RU1783440C - Способ определени стресс-реакции - Google Patents

Description

1 .

(21)4489405/14 (22)03.10.88 (46)23.12.92. Бюл. №47

(71)Свердловский государственный медицинский институт

(72)О.Г.Макеев, И.В.Ясырева и А.В.Короткое

(56)Авторское свидетельство СССР

№ 1293651, кл. G 01 N 33/58, опублик. 1987.

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРЕСС-РЕАКЦИИ

(57)Использование: физиологи , медицина. Целью изобретени   вл етс  повышение точности Способа. Сущность изобретени : в

качестве инкубационой среды эритроцитов с мечеными биологически активными веществами (БАВ) используетс  околоклеточна  среда органов и тканей, в которых происходит эритроцитарный обмен БАВ. При этом околоклеточна  среда, взаимодейству  с эритроцитами, вызывает отсоединение БАВ, активно используемых ткан ми (и недостаток которых имеетс  в среде), и присоединение к эритроцитам БАВ, имеющихс  в околоклеточной среде в избытке, что моделирует услови  обмена БАВ в ткан х. По окончании инкубации эритроциты отмывают от инкубационной среды и радиометри- руют. 5 табл.

Изобретение относитс  к медицине и физиологии, а именно к методам исследовани  эритроцитарных транспортных систем.

Известны способы оценки стресс-реакции путем определени  объема кровотока через голбвпой мозг и константы скорости потреблени  кислорода ткан ми мозга, анализа электрокардиограммы.

Наиболее близким к изобретению  вл етс  способ определени  реакции организма на воздействие стрессорных факторов, основанный на определении в крови кислой фосфатазы, катепсина Д и щелочной фосфа- тазы в периоды относительного функционального поко  и действи  стрессора. При повышении активности ферментов в услови х стресса менее чем на 20% устанавливают нормальную реакцию организма, а при увеличении более чем на 20% - патологическую реакцию.

Недостатком способа  вл етс  низка  точность оценки. Последнее обусловлено широкими пределами колебани  концентрации ферментов в зависимости от возраста , режима питани , наличи  заболеваний, в том числе хронических, групп крови (Клиническа  оценка лабораторных тестов/Под ред. Н.У.Тица. М.: Медицина, 480 с).

Целью изобретени   вл етс  повышение точности способа.

Цель достигаетс  тем, что в способе, включающем исследование биологически активных веществ (БАВ) крови, эритроциты помещают в биологические жидкости организма , в которые дополнительно внос т меченые БАВ, и при определении отношени  приращени  св зывани  с эритроцитами БАВ менее 0,63 устанавливают начальную стадию стресс-реакции, а при значении более 1,37 устанавливают стадию поврежде ни  клеточных момбран.

х| 00 W

4

6

Увеличение точности способа происходит за счет того, что начальна  стади  стресс-реакции, сопровождающа с  изменением состава и свойств биологических жидкостей, вызывает снижение взаимодействи  эритроциты-меченые БАВ, а развитие стресс-реакции, сопровождающеес  повреждением клеточных мембран (повреждение липидного бисло ), приводит к повышению взаимодействи  эритроциты - меченые БАВ (в результате увеличени  неспецифического компонента взаимодействи ).

В осуществлении способа используютс  БАВ, принимающие активное участие в процессах адаптации и компенсации повреждени  - кортикостероиды и простаг- ландин Е2 (ПГЕа).

Способ осуществл етс  следующим образом .

