RS62036B1

RS62036B1 - Kombinacija anti cd19 antitela sa bcl-2 inhibitorom i njihova upotreba

Info

Publication number: RS62036B1
Application number: RS20210792A
Authority: RS
Inventors: Jan Endell; Konstantin Petropoulos; Peter Kelemen; Rainer Boxhammer; Markus Rückert
Original assignee: Morphosys Ag
Priority date: 2016-10-28
Filing date: 2017-10-27
Publication date: 2021-07-30
Also published as: CY1124648T1; RU2019113370A; IL301786B2; EP3903821A1; AU2017348624B2; CN109890418B; BR112019008244A2; JP2024167208A; PL3532098T3; ZA201903302B; MX2019004942A; LT3532098T; SG10202104036QA; CN109890418A; AU2017348624A1; IL301786A; IL266216B1; IL301786B1; ES2871574T3; HRP20210838T1

Description

Opis

Oblast Pronalaska

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutsku kombinaciju antitela CD19 i inhibitora BCL-2 za lečenje ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije.

Pozadina Pronalaska

[0002] B ć elije su limfociti koji igraju veliku ulogu u humoralnom imunološkom odgovoru. Proizvode se u koštanoj srži već ine sisara i predstavljaju 5 -15% cirkulišu ć eg limfoidnog bazena. Glavna funkcija B ć elija je da stvaraju antitela protiv različitih antigena i suštinska su komponenta adaptivnog imunološkog sistema.

[0003] Zbog njihove ključne uloge u regulisanju imunološkog sistema, poremeć aj regulacije B ć elija je povezan sa nizom poremeć aja, poput limfoma i leukemija. To uključuje ne-Hodgkinov limfom (NHL), hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL) i akutnu limfoblastnu leukemiju (ALL).

[0004] NHL je heterogeni malignitet poreklom iz limfocita. U Sjedinjenim Državama (SAD), incidenca se procenjuje na 65.000/godišnje sa smrtnošć u od približno 20.000 ( American Cancer Society, 2006; and SEER Cancer Statistics Review). Bolest se može javiti u svim uzrastima, uobičajeni početak započinje kod odraslih starijih od 40 godina, a incidenca se poveć ava sa godinama. NHL karakteriše klonska proliferacija limfocita koji se akumuliraju u limfnim čvorovima, krvi, koštanoj srži i slezini, iako može biti uključen bilo koji glavni organ. Trenutni sistem klasifikacije koji koriste patolozi i kliničari je Klasifikacija tumora Svetske zdravstvene organizacije (WHO), koja raspoređuje NHL u prekursor i zrele neoplazme B-ć elija ili T- ć elija. PDQ trenutno deli NHL na indolentan i na agresivan za ulazak u klinička ispitivanja. Indolentnu NHL grupu čine prvenstveno folikularni podtipovi, mali limfocitni limfomi, MALT (limfoidno tkivo povezano sa sluzokožom) i marginalna zona; indolentna grupa obuhvata približno 50% novootkrivenih NHL pacijenata sa B-ć elijama. Agresivni NHL uključuje pacijente sa histološkim dijagnozama primarno difuznih velikih B ć elija (DLBL, DLBCL ili DLCL) (40% svih novootkrivenih pacijenata ima difuzne velike ć elije), Burkitt ćelija i mantle ćelija. Klinički tok NHL je veoma varijabilan. Glavna odrednica kliničkog toka je histološki podtip. Već ina indolentnih tipova NHL-a se smatra neizlečivom bolešć u. Pacijenti u početku reaguju na hemoterapiju ili terapiju antitelima i ve ć ina ć e se povratiti. Dosadašnje studije nisu pokazale poboljšanje preživljavanja ranom intervencijom. Kod asimptomatskih pacijenata, prihvatljivo je „gledati i čekati“ dok pacijent ne postane simptomatičan ili dok se čini da se tempo bolesti ubrzava. Vremenom se bolest može transformisati u agresivniju histologiju. Medijan preživljavanja je 8 do 10 godina, a indolentni pacijenti često dobijaju 3 ili više tretmana tokom faze lečenja svoje bolesti. Početno lečenje simptomatskog indolentnog NHL pacijenta u prošlosti je bilo kombinovana hemoterapija. Sredstva koja se najčešć e koriste uključuju: ciklofosfamid, vinkristin i prednizon (CVP); ili ciklofosfamid, adriamicin, vinkristin, prednizon (CHOP). Približno 70% do 80% pacijenata ć e odgovoriti na početnu hemoterapiju, a trajanje remisije traje oko 2-3 godine. Na kraju, već ina pacijenata se recidivira. Otkri ć e i klinička upotreba antitela na CD20, rituksimab, obezbedili su značajna poboljšanja u odgovoru i stopi preživljavanja. Trenutni standard nege za već inu pacijenata je rituksimab CHOP (R-CHOP) ili rituksimab CVP (R-CVP). Interferon je odobren za početno lečenje NHL-a u kombinaciji sa alkilirajuć im agensima, ali pokazalo se da ima ograničenu upotrebu u SAD-u. Rituksimab je efikasan u nekoliko vrsta NHL-a i trenutno je odobren kao prva linija lečenja za indolentni (folikularni limfom) i agresivni NHL (difuzni limfom velikih B ć elija). Međutim, postoje značajna ograničenja anti-CD20 monoklonskih antitela (mAb), uključuju ć i primarnu rezistenciju (50% odgovora kod recidiviranih indolentnih pacijenata), stečenu rezistenciju (50% stopa odgovora nakon ponovnog lečenja), retki potpuni odgovor (2% potpunog rezoniranja) stopa ponovljene populacije) i kontinuirani obrazac recidiva. Konačno, mnoge B ć elije ne eksprimiraju CD20, a samim tim mnogi poreme ć aji B ć elija se ne leče korišć enjem terapije antitelima na CD20.

[0005] Pored NHL-a, postoji nekoliko vrsta leukemija koje su rezultat neregulacije B ć elija. Hronična limfocitna leukemija (poznata i kao „hronična limfoidna leukemija“ ili „CLL“) je vrsta leukemije odraslih uzrokovana abnormalnom akumulacijom B limfocita. U CLL, maligni limfociti mogu izgledati normalno i zrelo, ali nisu u stanju da se efikasno nose sa infekcijom. CLL je najčešć i oblik leukemije kod odraslih. Muškarci imaju dvostruko ve ć u verovatnoć u da obole od HLL nego žene. Međutim, ključni faktor rizika je starost. Preko 75% novih slučajeva se dijagnostikuje kod pacijenata starijih od 50 godina. Više od 10.000 slučajeva se dijagnostikuje svake godine, a smrtnost je skoro 5.000 godišnje (American Cancer Society, 2006; and SEER Cancer Statistics Review). HLL je neizlečiva bolest, ali u već ini slučajeva sporo napreduje. Mnogi ljudi sa CLL vode dugi niz godina normalan i aktivan život. Zbog svog sporog početka, CLL u ranoj fazi se uglavnom ne leči, jer se veruje da rana intervencija CLL ne poboljšava vreme preživljavanja ili kvalitet života. Umesto toga, stanje se nadgleda tokom vremena. Početni CLL tretmani variraju u zavisnosti od tačne dijagnoze i progresije bolesti. Postoje desetine sredstava koja se koriste za CLL terapiju. Kombinovani režimi hemoterapije kao što su FCR (fludarabin, ciklofosfamid i rituksimab) i BR (Ibrutinib i rituksimab) efikasni su i kod novootkrivenih i kod relapsnih KLL. Alogena transplantacija koštane srži (matične ć elije) se retko koristi kao prva linija lečenja CLL zbog svog rizika.

