RS64210B1 - Čvrsti oblici inhibitora ttk - Google Patents

Description

Opis

POVEZANE PATENTNE PRIJAVE

[0001] Ova prijava zahteva korist od privremene SAD patentne prijave br. 62/363,424, podnete 18. jula 2016. godine.

OSNOV PRONALASKA

[0002] Humana TTK protein kinaza (TTK), takođe poznata kao tirozin treonin kinaza, protein kinaza dvostruke specifičnosti TTK, monopolarno vreteno 1 (Mpsl) i fosfotirozinodabrana treonin kinaza (PYT), je konzervativna multispecifična kinaza koja je u stanju da fosforiliše ostatke serina, treonina i tirozina kada se eksprimiraju u E. coli (Mills et al., J. Biol. Chem. 22(5): 16000-16006 (1992)). TTK iRNK se ne eksprimira u većini fiziološki normalnih tkiva kod ljudi (Id). TTK iRNK se eksprimira u nekim brzo proliferišućim tkivima, kao što su testisi i timus, kao i u nekim tumorima (na primer, TTK iRNK se ne eksprimira u karcinomu bubrežnih ćelija, eksprimira se u 50% uzoraka kancera dojke, eksprimira se u tumorima testisa i uzorcima kancera jajnika) (Id). TTK je eksprimirana u nekim ćelijskim linijama kancera i tumorima za razliku od normalnih pandana (Id.; videti takođe WO 02/068444 A1).

[0003] Sredstva koja inhibiraju TTK imaju potencijal za lečenje kancera. Brojni moćni inhibitori TTK prikazani su u objavama međunarodnih patentnih prijava br. WO 2014/075168 i WO 2015/070349. Jedan reprezentativni inhibitor TTK je N-ciklopropil-4-(7-((((1s,3s)-3-hidroksi-3-metilciklobutil)metil)amino)-5-(piridin-3-iloksi)pirazolo[1,5 -a]pirimidin-3-il)-2-metilbenzamid, čija je struktura prikazana u nastavku teksta kao jedinjenje (I):

[0004] Postoji potreba za oblicima soli ovog jedinjenja koji su kristalni i inače imaju fizička svojstva koja pogoduju proizvodnji velikih razmera. Takođe postoji potreba za farmaceutskim formulacijama u kojima je ovaj kandidat za lek stabilan i efikasno se isporučuje pacijentu.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0005] Predmetni pronalazak se odnosi na novi ko-kristal jedinjenja (I) i ko-formirajući molekul, pri čemu je ko-formirajući molekul fosforna kiselina. Predmetni pronalazak se takođe odnosi na hidrobromidnu so jedinjenja (I), gde je molarni odnos između jedinjenja (I) i bromovodonične kiseline 1:1. U poređenju sa slobodnom bazom i drugim oblicima soli jedinjenja (I), novi čvrsti oblici pokazuju značajno poboljšana svojstva uključujući povećanu rastvorljivost u vodi, tačke topljenja i farmakokinetičku izloženost. Konkretno, kao što je prikazano u primeru 5 u nastavku teksta, ko-kristal jedinjenja (I) i fosforne kiseline i soli bromovodonične kiseline jedinjenja (I) u kristalnom obliku dovode do značajno povećane koncentracije u plazmi u odnosu na jedinjenje u vidu slobodne baze (I) i kod pacova i kod pasa, nakon oralne primene. Ovo ima veliku prednost jer novi čvrsti oblici mogu da se primenjuju oralno kako bi se postigli efikasni nivoi leka u plazmi.

[0006] U prvom primeru izvođenja, predmetni pronalazak je usmeren na ko-kristal jedinjenja (I) i ko-formirajući molekul, ili solvat ko-kristala, pri čemu je ko-formirajući molekul fosforna kiselina.

[0007] U drugom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom primeru izvođenja, gde je molarni odnos jedinjenja (I) : fosforna kiselina u ko-kristalu 1:2.

[0008] U trećem primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom ili drugom primeru izvođenja, gde je ko-kristal hidrat.

[0009] U četvrtom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom, drugom ili trećem primeru izvođenja, gde je molarni odnos jedinjenja (I) : fosforna kiselina : H2O u ko-kristalu 1:2: 1/2.

[0010] U petom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom, drugom, trećem ili četvrtom primeru izvođenja, pri čemu ko-kristal karakterišu bilo koja tri, četiri ili bilo kojih pet pikova u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 7.6 °, 12.0°, 20.3°, 23.5° i 24.5° ± 0.2 u 2Θ.

[0011] U šestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom, drugom, trećem ili četvrtom primeru izvođenja, pri čemu ko-kristal karakterišu bilo koja tri, četiri, bilo kojih pet, šest, sedam, osam, devet, deset ili jedanaest pikova u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 7.6°, 11.1°, 12.0°, 15.4°, 17.5°, 19.8°, 20.0°, 20.3°, 21.2°, 23.5°, 23.6° i 24.5°. ± 0.2 u 2Θ.

[0012] U sedmom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom, drugom, trećem ili četvrtom primeru izvođenja, pri čemu ko-kristal karakterišu pikovi u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 7.6°, 11.1°, 12.0°, 15.4°, 17.5°, 19.8°, 20.0°, 20.3°, 21.2°, 23.5°, 23.6° i 24.5° ± 0.2 u 2Θ.

[0013] U osmom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom, drugom, trećem ili četvrtom primeru izvođenja, pri čemu se ko-kristal karakteriše dijagramom rendgenske difrakcije praha koji je prikazan na slici 1.

[0014] U devetom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom, drugom, trećem, četvrtom, petom, šestom, sedmom ili osmom primeru izvođenja, pri čemu je ko-kristal okarakterisan diferencijalnim skenirajućim kalorimetrom (DSC), sa najvišim temperaturama faznog prelaza od 160 ± 4 °C.

[0015] U desetom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom, drugom, trećem, četvrtom, petom, šestom, sedmom, osmom ili devetom primeru izvođenja, pri čemu se vodonična veza formira između vodonika fosforne kiseline i atoma azota piridinskog prstena jedinjenja (I) i vodonična veza ima rastojanje između 2.5-2.9 Å.

[0016] U jedanaestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje ko-kristal prema prvom, drugom, trećem, četvrtom, petom, šestom, sedmom, osmom, devetom ili desetom primeru izvođenja, pri čemu se ko-kristal karakteriše pikom spektroskopije<15>N - nuklearne magnetne rezonance čvrstog stanja (<15>N-ssNMR) na -122.5 ± 2 ppm, a intenzitet pika na -122.5 ppm je najmanje 40-70% manji od pika na -302 ppm. U jednom primeru izvođenja, intenzitet pika na -122.5 ppm je najmanje 40%, 50%, 60% ili 70% manji od pika na -302 ppm. U drugom primeru izvođenja, ko-kristal karakterišu pikovi spektroskopije<15>N-nuklearne magnetne rezonance čvrstog stanja (15N-ssNMR) prikazani na slici 3B.