На 1 этапе определ ют характеристики эритроцитов и сыворотки интактных доноров . Эритроциты получают посредством центрифугировани  интактных доноров. Эритроциты получают посредством центрифугировани  стабилизированной крови и помещают в 0,4 мл биологической жидкости (сыворотки, околоклеточной жидкости), полученной от интактных доноров, в которую внесены меченые кортикостероиды и ПГЕ2 в концентраци х 10 -109 моль дл  ПГЕ2 и кортикостероиды и 10 10-10 s моль. Основное требование при проведении этого этапа - предварительное тестирование крови людей по системе АВО. Спуст  30 мин инкубации этой смеси при 37°С эритроциты отмывают от несв занного лиганда на мил- липоровых фильтрах. Фильтры высушивают и радиометрируют в простом толуоловом сцинтилл торе. На основании полученных данных стро т график зависимости количества св завшегос  вещества (ось ординат) от концентрации внесенного в инкубационную среду (ось абсцисс).

На построенном графике определ ют место перегиба, необходимость вы влени  которого обусловлена тем, что этой точке соответствует насыщение специфических к данному радиолиганду участков св зывани . Дальнейшее св зывание (после насыщени  специфических участков) обусловлено неспецифическими процессами (липофильностью и гидрофобностью БАВ), химическими и физическими свойствами мембраны.

Таким образом, смещение точки перегиба свидетельствует об изменении концентрации данного БАВ в окружающей клетку среде, которое вступает в конкуренцию с меченым аналогом за места специфического св зывани . Полученна  концентраци  и превышающа  ее на пор док в дальнейшем используютс  дл  оценки стадии стресс-реакции . Дополнительна  концентраци  (на

пор док больша ) необходима дл  оценки неспецифического св зывани , которое в основном зависит от химического состава мембран, немен ющегос  под действием стресса.

0 Эритроциты и сыворотку, исследованные на 1 этапе, сохран ют в течение 2-3 недель при 1-4°С и используют по мере необходимости на 2 этапе. Экспериментальным путем определено, что исследованные

5 показатели при хранении в этих услови х в течение 3 недель не измен ютс .

Проведением 1 этапа (определение концентрации радиолиганда) достигаетс  существенное повышение точности оценки

0 стресс-реакции благодар  исключению погрешностей , св занных с индивидуальными особенност ми доноров и качеством использованных в работе реактивов.

На 2 этапе готов т 2 серии инкубацион5 ных культур:

1сери  - эритроциты здоровых доноров (заготовлены на 1 этапе), биологическа  жидкость обследуемых;

2сери  - эритроциты обследуемых, би- 0 ологическа  жидкость здоровых доноров

(заготовлена на 1 этапе).

В каждой серии исследуетс  св зывание с эритроцитами меченых ПГЕ2 и корти- зола (кортикостерона у лабораторных

5 животных, что обусловлено особенност ми их эндокринной регул ции) в концентраци х , определенных на 1 этапе, которые до- бавл ютс  в среде перед внесением эритроцитов. Режимы инкубации и последу0 ющей радиометрии аналогичны 1 этапу. На основании полученных данных рассчитывают отношение приращений св зывани  ли- гандов в 1 и 2 сери ,х по отношению приращений св зывани  лигандов, пол5 ученных на 1 этапе (эритроциты и сыворотка интактных доноров). При возрастании концентрации меченого БАВ, в среде инкубации на пор док определ ют разницу отношений приращений дл  двух концент0 раций в 1 и 2 сери х. Вы вл ют вещество, дл  которого эта величина окажетс  наименьшей , и на основании этого производ т оценку стадии стресс-реакции. Выполнение подобной процедуры приводит к некоторо5 му загрублению метода, однако подобный подход оправдан, так как позвол ет снизить вли ние случайных факторов на результат, что ведет к повышению точности способа (Горелик Л.А. и др. Методы распознавани .

М.: Высша  школа, 1989, с. 99-111).

Способ по сн етс  следующими примерами .

Пример 1. Возраст обследуемых от 20 до 50 лет. По предлагаемому способу обследовано 120 рабочих.