[0006] Druga vrsta leukemije je akutna limfoblastna leukemija (ALL), poznata i kao akutna limfocitna leukemija. ALL karakteriše hiperprodukcija i kontinuirano razmnožavanje malignih i nezrelih belih krvnih zrnaca (poznatih i kao limfoblasti) u koštanoj srži. „Akutno“ se odnosi na nediferencirano, nezrelo stanje cirkulišuć ih limfocita („eksplozije“) i da bolest brzo napreduje sa očekivanim životnim vekom od nedelja do meseci ako se ne leči. ALL je najčešć i u detinjstvu sa najveć om incidencijom od 4-5 godina. Deca od 12 do 16 godina umiru od toga lakše od ostalih. Trenutno se najmanje 80% ALL u detinjstvu smatra izlečivim. Svake godine se dijagnostikuje manje od 4.000, a smrtnost je skoro 1.500 godišnje (American Cancer Society, 2006; and SEER Cancer Statistics Review).

[0007] Ljudski molekul CD19 je strukturno različit receptor na ć elijskoj površini izražen na površini ljudskih B ć elija, uključujuć i, ali ne ograničavaju ć i se na, pre-B ć elije, B ć elije u ranom razvoju (tj. nezrele B ć elije), zrele B ć elije kroz terminal diferencijacija u plazma ć elije i maligne B ć elije. CD 19 je izražen u ve ć ini pre-B akutnih limfoblastnih leukemija (ALL), ne-Hodgkinovih limfoma, B ć elijskih hroničnih limfocitnih leukemija (CLL), pro-limfocitnih leukemija, leukemija dlakavih ć elija, uobičajenih akutnih limfocitnih leukemija i nekih Null-akutnih limfoblastnih leukemija (Nadler et al, J. Immunol., 131 :244-250 (1983), Loken et al, Blood, 70:1316-1324 (1987), Uckun et al, Blood, 71 :13-29 (1988), Anderson et al, 1984. Blood, 63:1424-1433 (1984), Scheuermann, Leuk. Lymphoma, 18:385-397 (1995)). Ekspresija CD 19 na plazmać elijama dalje sugeriše da se on može izraziti na diferenciranim tumorima B ć elija kao što su multipli mijelom, plazmocitomi, Waldenstromovi tumori (Grossbard et al., Br. J. Haematol, 102:509- 15 (1998); Treon et al, Semin. Oncol, 30:248-52 (2003)).

[0008] Zbog toga je CD 19 antigen meta imunoterapije u lečenju ne-Hodgkinovog limfoma (uključujuć i svaki od ovde opisanih podtipova), hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije.

[0009] Prikazane su određene terapije CD19. T ć elije koje eksprimuju anti-CD19 himerni receptor antigena (CAR), uključuju ć i CD3-z i 4-BB kostimulatorni domen, su primenjene kod pacijenata sa naprednim CLL. Kalos et al., T ć elije sa himernim receptorima antigena imaju snažne antitumorske efekte i mogu uspostaviti memoriju kod pacijenata sa naprednom leukemijom, Science Translational Medicine, vol. 3, BR. 95 (10. avgusta 2011. godine). Sadelain et al., Obe ć anje i potencijalne zamke himernih receptora antigena, Current Opinion in Immunology, Elsevier, vol. 21, BR.2, 2. aprila 2009, takođe opisuje anti-CD19 himerne antigenske receptore (CAR). Ni Kalos et al. ni Sadelain et al., međutim, ne opisuju antitela specifična za CD19 u kombinaciji sa inhibitorom BCL-2 kao što je ovde prikazano.

[0010] Karlsson et al: „Kombinovanje CAR Tć elija i inhibitora apoptoze Bcl-2 porodice ABT-737 za lečenje maligniteta B- ć elija“, Cancer Gene Therapy 2013, vol 20, BR.7, 386-393 opisuje lečenje malignih tumora B-ć elija sa CAR T ć elija koja targetira CD19 i ABT-737, BCL-2 inhibitor, navitoklaks, ali ne otkriva niti predlaže lečenje limfoma i/ili leukemije MOR208 i venetoklaksom.

[0011] Upotreba antitela na CD19 u nespecifičnim limfomima B ć elija je razmatrana u WO2007076950 (US2007154473), zajedno sa letimičnim pominjanjem Ibrutiniba u dugačkoj listi potencijalnih kombinacionih partnera, ali ne uspeva da nauči antitelo ovde predstavljeno kao primer ili sugeriše sinergijske efekte kombinacije u lečenju ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije, kao što je ovde prikazano.

[0012] Upotreba antitela na CD19 u CLL, NHL i ALL je opisana u Scheuermann et al., CD19 Antigen in Leukemia and Lymphoma Diagnosis and Immunotherapy, Leukemia and Lymphoma, Vol. 18, 385-397 (1995), ali ne uspeva da predloži kombinaciju koja je ovde prikazana.

[0013] WO2016/130902 opisuje kombinovanu terapiju ALL-a sa kombinacijom anti-CD19 ADC i hemioterapiju kao što su vinkristin, doksorubicin, ciklofosfamid ili deksametazon, ali ne otkriva i ne predlaže lečenje limfoma i/ili leukemija MOR208 i venetoklaks-om kao što je ovde prikazano.

[0014] Dodatna antitela specifična za CD19 opisana su u WO2005012493 (US7109304), WO2010053716 (US12/266,999) (Immunomedics); WO2007002223 (US US8097703) (Medarex); WO2008022152 (12/377,251) i WO2008150494 (Xencor), WO2008031056 (US11/852,106) (Medimmune); WO 2007076950 (US 11/648.505) (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (US12/253,895) (Seattle Genetics); i WO2010095031 (12/710,442) (Glenmark Pharmaceuticals), WO2012010562 i WO2012010561 (International Drug Development), WO2011147834 (Roche Glycart) i WO 2012/156455 (Sanofi).

[0015] Kombinacije antitela specifičnih za CD19 i drugih agensa opisane su u WO2010151341 (US 13/377,514) (The Feinstein Institute); US5686072 (University of Texas) i WO2002022212 (PCT/US01/29026) (IDEC Pharmaceuticals), WO2013/024097 (14/126,928) (MorphoSys AG) i WO2013/024095 (14/127,217) (MorphoSys AG). WO2013/024097 opisuje kombinovani tretman limfoma i/ili leukemije sa anti-CD19 antitelom MOR208 i bendamustinom. WO2013/024095 opisuje kombinovani tretman limfoma i/ili leukemije sa anti-CD19 antitelom MOR208 i fludarabinom.

[0016] Određeni inhibitori BCL-2 su komercijalno dostupni. VENCLEXTATM (venetoclax), poznat i kao GDC-0199, ABT-199 i RG7601 je BCL-2 inhibitor indiciran za lečenje pacijenata sa hroničnom limfocitnom leukemijom (CLL) sa delecijom 17p, kako je utvrdio test odobren od FDA, koji su primili najmanje jednu prethodnu terapiju. Venetoclax je opisan u patentima Sjedinjenih Država br.8,546,399 i 9,174,982.

[0017] WO2015/130585 opisuje lečenje karcinoma, naročito leukemija i limfoma, inhibitorom ciklin-zavisne kinaze i inhibitorom BCL-2, poželjno venetoclax-om (ABT-199), ali ne uspeva da nauči antitela ovde predstavljena kao primer ili sugeriše sinergijske efekte kombinacije u lečenju limfoma i/ili leukemija sa MOR208 i venetoclax-om kao što je ovde prikazano.

[0018] Uprkos nedavnom napretku u otkrivanju i razvoju agensa protiv raka, mnogi oblici karcinoma koji uključuju tumore koji eksprimiraju CD19 i dalje imaju lošu prognozu. Dakle, postoji potreba za poboljšanim metodama za lečenje takvih oblika raka.

[0019] Predmet ove prijave se razlikuje od stanja tehnike u tome što se venetoclax koristi sa MOR208. Ova kombinacija pokazuje sinergijski efekat u odnosu na svako jedinjenje kada je samo. Ovaj efekat ne predviđa stanje tehnike.

Rezime

[0020] Ni pojedinačno ni u kombinaciji stanje tehnike ne sugeriše sinergijske efekte kombinacije prikazanog antitela i venetoclax-a u lečenju ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije.

[0021] U jednom aspektu, ovo otkrić e se odnosi na sinergijsku kombinaciju antitela specifičnog za CD19 i BCL-2 inhibitora. Takve kombinacije su korisne u lečenju malignih tumora B ć elija, poput ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije.

