JPS6284026A - 性的生成物の生成方法、ならびにそれに使用する組成物の製造方法、および前記組成物の使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、噴孔動物の出生前の生命体、ならびに出生後
、即ち、動物の幼時期、青春期および成熟期における生
命体の生殖器官の活動を制御し、また、０＋Ｕ乳動物か
ら子孫をつくったり、生殖に関連する性的生成物の生成
率を、種の通常の生殖能力を超えて数倍高めるべく、哺
乳動物から、自然授精若しくは人工授精に適した性的生
成物を生成させるための方法に関する。

（従来の技術） 性的活動を刺激し、かつ主として家畜における排卵を誘
発させるため、通常、ステロイド、ゴナドトロピン（性
腺刺激ホルモン）、また最近では。

特にＧｎＲｌｌやそれの強力な類似体のような各種ホル
モンが使われている。

公知の物質および方法によれば、ある理由から排卵しえ
ない状態になっている成熟卵に限り、排卵を誘発するよ
うになっている。つまり、正常な周期中に起こる幾つか
の障害物を、単一の衝撃方式のようなホルモン効果を用
いて取り除き、排卵を誘発しつるようになっている。

今のところ、卵巣活動を全般に刺激し、かつ前腔卵胞お
よび原始卵胞の成熟化を促進するホルモン剤の製造方法
や１発育を始めた卵胞の数を増加させるホルモン剤の製
造方法は、知られていない。

また、未成熟の動物からとった性的生成物とか、このよ
うな生成物が、初期の段階で成熟を中断してしまってい
る動物からとったものとか、無傷動物からとったインビ
トロでの性的生成物とか、死後の性腺からとった性的生
成物とかを、授精に使用できるようにする製造方法も、
知られていない。

幾種類かの繁殖動物の場合、従来の処理方法では、不適
当であり、また、ある外来種の野性の柔毛質動物の場合
など、従来の処理方法では、退化をもたらし、場合によ
っては、性的生成物の生成の際、完全な休止をもたらす
という不合理な面がある。これらの動物の場合、従来知
られているホルモン製剤では、全く役に立たない。

近年、ジェイ・エイ・キング（Ｊ、　Ａ、　Ｋｉｎｇ）
およびアール・ピー・ミラー（Ｒ，Ｐ、　Ｍｉｌｌａｒ
）が、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ー（Ｊ、　Ｂｊ、ｏｌ、。

Ｃｈｅｍ、）２５７．１０７２２乃至１０７２８ページ
（１９８２年）に、またエヌ・シャーウッド（Ｎ、　Ｓ
ｈｅｒｗｏｏｄ）等が、プロシージャー・オブ・ナチュ
ラル・アカデミツク・サイエンス（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ
ｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、）８０．２７９４乃至２７
９８ページ（１９８３年）に発表しているように１種に
特有のＧｎＲ）Ｉ誘導体を提唱していること、また、ア
ール・エム・シャープ（Ｒ，Ｍ、　５ｈａｒｐｅ）等が
、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）２９０．７８５乃至７８
７ページ（１９８１年）に、かつエヌ・デーケル（Ｎ、
　Ｄｅｋｅｌ）等が、バイオロジカル・リプロダクショ
ン（Ｂｉｏｌ、　Ｒｅｐｒｏｄ、）２８．１６１乃至１
６６ページ（１９８３年）に発表しているように、性腺
および卵巣における各種ＧｎＲＨ囚子の存在についての
報告がある如く、特別の支配因子が存在し、かつそれら
の間には相互作用の可能性があるという考えが、一段と
高まっている。

本願出願人による魚類および鳥類に特異的なＧｎＲ）Ｉ
誘導体は、ハンガリー国特許公開公報第４４５７／８３
号に記載されている如く、通常、捕えられた状態で飼わ
れていない魚の場合でさえ、性的生成物を生成させるの
に使用でき、その効果は、発育卵胞を刺激することによ
り達成できるようになっている。

（発明の目的） 本発明の第１の目的は、動物の生成する性的生成物が、
人工授精若しくは自然授精に適し、かつ子孫の生産に適
するよう、噴孔綱の子孫、即ち動物の生殖器官の活動を
刺激しうる方法を提供することである。

本発明の第２の目的は、種の通常の生殖能力以上に、哺
乳綱の雌雄の器官における性的生成物の生成率を高める
ための方法を提供することである。

（発明の要約） 本発明によれば、一般式（１） ％式％（１） （式中、Ｘ１は、グリシル基、または他のあらゆる天然
若しくは合成のＤ−アミノ酸を表わし、ｘ２は、１乃至
４個の炭素原子を含むアルキル基、フェニル基およびト
リプトフィル基よりなる群から選択された基を側鎖基に
持つＬ−アミノ酸を表わし、Ｘ３は、１乃至４個の炭素
原子を有するアルキル基、または２乃至４個の炭素原子
を有するアルカノイルアミド基を側鎖基に持つＬ−アミ
ノ酸を表わし、かつ、ｘ４は、グリシルアミド基、また
は１乃至４個の炭素原子を有するアルキルアミド基を表
わす。） で示される化合物、またはその塩若しくはその金属複合
物を用いることにより、前述の目的は達成される。つま
り、自然授精若しくは人工授精に好適な、授精に与かる
性的生成物がつくられ、かつその量を、性的に未成熟で
あるとか、発情していない状態、即ち、生体が不自然な
維持状態により、発情していない状態かにある捕乳綱動
物からインビボ的に、また、無傷動物ならびに死後の哺
乳増動物からインビトロ的に、増大させうるようになっ
ている。

一般式（１）で示される化合物は、ハンガリー国特許公
開公報第４４５８／　１９８３号、および米国特許第４
．４１０，５１４号明細書に記載の公知の方法によって
製造される。

