RU164292U1

RU164292U1 - METHOD FOR PRODUCING NATIVE BIOLOGICAL DRUG LIQUOR

Info

Publication number: RU164292U1
Application number: RU2016121679/93U
Authority: RU
Inventors: Василий Степанович Пикалюк; Владислав Владиславович Ткач; Максим Андреевич Кривенцов; Лейла Рустемовна Шаймарданова; Евгения Юрьевна Бессалова; Виктор Владимирович Киселев; Юрий Павлович Зайвый; Антон Осипович Лесковский
Priority date: 2016-06-01
Filing date: 2016-06-01
Publication date: 2016-08-20

Abstract

Способ получения нативного биологического препарата ликвора, включающего прижизненное субокципитальное взятие цереброспинальной жидкости коров, криоконсервацию жидким азотом полученного сырья и его размораживание с последующей стерилизацией и запаиванием в ампулы, отличающийся тем, что стерилизацию полученного сырья осуществляют пропусканием его через антибактериальные фильтры, а размораживание сырья проводят в один этап.A method of obtaining a native biological preparation of cerebrospinal fluid, including intravital suboccipital taking of cerebrospinal fluid of cows, cryopreservation of the obtained raw material with liquid nitrogen and its thawing followed by sterilization and sealing in ampoules, characterized in that the obtained raw material is sterilized by passing it through antibacterial filters and thawing is carried out one stage.

Description

Полезная модель относится к области экспериментальной медицины, ветеринарии, и может быть использована для заготовки большого количества ликвора для производства иммунобиологического препарата на его основе.The utility model relates to the field of experimental medicine, veterinary medicine, and can be used to procure a large amount of cerebrospinal fluid for the production of an immunobiological preparation based on it.

В качестве прототипа выбран способ получения нативного биологического препарата ликвора (Патент № 62850. Украша. МПК А61К 35/24, А61К 35/12. Спосиб одержання цильного ликворного препарата /Закрите акционерне товариство "Институт Кримагропроект". - Заявка № 2003087820. - Заявл. 18.08.2003. - Опубл. 15.12.2003. - Бюл. №12), который включает прижизненное субокципитальное взятие цереброспинальной жидкости коров с последующей ее стерилизацией и запаиванием в ампулы, причем полученное сырье предварительно криоконсервируют жидким азотом при t - 196°С, а через 6-8 дней осуществляют стерилизащи гамма-лучами с последующим двукратным размораживанием при температуре +18+20°С и замораживанием при температуре -40-70°С, причем как доноров используют нетельных коров второго-четвертого месяцев лактации.As a prototype, the method of obtaining a native biological liquor preparation was selected (Patent No. 62850. Ukr. IPC A61K 35/24, A61K 35/12. Method for obtaining liquor liquor / Close the Institute Krimagroproekt partnership. - Application No. 2003087820. - Application. 08/18/2003. - Publish. 12/15/2003. - Bull. No. 12), which includes intravital suboccipital taking of cerebrospinal fluid of cows with its subsequent sterilization and sealing into ampoules, and the obtained raw materials are pre-cryopreserved with liquid nitrogen at t - 196 ° С, and after 6-8 days they are sterilized with gamma rays, followed by twice thawing at a temperature of + 18 + 20 ° C and freezing at a temperature of -40-70 ° C, and donors use incorruptible cows of the second or fourth months of lactation.

Признаками, совпадающими с существенными признаками заявляемого способа, являются: прижизненное субокципитальное взятие цереброспинальной жидкости коров, криоконсерация жидким азотом полученного сырья и его размораживание с последующей стерилизацией и запаиванием в ампулы.Signs that coincide with the essential features of the proposed method are: intravital suboccipital taking of cerebrospinal fluid of cows, cryopreservation with liquid nitrogen of the obtained raw material and thawing it with subsequent sterilization and sealing into ampoules.