Первый этап исследовани . Кров здоровых доноров получали со станции переливани  крови. Полученную кровь тестировали по системе АВО и резус-фактору. Эритроциты из цельной крови получали центрифугированием (3,5 тыс. об/мин, 15 мин), дважды отмывали растворов Хенкса при тех же режимах центрифугировани . Отмытые эритроциты суспендировали в растворе Хенкса по 25 -10 клеток в 50 мкл среды, залибали их в пластмассовые трубы и дл  хранени  помещали в холодильник при 1-4°С.

Сыворотку крови от здоровых доноров фильтровали через миллипоровые фильтры с величиной пор 220 нм и помещали в пла- стмассЬвы е трубы в холодильник при 1-4°С.

На 1 этапе сыворотку крови здоровых доноров в объеме 400 мкл помещали в полистироловые платы, в которые вносили меченные по тритию и углероду лиганды (5, б, 8,11,12,14, 153Н-простагландин Е2 фирмы Амершам, мол рна  активность - 6,43 ТБк/ммоль) в обьеме 50 мкл физраствЬра до конечных Концентраций 500 мкл инкубационной среды Ю 11,2- 1011,4-1011,, 1012, 2- Ю 10, 4- 1010, 8- Ю 10, моль и 414 С-к ортизол (мол рна  активность 1,8 ТБк/моль, СССР) в объеме 50 мкл до конечных концентраций , 2 , 4- Ю 10, 8 , , 2- , 4- , 8- Ю 9, моль по три пробы каждой концентрации,

Процедура разведени  на примере раз- реденм  ПГЕ2.,

Удельна  радиоактивность ПГЕа по паспорту составл ет 6,48 ТБк/ммоль, объемна  радиоактивность флакона по паспорту 3,7 МБк/мл. Радиоактивность фасовки 1,85 МБк. Следовательно, дл  вычислени  объема растворител , в котором поставл етс  ПГЕа, необходимо общую активность фасовки разделитьЧ1а объемную радиоактивность (1,85 МБкгЗ, 1 МБк/мл 0,5 мл или 500 мкл). Дл  определени  количества вещества , наход щегос  в фасовке, общую радиоактивность фасовки раздел ют на удельную радиоактивность вещества (1,85 МБк:6,48ТБк/ммоль 0,285;10 ммольили 0,285-Ю 9 моль).

Так им образом, имеетс  0,285- 10 моль ПГЕ2. растворенного в 500 мкл абсолютного этанола (растворитель поставки). Необходимо в инкубационной среде с общим объемом 0,5 мл создать концентрацию ПГЕ2 моль(примр). Концентраци  М соV14

1C 14 в

0

0

ответствует 10 М в 1 мл или 0,5 0,5 мл. Дл  решени  этой пропорции 0,5- М х 500 мкл: 0,285- ,75 мкл. Следовательно, 0,5- Ю 14 М ПГЕа содержитс  в 8,75- мкл. Необходимо вз ть 87- 5 мкл и развести в Ю3 раз. Раз&одение осуществл етс  поэтапно. На 1 этапе 8,75 мкл исходного раствора развод т 500,0 мкл физраствора , 50 мкл полученного раствора развод т в 0,450 мл физраствора (разведение в 100 раз). При разведении 50 мкл последнего раствора в 450 мкл среды получают конечную концентрацию (разведение в J03 раз) в инкубационной среде, содержагцэй 5 сыворотку, эритроциты и ПГЕа.

По той же схеме рассчитывают другие концентрации.

Радиоактивность полученных концентраций рассчитывают по формуле: количество вещества, умноженное на уд. радиоактивность вещества (0,,48х1015 Бк/моль 32,4 Бк). Следует отметить, что моль вещества соответствует 10 (число Авогардо) Ю9 молекул; таким обра- 5 зом, в 0,5 мл инкубационной среды с концентрацией ПГЕ2 10 моль содержитс  10 молекул ПГЕ2.

Расчет радиоактивности используют при проведении очистки ПГЕ2 на колонке, заполненной кремниевой кислотой (ВИР РЕД, США), смесью 0,04 объемных долей метанола и 0,96 объемных долей хлороформа с последующим упариванием и разведением в абсолютном этаноле. В последнем случае пересчитывают на выход с колонки (65%-хО,65).