[0017] U dvanaestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži ko-kristal prema prvom, drugom, trećem, četvrtom, petom, šestom, sedmom, osmom, devetom, desetom ili jedanaestom primeru izvođenja i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.

[0018] U trinaestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so jedinjenja (I) ili njen solvat, pri čemu je molarni odnos između jedinjenja (I) i bromovodonične kiseline 1:1.

[0019] U četrnaestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so prema trinaestom primeru izvođenja, pri čemu je so u nesolvatisanom obliku.

[0020] U petnaestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so prema trinaestom ili četrnaestom primeru izvođenja, pri čemu je hidrobromidna so prema predmetnom pronalasku kristalna.

[0021] U šesnaestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so prema petnaestom primeru izvođenja, pri čemu se kristalna hidrobromidna so karakteriše sa tri ili četiri pika u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 5.9°, 11.9°, 21.6° i 22.0° ± 0.2 u 2Θ.

[0022] U sedamnaestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so prema petnaestom primeru izvođenja, pri čemu se kristalna hidrobromidna so karakteriše sa bilo koja tri, četiri, bilo kojih pet, šest, sedam ili osam pikova u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 5.9°, 10.0°, 11.9°, 13.8°, 17.3°, 19.4°, 21.3°, 21.6° i 22.0° ± 0.2 u 2Θ.

[0023] U osamnaestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so prema petnaestom primeru izvođenja, pri čemu se kristalna hidrobromidna so karakteriše pikovima u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 5.9°, 10.0°, 11.9°, 13.8°, 17.3°, 19.4°, 21.3°, 21.6° i 22.0° ± 0.2 u 2Θ.

[0024] U devetnaestom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so u prema sa petnaestom, šesnaestom, sedamnaestom ili osamnaestom primeru izvođenja, pri čemu se hidrobromidna so karakteriše pikovima u dijagramu rendgenske difrakcije praha koji je prikazan na slici 7.

[0025] U dvadesetom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so prema trinaestom, četrnaestom, petnaestom, šesnaestom, sedamnaestom, osamnaestom ili devetnaestom primeru izvođenja, pri čemu se hidrobromidna so karakteriše pikom diferencijalne temperature fazne tranzicije (DSC) od 221 ± 2 °C.

[0026] U dvadeset prvom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži hidrobromidnu so prema trinaestom, četrnaestom, petnaestom, šesnaestom, sedamnaestom, osamnaestom, devetnaestom ili dvadesetom primeru izvođenja, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.

[0027] Drugi aspekt prema predmetnom pronalasku je ko-kristal prema prvom, drugom, trećem, četvrtom, petom, šestom, sedmom, osmom, devetom, desetom ili jedanaestom primeru izvođenja ili hidrobromidna so prema trinaestom, četrnaestom, petnaestom, šesnaestom, sedamnaestom, osamnaestom, devetnaestom ili dvadesetom primeru izvođenja, za upotrebu u lečenju kancera.

KRATAK OPIS CRTEŽA

Slika 1 prikazuje dijagram rendgenske difrakcije praha (XRPD) ko-kristala jedinjenje (I) bisfosfat hemihidrata.

Slika 2 prikazuje termogram diferencijalne skenirajuće kalorimetrijske analize (DSC) kokristala jedinjenja (I) bisfosfat hemihidrata.

Slike 3A i 3B prikazuju<15>N-NMR spektre čvrstog stanja jedinjenja (I) i jedinjenje (I) bisfosfat hemihidrat ko-kristala, respektivno.

Slika 4 prikazuje ORTEP strukturu ko-kristala jedinjenje (I) bisfosfat hemihidrata.

Slika 5 prikazuje XRPD dijagram amorfnog 1:2 jedinjenja (I)/fosforne kiseline.

Slika 6 prikazuje DSC termogram 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida.

Slika 7 prikazuje XRPD dijagram 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0029] Predmetni pronalazak obezbeđuje nove čvrste oblike jedinjenja (I), koje je N-ciklopropil-4-(7-((((1s,3s)-3-hidroksi-3-metilciklobutil)metil)amino)-5-(piridin-3-iloksi)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-2-metilbenzamid. Konkretno, nađeno je da jedinjenje (I) i fosforna kiselina mogu da formiraju ko-kristal pod dobro definisanim uslovima tako da obezbede nehigroskopni kristalni oblik. Takođe je pronađeno da 1:1 so bromovodonične kiseline jedinjenja (I) može da se kristališe pod dobro definisanim uslovima kako bi se dobili nehigroskopni kristalni oblici. Oba čvrsta oblika obezbeđuju visoku bioraspoloživost kada se primenjuju oralno.

[0030] Termin "ko-kristal" (ili "kokristal") se odnosi na višekomponentni sistem u kome postoji molekul ili molekuli farmaceutskog aktivnog sastojka - domaćin (API, npr. jedinjenje (I)) i gost, ili ko-formirajući molekul ili molekuli (npr. fosforna kiselina). API i koformirajući molekuli interaguju formiranjem vodonične veze i moguće drugim nekovalentnim interakcijama bez jonskih interakcija i bez značajne ili potpune razmene protona između API molekula i molekula gosta. U pronalazak su takođe uključeni solvati, uključujući hidrate otkrivenog ko-kristala. U ko-kristalu, i API molekul i gost (ili koformirajući) molekul postoje kao čvrsta supstanca na sobnoj temperaturi kada su sami u svom čistom obliku.

[0031] "Solvatni oblik" se odnosi na čvrsti ili kristalni oblik jedinjenja (I) u vidu slobodne baze ili soli, gde je molekul rastvarača kombinovan sa slobodnom bazom jedinjenja (I) ili odgovarajućom soli u određenom odnosu (npr. molarni odnos jedinjenje (I):rastvarač 1:1 ili 1:2) kao sastavni deo čvrste supstance ili kristala. "Nesolvatisani oblik" se odnosi na oblik koji je nesolvatisan, tj. nema određenog odnosa između molekula rastvarača i slobodne baze jedinjenja (I) ili odgovarajuće soli jedinjenja (I), a molekul rastvarača nije u značajnoj meri (npr. manje od 10% težine) prisutan u čvrstom obliku. Dobro poznati molekuli rastvarača uključuju vodu, metanol, etanol, n-propanol i izopropanol. Novi čvrsti oblici otkriveni u predmetnom pronalasku uključuju solvatisani oblik ili nesolvatisani oblik.

[0032] Kako se ovde koristi, "kristalni" se odnosi na čvrstu supstancu koja ima kristalnu strukturu u kojoj pojedinačni molekuli imaju visoko homogenu pravilnu zaključanu hemijsku konfiguraciju. Ko-kristal jedinjenja (I) i fosforne kiseline mogu da budu kristali jednog kristalnog oblika 1:2 jedinjenja (I):fosforna kiselina, ili mešavina kristala različitih monokristalnih oblika. Pojedinačni kristalni oblik označava 1:2 jedinjenje (I) fosforne kiseline kao pojedinačni kristal ili više kristala u kojima svaki kristal ima isti kristalni oblik.

