RU1791448C - Способ получени среды дл выделени и видовой идентификации стафилококков - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к области медицины , а именно медицинской микробиологии , и может быть использовано дл  выделени  стафилококков и видовой идентификации их по лецитиназной активности и пигментообразованию. Целью изобретени   вл етс  улучшение ростовых свойств среды и процесса лиофилизации, а также увеличение срока хранени  целевого продукта. Она достигаетс  тем, что порошковый агар- агар смешивают с хлоридом натри , желтком и молоком, а затем добавл ют м ср-пептонный бульон, смесь гомогенизируют при комнатной температуре, замораживают до температуры от 40-50°С в охлажденном спирте и лиофилизируют в течение 16-18 ч при температуре продукта не выше 35°С, причем в начале сушки создают давление 0,026-0,013 кПа, а в конце сушки - 0,003 кПа. 1 табл. w fe

Description

Изобретение относитс  к области медицины , а именно к медицинской микробиологии и может быть использовано дл  выделени  стафилококков и видовой идентификации их по лецитиназной активности и пигментообразованию.

Известен способ приготовлени  жел- точно-молочно-солевого агара дл  выделени  и идентификации стафилококков, включающий смешивание питательного агара , содержащего ферментативный гидроли- зат кормовых дрожжей и хлорид натри  с молочно-желточной смесью по прописи.

Целью изобретени   вл етс  улучшение ростовых свойств среды и процесса лиофилизации , а также увеличение срока хранени  целевого продукта.

Указанна  цель достигаетс  тем, что порошковый агар-агар смешивают с хлоридом натри , желтком и молоком, а затем добавл ют м со-пептонный бульон, смесь гомогенизируют при комнатной температуре, замораживают до температуры - 40, -50°С в охлажденном спирте и лиофилизируют в течение 16-18 ч при температуре продукта не выше 35°С, причем в начале сушки поддерживают давление 0,026-0,013 кПа, а в конце сушки - 0,ООЗкПа.

Пример. Дл  получени  среды используют следующие компоненты (в вес.%): порошковый агар-агар - 1,8-2,0; натри  хлорид - 7,5-10; желток  ичный - 1,2-1,5; молоко коровье стерильное - 18,0-20,0, м со-пептонный бульон - остальное.

VJ

N0

S

00

Все компоненты в указанной последовательности помещают в стерильную емкость , тщательно растирают до получени  однородной массы, после чего при посто нном перемешивании добавл ют м со-пеп- тонный бульон. Смесь разливают по 100 мл в стерильные бутылки емкостью 250 мл. закрывают резиновыми пробками и погружают в ванну с охлаждением до -40, -50°С на 30-40 мин. При вращении бутылок смесь замораживают на их стенках. Затем бутылки открывают, помещают в сублимационный аппарат и замороженную смесь сушат в течение 16-18 ч. ори температуре продукта не выше 35°С/ до Зч. или при -35-17°С; 4-11 ч. при -15-0°С; 12-18ч. при 30-35°С/, причем в начале сушки поддерживают давление 0,026-0,013 кПа, в конце сушки - 0,003 кПа. Бутылки с высушенной средой герметически укупоривают.

Дл  использовани  среды в бутылки добавл ют небольшое количество кип щей стерильной дистиллированной воды, встр хивают , чтобы смыть сухую массу со стенок, довод т ее уровень до 100 мл. Восстановленную среду разливают в стерильные чашки Петри и после застывани  используют дл  посевов по общеприн той методике. .

Исследовани  охватывают изучение 90 культур стафилококков, выделенных от больных туберкулезом.

Дл  оценки биологической активности восстановленной сухой и нативной сред, изготовленных , соответственно, по за вленному способу и по прототипу, учитывали процентное количество культур, которые про вл ли лецитиназную активность и обнаружили пигмент спуст  24 и 48 ч после посева.

Показатели интенсивности лецитинаэ- ной активности и пигментообразовани  при проверке через 24 и 48 ч после посева патологического материала на нативную и сухую восстановленную питательную среды, изготовленные сравниваемыми способами, представлены в таблице.

Результаты сравнительного изучени  лецйтиназной активности и пигментообразовани  стафилококков на нативной и сухой восстановленной питательных средах, изготовленных , соответственно, по прототипу и за вленному способу.

Результаты проверки лецйтиназной активности через 24 ч после посева показывают преимущества сухой восстановленной среды по за вленному способу.

Полученные через 24 ч различи  по пиг- ментообразованию статически также вы в1 л ют преимущество сухой питательной

среды, изготовленной по за вл емому способу . Эта особенность более  рко выражена у культур, образующих золотисто-желтый пигмент.

Высока  биологическа  активность сред по за вленному способу подтверждаетс  и при сопоставлении результатов испытани  обеих сред после 48 ч после посева патологического материала.

Через 24 ч и 48 ч после посева среда по за вленному способу обладала более высокими биологическими качествами выделени  и идентификации стафилококков по лецйтиназной активности и пигментообразованию .

Весьма существенно, что на сухой восстановленной среде 73,3% культур стафилококков по пигменту и лецйтиназной активности уже через 24 ч могли быть отнесены к патогенным штаммам. Причем пато- генность их подтверждена в реакции плазмокоагул ции. На нативной среде таких штаммов было 50% по истечении 24 ч после посева. Различие статистически достоверно . Этот факт подтверждает более высокие биологические качества сухой среды по предлагаемому способу, позвол ющие за короткий период получить более высокий диагностический результат.

Анализ скорости прироста количества патогенных культур в последующие 24 ч на нативной среде показывает, что их максимальное число 70,0%. достигаетс  только к 48 ч, в то врем , как на сухой, восстановленной среде максимум (73,3%) патогенных культур обнаруживаетс  уже к 24 ч после посева и лишь незначительно (4%) возрастает к 48 ч. Фактически полноценна  диагностика патогенности стафилококков

обеспечиваетс  на сухой восстановленной среде в 24 ч инкубации в термостате, т.е. в срок в 2 раза меньше, нежели на нативной среде.

Вторично биологическа  активность

среды по за вленному способу была проконтролирована после 12 мес цев хранени , которые показали, что питательна  среда, изготовленна  по за вленному способу и восстановленна  после 12 мес цев

хранени , при видимой идентификации стафилококков по показател м лицетиназной активности и пигментобразованию превосходит нативную среду по прототипу.

Способ приготовлени  среды позвол ет получить сухую питательную среду, стандартизировать ее и обеспечить выделение и видовую идентификацию стафилококков по лецйтиназной активности и пигментообра- зованию.

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ получени  среды дл  выделени  и видовой идентификации стафилококков, включающий приготовление желтрчно-мо- лочно-солевой питательной смеси на уплотн ющей агаровой основе, отличающийс  тем, что, с целью улучшени  ростовых свойств среды и процесса лиофи- лизации, а также увеличени  срока хранени  целевого продукта, в качестве уплотн ющей основы используют порошкр0

   вый агар-агар, смешивают его с хлоридом натри , желтком и молоком, смесь гомогенизируют при комнатной температуре с м - со-пептонным бульоном, замораживают до температуры -40...-50°С в охлажденном спирте и лиофилизируют в течение 16-18 ч. при температуре продукта на выше 35°С, причем в начале сушки поддерживают давление 0,026-0,013 кПа, а в конце сушки - 0.003 кПа.