Причинами, препятствующими достижению ожидаемого технического результата ( повышение качества препарата), являются: высокий риск получения некачественного ликвора ввиду инфицирования, попадания в ликвор крови, возможность разгерметизации системы, трудоемкость обработки субстрата, длительность заготовки препарата за счет двукратной заморозки и оттаивания.Reasons that prevent the achievement of the expected technical result (improving the quality of the drug) are: high risk of poor-quality cerebrospinal fluid due to infection, getting into the cerebrospinal fluid, the possibility of depressurization of the system, the complexity of processing the substrate, the duration of the preparation of the drug due to double freezing and thawing.

В основу полезной модели поставлена задача усовершенствования способа получения нативного биологического препарата ликвора путем изменения процесса стерилизации, а именно - пропусканием ликвора через антибактериальные фильтры "Миллипор", что позволяет получить необходимую стерильность препарата, при этом упрощает и минимизирует сроки его изготовления, что позволяет достичь ожидаемого технического результата, то есть повысить качество ликвора какThe utility model is based on the task of improving the method for producing a native biological preparation of cerebrospinal fluid by changing the sterilization process, namely, passing liquor through antibacterial filters "Millipor", which allows to obtain the necessary sterility of the drug, while simplifying and minimizing the time of its manufacture, which allows to achieve the expected technical result, that is, to improve the quality of cerebrospinal fluid as

субстрата для производства иммунобиологического препарата для ветеринарии и медицины.substrate for the production of an immunobiological preparation for veterinary medicine.

Поставленная задача решается тем, что в способе получения нативного биологического препарата ликвора, включающего прижизненное субокципитальное взятие цереброспинальной жидкости коров, криоконсервацию жидким азотом полученного сырья и его размораживание с последующей стерилизацией и запаиванием в ампулы, согласно полезной модели, стерилизацию полученного сырья осуществляют пропусканием его через антибактериальные фильтры, а размораживание сырья проводят в один этап.The problem is solved in that in the method for producing a native biological preparation of cerebrospinal fluid, including intravital suboccipital taking of cerebrospinal fluid of cows, cryopreservation of the obtained raw material with liquid nitrogen and its thawing, followed by sterilization and sealing in ampoules, according to the utility model, sterilization of the obtained raw material is carried out by passing it through antibiotic filters, and thawing of raw materials is carried out in one step.

Между совокупностью существенных признаков предложенного способа и ожидаемым техническим результатом, который может быть достигнут, проявляется следующая причинно-следственная связь: проведение стерилизации полученного сырья путем пропускания его через антибактериальные фильтры и осуществление размораживания в один этап позволяет получить препарат, очищенный от бактерий, крупнодисперсных молекул белков, содержащихся в ликворе, а также клеток ликвора, что обеспечивает стерильность спинномозговой жидкости, отсутствие антигенных свойств при одновременном сохранении биологически активных веществ, подтвержденные результатами исследований эффективности введения такого препарата.Between the set of essential features of the proposed method and the expected technical result that can be achieved, the following causal relationship is manifested: sterilization of the obtained raw material by passing it through antibacterial filters and defrosting in one step allows to obtain a preparation purified from bacteria, coarse protein molecules contained in the cerebrospinal fluid, as well as cerebrospinal fluid cells, which ensures sterility of the cerebrospinal fluid, the absence of antigenic oystv while maintaining the biologically active substance, confirmed the results of studies of the effectiveness of the administration of the drug.

Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.

Первоначально отбирают здоровых лактирующих коров и фиксируют их в стойле. В состоянии гиперфлексии головы выполняют дезинфекцию места пункции у шейной связки и вводят толстую иглу с мандреном в большую цистерну мозга. При этом контролируют точность попадания в цистерну по ощущению провала иглы. Затем быстро извлекают мандрен и в толстую иглу вводят тонкую иглу, насаженную на шприц емкостью 100 мл (шрицы "Люэр", "Рекорд", "Жане" и т.п.).Initially, healthy lactating cows are selected and fixed in a stall. In a state of hyperflexion of the head, the puncture site of the cervical ligament is disinfected and a thick needle with mandrin is inserted into the large cistern of the brain. At the same time, the accuracy of getting into the tank is controlled by the sensation of a needle failure. Then, the mandrin is quickly removed and a thin needle inserted onto a 100 ml syringe (Luer, Record, Janet syringes, etc.) is inserted into a thick needle.