Ko-kristal jedinjenja (I) i fosforne kiseline

[0033] U jednom primeru izvođenja pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje (I): ko-kristal fosforne kiseline sa molarnim odnosom od približno 1:2 (videti primere u tekstu). Pronalazak takođe obuhvata ko-kristal u drugim molarnim odnosima jedinjenje (I):fosforna kiselina.

[0034] U drugom primeru izvođenja, ko-kristal prema predmetnom pronalasku je u obliku solvata (npr. voda). U jednom konkretnom primeru izvođenja, molarni odnos ko-kristala je sledeći: jedinjenje (I) x 2 fosforne kiseline x 1/2 H2O.

[0035] U drugom primeru izvođenja, najmanje određeni težinski procenat ko-kristala jedinjenja (I) i fosforne kiseline je jednokristalni oblik. Konkretni težinski procenti uključuju 70%, 72%, 75%, 77%, 80%, 82%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% ili težinski procenat od 70%-75%, 75%-80%, 80%-85%, 85%-90 %, 90%-95%, 95%-100%, 70-80%, 80-90%, 90-100%. Na primer, u konkretnom primeru izvođenja, najmanje 80% (npr., najmanje 90% ili 99%) po težini određenog je u jednom kristalnom obliku. Podrazumeva se da sve vrednosti i rasponi između ovih vrednosti i opsega treba da budu obuhvaćeni ovim pronalaskom.

[0036] Kada je određeni težinski procenat ko-kristala 1:2 jedinjenja (I) i fosforne kiseline u jednom kristalnom obliku, ostatak ko-kristala je neka kombinacija amorfnog jedinjenja (I)/fosforne kiseline, i/ili jedan ili više drugih kristalnih oblika jedinjenja (I)/fosforne kiseline isključujući monokristalni oblik.

[0037] U 1:2 jedinjenju (I) i ko-kristalu fosforne kiseline, jedinjenje (I) je najmanje 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ili 99.9%, po težini, čisto u odnosu na ostale stereoizomere , tj. odnos težine stereoizomera prema težini svih stereoizomera.

Kristalni oblici 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida

[0038] U jednom primeru izvođenja prema predmetnom pronalasku, obezbeđena je bromovodonična kiselina jedinjenja (I) sa molarnim odnosom od približno 1:1 (videti primere u tekstu). U jednom primeru izvođenja, najmanje neki određeni težinski procenat 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida je u kristalnom obliku.

[0039] U drugom konkretnom primeru izvođenja, najmanje neki određeni težinski procenat 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida predstavlja jedan kristalni oblik. Konkretni težinski procenti uključuju 70%, 72%, 75%, 77%, 80%, 82%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, ili težinski procenat od 70%-75%, 75%-80%, 80%-85%, 85%-90%, 90%-95%, 95%-100%, 70-80%, 80-90%, 90-100%. Na primer, u jednom primeru izvođenja, najmanje težinskih 80% (npr., najmanje 90% ili 99%) 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida je u vidu jednog kristalnog oblika. Podrazumeva se da je predviđeno da sve vrednosti i opsezi između ovih vrednosti i opsega budu obuhvaćene predmetnim pronalaskom.

[0040] Kristalno 1:1 jedinjenje (I) hidrobromid može da predstavlja kristale jednog kristalnog oblika 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida, ili smeše kristala različitih pojedinjačnih kristalnih oblika. Jedan kristalni oblik označava 1:1 jedinjenje (I) hidrobromid u vidu jednog kristala ili većeg broja kristala kod kojih svaki kristal ima isti kristalni oblik.

[0041] Kada određeni težinski procenat 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida predstavlja jedan kristalni oblik, ostatak 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida predstavlja neku kombinaciju amorfnog 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida, i/ili jedan ili više drugih kristalnih oblika 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida isključujući ovaj jedan oblik.

[0042] U 1:1 jedinjenje (I) hidrobromidu, jedinjenje (I) je najmanje težinskih 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ili 99.9% čisto u odnosu na druge stereoizomere, tj. odnos težine stereoizomera u odnosu na težinu svih stereoizomera.

Priprema kristalnih oblika 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida i ko-kristala jedinjenja (I) i fosforne kiseline

[0043] Određeni čvrsti oblici 1:1 jedinjenja (I) hidrobromida i ko-kristala jedinjenja (I) i fosforne kiseline mogu da se dobiju, na primer, sporim uparavanjem, sporim hlađenjem i taloženjem antirastvaračem.

[0044] Kako se ovde koristi, "anti-rastvarač" se odnosi na rastvarač, u kome 1:1 jedinjenje (I) hidrobromid ili ko-kristal jedinjenja (I) i fosforne kiseline imaju nisku rastvorljivost i izazivaju so bromida ili ko- kristal da se istaloži iz rastvora u obliku finog praha ili kristala.

[0045] Alternativno, 1:1 jedinjenje (I) hidrobromid (ili jedinjenje (I) i ko-kristal fosforne kiseline) može da rekristališe iz pogodnog rastvarača sa ili bez dodavanja kristala za seme.

[0046] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak za dobijanje ko-kristala jedinjenja (I) i fosforne kiseline, pri čemu postupak obuhvata:

mešanje suspenzije jedinjenja (I) i fosforne kiseline u pogodnom rastvaraču; i uklanjanje rastvarača. Pogodan rastvarač uključuje, ali nije ograničen na, aceton, dietil etar, MeOH/THF, sirćetnu kiselinu i 1,4-dioksan. Kada se u postupku pripreme koristi MeOH/THF, odnos između dva rastvarača je 3:2 do 2:3 (zap.:zap.).

[0047] U jednom primeru izvođenja, molarni odnos između jedinjenja (I) i fosforne kiseline koja se koristi u pripremi je 1:2 do 1:8.

[0048] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak za pripremu 1:1 jedinjenje (I) hidrobromida. Konkretno, u suspenziju jedinjenja (I) u pogodnom rastvaraču (npr. butanol i/ili MEK), dodat je rastvor HBr (npr. u rastvoru butanola i/ili MEK); smeša je zagrevana na 60°C tokom 2 sata, a zatim na 5°C preko noći. Čvrsta supstanca je zatim izdvojena filtracijom. Pogodan rastvarač uključuje, ali nije ograničen na, butanol i/ili MEK, i/ili vodu.

[0049] Priprema svakog specifičnog čvrstog oblika je opisana u eksperimentalnom delu koji sledi.

Postupci lečenja

[0050] Drugi aspekt predmetnih instrukcija odnosi se na ko-kristal jedinjenja (I) i fosforne kiseline (ili hidrobromidnu so jedinjenja (I)) koji je ovde opisan za upotrebu u lečenju kancera.

[0051] U jednom primeru izvođenja, ovde opisani ko-kristali (ili soli bromovodonične kiseline jedinjenja (I)) inhibiraju rast tumora. Na primer, ovde opisani ko-kristali (ili soli bromovodonične kiseline jedinjenja (I)) inhibiraju rast tumora koji prekomerno eksprimira TTK.