[0022] In vitro modeli se smatraju indikativnim kako bi se određeno jedinjenje ili kombinacija jedinjenja ponašala kod ljudi.

[0023] MEC-1 ć elije (DSMZ # ACC497) su ć elijska linija hronične leukemije B- ć elije. MEC-1 ć elije u sadašnjem in vitro modelu pokazuju kakoć e kombinacija funkcionisati u lečenju hronične limfoidne leukemije (CLL) kod ljudi.

[0024] Pored toga, kada se jedinjenja kombinuju in vitro, očekuje se da kombinacija ima samo aditivne efekte. Iznenađuju ć e, pronalazači su otkrili da je kombinacija određenog antitela specifičnog za CD19 i venetoxlax posredovala u sinergističkom nivou specifičnog ubijanja ć elija in vitro u poređenju sa antitelom i samim venetoclaxom. Konkretno, pronalazači su otkrili da je kombinacija MOR00208 i venetoclax-a posredovala u sinergističkom nivou specifičnog ubijanja ć elija in vitro u MEC-1 ć elijama u poređenju sa antitelom i samim venetoclax-om.

[0025] Ukratko, kombinacija primera antitela na CD19 i venetoclax ponašala se sinergijski u modelima relevantnim za CLL. Kako je CLL poremeć aj povezan sa B ć elijama, a CD19 je visoko eksprimiran na B ć elijama, navedena kombinacija bi imala isti mehanizam delovanja i takođe bi trebalo da se ponaša sinergijski u lečenju drugih poremeć aja povezanih sa B ć elijama, npr. ALL i NHL.

[0026] Prema tome, kombinacija primera antitela specifičnog za CD19 i venetoclax treba da bude efikasna u lečenju ljudi kod ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije. Očekivana efikasnost kombinacije antitela specifičnog za primer CD19 i venetoclax-a bić e potvrđena u kliničkim ispitivanjima.

[0027] Kako je mehanizam delovanja venetoclax-a i drugih BCL-2 inhibitora sličan, jer deluju inhibirajuć i antiapoptotični protein B-ć elijski limfom-2 (Bcl-2), što dovodi do programirane ć elijske smrti ć elija, veruje se da sinergiju takođe treba videti pri lečenju ljudi koji imaju ne-Hodgkinov limfom, hroničnu limfocitnu leukemiju i/ili akutnu limfoblastnu leukemiju sa kombinacijom primera antitela na CD19 i inhibitora BCL-2, osim venetoclax-a.

[0028] Kako se navedeno anti-CD19 antitelo i druga anti-CD19 antitela vezuju za CD19, veruje se da sinergiju treba videti i kod lečenja ljudi koji imaju ne-Hodgkinov limfom, hroničnu limfocitnu leukemiju i/ili akutnu limfoblastnu leukemiju sa kombinacijom bilo kog anti-CD19 antitela i BCL-2 inhibitora, npr. venetoclax.

[0029] Jedan aspekt ovog otkrić a obuhvata kombinaciju u kojoj antitelo specifično za CD19 sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region sekvence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQH- LEYPIT (SEK ID BR: 6) i venetoclax-a. U poželjnim izvođenjima, kombinacija je sinergijska. U poželjnim aspektima, kombinacija se koristi za lečenje ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije.

[0030] Poželjni aspekt diskurza je kombinacija koja sadrži antitelo specifično za CD19 pri čemu pomenuto antitelo sadrži HCDR1 region koji sadrži sekvencu SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region koji sadrži sekvencu NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region koji sadrži sekvencu GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region koji sadrži sekvencu RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region koji sadrži sekvencu RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region koji sadrži sekvencu MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6) i venetoclax-a za upotrebu u lečenju ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije.

Opis Crteža

[0031]

Slike 1-3 pokazuju citotoksičnost MOR00208 i venetoclax-a u kombinaciji u ć elijskoj liniji MEC-1. MEC-1 ć elije su prethodno tretirane venetoclax-om tokom 24 sata.

Slika 4 prikazuje aminokiselinsku sekvencu promenljivih domena MOR00208.

Slika 5 prikazuje aminokiselinsku sekvencu Fc regiona MOR00208.

Slike 6-8 prikazuju krive Chou-Talay kombinacionog indeksa MOR00208 i venetoclax-a u ć elijskoj liniji MEC-1.

Slika 9 MOR00208 u kombinaciji sa ABT-199 pokazala je superiorno smanjenje rasta tumora u poređenju sa bilo kojom mono terapijom u s.c. Model miša Toledo SCID. Prikazane su grupne srednje vrednosti 6 standardnih greška srednje vrednosti (SEM). Asterici su ukazali na statističku značajnost vremena udvostručenja tumora kombinovanog tretmana u odnosu na pojedinačni tretman MOR0028 ili odgovarajuć i pojedinačni tretman ABT-199: * p-vrednost <0,05, ** pvrednost <0,01 i **** p-vrednost < 0.0001. Lečenje je započeto randomizacijom na srednjoj zapremini tumora od 266 mm³ (123 - 406 mm³) 23 dana nakon injekcije tumora. MOR00208 (11 mg/kg) je primenjen intraperitonealnom injekcijom (i.p.) dva puta nedeljno. ABT-199 (20 ili 40 mg/kg) primenjivan je per os (p.o.) dnevno.

Slika 10 MOR00208 u kombinaciji sa ABT je pokazala superiorno srednje preživljavanje u poređenju sa bilo kojom monoterapijom u s.c. Model miša Toledo SCID. Kaplan-Meierove krive prikazuju preživljavanje od randomizacije do humane krajnje tačke (zapremina tumora 2000 mm³). Lečenje je započeto randomizacijom na srednjoj zapremini tumora od 266 mm³ (123 - 406 mm³) 23 dana nakon injekcije tumora. MOR00208 (11 mg/kg) je primenjeno intraperitonealnom injekcijom (i.p.) dva puta nedeljno. ABT-199 (20 ili 40 mg/kg) primenjivan je per os (p.o.) dnevno.

Detaljan opis pronalaska

[0032] „Sinergija“, „sinergizam“ ili „sinergistično“ znače više od očekivanog aditivnog efekta kombinacije. U pogledu in vitro studija, ovde se određuje "sinergija", "sinergizam" ili "sinergistični" efekat kombinacije metodama Chou et al., Clarke et al. i/ili Webb et al. Ting-Chao Chou, Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies, Pharmacol Rev 58:621-681 (2006). Takođe videti Clarke et al., pitanja u eksperimentalnom dizajnu i analizi krajnjih tačaka u proučavanju eksperimentalnih citotoksičnih sredstava in vivo kod raka dojke i drugi modeli, Breast Cancer Research and Treatment 46: 255-278 (1997). Takođe videti Webb, J. L. (1963) Enzyme and Metabolic Inhibitors, Academic Press, New York.

[0033] Izraz "antitelo" označava monoklonska antitela, uključujuć i bilo koji izotip, kao što su IgG, IgM, IgA, IgD i IgE. IgG antitelo se sastoji od dva identična teška lanca i dva identična laka lanca koja su povezana disulfidnim vezama. Svaki teški i laki lanac sadrži konstantni i promenljivi region. Svaka varijabilna regija sadrži tri segmenta koja se nazivaju „regioni koji određuju komplementarnost“ („CDR“) ili „hipervarijabilni regioni“, koji su prvenstveno odgovorni za vezivanje epitopa antigena. Označeni su kao CDR1, CDR2 i CDR3, numerisani redom od N-kraja. Visoko konzervirani delovi promenljivih regiona izvan CDR-a nazivaju se „okvirni regioni“. „Fragment antitela“ označava Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab ’F(ab’) 2 fragment ili drugi fragment, koji sadrži najmanje jedan promenljivi teški ili promenljivi laki lanac, od kojih svaki sadrži CDR i okvirne regione.

