RU181920U1 - Иммуночип для трепонема-специфической серологической диагностики сифилиса - Google Patents
Иммуночип для трепонема-специфической серологической диагностики сифилиса Download PDFInfo
- Publication number
- RU181920U1 RU181920U1 RU2017144858U RU2017144858U RU181920U1 RU 181920 U1 RU181920 U1 RU 181920U1 RU 2017144858 U RU2017144858 U RU 2017144858U RU 2017144858 U RU2017144858 U RU 2017144858U RU 181920 U1 RU181920 U1 RU 181920U1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- immunochip
- antibodies
- antigens
- syphilis
- utility
- Prior art date
Links
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 title claims abstract description 15
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 38
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 241000589886 Treponema Species 0.000 claims abstract description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract description 3
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical compound CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 2
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 claims 1
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 abstract description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 6
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 abstract description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 abstract description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 abstract description 2
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 abstract description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 208000008306 Latent Syphilis Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 2
- RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-O CDP-choline(1+) Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC[N+](C)(C)C)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-O 0.000 description 1
- 102100024462 Cyclin-dependent kinase 4 inhibitor B Human genes 0.000 description 1
- 101000980919 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 4 inhibitor B Proteins 0.000 description 1
- 108020005719 Species specific proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007397 Species specific proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Полезная модель относится к области медицины, а именно - к устройствам для диагностики инфекций с использованием иммунологических методов исследования. В частности, полезная модель представляет собой иммуночип - одну из разновидностей биочипов, предназначенных для анализа биологических жидкостей и содержащих рабочую зону с иммобилизованными зондами (белками) для связывания биоспецифических лигандов (антител).Предложенный иммуночип для трепонема-специфической серологической диагностики сифилиса, представляющий собой стеклянный слайд с активированным соединениями силана покрытием, на поверхности которого в пределах выделенной прямоугольной области раздельно иммобилизованы антигены Тр15, Тр17, Тр47, TmpA, Тр0277, Тр0319, Тр0453, Тр0684, Тр0965 и Тр1038 Treponema pallidum в смеси с раствором гелеобразующих мономеров метакриламида в четырех повторностях каждый; реагенты для контроля правильности проведения анализа - БСА, IgG человека и антитела к IgG человека; а также флуоресцентный краситель Су5, маркирующиий границы анализируемой области.Назначением полезной модели является раздельное параллельное обнаружение в исследуемой сыворотке крови наличия или отсутствия трепонемоспецифических антител к 10 антигенам Т. pallidum, фиксация которых в ячейках иммуночипа регистрируется с использованием антител к IgG человека, коньюгированных с флуоресцентным красителем Су5.Положительным результатом от использования иммуночипа является повышение чувствительности проводимого диагностического исследования.
Description
Область техники, к которой относится полезная модель
Полезная модель относится к области медицины, в частности, к диагностике инфекций, передаваемых половым путем, а именно - к диагностике сифилиса с использованием иммунологических методов исследования.
Полезная модель представляет собой одну из разновидностей биочипов, предназначенных для анализа биологических жидкостей (например, крови), и содержащих рабочую зону с иммобилизованными зондами (белками) для связывания биоспецифических лигандов (антител).
Предшествующий уровень техники
Длительное и скрытое течение сифилиса определило главенствующую роль серологических методов исследования в лабораторной диагностике этого заболевания. Серологическая диагностика сифилиса в Российской Федерации регламентирована приказом Минздрава РФ №87 от 26.03.2001 г. «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса», в соответствии с которым верификация диагноза осуществляется с использованием неспецифических (нетрепонемных) и специфических (трепонемных) тестов. Нетрепонемные тесты определяют реагиновые антитела к кардиолипиновому антигену и используются, в основном, для скрининга на наличие сифилитической инфекции и при оценке эффективности специфического лечения. В свою очередь трепонемные тесты выявляют трепонема-специфические антитела, распознающие видоспецифические белковые антигены Treponema pallidum. В соответствии с приказом Минздрава РФ №87 от 26.03.2001 г. положительный результат трепонемных тестов является обязательным для подтверждения диагноза «сифилис».