以上述べたことから、本発明は、補乳綱動物（以下、こ
れを媒体という。）の出生前の生命体。

ならびに出生後、即ち、媒体の幼時期、青春期および成
熟期における生命体の生殖器官の活動を制御して、媒体
から、自然授精若しくは人工授精に好適な性的生成物を
生成させ、また、ある場合には、媒体から子孫をつくっ
たり、生殖に関連する性的生成物の生成率を、種の通常
の生殖能力を超えて数倍高めるための方法に関するもの
である。

本発明によれば、個々の処理の間に、少なくとも２時間
、多くて７日間、好ましくは２乃至８時間の間隔を設け
ながら、一般式（１）で示されるノナペプチドアルキル
アミド若しくはデカペプチドアミド、またはその塩若し
くはその金属複合物を。

少なくとも１回、多くて６０回、好ましくは１乃至５回
、体重１ｋｇ当り０．０１乃至５００μｇ（以下、これ
をμｇ／ｂｗｋｇと表示する。）、好ましくは１乃至１
００μｇ／ｂｗｋｇ投与して、媒体を処理する。

一般式（Ｉ）で示される化合物は、溶液、粉末、注射液
、またはスプレー状で使用できる。投与の仕方は、筋肉
内投与、腹腔内投与、皮下投与、および子宮内投与など
により行なう。

ある動物種の場合、性的生成物の生成率は、本発明によ
る処理のため増大し、また別の動物の場合（臨床上）、
低下、即ち断続的な生殖活動は、正常化され、種の通常
の水準に復元される。

本発明のよる処理方法は、生殖器官における生成過度を
誘発し、それにより、性的生成物の量が増大し、種の通
常の生殖能力をはるかに超えた水準にまで上げるのに好
適である。

本発明による処理により、胚上皮は著しく活性化され、
精液中の活動精子の数が増大する。

本発明による処理方法は、下垂体の生成過度をもたらす
きっかけを与えることができるため、下垂体の非感受性
が現われてくる。つまり、下垂体の無感覚状態がつくら
れるので、この方法を、避妊のために使用することもで
きる。

本発明による方法を用い、実験室の条件のみならず、自
然条件および人工条件の下で、目的生成物をつくること
ができる。

一般式（１）で示されるＧｎＲＨＭ似体を、さまざまな
リズムで投与することにより、生殖器官の機能を既述し
たように制御することができる。このことは、まだ報告
がなく、新規な方法である。

本発明による方法の主な利点は、次の通りである。

（ａ）この方法を用いることにより、人工的な状態で飼
育されている咄乳綱動物の性腺活動を改良でき、その機
能を正常状態に戻すことができるため、動物に子孫をさ
ずけることができる。

（ｂ）この方法は、卵巣における生成過度を誘発するの
に好適であり、それによって、排卵する卵の数を、通常
の種に見られる数以上に増大させることができる。また
、インビトロ授精を行なった後、これらの卵を胚として
貯蔵したり、受体動物に移植ができる。

（ｃ）この方法は、過刺激を誘発し、それにより、哺乳
動物の幼時個体における排卵過度を誘引するのに好適で
ある。従って、媒体が性的に未成熟であっても、媒体か
ら子孫を得ることができる。

（ｄ）この方法は、独特な実験室状態の下で、無傷卵巣
から取り出される器官培養により、インビトロ授精卵を
つくるのに好適である。従って、媒体が死んでしまった
後でも、優れた繁殖価値のある媒体から子孫を得ること
ができる。

（ｅ）この方法により得られた性的生成物を配分するこ
とによって、遠隔地の種同士の雑種形成が可能になり、
そこで、新種の家畜をつくることができる。

（ｆ）この方法は、工業生産方式による条件の下に、あ
らゆる年令層の雌雄媒体間での大量の卵、精子、または
胚をつくるのに好適であり、そのため、例えば、胚バン
クを設立したり、子孫の大陸間分配を実験することが可
能となる。

（ｇ）この方法は、媒体における季節的に発情していな
い時期、および封鎖されている精子形成を解放するのに
好適である。そのため、四季を通じて、精力的子孫をつ
くることができ、そこで、飼養産業に係わる有効な利用
化が可能である。

（ｈ）この方法は、保護されるべき自然の希少種の人工
繁殖に好適である。

（ｉ）この方法は、雌雄の動物における下垂体の働きを
、等しく不感性に保つのに好適であるため。

公知の避妊法を使うことができない場合でさえ、不必要
な妊娠を回避させることができる。

（実施例） 以下、本発明の好適実施例を詳細に説明する。

ただし、本発明は、これら実施例に制約されない。

体重が７乃至８ｇに成長した６０匹の２１日ラットに対
し、生理的食塩水に溶かしたＤ−Ｐｈｅ’−Ｇｉｎ８−
ＧｎＲＨを、腹腔内注射により投与した。

処理状態により、ラットを各種のグループに分けた。一
連の処理は、１乃至８日間にわたり、かつ投与量を、１
μｇおよび２μｇとし、それぞれ、毎日と、１日に２回
投与した。処理は、それぞれ、５μｇおよび１０μｇで
終了した。

最後の処理を行なってから２４時間後、すべてのラット
を、エーテル蒸気を用いて殺し、死んでから卵巣を摘出
した。

肉眼と組織学的試料を使って評価を行なった。

対照ラットの卵巣中に発育卵胞を観察したが、それらら
はどれも、グラーフ（Ｇｒａｆ）卵胞の大きさになって
おらず、また、黄体、出血体いずれも検出されなかった
。

他方、処理したすべてのグループでは、ホルモン効果が
観察できた。その証拠として、卵胞が発育し、それらが
グラーフ卵胞に変わり、排卵と。

正常黄体の形成をみた。卵管と子宮の拡張もｗｔ察され
た。

６０匹中４匹だけ、処理に対して反応しなかった。

１日２回の割合で４日間、２μｇのＧｎＲＨ類似体を投
与し、かつ４日目の２μｇ処理に引続いて１０μｇを投
与したグループの場合、排卵直前のラット全ての卵巣に
、柔軟なグラーフ卵胞が多数ｍ察された。最終的成熟状
態を経過しているグラーフ卵胞は、６０乃至９０個の数
に達し、一方、成熟ラットの場合、この数は僅か１２個
に過ぎなかった。

