RO109807B1

RO109807B1 - Compozitie si metoda de biocontrol a dezvoltarii fungilor nedoriti, in culturi de plante

Info

Publication number: RO109807B1
Application number: RO147971A
Authority: RO
Inventors: Elad Yigal; Zimand Gilly; Chet Ilan
Original assignee: Peri Dev Applic 1985 Ltd; Yissum Res Dev Co
Priority date: 1990-07-12
Filing date: 1991-07-09
Publication date: 1995-06-30
Also published as: EP0466133A2; IL95066A; KR920002770A; BG94804A; DE69125890T2; DE69125890D1; YU122891A; JP3059245B2; ATE152320T1; HU220419B; BR9103028A; AU649050B2; ES2103758T3; BG61345B1; JPH0678753A; YU48397B; KR100202733B1; AU8033991A; IL95066A0; US5238690A

Description

Prezenta invenție se referă la o compoziție și o metodă de biocontrol a dezvoltării fungilor nedoriți, în culturi de plante.

Se cunoaște că, mucegaiul cenușiu generat de Botrytis cinerea Pers, și putregaiul 5 alb generat de Sclerotinia sclerotiorum Lib. de Bary reprezintă probleme serioase în multe culturi din lumea întreagă. Agenții patogeni atacă multe culturi inclusiv grapurile, vegetalele și plantele ornamentale. Culturile sunt 10 atacate când se dezvoltă în teren deschis sau în strucutri sub acoperiș. Dacă nu este efectuat un control adecvat, mucegaiul cenușiu și putregaiul alb pot provoca pierderi substanțiale înainte de recoltare și după recoltare, prin 15 conservare și transport. Atacurile patogenilor se adresează tuturor părților plantelor incluzând florile, fructele, frunzele, tulpinile, ramurile phylocladele, bulbii sau semințele.

Fungicidele chimice sunt utilizate pe 20 scară largă pentru controlul bolilor. Cu toate acestea, Botrytis cinerea a dezvoltat o rezistență la fungicidele comune utilizate. Printre acestea se află fungicidele pe bază de dicarboximidă și fungicidele pe bază de 25 benzimidazol. în multe cazuri, fermierii nu au nici o soluție pentru această problemă datorită rezistenței. Mucegaiul cenușiu și putregaiul alb, epidemice, sunt de obicei boli severe în caz de umiditate ridicată, temperaturi cuprinse între 10 30 și 25‘C. Utilizarea microorganismelor antagonistice în controlul fungilor patogeni la plante a constituit subiectul unor cercetări extensive. Unul dintre cei mai studiați antagoniști, în mod frecvent, îri legătură cu controlul biologic, este 35 genul Trichoderma, așa cum este menționat în Y.Elad și colaboratori, 1982, Can.J. Microbiol.28: 719-725; I.Chet și R.Baker, 1981, Phytopathology 71; 286-290; M.N. · Schroth și J.G.Hancock, 1981, Ann. 40 Rev.Microbiology 35; 459-463; Y.Elad și colaboratori, 1981, Plant Disease 65; 675-677; Y.Elad și colaboratori, 1980, Phytopathology 70:119-121; I.Chet și colaboratori, 1979, în

B. Scrippers și W.Cams,eds.Soil Beme Plant 45 Pathogens, Academic Press, NY, NY; Y.Hadar și colaboratori 1979, Phytopathology 69;

C. Dennis și J.Webster, 1971, Trans, Br.mycol.

Soc. 57 363-369; Y.Elad (1990) Phytoparasitica, 18:99-105.

Speciile sau varietățile de Trichoderma pot fi diferențial antagonistice la diferite specii de fungi, așa cum este menționat în H.D.Wells și colab. 1972 Phytopathology 62; 442-447. Astfel de diferențieri în antagonism au fost găsite, atât în cadrai speciilor de Trichoderma, cât și între aceste specii, așa cum este, de asemenea, menționat în D.K.Bell și colab. 1982, Phytophatology 72:379-382. De aceea, fiecare produs izolat de Trichoderma neținând seama de speciile acesteia, au diferite caracteristici în abilitatea de a contracara bolile plantei.

Compoziția de biocontrol a dezvoltării fungilor nedoriți în culturi de plante, conform invenției, cuprinde cel puțin 10⁵ celule/g dintro celulă de Tricohderma herzianum 1-952, s-au dintr-un mutant, derivat de la această specie și o substanță purtătoare adecvată acceptabil din punct de vedere agronomic, pentru a inhiba activitatea speciei Botrytis cinerea sau Sclerotinia sclerotiaum.

Metoda de biocontrol a dezvoltării fungilor nedoriți în culturi de plante, conform invenției, constă în aceea că, compoziția definită mai sus se aplică într-o doză de

10...1000 g în 10....300 ml de apă pentru 1000 m², pe produsele agricole aflate în faza de pre sau post-recoltare.