[0052] Kanceri koji mogu da se leče (uključujući smanjenje verovatnoće ponovnog pojavljivanja) postupcima prema predmetnim instrukcijama uključuju rak pluća, rak dojke, rak debelog creva, rak mozga, neuroblastom, rak prostate, melanom, multiformni glioblastom, rak jajnika, limfom, leukemiju, melanom, sarkom, paraneoplaziju, osteosarkom, germinom, gliom i mezoteliom. U jednom primeru izvođenja, kancer je izabran od leukemije, akutne mijeloidne leukemije, hronične mijelogene leukemije, raka dojke, raka mozga, raka debelog creva, kolorektalnog kancera, raka glave i vrata, hepatocelularnog karcinoma, adenokarcinoma pluća, metastatskog melanoma, raka pankreasa, raka prostate, raka jajnika i raka bubrega. U jednom primeru izvođenja, rak je rak pluća, rak debelog creva, rak mozga, neuroblastom, rak prostate, melanom, mutiformni glioblastom ili rak jajnika. U drugom primeru izvođenja, rak je rak pankreasa, rak prostate, rak pluća, melanom, rak dojke, rak debelog creva ili rak jajnika. U još jednom primeru izvođenja, rak je rak dojke, rak debelog creva i rak jajnika. U još jednom primeru izvođenja, rak je rak dojke. U još jednom primeru izvođenja, rak je rak dojke bazalnog podtipa ili rak dojke luminalnog B podtipa. U još jednom primeru izvođenja, kancer je bazalni podtip raka dojke koji prekomerno eksprimuje TTK. U još jednom primeru izvođenja, rak dojke bazalnog podtipa je ER (estrogeni receptor), HER2 i PR (progesteronski receptor) negativan rak dojke. U još jednom primeru izvođenja, kancer je kancer mekog tkiva. "Kancer mekog tkiva" je termin koji stručna oblast prepoznaje, a koji obuhvata tumore nastale iz bilo kog mekog tkiva tela. Takvo meko tkivo povezuje, podržava ili okružuje različite strukture i organe tela, uključujući, ali ne i ograničeno na, glatke mišiće, skeletne mišiće, tetive, fibrozno tkivo, masno tkivo, krvne i limfne sudove, perivaskularno tkivo, nerve, mezenhimske ćelije i sinovijalnih tkiva. Dakle, kanceri mekog tkiva mogu da budu kanceri masnog tkiva, mišićnog tkiva, nervnog tkiva, tkiva zglobova, krvnih sudova, limfnih sudova i fibroznog tkiva. Kanceri mekog tkiva mogu da budu benigni ili maligni. U principu, maligni kanceri mekog tkiva se nazivaju sarkomi ili sarkomi mekog tkiva. Postoji mnogo vrsta tumora mekog tkiva, uključujući lipom, lipoblastom, hibemom, liposarkom, lejomiom, lejomiosarkom, rabdomiom, rabdomiosarkom, neurofibrom, švanom (neurilemom), neurom, maligni švanom, neurofibrosarkom, neurogeni sarkom, nodularni tenosinovitis, sinovijalni sarkom, hemangiom, glomusni tumor, hemangiopericitom, hemangioendoteliom, angiosarkom, Kapošijev sarkom, limfangiom, fibrom, elastofibrom, površinska fibromatoza, fibrozni histiocitom, fibrosarkom, fibromatoza, dermatofibrosarkom protuberans (DFSP), maligni fibrozni histiocitom (MFH), miksom, tumor granularnih ćelija, maligni mezenhimomi, alveolarni sarkom mekog dela, epitelioidni sarkom, sarkom bistrih ćelija i dezmoplastični tumor malih ćelija. U konkretnom primeru izvođenja, kancer mekog tkiva je sarkom izabran iz grupe koja se sastoji od fibrosarkoma, gastrointestinalnog sarkoma, lejomiosarkoma, dediferenciranog liposarkoma, plejomorfnog liposarkoma, malignog

1

fibroznog histiocitoma, sarkoma okruglih ćelija i sinovijalnog sarkoma.

[0053] Kako se ovde koristi, "lečenje subjekta koji ima kancer" uključuje postizanje, delimično ili u velikoj meri, jednog ili više sledećih ishoda: zaustavljanje rasta, smanjenje obima kancera (npr., smanjenje veličine tumora), inhibiranje brzine rasta kancera, boljitak ili poboljšanje kliničkog simptoma ili indikatora u vezi sa kancerom (kao šo su tkivne ili serumske komponente) ili povećanje dugovečnosti subjekta; i smanjenje verovatnoće ponovne pojave kancera.

[0054] Kako se ovde koristi, izraz "smanjenje verovatnoće ponovnog pojavljivanja kancera" znači delimično ili potpuno inhibiranje, odlaganje vraćanja kancera na ili blizu primarnog mesta i/ili na sekundarnom mestu nakon perioda remisije. To takođe znači da je manja verovatnoća da će se rak vratiti uz lečenje opisano ovde nego u njegovom odsustvu.

[0055] Kako se ovde koristi, termin "remisija" se odnosi na stanje raka, pri čemu su klinički simptomi ili indikatori povezani sa rakom nestali ili ne mogu da se otkriju, obično nakon što je subjekt uspešno lečen terapijom protiv kancera.

[0056] Generalno, efikasna količina jedinjenja o kome se ovde govori varira u zavisnosti od različitih faktora, kao što su dati lek ili jedinjenje, farmaceutska formulacija, način primene, tip bolesti ili poremećaja, identitet subjekta ili domaćina koji se leče i slično, ali to ipak može rutinski da odredi stručnjak u ovoj oblasti. Efikasnu količinu jedinjenja prema predmetnim instrukcijama lako može da odredi stručnjak u oblasti rutinskim metodama koje su poznate u stanju tehnike.

[0057] Izraz "efikasna količina" označava količinu koja kada se primenjuje kod subjekta rezultira korisnim ili željenim rezultatima, uključujući kliničke rezultate, npr., inhibira, potiskuje ili smanjuje rak (npr. kako je određeno kliničkim simptomima ili količinom ćelija raka) kod subjekta u poređenju sa kontrolom.

[0058] U jednom aspektu, efikasna količina 1:1 jedinjenja (I) hidrobromida (ili jedinjenja (I) i ko-kristala fosforne kiseline) kreće se od oko 0.01 do oko 1000 mg/kg telesne težine. Stručnjak u oblasti će shvatiti da određeni faktori mogu uticati na dozu potrebnu za efikasno lečenje subjekta koji pati od kancera i ovi faktori uključuju, ali nisu ograničeni na, ozbiljnost bolesti ili poremećaja, prethodne tretmane, opšte zdravlje i/ili starost subjekta i drugih prisutnih bolesti.