В каждую  чейку платы заливают 25 -10 эритроцитов (к уже залитым сыворотке и меченому лиганду) в объеме 50 мкл и помещают в термостат при 37°С.

После инкубации клетки осаждают на миллипоровые фильтры (450 нм) и отмывают 25-кратными объемами физраствора, содержащего немеченые лиганды (дес тикратно превышающие по концентрации использованные). Фильтры высушивают и радиометрируют в простом толуоловом сцинтилл торе на сцинтилл ционном счетчике Бета-2 (эффективность счета по 3Н - 0 57,5%,по14С-97%).

Данные представлены в табл.1.

На основании таблицы строили график зависимости количества св завшегос  вещества (ось ординат) от концентрации, вне- 5 сенной в среду инкубации (ось абсцисс) дл  донора С., 28 лет, III гр. крови, резус +.

На построенном графике определ ли место перегиба (дл  ПГЕ2 - 0,9 М, дл  кортизола - 10 М).

0

5

0

5

Полученные таким образом результаты  вл ютс  контрольными дл  обследуемых, имеющих группу крови III и резус +.

На 2 этапе исследовани  у обследуемых также получали эритроциты крови (3-кратной отмывкой центрифугированием 3,5 тыс. об/мин, 15 мин), стабилизированной гепарином или цитратом венозной крови, и сыворотку (отстаиванием при 4°С в течение 2 ч и последующим центрифугированием 3,5 тыс.об/мин, 15 мин) нестабилизированной венозной крови.

Полученную от пациентов кровь тестировали по системе АВО и по наличию в крови резус-фактора. При определении III группы крови и резуса + использовали дл  проведени  реакции эритроциты и сыворотку здорового донора С. Кровь обследуемых с иной группой исследовали с эритроцитами и сывороткой здоровых доноров соответствующей группы крови.

. Сыворотку крови рабочего 17. (26 лет, стаж работы 1 год, оператор), имеющего III группу крови и резус + в объеме 0.4 мл, заливали в 12  чеек пластиковых плат (объем  чейки 1,5 мл) и приливали меченый ПГЕа в концентраци х, определенных на 1 этапе (0,9 - точка перегиба и 0,9 10 - в 10 раз больша ), в 6  чеек и меченый кортизол ( и моль) в 6  чеек по 3 на каждую концентрацию.

В следующие 12  чеек заливали сыворотку здорового донора С., в которые аналогичным образом и в тех же концентраци х приливали меченые лиганды (по 3 на каждую концентрацию).

Полистироловые платы разогревали в термостате в течение 5 мин (37°С) и в заполненные  чейки вносили эритроциты: в сыворотку крови обследуемого П. - по 25-10 клеток здорового донора С. в объеме 50 мкл и в сыворотку крови здорового донора С. - 25-106 эритроцитов обследуемого П. (50 мкл).

После 30-минутной инкубации при 37°С эритроциты осаждали на фильтры с величиной пор 450 нм, отмывали 25-кратным объемом физиологического раствора, содержащим в избытке немеченые лиганды. Фильтры подсушивали и помещали в специальные контейнеры, в которых доставл ли в лабораторию СГМИ, где радиометрировали на счетчике БЕТА-2. На основании полученных данных составлена табл.2.

Пример расчета поданным рабочего П.: Хопыт 701.1 -662.2 ,04

Хконтроль 740 - 643,0 где 0,4 - отношение приращений св зывани  ПГЕ2 с эритроцитами донора С. при

инкубации с сывороткой донора П. По отношению к приращению св зывани  ПГЕ2 с эритроцитами донора С. при их инкубации с сывороткой донора С. (Х0п/ХКонтр).