Botrytis cenerea și Sclerotinia sclerotiorum sunt sensibile la antagonism prin competiție cu alte microorganisme. Germinarea sporilor și dezvoltarea hifelor acestei plante patogene și infectarea plantelor gazdă, poate fi redusă când substanțele nutritive și spațiul este limitat. Un astfel de mecanism poate constitui o bază pentru controlul biologic cu succes al mucegaiului cenușiu și putregaiul alb.. Mai mult decât atât, antagonistul va fi capabil de a supraviețui în aceeași nișă pentru o perioadă lungă de timp și poate fi activ împotriva patogenilor, în același timp.

Conform prezentei invenții, se face referire la noi antagoniști ai speciilor

Trichoderma harzianum astfel descoperite, care sunt activi împotriva patogenilor plantei

Botrytis cinerea Pers, și Sclerotinia sclerotiorum. Antagonistul este utilizat pentru controlul bolilor de plante, cum este mucegaiul cenușiu care este produs de Botrytis cinerea și putregaiul alb produs de Sclerotinia sclerotiorum. Specia de Trichoderma harzianum T-39 (1-952), a fost obținută într-o cultură biologică pură. Trichoderma harzianum T-39 (1-952), poate fi aplicată pe bolta formată din plante în alternare cu diferiți fungicizi utilizați pentru controlul mucegaiului cenușiu. Noua specie de Trichoderma harzianum se poate dezvolta menținându-se prin amestecarea cu un suport convenabil, acceptabil în agricultură pentru a prduce o compoziție fungicidă activă de biocontrol, utilizată în controlul bolilor cauzate de Botrytis cinerea și Slcerotinia sclerotiorum. Compoziția de biocontrol poate astfel să conțină o bază de hrană pentru micoparazit sau chiar vehicoul poate servi ca bază hrană. într-unul din aceste întruchipări ale prezentei invenții, compoziția de biocontrol poate așadar să conțină un adeziv convenabil acceptabil în agricultură. Agentul de biocontrol Trichoderma harzianum T-39 (1-952), reduce procentul de îmbolnăviri cauzat de către Botrytis cinerea și Slcerotinia sclerotiorum cu 50% până la 70%. Antagonistul este capabil de menținere a populației superioare peste frunzele și fructele plantelor tratate în sere, vii sau în alte locuri. Trichoderma harzianum T-39 (1-952), este capabilă de competiție cu fungul Botrytis cinerea și Sclerotinia sclerotiorum pentru substanțe nutritive și spațiu. Aceasta conferă acestui produs izolat, unica sa abilitate de control a bolii. Invenția de față se referă așadar la metodele de utilizare a acestei compoziții de biocontrol, ca fungicid împotriva mucegaiului cenușiu. Cantități efective din compoziția de biocontrol se aplică pe diferitele părți ale plantei. într-o întruchipare specifică a prezentei invenții, un fungicid chimic este inclus în compoziția de biocontrol. Trichoderma harzianum T-39 (1-952), posedă rezistență la fungicizii chimici care ar putea distruge sau retarda dezvoltarea altor fungi. în mod alternativ, fungicidul chimic este aplicat singur, fie înainte, fie după tratamentul cu Trichoderma harzianum T-39 (1-952),

O nouă specie antagonistică din speciile de Trichoderma harzianum a fost descoperită, aceasta fiind activă împotriva patogenici fungului Botrytis cinerea față de plantă. Specia preferată din acest nou antagonist este izolată dintr-o microfloră naturală a filoplanului fructului de castravete. Fungul antagonistic a fost cultivat în formă pur biologică, etichetat cu T-39 și identificat conform criteriilor Rifai, așa cum este menționat în (Rifai M.Mycol.Pap.116). Această specie preferată de Trichoderma harzianum Rifai T-39 este depozitată la Institutul Pasteur, Colecția Națională de Culturi de Microorganisme, Paris-Franța, urmându-se instrucțiunile Tratatului de la Budapesta privind Recunoașterea Internațională al Depozitului de Microorganisme sub numărul de acces 1-952.