[0059] Štaviše, režim "lečenja" subjekta efikasnom količinom jedinjenja prema predmetnom pronalasku može da se sastoji od jedne primene, ili alternativno da obuhvata seriju primena. Na primer, 1:1 jedinjenje (I) hidrobromid (ili jedinjenje (I) i ko-kristal fosforne kiseline) može da se primenjuje najmanje jednom nedeljno. Međutim, u drugom izvođenju, jedinjenje može da se primenjuje kod subjekta od otprilike jednom nedeljno do jednom dnevno za dati tretman. Dužina perioda lečenja zavisi od niza faktora, kao što su težina bolesti, starost pacijenta, koncentracija i aktivnost jedinjenja prema predmetnom pronalasku ili njihove kombinacije. Takođe će se uzeti u obzir da efikasna doza jedinjenja korišćenog za lečenje ili profilaksu može da se poveća ili smanji tokom određenog režima lečenja ili profilakse. Moguće je da dođe do promena doza, što se uočava standardnim dijagnostičkim testovima poznatim u stanju tehnike. U nekim slučajevima može da bude neophodna hronična primena.

[0060] "Subjekat" je sisar, poželjno čovek, ali može da bude i životinja kojoj je potreban veterinarski tretman, npr. ovce, svinje, konji i slično) i laboratorijske životinje (npr. pacovi, miševi, zamorci i slično).

[0061] Jedinjenja prema pronalasku mogu da se primenjuju kod pacijenta u različitim oblicima u zavisnosti od izabrane rute primene, kao što će razumeti stručnjaci u oblasti. Jedinjenja prema pronalasku mogu da se primenjuju, na primer, oralnom, parenteralnom, bukalnom, sublingvalnom, nazalnom, rektalnom primenom, putem flastera, pumpe, ili transdermalnom primenom, i farmaceutske kompozicije su formulisane u skladu sa tim. Parenteralna primena uključuje intravenski, intraperitonealni, subkutani, intramuskularni, transepitelni, nazalni, intrapulmonalni, intratekalni, rektalni i topikalni način primene. Parenteralna primena može da bude putem kontinuirane infuzije tokom odabranog vremenskog perioda.

Farmaceutske kompozicije

[0062] 1:1 jedinjenje (I) hidrobromid (ili jedinjenje (I) i ko-kristal fosforne kiseline) koje je ovde prikazano može pogodno da se formuliše u farmaceutske kompozicije za primenu kod subjekta.

[0063] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži 1:1 jedinjenje (I) hidrobromid (ili jedinjenje (I) i kokristal fosforne kiseline) kao što je gore opisano, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.

[0064] Farmaceutske kompozicije prema predmetnim instrukcijama opciono uključuju jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača i/ili razblaživača za njih, kao što su laktoza, skrob, celuloza i dekstroza. Drugi ekscipijensi, kao što su agensi za ukus; zaslađivači; i konzervansi, kao što su metil, etil, propil i butil parabeni, takođe mogu da budu uključeni. Potpuniji spisak odgovarajućih ekscipijenasa može se naći u priručniku Handbook of Pharmaceutical Excipients (5th Ed., Pharmaceutical Press (2005)). Stručnjak u oblasti bi znao kako da pripremi formulacije pogodne za različite rute administracije. Konvencionalni postupci i sastojci za izbor i pripremu odgovarajućih formulacija opisani su, na primer, u publikaciji Remington’s Pharmaceutical Sciences (2003 - 20th edition) i u The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NF19) koja je objavljena 1999. Nosači, razblaživači i/ili ekscipijensi su "prihvatljivi" u smislu da su kompatibilni sa drugim sastojcima farmaceutske kompozicije i nisu štetni za primaoca.

[0065] Tipično, za oralnu terapijsku primenu, jedinjenje prema predmetnim instrukcijama može da bude inkorporirano sa ekscipijensom i može da se koristi u obliku tableta za gutanje, bukalnih tableta, pastila, kapsula, eliksira, suspenzija, sirupa, višeslojnih implanta i slično.

[0066] Tipično za parenteralnu primenu, rastvori jedinjenja prema predmetnim instrukcijama u principu mogu da se pripremaju u vodi koja je pogodno pomešana sa surfaktantom kao što je hidroksipropilceluloza. Disperzije takođe mogu da se pripremaju u glicerolu, tečnim polietilen glikolima, DMSO i njihovim smešama sa ili bez alkohola, i u uljima. U uobičajenim uslovima skladištenja i upotrebe, ovi preparati sadrže konzervans za sprečavanje rasta mikroorganizama.

[0067] Tipično, za upotrebu za injekcije, sterilni vodeni rastvori ili disperzije i sterilni praškovi jedinjenja opisanog ovde za trenutnu pripremu sterilnih rastvora ili disperzija za injekcije su prikladni.

[0068] Pronalazak je ilustrovan sledećim primerima, za koje nije predviđeno da na bilo koji način budu ograničavajući.

EKSPERIMENTALNI DEO

Skraćenice:

[0069]

BSA benzen sulfonska kiselina

DSC diferencijalna skenirajuća kalorimetrija

Ekv. ekvivalent

NA nije navedeno

NMP N-metil-2-pirolidon

pTSA para-toluensulfonska kiselina

RH relativna vlažnost

1

rt sobna temperatura

temp temperatura

TGA termogravimetrijska analiza

THF tetrahidrofuran

Tež.% težinski procenti

XRPD rendgenska difrakcija praha

Uslovi analize

Rendgenska difraktometrija praha (XRPD)

[0070] XRPD analiza je sprovedena korišćenjem Bruker D8 Discover difraktometra sa DAVINCI konfiguracijom, skeniranjem uzoraka između 1.5 i 45° u 20 uglova. Upotrebljeno je približno 1-2 mg svakog uzorka za skrining.

Difrakcija rendgenskih zraka monokristala (SC-XRD)

[0071] SC-XRD analiza je izvedena na 293 K na X-Calibur difraktometru kompanije Oxford Diffractions sa Mo Kα izvorom i grafitnim monohromatorom. Rezolucija strukure i preciziranje su izvedeni korišćenjem SHELXS-97 i SHELXL-97, respektivno.

Termogravimetrijska/ diferencijalna skenirajuća kalorimetrijska analiza (TGA/DSC)

[0072] 3-10 mg materijala je izmereno u otvorenoj aluminijumskoj posudi i stavljeno u simultani Setaram LABSYS EVO termogravimetrijski/diferencijalni skenirajući kalorimetar (TGA-DTA/DSC) sa robotom i držano na rt. Uzorak je zatim zagrevan brzinom od 10°C/min od 30°C do 350°C za koje vreme je zabeležena promena težine uzorka zajedno sa bilo kojim diferencijalnim termičkim događajima. Kao gas za pročišćavanje korišćen je azot, pri brzini protoka od 100 cm<3>/min. Pre analize, instrument je izmeren i temperatura kalibrisana korišćenjem referentne težine od 100 mg i referentnog standarda indijuma, respektivno. Analiza uzorka je sprovedena uz pomoć CALISTO softvera, gde su odgovarajući gubitak mase i temperature termičkih događaja navedeni kao početna temperatura, merena prema specifikacijama proizvođača. Sve analize su sprovedene sa brzinom zagrevanja od 10°C/min i osnovna vrednost je oduzeta.

Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC)

[0073] 1-4 mg materijala je izmereno u aluminijumsku DSC posudu i zatvoreno nehermetički aluminijumskim poklopcem. Posuda za uzorke je zatim stavljena u instrument TA Instruments K2000 (opremljen hladnjakom). Kada je dobijen stabilan odgovor u vidu toplotnog toka na 35 °C, uzorak i referenca su zagrejani na 300 °C brzinom od 10°C/min i praćen je dobijeni odgovor u vidu toplotnog toka. Pre analize, instrument je kalibrisan za temperaturu i toplotni tok pomoću indijuma kao referentnog standarda. Analiza uzorka je sprovedena uz pomoć softvera TA Universal Analysis 2000 gde su temperature termičkih događaja navedene kao početna temperatura i temperatura pika merene prema specifikacijama proizvođača.

Spektroskopija<1>H-nuklearne magnetne rezonance (<1>H-NMR)

[0074] Merenja nuklearne magnetne rezonance su zabeležena na Bruker Avance DRX 400 instrumentu na 400 MHz i rt, koristeći DMSO-d6ili CD3OD kao rastvarač bez internog standarda.

Spektroskopija<15>N-nuklearne magnetne rezonance čvrstog stanja (<15>N-ssNMR)

[0075] Analiza<15>N-nuklearne magnetne rezonance čvrstog stanja izvedena je na spektrometru čvrstog stanja Bruker Avance III na 500 MHz.<15>N spektri su snimljeni pomoću CP-MAS (unakrsne polarizacije spinovane pod magičnim uglom) na Bruker nosaču uzorka od 4 mm, sa dva RF kanala, a frekvencija rotacije uzorka je bila 7 kHz.

Primer 1: Kombinovani skrining soli

[0076] Skrining soli je izveden pomoću 6 rastvarača (H2O, DMSO, 1,4-dioksan, sirćetna kiselina, MeOH/THF (1:1), 1-BuOH/MEK 1:1 i NMP) i dvanaest farmaceutski prihvatljivih kiselina (HCl, HBr, H3PO4, H2SO4, pTSA, BSA, naftalen sulfonska kiselina, etan sulfonska kiselina, metan sulfonska kiselina, etan disulfonska kiselina, L-maleinska kiselina i 2-aminosulfonska kiselina).

[0077] Kiseline su dodate u jedinjenje (I) (15 mg, rastvor ili suspenzija u datom rastvaraču) ili kao čvrsta supstanca ili kao 10% rastvor u odgovarajućem rastvaraču. Za sve rastvarače osim NMP, korišćeni su kiselinsko-bazni odnosi od 1.05:1 i 2.2:1. Za eksperimente sa NMP eksperimentima korišćen je samo molarni odnos 2.2:1. Dobijeni rastvori su ostavljeni preko noći na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su sakupljene i analizirane. Preostali rastvori su

1

ili ohlađeni ili tretirani anti-rastvaračem. Ako nije došlo do precipitacije nakon tretmana hlađenjem/anti-rastvaračem, rastvori su osušeni u vakuumu. Konačno, sve dobijene čvrste materije su stavljene u klimatsku komoru na 40 °C i 75% RH tokom 5 dana i ponovo analizirane. Zatim je ponovo procenjeno da li pogodne kombinacije rastvarača i protivjona formiraju soli sa jedinjenjem (I) na povećanom nivou.

[0078] Kristalni materijal je dobijen sa jedanaest od dvanaest ispitanih kontrajona. Eksperimenti sa 2-aminosulfonskom kiselinom su doveli samo do dobijanja slobodnog baznog materijala. Višestruki kristalni oblici su dobijeni iz HCl, metansulfonske kiseline, etan disulfonske kiseline i p-TSA eksperimenata. Stres testiranje je rezultiralo konverzijom u dodatne kristalne forme, što ukazuje na sklonost ka polimorfizmu. Soli dobijene iz eksperimenata sa maleinskom kiselinom bile su solvatirane, niske kristalnosti i razložene tokom DSC analize. Soli dobijene od naftalen sulfonske kiseline, benzol sulfonske kiseline i sumporne kiseline bile su visoko higroskopne.

[0079] Pokazalo se da kristalni materijal dobijen iz eksperimenata sa bromovodoničnom kiselinom i fosfornom kiselinom ima povećanu rastvorljivost u odnosu na slobodnu bazu, nisku higroskopnost i da je stabilan u uslovima stresa (40°C/75%, relativna vlažnost - RH, 80°C, ambijentalno svetlo tokom 7 dana). Oba čvrsta oblika su degradirana pod uslovima oksidativnog stresa (3% vodenog rastvora H2O2). Osobine svakog izolovanog kristalnog oblika su prikazane tabeli 1.

Tabela 1. Svojstva kristalnih oblika jedinjenja (I)

Primer 2: Pripremanje ko-kristala 1:2 jedinjenje (I)/fosforna kiselina

1

[0080] Metod A: Jedinjenje (I) (605.5 mg, 1 ekv.) je razmućeno u acetonu (14 mL). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi 5 min da bi se omogućila homogenizacija. Zatim je brzo dodat rastvor H3PO4(459.46 mg, 4 ekv.) u acetonu (6 mL). Dobijen je žuti gel, i smeša je držana na rt uz mešanje 2 dana. Precipitat je zatim filtriran, ispran acetonom (20 mL) i osušen na 4°C/10 mbar. Dobijena čvrsta supstanca je dalje okarakterisana kao bisfosfatni hemihidrat pomoću TGA, XRPD, DSC,<1>H NMR,<15>N NMR čvrstog stanja, IR, Ramanske i kristalografije sa rendgenskim zracima.

[0081] Metod B: rastvor H3PO4(494.7 g, 4 ekv.) u MeOH/THF (10,5 ml, 1:1 zap./zap.) dodat je u bočicu koja sadrži jedinjenje (I) (506.88 mg, 1 ekv.). Dobijena smeša je mešana na rt dok nije dobijen žuti rastvor. Rastvor je ostavljen da ispari na 50°C i atmosferskom pritisku uz mešanje uz pomoć vorteksa. Dobijen je žuti gel i zatim je dodat aceton (15 mL) i ostavljen da se meša vorteksom na rt 1 dan. Suspenzija je ostavljena da se meša još 3 d. Kristalne čvrste materije su zatim filtrirane i dalje okarakterisane kao identične u kristalnom obliku sa dobijenim materijalom u metodi A.

[0082]<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.53-8.58 (m, 1H), 8.46-8.50 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.80-7.86 (m, 1H), 7.72-7.76 (m, 1H), 7.55-7.61 (m, 2H), 7.18 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.92 (s, 1H), 3.52 (d, J=6.8 Hz, 2H), 2.77-2.86 (m, 1H), 2.28-2.38 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.18-2.24 (m, 2H), 1.88-1.99 (m, 2H), 1.37 (s, 3H), 0.75-0.84 (m, 2H), 0.54-0.64 (m, 2H).