[0034] Bcl-2 (B-ć elijski limfom 2), koji kod ljudi kodira BCL2 gen, je osnivač porodice Bcl-2 porodice regulatornih proteina koji regulišu ć elijsku smrt (apoptozu), bilo indukovanjem (pro-apoptotičkim) ili inhibiranjem (antiapoptotička) apoptoza. Bcl-2 je referenciran NCBI genom broj 596. Bcl-2 se posebno smatra važnim antiapoptotičnim proteinom i prema tome je klasifikovan kao onkogen. Bcl-2 svoje ime izvodi iz B-ć elijskog limfoma 2, jer je drugi član niza proteina koji je inicijalno opisan u hromozomskim translokacijama koje uključuju hromozome 14 i 18 u folikularnim limfomima. Ortolozi (poput Bcl2 kod miševa) identifikovani su kod brojnih sisara za koje su dostupni kompletni podaci o genomu.

[0035] "BCL-2 inhibitor" je klasa lekova koja deluje inhibirajuć i antiapoptotični protein B- ć elijskog limfoma-2 (Bcl-2), što dovodi do programirane ć elijske smrti ć elija. Inhibitor BCL-2 uključuje venetoclax. Venetoclax prodaju Abbvie i Genentech (trgovačko ime VENCLEXTATM, takođe poznato kao GDC-0199, ABT-199 i RG7601). Venetoclax je trenutno označen za lečenje pacijenata sa hroničnom limfocitnom leukemijom (CLL) sa delecijom 17p, kako je utvrđeno testom odobrenim od strane FDA, koji su primili najmanje jednu prethodnu terapiju. Formula venetoclax-a je 4-(4-{[2-(4-hlorofenil)-4,4 dimetil-1-cikloheksen-1-il] metil}-1-piperazinil)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]fenil}sulfonil)-2-(1H-pirolo [2,3-b] piridin-5-iloksi) benzamid i ima sledeć u strukturu:

[0036] "Venetoclax", "ABT" i "ABT-199" se ovde koriste kao sinonimi.

[0037] Ostali inhibitori BCL-2 uključuju:

Genasense: Genta Incorporated je razvila antisens oligonukleotidni lek Genasense (G3139) za ciljanje Bcl-2. Antisens DNA ili RNA lanac je nekodirajuć i i komplementaran kodiraju ć em lancu (koji je obrazac za proizvodnju RNK ili proteina). Antisens lek je kratka sekvenca RNK koja hibridizira i inaktivira mRNK, sprečavajuć i stvaranje proteina. Proliferacija ć elija humanog limfoma (sa translokacijom t (14; 18)) se može inhibirati antisens RNK usmerenom na početni kodonski region Bcl-2 mRNA. Studije in vitro su dovele do identifikacije Genasense-a, koji je komplementaran sa prvih 6 kodona Bcl-2 mRNA. Oni su pokazali uspešne rezultate u fazama I/II ispitivanja limfoma. Veliko ispitivanje faze III pokrenuto je 2004. Od 2016. lek nije bio odobren i njegov proizvođač je bio van poslovanja.

[0038] ABT-737 i ABT-263: Sredinom 2000-ih, Abbott Laboratories su razvili novi inhibitor Bcl-2, Bcl-xL i Bcl-v, poznat kao ABT-737. Ovo jedinjenje je deo grupe BH3 mimetičkih inhibitora malih molekula (SMI) koji ciljaju ove proteine porodice Bcl-2, ali ne i A1 ili Mcl-1. ABT-737 je superiorniji od prethodnih BCL-2 inhibitora s obzirom na njegov već i afinitet za Bcl-2, Bcl-xL i Bcl-v. Studije in vitro su pokazale da su primarne ć elije pacijenata sa malignim oboljenjima B-ć elija osetljive na ABT-737. Na životinjskim modelima poboljšava preživljavanje, uzrokuje regresiju tumora i leči visok procenat miševa. U pretkliničkim studijama koje su koristile ksenografte na pacijentima, ABT-737 pokazao je efikasnost u lečenju limfoma i drugih karcinoma krvi. Zbog svojih nepovoljnih farmakoloških svojstava ABT-737 nije prikladan za klinička ispitivanja, dok njegov derivat ABT-263 ima sličnu aktivnost na ć elijskim linijama raka malih pluć a (SCLC) i ušao je u klinička ispitivanja.

[0039] "VH" se odnosi na promenljivi region teškog lanca imunoglobulina antitela ili njegovog fragmenta. "VL" se odnosi na promenljivi region lakog lanca imunoglobulina antitela ili njegovog fragmenta.

[0040] Izraz "CD19" se odnosi na protein poznat kao CD19, koji ima sledeć e sinonime: B4, B-limfocitni antigen CD19, B-limfocitni površinski antigen B4, CVID3, Diferencijacijski antigen CD19, MGC12802 i T-ć elijski površinski antigen Leu-12.

[0041] Humani CD19 ima aminokiselinsku sekvencu:

[0042] „MOR00208“ je anti-CD19 antitelo. Sekvenca aminokiselina promenljivih domena je data na Slici 4. Aminokiselinska sekvenca Fc regiona teškog i lakog lanca MOR00208 je data na Slici 5. "MOR00208" i "XmAb 5574" se koriste kao sinonimi za opis antitela prikazanog na slikama 4 i 5. Antitelo MOR00208 je opisano u patentnoj prijavi Sjedinjenih Država serijski broj 12/377,251.

[0043] Patentna prijava Sjedinjenih Država serijski broj 12/377,251 opisuje antitelo nazvano 4G7 H1.52 Hibrid S239D/I332E/4G7 L1.155 (kasnije nazvano MOR00208) kako sledi:

[0044] Dodatna antitela specifična za CD19 su opisana u patentu Sjedinjenih Država br. 7,109,304 (Immunomedics); prijava Sjedinjenih Država serijski br. 11/917.750 (Medarex); prijava Sjedinjenih Država serijski br. 11/852,106 (Medimmune); prijava Sjedinjenih Država serijski br. 11/648.505 (Merck Patent GmbH); patent Sjedinjenih Država br.

7,968,687 (Seattle Genetics); i prijava Sjedinjenih Država serijski br.12/710,442 (Glenmark Pharmaceuticals).

[0045] „Fc region“ označava konstantni region antitela, koji kod ljudi može biti iz podklase IgG1, 2, 3, 4 ili drugih. Sekvence humanih Fc regiona dostupne su na IMGT, Humani IGH C-REGIONi, www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/protein/human/IGH/IGHC/Hu_IGHCallgenes.html (preuzeto 16. maja 2011).

[0046] "RefmAb33" je antitelo čija je aminokiselinska sekvenca sledeć a:

Teški lanac, uključujuć i Fc region:

Laki lanac, uključuju ć i Fc region:

[0047] RefmAb33 je specifičan za RSV i koristi se kao kontrola izotipa, jer deli isti Fc region kao MOR00208.

[0048] „Kombinacija“ znači više od jedne stavke, npr. jedinjenje kao što su antitelo i venetoclax.

[0049] Ovo otkrić e se takođe odnosi na kombinacije, farmaceutske proizvode i farmaceutske sastave koje sadrže opisane kombinacije. Dve komponente kombinacije ovog pronalaska, npr. antitelo specifično za CD19 i venetoclax, se mogu primenjivati zajedno, istovremeno, odvojeno ili naknadno, bilo fizički ili na vreme.

[0050] Venetoclax se trenutno uzima oralno i trenutno se dozira jednom dnevno. MOR00208 se trenutno daje intravenozno i trenutno se dozira jednom nedeljno ili jednom u dve nedelje.

[0051] Poželjno je da davanje oba leka omoguć ava da oba leka budu istovremeno aktivna kod pacijenta. Na primer, ako se MOR208 dozira nedeljno, a venetoclax svakodnevno, tada je aktivna supstanca oba leka istovremeno prisutna kod pacijenta. U jednom izvođenju, venetoclax se primenjuje pre i/ili odvojeno od primene antitela specifičnog za CD19, npr. MOR00208.

[0052] Istovremeno znači da se dve komponente daju istovremeno kada su obe komponente (lekovi) istovremeno aktivne u pacijentu. Pod „sinergizmom“ se podrazumeva da su oba leka istovremeno aktivna kod pacijenta.

[0053] Zajednička primena može značiti da se daje istovremeno.