Trichoderma harzianum T-39 (1-952) și mutanții derivați de la aceasta pot fi utilizați pentru controlul mucegaiului cenușiu produs de către Botrytis cinerea și putregaiul alb produs de Sclerotinia sclerotiorum. în plus, față de abilitatea antagonistică, Trichoderma harzianum T-39 (1-952) are supraviabilitatea pe termen lung asupra boitei plantei. Aceasta se poate aplica pe plantele care prezintă modificări în cazul fungicidelor care sunt utilizate împotriva mucegaiului cenușiu de exemplu, fungicide ca benomil, carbendazim, vinclozolin, iprodionă, procimidon, diclofluanida, tebuconazolul, proclorazul, febetanilul, dietefencarb, metomeclan, clortalohil și amestecul acestor fungicide. Trichoderma harzianum T39 (1-952) posedă rezistență la următoarele pesticide care pot fi aplicate pe plante în diferite agrosisteme: polioxin D, polioxin B, TMDT, sulfat de cupru cu cinci molecule de apă de cristalizare CuSO₄. 5H₂O, difenilamină, folpet, tridemorf, bitertanol, dimetirimol, triforină, dicloronit, roanilină, bupirimat, hexaconazol, microbutanil, fenilrotion, fosetil-Al, propionazol, azinfos-metil, clorpirifos, mancozeb, endosulfan, metomil, tridimefon, chinometionat, diniconazol, medidation, oxiclorura de cupru, imazalil, oxadixil, cimoxanil, metalaxil, triadimenol, ditalimfos, sulf și penoconazol. în plus, față de o gamă largă de antagonisme și de rezistențe la fungicidele chimice și la pesticide, Trichoderma harzianum T-39 (1-952) este capabilă de o supraviețuire pe termen lung, controlul mucegaiului cenușiu și al putregaiului alb fiind efectuat într-un interval de temperatură de la 3 până la 30°C. Aceste caracteristici adiționale fac din prezenta invenție un agent de control multilateral convenabil pentru aplicare în zone semiaride ca și în zone agricole temperate, în sere sau în teren deschis, în cazul produselor agricole depozitate, ca și în cazul transportului de produse agricole. Metodele de aplicare ale Trichodermei harzianum T-39 (1-952) se bazează pe mijloace cum ar fi conidii, clamidospori sau segmente de hife sau prin mijloace de combinare a fiecăruia din acestea, direct pe bolta plantelor. Aplicarea directă a antagonistului, totuși, pare a fi mai puțin efectivă decât aplicarea compoziției de biocontrol care conține Trichoderma harzianum T-39 (1-952) și un vehicul acceptabil în agricultură. Aceste compoziții de biocontrol pot fi sub formă solidă sau sub formă lichidă și pot conține alți adjuvanți, cum ar fi, de exemplu, emulgatori, agenți de suspendare, agenți de aglutinare, etc. Compozițiile solide pot fi sub formă de prafuri, granule sau pulberi umectabile, iar compozițiile lichide pot fi sub formă de medii apoase sau neapoase, în soluții, suspensii, dispersii, dispensii sau sub formă de concentrate. Cantitatea de spori, hife sau clamidospori ai antagonistului în compoziție trebuie să fie de cel puțin IO⁶ celule per gram de compoziție. Propagarea acestor spori depinde de condițiile de dezvoltare în care compoziția se aplică la plante. Astfel de factori la timpul de depozitare al compoziției, pot avea un efect asupra antagonistului, în condițiile de dezvoltare și de aceea, se prepară astfel, ca, compoziția să conțină o bază de hrană convenabilă. în anumite întruchipări ale invenției, vehiculul poate constitui total sau parțial baza de hrană pentru antagonist. Hrana de bază și vehiculul referitoare la antagonist cu substanțe nutritive suficiente și la o microzonă înconjurătoare favorabilă, facilitează stabilimentul, microzonă înconjurătoare pe termen lung și supraviețuirea organelor din plantă pe termen lung. Conform altor întruchipări ale prezentei invenții, compozițiile de biocontrol pot conține, așadar, alte pesticide sau alți agenți de control cum ar fi, de exemplu, alte produse izolate ale microorganismelor antagoniste, cum este, de exemplu, Trichoderma sau alte specii de microorganisme. Pentru aplicare pe plante, compoziția de biocontrol se aplică într-o doză de 10 până Ia 1000 g în 10 până la 300 ml apă pentru 1000 m² de cultură sau într-o doză de 0,0570 în greutate apă pe produsele agricole în faza de prerecoltare și în faza de postrecoltare. Gama plantelor de cultură care sunt supuse la atacul Bonyn's-ului cinerea și Sclerotinei sclerotiorum, este foarte largă. Prezenta invenție este efectivă în controlul bolilor cauzate de către acest patogen într-o gamă superioară acesteia și este efectivă în protecția unor plante cum ar fi, de exemplu, castraveți, tomate, piper, struguri, trandafiri, căpșuni, pătlăgele vinete, fasole, geranium, salată, morcovi și alte plante.

Se dau, în continuare, 17 exemple de realizare a invenției.

Exemplul 1. Speciile tulpinei de Trichoderma sunt izolate din fructele de castravete, după cum urmează: Fructele sunt agitate cu apă la o viteză de 200 rot/min. Porțiuni de apă de spălare se diluează odată, și 0,1 ml se pulverizează pe plăcile cu mediu selectiv , agar, așa cum este menționat în (Elad și colab. Phytoparasitica 1981, vol.9 pp.59-67). Specia pură care rezultă astfel este denumită T39. Produsul izolat T-39 este identificat conform metodei sugerate de către Rifai, ca Trichodrema harzianum, așa cum este menționat în (Rifai, M.1969, Mycol.Pop 116).