Распространенными трепонемными тестами являются реакция пассивной гемагглютинации - РПГА, реакция иммунофлюоресценции - РИФ, реакция иммобилизации бледных трепонем - РИБТ, иммуноферментный анализ - ИФА. Наиболее же технологичным и точным считается тест с использованием биочипов (иммуночипов), позволяющий производить одновременную детекцию специфических антител к нескольким видоспецифическим антигенам Treponema pallidum. Так из уровня техники известна «Диагностическая тест-система в формате иммуночипа и способ серологической дифференциальной диагностики сифилиса» [Патент RU 2397178], состоящая из иммуносорбента с раздельно иммобилизованными на нем антигенами Treponema pallidum Тр15, Тр17, TmpA, Тр47, конъюгата и реагентов, необходимых для выявления комплекса «антиген-антитело». Опыт использования данного иммуночипа позволил констатировать наивысшую (100%) специфичность проводимого анализа, однако чувствительность подобного исследования не достигала этого уровня [Смердова М.А., Маркелов М.Л., Гущин А.Е., Судьина А.Е., Шишова А.В., Шипулин Г.А. Разработка экспериментальной тест-системы на основе иммуночипа для серодиагностики сифилиса // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2008. - №6. - С. 54-58]. Причиной недостаточной чувствительности известного иммуночипа являлась частая регистрация трепонема-специфических антител только к одному из четырех раздельно иммобилизированных антигенов Treponema pallidum, что в соответствии с действующим критерием (обнаружение антител к 2 или более антигенам) оставляло подобные сыворотки в зоне диагностической неопределенности.
Наиболее вероятной причиной недостижения поставленной задачи с использованием описанного выше иммуночипа является ограниченное количество иммобилизованных на нем видоспецифических антигенов Treponema pallidum. При этом п. 2 формулы изобретения RU 2397178 предусматривает возможность дополнительной иммобилизации «по крайней мере одного антигена и/или пептида Treponema pallidum, выбранного из Тр39, Тр41, Тр42, Тр44.5, Тр92, Тр0453», однако практическая реализация подобного подхода в доступных источниках научной и научно-технической литературы не описана.
Раскрытие полезной модели
Настоящая полезная модель представляет собой иммуночип для одновременного анализа антител к расширенной панели из 10 антигенов Treponema pallidum, в которой 4 ранее применяемых антигена Тр15, Тр17, Тр47 и TmpA, дополнены вновь полученными рекомбинантными белками Тр0277, Тр0319, Тр0453, Тр0684, Тр0965 и Тр1038.
Иммуночип представляет собой стеклянный слайд размером 75×26 мм (Фиг. 1) с поверхностью, активированной с использованием соединений силана.
На поверхности иммуночипа выделена прямоугольная область (эррей) шириной 8 мм, предназначенная для нанесения антигенов и последующего анализа одного образца сыворотки крови.
В пределах эррея на поверхность иммуночипа нанесены микрокапли объемом 0.1 нл, содержащие использованные антигены в концентрации 0.225 мг/мл в смеси с раствором гелеобразующих мономеров метакриламида. Каждый из антигенов нанесен на поверхность иммуночипа в четырех повторностях, схема нанесения приведена на Фиг. 2. Последующая фотоиндуцированная сополимеризация гелевых ячеек вызвана облучением при 350 нм с интенсивностью 0.06 мкВт/см2 в течение 50 минут при 20°С.
Дополнительно в краевых зонах эррея находятся контрольные ячейки: с БСА для исключения неспецифического связывания; с антителами к IgG человека для подтверждения внесения исследуемого образца сыворотки крови; с IgG человека для подтверждения внесения коньюгата с флуоресцентной меткой; а также 4 ячейки с красителем Су5, маркирующие границы анализируемой области.
Зона эррея закрыта пластиковой инкубационной камерой шириной 13 мм и объемом 60 мкл с отверстиями для введения анализируемого биологического образца (диаметр отверстия 1,5 мм)..
Дополнительными реагентами, необходимыми для использования полезной модели, являются раствор для разведения контрольных и исследуемых образцов (50мМ фосфатный буфер с 0.05% Tween-20); раствор антител к Fc-фрагменту иммуноглобулина человека, коньюгированных с флуоресцентным красителем Су5; жидкость для промывки иммуночипа (деионизированная вода).