Tabela 2. XRPD jedinjenje (I) bisfosfat hemihidrata

(nastavak)

1

[0083] Podaci rendgenske kristalografije monokristala fosfatnog kompleksa jedinjenja (I) pokazuju da svaka jedinična ćelija sadrži 2 molekula jedinjenja (I), 4 molekula fosforne kiseline i 1 molekul vode. Sve vodonične veze unutar kompleksa su između 2.5-2.9 Å, što ukazuje da ne postoji jonski karakter uočen između protona fosforne kiseline i osnovnog azota piridinskog prstena. Ovaj rezultat je u skladu sa zapažanjima iz čvrstog stanja<15>N-NMR. Uzeti zajedno, ovi rezultati potvrđuju oblik jedinjenja (I) bisfosfat hemihidrata kao kokristalnog kompleksa. Kristalografski podaci za jedinjenje (I) bisfosfat hemihidrat su predstavljeni u tabeli 3. ORTEP prikaz je predstavljen na slici 4.

Tabela 3. Kristalografski podaci za jedinjenje I bisfosfat hemihidrat

[0084]<15>N-NMR analiza u čvrstom stanju je izvedena na slobodnoj bazi jedinjenja (I) i jedinjenje (I) bisfosfat hemihidratu. Superponirani spektri su prikazani na slici 3. Pomeranje i relativni intenzitet piridin azotnog pika u jedinjenju fosfata u odnosu na slobodnu bazu ukazuje na prirodu interakcije između atoma vodonične veze i nema jonski karakter. Nije

1

primećen prenos protona na piridil azot, što potvrđuje da je fosfat ko-kristal.

[0085] Jedinjenje (I) bisfosfat hemihidrat takođe može da se dobije kristalizacijom amorfnog ili polukristalnog ko-kristala jedinjenja (I) i H3PO4korišćenjem uslova prikazanih u tabeli 4. Alternativno, kristalizacija viskoznog gela može da se indukuje da daje jedinjenje (I) bisfosfat hemihidrat tako što se gel zajedno sa malom količinom čvrstih materija nanese na veću staklenu površinu i grebe se lopaticom. Takođe, gel može da kristališe sonikacijom.

Tabela 4. Kristalizacija jedinjenje (I) bisfosfat hemihirata

Primer 3: Priprema amorfnog 1:2 jedinjenja (I)/fosforne kiseline

[0086] U smešu MeOH/THF (9.7 mL, 1:1 zap./zap.) je dodato jedinjenje (I) (500 mg, 1 ekv.) u staklenoj bočici na rt. Zatim je dodat H3PO4(238 mg, 2 ekv.) i dobijena smeša je mešana na rt 2 h. Rastvor je promenio boju, ali nije došlo do precipitacije. Bistri rastvor je zatim ostavljen da stoji 1 dan na 5°C, a zatim 1 dan na -20°C. Nisu dobijene čvrste supstance. Rastvarač je zatim uklonjen na 30°C/10 mbar, a dobijene čvrste supstance su analizirane XRPD i pokazalo se da se radi o amorfnim čvrstim supstancama.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.53-8.58 (m, 1H), 8.46-8.50 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.80-7.86 (m, 1H), 7.72-7.76 (m, 1H), 7.55-7.61 (m, 2H), 7.18 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.92 (s, 1H), 3.52 (d, J=6.8 Hz, 2H), 2.77-2.86 (m, 1H), 2.28-2.38 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.18-2.24 (m, 2H), 1.88-1.99 (m, 2H), 1.37 (s, 3H), 0.75-0.84 (m, 2H), 0.54-0.64 (m, 2H).

[0087] Amorfni materijal takođe može da se dobije rastvaranjem jedinjenja (I) u 1,4-dioksanu i dodatkom etil acetata ili acetona kao antirastvarača ili rastvaranjem jedinjenja (I) u 1-etoksietanolu i dodatkom etil acetata kao antirastvarača.

Primer 4: Priprema 1:1 jedinjenje (I)/HBr kristalne soli

[0088] Smeši 1-butanola i MEK (60 mL, 1:1 zap./zap.) dodato je jedinjenje (I) (502 mg, 1 ekv.). Suspenzija je zagrevana na 60°C i dodat je HBr (4.8% rastvor u 1-butanolu i MEK (2.5 mL, 2 ekv.). Smeša je mešana na 60°C tokom 2 h, a zatim na 5°C preko noći. je zatim regenerisan filtracijom, ispran dietil etrom i okarakterisan kao hidrobromid pomoću XRPD,

1

TGA, IR, Raman i DSC.

Tabela 5. XRPD jedinjenje (I) hidrobromida

Primer 5: Farmakokinetičke analize

Metode:

[0089] Pojedinačna oralna doza u prahu u kapsuli svakog oblika je primenjena na tri (n=3) ženke Sprague-Dawley pacova i tri mužjaka pasa rase bigl (n=3) sa 5 mg aktivnog farmaceutskog sastojka po kg telesne težine. Plazma je zatim analizirana na nivoe jedinjenja u plazmi pomoću LC/MS.

Priprema artikla za testiranje, za doziranje kapsulama kod pacova i pasa:

[0090] Jedinjenje je mleveno korišćenjem avana i tučka i pažljivo je podeljeno u želatinsku kapsulu, tarirano na analitičkoj vagi. Punjenje je nastavljeno sve dok se ne postigne željena masa jedinjenja. Kapsule veličine 9 korišćene su za doziranje kod pacova, a kapsule veličine 3 su korišćene za pse. Napomena: opterećenje jedinjenjem je korigovano za odnos bioekvivalencije svakog oblika.

[0091] Nakon oralnog doziranja, krv je izvučena iz lateralne safenske vene u epruvete obložene litijum heparinom (pacovi) ili epruvete obložene sa K2EDTA (psi), u određenim vremenskim tačkama. Plazma je sakupljena i čuvana zamrznuta na -80°C do analize.

Analiza plazme pacova:

2

[0092] Uzorci plazme (20 μL) i standardni uzorci plazme sa dodatkom su razblaženi pet puta sa ledeno hladnim acetonitrilom koji sadrži 100 ng/mL verapamila kao internog standarda. Uzorci i standardi su filtrirani kroz 0.22 µm membrane u formatu od 96 bunarčića. Filtrati su zatim razblaženi vodom do 30% acetonitrila.

[0093] 10 µL svakog uzorka i standarda je ubrizgano u Waters Acquity CSH 1.7 µm 2.1x100 mm kolonu pri 0.6 mL/min pomoću Acquity UPLC. C18 kolona je uravnotežena sa 5% acetonitrila u vodi. Jedinjenja su eluirana gradijentom do 99% acetonitrila. Sve mobilne faze su sadržale 0.1% (zap./zap.) mravlje kiseline.

HPLC elucioni gradijent:

[0094]

[0095] Eluent na koloni je analiziran pomoću sistema tandem kvadrupolne masene spektrometrije sa elektrosprej jonizacijom (ESI-MS/MS, Waters Xevo TQ). Sastav eluenta je analiziran za tri para jona specifična za interni standard i tri jonska para specifična za analit. Eksperimentalni uzorci su upoređeni sa uzorcima standardne krive da bi se odredile koncentracije jedinjenja. Farmakokinetički parametri su određeni korišćenjem Excel plug-in dodatka "PKfit".