Exemplul 2. Trichoderma harzianum T-39 (1-952) este dezvoltată pe mediu în stare solidă bazat pe amidon, ca o sursă majoră de hrană și celită, în rezervor de apă. Dezvoltarea este inițiată prin inocularea mediului solid cu Trichoderma. Amestecul tuturor ingredientelor hrănitoare, a celitei și a materialului de inoculare, se granulează și apoi se incubează prin menținere la temperatura camerei la 25’C. în timpul celor 10 zile de dezvoltare a mediului, acesta este răsturnat de două ori și apoi este uscat și măcinat. Produsul finit conține 5 x 10⁹ până la 1 x IO¹⁰ unități care formează colonii (CFU) per gram. Viabilitatea testelor arată că o valoare inițială de 8,5 x IO⁹CFU/gram greutate uscată prin menținere la temperatura camerei timp de 6 luni, se încarcă numai ușor pînă la 7,5 x 10⁹ CFU greutate uscată și după 12 luni, până lă 7 x IO⁸CFU/gram greutate uscată.

Exemplul 3. Trichoderma harzianum T-39 (1-952) este testată în mediul de dezvoltare (agar-deztroza-cartof-amidon) îmbunătățit cu diferite fungicide și pesticide. Germinarea conidiilor este evaluată după un timp de 24 h la inoculare. în plus, dezvoltarea miceliului cu trei până la patru zile după inoculare la temperatura de 220 ± 2°C este, așadar, evaluată. Pesticidele sunt aranjate în grupe conform abilității lor de inhibare a Trichodermei harzianum T-39 (1-952) (vezi tabelele 1 și 2).

Exemplul 4. Conidiile de Trichoderma species sunt izolate și pulverizate pe diferite plante. Inocularea plantelor tratate cu Botrytis tinerea este efectuată, ca fază următoare. Toate tratamentele sunt incubate într-o cameră umedă, la temperatura de 16 ± 2’C pentru a se dezvolta mucegaiul cenușiu. Incidența bolii este evaluată în timp de 5... 10 zile. Procentajul de boală incidență în diferitele produse izolate cu Trichoderma species, este prezentat în tabelul 3. Rezultatele obținute de Trichoderma species (harzianum) T-39 (1-952) sunt mult superioare față de alte produse.

Exemplul 5. Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) față de mucegaiul cenușiu al strugurilor, se testează prin pulverizarea în vie numai, ca, compoziție cu iprodiona sau alternativ cu iprodiona în trei așezări diferite, conform cu programul recomandat în fiecare zonă. Procentajul de ouă infectate, este prezentat în tabelul 4. Rezultatele arată un control îmbunătățit al bolii, când se utilizează Trichoderma harzianum T-39 (1-952).

Exemplul 6. Trichoderma harzianum T-39 (1-952) se pulverizează pe plante, trandafiri, menținute într-o seră comercială încălzită la temperatura de 15’± 3°C, infestate pe cale naturală cu Botrytis tinerea și comparate cu efectul unui amestec de tebuconazol și diclofluanidă. Agenții de biocontrol activ sunt pulverizați în volume de 1000 1/h în apă. Loturile de 5 m lungime și 1 m lățime sunt randomizate, răspândite în cinci replicații. Tabelul 5 arată că Trichoderma harzianum T39 (1-952) are ca rezultat un control efectiv al tulpinilor infectate cu Botrytis tinerea, când se aplică ca atare sau alternativ într-un amestec de tebuconazol și diclofluanidă.

Exemplul 7. Conidiile de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) sunt pulverizate pe florile de trandafir tăiate, infectate în mod natural cu Botrytis tinerea. Florile sunt incubate într-o cameră umedă timp de 6 zile, după care se examinează severitatea mucegaiului cenușiu. Așa cum este arătat în tabelul 6, un spray care conține IO⁷ conidii/ml, este mult mai utilizat pentru biocontrolul trandafirilor infectați cu mucegaiul cenușiu.

Exemplul 8. Compozițiile de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) într-o 1000 1/h în apă, sunt numai pulverizate, în conjuncție cu, sau alternativ cu fungicidele chimice pe strugurii de masă din vie, infestați în mod natural cu mucegaiul cenușiu cauzat de Botrytis tinerea. Infecția este monitorizată pe ciorchine în vie sau pe ciorchinele cules, în timpul incubației într-o cameră umedă. Rezultatele sunt prezentate în tabelul 7, care arată că Trichoderma harzianum T-39 (1-952) prezintă un control efectiv față de mucegaiul cenușiu în cazul strugurilor de masă prin aplicare pe diferite căi.

