PT97770B - Metodo para o tratamento de doenca mental psicotica com uanidinas substituidas tendo elevada afinidade de ligacao ao receptor sigma - Google Patents

Metodo para o tratamento de doenca mental psicotica com uanidinas substituidas tendo elevada afinidade de ligacao ao receptor sigma Download PDF

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Description

uma bibliografia, das patentes uma ampla variedade de guanidinas substituídas. Por exemplos 1.411,731 e i »422.506 apresenta a difenilguanidina. coma um acelerador da borracha; 1«597.233 apresenta a N-D-tolil~N'-fenil-guanidina como uns acelerador da borracha; 1.672.4: *T Λ 3= i apresenta B. N 5 NJ ~i t-DíTiO S en c o útil p- •5 Γ* a fins tera pê uti C 0 3 »í de sai s so lúveis ί Π B. água; 1»730.. 3 33 apresenta Λ „v N-p -dimi guanid ina como um B. celerador d δ bor rac h •i In/7Un/ 7ϋ W apresenta um proc. guanidinas dissubstituídas com N?W'-dialquilo, incluindo N-di--eti 1-N * -f eni 1 -guanidina f N-dieti 1 -N-isoami 1 guanidina ,= M-dimeti 1 --N' -isoamilguanidins e N-dimeti 1-N' -etilgu.anidina; 1.350.= 682 apresenta um processo para a preparação de guanidinas di—substituídas como aceleradores da borracha apresentando um substituinte adicional no átomo de azoto da imina; 2.145.214 apresenta a utilização de guanidinas dissubs-tituídas, por exemplo,* díarilguanidinas especialmente dixilguani-dina, como parasiticidas; 254«009 apresenta sim-d i-2-oc til-quanidina 1.274.4/6 e 2=239.542 apresentam sim-dicicloguanidina como id a & 5“ orno repelente da s lar 2*6 »474 .apresenta i i, ;; ·«* p— ã. If en i 1 Iguanídina c orno a 3.1 17 .994 apresenta guan e BBU 5 sais como campos tos b t r i ssu bs t i tu í d as em 3.140.231 apresenta N—metil— e N-etil— !M* — octilguanidi — nas e seus sais como agentes antihipertensores; •í.248.246 descreve (Exemplo 5) uma guanidina substituída em 1?3 cujos substituintes s-áa grupos hidrocarbonetos hidrofóbicos5 um dos quais é naftilmetilo e o outro é n—butilo; I ’ » *
3.252.816 apresenta várias cinamil— guanidinas substituídas em N e nMo substituídas s genéricamente os correspondentes compostos substituídos com Ν'- e N''-alquilo e seus sais como agentes antihipertensores; 3.270.054 apresenta derivados N—2—adamant—1—il— e N—2-homoadamant-i-i 1-oK.i-etil-tioetil- e aminoetil—guanidina apresentando no máximo dois grupos alquilo inferior no átomo N'~ e/ou N''-azoto como agentes simpéticoliticos e anti-virais;
J 3.301.755 apresenta alqu.il-guanidinas não substituídas N-etilénicamente e os correspondentes compostos Ν'- e/ou Nr'-alquilo inferior como agentes hipoglicémicos e antihipertensores? 3.4©9»669 apresenta N-ciclobexilamino-ípropil substituído com 3,3-dialquilo)-guanidinas e os correspondentes compostos substituídos com N'-alquilo e/ou M''-alquilo como agentes h i potensores; 3.547.951 apresenta guanidinas substituídas com 1,3--diaxalan-4-il-alquilo que apresentam actividade anti—hipertensora e apresenta alquilo inferior, incluindo n-butilo, como um possível substituinte no outro grupo amino; 3.639,.477 apresenta compostos propoxilguanidina como possuidores de propriedades indutoras de anorexia;
3.681.459; 3.769.427? 3.,803,324? 3.908.013; 3.976.787? e 4.014,934 apresentam derivados da guanidina substituídos com elementos aromáticos em que o anel fenilo pode conter substituin-tes hidroxi e/ou halogénio para utilização em terapêutica vaso-constritora ; 3.804.898 apresenta N-benzilciclohu.tenil e N-benzilciclobu— tenil-alquxl-guanidinas e os correspondentes compostos substituídos com N-alquilo e/ou Ν'*-alquilo como agentes hi potensores; 3.968.243 apresenta guanidinas substituídas com N—aralquilo e os correspondentes compostos N' —a 1 qu.11 —n11 a 1 qui 1 o e N*,N'-aralquila como sendo úteis no tratamento de arritmias cardíacas? 3»795.533 aprssenta o-ha. 1 cx-benzi I i dene-amino-guanidirias a a sua. utilização como agentes antidepressivos para dominar a depressão psicótica; 4.Θ07.181 apresenta várias- guanidinas dissubstituídas em N,W' substituídas no átomo de azoto da imina por adamantilo como possuidoras de actividades antiarrítmicas e diuréticas; 4.051.256 apresenta N-~fen.il- e N-piridil-N' -cicloal-·· quil-guanidinas como agentes anti-virais; 4.4352.455 e 4.130.663 apresentam estirilamidinas, como agentes analgésicos ou para a prevenção da agregação das plaquetas do sangue; 4.109.014 apresenta guanidinas substituídas com N-hidro-xi s as correspondentes guanidinas dissubstituídas com N—metila como agentes vasoconstritores; 4.169.154 apresenta a utilização de guanidinas no tratamento da depressãox 4.393.007 apresenta guanidinas substituídas em N e não substituídas, substituídas em N não substituídas em meiil-M" ;i monossubstituídas e dissubstituídas~M"-não substituídas e substituídas como agentes bloqueadores ganglionares; © 4.471.137 apresenta guanidinas Ν,Ν,Ν',N’-tetraalquilo como sendo bases impedidas estereoquimicamente úteis na síntese QLiz01XCS k 4.709.094 apresenta guanidinas dissubstituídas em 1,3, por exemplo, 1,3“dibutil—guanidina e 1,3 di-o-tolil-quinidina, como liqandas ao receptor siama cerebral.
Para exemplos de outras guanidinas substituídas ver, por exemplo, 1.422.506; 1.642.180; 1,756.315; 3,159.676; 3,228.975; 3.248.426;3.283.003; 3,320.229; 3.479,437; 3.547,951; 3.639.477; 3»784.643; 3.949.089; 3.975.533; 4.060.640 e > χ
Seiukj H.W» , et al», ά« ried. Chem« i 12«712 <1969) descreve a síntese de uma série de guanidinas dissubstituídas com adamantilo cama passíveis agentes anti-virais, incluindo clorohi-dreto de N,N*-di-íadamantan-l-il>~guanidina, clorohidreto de N-< adaman t.an-i~il)—N*-ciclohexil~guanidina e clorohidreto de W- (adaman tan~1 · i 1) -N' -ben ?. i 1 -guan idina. *
A Patente dos E.U.A. No. 4.7Θ9.094 <1987), apresenta derivados da guanidina dissubstituída em N,N*que apresentam elevada actividade de ligação em relação ao receptor sigma tendo a Fórmula <I)s
NH ti R-NH-C-NH-R' <I) em que R e R'são um grupo alquila com pelo menos 4 átomos de carbono, um grupo cicloalquilo com 3-12 átomos de carbono, ou cartaocíclico ou arilo, com pelo menos 6 átomos de carbono.
Duas das novas apresentadas são também -2-mefci1feni1)-quanidina guanidinas dissubstituídas em N,N' alí alí reivindicadas isto é, 1,3-di-í4~halo-e 1,3-d1-(4-C "Ή 3-C 2-meti1f en iI)-guanidi
na. é também aqui reivindicado um método para determinar a relação entre um comportamento anormal semelhante ao psicótico num mamífero apresentando esse comportamento e a disfunção do sistema receptor sigma, que compreende a administração a um mamífero apresentando um tal comportamento de uma guanidina dissubstituída em M,N'solúvel na água que desloca in vitro N,M'-d.χ-(4-Γ·Ή 3-2-metilfeni1)-guanidina ligada a membrana do cérebro de mamífero, numa quantidade eficaz para alterar a actividade mental do mamífero modulada pelo receptor sigma do k r
crebro; um método para o tratamento de um ser humano sofrendo de aiTB doença mental psicótica associada a alucinações, que compre-en<js a administração a esse ser humana de uma guanidina dissuhsti-tuid-3 em N,N' que é um antagonista da activida.de de ligação ao eceptor sigma de um benzomorfan alucinogénxco, numa quantidade efica*- P&ra melhorar as alucinações.
Na Patente dos E, U,A, No, 4,7fi9,&94 é ainda apresentado um método para a determinação da actividade de ligação ao recep-tof siqma do cérebro de um composto orgânico que compreende os passos de a) fazer contactar num meio aquoso uma quantidade conhecida de membrana isolada do cérebro de mamífero que apresenta actividade de ligação afim do receptor sigma, com uma mistura çje (j.) uma guanidina dissubstituída em N,N' marcada com tritio que se liga seXectivamente aos receptorss sigma do cérebro, numa quantidade conhecida capaz de ser ligada aos receptores sigma da mambrana do cérebros e (ii) quantidades conhecidas variáveis de um composto orgânico solúvel a ser ensaiado quanto à sua activi— dade de ligação ao receptor sigmaρ b) separar a membrana do cérebro do composta marcada com tritio que não fica ligado à membrana do cérebro no passo a)§ e c) determinar, a partir da relação molar da proporção do composto marcado com tritio ligado que é separado no passo b> e a quantidade molar de composto orgânico utilizado no passo a), a actividade de ligação ao receptor sigma desse composto orgânico.
Ler tos opiáceos benzomorfan, tais como N—alil— nonisí·^··· zocine íSKF iΘ,Θ47) e ciclazocine, para além da analgesia, provocam alucinações, despersonalizaç-lo, embrxaguâs © outros efeitos psicotomiméticos no ser humano. Nos macacos, cães e roedores o opiáceo psicofcomimético causa efeitos comportamentais & autónomos que são diferentes dos observados com a administração de opiáceos clássicos tais como a morfina ou peptideos opioidei-.
Pensa-se que os receptores "opioides" sigma específicos na cérebro s-!a os mediadores desses efeitos atípicos, Martin et al. , J. Pharmacol,,___Εκρ, Ther. 197 s517-532 (1976), Pensa-se que os receptores sigma fazem também a mediação de alguns efeitos psicotomiméticos de fenciclidine tPCP, angel dustJ, ou alternativamente, que os opiáceos psicotomiméticos actuam em receptores específicos PCP, Zukin5ReS«5 et al, Mol» Pharmacol. 29;246-254 (1981) ¾ Shannon, H„E,, J. Pharmacol·; Exp, Ther, 225s 144-152 (1983)? White, J.M», et al.Psycho-pharmaçolpqy 89;1-9 (1983)? e Zukin et al., J, Meu,rochem, 46;1932-194i <1986), PCP é uma droga usada abusivamente que causa um síndroma comportamental no ser humano semelhante ao que é observado na psicose esquizofrénica, Ani. 1 ins,, 0., et al,, CRC Critica 1 Rev, To>;ico 1 „ 19; 145-177 (1982) , Devido aos potentes efeitos psicotomiméticos dos opiáceos sigma e PCP, pensa-se que os receptores sigma íe/ou PCP) desempenham um papel na doença mental, particularmente- na esquizofrenia.
Uma investigação sistemática do papel desempenhado pelos receptores sigma na função cerebral normal e anormal tem sido prejudicada por uma falta de ensaios e bioensaios específicos em relação ao receptor sigma, A realização desses ensaios específicos requere ligandos ao receptor sigma altamente selecti-vos e potentes, bem caracterizados. Estudos recentes revelaram que as receptores da membrana cerebral podem ser marcados in vitro com <±>Γ~Ή38ΚΡ 19,947, Su, T,P,, J„ Pharmacol, Εκρ, Ther, 223s284-299 (1982)? í ·*·) E°H iSKF 19,947, Tam, S.W., et al., Proc,
Na ti.,.·.....Acad. Sei., U.S.A. 81 .*5618-5621 <1984>p Martin et al.. Jju
Fhajnnaço,l..-·E;iq.Ther, 251;559-544 <1984)p e Mickelson, M.M., et âiis Res, Coffljnun, Chem, Pathol. Pharmacol. 47;255-263 <1985), embora não selectivamente, Bundlach st al., Eur. õ. Pharmacol, 11.3;465—466 (1985)p e Largent, B,L,, et al.» d, Pharmacol, Εκρ, Ther« 258s739-748 <1986/, e com ( + > f':'H13”<3~hidroKÍfenil )-N-( 1--propi 1)-piperidine < ( + > Γ-ΉΤ3-ΡΡΡ), Largent et al,, Proc ,__Natl,
Acad. Sei, U.S»A. 81s4965-498/ C1994}, que ê aparen temente ma is selectivo em relação aos receptores sigma que os outros.