Дополнительным оборудованием, необходимым для использования полезной модели, является установка для количественной детекции флуоресценции (сканер), обеспечивающий возбуждение красителя Су5 при 650 нм и количественную регистрацию флуоресценции при 670 нм.
Осуществление полезной модели
Основной задачей, которую решает настоящая полезная модель, является повышение диагностической чувствительности трепонема-специфической серодиагностики сифилиса.
Достижение этой задачи обеспечивается использованием расширенной панели видоспецифических антигенов Treponema pallidum (Тр15, Тр17, Тр47, TmpA, Тр0277, Тр0319, Тр0453, Тр0684, Тр0965 и Тр1038), по отношению к которым образцы сыворотки крови тестируется на наличие соответствующих трепонема-специфических антител.
Серологическая диагностика сифилиса с помощью иммуночипа осуществляется следующим образом:
1) Анализируемые образцы крови собираются в вакуумные пробирки с коагулянтом, разделяются центрифугированием при 1500 g в течение 15 мин, выворотка направляется на исследование или при необходимости помещается на хранение при -70°С.
2) Перед проведением исследования сыворотки разводятся 1:10 в 50 мМ фосфатном буфере с 0.05% Tween-20, после чего в объеме 60 мкл вносятся в камеру иммуночипа.
3) Иммуночип с исследуемым образцом инкубируются 1 ч при 37°С. На данном этапе происходит взаимодействие присутствующих в сыворотке специфических антител с соответствующими антигенами, иимобилизованными в ячейках на поверхности иммуночипа. Кроме того, присутствующие в сыворотке иммуноглобулины вне зависимости от своей специфичности взаимодействуют с ячейками, содержащими антитела к IgG человека (контроль правильности внесения образца).
4) После завершения инкубации несвязанные антитела удаляют. Для этого чипы ополаскивают деионизированной водой, промывают фосфатным буфером с 0.05% Tween-20 в течение 30 минут на ротационном шейкере при 200 об/мин, вновь ополаскивают деионизированной водой и высушивают в потоке воздуха.
5) В камеру иммуночипа вносят 60 мкл раствора антител к Fc-фрагменту иммуноглобулина человека, коньюгированных с флуоресцентным красителем Су5, после чего повторно инкубируют 1 ч при 37°С. На данном этапе происходит взаимодействие флуоресцентного коньюгата с антителами сыворотки крови, ранее провзаимодействовавшими с иммобилизованными в ячейках иммуночипа антигенами Т. pallidum. Кроме того, флуоресцентный коньюгат взаимодействует с контрольными ячейками, содержащими IgG человека (контроль правильности внесения коньюгата).
6) После завершения повторной инкубации с иммуночипа удаляется реакционная камера, иммуночип промывается деионизированной водой и высушивается в потоке воздуха.
7) Регистрация результатов исследования на иммуночипе проводится с использованием аппаратно-программного комплекса для анализа биочипов, позволяющего возбуждать флуоресценцию (ФЛ) красителя Су5 при 650 нм и регистрировать ее при 670 нм.
8) Интенсивность ФЛ рассчитывается как средний сигнал от четырех ячеек с одним и тем же антигеном.
9) Пороговый уровень флуоресценции (ФЛпорог) для каждого использованного рекомбинантного антигена Т. pallidum предварительно определяется на основе реакции с образцами сывороток крови здоровых доноров (Фиг. 3) с поправкой +3σ (квадратическое отклонение для данной выборки).
10) В дальнейшем «положительными» считаются значения флуоресценции, превышающие ФЛпорог более чем на 10%; «отрицательными» - составляющие менее 90% от ФЛпорог, а значения ±10% от ФЛпорог расцениваются как сомнительные («серая зона» диагностического исследования).
Результат исследования на иммуночипе признается корректным при правильной работе всех присутствующих в составе иммуночипа контрольных ячеек: если контрольные ячейки с антителами к IgG человека, а также с IgG человека дают положительный сигнал флуоресценции, а ячейки с БСА и раствором для нанесения ("blank") дают отрицательный сигнал.