Exemplul 9. Compozițiile de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) într-un volum de 1000 1/h se pulverizează pe tomatele din seră. Loturile conțin douăzeci de plante randomizate în cinci replicații. Botrytis tinerea produs în mod natural este monitorizat pe tulpini și fructe. Simptomele în cazul fructelor sunt, fie sub formă de putregai regulat, fie ca spoturi umbrite. Așa cum este arătat în tabelul

8, toate simptomele de mucegai cenușiu prezente la plante, tomate, sunt controlate prin Trichoderma harzianum T-39 (1-952).

Exemplul 10. Compoziție de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) este pulverizată pe fructe, căpșuni, infectate în mod natural cu Botrytis cinerea. Fructele tratate și netratate sunt incubate într-o cameră umedă. în tabelul 9 se arată că produsul T-39 reduce cu succes mucegaiul cenușiu.

Exemplul 11. Compozițiile de Trichoderma harzianumT-39 (1-952) sunt pulverizate pe plante, castraveți în sere neîncălzite, în diferite locuri. Se produce mucegaiul cenușiu pe fructe și pe tulpini, în diferite grade, conform condițiilor din sera specifică și populației naturale de Botrytis cinerea. Trichoderma harzianum T-39 (1-952) este pulverizată ca atare, apoi se poate amesteca într-un rezervor cu alte fungicide sau alternativ se poate utiliza cu un alt fungicid. Tabelul 10 arată că, compozițiile care conțin Trichoderma harzianum (1-952) reduc semnificativ incidența acestei boli.

Exemplele 12 și 13. Obiectiul acestor teste este de a determina dacă există vreun efect asupra procedeului de preparare a vinului obținut din strugurii tratați cu compoziții conținând Trichoderma harzianum T-39 (1-952). Un preparat de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) este pulverizat într-o doză de 4 kg per hectar, pe struguri (cv.Sauvignion Blanc) în vii situate în zona Ortal (Golan Heights, Northem Israel). Pulverizarea a fost realizată în mijlocul lunii august 1989, cu ajutorul unui pulverizator pe două straturi de vie, fiecare fiind de 20 m lungime. Se utilizează ca martor, straturi de viță de vie nepulverizate. Nici un fungicid nu se pulverizează în porțiunea de experimentare, dar toate alte tratamente se efectuează conform cu recomandările din zonă. La data de 1 septembrie 1989, 10 mostre de câte 10 kg de struguri au fost testate randomizat în vii și transferate în laborator. Sucul de la struguri a fost realizat pentru fiecare mostră de struguri. S-a adăugat bioxid de sulf la acest suc-după producerea acestuia și 6 h mai târziu se adaugă drojdie și substanțe nutritive. Sucul fermentat este incubat într-un flacon de un litru, cu ajutorul unei pipete, permițându-se ca bioxidul de carbon să iasă afară din sistem. Nivelul Brix este măsurat cu un dispozitiv Brix și rezultatele sunt prezentate în tabelul 11. Populația celulelor de drojdie este numărată cu ajutorul unui hemocitometru și rezultatele astfel obținute sunt prezentate în tabelul 12. Din aceste rezultate, se poate trage concluzia că produsele solide totale, așa cum sunt măsurate prin metoda Brix, nu diferă de cele ale martorului și cu tulpinile de la struguri sunt tratate c T-39. Mai mult decât atât, deoarece măsurătorile inițiale prezintă o cădere în populația celulară din drojdie, aceasta nu este statistic semnificativă și după 8 zile, rezultatele sunt în esență aceleași. De aceea, utilizarea Trichodermei harzianum T-39 (1-952), în cazul strugurilor nu are un efect semnificativ asupra producției de etanol obținută. în final, testarea vinului nu relevă nici o diferență în ceea ce privește mirosul, culoarea, gustul și claritatea, între vinurile obținute ca martor și vinul din struguri tratați cu Trichoderma har zianumT-39 (1-952).

Exemplul 14. Conidiile de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) sunt pulverizate pe florile de trandafiri. Florile sunt apoi monitorizate pentru nivelul populației de Trichoderma harzianum după un timp de o săptămână de la pulverizare. Nivelul populației de Trichoderma harzianum este determinat prin spălarea florilor cu apă conținând 0,001 M Tween-20 în diluție serială a apei de spălare și apoi se formează un strat din mediul selectiv de Trichoderma. Coloniile sunt numărate după incubare timp de 5 zile la temperatura de 200’C. Nivelul populației de Trichoderma harzianum nu are o cădere drastică timp de o săptămână, așa cum este arătat în tabelul 13.

Exemplul 15. O compoziție de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) este pulverizată într-o doză de la 0,2% la 0,4% pe plante, căpșuni pe loturi de teren (4 replicații de câte 10 x 1,6 m) aranjate în blocuri randomizate și rezultatele sunt comparate cu efectul fungicidelor chimice. După patru săptămâni de la incidența bolii pe căpșuni, se reduce doza de Trichoderma harzianumT-39 (1-952) similar ca în cazul fungicidelor, așa cum este arătat în tabelul 14.