Após os estudos in vitro iniciais por Martin et al., (1976) supra Keats and Telford (Keats, A.S.,, et al. "Analgesicss C1 inica 1 Aspects. “Em Molecular___Modification.....in Drug___Design, R»F.Gould íed» > =, Advances in Chemistry Series #45 Amer. Chem. Coe», Wssh. D.C» (1964)).. e Hsertzen (Haertzen, C.A» Cyclazocine and Nalorphins on the Addiction Research Center Inventory /ARCI)., Psychopharmacolooia \Berl»> 16s566-577 (1970)), numerosos investigadores iniciaram a caracterização bioquímica, dos diferentes receptores dos opiáceos (receptores mu, receptores kappa e receptores sigma) in vitro. A primeira evidência quanto á existência de um receptor sigma separado em experiências com tubos de ensaio foi proporcionada por Su Í19S2) supra num artigo descrevendo um sítio de ligação inacessível à etorfina nas- membranas do cérebro da cobaio, que se apresentava aparentemente marcado selectivamente por SKF-10s047 marcado com tritio. Para ultrapassar o facto de 3KF-íΘ»047 poder marcar múltiplos receptores opioities na cérebro, Su realizou o seu. ensaio de ligação ao receptor usando SKF-1θ,Ú47 marcado com tritio na presença de etorfina não marcada em excesso. A etorfina é uma droga agonista dos opiáceos muito forte que é sabida ligar-se aos receptores delta., receptores mu e receptores kappa com uma. potência quase igual» Su utilizou etorfina para saturar todos os receptores mu.» kappa e delta numa preparação de membrana cerebral adicionando em seguida SKF-1&,Θ47 marcado com tritio. Isto permitiu—lhe detectar um sitio de ligação sigma que era aparentemente diferente dos receptores mu, kappa e delta»
Uma abordagem importante para. a identif í cação do receptor sigma como um entidade separada ocorreu quando Tam et 10 ά * τ
âla.» < 1984), supra» demonstrou que os problemas anteriores na marcação selectiva do receptor sigma eram causados pelo facto de em todas as experimentações anteriores se ter utilizado uma preparação racémica SKF-10,047. Iam revelou que usando um isóntero de {-È-)-5KF·--10.,047 marcado com tritio se podia marcar selectiva-mente um receptor sigma que era diferente dos receptores opioides mu, delta e kappa. Por outro lado, Tam revelou que (->~SKF-íΘ,®47 marcava aparentemente os receptores mu s kappa mas não os receptores sigma. Tam, S.W., Eur. J. Pharm. 109;33-41 (1985). Este achado foi ac tua 1 menta confirmado. (Martin et al. , 1984, supra,, Além disso, existe uma evidencia a partir de experimentações comportamentais, Khazan et al. Neuroaharm. 235983-987 (1984);
Brady e.t_al» , Science 215; 178-180 (1981), que é o isémero (+>-SKF-10,047 que é sxclusivamsnte responsável pelos efeitos psicotomiméticos de SKF-i0,047.
Um dos achados mais importantes da caracterização bioquímica do receptor sigma consistiu no facto deste receptor se ligar a todas as drogas opiáceas sintéticas que é sabido terem efeitos alucinogénicos e psicotomiméticos. Qs opiáceos que não apresentam efeitos psicotomiméticos in vivo não se ligam a este receptor. Facto mais importante, verificou-se que para além das drogas opiáceas alucinogénicas, o receptor sigma também se liga a muitas drogas anti-psicóticas que são usadas clínicamente para tratar as alucinaçBes nos doentes esquizofrénicos. (Tam and Cook, 1984). As observações iniciais no que se refere à ligação da droga anti-psicótíca ao receptor sigma (SU, 1982) foram subse-quentemente considerávelmente confirmadas e alargadas por Tam et a1„„ (1984), supra, e revelaram também que quando se utilizou haloperidal marcado radioactivamente, uma das drogas anti—psicóticas mais potentes que é usada clínicamente, cerca de metade dos sitias de ligação nas preparações de membrana da cérebro eram na realidade receptores sigma enquanto que a outra metade dos sítios de ligação eram sabido aparentemente receptores da dopamina» έ desde há muito que as drogas- com maior poder anti-psicético são também antagonistas dos receptores da dopamina. Anteriormente as acçSes benéficas das drogas anti-psicóticas em doentes psicóticos tinham sido atribuídas ao efeito bloqueador do receptor da dopamina destas drogas» Contudo5 torna—se claro a parti?" da trabalho de Tam, que numerosas drogas anti-psicóticas usadas clínicamente também se ligam ao sítio sigma,. Todas as drogas anti—psicóticas que se ligam ao receptor sigma podem em parte dar origem ao efeito benéfico de aliviar as alucinações através do receptor sigma» Tomadas em conjunto todas estas observações sugerem que o receptor sigma é um principal candidato a ser envolvida na patogenese da doença mental, particularmente da esquisofrenia em que as alucinações constituem o sintoma clinico mais importante» êa isómero s des;í tror otatórios em mist ur 'âS :en , C.A. 5 Psychoph a r m & c o 1 o o i a. 10 5 óòt>~ .77 D. T», et 3 i » Phar rnacol. Sei 7 s 44 rn- C3 51 o f ac to _ ua f muitos dos efeito s in vi vo :tr orotatóric :s e da ligação do SKF~10 ,047 D não bsr em antagoni zados por n alDKona ou apoiam for temente o conceito de que 05
Deutsch3 „ 1 „ „ et a 1»,, \ C1 inica 1 Meuropharmaco 1 oqy, Vol» 11, No» 2, pp» 1Ô5-119 (Í98S>) proporcionaram uma revisão bibliográfica que implica o receptor sigma na psicose e na eficácia anti-droga. De acorda com Deutsch et ai», certos benzo-morfans que possuem potência analgésica nos seres humanos encontram-se também associados a uma elevada incidência de efeitos psicotomiméticos. Concluiu-se actua1mente que a acção analgésica se encontra associada a isómeros levorotatórios de misturas racémicas dos hensomorfans, enquanto que os efeitos psicotomiméticos são atribuíveis racémic; 5 s» 9 e r í1970), e Manai1 £1VSó)» Conjugado
efeitos psoc o tom i mé t i c os dos enanfciómeros tíeKtrorotstórios se encontram associados ao sitio is xgaçâo rscsptcr sxqma, aX »3 í Life 'aci » Αϋ22 1 9v 210
Além disso» T»P», e____ {1986)) 5 ε Contreras, P*C», st al„ . (Synapse 1_í5/—61 (1987)), estabe 1 eceram a existência de iigandos endógenos para o recsptor sigma, sugerindo que a desragulação da síntese» libertação ou degradação destes Iigandos naturais pode estar na. origem do mecanismo da psicose ocorrendo naturalmente» Conssqusntemente, o an f agon 1 sm 0 do r ecept or sigma p r 0 yu rc iona a po íss I: tra tamen to terap ‘eu tic o a nti-psicétic 0 eficaz» Ver 0 t 1 a n Li fe Sei 8 òb « 232 :9-37 ( í 986 > *s e Su, T»P ; 1 H Xt 1 71 s 224-8 ; / 1986)„ Ainda como GU.t ,ra evidência do papel do na psiCG s-e , α carbazo ile substituído c 1 orohidreto d: Ferris, R»Í1»; isu rase i» Le t. sigma -dimeti1-1-piperazini1)—propilDcarbazole (rimcazole) foi identificado como um agente anti-psicétieo potencial tendo como base a sua capacidade para antagonizar selectivamente comportamentos mesolirobicos induzidos pela apomorfina sem alteração da intensidade dos comportamentos estereotipados» Além disso, o composto não acelera a taxa da síntese da dopamina e não afecta a produção estimulada de dopamina de cAMP em produtos homogeneizados de corpo estriado e tubérculo alfativo de rato, estabelecendo assim que o rimcazole não exerce a sua acção ao nível dos receptores da dopamina pás-sinápticos na área mesolimbica, D rimcazole é capaz de inibir competitivamente a ligação específica de SKF-ÍO,Θ47 trifiado dextrorotatóriamente, o agonista do receptor sigma prototipo, sugerindo que o rimcazole actua no sítio receptor» Assim, o rimcazole revela potencial actividade antipsicótica nos seres humanos sem efeitos
V extrapiramidais, comportamento farmacológico que é consistente com o seu papel como um antagonista competitivo do receptor siqma.
Um outro composto, BMY 148Θ2demonstrou muitas propriedades em testes do comportamento préciinicos o que sugere a sua* eficácia como um agente antipsicótico que é desprovido de efeitos extrapiramidais secundários, 0 composto C1 > não causou, catalepsia em ratos? (2) nac inibe a ligação de L"'H3espiperona à classe D._, jL. dos rsceptores da dopacnina estriados em ratos? Í3) nSo aumentou a densidade má Mima do sitio D.-, com CrOespiperona-marcada no corpo estriado mesmo a seguir a administração crónica (2Θ dias) a ratos? (4) não parece interactuar com a subclasse de recepto-res da d opa mi na ? e (5) não inibe *a produção de cftMP estimulada pala dopamina ou a ligação de -C'"'HjSCH 2339Θ in vitro. Estes dados sugerem que BMY 148Θ2 apresenta, um baixo potencial para a produção de disquinesia tardia e sugere ainda que os efeitos antipsi-cóticos devem ser mediados por um sítio nlo dopaminergico. Além disso, BMY 14802 liga-se com uma afinidade relativamente elevada ao receptor sigma, sendo a ligação estereoselectiva (sendo o enantiómero dextrorotatório 1Θ vezes mais potente na inibição da ligação do que o enantiómero levorotatório) BMY 14802 não se liga aos sítios adrenérgicos, muscarínicas, colinérgicos ou histaminergicos, sugerindo que o composto não estaria associado a efeitos secundários sedativos e autónomos desagradáveis»
Consequentemente pode—se esperar que compostos que se ligam selectivamente ao sitio receptor sigma e que que antagonizam este sítio sejam drogas antipsicéticas úteis que nlo apresentam efeitos extrapiramidais.
As drogas antipsicéticas a anti-esquizofrenia que são correntemente utilizadas apresentam efeitos secundários muito
V
intensos que são pri receptores da dopami envolvem lesões irrev ncipalmente devidos a. sua na. Os efeitos secundários ersíveis do sistema nervoso acção sobre os f requentementee;; t rap i ram i d a 1 nue controla, as funções cerebrais do '“5 dos a tratamento com droga antiesqu mov i mento zoτ rénxca
Doentes submeti" de longa duração desenvolvem frequentemente um síndroma nente da sua capacidade para controlar que envolve per da perma" movimentos coordenados,
Os estudos anteriores revelaram que o sitio de ligação sigma tem as caracteristicas de i> estereo-selectividade em
relação aos opiáceos benzomorfan deκtrorotatorios e insensibilidade em relação a naloxone; 2) elevada afinidade em relação ao haloperidol e moderada a elevada afinidade em relação o drogai antipsicóticas fenotiazina que é sabido serem potentes bloqueado-res do receptor da dopaminas e 3) insensibilidade em relaçao à dopamina e à apomorfina. Este intrigante perfil de -.execticidade em relação às drogas exige uma análise detalhada do papel desempenhado pelos receptores sigma em relação -à Tunção cerebral normal e anormal. Para fazer esta análise, é essencial que se encontre disponível um espectro de compostos ai temente selectivos e com acção potente em relação ao receptor sigma. Este invento proporciona esses compostos e métodos para a identificação de outras drogas apresentando essa actividade.