Движением поршня вновь проверяют правильность попадания в большую цистерну по наличию светло-желтого прозрачного ликвора в шприце.The movement of the piston again checks the correctness of getting into a large tank by the presence of a light yellow transparent liquor in the syringe.

За один раз у одного животного возможно получить до 100 мл ликвора без вреда для животного. Полученная спинномозговая жидкость не должна содержатьAt one time, one animal can get up to 100 ml of cerebrospinal fluid without harm to the animal. The resulting cerebrospinal fluid should not contain

примеси крови и кусочков ткани. После получения необходимого количества ликвора, извлекают сначала шприц с тонкой иглой, затем толстую иглу и обрабатывают место укола. Жидкость из шрица вводят в стерильный пластикатный мешок типа "Компопласт" через резиновую пробку мешка, маркируют мешок и погружают в сосуд Дьюара с жидким азотом при температуре - 196°С. Доставляют сосуды Дьюара на станцию переливания крови, где осуществляют размораживание спинномозговой жидкости и пропускание ее через антибактериальные фильтры "Миллипор". Затем осуществляют проверку полученного препарата на стерильность и запаивают в ампулы.impurities of blood and pieces of tissue. After obtaining the required amount of cerebrospinal fluid, first remove the syringe with a thin needle, then a thick needle and treat the injection site. The liquid from the syringe is introduced into a sterile plastic bag of the Compoplast type through the rubber stopper of the bag, the bag is marked and immersed in a Dewar vessel with liquid nitrogen at a temperature of -196 ° C. Dewar vessels are delivered to the blood transfusion station, where they thaw cerebrospinal fluid and pass it through the Millipor antibacterial filters. Then, the obtained preparation is checked for sterility and sealed in ampoules.

Стерилизацию ликвора осуществляют через антибактериальные фильтры "Миллипор", которые включают осветительные фильтры с размером пор 0,8 мкм, осветительные стерилизирующие фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, и стерилизирующие фильтры с размером пор 0,22 мкм. Для грубого очищения ликвора можно использовать только осветительные и осветительные стерилизирующие поры. Время фильтрации зависит от объема стерилизированного ликвора и от размера пор антибактериального фильтра, и может составлять от 2-3 часов до суток. Такой препарат ликвора годится к применению в ветеринарной медицине для коррекции патологий различного происхождения.The cerebrospinal fluid is sterilized through Millipor antibacterial filters, which include lighting filters with a pore size of 0.8 μm, lighting sterilizing filters with a pore diameter of 0.45 μm, and sterilizing filters with a pore size of 0.22 μm. For coarse clarification of cerebrospinal fluid, only lighting and lighting sterilizing pores can be used. The filtration time depends on the volume of the sterilized cerebrospinal fluid and the pore size of the antibacterial filter, and can range from 2-3 hours to a day. Such a cerebrospinal fluid drug is suitable for use in veterinary medicine for the correction of pathologies of various origins.

Применяют полученный ликворный препарат в ветеринарной медицине для коррекции различных патологий животных, включая анемии, дистрофии, респираторные, кишечные инфекции животных, для получения мясного прироста веса.The obtained cerebrospinal fluid is used in veterinary medicine to correct various animal pathologies, including anemia, dystrophy, respiratory, intestinal infections of animals, to obtain meat weight gain.

Способ, который заявляется, позволяет с минимальными затратами получать ценное биологическое сырье для препарата, обладающего мощными иммунологическими и адаптогенными свойствами.The method that is claimed allows to obtain valuable biological raw materials for the preparation with powerful immunological and adaptogenic properties at minimal cost.