Exemplul 16.0 compoziție formată de 5 Trichoderma harzianum T-39 (1-952) este aplicată într-o doză de la 0,2% până la 0,4% pe morcovi infectați pe cale naturală cu Sclerotinia sclerotiorum. Morcovii sunt tratați după recoltare și incubare într-o cameră umedă. 10 După două săptămâni, severitatea bolii este testată în cazul putregaiului alb. Se poate observa că putregaiul alb al morcovilor este redus semnificativ de către ambele procente de

T-39, dar acesta nu este redus de către tiobendazolul aplicat într-o proporție recomandată, așa cum este arătat în tabelul 15.

Exemplul 17. O compoziție de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) este pulverizată pe plante, castraveți, într-o seră. Populația de T-39 este măsurată pe frunze și fructe cu un factor de timp. Se poate observa din tabelul 16, că agentul de biocontrol este el însuși stabilit pe bolta plantelor, castraveți.

Sensibilitatea Trichodermei harzianum T-39 (1-952) la pesticide, în PDA

Tabelul 1

Agenți de inhibiție superiori	Agenți de inhibiție moderați ^(b>
Vinclozolin	NPC
Iprodionă	Polioxin D
Carbendazim	Polioxin B
Benomil	Diclorfluanid
Carbendazim + Dietofencarb	Thiram
Clorotalonil	CuSO₄.5H₂O
Metomeclan	Difenil amină
Fenetanil	Folpet
Procimidon	Tridemorf
Fluazinon	Bitertanol
Tebuconazol
Procloraz

a) inhibiție la o concentrație de pesticid de 2 ppm sau mai puțin

b) inhibiție la concentrație de pesticid de la 2 până la 15 ppm

14

Sensibilitatea Trichodermei harzianum

T-39 (1-952) la pesticide în PDA

Tabelul 2

Ne inhibiție
Dimetirimol	Metomil
Triforina	Triadimefon
Diclomitroanilina	Quinometionat
Bupirimat	Diniconazol
Hexaconazol	Metilationă
Miclobutanil	Oxiclorură de cupru
Fenitrotion	Imazalil
Fosfetil Al	Metal axil
Propiconazol	Oradizil + Cimoxenil+Mancozeb
Metil azinfos	Triadimenol
Cloropirifos	Ditai imfos
Mancozeb	Sulf
Endosulfan	Penconazol

a) inhibiție la o concentrație de pesticid mai mare decât 15 ppm

Severitatea bolii de mucegai cenușiu în prezența speciilor de Trichoderma. Produse izolate, aplicate cu suspensii conidiale

Tabelul 3

Produsul izolat	Origine	Tomate	Piper	Geranium	Trandafir
1	2	3	4	5	6
Control	-	100	100	100	100
T-39	castravete ^a)	61	46	6	20
T-44	sol	83	80	126	25
TOM	sol	83	56	111	40
T-502	sol	67	56	111	25
T-672	sol	: 100	53	36	58
T-35	sol	100	80	44	50

Tabelul 3 (continuare)

1	2	3	4	5	6
T-Y	sol	100	60	36	57
T-164 G	castravete ^a)	100	80	92	40
T-180 H	sol	100	73	180	65
T-RCTI	struguri/Franța	78	80	17	65
T-65 G	vinete	122	66	64	83
T-315	sol	133	66	100	83
T-FOR	sol	89	80	100	58
T-94	sol	100	56	111	75
T-501	sol	66	93	83	25
T-132 G	tomate	100	73	110	40
T-CW 10	sol	89	100	72	83
T-GAM	sol	100	68	127	108
T-GEN-12	sol	88	80	154	100
T-33	sol	96	86	50	100
T-117 G	castravete ^a)	100	86	62	60
T-55	sol	100	100	100	163
T-199 G	struguri	100	86	100	200
T-59 G	struguri	100	73	100	125
T-133 G	struguri	68	73	130	100
T-191 G	tomate	100	75	72	100
T-192 G	vinete ^a)	100	80	50	63

a) serâ

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) și al

Iprodionei față de mucegaiul cenușiu la strugurii de vin Tabelul 4

Ingredientul activ	Doza ^a)	Spray Program	Var.Carignan în Carcassonne	Gamay în Chazay d'Azergnes	Gamay în Villefranch
			Procente de boabe infectate
			d)	e)	f)	g)	h)
1	2	3	⁷ 4	5	6	7	8

Tabelul 4 (continuare)