0 medo, ou receio, é caracterizado pela antecipação de um perigo ou acontecimento conhecido. Pelo contrário, a ansiedade neurótica caracteriza—se por um receio sem causa conhecida, ou por uma resposta mal adaptada a um perigo banal» Nos últimos anos, a perturbação ansiosa generalizada (GAD) foi caracterizada pelos psiquiatras como sendo crónica (presente contínuamente durante pelo menos a m’ê's) e exemplificada por três de quatro sintomas psicomotores; tensão motora, hiperactivida.de autónoma, sxpectativa com apreensão, insónia e exploração minuciosa. Antes C.' desta caracterisaçgo ter sido adoptada, &isaxos clínicos de agentes ansiolí ticos· nos Estados Unidos ocorreram em doentes que eram descritos de formas variadas como sofrendo de neurose ansiosa, ansiedade com depressão associada, e outras expressões afins» As perturbações ansiosas afectam 2-3¾ da população geral (os 6/ milhões de receitas passadas em 1977 para apenas dois ansiolíticos populares confirmam esta incidência projectada), A popularidade dos ansiolíticos certifica a sua capacidade para melhorar os sintomas· debilitantes da doença» Tayior, D * P«, FAóEB is. 2:2443-2452 0.9835.
Históricamente, a ansiedade foi tratada com agentes incluindo álcool, opiáceos e beladona, que possuem um componente sedativo no seu campo de «crgDa jsjq século vinte foram descobertas novas entidades clínicas qUs sao míJiS inócuas para o tratamento da ansiedade incluindo barbitúricos, carbamatos de propanediol, e benzodiazepinas» Os perfis farmacológicos destas drogas sugeriram que as suas acçSes são mediadas por receptorss para o ácido Γ-amxnobutírAca (QABA/« Embora as benzodiazepinas representem uma alternativa fixais segura do que G oieprobamato e fenobarbital, elas são também sedativas» A*ém iisso. as benzodiazepinas controlam as convulsões e produzem um r©iaxamento muscular, propriedades que são desnecessárias ou iπd.¾sejgvsi5 no tratamento da ansiedade. Aíém disso, estas drogas podem interactuar com o álcool, com consequências potencialmente desastrosas» Recentemente, foi considerado que as benzcdla^pí^as produzem habituação e que são acentuadamente responsáveiss por e.,-empla9 por sintomas de supressão após utilização Pr°longada» A necessidade de encontrar drogas ansioselectivas que sejam mais selectivas, que apresentem menos efeitos secundários, e que apresentem um perfil consistente com segurança durante tratamentos prolongados resultou, numa pesquisa contínua dessas droga5„ Esta pesquisa levou â síntese e
avaliação de agentes que não possuam um-a óbvia homologia com as benzodiazepinas. Taylor et aL, supra.
Buspirona íBuspar) foi d primeiro novo ansiolitico a ser aprovado para utilização clinica nas- Estados Unidas desde que as benzodiazepinas foram introduzidas há quase 3Θ anos» A introdução de buspirona nos ensaios clínicos para o tratamento da ansiedade foi um resultado directo da sua eficácia num modelo animal profético para a doença— o amansar da resposta -agressiva de macacos rhesus ã introdução de objectos estranhos- nas suas jaulas de acordo com o protocolo descrito por Tompkins, E.C» et a 1,,, Res Commun. Fsychol, Psychiatrv Bebav. 5 s 3-37-352 (198Θ). Ver Taylor et al« supra» A avaliação préclinica dos ansiaiíticos putativos depende dos testes animais» A maior parte dos dados laboratoriais sobre novos ansioliticos putativos colhidos em testes animais formam duas classes principais, 0 primeiro -grupo de testes baseia—se em conflito ou medo condicionado» 0 segundo grupo de testes baseia-se na ansiedade gerada por novas situações. Embora estes testes se diferenciem pelo modo pelo qual a ansiedade é produzida, tem havido um surpreendente -acordo entra eles na i cl-assif icação das drogas como ansiolíticas ou ansiogénicas» File, S.E., TIWS ÍSs4él~463 <1987), ter tm dois testes particulares quanto à actividade ansio-lítica, é suposto que a antecipação ds castigo leva a uma redução numa. resposta associada ao castigo, Reciprocamente, agentes ansioliticos que reduzem a ansiedade levam a uma taxa de resposta aumentada. No teste de Sei ler—Seifter, o rato recebe um prémio alimentar por premir uma alavanca. mas 4· r» í: ambém recebe um choque eléctrico na pata, o que tem o efeito de suprimir a resposta» tste esquema com punição alterna com um esquema sem punição em
17 - Λ
que as choques eléctricôs na pata nSlo são administrados» Durant.es este esquema sem punição» a pressão da alavanva é ainda premiada. Na teste de Vogel, deixa-se um rato beber água, mas recebe também um choque eléctrico através da bica de água ou das grades do
pavimento. Nos testes tanto de Vogel como de Sei ler Seifter,, é obtida uma medição da resposta sem punição a fim de permitir uma avaliação de qualquer estimulante não especifico ou de efeitos de drogas sedativas ou de quaisquer alterações na ingestão de alimento ou de água. Em ambos estes testes, as faenzodiazepmas melhoram a taxa de resposta nos períodos de punição, sem aumentarem a taxa de resposta na ausência de choque. Embora estes testes sejam testes válidos sobre a ansiedade, os únicos meios de os avaliar têm sido farmacológicos» Taylor ei al.supra.
Um teste menos amplamente usado utiliza a locomoção com punição, em que uma medição de travessia sem punição é obtida de acordo com a velocidade relativa â qual um ratinho atravessa de uma placa, metálica para outra, em que os choques eiéctricos são administrados sempre que o ratinho atravessa. Embora menos amplamente usado para testar capaz de detectar aumentos pela droga manipulando o nív agentes ansioUtícos, este teste foi s diminuições da ansiedade induzidos el do choque. File, S.E», J. Neurose! C 19R0j
Methods
0 teste da interseção social da ansiedade (File, supra; Janes, B.J. et al., Br, J» Fharmacol. 93: 985-993 U988) explora a incerteza e ansiedade geradas pela colocação de ratos num mexo ambiente não familiar e sob uma luz brilhante. A variável depen dente è o tempo que os pares de ratos machos gastam em interseção social (90¾ dos comportamentos são de natureza investigadora)« Tanto a familiaridade como o nivel de luz da arena do teste podem se r man i pu1ados» Os a.tHrvado de interacçao ratos nâ'o drogados revelam o social quando a arena do teste nível mais è familiar e é iluminada por uma luz ds pouca intensidade» A interseção social declina se a arena for não familiar aos ratos ou se for iluminada par luz intensa» Os agentes ansiai £ticos evitem este declínio. 0 nível total de actividade motora pode também ser medido para permitir a detecção de efeitos de drogas específicos de contporta-men tos soclais» 0 teste de inter 1-51 dLi»SiJ =-LJ<_j.a ansiedade é um dos poucos testes animais de ansiedade que tem apresentada validade no aspecto comportamental« Outras medições comporlamentais indicativas de ansiedade e stress < por exemplo defecação, seções de limpeza própria s actividades de deslocamento) foram correlacionadas com a redução na interseção sociali e outras causas de alteração ds resposta (por exemplo exploração do meio ambiente,, alterações olfativas) foram excluídas» A fim de dar validade fisiológica ao teste,, foram também medidos os níveis de ACTH e de costicosterona e alterações na noradrenalina hipotalâmica. Reqisio, TINS ΙΦϋ 461-463 (1987)» .nsiedade gerada por uma mais labirinto". Neste ds animais num braço
Um outro teste que explora a , nova situação é o teste de "elevação teste, a ansiedade á gerada colocando descoberto elevado. A altura, vel pela produção da alteraçõ Q aparelho tem o formato de dois braços fechados» 0 rato no aparelho» A actividade aumenta percentual no tempo braços descobertos e o número Este teste também apresentou em vez do nível de luz» é responsá-es comportamentais e fisiológicas» um mais com dois braços abertos e tem livre acesso a todos os braços ansiolítica pode ser medida pelo que o animal do teste gasta nos de entradas nos braços descobertos, validade no aspecto comportamental e tisioloqico, ansiaiitica px per azino) —
Agentes que se determinou, terem activid-sde incluem o derivado do carbazole 9-L3-(355-cis-dimeti1 -prapi1Icarbasole tendo a fórmula (11)3
e su.cts composi ç £>es tarmaceutit 4.400=338 (1983).
Ver Patente dos E.U.A. Nd,. é também sabido que os antagon seratonina são úteis para o tratamento R.S.j et al.. J. Affective Disord. Ss197-H.G.M» et al.. Fsvçhapharfliscol, Buli. 23s istas dos receptores da da ansiedade,, Ver Kahn, •200 (1987)5 Nestenberg, 146—149 (1987 >«
Resumo do Invento 0 inventa relaciona—se com tuídas em N,M'que se ligam aos sitio mente os que o fazem selectivamente. novas guanidinas dissubsti-rscsp-corss sxgmaç especxal 0 invento também guanidinas dissubstituídas ss relaciona com uma. nova classe de em N,N'que são marcadas radioactiva™ ligação ao receptor sigma de compostos orgânicos. 0 invento também se relaciona, com composições farmacológicas compreendendo algumas das guanidinas dissubstituídas em N,N'antsriormente referidas apresentando actividade de ligação ao recspior sigma e a sua utilização para o tratamento ou prevenção da psicose, depressão, hipertensão ou ansiedade, 0 invento também se relaciona com um método para determinar a actividade de ligação ao teceptor sigma de compostos orgânicos» análise relação anti de— 0 invento também se relaciona com um método de i-n vit.ro para o ensaio de compostos tendo actividade em ao receptor sigma e utilidade como droqas antipsicóticasj pressivas, antihipertensivas e ansiolíticas. 0 invento também se relaciona com um método para determinar a relação entre o comportamento do género psicótico num mamífero apresentando esse comportamento e a disfunção do sistema receptor sigma.
As guanidinas substituídas do invento t‘ã'm a Fórmula
Cl)
MH
R—NH—C—MH—R em que R e R' são um grupa alquilo com paio menos 4 átomos de carbono? um grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos de carbono 3 um grupo arilo carbocíclico com pelo menos 6 átomos de carbono, alcarilo ou aralquilo com pelo menos 6 átomos- de carbono, e contendo la 3 aneis separados ou condensados, um anel heterocxc 1 ico, e em que cada u.m de entre R e RT podem ser su.bsti— tuidos em 1 a 3 posições, ou em que R e R' em conjunto com o
grupa guanidina ao qual estão ligados formam um anel cíclico saturado ou não saturado contendo pelo menos 2 átomos de carbono eMcluíndo o átomo de carbono da guanidina, e em que o referido anel cíclico pode ser substituído com um ou mais grupos alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, grupos carbocíclicos arílicas com pelo menos 6 átomos de carbono, grupos cicioalquilos com 3 a 12 átomos de crabono, ou 1 a. 2 aneis aromáticos condensados e ainda em que a referida guanidina dissuhstituída em N,N' apresenta uma elevada afinidade em relação ao receptor sigma. De preferencia, essas guanidines dissubstituídas em N , M' também apresentam activida.de num ou mais dos modelos animais aqui apresentados.
Em particular, o invento reiaciona.~se com guanidinas dissubstituídas em N,N‘ da Fórmula <I>, anteriormente referidas, em que R e R' são cada um deles adamantilo, ciclohe;<iIo, cuisari-nilo, norbornilo, isobornilo, ou um arilo carbocíclico monocíclx— co com pelo menos & átomos de carbono. 0 invento também se relaciona com guanidinas substituídas tendo a Fórmula (ΙΙΪ)ϊ
NH
Fi
R-X-NH-C-IMH
em que X. e ramif são independentemente C^-C^.-, alquileno de cadeia linear cada C.-z-tb.^ alquileno não saturado de cadeia linear lf· I li .*ΐ·ι
OU DU ramificada ou em que X e ¥ constituem uma ligação simples, R e R' são independentemente hidrogénio, ura grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos de carbono, um grupo arilo carbocíclico com pelo menos 6 átomos de carbono, aralquilo cora pelo menos ò átuflius de carbono, e contendo 1 s -> anexs separados ou condensados, ura -anel heterocíclico ou. ura grupo heteroarilo, e em que cada um de entre R e R' podem ser substituídos nas posições 1 a 3, ou .-1 ι " *
em que R e Rem conjunto com o grupo guanidina ao qual estão ligados formam um an ... *1 -*__1 A __ ... .. tá x i-. a. l~ i. i. w- bpci U. i ado ou nSo satur- pelo menos 2 átomos de carbono sxc1 uindo o átomo d? guanidina, e em que o referido anel cíclico pode ser com um ou mais grupo s alquila com 1 a 6 átomos de cai ar11 carbocíclicos c om pelo menos £? -Hí u* J\íl‘-J£· de car c icIoalqu.il os com 3 a 12 átomos- ds carbono, ou la 2 anéis aromáticos condensados» De preferencia a referida guanidina dissubstituida em N,N' apresenta tuna elevada afinidade em relação ao receptor sigma»
De preferencia, X e Y são grupos Cn-C^ alquileno. Também contempladas para utilização no invento reivindicado são as quanidir dissubstituidas em N»N’tendo as Fórmulas Cl) (III) em que um ou dois grupos U, 1 '~'6 alquilo inferior são substituídos em N e/ou N'» 0 invento também se relaciona com compostos tendo a Fórmula <IV);
NH (IV)
II R-X-N-C-N-Y-R’
I I (CH2)n em Que 1 V- n é 2, 3, 4 ou 5? X e y sSo mdepen .igação simples, tj-C1 ,-v alquileno -Ο,ρ alquileno de cadeia de cadeia linear ou ramificada ou C-linear ou ramificada? R e R'· sSo independentemente hidrogénio, um grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos- de carbono, um grupo arilo carbocíclico com pelo menos ó átomos de carbono, aralquilo com pelo menos 6 átomos de carbono, a contendo 1 a 3 anéis separados ou condensa- dos, um anel heteroc íc1ico, e em que c< ada um de entre R e R" podem ser sub stituídos nas posi ções 1 a 3, ou em que R e R' BiTi conjunto com o grupo guanidina ; ao qual estão liga dos fc :»rmam um anel cíclico saturado ou n-!o saturado contendo pelo menos Aw átomos de carbono excluindo o átomo de carbono da quanidina, e em
Ui se que o referido 1 cíclico pode ser substituído com um ou mais grupos alquilo com í a & átomos de carbono, grupos sril csrfoocicli· cos com pelo menos 6 átomos de carbono, grupos cicloalquilos com 3 a 12 átomos de carbono, ou 1 a 2 -anéis aromáticos- condensados.