他の個体グループに対し、同じ処理法を用いた。

ただ異なる点は、その処理を６日間続けたことである。

このグループの場合、正規の黄体の数によって、排卵過
度を判断した。このグループでは、上段で詳細に説明し
た場合と同様、黄体の数は、６０乃至９０の範囲であっ
た。

組織学的評価は、このようにして得られた結果をもとに
完全に裏付けされた。

以上説明した処理により、先ず第１に、幼時動物を使っ
て成熟卵をつくることができたこと、第２に、つくられ
た卵の数を、成熟した動物に関して観察されたものに比
べて増大させることができた。

去】１」λ 実施例１で説明した方法により１体重が５乃至６ｇに成
長した１０５匹の２８日マウスを一緒にして処理した。

１乃至８日間処理したこれらのマウスに、１乃至５／Ａ
ｇのＤ−Ｐｈｅ’、　Ｇｉｎ”、　ｄｅｓＧｌｙｌｏ−
ＧｎＲＨを１日２回投与した。処置の間には、４時間の
間隔をおいた。最後の処理をしてから２７時間後、卵巣
を取り出した。

対照グループの卵巣は、鈍い黄色の均質な状態を呈して
おり、その中のいくつかには、１乃至２個の発育卵胞が
ｍｉｓされた。

処理されたマウス全ての卵巣には、ホルモンの作用で、
卵巣と卵管の肥大化が観察された。１日量１μｇを３日
間投与したマウスに対し、３日目には、１μｇを投与し
てから４時間後に、５μｇの前記ＧｎＲＨを投与した。

それらのマウスの卵巣には、最終的成熟状態を経過し、
かつ波状構造を有するグラーフ卵胞が現われ、その数は
、各マウスごとに４５乃至７０であった。

５日間処理した同じグループには、先に示した数のグラ
ーフ卵胞のところに、黄体が形成されていた。

組織学的評価は、肉眼による評価の結果と同じ結果をも
たらした。

このテストの結果は、実施例１で説明した方法に対する
裏付けを与えた。

大規模な飼育場で飼われている真珠のように白く、生ま
れてから４２日の２０匹の予見に対し、１日２回の割合
で３日間、５／ＡｇのＤ−Ｐｈｅ’　、　Ｇｌｎ”　−
ＧｎＲＨ類似体を腹腟内注射により投与した。

次に、それらの動物を、２つのグループに分け、一方に
は、４日目に、５０μｇの活性化成分を用いて処置し、
これに対し、別のグループは、処置を始める前に、エー
テルを用いて殺した。

このグループの発育卵胞を数え、５０μｇの成分投与に
よる効果を行なう際の対照として使用した。

生きているグループの中から２匹を選び、腹腔鏡による
彼等の排卵過程を調べるため、麻酔をかけ。

かつ腹腔を鏡に映し出しながら、１０時間監視を行なっ
た。

５０μｇ成分投与処理後２６時間経過したものには。

対照動物の不活性卵巣と比較して、各個体には、それぞ
れ、３０乃至４０個の排卵と出血体が生じていた。

幼い兎に対し、このような処理を施すことにより、成熟
卵が生成し、かつその数は、正常の値に比べ驚くほど増
大した。

生まれてから１００日の２０匹の雌豚を使い、１日２回
の割合で６日間、１回につき、１０μｇのＤ−Ｐｈａ’
　−Ｇｌｎ’−ＧｎＲＨ類似体を筋肉内注射により投与
した。

テストの際、対照豚の卵巣の片方を取り出し、実施例３
に記載のテスト方法を用いて、グラーフ卵胞および形成
された黄体の数の比較を行なった。

排卵の発生を腹腔鏡によって確認した。

７日目に、１００　μｇのＤ−Ｐｈｅ’、　Ｇｌｎ”−
ＧｎＲＨ類似体を投与すると、４１時間後、幼い豚には
、１５乃至３６個の排卵がみられた。

これらの動物の処理により、実施例１乃至３において説
明した結果と同じ結果を得ることができた。

実施例５ 幼い羊における排卵遣支叫透又 生まれてから５０日の１０匹の雌の羊を使い、１日２回
の割合で５日間、１回につき１０μ＆のＤ−Ｐｈａ’　
。

Ｇｌｎ”、　ｄｅｓＧｌｙ″０−ＧｎＲＨエチルアミド
を、筋肉内注射により投与した。

６日目に、７０μｇの活性化成分を投与した結果、各個
体に３乃至９個の排卵が生じた。対照として用いられた
個体には、全く変化がみられなかった。

処理済個体と未処理の対照個体との比較は、腹腔鏡を用
いて行なった。

結果は、実施例１乃至４で説明したものと同じであった
。

χｍ虜 い　　における　、　゛す２度ｃ７）Ｉｔル生まれてか
ら６５日の８頭の畜牛を使い、１日３回の割合で８日間
、１回につき２μ＆のＤ−Ｐｈｅ’　。

Ｇ１．ｎ”、　ｄｅｓＧｌｙｌｏ−ＧｎＲ）ｌエチルア
ミドを用いて処理した。

休止日を１日おいて、１００日目、１００μＧの活性化
成分を、各個体に筋肉内注射により投与した。

最後の注射に引続き、両側の卵巣を摘出した。

５乃至１１の発育したグラーフ卵胞が、各卵巣に形成さ
れた。卵胞の５０％は、既に、手でされってみてしっか
りしている段階、つまり、排卵直前の卵胞になっている
段階を過ぎていた。