[0054] Komponente kombinacije se mogu formulisati u različitim farmaceutskim sastavima. Farmaceutski sastav uključuje aktivno agens, npr. antitelo za terapijsku upotrebu kod ljudi. Farmaceutski sastav može sadržati prihvatljive nosače ili ekscipijente.

[0055] "Dati" ili "davanje" uključuje, ali nije ograničeno na isporuku u obliku za injekcije, kao što je, na primer, intravenski, intramuskularni, intradermalni ili potkožni put ili put sluzokože, na primer, sprej za nos ili aerosol za inhalaciju ili kao rastvor, kapsula ili tableta koja se može uzimati.

[0056] „Terapeutski efikasna količina“ jedinjenja ili kombinacije se odnosi na količinu dovoljnu za izlečenje, ublažavanje ili delimično zaustavljanje kliničkih manifestacija date bolesti ili poremeć aja i njegovih komplikacija. Količina koja je efikasna za određenu terapijsku svrhu zavisić e od težine bolesti ili povrede, kao i od težine i opšteg stanja subjekta. Podrazumeva se da se određivanje odgovarajuć e doze može posti ć i rutinskim eksperimentisanjem, konstruisanjem matrice vrednosti i ispitivanjem različitih tačaka u matrici, a sve to je u okviru uobičajenih veština obučenog lekara ili kliničkog naučnika.

[0057]„Unakrsno takmičenje“ znači sposobnost antitela ili drugog vezivnog agensa da ometa vezivanje drugih antitela ili veziva za CD19 u standardnom testu takmičenja vezivanja. Sposobnost ili stepen u kojoj je antitelo ili drugi vezivni agens u stanju da ometa vezivanje drugog antitela ili molekula koji se veže za CD19, i, prema tome, da li se može reć i da se unakrsno takmiči prema pronalasku, može se odrediti pomoć u standardnih testova takmičenja vezivanja. Jedan pogodan test uključuje upotrebu tehnologije Biacore (npr. upotrebom instrumenta BIAcore 3000 (Biacore, Uppsala, Švedska)), koji može meriti obim interakcija pomoć u tehnologije površinske plazmonske rezonance. Još jedan test za merenje ukrštenog takmičenja koristi pristup zasnovan na ELISA. Postupak velike propusnosti za antitela koja "vežu epitope", zasnovan na njihovom unakrsnom takmičenju, opisan je u međunarodnoj patentnoj prijavi br. WO 2003/48731

[0058] Izraz "epitop" uključuje bilo koju proteinsku odrednicu koja se može specifično vezati za antitelo ili na bilo koji drugi način interakciju sa molekulom. Epitopske odrednice se uglavnom sastoje od hemijski aktivnih površinskih grupa molekula kao što su aminokiseline ili bočni lanci ugljenih hidrata ili šeć era i mogu imati specifične trodimenzionalne strukturne karakteristike, kao i specifične karakteristike punjenja. Epitop može biti „linearni“ ili „konformacijski“. Izraz "linearni epitop" se odnosi na epitop sa svim tačkama interakcije između proteina i molekula koji deluje (kao što je antitelo) i javljaju se linearno duž primarne aminokiselinske sekvence proteina (kontinuirano). Izraz „konformacioni epitop“ se odnosi na epitop u kome su diskontinuirane aminokiseline povezane u trodimenzionalnu konformaciju. U konformacionom epitopu, tačke interakcije se javljaju preko aminokiselinskih ostataka na proteinu koji su odvojeni jedni od drugih.

[0059] "Vezuje isti epitop kao" znači sposobnost antitela ili drugog vezivnog agensa da se veže za CD19 i koji ima isti epitop kao prikazano antitelo. Epitopi prikazanog antitela i drugih antitela na CD19 se mogu odrediti pomoć u standardnih tehnika mapiranja epitopa. Tehnike mapiranja epitopa, dobro poznate u tehnici, uključuju Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E.Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey. Na primer, linearni epitopi se mogu odrediti, na primer, istovremenom sintezom velikog broja peptida na čvrstim nosačima, peptida koji odgovaraju delovima molekula proteina i reakcijom peptida sa antitelima dok su peptidi još uvek vezani za nosače. Takve tehnike su poznate u tehnici i opisane su, na primer, u patentu Sjedinjenih Država br. 4,708,871; Geysen et al, (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:3998-4002; Geysen et al, (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:78-182; Geysen et al, (1986) Mol. Immunol. 23 :709-715. Slično tome, konformacioni epitopi se lako identifikuju određivanjem prostorne konformacije aminokiselina, kao što su, na primer, razmena vodonik/deuterijum, rendgenska kristalografija i dvodimenzionalna nuklearna magnetna rezonanca. Videti, npr., Epitope Mapping Protocols, gore. Antigeni regioni proteina se takođe mogu identifikovati pomoć u standardnih grafikona za antigenost i hidropatiju, kao što su oni izračunati korišć enjem, na primer, softverskog programa Omiga verzije 1.0 koji je dostupan od the Oxford Molecular Group. Ovaj računarski program koristi Hopp/Woods metodu, Hopp et al, (1981) Proc. Natl.

Acad. Sci USA 78:3824-3828; za određivanje profila antigenosti i Kyte-Doolittle tehnika, Kyte et al, (1982) J.Mol. Biol.

157: 105-132; za hidropatske grafikone.

Izvođenja

[0060] Aspekt ovog otkrić a je kombinacija koja sadrži antitelo specifično za CD19 i inhibitor BCL-2 za upotrebu u lečenju ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije. U izvođenjima, kombinacija je sinergijska.

[0061] Ovde se kombinacija primera antitela na CD19 i venetoclax-a ponašala sinergijski u in vitro modelima relevantnim za CLL. Kako je CLL poremeć aj povezan sa B ć elijama, a CD19 je izrazito izražen na B ć elijama, navedena kombinacija treba da ima isti mehanizam delovanja i takođe bi trebalo da se ponaša sinergijski u lečenju drugih poremeć aja povezanih sa B ć elijama, npr. ALL i NHL. Prema tome, kombinacija primernih antitela specifičnih za CD19 i venetoclax treba da bude efikasna u lečenju ljudi kod ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije. Očekivana efikasnost kombinacije antitela specifičnog za primer CD19 i venetoclax-a bić e potvrđena u kliničkim ispitivanjima.

[0062]Testirane su MEC-1 ć elije (DSMZ # ACC497), hronična ć elijska linija β- ć elijske leukemije. MEC-1 ć elije u sadašnjem in vitro modelu pokazuju kako ć e kombinacija funkcionisati u lečenju hronične limfoidne leukemije (CLL) kod ljudi. Vrednosti Chou indeksa ukazuju na jasan sinergizam kombinacije MOR00208 i venetoclax-a u specifičnom ubijanju MEC-1 ć elija u poređenju sa MOR00208 i samo venetoclax-om.

[0063] Ukratko, kombinacija primera antitela na CD19 i venetoclax-a ponašala se sinergijski u modelima relevantnim za CLL.

[0064] Prema tome, kombinacija primernih antitela specifičnih za CD19 i venetoclax treba da bude efikasna u lečenju ljudi kod ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije.

[0065] Kako su mehanizmi delovanja venetoclax-a i drugih BCL-2 inhibitora slični, veruje se da sinergiju treba videti i kod lečenja ljudi koji imaju ne-Hodgkinov limfom, hroničnu limfocitnu leukemiju i/ili akutnu limfoblastnu leukemiju sa kombinacijom primera -CD19 antitelo i inhibitor BCL-2, osim venetoclax-a.

[0066] Kako se navedena antitela na CD19 i druga antitela na CD19 vezuju za CD19, veruje se da sinergiju treba videti i kod lečenja ljudi koji imaju ne-Hodgkinov limfom, hroničnu limfocitnu leukemiju i/ili akutnu limfoblastnu leukemiju sa kombinacijom bilo kog anti- CD19 antitela i inhibitora proteina B-ć elijskog limfoma-2 (Bcl-2), gde je antitelo anti-CD19, na primer, opisano u patentnoj prijavi Sjedinjenih Država serijski broj 12/377,251 (Xencor), WO2005012493, WO2010053716 (Immunomedics); WO2007002223 (Medarex); WO2008022152 (Xencor); WO2008031056 (Medimmune); WO 2007/076950 (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (Seattle Genetics); i WO2010095031 (Glenmark Pharmaceuticals).