De preferi'ncia, o referido composto apresenta uma elevada afinidade em relação ao receptor sigma, é também preferível quando R e R'sSo m-etilfenilo, X e V sao ligações simples e n é 2, por exemplo, M,N' -di (m-etil f eni 1)-2-imi.noimidazol idina. 0 invento também se relaciona com derivados- tritiados das guanxdinas dj.ssu.osti.tuxclas em w,.N em que -pelo menos um dos átomos de carbono do anel de R e R' apresenta pelo menos um -átomo radioactivo, de preferência um átomo de iritio, 0 invento também se relaciona com um método para determinar a acfcividade de ligação ao receptor cerebral sigma de um composto orgânico que compreende os passos- den a) faser contactar num meio aquoso uma quantidade conhecida de membrana cerebral de mamífero isolada que apresenta actividade de ligação ao receptor semelhante a sigma, com uma mistura de íi) uma guanidina dissubsiituída em Ν,Ν* marcada com rádio que se liga selectivamente aos receptares cerebrais sigma, numa quantidade conhecida capas de ser ligada aos receptores sigma dessa membrana de cérebro? e Cii) quantidades conhecidas variáveis de 24 - Μ
composta orgânico solúvel na água a saram ensaiadas em relação à actividade de ligação ao receptor sigmas b) separar a membrana do cérebro do composto marcada cam rádio que não se liga á membrana do cérebro no passo a)5 c) determinar? a partir da relação molar entre a proporção de composto marcado com rádio ligado que é separado no passo b> e a quantidade molar de composto orgânico utilizado no passo a), a actividade de ligação ao receptor sigma do composto orgânico.
0 invento também se relaciona com um método para determinar a relação entre o comportamento do género psicótico anormal num mamífero apresentando esse comportamento e a disfunção do receptor sigma, que compreende a administração a esse mamífero de uma quantidade moduiadora do receptor cerebral sigma de uma gu&nidina dissubstituída em N,N"solúvel na água que desloca in vitro a ligação de N,N'-di-í4-EwHl-2-metiIfenil>-gua-nidina è membrana cerebral de mamífero, eficaz para alterar a actividade mental modulada pelo receptor cerebral sigma desse animal. meio para se 1 ec t i v a.— o invento
Pelo presente invento proporciona-se um identificar compostos que se ligam competitivamente e mente ao sítio receptor sigma. Consequentemente,
proporciona compostas, composições farmacãuticas, e a utilização de alguns para o tratamento de psicoses, depressgDi| hipertensão ou. ansiedade» A ligaçao selwctiva ao receptor sigma tem particular valor na redução ou eliminação de efeitos, secundários eK.tra- pxramiuai^ iiidc^ej-ãveis s-ssocxado^· ás ρ r ^ .r ^ t s s medicações antipsicóticas»
Fo 3. das em N,N' substanc ia1mente
ainda descoberto que certas guan^rjinas são potentes ansioliticos, e mesmD não sedativas num modelo animal« A dissubstituí-tempo, são íssim. estas
X guanidinas dissuhstituidas em Μ 5 N' são úteis para o tratamento ou X orofilaxia da ansiedade em animais stc ·, em seres numanos»
Breve Descrição dos desenhos
Figura í è uma representação gráfica dos dados resultantes da administração subcutânea (s.c.) in vivo de diasepam sobre α comportamento do ratinho na caixa de teste pretoϊbranco„ r íaurs. teste preto í branco. uma repres en taç ão gr· , "á O w t i L > i. Π O vivo ds N a o compor {,. cf ίΤϊ cd Γí to do uma repres entaç ão gr :So s. 1 *“·» mi VIVO dS N- iça dos dados resul-/o de M— \ 2—meti I íenii >-N' - í ada- mantan-i-il>guanidina iAdTS> sobre α comportamento do ratinho na caixa de teste pretos branco„
Figura 4 é uma representação gráfica dos dados resultantes da administração oral in vivo de AdTS sobre o comportamento do ratinho na caixa de teste pretos branco >= tação gráfica dos dados resu.l--vo de N-(2-iodofeni1)-N'-< ada-e o comportamento do ratinho na
Figura 5 é uma represen tantes da administração s.c, in yj· mantan-1~i1)guan id ina (AdIpS Ϊ sobr caixa de teste preto;branco»
Figura uma representação gráfica dos dados resul tantes da administr —i1)~N'—C(E >—2—feni comportamento do ra ação s»c« in vivo ds N—( leteni13 feniIguanidina tinho na caixa de teste ,, 5-dimeti ladamantan-i· í F--114—S) sobre o r sto»branco«
— Zò ~
Figura 7 è uma rsρressntaç3a gráfica dos dados resultantes da administração s.c» in vivo de DTG sobre o comportamento do ratinho na caixa de teste pretos branco.
Figura 8 é uma representação gráfica dos dados resultantes da administração oral de N,N'-di-Cadamantan— i-il )gu.anidina e N-íadamantan-i-il)~N'-ío-iodofenilIguanidina, em comparação com controlos, sobre o comportamento do ratinho na caixa de teste preto s branco.·, j
Figura 9 é uma representação gráfica dos dados resultantes da administração s.c. in vivo de N-ciclohesíil-N'-ío— totil )- sobre o comportamento dc guanidina, em comparação co<S controlos, ratinho na caixa de teste pretosbr-anco.
Figura 1Θ é uma representação gráfica dos dados resultantes da administração s.c, in vivo de N--{±>endo-2--norbarnil)--N'-(2-iodofenilj-guanidina em comparação com controlos, sobre s comportamento da ratinho na caixa de teste pretosbraneo.
Figura íl ê uma representação gráfica dos dados resultantes da administração s.c. i_n vivo de N—<exo—2—norbornil>~N*— -í2-meti1feni1)-guanidina em comparação com controlos, sobre o comportamento do ratinho na caixa de teste pretos branco. F-i iqura 12 â uma representação gráfica dos dados resul tantes da administração s.c» in vivo de N-Cadamantan-l-il)—N' -~ci·· c1oheκi1guanidina em comparação com controlos, sobre o comportamento do ratinho na caixa de teste pretosbraneo.
Figura 13 è uma representação gráfica dos dados resul· tan te« ad m i n i s t r aç ão sral de N-ciclohe>;i 1 -N1 -(2-meti 1 fenii sguanidina em comparação com controlos H sobre o comportamento do ratinho na caixa de teste pretosbran· CDn
Figura 14 é uma representação gráfica, dos dados resultantes da administração oral de N~íC±>-enda-2~norbarnil~N'-<2-ia~ dofeniljguanidina em comparação com controlos, sobre o comportamento do ratinho na caixa de teste pretos branca.
Figura 15 é uma representação gráfica dos dados resultantes da administração oral de N-iexo-2~narharn.il)~N'-(2-mstil-fenil>~guanidina em comparação com controlos, sobre o comportamento do ratinho na caixa de teste pretos branco.
Figura 16 è uma representação gráfica dos dados resultantes da administração i.p. in vivo de W-í2-estirilfeniI>---M’ — í2— -iodofenilJguanidina em comparação com controlos, sobre o comportamento do ratinho na caixa de teste pretor.branco. dados rssul-s AdTS \pera
Figura 17 é uma representação gráfica do-tant.es da administração i.p. in vivo de diazepam comparação) no teste de interseção social do rato.
OgbLnçáo das Aoresent a c 3 e s P r e f e r i d a s
Descobrimos que as quanídinas dissuhstituídas dests ds I X i_’ ícvw ã.o p-SC :idade qa i _~· jptor sigma, tal invento apresentam activ.idade de 13—d i—orto—to1i1—guanidi— nsíN,M'-di-( C'-!H.í—2-metil fenil)— guanidinaC Γ.'~ΉΊ—DTB3 > que tem a fórmula CIV)s
IV
CH, CHj saturáve1mente,
Este composto liga-se reversívelmente se1sct ivaments receptor sigma da cobaia b c e com grande afinioade nos produtos homogeneis >rtes de cérebro de rato ao sitio de Ixqação ao sdos de membrana cerebral e de cobaia montados em I ϊΤί X D cí ?-t- « sítios. invento
Estabelecemos que í+l-E^HDS-PPP se liga aos mesmos A disponibilidade dos ligandos sigma selectivos deste facilita a caracterização dos receptores sigma in vivo e in vitro.
As guanidinas dissubstituidas em N,N'deste invento são as da Fórmula ÍI>:
NH n R-NH-C-NH-R' em que R e R" são cada um deles um grupo alquilo com pela menos 4 átomos de carbono ou grupos aril carbocíclicos com peio menos 6 átomos de carbono, por exemplo R e R" , que podem ser iguais ou. diferentes, são alquilo com 4 ou mais átomos de carbono, por exemplo com 4 a 12, de preferência um alquilo de cadeia linear e com maior preferência um grupo alquilo com 4 a 8 átomos de carbono, por exemplo, butilo, isobutilo, terc-hutiia, amilo, hexilo, octilo, nonilo e deciloj cicloalquilo de 3 a 12 átomos de carbono, por exemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclapentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, 1,4-metilsns-ciclohexanilo, adamanti-lo, norbornilo, isobornilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilmetilo. Λ
i~ ou 2~c i c 1 α hs x i 1 e t i. 1 o s I- ou 3~ciclohexi 1 propiIo\ •ilo. alcarilo ou aralquilocarbocíclico, por exemplo, de até 18 átomos de carbono e contendo í a 3 anéis aromáticos separados ou. conden sados, por exemplo fenilo, ben.ziíο·, Ι έ feníletilo, Ι ου 3-fenilpropilo; o-, m- ou p-tolilo, ffl,m'-dimetilfenilo, o-, m- ou ρ-etilfenilo„ βι,ικ' dietiifenilo, ov-meti 1 -o1 -eti 1 feni 1 o e o—propil-fenilo, nafta.ia5 2~naftila, bifenilo; e anéis heterocíclicos, por exemplo 3-, 4—, 5-, 6-, 7—, e 8-cumarinilo; 2~ e 4—piridilo, pirrolilo especialmente 2- e 3—W-metilpirrolilo5 pirrolidinilo, 2- e 3-furanilo, 2— e 3-iiofenilo, 2- e 3-benzofuranilo5 2-benzo-xazolxla, pirazinxlo^ pioerazxnixo, pir xmicíx lo, 2 5 -½ — e 3 txa.zo lilo, 2-, 4— e 5~oxazoi ilo, 2-, 4- e 5-imidazolilo, 2- e 3-indo- ..ilo, e 2-4-benzotiazolilo, tienilo, benzofuranilo e morfolino.