Analiza pseće plazme:

[0096] Uzorci plazme (20 µL) i standardni uzorci plazme sa dodatkom su razblaženi jedanaest puta sa ledeno hladnim acetonitrilom koji sadrži 40 ng/mL diklofenaka kao internog standarda. Smeša je mešana vorteksom 2 min i centrifugirana. Supernatant od 0.5 µL je ubrizgan u kolonu Waters Acquity BEH 1.7 µm 2.1x50 mm pri 0.6 mL/min pomoću Acquity UPLC. Kolona je uravnotežena sa 10% metanola u vodi. Jedinjenja su eluirana sa gradijentom do 95% metanola. Mobilne faze su sadržale 0.025% (zap./zap.) mravlje kiseline i 1mM NH4OAc.

HPLC elucioni gradijent:

[0097]

[0098] Eluent kolone je analiziran pomoću sistema tandem kvadrupolne masene spektrometrije sa elektrosprej jonizacijom (ESI-MS/MS, API-6500). Sastav eluenta je analiziran za jedan par jona specifičan za interni standard i jedan par jona specifičan za analit. Eksperimentalni uzorci su upoređeni sa uzorcima standardne krive da bi se odredile koncentracije jedinjenja. Farmakokinetički parametri su određeni korišćenjem WinNonlin Professional 6.2.

[0099] Ko-kristalni bisfosfat hemihidrat i hidrobromidna so jedinjenja (I) pokazuju superiornu farmakokinetiku u odnosu na slobodnu bazu. Jedinjenja su dozirana oralno u obliku praha u kapsulama kod Sprague Dawley pacova i psima rase bigl. Kao što je prikazano u tabeli 6, ko-kristal bisfosfat hemihidrata i kristalna so jedinjenje (I) hidrobromida pokazuju povećane koncentracije u plazmi u odnosu na slobodnu bazu jedinjenja (I).

Tabela 6. Farmakokinetički parametri kokristala bisfosfat demihidrata, hidrobromidne soli i slobodne baze jedinjenja (I) nakon PO administracije, prašak u kapsuli, Sprague-Dawley pacovima i psima rase bigl

2

Claims (20)

1. Patentni zahtevi 1. Ko-kristal jedinjenja (I) i ko-formirajući molekul,

   ili solvat ko-kristala, pri čemu je ko-formirajući molekul fosforna kiselina.
2. 2. Ko-kristal prema patentnom zahtevu 1, pri čemu, molarni odnos jedinje (I) : fosforna kiselina u ko-kristalu je 1:2.
3. 3. Ko-kristal prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu, ko-kristal je hidrat.
4. 4. Ko-kristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, pri čemu, molarni odnos jedinje(I) : fosforna kiselina : H2O u ko-kristalu je 1:2:1/2.
5. 5. Ko-kristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, pri čemu se ko-kristal karakteriše ^ sa bilo koja tri, četiri, ili bilo kojih pet pikova u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 7.6°, 12.0°, 20.3°, 23.5°i 24.5° ± 0.2 u 2Θ.
6. 6. Ko-kristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, pri čemu se ko-kristal karakteriše sa bilo koja tri, četiri, ili bilo kojih pet, šest, sedam, osam, devet, deset ili jedanaest pikova u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 7.6°, 11.1°, 12.0°, 15.4°, 17.5°, 19.8°, 20.0°, 20.3°, 21.2°, 23.5°, 23.6°i 24.5° ± 0.2 u 2Θ.
7. 7. Ko-kristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, pri čemu se ko-kristal karakteriše sa pikovima u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 7.6°, 11.1°, 12.0°, 15.4°, 17.5°, 19.8°, 20.0°, 20.3°, 21.2°, 23.5°, 23.6°i 24.5° ± 0.2 u 2Θ.
8. 8. Ko-kristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, pri čemu se vodonične veze obrazuju između vodonika forsforne kiseline i atoma azota piridinskog prstena u jedinjenju (I) i vodonična veza ima rastojanje između 2.5-2.9 Å.
9. 9. Ko-kristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8, pri čemu se ko-kristal karakteriše sa pikom spektroskopije<15>N-nuklearne magnetne rezonance čvrstog stanja (<15>N-ssNMR), na -122.5 ± 2 ppm, i intenzitet pika na -122.5 ppm je najmanje 40-70% manji od pika na -302 ppm.
10. 10. Farmaceutska kompozicija koja sadrži ko-kristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
11. 11. Hidrobromidna so jedinjenja (I) predstavljena sledećom strukturnom formulom:

    ili njen solvat, pri čemu, molarni odnos između jedinjenja (I) i bromovodonične kiseline je 1:1.
12. 12. Hidrobromidna so prema patentnom zahtevu 11, pri čemu je so u nesolvatisanom obliku.
13. 13. Hidrobromidna so prema patentnom zahtevu 11 ili 12, pri čemu je hidrobromidna so kristalna.
14. 14. Hidrobromidna so prema patentnom zahtevu 13, pri čemu se kristalna hidrobromidna so karakteriše sa tri ili četiri pika u dijagramu rendgenske difrakcije praha na, na 5.9°, 11.9°, 21.6°, i 22.0° ± 0.2 u 2Θ.
15. 15. Hidrobromidna so prema patentnom zahtevu 13, pri čemu se kristalna hidrobromidna so karakteriše sa bilo koja tri, četiri, bilo kojih pet, šest, sedam ili osam pikova u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 5.9°, 10.0°, 11.9°, 13.8°, 17.3°, 19.4°, 21.3°, 21.6°i 22.0° ± 0.2 u 2θ.
16. 16. Hidrobromidna so prema patentnom zahtevu 13, pri čemu se kristalna hidrobromidna so karakteriše sa pikovima u dijagramu rendgenske difrakcije praha na 5.9°, 10.0°, 11.9°, 13.8°, 17.3°, 19.4°, 21.3°, 21.6°i 22.0° ± 0.2 u 2Θ.
17. 17. Farmaceutska kompozicija koja sadrži hidrobromidnu so prema bilo kom od patentnih zahteva 11-16, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
18. 18. Postupak za pripremu ko-kristala jedinjenja (I) i fosforne kiseline, kao što je definisano u patentnom zahtevu 1, pri čemu postupak obuhvata: mešanje suspenzije fosforne kiseline i jedinjenja (I) u pogodnom rastvaraču; i uklanjanje rastvarača.
19. 19. Postupak prema patentnom zahtevu 18, pri čemu, molarni odnos između jedinjenja (I) i fosforne kiseline je 1:2 do 1:8, a rastvarač je aceton, dietil etar, MeOH/THF, sirćetna kiselina i 1,4-dioksan, poželjno rastvarač je THF/MeOH; i odnos između dva rastvarača je 3:2 do 2:3 (zap./zap.).
20. 20. Ko-kristal prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9 ili hidrobromidna so prema bilo kom od patentnih zahteva 11-16 za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu, kancer je rak pankreasa, rak prostate, rak pluća, melanom, rak dojke, rak debelog creva ili rak jajnika, poželjno, rak pluća, rak dojke i rak debelog creva, poželjnije, rak dojke. 2