このテストが示すように、幼い畜牛からでさえ、成熟し
た個体においては、正常の場合にはその数が一つである
と見做されているのに対して、いくつかの成熟卵が得ら
れた。

多くの文献にみられるように、少数の群で生活している
通常の動物種、しかも、特に霊長口において、その群の
すへての雄は、活発な性欲を持っているが、交尾できる
のは優占種の雄だけに限られる。そのため、劣位の雄は
、生理的に復元可能な乏精液症にかかっている。

本出願人の場合、優占種の雄から採られ、かつ精子バン
クに保存される精子とは別に、４匹の性的に成熟した劣
位の雄から採った精子を授精に使用することを目的とし
ている。

処理を始める前に、すべての個体に麻酔をかけ、電気シ
ョック法により射精させた。精液の濃度と固有運動性を
、顕微鏡を用いて調べ、次に、それを−１９６℃に冷凍
されたプローブに入れた。

以前の精液学的研究において０本出願人は、調べるのが
難しく欠陥のある精子は、凍結状態で生存できないこと
を発見している。

凍結後の順調な精子像が示したようしこ、精子完成は、
順調に行なわれた。処理前の雄の精液は。

生理的乏精液症状を呈するものであった。

６０乃至９０ｋｇの体重の雄のチンパンジーに対し、１
００　μｇのＤ−Ｐｈｅ’、　Ｇｌｎ”＋　ｄｅｓＧｌ
ｙ”−ＧｎＲｌ−１エチルアミドを通常の生理的食塩水
１ｍＱに溶かし、それを、圧縮空気式による筋肉内注射
により投与した。

最初の処理を行なってから４週間後、麻酔をかけて精液
をとった。４０乃至６０％の若い精子が形成された。こ
れに対して、冷凍テスト後の精液は、運動性が１０％以
下になっていた。

最初の処理を行なってから６０日後、麻酔をかけ、電気
的手法によって得られた精液は、欠陥精子の数が３０％
以下に減り、かつ固有運動性も６０％を超えた。精液の
質的ならびに量的性質は、優占種の雄からとったものと
変わらず、かつ文献によるデータと同じ性質を示した。

精液を１：１の割合に希釈してから、凍結テストしたも
のは、陽性であり、かつ固有運動性は、６０％が４５％
に下がっただけであった。新鮮な精子も、また凍結した
精子も、品質上、授精目的の上から完全であった。

この方法によって得られる劣位の雄の精子は、質的にも
又量的にも十分満足の行くものであり、かつ精子バンク
で保存でき、授精にも好適である。

動物園で飼育されている体重が７００ｋｇの雄のバイソ
ンから、麻酔をかけ、電気的手法により、精子試料を採
った。その個体は、季節的乏精液症の状態になっていた
。

この個体の症状は、次の通りであった。

１５００倍の顕微鏡を使って精子を調べると、精子の数
は、５乃２０であり、かつ欠陥精子は、７５乃至８０％
に達していた。精液の密度は、０．５であった。

このような精子は、授精用には不適切である。

１週間に２回、１回につき、２００乃至２００μｇのＤ
−Ｐｈｅ’、　Ｇｉｎ”−ＧｎＲＨ類似体を用い、圧縮
空気式による筋肉内注射により１個体を処理した。

処理を開始してから５５日目に、麻酔をかけ、１時間の
間隔をおいて１個体から２回精液をとった。

この２回分の精液を合体した。密度は４で、固有運動性
は５５％であった。

このようにして得られた精子を凍結させ、凍結の結果失
われる固有運動性の程度を調べたところ、それは、僅か
５％であった。

このような処理により、個体の精子完成が誘発され、不
適切な精子の代わりに、良質の精液が得られ、それによ
って、新鮮なものと凍結したものを用いて、１４頭の雌
を授精させることができた。

高級なハイブリッド毛皮を生産するべく、大規模な飼育
場で飼われている純粋種の銀キツネおよび青ギツネと授
精させるため、動物園で飼育され、かつ季節的乏精液症
に陥っている雄の赤ギツネの精子完成誘発を試みた。

文献によれば、すべてのキツネの発情期は、毎年僅か１
回だけに過ぎず、その時期以外は、雌雄の性腺は、完全
に不活発になっていることが知られている。

さまざまな種類の無発情時期には、数カ月のずれがある
（赤ギツネは１月、青ギツネは４月と５月）。テストの
結果は、季節的に発情していない個体群と比較した。そ
の個体群における平均射精量は２ｍＱ、密度は３、運動
性は５０乃至６０％であった。これを正常値とした。

テストは、平均体重が８ｋｇの性的に成熟した５匹の雄
の赤ギツネに対し、４月に入り、ｌμｇ、５μｇ、１０
μ名およびｓｏμｇのＤ−Ｐｈｅ’、　Ｇｉｎ’−Ｇｎ
Ｒ）Ｉ類似体を１週２回の割合で７週間投与した。投与
を開始してから３週目に、精子試料を採取した。試料中
の精子数は、正常値の７０％であり、かつ変性精子の数
は、４０％を超えていた。変形したものの殆どは、幼若
形成（頚部および中間部のプラズマ・ドロップレット）
であった。

テストを開始してから７週間後、再び個体から精液を採
取した。各個体からとれた精液は、量が１．２乃至３．
１ｍＬ密度が３．運動性が６５％であった。

それらは、数学的にみて、正常値を明らかに超えていた
。（雄と雌とは分けていたので、彼等には、交尾する機
会はなかった。）精子試料を等級に従ってグループ分け
し、次に、凍結した。