1	2	3	4	5	6	7	8
		-	22/3	10/4	14,4	4/4	21/4
Netratate		-	19,7	48,2	33,3	3,1	10,4
Iprodiona	500	ABCD	-	-	-	0,5	1,8
	750	ABCD	5,0 '	3,3	14,5	0,6	3,3
T-39	4b	ABCD	5,0	18,4	20,0	2,8	7,0
Iprodiona	500	ABCD	-	-	15,9	0,6	2,4
și T-39	4b	-	-	-	-	-	-
T-39 urmând d4		AB	2,0	11,0	-	-	-
de Iprodionă	750	CD	-	-	-	-	-

a = grame de ingredienr activ per hectar b = 4 kg/h de formulare c = A = cap făli; B = bunch clos; C = verairon D=Prerecoltare d = 22 zile după tratamentul numărul 3 e = 10 zile după tratamentul numărul 4 f = 14 zile după tratamentul numărul 4 g =4 zile după tratamentul numărul 4 h = 21 zile după tratamentul numărul 4

Localitate Date despre tratament

- Carcassonne 21.6.1989; 5.7.1989; 17.8.1989; 11.9.1989

- Chazay d'Azergnes 14.6.1989; 4.7.1989; 3.8.1989; 22.8.1989

- Villefranche 15.6.1989; 4.7.1989; 1.8.1989; 21.8.1989

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) asupra incidenței mucegaiului cenușiu pe tulpinile tufelor de trandafir

Tabelul 5

Tratament	Numărul cumulativ al tulpinilor infectate per 10 plante
Martor netratat	10,8
T-39 (4g/l)	5,6
Terbuconazol + diclofluanidă	3,8
T-39 urmat de terbuconazol + diclorfluanidă	3,8
Polioxin B (un gram/litru)	3,8

Efectul conidiilor de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) pulverizate peste florile de trandafiri, infestate în modnatural cu Botrytis cinerea

Tabelul 6

Concentrația conidiilor (per/mililitru) ^a·*	Indicele de boală ^b^
⁰6	2,7
10₇	2,0
10	1,9

a) = după șase zile într-o cameră umedă

b) = cheia: 0 = nici o boală; 5 = complet infectat

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) pulverizat în vii peste mucegaiul cenușiu pe strugurii de masă

Tabelul 7

Tratament	Infecții	per 10	vinuri
cv Barlinka ^a,b’	cv.Shami ^a^^,b^	cv.Shami ^a),c)
Martor netratat	6,2	20,3	5,6
T-39 (4 g/1)	2,8	13,3	2,7
Iprodionă (0,5 g/1)	-	8,6	2,3
Folpet	1,8	-	-
Dietofencarb + Carbendazim (0,25 g/1 fiecare)	-	11,3	0,3
T-39 + Iprodionă	-	3,0	1,3
T-39 alternat cu un amestec de Dietocarb și Carbendazim	-	11,0	3,0

a) = cultivator de struguri; b) = testat în vii; c) - testat la șapte zile de la recoltare

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) asupra plantelor tomate în seră

Tabelul 8

Tratament	Fruct putregai ^a)	Frunze infectate	Tulpini infectate ^b)	Fructe spoturi sec.
Martor netratat	39,8	20,4	1,2	2,6
T-39 (4 g/1)	23,8	13,0	0,2	0,5
Tprndinnii (Q,5 p/1)	îs n	46	0?	ni

a) = numărul de infecții per zece plante

b) = indicele de boală: 0 = fruct sănătos; 5 = fruct complet acoperit cu spoturi

22

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) asupra martorului în stadiu de post recoltare, în cazul mucegaiuluicenușiu la căpșuni

Tabelul 9

Zile de incubare în camera cu umiditate	Indicele de boală ^a)
Fructe netratate	Fructe tratate
9	• 3,0	1,6
11	3,5	2,4
13	4,6	2,8

a) = indice de boală; 0 = plantă sănătoasă; 5 = planta complet distrusă

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) la infecțiile fructelor de castraveți și tulpinile de la plante în diferite locuri, în Israel a

Tabelul 10

Incidența bolii ca număr de infecții per zece plante
Tratament	Ara ^b)	Herut ^b)	Gadish ^b^	Iptan ^b)	Ahitu ^b)
Fruct	Tulpină	Fruct	Fruct	Tulpina	Fruct	Tulpină	Tulpină
Martor netratat	33,3	12,3	174,7	15,7	12,0	34,3	48,0	3,75
Vinclozolin (0,5 g/1)	18,3	4,3	-	-	-	-	-	-
Iprodiona (0,5 g/1)	-	-	88,0	5,5	4,8	13,4	16,8	1,5
T-39 (2g/l)	10,8	2,0	-	-	-	-	-	-
T-39 (4g/I)	-	-	14,1	3,8	5,5	15,0	24,0	2,0
T-39 (4gA) amestecat cu Iprodiona (0,5 g/1)			15,0	2,8	1,5	15,4	15,3	0,2
T-39 (4g/l) alternat cu Iprodionă (0,5 g/1)	-	-	-	-	12,5	22,0	-	-

a) = pulverizat la un volum de 1000 1/ha

b) = localitate în Israel

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) asupra nivelului Brix la sucul de struguri obținut din struguri tratați cu T-39