[0067] U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 sadrži antitelo koje se unakrsno takmiči sa antitelom koje sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region sekvence RSSKSLQN- VNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6).

[0068] U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 sadrži antitelo koje se vezuje za isti epitop kao antitelo koje sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), an HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region sekvence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6).

[0069] U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3) , LCDR1 region sekvence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6).

[0070] U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 ima citotoksičnu aktivnost. U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 sadrži konstantni region koji ima aktivnost indukovanja ADCC. U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 indukuje ADCC.

[0071] U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 indukuje ADCC i sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region sekvence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6).

[0072] U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3) , LCDR1 region sekvence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6) i konstantni region koji ima ADCC indukciju aktivnost.

[0073] U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 sadrži varijabilni teški lanac sekvence EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPY NDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWG QGTLVTVSS (SEK ID BR: 10) i varijabilni laki lanac sekvence DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQK-PGQSPQLLIYR MSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEK ID BR: 11).

[0074] U određenim izvođenjima, pomenuto antitelo sadrži konstantni domen teškog lanca sekvence

[0075] U izvođenjima, antitelo specifično za CD19 sadrži konstantni domen lakog lanca sekvence

[0076] U izvođenjima, BCL-2 inhibitor je venetoclax.

[0077] U izvođenjima, komponente kombinacije, antitelo specifično za CD19 i venetoclax, se daju odvojeno. U jednom izvođenju, venetoclax se daje pre davanja antitela specifičnog za CD19.

[0078] U izvođenjima, komponente kombinacije se primenjuju u vreme kada su obe komponente (lekovi) istovremeno aktivne kod pacijenta. Pod „sinergizmom“ se podrazumeva da su oba leka istovremeno aktivna kod pacijenta. U izvođenjima, komponente kombinacije se daju zajedno, istovremeno, odvojeno ili naknadno, bilo fizički ili na vreme. U izvođenjima, komponente kombinacije se primenjuju istovremeno.

[0079] U izvođenjima, kombinacija je farmaceutski sastav. U izvođenjima, sastav sadrži prihvatljiv nosač. U izvođenjima, kombinacija se daje u efikasnoj količini.

[0080] Jedan aspekt ovog otkrić a sadrži antitelo specifično za CD19 koje sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region sekvence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6) za tretman ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije, pri čemu se pomenuto antitelo koristi u sinergističkoj kombinaciji sa venetoclax-om.

[0081] Jedan aspekt ovog otkrić a sadrži antitelo specifično za CD19 koje sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region sekvence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6) za tretman ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije, pri čemu se pomenuto antitelo koristi u kombinaciji sa venetoclax-om. U jednom ostvarenju, navedeno antitelo se daje u kombinaciji sa venetoclax-om. U još jednom izvođenju, navedeno antitelo se koristi u kombinaciji sa venetoclax-om, pri čemu se pomenuto antitelo i venetoclax daju odvojeno. U daljim rešenjima, pomenuto antitelo se daje pre venetoclax-a. U daljim rešenjima venetoclax se daje pre pomenutog antitela.

[0082] Jedan aspekt ovog otkrić a obuhvata sinergističku kombinaciju antitela specifičnog za CD19 koja sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region sekvence RSSKSLQN- VNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQHLEYPIT (SEK ID BR : 6) i venetoclax-a za lečenje ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije. U izvođenjima, ne-Hodgkinov limfom je izabran iz grupe koju čine folikularni limfom, mali limfocitni limfom, limfoidno tkivo povezano sa sluzokožom, marginalna zona, difuzne velike B ć elije, Burkitt's i mantle ćelije.

[0083] U izvođenjima, ne-Hodgkinov limfom je folikularni limfom. U izvođenjima, ne-Hodgkinov limfom je mali limfocitni limfom. U izvođenjima, ne-Hodgkinov limfom je limfoidno tkivo povezano sa sluzokožom. U izvođenjima, ne-Hodgkinov limfom je limfom marginalne zone. U izvođenjima, ne-Hodgkinov limfom je difuzni limfom velikih B ć elija. U izvođenjima, ne-Hodgkinov limfom je Burkittov limfom. U izvođenjima, ne-Hodgkinov limfom je limfom plaštnih ć elija.

[0084] U izvođenjima, kombinacija je za lečenje hronične limfocitne leukemije. U izvođenjima, kombinacija je za lečenje akutne limfoblastne leukemije.

[0085] Sledeć i aspekt obuhvata postupak za lečenje ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije kod pojedinca kome je to potrebno, koji postupak obuhvata davanje antitela specifičnog za CD19 i inhibitora BCL-2. U izvođenjima metode, antitelo specifično za CD19 sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR : 3), LCDR1 region sekvence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQH- LEYPIT (SEK ID BR: 6). U realizacijama metode, antitelo sadrži primer antitela specifičnog za CD19. U izvođenjima metode inhibitor BCL-2 je venetoclax.

[0086] Sledeć i aspekt uključuje upotrebu antitela specifičnog za CD19 pri čemu pomenuto antitelo sadrži HCDR1 region sekvence SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region sekvence NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region sekvence GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region sekvence RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region sekvence RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region sekvence MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6) u proizvodnju leka za lečenje ne-Hodgkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije u sinergijskoj kombinaciji sa venetoclax-om.

Primeri

Primer 1: Citotoksičnost MEC-1 ć elija primenom MOR00208 i venetoclax-a pojedinačno i u kombinaciji

Materijali

[0087] Testirane ć elijske linije: MEC-1 ć elije (DSMZ # ACC497). Uslovi kulture koriš ć enih ć elijskih linija su prema informacijama dobavljača. Ć elijski medijum: Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium (IMDM), Invitrogen, Cat BR.: 31980; RPMI1640, Invit- rogen, Cat BR.: 31870; GlutaMAX, Invitrogen, CAT BR.: 35050; FCS: Sigma CAT BR.: F7524 LOT BR.: 111M3396. NKs: RPM11640, sa GlutaMAX, Invitrogen, Cat BR.: 31870, 10% FCS; Biocoll: Biochrome AG CAT BR.: L6115 LOT BR.: 0034D; MACS NK komplet za izolaciju ć elija: Miltenyi Biotec CAT BR.: 130-092-657 LOT BR.: 5150402327; venetoclax: Selleck Chem. CAT BR.: S8048 LOT BR.: S804803; FCS: Sigma CAT BR.: F7524 LOT BR.: 111M3396; i RefmAb33 (anti- RSV) sa istim Fc regionom kao MOR00208.