Использование заявляемого устройства (иммуночипа) для трепонема-специфической серологической диагностики сифилиса иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Исследована сыворотка крови пациента с предварительным диагнозом «Ранний скрытый сифилис (?)». Ранее полученный результат нетрепонемного теста (реакция плазменных реагинов) - положительный.
При тестировании на иммуночипе (Фиг. 4) получен положительный результат только с одним иммунодоминантным антигеном (Тр17), что позволяет объяснить сомнительный результат ИФА и в соответствии с формулой Патента RU 2397178 оставляет данную сыворотку в зоне диагностической неопределенности.
В то же время использование иммуночипа с расширенной панелью антигенов позволило зафиксировать положительный результат реакции с антигенами Тр0453, Тр0319 и Тр0277, что однозначно указывало на наличие у обследуемого пациента сифилитической инфекции.
Пример 2.
Иммуночип использован для тестирования 85 сывороток больных сифилисом и 46 сывороток здоровых доноров. Результаты исследования на иммуночипе оценены по результатам реакции с 4 традиционно используемыми антигенами Т. pallidum (Тр15, Тр17, Тр47, TmpA) и расширенной панелью из 10 антигенов (Тр15, Тр17, Тр47, TmpA, Тр0453, Тр0319, Тр1038, Тр0965, Тр0277, Тр0684). Результаты диагностической эффективности подобного тестирования оценены в соответствии с ГОСТ Р 53022.3-2008 «Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 3. Правила оценки клинической информативности лабораторных тестов».
Использование формального критерия (положительной реакции сыворотки крови с 2 или более антигенами Т. pallidum) свидетельствовало о значимом преимуществе использования расширенной диагностической панели в составе заявляемого иммуночипа. Так использование 4 антигенов позволило получить положительный результат только для 62 из 85 сывороток больных сифилисом, а использование расширенной панели - уже у 78 из 85 сывороток (т.е. на 16 случаев больше). При этом профиль иммунореактивности дополнительно идентифицированных «положительных» сывороток в 12 из 16 случаев включал традиционный антиген Тр17 и впервые использованный рекомбинантный белок Тр0453. Кроме того, в данных образцах зафиксированы антитела к рекомбинантным белкам Тр0277 (3 сыворотки) и Тр0319 (2 сыворотки), в результате чего профиль их иммунореактивности расширялся до 3-4 антигенов. Один вновь достигнутый результат основывался на специфическом взаимодействии с иммунодоминантным антигеном Тр15 и новым белком Тр0453, а еще три «положительные» сыворотки могли быть верифицированы исключительно на основе их реагирования с вновь используемыми антигенами: Тр0319 + Тр0453 и Тр0453 + Тр0965, соответственно. Результат тестирования сывороток здоровых доноров был отрицательным во всех случаях.
Результаты сравнительной оценки чувствительности, специфичности, положительной и отрицательной ценности, а также интегральной диагностической эффективности иммуночипа с использованием панелей из 4 и 10 антигенов Т. pallidum приведены в Таблице.
Примечания: * - Тр15, Тр17, Тр47, TmpA.
** - Тр15, Тр17, Тр47, TmpA, Тр0453, Тр0319, Тр1038, Тр0965, Тр0277, Тр0684.
Проведенный анализ позволил констатировать 100% значения специфичности как при тестировании на иммуночипе с 4-мя традиционно используемыми антигенами, так и расширенной панелью из 10 антигенов. Вместе с тем использование расширенной панели позволило существенно (с 72,6% до 91,7%) увеличить чувствительность выполняемых диагностических реакций, что нашло свое отражение в увеличении отрицательной предсказательной ценности с 66,7% до 86,8% и значимом повышении общей диагностической эффективности тестирования на заявляемом иммуночипе (до 94,6% против 82,3%).
Краткое описание чертежей
На Фиг. 1 представлена общая конструкция заявляемой полезной модели (иммуночипа) в двух проекциях: а - вид свеху; б - вид сбоку.
На Фиг. 2 представлена схема нанесения антигенов Тр15, Тр17, Тр47, TmpA, Тр0453, Тр0319, Тр1038, Тр0965, Тр0277 и Тр0684 Т. pallidum и контрольных реагентов на поверхность иммуночипа в пределах эррея.
