RU1448443C

RU1448443C - Method of preparing of substance recovering reproductive function of mature cattle testicles

Info

Publication number: RU1448443C
Authority: RU
Inventors: В.Г. Морозов; В.Х. Хавинсон; Н.Д. Сидорова; В.Н. Анисимов; С.П. Князева; О.В. Чайка; В.Л. Константинов
Original assignee: Морозов Вячеслав Григорьевич; Хавинсон Владислав Хаукелевич; Сидорова Нина Дмитриевна; Анисимов Владимир Николаевич; Князева Серафима Петровна; Чайка Олег Васильевич; Константинов Владимир Леонидович
Priority date: 1986-01-08
Filing date: 1986-01-08
Publication date: 1994-08-15

Abstract

FIELD: chemical-pharmaceutical industry. SUBSTANCE: minced cattle testicles are treated with acetic acid and precipitated with acetone. Precipitate is dissolved in water following by filtration and drying of the end product. Raw is treated with acetic acid at pH 3.5-4.0 with addition of zinc chloride (0.5 g/l). Conservation of active substance is provided by use of decreased temperature in the process of raw treatment (10-15 C). EFFECT: increased specific activity of the end product. 2 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к получению препаратов из органов животных. The invention relates to medicine, in particular to the preparation of preparations from animal organs.

Цель изобретения - повышение специфической активности целевого продукта. The purpose of the invention is to increase the specific activity of the target product.

Изобретение осуществляется следующим образом. The invention is as follows.

Измельченные семенники крупного рогатого скота обрабатывают уксусной кислотой, осаждают ацетоном, растворяют осадок в воде с последующими фильтрацией и высушиванием целевого продукта, обрабатывают сырье уксусной кислотой при рН 3,5-4,0, в течение 12-24 при температуре 10-15^оС с добавлением 0,5 г/л хлористого цинка, осаждение ацетоном производят тремя объемами при температуре от -5 до -10^оС, а к измельченным семенникам добавляют жмых семенников после отделения вещества, обладающего гиалуронидазной активностью, или смесь семенников и жмыха. Семенники и жмых семенников берут в соотношении 1:(5-10).The crushed cattle testes are treated with acetic acid, precipitated with acetone, the precipitate is dissolved in water, followed by filtration and drying of the target product, the raw material is treated with acetic acid at pH 3.5-4.0, for 12-24 at a temperature of 10-15 ^о С supplemented with 0.5 g / l zinc chloride, precipitation with three volumes of acetone produced at a temperature from -5 to ^-10 ° C and added to the pulverulent testes testicular oilcake, after separation substance having hyaluronidase activity, or a mixture of the testes and cake. Seed plants and seed testicles are taken in a ratio of 1: (5-10).

Существенность отличия предложенных признаков усматривается в том, что из семенников крупного рогатого скота или жмыха этих семенников выделяют вещество, отличное от известных веществ, полученных ранее из семенников крупного рогатого скота. The significance of the difference in the proposed features is seen in the fact that from the testes of cattle or oilcake of these testes a substance is distinguished that is different from the known substances obtained earlier from the testes of cattle.

П р и м е р 1. Берут 2,0 кг замороженных семенников половозрелых быков, измельчают на волчке и добавляют 10,0 кг жмыха семенников, перемешивают. Сырье помещают в реактор с охлаждением и мешалкой и заливают 5-10 ч. раствора уксусной кислоты по рН 3,5. Туда же добавляют 0,5 г на 1 л хлористого цинка (табл.1) и включают мешалку. Обработку проводят при температуре 15^оС в течение 24 ч при постоянном перемешивании.PRI me R 1. Take 2.0 kg of frozen testes of sexually mature bulls, crushed in a spinning top and add 10.0 kg of testis cake, mix. The raw material is placed in a reactor with cooling and stirrer and pour 5-10 hours of a solution of acetic acid at pH 3.5. 0.5 g per 1 liter of zinc chloride is added thereto (Table 1) and the stirrer is turned on. Processing is carried out at a temperature of 15 ^about C for 24 hours with constant stirring.