Adiei on a 1 men te, 1,23 afectam prejudicialmente a activ ou mais substituintes que não dade da porção guanidina dissubs— presentes em um ou ambos os seus por eKemplo, alquilo com 1 a 8 , metilo, etilo; hidronialquilo de , por eKemplo, cloro, bromo, iodo, fluoro; hidroxi; nitro; azido, cisno; isocianato; aminos alquilo inferior amino; di-alquila inferior amino;
tituída em N,, W' podem estar grupos hxdrocarbonetos κ e R átomos de carbono, por eKemplo 1 a 8 átomos de carbono; halo tri f1uorometilo; alcoxi com 1 a 8 átomos de carbono, por exemplo, aietoxi, etoxi e propaxi; aciloxi, por exemplo, alcanoiloxi de í a 8 átomos de carbono, por exemplo, acetoxi e benzoxis amido, por exemplo, acetamido, N~etilacetemido; carbamido, por exemplo, carbamilo, N—metilcarbamilD, N,hT—dimetilcarbamilo; etc,
Especialmente preferidos são compostos da Fórmula I em que R e R" são cada um deles ciclohexilo, norbornilo, admantan—1— —χϊο, adamantan-2-χlo, O—cumarinilo, ou grupos fenilo., -Esses grupos fenilo, que não precisam necessáriamente de ser idênticos, podem ser substituídos com um ou mais dos substituintes 9 por* exemplo na posição -o, :,4 OU 5,5, quand o o grupo feni i é âCjUX def xnxdo e R'· é adaman t 1 es em que R e R" são ambos í e R* á ρ—bromo—o —to li lo, p-CF-r
~lTí OU -~p uU Π-S pOSXÇÃG ÍC |J Í.v. o
Ia, a-ioda-fenilo, p-azido-a-talila, ciclohexila au admantilo; s R é fenilo e R' é p-bromo-o-tolilo, p-iodo~o-ioliIo, m-nitro-fe-nila au a-iado-fenilo.
As Quanidinas altamente activas deste invento tã'm substancialmente a mesma estsreoconfiguração que í+)3-PPP com fenilo axial e com SKF iΘ,©47 com o anel piperidina numa forma de barco oblíqua e N-alila axial* Esta similaridade na configuração espacial, isto é, tal como é demonstrado por modelo computuriza-do, de· compostos tendo actividade de Ligação ao receptor sigma proporciona uma técnica de análise para prever o nível provável da actividade de ligação ao receptor sigma de outras guanidinas dissubstituidas em N,N'. Pode ser utilizada modificação molecular auxiliada por computador para determinar a similaridade molecular de várias espécies em tr@s dimensões» r_\xsmp 1 OS- de u-ompo^tu/s que Toram xsaladu/s e/ou p*repara— dos e Que revelaram possuir a anteriormente referida actividade
’T de deslocamento de Γ'ΉΊΟΤΒ in vitro são N,N*—dibutilguanidina, N, N' ~d i f en i 1 guan id iria, N, N' -d i-o- to 1 i 1 guan id ina, N, N' -d i- (2—me~ ti Ί —4-bromo-fen i1)guanid ina, N,N'-di-(2~meti1-4—iodofeni1)guan i-d ina, N-< 2—meti1-az idofeni1)—N'-í2-meti1fen i1)guan id ina, N,N'—d ia· damanti1guan id ina, N—adamanti1—N— {2—meti 1feni1)guan idina, N-\2-iodofeni1)-N!-< 2-meti1fen i1)guanid ina, N-í 2-meti1-4-nifcrofe-nil — (2-meti If eni l) guanid ina, N,N'—di—í2,é>—dimetilfenil /guaní- dina, N— (2, é—dxmet x 1 f eni 1} —N' —N' — i 2—me til f eni I) guanid ina, N— (ada··* man til / · N — i c x c 1 ohex i 1) guan id ina, N , N' —di (c ic 1 ohexi I) guan id ina, N- (2-iQdofen.il )-N' -(adaman til) guanid ina.
N-<2-metilfenil 3~N' -ciclohexil-guanidina, N-adamantil-N' -fenilgua-nidina, N,N' ~di ím-n-prcpil fsnil )quanidina, N ,N* -di~( 1 -tetralinil 3-guanidina, N-(3,5~disst i 1 -1-adaman tani. 1 )-W' -<g~toli.l)guanidina» W-(3,5~ditnsti;í--i-ada<nantanil 3--N' •“(g-iodofenil )guanidina, N~< 1-ada-ma ti 3.) -N' -(g--n it.ro f enil) guanidina, M,N' —di (±}-enda-2-norbornil) ~ guanidina , N-- (sκο-Ξ-isoborri 1)-M' ~ < o-iodof eni 13guanidina, Η, N' - di-íexo-2-norbornilJguanidina, W-(exo~2~isabarnil>~Na-(g-tolil3-guanidina, N-Cg-iodofenil 3~N' -ít-butil) guan idina, N,, H! -dibensil-guanidina» N—(adamani-i-il>~N'-Cg-isopropilfeni1>-guan idina , N- C adama-n t- 1 - ΐ 13 -ím ’ -- 3 p~ br omo-g- to 111 > guan idina, N-<ciclohexil) ~U' -~ í g.-bromo-g-to I i 13 guan id ina , e N- < adaman t-2—i i 3 -N' - < g-iodof sn i 13 -guanidina.
De entre os compostos testados até à data, alguns dos que tftoi a actividade de ligação ao receptor sigma mais elevada são os da Fórmula 1 em que um de entre R e R' é adamantilo e o outro é também adamanti la ou fenila substituído em a. Assim, os compostos preferidos deste invento .incluem aqueles em que R e R' tem esses -valores, isto é, em que o outro de entre R e Fr é, por exemplo, o-alquilo inefrior fenilo, em que alquilo tem de 1 a 4 átomos de carbono, por exemplo, CH.T, Ο.-,Η^, i-C^i-U, o-halofenilo em que halo é Cl, Br, I ou F, o-nitro-o-smino, o-carbo-alcoxi inferior, por exemplo, CDOCH-,, α-amino, por exemplo, -CONH.-,,
I o-sulfato, o-carboxi, o-acilo, por exemplo, acetilo, o-CFf3s o-sulfamido e o-alcoxi inferior, por exemplo, o-metoxi, fenilo ou outro grupo fenila orto substituído por qualquer outro substituin— te com um peso molecular inferior a 15$.
Compostos de gunidina dissubstituída em N,N' especial-mente preferidos que apresentam elevada ligação ao receptor sigma incluem N™ < 2—iodof en i 13 —N" - (adaman t-1—i 1 > guan id ina < Ad Σ pG, I= 6,2 nM); N-f.g-toIil >~N"-íadamant-l-il 3guanidina <AdTS, ICc^ = 7,6 nM>? N,N*~d i~( adaman t-1.-11íguanitíina iDAG, XC50 = 16,5 nM); W-cic lohex i I ™N' - < 2—meti 1 f en i 13 -guan id ina (IC.-^ = 13 nH);
~il)-M'-ciclaheKilguanidina (IC^ = 12,5 nM); M-Cada-manfc-2-il )-N* ~C2~iodof0n.ll )guanidina í IC^ = 3,5 nM) ; M-Cadamant- N-Cadamant-Í 30 *CJ. barnil >~M*-\2-metilfenil )quanidina (ICr,-. -- /,9 nM); N-< <±)-endo·· -2-narbarnil)“M’-<2-fnetilfenil)quanidina = 6«0 nM); N-íexa- -2~narharn.il )~N*-(2~iodofen.ll Iguanidina < IC^ = 4,0 nM); Μ~<(±)~ -enda-2~narbarn.il )-N* -<2-iodofenil Iguanidina <Ιϋ^ 5,0 nM) ; nM) ? M— (o-to 1 i 1) -N' - í o-ioda·- i’4 , N ~di \ o to 11. i ) ousn idxna \ It- ~~tC\ feni 1)guan idina C K "'50 £ 'i. n M) s M , Μ Lx i—' < g-brosTiQ-g -meti Ifeni 1 )gua· nidina (IC 5Θ ~ 0 ’*T 1 / nM); N ,N‘ u í ατ P ΓΌ n *i i fenil )guanidina (IC — 0 *T - _ M); N- i a-tal X i ) -jvj' - { g -ni tra—g ___im mm m.ZmJ 1 i. 1)' guanid ina ’ *u5© nM); N,N' ~di -í 1 -tetra . i. XI •uDgua — £ ~S ! ! J.U ina < ICF, 0 = 58 nM >; N~ < G“ tal i 1 ) -N' - C g-55 i 1 x Dy uanidina í T p ’ 50 =2 70 nrt) 5 N ,N'-di — C 0— xilil ) guan i d in a < 1 Cr- 0 nM); N,i U’ -di-í c xc lahe>; X i ) qu an .idina < IC,, ts 0 1 nM) ; N- (3.-,5~dimetiladamantan~l“il )~N" -a-talil )quanidina < IC·.-,-. = 1b nM) s * — 7™i L-l 7j(A N-(3,5~diínetil“l-adamantanil )-N‘ -<g-iadofenil )guanidina (IC 16 nM) ; N-( 1-adamantil )-N' -ío-niferofenil )auanidina < ICW,-, . — - “çt4 50 nM > ; N, M' -d i- í (±) -enda-2-narhorn 11 > guan id ina < IC^.-,
N,M' —di-(exa-2-narbornil )guanj.dina (IC barnil>~N'--Ca-taixl)quanidina <IC -Ν' -C t-butil )quanidina í IC^.,, :ic^ D0 -isnidi na CI Ce·-^ [C50 e : 22 nM); N~ - 25 nM); N-í g- nM) ρ M, N' —d i ben 2
16 nM)s 18 nM); f Λ KJ ~~ jí X ’rx· O 9@ nM) | N-(adamant-i-iI)-N- ~(o-isaprapi 1 fenil Iguanidina = 24 nM); N-<adamant-i-i1 >-N'-í g-bromo-o-tolil Iguanidina CIC^ - 2,7 nM> ; N—{cxclohexilJ-N'-(g-broma-g-tolil>-guanidina í lCSí-3 - 5,5 nM); N-(4—asida--2~ms-ti 1 f snil )-M*-(2-metilfenil )guani-dina (10^. - 2Θ nM); N—í2-snetiI-4—nitro—5—bromofenil >-N* —<2—metil— -4,5-dibromofenil)guanidina; N,N'-di-(o-iodofsnil Jguanidina í IC^ 43 nM); N,M'-di-
iM) 5 N,N' ~di-<3“-iTiet..il fenil Jquanidina < ICS -íffl-etilfenil >-2-imino-iroida2olidina (Ϊ Cr_-Çi = 70 nM); N-<4-nitro-2--raetil feni 1 )~N‘ — í 2—metilfeni 1 )guanidina CIC^ = 37 nM); N-í 1-naf til ) -M"-í 2-iodafen11í guanid ina iIC^ = 4Θ,1 nM); N,N*-di-(4-indanil)gua- nidina -1-. 0 n 1 nM)
N—íadansantan—i—il)—N' -<2-trif luorometilfenil >quanidxna C 10,=..-. 7? 44 nM > ; P l·- (adman tan-i ~i 1) -~N' - í 2 "•meti 1 f en i 1) (IC5§ .,1? Izí nrl) ? jii~ C ad^EHi^ín ,_s.e ,-"1 ~il)~ Ν' -i.b-C \ 11, õvj - 21,9 nM); N—íCadamantan—í—i 1 > -N' “ V ^ 3 4“"d din-a lL'5fi B ? v2 r;M J ? s M~* C adamant an-1-11>-M'- luorofsnillauanidina Γ 4 nM> ,= t ri fIuororneti i - 0 nível de actividade em relação ao receptor sigma das guanidinas dissubstituídas pode também ser determinado in._vivo num teste de propriedades de estimulo discriminativo utilizando ratos treinados para discriminarem entre inj ecções intraperito-neais de ciclasocina C 2,, Q mg/kg) s de soluçSo salina num paradigma de acto de evitar num ensaio descontinuo com sessões de 2Θ ensaios cada» Por exemplo? ciclazocina foi completamente substituível por dítolilguanidina (DTO) e difenilquanidina (DPG) nas mesmas concentrações» íi-Ioltcman? S.B»? Emery University? fttlanta, Beorgia? comunicação privada).