Хопыт ... 736

Х«жтр 737,1-592,4

«.ЧДИ,

(см. табл.1)

где 1,04 - отношение приращений св зывани  кортизола с эритроцитами обследуемого П. при инкубации в сыворотке донора С. по отношению к приращению св зывани  кортизола с Эритроцитами донора С. при их инкубации с сывороткой донора С.

Как следует из полученных данных, в наибрльшей степени измен етс  св зыва- ние МГЕз; поэтому, с целью повышени  до- стове рности, анализ следует проводить по данным изменени  св зывани  кортизола. Достоверные отличи  св зывани  кортизола получены при инкубации эритроцитов донора С. с сывороткой рабочего П (отношение приращений менее 0,63); следо- вательно, сыворотка обследуемого П. оказывает ингибирующее действие на св зывание меченого кортизола, что обусловлено избытком немеченого кортизола в сыворотке П. Возрастание концентрации кортизола в сыворотке характерно дл  начальной стадии стресс-реакции.

Таким образом, обследуемый П. находитс  в начальной стадии стресс-реакции.

На основании проведенных исследова- кий составлена диагностическа  таблица, использование которой значительно упрощает диагностическую процедуру (табл.3).

Пример 2. 1 пациент К., 23 года, 1 производство, слесарь КИП, стаж работы 3 года.

2пациент, П., 38 лет, оператор, стаж работы 3 года.

3пациент С., 24 года, оператор, стаж работы 4 года.

Результаты представлены в табл.4.

Как следует из данных, полученных при исследовании по за вл емому способу 1 пациента (К), наименьшей разницей отношений приращений св зывани  обладает

меченый ПГЕ2; следовательно, дл  повышени  точности диагностики стадии стресс-реакции целесообразно использовать данные, полученные при инкубации эритроцитов с ПГЕ2. Во всех случа х отношение приращений св зывани  находитс  в пределах 0,63- 1,37. Следовательно, стресс-реакци  отсутствует.

При обследовании пациента К. по прототипу обнаружено значительное (на 48%)

увеличение кислой и щелочной фосфатаз, что, согласно прототипу, расцениваетс  как наличие стресс-реакции. Противоречие диагностики нашло объ снение в том, что у обследуемого К. при клиническом и лабораторном исследовании вы влен хронический , в лотекущий пиелонефрит, сопровождающийс  нарастанием активности ферментов крови.

При обследовании пациента П, наименьшей разницей отношений приращений обладает кортизол, поэтому анализировали св зывание эритроцитами кортизола. Изменение св зывани  кортизола с эритроцитами донора С. при их инкубации с сывороткой пациента П меньше порогового значени  (0,63), в то же врем  изменение св зывани  кортиэола при инкубации эритроцитов пациента П. с сывороткой здорового донора С. не превышает пороговое значение (1,37).

Следовательно, пациент П. находитс  в стадии тревоги. Анализ активности ферментов по прототипу показал повышение активности ферментов на 16,3%, что должно рассматриватьс  как отсутствие стресс- реакции. Однако при клиническом обследовании данного пациента обнаружена анеми  не сной этилогии (эритроциты - 3,6 Тлитр, гемоглобин - 92 Глитр), про влением которой  вл етс  снижение активности исследуемых ферментов.

Анализ данных, полученных при исследовании крови пациента С., продемонстрировал , что с целью большей достоверности следует использовать данные по св зыванию ПГЕа. Оценка этих параметров показывает , что отношение приращений св зывани  ПГЕ2 с эритроцитами обследуемого С. при инкубации последних в интак- тной сыворотке превышает порог 1,37, что свидетельствует о наличии повреждени  клеточных мембран. Важно отметить, что у данного пациента при клиническом исследовании не вы влено соматической патологии , активность ферментов свидетельствует о наличии стресс-реакции (возрастание активности на 61,2%), Последнее совпадает с данными, полученными по данному способу . Подтверждением адекватности диагностики  вл етс  то, что исследование проведено сразу после ликвидации аварийной ситуации, св занной с выбросом сернистого газа, и работы в средствах индивидуальной защиты (близкие показатели в тот день были получены и у других пациентов).