После обработки сырья жидкую фракцию отделяют центрифугированием, охлаждают до температуры -5^оС, добавляют ацетон в соотношении ацетон - супернатант 3: 1 (табл.2). Формирование осадка 20 ч. Осадок высушивают, измельчают. Полученный порошок в количестве 236 г растворяют в дистиллированной воде при температуре 18^оС из расчета 70 г на 1 л воды. Водную экстракцию проводят 2 ч при непрерывном перемешивании. Балластные белки удаляют фильтрованием. В фильтрате устанавливают рН 4,5, стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы, лиофилизируют, получают в каждом флаконе по 12 мг лиофилизированного порошка. Выход активного вещества составляет 36 г из 1 кг сырья.After processing raw liquid fraction is separated by centrifugation, cooled to ^-5 ° C, was added acetone acetone - supernatant 3: 1 (Table 2). The formation of a precipitate for 20 hours. The precipitate is dried, crushed. The resulting powder in an amount of 236 g is dissolved in distilled water at a temperature of 18 ^about With the calculation of 70 g per 1 liter of water. Water extraction is carried out for 2 hours with continuous stirring. Ballast proteins are removed by filtration. The filtrate is adjusted to pH 4.5, sterilely filtered through EKS plates, poured into vials, lyophilized, and 12 mg lyophilized powder is obtained in each vial. The output of the active substance is 36 g from 1 kg of raw material.

П р и м е р 2. Берут 10 кг жмыха семенников крупного рогатого скота после выделения лидазы, помещают в реактор и заливают 5 ч. раствора уксусной кислоты до рН 4,0. Добавляют хлористый цинк из расчета 0,5 г на 1 л содержимого и включают мешалку. Обработку проводят при температуре 15^оС в течение 12 ч при постоянном перемешивании.PRI me R 2. Take 10 kg of cake of testis of cattle after isolation of lidase, placed in a reactor and pour 5 hours of a solution of acetic acid to pH 4.0. Zinc chloride is added at a rate of 0.5 g per 1 liter of contents and the stirrer is turned on. Processing is carried out at a temperature of 15 ^about C for 12 hours with constant stirring.

После обработки сырья жидкую фракцию отделяют центрифугированием, охлаждают до температуры -10^оС и добавляют 3 объема ацетона. Формирование осадка 20 ч. Полученный осадок высушивают, измельчают и в количестве 180 г растворяют в дистиллированной воде при температуре 18^оС из расчета 75 г на 1 л воды. Водную экстракцию проводят 1 ч при непрерывном перемешивании. Балластные белки удаляют фильтрованием.After processing raw liquid fraction is separated by centrifugation, cooled to ^-10 ° C and 3 volume of acetone. The formation of a precipitate of 20 hours. The resulting precipitate is dried, crushed and dissolved in an amount of 180 g in distilled water at a temperature of 18 ^about With the calculation of 75 g per 1 liter of water. Water extraction is carried out for 1 h with continuous stirring. Ballast proteins are removed by filtration.

В фильтре устанавливают рН 4,5, стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы, лиофилизируют и получают в каждом флаконе по 12 мл лиофилизированного порошка. Выход активного вещества составляет 24 г из 1 кг сырья. The filter is adjusted to pH 4.5, sterilely filtered through EKS plates, poured into vials, lyophilized and 12 ml of lyophilized powder obtained in each vial. The output of the active substance is 24 g from 1 kg of raw material.

Биологическую активность вещества, выделенного из семенников, изучали в экспериментальной модели, предложенной Б.А.Федоровым (Федоров Б.А. Состояние семенников крыс при острой лучевой болезни. Канд. диссертация ЦНИРРИ МЗ СССР, Л., 1962). The biological activity of the substance isolated from the testes was studied in the experimental model proposed by B.A. Fedorov (B. Fedorov. Condition of rat testes in acute radiation sickness. Candidate dissertation, Central Scientific Research Institute of Health of the USSR, L., 1962).

П р и м е р 3. Берут 1 кг замороженных семенников половозрелого скота, измельчают и добавляют 5 кг жмыха семенников, после выделения лидазы перемешивают и заливают раствором уксусной кислоты до рН 3,8 с добавлением 0,5 г/л хлористого цинка, температуру устанавливают 10^оС, включают мешалку и обрабатывают сырье в течение 18 ч при постоянном перемешивании.PRI me R 3. Take 1 kg of frozen testes of sexually mature cattle, crushed and add 5 kg of cake of testes, after isolation of lidase, mix and fill with a solution of acetic acid to pH 3.8 with the addition of 0.5 g / l zinc chloride, temperature adjusted to 10 ^{° C,} the stirrer and treated feed for 18 hours with continuous stirring.