Пример 1.Example 1

В лаборатории микробиологии проводили исследования стерильности спинномозговой жидкости (СМЖ) крупного рогатого скота. Исследовали образцы СМЖ на стерильность, включающее посев по 2 мл образцов СМЖ в среды обогащения - сахарный бульон, инкубацию в данной ростовой среде в течение 24In the laboratory of microbiology, cattle spinal fluid (CSF) sterility was studied. We studied CSF samples for sterility, including the inoculation of 2 ml CSF samples in enrichment media — sugar broth, incubation in this growth medium for 24

часов с последующим отбором по 0,1 мл каждого образца и посевом на различные питательные среды. Учёт выросших колоний бактерий проводился визуально. Идентификация выделенных культур проводилась стандартными микробиологическими методами в соответствии с определителем Берджи. Результаты исследования показали отсутствие контаминации СМЖ.hours, followed by sampling of 0.1 ml of each sample and seeding on various nutrient media. Accounting for the grown colonies of bacteria was carried out visually. Identification of the selected cultures was carried out by standard microbiological methods in accordance with the Bergey determinant. The results of the study showed the absence of CSF contamination.

Пропускание ликвора через антибактериальные фильтры "Миллипор" позволяют обеспечить стерильность спинномозговой жидкости при сохранении биологически активных веществ, что подтверждено результатами исследований эффективности введения такого препарата. Пропускание ликвора через антибактериальные фильтры "Миллипор" позволяет обеспечить сохранение мелкодисперсных биологически активных веществ в составе СМЖ.Passing cerebrospinal fluid through antibacterial filters "Millipor" allows to ensure the sterility of cerebrospinal fluid while preserving biologically active substances, which is confirmed by the results of studies of the effectiveness of the introduction of such a drug. Passing the cerebrospinal fluid through the Millipor antibacterial filters allows preservation of finely dispersed biologically active substances in the CSF.

Предложенной способ позволяет получить препарат ликвора, который не уступает ближайшему аналогу по стерильности и обеспечивает отсутствие контаминации СМЖ - загрязнение бактериями при выполнении всех условий, заявленных в способе.The proposed method allows to obtain a cerebrospinal fluid preparation, which is not inferior to the closest analogue in sterility and ensures the absence of CSF contamination - contamination by bacteria under all conditions stated in the method.

Преимуществами способа являются получение более качественного препарата ликвора, нежели в ближайшем аналоге, позволяет снизить себестоимость его производства, минимизировать сроки и упростить процедуру изготовления препарата.The advantages of the method are to obtain a higher-quality cerebrospinal fluid preparation than in the closest analogue, which allows to reduce the cost of its production, minimize the time and simplify the manufacturing process of the drug.

Предложенный способ позволяет исключить попадание крови и мягких тканей в получаемый препарат ликвора, повысить давление в системе для облегчения выведения ликвора, обеспечить герметичность системы в целом. Обеспечение данных условий повысит качество ликвора как субстрата для производства иммунобиологического препарата для ветеринарии и медицины.The proposed method eliminates the ingress of blood and soft tissues into the resulting cerebrospinal fluid preparation, increases the pressure in the system to facilitate excretion of the cerebrospinal fluid, and ensures the integrity of the system as a whole. Providing these conditions will improve the quality of cerebrospinal fluid as a substrate for the production of an immunobiological preparation for veterinary medicine.

Данный способ не требует специального оборудования. Предложенный способ быстрый, дешевый и простой в использовании.This method does not require special equipment. The proposed method is fast, cheap and easy to use.

Claims

A method of obtaining a native biological preparation of cerebrospinal fluid, including intravital suboccipital taking of cerebrospinal fluid of cows, cryopreservation of the obtained raw material with liquid nitrogen and its thawing followed by sterilization and sealing in ampoules, characterized in that the obtained raw material is sterilized by passing it through antibacterial filters and thawing is carried out one stage.