−１９６℃で希釈凍結した後の精液を元に戻したものの
運動性は、４５％であった。凍結精液を用い、かつＧｎ
ＲＨによる排卵プログラム（実施例１７を参照）、およ
び授精技術を用い、青ギッネを妊娠させることができた
。

５匹のキツネに、それぞれ１回射精させることによって
、授精に好適な５６回分の量が得られた。

従って、高級な毛皮を生産するための呈産的技術目処が
可能となった。

体重１２０ｋｇの８才になる雄のシベリア虎を、動物園
に入れ、仲間と一緒に３年間生活させた。雌の発情期に
、定まった交尾を行なったが、その間、子孫はできなか
った。雌に欠陥があるという可能性は、全くなかった。

何故なら、その雌は、以前、他の雄から妊娠させられて
おり、かつ産んだ子供を育てた経験も持っていた。

この個体に麻酔をかけ、電気的手法により精液を採取し
たところ、それは非常に希薄であり、かつ各視野ごとに
、４乃５個の退化し振動している精子だけが観察された
。退化状態は、精子完成の幼若段階の特徴を示していた
。

そこで、この個体に対し、通常の生理的食塩水１ｎ＋Ｒ
に希釈した１００　μｇのＤ−Ｐｈｅ’、　Ｔｒｐ’、
　Ｌｅｕ”−ＧｎＲＨを週に１回、圧縮空気方式による
筋肉的注射により投与した。この雄を、その相手と一緒
にして飼ったところ、処理中、彼等は規則的に交尾した
。

雌は妊娠し、３頭の健康な子孫が生まれた。出産時から
計算して、交尾による授精は、最初の処理から４０乃至
５０日であることが分かった。

従って、本発明による方法は、精子形成の退化により生
殖力がなくなっている雄の虎を処理し、子孫を作らせる
ことに適用しうろことが実証された。

実施例Ｊ１ ベンガル虎から凍結に好　なハイパー（れた）糀上上」
るための正常閉　の刺激ヒ１ 動物園で飼育され、かつ規則正しい交尾を行ない、数年
間、規則正しく相手を妊娠させてきた。

体重が２００ｋｇの８才のベンガル虎を使った。

このことをわきまえた上で、麻酔を用い、交尾期におけ
る精子試料を電気的に採取した。この試料の密度は３で
あり、運動性は３０％で、かつ精液の量は０．２ｄであ
った。精液は、正常な精子像を示していた。しかし、こ
のように少量の精液を凍結することは、技術的に不可能
である。個体を保護し、肝臓疾患を起こさせないように
するため。

麻酔は、せいぜい４日に１度、４乃至５時間が限度であ
る。これでは、精液を集めることは不可能である。

そこで、この雄を雌から分離し、かつこの雄に対し、１
日につき、１社の生理的食塩水に溶かした１０μｇのＤ
−Ｐｈｅ’、　Ｇｉｎ’、　ｄｅｓＧｌｙ”−ＧｎＲＨ
エチルアミドを、圧縮空気式筋肉的注射により、１２日
間投与した。

１２日目に、麻酔をかけた個体から、電気的手法により
、１時間の間隔をおいて２回精液を採取した。この方法
により、最初１ｍ１２、次に０．８ｍｍの精液がとれた
。２つの試料を合体し、調べた結果、密度は４、運動性
は７０％であった。精液試料を、２１回分の人工授精用
に調製し、凍結した。解凍した精液は、６０％の運動性
を示した。

この方法により、ベンガル虎から相当の量の精液を得る
ことができ、かつ精子バンク式の保存に成功した。

体重がおよそ３５０ｋｇの１８才の雄のオランウータン
は、幼時期に捕捉され、動物園に入れられた。

処理されるまで、このオランウータンは、３人の飼い主
の手にかかっていた。これまでの記録によれば、このオ
ランウータンは、まだ一度も相手をつくったことがなく
、いつも−頭で過ごしていたため、交尾したことはなか
った。

この動物は、１１年前からの現在の場所で生活しており
、かつ自分と同じ性の仲間も、また異性の相手をも持た
なかった。彼は、無気力で、かつ完全に不能であり、入
院症状を呈していた。動物園は、動物がポルネオ産であ
り、かつ生殖力があり、それが購入される場合には、相
談をもちかけられてきている。染色体テストの結果、こ
の動物は、非常に数の少ないボルネ７種であった（全世
界で、１５３頭が生存）。

病歴の点で稔性に疑問をいだかせる要因は、通常の哺乳
類にみられる積極行動が欠如していること、および５乃
至６年前の入院の際、正規の自慰行動が止まっているこ
とであった。

麻酔をかけた個体から、電気的手法により精液を採取し
た。射精の際、側性腺の分泌が特に目立ち、３部分に１
−１ドロツプレツトが形成され、かつ量は全部で０．１
社であった。精液中、運動精子は存在せず、かつ全精液
中、僅かの不活性精子が観察できただけであった（顕微
鏡の１０視野中、僅かに１乃至２個）。

そこで、個体に対し、実施例１１で行なった方法と同じ
ように、１００　μｇのＤ−Ｐｈｅ’、　Ｇｌｎ’、　
ｄｅｓＧｌｙ”−ＧｎＲＨエチルアミドを週に２回投与
した。処理中、動物の行動は、一段ときびきびし、活溌
になった。

しかし、これは、空気銃式注射器の発射が怖くて引き起
こされたもので、性欲の発露によるものではなかった。

最初の投与から４７日目で処理を打ち切り、麻酔を更新
しながら１時間間隔で、１２回精液を採取した。このよ
うにして、全部で３，２ｍｆｉの精液を得た。

精液の密度は３、運動性は３５％であった。退化精子の
量は２０％となり、特に、完全に幼若な発育状態のもの
からなっていた（頚部および中間部のプラズマ・ドロッ
プレット）。