Metode

[0088] Citotoksični potencijal MOR00208 i venetoclax-a samih i u kombinaciji je testiran u ć elijskoj liniji MEC-1 (CLL). Ubijanje ciljnih ć elija se meri pomo ć u slede ć ih parametara: monotretiranje venetoclax-om u koncentracijama od 3 mM, 6,5 mM i 10 mM; MOR00208 mono tretman u koncentracijama od 0,01 pM, 0,1 pM, 1 pM, 10 pM, 100 pM i 10 nM, i kombinovani tretman navedenih koncentracija venetoclax-a i MOR00208. Sledeć e se koriste kao kontrole: RefmAb33, same NK ć elije, same MEC-1 ć elije ili DMSO. U mono grupama venetoclax-a, kao i u kombinovanim grupama MOR00208 venetoclax, ciljne ć elije su prethodno obrađene venetoclax-om ili DMSO kontrolom tokom 24 sata, prać eno uklanjanjem mrtvih ć elija pre ADCC testa. Komplet za uklanjanje mrtvih ć elija koriš ć en je za uklanjanje ć elija ubijenih citotoksičnim efektom venetoclax-a. Komplet za uklanjanje mrtvih ć elija je primenjen kako bi oponašao uklanjanje mrtvih ć elija koje se takođe dešava in vivo i kako bi se sprečilo lažno negativno ometanje mrtvih ć elija sa naknadnim ADCC testom. Za ADCC test, ciljne ć elije se broje i boje pomo ć u CFSE u konačnoj koncentraciji od 1 mg/ml. Za kontrolnu grupu, tj. DMSO tretirane ciljne ć elije, odnos efektor: ciljne (E:T) ć elije je podešen na 2:1, tj. Efektorske ć elije 1x10E6/mL (NK ć elije) i 5x10E5/mL ciljne ć elije (MEC-1 ć elije). Za mono grupu venetoclax, kao i za kombinaciju grupe MOR00208 venetoclax, broj ciljnih ć elija je smanjen u skladu sa posmatranim citotoksičnim efektima venetoclax-a tokom 24-časovnog tretmana, dok je broj efektorskih ć elija bio konstantan na 1x106/ml. ADCC testovi su izvedeni na sledeć i način: koriste ć i ploče sa 96 bunarčića, dodato je 100 mL suspenzije ciljne ć elije MEC-1 po bunarčiću, prać eno 100 mL suspenzije NK efektorskih ć elija po bunarčiću. Mešane suspenzije ć elija su centrifugirane i resuspendovane u 100 ml antitela koje sadrži medijum ili odgovarajuć i kontrolni rastvor. Antitela su razblažena u opsegu od 10 nM - 0,01 pM (što odgovara 1,5 mg/ml - 1,5 pg/ml) u medijumu. Analize ADCC su inkubirane 2 sata u CO2-inkubatoru na 37°C. Posle 10 minuta inkubacije na ledu, u svaki bunarčić je dodato 50 ml DAPI rastvora (krajnja koncentracija 1 mg/ml) i inkubirano dodatnih 10 minuta na ledu. Merenja ADCC izvedena su na BD FACSVerse instrumentu. Mrtve ciljne ć elije su identifikovane kao DAPI pozitivne ć elije.

Podaci

[0089] Ukupno su izvedena tri nezavisna eksperimenta kako bi se utvrdio citotoksični potencijal kombinacije MOR00208 i venetoclax-a. Pojedinačne tabele sirovih podataka za sva tri eksperimenta prikazane su u tabelama 1-6. Pojedinačne krive odgovora na dozu ADCC za sva tri eksperimenta prikazane su na slikama 1-3. Krive indeksa kombinacije (+/- SEM) sva tri eksperimenta po svakoj koncentraciji venetoclax-a prikazane su na slikama 6-8.

Eksperiment 1:

[0090]

Tabela 1: Mono aktivnost MOR00208 i venetoclax-a

1

Tabela 2: Kombinovana aktivnost MOR00208 i venetoclax-a

Eksperiment 2:

[0091]

Tabela 3: Mono aktivnost MOR00208 i venetoclax-a

Tabela 4: Kombinovana aktivnost MOR00208 i venetoclax-a

Eksperiment 3:

[0092]

Tabela 5: Mono aktivnost MOR00208 i venetoclax-a

Tabela 6: Kombinovana aktivnost MOR00208 i venetoclax-a

Proračun sinergizma

[0093] Proračuni kombinovanog indeksa (CI) su završeni kako bi se utvrdila sinergija kombinacije prikazanog anti-CD19 antitela i venetoclax-a u poređenju sa MOR00208 i samo venetoclax-om. Takvi proračuni su opisani u Ting-Chao Chou, Teorijska osnova, eksperimentalni dizajn i kompjuterizovana simulacija sinergizma i antagonizma u studijama kombinacija lekova, Pharmacol Rev 58: 621-681 (2006) i Chou TC, Talalay P, Kvantitativna analiza doze- odnosi efekata: kombinovani efekti više lekova ili inhibitora enzima. Adv Enzyme Regul 22: 27-55 (1984). Metode Chou-Talalay-a sprovode se metodom CI-izobol.

Jednačina srednjeg efekta

[0094] Jednačina srednjeg efekta modelira efekat inhibitora (kao što je lek) kao što je Fa/Fu =(D/D50)^m, gde je D doza, Fa i Fu je deo sistema na koji utiče i na koji ne utiče doza D (Fa Fu = 1); D50 je doza koja daje srednji efekat (npr. IC50, ED50, LD50). Konstanta m određuje oblik krive doza-efekat. Koristili smo GraphPad Prism za izračun nelinearne regresije za procenu parametara m i D50.

CI-izobol metoda

[0095] Metoda CI-izobol pruža kvantitativnu procenu sinergizma između lekova. Kombinovani indeks (CI) procenjuje se na osnovu podataka o efektu doze pojedinačnih i kombinovanih tretmana lekovima. Vrednost CI manja od 1 ukazuje na sinergizam; CI = 1 ukazuje na aditivni efekat; a CI> 1 ukazuje na antagonizam. Interakcija sa lekovima (sinergizam ili antagonizam) je izraženija što je vrednost CI već a od 1. Formalno je indeks kombinacije (CI) kombinovanog lečenja definisan kao CI = D1/Dx1 D2/Dx2. Ovde su D1 i D2 doze leka 1, odnosno leka 2 kombinacije; i Dx1, a Dx2 je doza tretmana samo sa lekom 1 i lekom 2 koji bi dao isti efekat kao i kombinacija. Doze Dx1 i Dx2 treba proceniti na osnovu podataka o efektu doze pojedinačnih tretmana lekovima. U osnovi, jednačina srednjeg efekta prilagođena je podacima svakog leka. Iz jednačine srednjeg efekta leka možemo proceniti dozu (tj. D) neophodnu za postizanje efekta (tj. Fa, Fu). Što se tačka dalje nalazi od aditivne linije, to je već a razlika između 1 i njenog CI, pa je jači (sinergijski ili antagonistički) efekat.

1

Rezultati

[0096] Krive indeksa kombinacije (+/- SEM) sva tri eksperimenta za svaku koncentraciju venetoclax-a prikazane su na slikama 6-8. Vrednosti indeksa kombinacije ukazuju na jasan sinergizam kombinacije MOR00208 i venetoclax-a u specifičnom ubijanju MEC-1 ć elija u poređenju sa MOR00208 i samo venetoclax-om. Veoma niske doze MOR00208 imaju mali ili nikakav efekat u primerima ADCC testova ubijanja ć elija. Shodno tome, vrednosti CI u vrlo malim dozama MOR00208 pokazuju vrednost na ili malo iznad 1, koja predstavlja samo kiselost venetoclax-a. U koncentracijama MOR00208, gde sam MOR00208 pokazuje normalnu aktivnost ubijanja ć elija, jasan sinergizam je prikazan vrednostima CI manjim od 1, što predstavlja aktivnost MOR00208 i venetoclax-a. Najveć a koncentracija MOR00208 ovde predstavljenog primera dobijena je u tekuć im kliničkim ispitivanjima, gde se MOR00208 dozira od 12 mg/kg jednom nedeljno. Shodno tome, veruje se da je ilustrovani in vitro model predviđanje aktivnosti kod ljudi. Stoga bi kombinacija MOR00208 i venetoclax takođe trebalo da se ponaša sinergijski u lečenju ne-Hodgkinovog limfoma (NHL), hronične limfoidne leukemije (CLL) i akutne limfoblastična leukemija (ALL) kod ljudi.

[0097] Podrazumeva se da su opis, specifični primeri i podaci, iako ukazuju na primere izvođenja, dati kao ilustracija i nisu namenjeni ograničavanju ovog pronalaska. Različite promene i modifikacije u okviru ovog pronalaska postać e očigledne stručnjaku iz rasprave, otkrivanja i ovde sadržanih podataka, i stoga se smatraju delom pronalaska.

Primer 2: Efikasnost MOR00208 u kombinaciji sa ABT-199 u modelu ksenografta potkožnog humanogć elija limfoma kod SCID miševa

[0098] Prednost efikasnosti MOR00208 u kombinaciji sa venetoclax-om (ABT-199) dalje je proučavana na SCID modelu miša sa potkožnim tumorom ć elija humanog limfoma TOLEDO. Procenjeni su rast tumora i mortalitet.

