，然后连续处理该动物三天，每天三次，每两次间隔4小时，总共进行9次处理，每次使用剂量为0.1微克，活性物悬浮于标准的盐溶液和丙烯-乙二醇中进行肌肉注射。处理后取出另一侧卵巢，肉眼鉴定，然后固定，进行组织学检查。先后取出的两个卵巢都呈黄油样色，看起来也都是均匀的，但是处理过的卵巢明显增大。在未处理的卵巢中仅看见并经组织学鉴定系原始卵泡，而在处理过的卵巢的切片上可见难以计数的（数百个）卵泡，它们已开始生长并且处于窦状结构的不同阶段。

采用上述方法我们已经成功地同时刺激了卵巢中数以百计的原始卵泡。

实施例21

由器官培养产生牛卵，以便体外培养胚胎

将屠宰场的一头牛打晕，放血，然后在30-55分钟内完整地取出卵巢，于实验室中将它们放入完全的培养液中。培养液中加入10^-9-10^-8克/毫升浓度的D-Phe⁶，Gln⁸，des Gly¹⁰-Gn RH乙酰胺，器官培养的卵巢孵育16-43小时后排卵。由体外培养的卵巢自动排出的卵和用穿刺法获得的卵当中有85%能够连续进行减数分裂（减数的细胞分裂），并成功地用优良的牛精子在体外受精。在体外培养下，可见到体外受精卵的头两次卵裂。

采用这种方法，我们创造了这样一种机会，即与业已在饲养业中广泛采用的人工受精技术相似，有可能分别进行人工受精和移植而获得活的胚胎。在屠宰场有可能用上述方法生产胚胎，这种方法很易达到工业生产的要求。

Claims (4)

1、一种产生适用于天然人工受精的性产物的方法，该方法包括在哺乳动物出生前后在幼龄期，动情期和成熟期调节其性器官功能，使之产生子代和数倍地增加性产物的产生量，并使其生产水平远远高于各种属通常的平均水平，其特征在于，哺乳动物用一种九肽烷基酰胺或十肽酰胺处理1-60次，此活性物质的通式为：

其中：

X₁为D-苯丙氨酰，X₂为亮氨酰或色氨酰，X₃为谷氨酰胺基或亮氨酰，X₄为甘氨酰或乙胺基，此外，也可使用此活性物质的盐类或金属复合物，使用剂量为0.01-500微克/公斤体重，个体处理的时间间隔为2小时至7天。

2、根据权利要求1的方法，其中哺乳动物用一种九肽烷基酰胺或十肽酰胺处理1-5次。

3、根据权利要求1的方法，其中所说的剂量为1-100微克/公斤体重。

4、根据权利要求1的方法，其中个体处理的时间间隔为2-8小时。