動物の異常な程の高値のためと、麻酔および射精を取扱
う要員の保護のため、処置を中止した。

購買者は、制御された精子像が、生殖能力のある哺乳類
が示す特徴的なそれと匹敵しうろことに満足した。

以上述べた方法により、希少価値のある動物の稔性を矯
正でき、かつ国際的目録に掲載された保存遺伝子となっ
ている精子を貯蔵することが可能になった。

世界中の動物園では、大型の肉食動物のうちライオンを
見せものにすることが普通である６雌雄を同じ生活空間
に入れて、各種のパノラマ形式やサファリ形式で見せる
場合には、彼等を一緒にして見せることが絶対必要であ
る。

肉食動物のうち、ライオンは、捕まえてから満足な飼養
条件でうまく飼うことができる唯一の動物である。ライ
オン・マーケットは供給過多になっているため、個体に
弊害を与えず、かつ外観や行動に変化をもたらすことな
く、動物が交尾しても妊娠できないようにさせる避妊法
が大変具合い良い、ステロイドをベースにした避妊法を
用いると、動物が短期間で脂肪過多症にかかり、見せ物
として台無しになってしまう。

本発明による方法により、動物園に入れて飼われ、かつ
生殖能力を有し、かつ体重が２００ｋｇテ。

しかも既に５回の量産群を持った経験のある雌のライオ
ンに処理を施した。

処理は、Ｄ−Ｐｈｅ’、　Ｇｌｎ’−ＧｎＲ）１類似体
を用い、３週ごとに１回というようにして２回行なった
。投与量は、５０μｇとし、それに引続き、３週程度の
休止期をおいて５００μｇを投与した。

処理は、発情開始（４月）から、通常の種の発情終期（
８月）より５０日経過するまで、既に述べた３週間隔で
実施した。

個体は、通常の行動をとり、発情期には通常の交尾をし
、かつ検査の結果、相手の精子も正常であった。処理中
５個体は妊娠せず、かつ、行動とか様子に不自然さは見
られなかった。

生産飼育場では、子供をとるために飼育されている雌豚
を、出来るだけ早く成長させ、かつ生産的飼育技術に適
合しうるよう授精させて子供を生ませるようにすること
が必要である。

青春前期および青春期における雌の性腺活動は。

彼等が、大群の中で、集中的に飼を与えられ、早く育つ
ことを強要させられている故、不安定になっており、そ
のため、発情が滅多に起こらず、かつ平均化されなくな
ってしまう。

テストのため、良好な成長力、および工業技術によって
決められた食飼転換を基礎にして、飼育場で飼われてい
る２００匹の雌豚の中から、６０匹の潜在的繁殖力を有
するものを抽出した。これらの個体を、　３０匹づつ２
つのランダムグループに分けた。

２つのグループを、また工業技術により、２４時間、食
べ物と飲み物を与えないままにしておいた。

抽出時、個体に対し、通常の生理食塩水に溶かしたＤ−
Ｐｈｅ’、　Ｇｉｎ”−ＧｎＲ）ｌ類似体を、筋肉的注
射により投与した。次に、２０μｇの同じ類似体を、２
４時間の間隔をおいて、注射により２回投与した。

最初の発情個体は、未処理の対照グループと、処理済の
グループとも、抽出してから５日後であった。２つのグ
ループを、工業的飼育技術において認められているよう
に、同じ広さの豚小屋で、同し条件の下に２６日間飼育
した。この間に、未処理の対照から３個体（１０％）、
処理済の中から２１個体（７０％）が、確実に発情した
。これらの発情個体は、順調で、通常の出産に結び着い
た。

この一連のテストにおいて使われた雌豚は、僅か数匹で
あったので、正確な排卵時間は、目的には入れてなかっ
た。そのため、処理の目的は、２６日以内に、「１回で
成功する発情」という点であった。雌豚のうち１０％が
分娩すれば、生産飼育場での平均的な値として認められ
ているので、処理の結果、これが７０％に増大したとい
うことは、大変効率的なメリットを生みだしたことにな
る。

少なくとも２年間不妊状態にある２０匹のチンチラに対
し、１日２回、１回につき１０月ｇのＤ−Ｐｈｅ’　。

Ｇ１ｎ５−ＧｎＲｆ（類似体を、腹腔内注射により３日
間投与した。

４日目に、これらの個体に、７５μ＆のＧｎＲ）Ｉ類似
体を注射した。次に、それらを雄と一緒にした。１２匹
のチンチラが、４ケ月以内に子供を産んだ。

上記の処理と並行し、２年以上不妊状態を続け、かつ突
然変異による「黒い」チンチラとして高価な毛皮を有し
ている３匹に対し、１日２回、１回につき１０月ｇのＤ
−Ｐｈｅ’、　Ｇｉｎ’−ＧｎＲＨ類以体を、腹膜注射
により３日間投与した。４白目、これらの個体に、７５
μｇのＧｎＲＨ類似体を注射により施した。次に、いつ
ものように、雄と一緒にした。４ケ月以内で、３匹の個
体全部が子供を設けた。

この方法により、長期間不妊に陥っている高価な毛皮を
有する動物を、繁殖に結びつけることに成功した。

平均体重が６ｋｇで、かつ通常の状態で、２月乃至３月
の間に生殖期を迎える動物園から連れてきた２匹の雌の
野性猫を、Ｄ−Ｐｈｅ’、　Ｇｉｎ”、　ｄａｓＧｌｙ
”−ＧｎＲＨエチルアミドで処理した。