Materijali i Metode

[0099] Ć elijske linije i medijum za kulturu Toleda kupio je i obezbedio Oncodesign. Tumorske ć elije su gajene kao jednoslojne na 37°C u vlažnoj atmosferi (5% CO2, 95% vazduha). Medijum za kulturu bio je RPMI 1640 koji sadrži 2 mM L-glutamina (ref: BE12-702F, Lonza, Verviers, Belgija), dopunjen sa 10% fetalnog goveđeg seruma (ref: P30-1506, Lonza), HBSS (ref: BE10-543F), Glukoza (ref: G8769, Sigma, Francuska), Hepes (ref: BE17-737E, Lonza) i natrijum piruvat (ref: BE13-115E, Lonza). Ć elije su prilepljene za plastične boce. Za eksperimentalnu upotrebu, tumorske ć elije su odvojene od boce za kulturu petominutnim tretmanom tripsin-versenom (ref: BE02-007E, Lonza), u Hanksovom medijumu bez kalcijuma ili magnezijuma (ref: BE10-543F, Lonza) i neutrališe se dodavanjem kompletnog medijuma za kulturu. Ć elije su prebrojane u hemocitometru i njihova održivost je procenjena pomo ć u 0,25% testa isključenja tripan plave boje.

[0100] Tumori su indukovani potkožnim ubrizgavanjem 10x106 ć elija Toleda u 200 ml RPMI 1640 koji sadrži matrigel (50:50, v: v, ref: 356237, BD Biosciences, Francuska) u desni bok SCID miševa. U D23, kada su tumori dostigli srednju zapreminu od 256668 mm³, 60 miševa je randomizirano prema njihovoj individualnoj zapremini tumora u 6 grupa, od po 10 životinja, koristeć i softver Vivo Manager® ( Biosistemes, Couternon, Francuska). Izvršen je statistički test (analiza varijanse, ANOVA) za ispitivanje homogenosti među grupama. MOR208 je injektiran intraperitonealno (IP) u peritonealnu šupljinu miševa. Kombinovana supstanca je primenjena oralnom sondom (per os, PO) kroz cev za gavažu.

[0101] Raspored lečenja započet kod D23 je bio sledeć i:

Životinje iz grupe 1 su primale jedno dnevno PO davanje PEP i jednu IP injekciju dva puta nedeljno PBS.

Životinje iz grupe 2 su primale svakodnevno PO davanje ABT-199 u dozi od 20 mg/kg/adm

Životinje iz grupe 3 su primale svakodnevno PO davanje ABT-199 u dozi od 40 mg/kg/adm.

Životinje iz grupe 4 su primile jednu IP injekciju MOR208 sa 11 mg/kg/inj na D23, D27, D30, D34, D37 i D41, nakon čega je usledila jedna IP injekcija MOR208 sa 11 mg/kg/inj na D48 (dva puta nedeljno).

Životinje iz grupe 5 su primale svakodnevno PO davanje ABT-199 u dozi od 20 mg/kg/adm u kombinaciji sa IP injekcijama MOR208 od 11 mg/kg/inj na D23, D27, D30, D34, D37 i D41 i na D48, D51, D55 i D58.

Životinje iz grupe 6 su primale svakodnevno PO davanje ABT-199 u dozi od 40 mg/kg/adm u kombinaciji sa dva ciklusa jedne IP injekcije MOR208 sa 11 mg/kg/inj na D23, D27, D30, D34, D37 i D41 i na D48, D51, D55 i D58.

[0102] Svi podaci o studijama, uključujuć i merenja telesne težine životinja, kliničke evidencije i evidencije mortaliteta i lečenje, zakazani su i zabeleženi u bazi podataka Vivo Manager® (Biosistemes, Dijon, Francuska). Izvodljivost i ponašanje beleženi su svaki dan. Telesna težina i zapremina tumora su izmereni dva puta nedeljno. Dužina i širina tumora su merene dva puta nedeljno pomičnim kljunastim merilom, a zapremina tumora je procenjena formulom:

Zapremina tumora = širina<2>x dužina

2

Rezultati

[0103] Kombinovani tretman MOR00208 i ABT-199 u dozi od 20 i 40 mg/kg rezultirao je superiornom i statistički značajnom inhibicijom rasta ć elija limfoma Toledo u poređenju sa kontrolom nosača i oba režima monoterapije. Antitumorski efekat MOR00208 u kombinaciji sa ABT-199 pokazuje još već u izraženost kada se analizira preživljavanje miševa od randomizacije do humane krajnje tačke (zapremina tumora od 2000 mm³). Medijan preživljavanja i odgovarajuć i pove ć ani životni vek kombinovanih grupa bili su superiorniji u poređenju sa odgovaraju ć im monoterapijama. Dalja karakterizacija kombinovanog efekta kategoriše rezultat kombinacije MOR00208 kao potenciranje, jer je efekat kombinacije već i od zbira reperativnih monoterapija (Slika 9, Tabela 7, Slika 10, Tabela 8).

1

�

1

2

Claims

Patentni zahtevi:

1. Kombinacija koja sadrži antitelo specifično za CD19 pri čemu pomenuto antitelo sadrži HCDR1 region koji sadrži sekvencu SYVMH (SEK ID BR: 1), HCDR2 region koji sadrži sekvencu NPYNDG (SEK ID BR: 2), HCDR3 region koji sadrži sekvencu GTYYYGTRVFDY (SEK ID BR: 3), LCDR1 region koji sadrži sekvencu RSSKSLQNVNGNTYLY (SEK ID BR: 4), LCDR2 region koji sadrži sekvencu RMSNLNS (SEK ID BR: 5) i LCDR3 region koji sadrži sekvencu MQHLEYPIT (SEK ID BR: 6) i venetoclax za upotrebu u lečenju ne-Hočkinovog limfoma, hronične limfocitne leukemije i/ili akutne limfoblastne leukemije.

2. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu antitelo ima ADCC aktivnost.

3. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu antitelo sadrži promenljivi teški lanac koji sadrži sekvencu

EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPY NDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYW G QGTLVTVSS (SEK ID BR: 10) i varijabilni laki lanac obuhvatajući sekvencu

DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYR MSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK

(SEK ID BR: 11).

4. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu antitelo sadrži konstantni domen teškog lanca koji sadrži sekvencu

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEK ID BR: 12).

5. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu antitelo sadrži konstantni domen lakog lanca koji sadrži sekvencu

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEK ID BR: 13).

6. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu su navedena antitela specifična za CD19 i venetoclax formulisana u različitim farmaceutskim sastavima.

7. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu se pomenuto antitelo specifično za CD19 i venetoclax daje odvojeno.

8. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu:

(a) venetoclax se primenjuje pre primene antitela specifičnog za CD19; ili

(b) pomenuto antitelo specifično za CD19 se daje pre venetoclax-a.

2

9. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 6, pri čemu se antitela specifična za CD19 i venetoclax daju istovremeno.

10. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu se pomenuto antitelo specifično za CD19 i venetoclax daje u vreme kada su oba leka istovremeno aktivna kod pacijenta.

11. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva za upotrebu u lečenju hronične limfocitne leukemije.

12. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 10 za upotrebu u lečenju akutne limfoblastne leukemije.

13. Kombinacija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 10 za upotrebu u lečenju ne-Hočkinovog limfoma, opciono pri čemu je ne-Hočkinov limfom odabran iz grupe koja se sastoji od folikularnog limfoma, malog limfocitnog limfoma, limfoma limfoidnog tkiva povezanog sa mukozom, limfoma marginalne zone, difuznog limfoma velikih B ć elija, Burkitovog limfoma i limfoma plaštnih ć elija.

14. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, pri čemu je ne-Hočkinov limfom folikularni limfom.

15. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, pri čemu je ne-Hočkinov limfom mali limfocitni limfom.

16. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, pri čemu je ne-Hočkinov limfom limfom povezan sa sluzokožom limfnog tkiva.

17. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, pri čemu je ne-Hočkinov limfom limfom marginalne zone.

18. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, pri čemu je ne-Hočkinov limfom difuzni limfom velikih B ć elija.

19. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, pri čemu je ne-Hočkinov limfom Burkitov limfom.

20. Kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, pri čemu je ne-Hočkinov limfom limfom plaštnih ć elija.