На Фиг. 3 представлен результат анализа сыворотки крови здорового донора с применением заявляемого иммуночипа; отсутствует связывание антител в ячейках с антигенами Т. pallidum при корректной работе контрольных ячеек.
На Фиг. 4 представлен результат анализа сыворотки крови пациента с диагнозом «Ранний скрытый сифилис» с применением заявляемого иммуночипов; регистрируется связывание антител в ячейках с антигенами Тр17, Тр0453, Тр0319 и Тр0277 при корректной работе контрольных ячеек.
Claims (3)
1. Иммуночип для трепонема-специфической серологической диагностики сифилиса, представляющий собой стеклянный слайд с силановым покрытием, на поверхности которого в пределах выделенной прямоугольной области раздельно иммобилизованы антигены Тр15, Тр17, Тр47, TmpA, Тр0277, Тр0319, Тр0453, Тр0684, Тр0965 и Тр1038 Treponema pallidum в смеси с раствором гелеобразующих мономеров метакриламида в четырех повторностях каждый; реагенты для контроля правильности проведения анализа - БСА, IgG человека и антитела к IgG человека; а также флуоресцентный краситель Су5, маркирующиий границы анализируемой области.
2. Иммуночип по п. 1, отличающийся тем, что в качестве реагента, необходимого для выявления комплексов «антиген-антитело» на поверхности иммуночипа, используются антитела к IgG человека, коньюгированные с флуоресцентным красителем Су5.
3. Иммуночип по п. 1, обеспечивающий получение результата исследования в качестве числового значения интенсивности флуоресцентности на ячейках иммуночипа с возбуждением при 650 нм и регистрацией при 670 нм.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144858U RU181920U1 (ru) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | Иммуночип для трепонема-специфической серологической диагностики сифилиса |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144858U RU181920U1 (ru) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | Иммуночип для трепонема-специфической серологической диагностики сифилиса |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU181920U1 true RU181920U1 (ru) | 2018-07-26 |
Family
ID=62981913
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017144858U RU181920U1 (ru) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | Иммуночип для трепонема-специфической серологической диагностики сифилиса |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU181920U1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2699057C1 (ru) * | 2018-08-30 | 2019-09-03 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы "Московский научно-практический Центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения города Москвы" | Способ диагностики нейросифилиса |
| CN111530439A (zh) * | 2020-05-13 | 2020-08-14 | 郑州伊美诺生物技术有限公司 | 一种制备血清中定值梅毒特异性抗体的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6479248B1 (en) * | 1995-09-29 | 2002-11-12 | Siegfried Krell | Process and agent for detecting antibodies against Treponema pallidum |
| US6815173B1 (en) * | 1999-06-09 | 2004-11-09 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method for detecting syphilis using synthetic antigents |
| RU2397178C1 (ru) * | 2009-02-27 | 2010-08-20 | Федеральное государственное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Диагностическая тест-система в формате иммуночипа и способ серологической дифференциальной диагностики сифилиса |
-
2017
- 2017-12-20 RU RU2017144858U patent/RU181920U1/ru active IP Right Revival
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6479248B1 (en) * | 1995-09-29 | 2002-11-12 | Siegfried Krell | Process and agent for detecting antibodies against Treponema pallidum |
| US6815173B1 (en) * | 1999-06-09 | 2004-11-09 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method for detecting syphilis using synthetic antigents |
| RU2397178C1 (ru) * | 2009-02-27 | 2010-08-20 | Федеральное государственное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Диагностическая тест-система в формате иммуночипа и способ серологической дифференциальной диагностики сифилиса |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Варьирование иммунного ответа на антигены TP0277, TP0684, ТР0965 и ТР1038 Treponema pallidum при различных формах сифилиса [Текст] / А. В. Рунина [и др.] // Российский иммунологический журнал : науч. журнал. 2017/1, том 11, с.70-78. * |