処理を施す前に、両方の卵巣の状態を調べるため、麻酔
をかけて腹腔を切開した。腹部を縫合した後、個体に対
し、生理的食塩水に溶かした活性成分を、筋肉内注射に
より２日に１回、全部で４回投与した。１回目と２回目
の注射の間に、２時間の間隔をおき、１回目の量を１０
０μｇ、２回目の量を５００μｇとした。この後、４８
時間おいて、３回目に１００μｇ投与し、更に、２時間
遅らせて、４回目分の５００μｇを投与した。

処理日の０日目、２日目、４日目および８日目に、麻酔
をかけて腹部を開き、卵巣の状態における変化を肉眼で
観察した。処理後、両方の卵巣を取り出し、固定してか
ら、組織学的に調べた。

処理日の０日目、両方の個体の左側の卵巣に、３乃至４
個と推定される２次卵胞と一つの退化した古い黄体が、
また、右側の卵巣には、５乃至６個と推定される２次卵
胞が観察された。

処理を行なった結果、４日後全ての２次卵胞は。

排卵されたグラーフ卵胞に変わり、また、それらの場所
には、黄体に変わる出血体が見つかった。

出血体の横に、肉眼では数えることのできない２次卵胞
が形成されており、それは、次の処理により、更に形成
され、かつ最後の５００μｇが投与されるため、それら
は、濾胞的黄体形成とともに消失した。組織学的な分析
により、肉眼による観察の裏付けが完全に得られた。

前述の処理の結果得られた排卵現象が示すように、猫の
場合において、季節外れの授精が達成され、かつ人工管
理の下における子孫をつくることができる。

季節的に発情してない雌の青ギツネを、１２月、麻酔を
かけて腹腔鏡検査により調べた。その結果、両方の卵巣
が不活発になっており、かつグラーフ卵胞の発育が、そ
こには全くみられなかった。

次に、個体に対し、１日２回、１回につき１乃至５／ｊ
ｇのＤ−Ｐｈｅ’、　Ｇｌｎ’−ＧｎＲＨ類似体を、筋
肉内注射により１０日間投与した。１０日目に、麻酔を
かけ。

別の腹腔鏡検査を行なった。それによると、両方の卵巣
に、大量の黄体が確認されたが、技術が不完全であった
ため、その数は、約１０乃至２０としか見積ることがで
きなかった。同時に、子宮頚部は開いていた。

また、１２月、萎縮により受入れを拒む状態になってい
る雌に対し、同じように、１日２回、１回につき２μｇ
のＤ−Ｐｈｅ’、　Ｇｉｎ”−ＧｎＲＨ類似体を投与し
、子宮頚部の状態変化をみて、その効果を調べるように
した。その際、５０月ｇの活性成分による処理を行なっ
た。１６時間後の卵巣の状態を鏡を使って調べたところ
、排卵直前の状態がｗ１祭された。

それから、腹腔を完全に開き、卵巣を取り出し、かつ穿
刺により、１１個のグラーフ卵胞全部から卵を取り出し
た。放線冠で覆われた６個の規則正しい正常な卵が発見
された。

この方法により、インビトロでの授精可能な卵や、季節
的な発情休止期における胚を形成することができ、また
それによって１通常の発情を損うことはなかった。

ること 体重が０．３ｋｇで、かつ生まれてから４５日たってい
る５匹の子猫に対し、２日に１回、全部で４回、１回に
つき１００　μｇのＤ−Ｐｈｅ’、　Ｇｌｎ’−ＧｎＲ
Ｈ類似体を用いて処理を施した。投与は、通常の生理的
食塩水に溶かしてから筋肉内注射により行なった。

処理後、麻酔をかけて１個体から両方の卵巣を取り出し
、肉眼による検査を行なった。それから、この卵巣をホ
ルマリンで固定処理し、組織学的に調べた０両方の卵巣
に、５つ乃至７つの出血体があるのを発見した。

外被をかぶった状態で、発育卵胞が、光沢のあるバター
色の卵巣からはっきりと確認できた。この卵胞のいくつ
かは、グラーフ卵胞の大きさになっていた。活性成分で
処理しなかった個体について、このような変化はみられ
なかった。

これらの結果から明らかなように、処理を施された幼い
飼い猫の卵巣は、組織学的検査および形態学的検査を行
なったところ、性的に成熟した個体の特徴を示している
。従って、この動物は、自然の成熟期を待たずに、イン
ビトロ授精に係わる卵を形成させるのに適した状態にな
っている。

体重が０．３ｋｇで、かつ生まれてから４５日たってい
る５匹の子猫を、Ｄ−Ｐｈｅ”、　Ｔｒｐ’、　Ｌｅｕ
’−ＧｎＲ）ｌ類似体で処理した。処理に先立ち、麻酔
をかけて、左側の卵巣を取り出した。それから、媒体に
対し。

２日に１回、全部で３回、１回につき１００μｇの活性
成分を生理的食塩水に溶かしたものを、筋肉内注射によ
り投与した。

処理後、残してあった右側の卵巣を取り出し。

肉眼で調べ、更に、固定してから、組織学的検査を行な
った。

処理前に取り出した卵巣は、極めて均質で、バタ一様の
黄色を呈していた。発育卵胞は、肉眼的にも、また組織
学的にも検出されなかった。処理により、７つ乃至８つ
の出血体と、いくつか（数をかぞえられない）の発育卵
胞が確認された。

実験の結果、異なる類似体の活性成分を使用しても、実
施例１８で説明したものと同じ結果が得られ、かつ、卵
巣の連続周期が１組織学的に進められて行くことが確認
された。

体重が０．３ｋｇで、かつ生まれてから４５日たってい
る５匹の子猫を、Ｄ−Ｐｈｅ’、　Ｇｉｎ”−ＧｎＲ）
ｌ類似体で処理した。処理前に、麻酔をかけ、左側の卵
巣を取り出した。