Embora a discussão aqui a seguir de experimentações que se seguem se relacione com alguns destes 1igandos selectivos do receptor sigma? isto ê? as guanidinas dissubstituídas em N?M" do Quadro I roais abaixo,, a a.ciividade s a. utilidade desse composto aplica-ss de um modo comparável a outras guanidinas dissubstituí-das que competem coai e deslocam in vit.ro N?W' —di—(4~C"!H3-2-metil — fenil/-quanidina ligada in vitro a membrana isolada de cérebro de cosaia» por
Ao por em prática o método de medição da sctividade de ixgação aa receptor sigma deste inventa? uma quantidade conhecida de uma membrana de cérebro de mamífero, por exemplo, humano ou outro primata, porcino? roedor? por exemplo? rato ou cabaia? que tem sctividade de ligaçSo a SKF 1€>,Θ47 e a benzomorfan psicotomi-méticcf afim é feita contactar num veicula aquoso apropriado?
exemplo, solução salina fisiológica, com uma mistura, usual mente numa solução num veículo aquoso apropriado de Ci> uma guanidina dissubstituída em N,N''deste invento tenda actividade de ligação ao receptor sigma, numa quantidade capaz de ser completamente ligada à quantidade anteriorments referida de membrana e de Cii>
um composto orgânico solúvel na água cuja activids.de em relação ao receptor sigma vai ser ensaiada, em quantidades conhecidas, suficientemente variadas para se obter uma curva de dose—respos— ta. As técn icas para se > Liuter uma uur va dose—resposta são norma- 1i zadas e bem a mnecidas dos especial istas nesta técnica» Típica- sien te, podem—se utllizar q u a n t i d a d es molares variando de —zã. 1Φ a 10 ‘ da quantidade molar do composto marcado com tritio presente na mistura, por exemplo, utilizando de lã a 1 de 30 a 90 dessas misturas.
Se o composto orgânico a ser ensaiada apresenta activi— dade de ligação ao receptor sigma, uma porção do composto marcado com tritio que, na ausência do composto orgânico se iria ligar à membrana permanece não ligada e desse modo separável da membrana. A quantidade que permanece não ligada e proporcional ã ac ti vide, de de ligação ao receptor sigma do composto orgânico e a sua relação molar na mistura ao composto marcado com tritio*
Os concsntração dois compostos podem co 1 ec tiva conver* ien te, er utilizados em qualquer M-P *7 por exemplo, de 1Θ a iΘ'"'
No passo seguinte, a membrana é separada de e lavada atê ficar livre da solução na qual o passo (a) é conduzido. No passo seguinte, a quantidade de composto marcado com tritio que é assim separado da membrana é determinada, por exemplo, medindo o nível colectivo de radioactivida.de da. solução separada e da àaua de lavagem e comparando essa radioact.ivi.dade cora a obtida quando ν' -
mantidade de passos anteriores são conduzidos com a mesma m quanidina dissubstituida em N,N'marcada com tritio na ausência do comdosto orqân ico„
No passo sequinte do método, a a.c tivida.de de I igaqão ao receptor sigma do composto orgânico é determinada a partir da curva de resposta a dose assim obtida. preferidos os radiomarcadores de tritio. que possa ser substituído nas guanidinas do invento pode ser utilizado , por eMem- . 1 "-Γ1- 1 • “ET *“-Γ -T= τ - x T “ ~ * ÍJ A 5 N, e ^P.
Embora sej · qua 1 que'!·- radiom-srcad* dissu.bsti tuídas em N, N * da 14, 1 i „ p 1 U , L- ;
jH
Todos os passos anteriores são convencionais e tem sido utilizados em técnicas anteriores com outros tipos de compostos marcados com '"Ή tendo actividsde de ligação ao receptor sigma. 0 método deste invento é, contudo, único pelo facto das gu.anidinas dissubstituídas em M,M'" marcada·; :oai tritio deste invento serem aitamente seleetivas em relação à ligação aos receptores sigma e desse modo não irem competir com compostos orgânicos que se ligam a outros receptores cerebrais.
f r 1¾¾ j, 2 tí Γ Ώ mé todo d D aspecto de trata mento deste s? xempIo, tr S.X.S.' men to dS? um ser humano sof rende? de uma t 1 psicóti Γ .¾ ass ociada a siucin açSes, ou sofrendo de hi pertens ão ou an s iec: íade» a dministra- se-lhe uma rf X L. -:è. ΊΊ ú -rA unia gu anidin e. c íissubst ituída em N,M'so lú ívbI na água que apresenta uma elevada ligação ao receptor sigma, fto tratar psicoses, o composto é um antagonista em relação á activi--da.de de ligação ao receptor sigma de um benzomorfan alucinoqéni— co. De preferencia, a guanidina é um composto das Fórmulas I, III ου. IV em que R e Fí' são cada um deles um grupo alquilo com pelo menos 4 átomos de carbono, um grupo cicloalquilo de 3 a 12 átomos de carbono ou um grupo aril carbociclica com pelo menos 6 átomos de carbono. Num aspecto preferido, o ser humano é esquizofrénicos num outro aspecto preferido, o composto é N,M' -di~í 2~met.il fenil )~ —guanidina, hl-< adaman til )~H‘ -ícicloheKil )guanidina, M-adamantil--H' -(2-meti 1 f eni 1)guanidina, N- (1 -adaman ti I) -M' -< α-iodof eni. 1)gua-nidina, Π- '·, 2-adaman ti 1 )-N'-<o-iodofenil) guan id ina, N-cicloheKil-~N ‘ -í2-mefcilfenil) guan id ina , N,N' -d i - (c ic 1 o he x i 1} guan i d ina, Μ, M' —di— C 2-adaman ti 1 íguanidina, N,N' - d i - í m~ η - p r o o i 1 fenil íguanidi— na, M~iQ~tQl.il )-N'-(g-nitro-o-tolil íguanidina, N,N' --di--í 1-tetra-1ini1íguanidina, N~ío—ioli1Í-Ν'—ío—xili1íguanidina, N,N*—di~íQ~ -xilil íguanidina, N-í 3,5-dime til -adaman tan~i~.il Í-N' -<g~tolil íguanidina, N~í3,5~dimeti 1 adamantan-i--i 1 í~N' — ío— iodofen.il íguanidina, N-í 1-adamantil)—M'-<g--nitrofen.il íguanidina, í + > e í—íM-íexo-2-nor-borni1í ~N'~(2-iodofeni1í guan id ina, í +) e í-)-N-í endonorborni1í-N'--Co-tolilíguanidina, í + í e í-íN-íexonarbornil>-N'-ío-tolilíguani-dina, C + í s í — )N,N" -di í endonorborn!I íguanidina, {·*> e í-ÍN-íexo— isoborni.1) -N' ~ío-iodofeni.1 íguanidina, í+ 3 ε <-ÍN,N' -di-íexonor-bornilíguanidina, N-(o-iodofenilÍ-N'-ít-butilíguanidina, Η,M'~ -dibenziIguanid ina, M~ í adaman t-1-i1í-N"-í g-isopropi1feni1í guan i-dina, N-íadamant-í-il)—Ν'g-bromo-o-tolilíguanidina, N-íciclohe-κ i1)-N'-í β—bromo—o—toli1í guan id ina, M~ í adaman t—2—i1> —N'— í piodoíe— nilíguanidina, N,M'-di(o-metilbenzi1íguanidina, N,N*-dií1-adaman-tanemetil íguanidina, N-< adaman tan—1—il í —N' — <2-trif luorotnetilfe— nilí-guanidina, N-<adamantan-l-ilÍ--N'-í2,4-difluorometilfenilíguanidina, N-íadamant-1-il)~N"-í2-trifluarometilfenilí-guanidina, N-<adamant---l~.il í—N'-í2,4~dif luorometilfenil íguanidina, e N-íada-mantan-l-il Í-N' ~í2~tri.f luorometil-4-f luorofenil íguanidina; ou um composto correspondente apresentando 1,2,3 ou mais substituintes adicionais ou outros num ou em ambos os grupos hidrocarbonetos, por exemplo, alquilo com 1 a Θ átomos de carbono, por exemplo, metilo, efcilo; halo, por exemplo, cloro, bromo, iodo, fluoro? nitro? az ido? ciano? isocianato? amino? alquilo inferior amino? di-alquilo inferior amino? trifluorometilo? alcoxi com 1 a 8
ò / — átomos de carbono* por exemplo* metoxi, etoxi e propoxi; aciloxi, por exemplo, alcanoiloxi de 1 a 8 átomos de carbono, por exemplo, acetoxi e bensoilo; amido, por exemplo, acetamida, N-etilacetamidos carbamido, por exemplo, carbamilo, N— metiIcarbamilo, N,N' — -dimetil carbamilo; etc.
J
As guanidinas dissubstitu.ídss em N,H' , por exemplo das Fórmulas I, III e IV, podem actuar de um modo agonista, antagonista ou agonista inverso em relação aos benzomorfans protótipos de sigma. Pode—se assim esperar que os que actuam como antagonistas afectem o tamanho da pupila, a frequência cardíaca e a mente numa direcção oposta à causada por benzomorfans que pode ser determinada por testes normalizados em animais de laboratório. 0 tipo e o nível de actividade para uma determinada dosagem de cada composto podem ser convencionalmente determinados por experimentações de rotina usando protocolos farmacolégicos bem conhecidos para cada uma das actividadesp as correspondentes indicações que podem ser tratadas com essa dose são do conhecimento dos especialistas nesta técnica tendo como base resultados farmacológicos. Qs compostos deste invento sao particularmente importantes quanto á sua actividade antipsicótica para o tratamento de condiçSes psicóticas, por exemplo, esquizofrenia, por analogia com agentes conhecidos prolixina e haloperidol e para o diagnostico de situações de intoxicação dos receptores sigma» 0 invento relaciona—se também com a descoberta de que guanidinas dissubstituídas em Μ,N’apresentando uma elevada afinidade em relação ao receptor sigma sao ansiolíticas, e ao mesmo tempo, são substancialmente não sedativas num modelo animal= A expressão "elevada afinidade em relação ao receptor sigma” significa que o composto apresenta um ICC;,.- inferior a 1Θ& nM num ensaio de legação ao receptor sigma, de preferência em relação a ‘-'H-DTB tal como é apresentado nos exemplos mais abaixo. a AIternativaments, os compostos podem ser testados em relação (+>-l“Ή 33~~PPr tal como á descrito por Larqent, B„ L. , et al.. * iio 1 :oi. 52s772-7 84 (1987)? ia :ol. 155s 345” 347 (1988)5 e W )-2174 (Í987) « Os valores de nem .<
W W V. ri. W W pwt a f à i,CUyi.*.U CiH relação a '"'H-DTB e (-*->—t'“'H13-PPP são bem correlacionados. Ver Weber, E» et al, Proc. Natl. A ca d. Sei.___USA 85 a 8784-8783
Estas guanidinas dissuhstituídas em N,N" apresentam actividades ansiolíticas geralmente ίθθ-í.ôôô vezes superiores às das benzodiazepinas. Contudo, diferentemente das benzodiazepinas5 as guanidinas dissuhstituidas em N,N' utilizadas neste invento são não sedativas. Assim, estas guanidinas dissuhstituídas em N„hJ' são particularmente ata ir o tra taiTrisn tu uu privei ição da sn5iedatís em animais.
Trabalhos recentes pelos investigadores revelaram que as drogas activas em relação ao receptor sigma incluindo as diaril-guanidinas podem bloquear a libertação da acetilcolina induzida pela serotonina actuando nos receptores 5HT„ no plexo mientérico do íleo da cofoaia (Campbell et ai.. J,____Neurosei. 9;3380-339i (1989)). As drogas activas em relação ao receptor sigma actuam de um modo não compstitivo para bloquear a liberta— ção da acetilcolina estimulada pela. activaçSo do receptor 5HT. Trabalhos de certos autores revelaram que compostos que actuam como antagonistas competitivos nos receptores 58T-T apresentam actividade ansiolítica (Jones et al.a Br. J, Pharmacoi. 95;985-”993 (1988)>« Assim, os inventores concluíram que antagonistas não competitivos da libertação da acetilcolina induzida pelo receptor 5HT-. podem também ser ansiolíticos.. 0 invento indica que certas guanidinas dissubstituídas em M5N'activas em relação ao 39 -
receptor sigma apresentam na verdade uma potente actividads ansiolítica»
As guanidinas díssubstituídas constituem o objectivo da Patente dos E»U»A» No» 4„7@¥„Θ?4, cuja apresentação é aqui incorporada como referfncia» Como uma classe,, estes compostos são descritos nesta patente como apresentando uma. actividads de ligação altamente selectiva em relação ao receptor cerebral sigma»
Certos membros específicos desta classe de guanidinas dissubstituídas, isto é? as que demonstram uma elevada afinidade em relação ao receptor sigma? são úteis para o tratamento ou profilaxia da ansiedade .num indivíduo susceptível â ansiedade» Indivíduos suscaptíveis à ansiedade são os que sofreram uma série de episódios anteriores de 8AD» A actividade ansiolítica de qualquer guanidina particular dissuhstituída sí« N,N' pode ser determinada pela ut.ilicação de qualquer um dos modelos animais reconhecidos para a ansiedade,,
Um modelo preferido é descrito por Jones, B.J» et al., Br.___J.