Следует отметить, что среди обследованных лиц клинически вы влено в 52% случаев обострение хронических заболеваний

или вновь возникших заболеваний, в патогенезе которых важное место занимает стресс-реакци  ( звенна  болезнь желудка и 12-перстной кишки, гипертоническа  бо5 лезнь, астено-вегетативный синдром и др.). В эту группу вошло 32 человека, оцененных как наход щихс  в стади х стресс-реакции, и 31 человек - в стадии поко  по методу, изложенному в прототипе. В то же врем  в

0 данную группу (63 человека) вошло 60 человек , у которых обнаружена та или ина  стади  стресс-реакции, и 3 человека, состо ние которых расценивалось, как состо ние поко  по за вл емому способу. Таким обра5 зом, ошибочный диагноз по прототипу был вынесен в 31 случае, или в 49,2%. По предлагаемому способу ошибочное заключение было сделано в 3 случа х, или в 4,7%.

Следовательно, повышение точности

0 за вл емого способа по сравнению с прототипом составл ет 44,5%.

Пример 3. В эксперименте использовали мышей линии СВА в количестве 40

5 (самцы, возраст 5-6 мес цев, масса 18-22 г). В ходе эксперимента животных раздел ли на 2 группы, у одной из которых вызывали развитие стресс-реакции путем обездвиживани  в плексиглазовых трубах в

0 течение 8 ч, другую содержали в обычных услови х (по 20 животных в каждой группе). В ходе эксперимента использовали метод слепого контрол , состо щий в том, что до конца исследовани  принадлежность живо5 тного к той или иной группе была неизвестна .

В св зи с выполнением эксперимента на животных в методику исследований были внесены следующие изменени :

0 1) получение крови и сыворотки производили декапитацией животных;

2) группова  совместимость крови не оценивалась, так как была обеспечена генетической идентичностью линии животных;

5 3) в исследовании вместо 14С-кортизола был использован 3Н-кортикостерон (1, 2 6, 7 3Н4-кортикостерон, мол рна  активность 2720 ТБк/моль), что св зано с особенностью их нефроэндокринной регул ции.

0 4. Дл  оценки концентрации ферментов были использованы методические приемы, позвол ющие исследовать активность ферментов в микроколичествах крови.

5.Количество добавл емой в платы сы- 5 воротки составл ло 100 мкл, а меченые лига нды вносились в объеме 10 мкл.

6.Ввиду малого количества сыворотки, получаемой от животных, на 2 этапе исследовани  проводили в 2 повторност х, по каждой концентрации меченого БАВ.

На 1 этапе были определены рабочие концентрации меченых БАВ (ПГЕ2 и корти- костерона), которые дл  мышей линии СВА составили 1,9 , 1,9 Ми 0,8; М соответственно, --; Данные представлены в табл.5.

Выбрав БАВ с наименьшей разницей отношений приращений, кото р ым в том и другом случае  вл етс  кортийОс ёрбн, и сравнив отношени  приращений кортико- стерона в диагностической таблице, можно придти к заключению, что животное № 17 находитс  в начальной стадии стресё-реак- ции - в стадии тревоги, а животное № 28 - в стадии поко , Между тем актШность ферментов/определённых в соответствии про- тотипомг по отношению к кЪнТролю составило 16 и 14% соответствий но; чтсГпо- звол ет квалифицировать Их состЪ нй как состо ние поко .

Расшифровка протоколов показа/la, что животное Мг 17 относитс  к группе сйндук- цированной обездвиживанием стресс-реакцией , животное №. 28 - как интактное.