それから、媒体を、処理間隔を４時間にして、１日３回
の割合で３日間処理した。処理は、全部で９回行ない、
１回に使用した類似体の投与量は、０．１μｇであった
。活性成分は、通常の生理的食塩水およびポリエチレン
グリコールに＠濁し、筋肉内注射により投与した。

処理後、残してあった卵巣を取り出し、肉眼で調べ、次
に、固定を行なってから、組織学的検査を行なった。肉
眼で胴入たところ１両方の卵巣は、バターのような黄色
を呈し、かつ均質であったが、処理した方の卵巣は、若
干肥大していた。

未処理の卵巣には、原始卵胞だけがみつかり、かつ組織
学的にもそれが確認できた。これに対し、処理した方の
卵巣には、数えきれないほどの（数百の）卵胞がみつか
り１発育を始めており、かつ、アンスラム（ａｎｔｈｒ
ｕｍ）形成の各種の段階になっていた。

この方法により、卵巣における数百の原始卵胞を同時に
刺激することができた。

屠殺場で牛を気絶させ、血を出してから、３０乃至５５
分以内に無傷の卵巣を取り出した。実験室で、それらを
完全な補助液に入れた。

培養液に、濃度が１０−９乃至１０−’ｇ／ｍＱとなる
ようにして、Ｄ−Ｐｈｅ’　、　Ｇｉｎ”　、　ｄｅｓ
Ｇｌｙ”−ＧｎＲＨエチルアミドを加えた。インビトロ
卵巣の自発排卵によるものと、穿刺によって得られた卵
とから、８５％のものが、減数分裂（細胞の還元分裂）
を続け、がっ扱い易い牛の精子によってインビトロでの
授精に成功した。最初、インビトロ授精卵の培養液中で
、細胞の２分割がｉ察された。

この方法により、世界中の牛に対して使われている授精
技術と同じように、授精させたり、移植したりする生き
たままの胚を提供しうろことが可能になった０屠殺場に
おいて、前記方法を用い、工業的需要に対して十二分に
応じうる胚を生成することが可能である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）哺乳綱（以下、媒体という。）の出生前の生命体
   、ならびに出生後、即ち、媒体の幼時期、青春期および
   成熟期における生命体の生殖器官の活動を制御し、媒体
   から子孫をつくったり、生殖に関連する性的生成物の生
   成率を、種の通常の生殖能力を超えて数倍高めるべく、
   媒体から、自然授精若しくは人工授精に適した性的生成
   物を生成する方法であって、 媒体に対し、一般式（ I ） Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ
   ＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（ I ）（式中、Ｘ＿１
   は、グリシル基、または他のあらゆる天然若しくは合成
   のＤ−アミノ酸を表わし、Ｘ＿２は、１乃至４個の炭素
   原子を含むアルキル基、フェニル基およびトリプトフィ
   ル基よりなる群から選択された基を側鎖基に持つＬ−ア
   ミノ酸を表わし、Ｘ＿３は、１乃至４個の炭素原子を有
   するアルカノイルアミド基を側鎖基に持つＬ−アミノ酸
   を表わし、かつＸ＿４は、グリシルアミド基、または１
   乃至４個の炭素原子を有するアルキルアミド基を表わす
   。）で示されるノナペプチドアルキルアミド若しくはデ
   カペプチドアミド、またはその塩若しくはその金属複合
   物を、１回の投与量を体重１ｋｇ当り０．０１乃至５０
   ０μｇ（以下、これをμｇ／ｂｗｋｇと表示する。）、
   好ましくは１乃至１００μｇ／ｂｗｋｇとし、かつ処理
   間隔を少なくとも２時間、多くて７日間、好ましくは２
   乃至８時間とし、少なくとも１回、多くて６０回、好ま
   しくは１乃至５回投与することを特徴とする性的生成物
   の生成方法。
2. （２）哺乳綱の性的活動を高め、かつ自然授精若しくは
   人工授精に適した性的生成物をつくるために使用する組
   成物の製造方法であって、 一般式（ I ） Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ
   ＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（ I ）（式中、Ｘ＿１
   は、グリシル基、または他のあらゆる天然若しくは合成
   のＤ−アミノ酸を表わし、Ｘ＿２は、１乃至４個の炭素
   原子を含むアルキル基、フェニル基およびトリプトフィ
   ル基よりなる群から選択された基を側鎖基に持つＬ−ア
   ミノ酸を表わし、Ｘ＿３は、１乃至４個の炭素原子を有
   するアルカノイルアミド基を側鎖基に持つＬ−アミノ酸
   を表わし、かつＸ＿４は、グリシルアミド基、または１
   乃至４個の炭素原子を有するアルキルアミド基を表わす
   。）で示される化合物と、獣医学的キャリヤー若しくは
   賦形剤とを混合することを特徴とする性的生成物の生成
   方法に使用する組成物の製造方法。
3. （３）媒体の性的活動を高め、かつ自然授精若しくは人
   工授精に適した性的生成物をつくるための組成物の使用
   方法であって、 一般式（ I ） Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ
   ＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（ I ）（式中、Ｘ＿１
   は、グリシル基、または他のあらゆる天然若しくは合成
   のＤ−アミノ酸を表わし、Ｘ＿２は、１乃至４個の炭素
   原子を含むアルキル基、フェニル基およびトリプトフィ
   ル基よりなる群から選択された基を側鎖基に持つＬ−ア
   ミノ酸を表わし、Ｘ＿３は、１乃至４個の炭素原子を有
   するアルカノイルアミド基を側鎖基に持つＬ−アミノ酸
   を表わし、かつＸ＿４は、グリシルアミド基、または１
   乃至４個の炭素原子を有するアルキルアミド基を表わす
   。）で示される化合物からなることを特徴とする組成物
   の使用方法。