Pharmacol» 93s985-993 (1988). Este modelo envolve a administração do composto em questão a ratinhos que apresentam um nível basal elevado de ansiedade» 0 teste é baseado no achado de que esses ratinhas aceitam com relutância a sua passagem de um meio ambiente escuro num quarto de teste escuro para uma área que é pintada de branco e intensamante iluminada» A caixa do teste tem dois compartimentos? um branco e intensamente iluminado e um preto e não iluminado» 0 ratinho tem acesso a ambos os compartimentos através de uma abertura ao nível do chão na divisória entre os dois compartimentos» Os ratinhos são colocados no centro da área .intensamen te iluminada. Após localização da abertura para a área escura os ratinhos são livres de andar de um lado para α outro ί 1 r
entre os dois compartimentos, us ratinhos de controla t'ê'm cia para passar unia maior parte do tempo no compartimento escuro» Quando se lhes administra um agente ansiolitico, os ratinhos gastam mais tempo explorando o compartimento mais novo intensa-mente iluminado e apresentam uma lat'ê'neia retardada para se deslocarem para o compartimento escuro» Além disso, os ratinhos tratados com o agente ansiaiitico apresentam mais acç-Bes compor-tamentais no compartimento branco» facto que é medido por empina— mentos e travessias da linha» Porque os ratinhos se podem habituar à situação do teste, devem ser sempre utilizados ratinhos ingénuos no teste» Podem ser medidos cinco parâmetros5 o período de latfncia para a entrada no compartimento escuro, o tempo gasto em cada érea, α número de transições entre os compartimentos, o número de linhas atravessadas em cada compartimento, e o número de empinamentos em cada compartimento» Como ê apresentado mais deta!nadamente mais abaixo nos exemplo, verificou-se que a administração de várias guanidinas dissubstituídas em N,N' resultou no facto do ratinho passar mais tempo na área maior, intensamente iluminada da câmara do teste» Ao contrário do diazepam, as guanidinas dissubstituídas em N,N" não provocaram diminuições significativas no número de travessias da linha e empinamentos» Assim, estas guanidinas dissubstituídas em N,N' — apresentam uma actividade ansiolitica potente, e ao mesmo tempo, não sedativa»
No modelo de exploração ansiolitica de um agente putativo luz/escuridão, & actividade pode ser identificada pelo aumento de números linha s empislamentos no compartimento iluminado à e empinamentos no com par-ratinhos de controlo» custa do número de travessias da linha imanto escuro, em comparação com os 41
Um segundo modelo animal preferido é o teste da interseção social dos ratos descrito por Janes, B.J. st al,, supra, em que se quantificai o tempo que os dois ratinhos gastam sm interseção social, A actividade ansiol£tica do agente putativo pode ser identificada pelo aumento no tempo que os pares de ratos machos gastam em interseção social (9Θ% dos comportamentos são de natureza investigatária) „ Tanto o teste da íam.iliaridada como o teste do nível de luz da arena podem ser manipulados. Ratos não drogados apresentam o nível mais elevado de interseção social quando a arena do teste é familiar e é pouco iluminada» A i ate raeção social dec1ina se a arena não for familiar aos ratos ou se for i1uminada com luz intensa. Os agentes ansiolíticos evitam este declínio. 0 nivel global da ac tividade motora pode também ser medido para permitir a detecção dos efeitos específicos da droga em relação aos comportamentos sociais,
Tal como foi indicada anteriormente, os compostos deste invento são úteis como agentes anti-hipertensores e podem ser usados do mesmo modo que agentes anti—hipertensores conhecidos, por exemplo, meti1dopa, tartrato de metoprolol e cloronidreto de hidralazina.
Tal como as guanidinas sm geral e específicamente a N,N'-difenil-guanidina, as guanidinas dissubsiituídas deste invento, incluindo as das Fórmulas I, III e IV, são aceleradores da vulcanização da borracha, por exemplo, de borrachas naturais e de borracha acrílica contendo grupo epoxi, e podem ser usadas para esse fim do mesmo modo que a N,N'—difenilquanidina» Assim •qr l'_’HIl-DTG pode ser incorporado num objecto de borracha vulcanizada., por exemplo, um piso de pneu, e a. taxa da perde de borracha do pneu pela é.gu.a pode ser monitorizada pela. ta.Ka de perde de radioactividade»
As guanidinas dissubstituídas em N,N'podem ser rápida-mente preparads por reacçSes químicas convencionais, por exemplo, quando R e F?' são iguais, por reacção da correspondente amina com brometo de cianogénic. Outros métodos que podem ser utilizados incluem a reacção de uma amina ou sal de amina com uma alquil ou aril cianamida pré formada. » Ver Safer, S , R,, et al», J , Orq._Chero« 13s924 <1948)» Este é o método de escolha, para s produção de quanidinas dissubstituídas em N,N' em que os su.bstituint.es não são idênticos» Para uma síntes recente de quanidinas não simétricas, ver B.J. Durant st al», J» Hed»__Chem» 28s1414 «1985), e C»A»
Harynoff et ai», J» Orq» Chem» 51;1882 (1888). São também incluídos no presente invento os novos compostos aqui apresentados assim como suas composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade eficaz da quanidina dissuhsti-tuída em N,Mr em combinação com um veículo farmacêuticamente aceitável«
As quanidinas dissubstituídas em ti,Ν' e as composições farmacêuticas do presente invento podem ser administradas par quaisquer meios que realizem a finalidade pretendida» Por exemplo, a administração pode ser feita por via parentérica, subcutânea f intravenosa, intramuscular, intra-peritoneal, transdermica ou bucal»A1ternativamente, ou concorrentemente, a administração pode ser feita pela via oral» A dosagem administrada irá depender da idade, saúde, e peso do recipiente, tipo de tratamento concorrente, se existir, frequência de tratamento, e a natureza do efeito desejado»
As composições no âmbito deste invento incluem todas as composições em que a guanidina dissubstituída em N,N'é contida numa quantidade que é eficaz para se atingir a finalidade pretendida» Embora as necessidades individuais variem, a determinação • '-S. ~ das variações óptimas das quantidades eficaces de cada componente pertence ao especialista nesta técnica, Tipicamente, os compostos podem ser administrados a mamíferos, por exemplo sares- humanos, oralmente numa dose de Φ,ΘΦ25 a 15 mg/kg, ou uma quantidade equivalente do seu sal farmac@uticamente aceitável, por dia do peso corporal do mamifero a ser tratado de psicose, depressão, hipertensão ou perturbações ansiosas, por exemplo, ansiedade generalizada, perturbações fóbices, perturbação compulsiva obsessiva, perturbação de pânico, e perturbações de stress pés-traumático. De preferencia, cerca de β,0l a cerca de 1-9 mg/kg é administrada oralmente para o tratamento ou prevenção dessas perturbações» Para injecção intramuscular, a dose é geralmente de cerca de metade da dose oral. Por exemplo, para tratamento ou prevenção da psicose ou ansiedade, uma dose intramuscular apropriada deverá variar entre cerca de β,ΘΘ25 e cerca de 15 mg/kg, e com a maior preferencia, entre cerca de θ,Θί e cerca de íΰ mq/kq. A unidade de dosagem oral pode compreender de cerca de 0,25 a cerca de 4Θ<δ mg, de preferencia de cerca, de 0,25 a cerca de 10Φ mg do composto, A unidade de dosagem pode ser administrada uma ou mais vezes por dia sob a forma de um ou mais comprimidos cuntendo cada u.m de cerca, de tí, us a cerca oe 000, convenxentemen— te de cerca, de €>,25 a 50 mg do composto ansiolitico ou de seus solvatos, do composto como um produto podem ser administrados coma contendo veículos farmacêu— empreendendo excipientes e
Para além da administração químico crú, os compostos da invento parte de uma preparação farmacêutica ticamente aceitáveis apropriados c auxiliares rações que p r e pa r aç Se nistradas que facilitam o processamento dos compostos em prepa— podem ser usadas farmacêu.ticamente» De prefe*rência, as s, particularmente as preparações que podem ser sdm.i-oralmente e que podem ser usadas para o tipo preferido da administração, tais como comprimidos, grageias a cápsulas.. stradas por via restai, luçoes apropriadas para contêm de cerca de ®?&i também preparaçSes que podem ser admin tais como supositórios, assim como s* administração por injecção ou oralmente cento de a 99 por cento, de preferência de cerca de €»,25 a 75 por compostoís/ activo<s), juntamente com o excipiente.
As preparações farmacêuticas do presente invento são produzidas de ura modo que é ele próprio conhecido, por exemplo por meio de processos convencionais de mistura, granulação, formação de grageias, dissolução ou liofilizaçâo. Assim, preparaçSes farmacêuticas para u.itilização oral podem ser obtidas combinando os compostos s tivamente moendo a raistur grSnulos, após adição de necessária, para se obter ctivos com eKcipient.es sólidos, faculta— a resultante e processando a mistura de auxiliares apropriados, se desejado ou comprimidos ou núcleos de grageias.
Excipientes apropriados são, em particular, agentes de enchimento tais coma sacarídeos, por exemplo lactose ou. sucrose, manitol ou sorbitol, preparaçSes de celulose e/ou fosfatos de ,1l1u. assim n 0 0 agentes de .ando, por e xemplo , amido de a-mi do de batata Qtí 1 cl fcifíci ? Opi1meti Ice 1u1ose , carbo xi- .1 pir ro 1 -i.dons« LíS desej a d 1-1 jj adie ionado s tai S COÍBO ;;Tibém amido de cat bo x x me t x lo» :ada, =-.g a = , ou &.C Í do algín ico •ÓdiO r. ΗΠ '4 1. j. x ares são, ac Xiiícl fluxo e lu brific an tes, por .CG OU seus sais. tais c OíãO e cà 1 c io , e/ OLf polietil eno S-ãO Cui*n '~í O.í i i. w y titvs UA S. U. ΪΤ A U J. UtSK JJ n.s.UF υί’νίμϊ metilcelulose de sódio, e/ou polivin: agentes de desintegração podem set amidas anteriormente mencionadas e ti poli vinil pirrolidona de ligação cru:·: adi ou um seu sal, tal como aiginato da de tudo, agentes de regulação do eKempxo, sílica, l-sIlu, á.cxdo este estearato de magnésio ou astearato glicol» Os núcleos das grageias são proporcionados revestimentos aqrooriac ;us Οϊ» yUSXS,
se desejado5 são resistentes podem ser usadas soluções ao suco gástrico. Para este fim·., saturadas de saearídeos, que podem arábica, talco, polivinil pirrolidona, polietileno glicol e/ou dióxido de titânio, soluçSes de laca e solventes- orgânicos apropriados ou misturas solventes. A fim de produzir revestimen- •icos, são usadas soluções de ís tais como ftalato de acetil-i i propi1meti1ce1u1ose. Agentes iicionados aos revestimentos de comprimidos ou grage.ias, por exemplo, para identificação ou a fim de ceracterizar combinações de doses de composto activo» tos resistentes aos sucos gá preparações de celulcs i-e apropri celulose ou ftalato de nxd corantes ou pigmentos podem ser dhter facultativamente qoma
Outras preparações farmacêuticas que podem ser oralmente incluem cápsulas próprias para. empurrar ("push— fit" > feitas de gelatina., assim como cápsulas seladas, moles feitas de gelatina e de um agente de plasticidade tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas push-fit podem conter os compostos activos sob a forma de grânulos que podem estar misturados com agentes de enchimento tais como lactose, agentes de ligaçlc amidos, ε/ou lubrificantes tais como talco oi magnésio s, facultativamente, estabilizadores, moles, os compostos- ac ti vos são de preferência suspensos em x.*á.quxdos aproprxados, taxs como o. res i lo tais como estearato de íâS Cé.pS- u 1 as sso1vi dos ou -S- gordos. ou. estabi1iz ado“ podem se r -itórios, que uma base para iS são, por supositórios» Bases para supositórios apropri.< exemplo, triglicéridos naturais ou sintéticos, ou hidrocarbonetos de parafina» Além disso, é também possível usar cápsulas de também 46 1
gelatina rectais que se ti vos com li íT- a osss. exemq 1 o 3 trig 1 icéridoí bon e tos d s pa r a í i n a. „ zonexetein numa comoi.na*-r*MQ doxa c'Ρ'·„γ.:>to·,;.