Таким o6 pWo.M,s при диагностике со сто-  ни  животного № 17 по методу; изложенному в прототипе, допущена ошибка,

Анализ данных всегоШс пер ймента показал , что ошибочное решение при исполь . Данные дли построени  к ривой зависимости св зыпайи  FlTEj и кортизола от количества веществ, внесенных в среду инкубации (здоровый донор С., 28 лет, III гр.крови, резус +). Радйоактивнбстб- 1П рёйбҐав№й в -к;-; УЯ4: чи средних значени х по 3 пробам ---;--;д.лi, ..:- .,.и . :л.

-, -Ч f M jrsp W

, . , . . ,

м - ..

r.f

-, i ; 1

„ f fift t

i, . % - 4f M j I

,..« fijfe i , Л- --

зовании способа, вз того за прототип, прин то в 18% случаев, а при использова.нии преДл ага еШр госпособа. - в 5% случаев, сле дОв т ль н пр ьГшенйе томнрсти оценки.

5 стадий W cc-рейцйй ho предлагаемому- способу1 с о ста.вл ет, 13 %, чтр, однако, существенно ниже, чем при обследовании людей . /

Подобный диссонанс объ сн етс  тем,

0 что в бтличие от обследованных людей в эксперименте, использовал и генетически идентичных, заведомо здоровых, содержащихс  D одинаковых услови х лаборатор- ных животных что в реальной ситуации при

5 обследований людей практически исключе- |)0 I, V. r -

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ определени  стресс-реакций, включающий регистрацию уровн  биологи0 чески актйв ных веществ (БАВ) в крови обследуемого; отличающийс  тем, что, с целью псГв Ьниени  точности способа, эритроциты доноров и обследуемого помещают в биологические жидкости обследуемого, в

   5 которые првдва рительно.внос т меченые БАВ, регистрируют урбвень приращени  св зывани  БАВ с эритроцитами обследуе-. мого, и при его значении менее 0,63 устанавливают наличие Vrpecc-реакции.

   Л -

   Т а .6 л,и ц а 1.

   13178344014

   Табли4«2

   Ланние, полученные при обследовании рабочего П. по за вл емому спосооу

   рации метки в среде производили по формуле

   &2U-JB-- . XffiMKaSftM, XHOiiTftJt .-lKWf

   где X приращение;

   Y - св зывание при концентрации метки в среде

   инкубациир соответствующей точке перегиба

   у интактного донора; Y - св зывание метки при концентрации в среде

   инкубации, в 10 раз большей

   Т

   Отношение приращений исследуемых показателей, полученных на этапе

   и

   Эритроциты здоровых

   доноров, сыворотка

   обследуемых

   В пределах от 0,63

   до 1,37

   Менее 0,63

   В пределах 063-1,37

   Примечание: в том случае, когда отношение приращений св зывани  БАВ с эритроцитами здоровых доноров, инкубируемых в сыворотке обследуемого лица, менее 0,63, а отношение приращений св зывани  БАВ с эритроцитами обследуемого, инкубируемых в сыворотке здоровых доноров, более 1,37, состо ние обследуемого следует оценивать как переход от стадии тревоги к стадии повреждени  клеточных мембран. Пороги приращений 0,63 и 1,37 получены на основании статистического анализа по св зыванию использован-, ных меченых лигандов у людей и лабораторных животных, заведомо наход щихс  в состо нии стресса или состо ни  поко , и соответствуют р азмахам колебаний средней дл  кормы величины ± 38% (,05).

   Эритроциты обследуемых , сыворотка здоро- вых доноров

   В пределах 0,63-1,37 Более 1,37

   Данные обследовани  3 рабочих газоконденсатного завода,

   имеющих III группу крови и резус +. Представлены данные

   отношени  приращений св зывани  БАВ к приращени м

   св зывани , полученным при выполнении 1 этапа (эритроциты

   и сыворотка донора С).

   Оценка стадии стресс-реакции по за вл емому способу и прототипу животных №17 и № 28

   Таблица 4

   Таблица 5