| Смердова М.А., Маркелов М.Л., Гущин А.Е., Судьина А.Е., Шишова А.В., Шипулин Г.А. Разработка экспериментальной тест-системы на основе иммуночипа для серодиагностики сифилиса // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2008/6, с.54-58. * |
| Смердова М.А., Маркелов М.Л., Гущин А.Е., Судьина А.Е., Шишова А.В., Шипулин Г.А. Разработка экспериментальной тест-системы на основе иммуночипа для серодиагностики сифилиса // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2008/6, с.54-58. Варьирование иммунного ответа на антигены TP0277, TP0684, ТР0965 и ТР1038 Treponema pallidum при различных формах сифилиса [Текст] / А. В. Рунина [и др.] // Российский иммунологический журнал : науч. журнал. 2017/1, том 11, с.70-78. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2699057C1 (ru) * | 2018-08-30 | 2019-09-03 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы "Московский научно-практический Центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения города Москвы" | Способ диагностики нейросифилиса |
| CN111530439A (zh) * | 2020-05-13 | 2020-08-14 | 郑州伊美诺生物技术有限公司 | 一种制备血清中定值梅毒特异性抗体的方法 |
| CN111530439B (zh) * | 2020-05-13 | 2023-12-19 | 郑州伊美诺生物技术有限公司 | 一种制备血清中定值梅毒特异性抗体的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2014226173B2 (en) | Method and device for combined detection of viral and bacterial infections | |
| RU2397178C1 (ru) | Диагностическая тест-система в формате иммуночипа и способ серологической дифференциальной диагностики сифилиса | |
| JP3969722B2 (ja) | カンジダの検出 | |
| AU2003284187B2 (en) | Inflammatory bowel disease and irritable bowel syndrome IBD-first chek diagnostic panel | |
| RU181920U1 (ru) | Иммуночип для трепонема-специфической серологической диагностики сифилиса | |
| US11061028B2 (en) | Compositions and methods for the diagnosis of lyme disease | |
| CN111512159A (zh) | 结核诊断方法 | |
| KR102172016B1 (ko) | 항-cyfra21-1 자가항체-항원 결합체 및 cyfra21-1 항원 마커의 검출방법 및 이들 마커의 비율을 이용한 폐암 진단키트 | |
| KR20160128647A (ko) | 쇼그렌증후군 특이적 항체반응 검사를 이용한 쇼그렌증후군 진단방법 | |
| Xu et al. | Development of chemiluminescent lab‐on‐fiber immunosensors for rapid point‐of‐care testing of anti‐SARS‐CoV‐2 antibodies and evaluation of longitudinal immune response kinetics following three‐dose inactivation virus vaccination | |
| Sato | Laboratorial diagnosis of syphilis | |
| RU2532352C2 (ru) | Способ проведения иммунохроматографического анализа для серодиагностики | |
| JPH07140144A (ja) | アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体の測定方法および抗原抗体複合体の測定方法 | |
| JPH09507577A (ja) | 多対象同時測定用反応カラムと方法 | |
| WO2021221082A1 (ja) | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来ヌクレオカプシド断片および該断片を用いて抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を検出する方法およびキット | |
| Aktas et al. | Evaluation of the fluorescent treponemal antibody absorption test for detection of antibodies (immunoglobulins G and M) to Treponema pallidum in serologic diagnosis of syphilis | |
| WO2005064340B1 (fr) | Methode de diagnostic serologique et determination de statut vaccinal comprenant differents controles | |
| PT1538445E (pt) | Sistema de imunocromatografia e processo para a identificação dos anticorpos aag e tgt e o seu uso para diagnóstico da doença celíaca | |
| RU133313U1 (ru) | Диагностическая тест-система в формате иммуночипа и способ серологической диагностики иксодового клещевого боррелиоза | |
| RU2726484C1 (ru) | Способ диагностики риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки, иммуноферментная диагностическая тест-система для его осуществления | |
| RU2702900C1 (ru) | Способ количественного определения антител к бензо[а]пирену в биологических жидкостях человека | |
| WO2017208425A1 (ja) | 抗体検査のための前処理液及び抗体検査キット、抗体検査方法 | |
| KR20180023563A (ko) | 측방유동 면역 분석 기반의 항ccp 항체 및 류마티스인자를 이용한 류마티스 관절염 진단 방법 | |
| WO2023180899A1 (en) | Device and method for detecting diarrhea | |
| Parija | Antigen–Antibody Reactions |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM9K | Utility model has become invalid (non-payment of fees) |
Effective date: 20201221 |
|
| NF9K | Utility model reinstated |
Effective date: 20220207 |