Tabelul 11

Tratament în vie	Zile de incubare
1	3	8	11	17
Control	16,0	11,8	6,4	6,3	6,3
Trichoderma T-39 (1-952	15,5	11,1	6,2	6,2	6,2

Diferențele între tratamente la fiecare dată sunt grade diferite (p = 0,05).

statistic nesemnificative, conform Testului Duncan’s de

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) asupra numărului de celule de drojdie în sucul de striguri obținut din strugurii tratați cu T-39

Tabelul 12

Tratamentul în vie	Numărul de celule din drojdie ( x IO⁴)
, zile de incubație
1	3	8	11	17
Control	9280	12520	6000	17,8	38,2
Trichoderma harzianul T-39	6960	10300	1802	90,9	47,7

Diferențele între tratamente la fiecare dată nu 15 grade multiple (P=0,05). sunt strtistic semnificative, conform Testului Duncan’s

Populația de Trichoderma harzianum T-39 (1-952) pe florile de trandafir tratate cu conidii din agentul de biocontrol

Tabelul 13

Zile de incubație	Nivelul inițial de populație
0	1	2	3
1	0	0,90 x IO⁵	2,7 x IO⁷	1,6 x IO⁸
3	0	5,2 x IO⁵	2,3 x IO⁷	4,0 x IO⁸
7	0	2,0 x IO⁵	0,3 x 10	0,8 x IO⁸

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) asupra mucegaiului cenușiu la căpșuni în câmp infestat natural

Tabelul 14

Tratament ⁺⁾	Fructe infectate/10 metri (strat)
1	2
Control	11,25
T-39 (0,2%)	6,75
T-39 (0,4%)	4,50

Tabelul 14 (continuare)

1	2
Folpet (0,25%)	4,0
Carbendazin plus Ditiofencarb (0,1%)	3,75

+) = pulverizarea este efectuată cu patru săptămâni înainte de evaluare

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) asupra severității Sclerotiniei sclerotiorum prin aplicare lamorcovi după săpare Tabelul 15

Tratament	Indice de boală ^b)
Control	0,714
T-39 (0,2%)	0,536
T-39 (0,4%)	0,427
Tiabendatol (0,1%)	0,821

a) = două săptămâni după tratament :

b) =cheie; 0 = nici o boală; 5 = morcovi complet distruși.

Efectul Trichodermei harzianum T-39 (1-952) asupra frunzelor și fructelor de castravete într-o seră

Tabelul 16

Timp de probare	Propagule de Trichoderma harzianum
Pe frunze	Pe fructe
(Zile după aplicare)	Netratate	Tratate	Netratate	Tratate
0	54	20	0	0
28	232	9000	210	300
21	2300	450000	1500	350000

Revendicări 45

Claims

Revendicări 45

1. Compoziție de biocontrol a dezvoltării fungilor nedoriți în culturi de plante, caracterizată prin aceea că, cuprinde cel puțin IO⁵ celule pe gram dintr-o cultură de Tricoderma harzianum 1-952 sau dintr-un 50 mutant derivat de la această specie și o substanță purtătoare adecvată acceptabilă din punct de vedere agronomic pentru a inhiba activitatea speciei Blotrytis cinerea sau Sclerotînia sclerotium.
2. Compoziție de biocontrol, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, specia menționată 1-952 sau mutantul derivat de la aceasta este sub formă de conidii, clamidospori sau fragmente de hife sau amestecuri dintre acestea.
3. Compoziție de biocontrol, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, substanța suport include un mediu nutritiv pentru specia menționată

1-952 sau mutantul derivat de la aceasta.
4. Compoziție de biocontrol, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, mai cuprinde și un pesticid chimic.
5. Compoziție de biocontrol, conform reven- 5 dicării 4, caracterizată prin aceea că, pesticidul este un fungicid.
6. Compoziție de biocontrol, conform reven- dicării 5, caracterizată prin aceea că, fungicidul este ales dintre folpet și fungicide pe bază de dicarboxamidă. 10
7. Compotiție de biocontrol, conform revendicării

6, caracterizată prin aceea că, fungicidele pe bază de dicarboxamidă sunt alese dintre iprodionă și vinclozolin.
8. Compoziție de biocorol, conform revendicării

1, caracterizată prin aceea că, substanța purtătoare este aleasă dintre diatomit și celită.
9. Metodă de biocontrol a dezvoltării fungilor nedoriți, în culturi de plante, caracterizată prin aceea că, compoziția de biocontrol definită hi revendicarea 1, se aplică într-o doză de 10... 1000 g în 10...300 ml de apă pentru lOOOm², pe produsele agricole aflate în faza de pre sau post-recoltare.
10. Metodă de biocontrol, confoim revendicării 9, caracterizată prin aceea că fungii nedoriți sunt din specia Botrytis cinerea.
11. Metodă de biocontrol, conform revendicării 9, caracterizată prin aceea că fungii nedoriți sunt din specia Sclerotinia sclerotiorum.