После экстракции жидкую фракцию отделяют центрифугированием, охлаждают ее до температуры -8^оС, добавляют три объема ацетона и формируют осадок в течение 20 ч. Полученный осадок сушат и измельчают. Получают порошок в количестве 118 г, растворяют в дистиллированной воде (70 г на 1 л) и проводят водную экстракцию в течение 1 ч при непрерывном перемешивании. Балластные белки отделяют фильтрованием. При рН 4,5 в фильтрате фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы, лиофилизируют и получают в каждом флаконе по 12 мг лиофилизированного порошка. Выход активного вещества составляет 36 г на 1 кг сырья.After extraction, the liquid fraction is separated by centrifugation, is cooled to a temperature of -8 ^{° C} was added three volumes of acetone, and the precipitate formed over 20 hours. The resulting precipitate was dried and pulverized. A powder of 118 g is obtained, dissolved in distilled water (70 g per 1 l) and aqueous extraction is carried out for 1 h with continuous stirring. Ballast proteins are separated by filtration. At pH 4.5, the filtrate is filtered through EKS plates, poured into bottles, lyophilized, and 12 mg lyophilized powder is obtained in each bottle. The output of the active substance is 36 g per 1 kg of raw material.

П р и м е р 4. Берут 4 кг замороженных семенников половозрелого скота, измельчают, добавляют 20 кг жмыха семенников, перемешивают и экстрагируют раствором уксусной кислоты при рН 3,6 с добавлением 0,5 г/л хлористого цинка при температуре 12^оС. Экстракцию проводят 20 ч при постоянном перемешивании.PRI me R 4. Take 4 kg of frozen testes of sexually mature cattle, chopped, add 20 kg of testis cake, mix and extract with a solution of acetic acid at pH 3.6 with the addition of 0.5 g / l of zinc chloride at a temperature of 12 ^about The extraction is carried out for 20 hours with constant stirring.

После экстракции жидкую фракцию отделяют центрифугированием, охлаждают до температуры -7^оС, добавляют 3 объема ацетона и формируют осадок в течение 20 ч. Полученный осадок в количестве 416 г растворяют в дистиллированной воде из расчета 75 г/л, проводят водную экстракцию в течение 1 ч при постоянном перемешивании. Балластные белки удаляют фильтрованием, после чего стерильно фильтруют, разливают во флаконы, лиофилизируют и получают в каждом флаконе по 12 мг лиофилизированного порошка.After extraction, the liquid fraction is separated by centrifugation, is cooled to a temperature of -7 ^{° C,} added 3 volume of acetone and the precipitate formed over 20 hours. The resulting precipitate in an amount of 416 g was dissolved in distilled water at the rate of 75 g / l, the aqueous extraction is carried out for 1 h with constant stirring. Ballast proteins are removed by filtration, and then sterilely filtered, poured into vials, lyophilized and 12 mg lyophilized powder is obtained in each vial.

Выход активного вещества составляет 24 г на 1 кг сырья. The output of the active substance is 24 g per 1 kg of raw material.

Из приведенных данных видно, что при концентрации ZnСl₂ 0,5 г/л происходит более полное выделение из семенников конечного продукта и лучшее осаждение его ацетоном.From the above data it is seen that at a concentration of ZnCl _{2 of} 0.5 g / l, a more complete isolation of the final product from the testes and a better precipitation of it with acetone occurs.

Claims

A METHOD FOR PRODUCING A SUBSTANCE RESTORING A REPRODUCTIVE FUNCTION FROM SEEDS OF MATURE MATERIALS, including treating the raw material with acetic acid, centrifuging, precipitating with acetone, dissolving the precipitate in water, followed by filtering and drying the target product, which is used to specifically use the testes after separation of a substance with hyaluronidase activity, or a mixture of testes and oilcake, is treated with acetic acid at pH 3.5 - 4.0 for 12 - 24 hours at a temperature of 10 - 15 ^o C by adding 0.5 g / l of zinc chloride, and the desired product is obtained by precipitation with three volumes of acetone at a temperature from -5 to -10 ^o C.