Ma ter: 1 i. Cl CA .1.0 O’;::· 5 do bci-.e possivísis inc Iuem * por pelistilena glie cãs ou hidroçar-
Formulações apropriadas para administração parsntèríca inc1uem soluções aquosas dos compostos activos sob uma forma solúvel na égua* por exemplo, sais solúveis na água. Além disso, suspensões dos compostos activos como suspensões apropriadas para injecção oleosa podem ser administradas. Solventes ou veículos lipofílicos apropriados incluem óleos gordos, por exemples, óleo de sésamo,; ou ésteres sintéticos de ácido gordo, por exemplo, oleato de etilo ou triglicéridos. Suspensões aquosas para injseção podem conter substancias que fazem aumentar a viscosidade da suspensão incluindo, por exemplo, carhoximetil celulose de sódio, sorbitol, e/ou dextrano. Facultativamente, a suspensão pode também conter estabilizadores. A caracterização dos receptores sigma in vitro tem sido difícil devida è. falta de ligandos selectivos da droga. A maior parte dos opiáceos benzomorfan apresentam rsaeção cruzada com outros receptores opioides (mu, delta, kappa) apresentando assim um valor limitado para a caracterização e isolamento dos receptores. Pasternsk et al., J. Pharmacol. Exo. Ther.__219;192-198
Mal. Pharm. 20s246-254 (1981) e (1981); Zukin, R.S.. et al.
Tam, S.W., Eur. 3,___Pharmacol. Í09s33-41 (1985). Γ~'Η30Τ8 liga-se específicamente e com elevada afinidade a uma única classe de sítios de ligação em membranas de cérebro de cobaias. As caracte— rístucas de ligação s os perfis de especificidade da droga destes sítios são concordantes com os propostos para o receptor sigma, xn-,_luinuo 1) ins-ens-i bi. 1 idade em rexacao ao naloxone e estereose— lectiv.idade em relação aos isómeros dextrorotatórios dos opiáceos uenzomorfan tais como ( — )SKr 10,84·/. ( + )ciciazocina e
C +} ρβπ tazocina j{ 2) elevada afinidade em relação ao haloperidal e certas drogas antipsícéticas fenotissinasp 3) estereoselectivida~ de em relação a <->butaclamol5 e 4) insensibilidade em relação à dopamina s apomorfina. l""’H3-DTG é um de apenas dois compostos conhecidos tritiados que s«to selectivos em relação ao sítio sigma» 0 outro, ( + ) Γ'Ή Ί3·--ΡΡΡ, originalmente proposto como sendo um agonista do autoreceptor da dopamina, revelou recentemente ser seleetivo em relação aos sítios sigma em ensaios de ligação aos sitias sigma em membranas do cérebro de rato» Largent et al», C1984 > supra» As nossas experimentações confirmam estes achados *·?* —p na cobaia. e revelam que l'"H3DTB e ( + ) C‘"'H.13-PPP apresentam carac-terísticas de ligação a.o receptor e perfis de selectividade da droga virtualmente idênticos» Estudos prévios revelaram que os sítios sigma podem também ser marcados com C +) l'~'H3SKF, ( + )Γ~'Η3-etilcetazocina e com <±> C'~sH3Si<F 1Θ5Θ47» Contudo, estes ligandos não são selectivos em relação ao sitio sigma e requrecn a presença de drogas apropriadas nos ensaios de ligação a fim de mascarar os sítios de ligação não—sigma com reaccão cruzada» ΓjDTB apresenta um certo número de vantagens como u.m 1 igando sigma» έ altamente selectxvo em relação ao sitio sigma. ( ipresen·- ao contrário de C '“Ή.1 SKF i 0 P 0 4*7 0 í + )C'~'H3stilcetazocina) ta um sisvad 0 g r a u de 1 ig 3Cr.iáo e s pe-ç í f i c a (9®—97¾ d. tot al) a tem Uffiã S“3· tru tura CfUiíTi ica re 1 a t x vamen te s x íb ρ n ão quiral { difs Γ0Π te de 0 piác eos i +)l"H33—PPP e dos ben zomorfan)» Est as c ar ac ter ísti cas fazem dele um bom 0 pâf" tida para Bí 3^.1 nte se de an á j. og os para estudos de est tiv idade e pa Γ3 O es boç 0 de liga ndo s -ao receptor sigma vai s \apôs f0 o. *«_ t 4 uu í. X * se) 5 por te' em pi 0 r. compostos das Fórmul· que pelo menos um de enir e R e R ' é aril carbociclio tMiSLBOS tuído çom azido» -^-48 V >
0 sitio sigma maracado com E~H3DTG é claramente não relacionado com receptores opioides convencionais (mu, delta, kappa) sendo também insensível ao naloxone e apresenta estereose-lect.ivi.dade em relação aos isémeros de;·;trorotatórias de drogas benzomorfan« Isto constitui uma estereoselectividade reversa em ι
comparação com receptorss opioides sensíveis a naloxone que são seiect.ivos em relação a isómeros levorotatórios de opiáceos» Ds receptores sigma não devem assim ser referidos como receptorss sigma "opioides" » A selectivida.de da droga dos si tios sigma para isémeros dextrorotatórias de opiáceos psicotomiméticos relaciona— -se, contudo, bem com o perfil farmacológico de opiáceos dextro-rotatórios versus levorotatèrios em testes animais realizados para fazer a diferenciação entre actividade do receptor opioide convencional a actividade sigma benzomorfan. Cowan, A», Life Sei» K«T»,j et a 1. „ Science 213.s 178-i8Θ Neuropharmaco 1« 2:31983-987 C1984) „ ícomportamental) das drogas 28s1559-1576 <1981); Brady, (1982)? e Khazan, N. s et al.
Estudos autoradiugí· ancas usando sitio sigma em secçSes de cérebro de roedor confirmam que os sitias sigma são diferente delta e kappa visto a distribuição da ligaçãi te diferente da distribuição dos receptorss
I í “Ή 3 DTG v i sua1i z am o montados em lâminas e s dos receptores mu, ο C “Ή3 DTS ser bastan— opioides mu, delta e de ligação C'"‘3DTG é, à distribuição dos ainda que os dois kappa.» A distribuição anatómica dos sítios contudo, muito semelhante se não idêntica sítios de ligação E°H33-PPP, confirmando radioligandos marcam sitias de ligação idênticos» A elevada afinidade do sítio de ligação :r!3DT8 em relação ao haloperidol e otiazina (QUADRu I) que são dopamina levanta a questão igma e os receptores D.7.» Os em relação a certos antipsicóticos fen também antagonistas do receptor E^. da quanto à relação entre os receptores s 'H3DT8 é claramente resultados apresentados revelam que o -~.i.ti».j distinto dos receptores da dopamina, visto a distribuição >
I
?,utoradioq rá f i ca do receptor dopamina ser diferente B porque dopamina? apomorfina e muitos outros Aiqandos ao^ ... . , . ... .-~Ή3.07Θ„ dopamina não interacfcuarem com o sxtxo de Ixgaç*o u a receptor da j.3|.|j0TO é estereo
Além disso? o sitio sigma marcado com .· -n--i-p*rso5electivi- selectivo em relação a i-JJutaclaraoi M·-'- « dade reversa em comparação com os receptores da F·· ··· ^ s'ão es tereosel ec ti vos em relação a \ + ) bs.tt.cicl amo 1«
Verificou-se que o sitio sigma, sensível ®sT! · «*<*ç«*d ->u r* *-**t_| “t η'ΤΛ „ .L u ... J jnir ^ â I 1Π Xtlddíí haioperidol nwârcado cont t H 3 iz- ^.pr tc* umá n«jufa» ^ # í-sp^Xfní^n em relação ao PCP potente aiucxnogenxco em e^H**" ” íy*" * concorrentes. Isto está de acordo com achados d& outros qu«; utilizam t + U^HDSKF 10,047, <±> E^mSKF 10,047 ou C±)-E "H33-PF1 ... . r- - _s i ao receptor para marcar os sítios sigma. Em ensaios de ligaçãu pr:p, contudo? Γ~Ή3·-Ρ0Ρ marcou predominar;temente íma^· ndu eKCiUsi- vamente) um sítio de ligação PCP insensível ao haluperiuul, denominado receptor de opiáceo PCP/sigma por Zukin e colegas, Zukin et al. (1981? 1986)? supra, que se separa dO sitio sigma sensível ao haioperidol marcado com CHIDTB ou ( + )CΉ33-ΡΡΡ. Pelo contrário, E"‘H3DTB parece marcar exclusivamente o sitio sigma sensível ao haioperidol? visto toda a ligação específica ser deslocávei por haioperidol e a distribuição anatómica d© ligação fVtJDTB é distinta da distribuição dos receptores PCP. Além disso? DTS não marcado é virtualmente inactivo num ensaio de ligação E'“’H3~PCP CS. Willliam Tam* E.l» DuPant De Nemours & Co.,
Wilminçton, Delaware, comunicação pessoal). Existe uma certa controvérsia em relação a qual dos dois sitios de ligação é responsável por causar os efeitos comportamentais de PCP © de opiáceos benzomorfans psicotomiméticos s corresponderia assim ao receptor sigma postulado por Martin et al. <1976)? supra. Zukin e os seus colaboradores argumentaram que os efeitos comportamentais tanto de PCP como dos opiáceos benzomorfan psicatomiméticos são
que é igualmente provável que os efeitos comportsmentais tando de PCP como dos opiáceos psicotomimétieos sejam mediados através do sitio sigma sensível ao haloperidol» Como L""ΉjDTB marca evídusi— vamente o sitio sigma sensível ao haloperidol e não interactua significativaments com o sitio PCP insensível ao haloperidol, estudos comportamentais usando DT8 ou outras guanidinas substituídas deste invento como 1igandos sigma prototípicoss tomando em consideração o facto de sarem aqonistas ou antagonistas (ver abaixo)3 deverá resolver esta questão.
mediados pelo sítio PCr insensí ve1 ao H-S1 o j3S r*. opiáceos ben zomor Tsn ligam com uma a finidade st al«, ( 1VSô)H suor a, citou evidfnoia cireuns
Talvez o aspecto mais importante dos achados sobre a especificidade da droga dos sítios sigma que emergiu deste e doutros estudos consista no facto deles interactuarem com certas drogas antipsicóticas muito potentes (haloperidol., fenotiazinas) que são usadas clinicaroente para o tratamento da esquizofrenia. Este intrigante perfil de selectivida.de em relação á droga facilita estudos que fêm como finalidade estudar o papel desempenhado pelos receptores sigma na seção da. droga antipsicótica e função cerebral anormal. A disponibilidade de DT8 e de guanidinas dissuhsiituídas em N?N'como ligando sigma selectivo deve servir para facilitar esses estudos.
Os compostos deste invento apresentam afinidade alta-mente selectiva em relação ao rsceptor sigma. Consequentemente, podem apresentar algumas das actividades dos benzomorfans, isto è? as produzidas por ligação ao rsceptor sigma sensível ao haloperidol mas- não em relação ás produzidas pela ligação de
Por enemplo., benzomor causando midríass e benzomorfans a outros receptores não sigma fans podem actuar nos receptores siqma taquicardia e efeitos tomiméticos acentuados. DT8 assxm um f
instrumento eficaz para demonstrar os efeitos fisiológicas mediados pelo receptor sigma os quais, até à data, tê'm sido obscurecidos pela reactividade cruzada de benzomorfans com receptores não-sigma»
Os compostos deste invento são particularmente importantes na tratamento de seres humanos atingidos por uma doença psicótica, por exemplo, esquizofrenia, ou com hipertensão crónica» Neste aspecto, podem ser utilizados substancialmente do mesmo modo que agentes antipsicóticos e agentes anti-hipertensores, respectivamente»
Sem posterior elaboração, pensa-se que qualquer especialista nesta técnica pode, usando a descrição anterior, utilizar o presente invento na sua capacidade máxima. As apresentações especificas preferidas que se sequem devem, assim, ser elaboradas com fins meramente ilustrativos, e não, de qualquer modo, limitativos da restante apresentação» Todo o texto de todas as aplicações, patentes e publicações, se existentes, citado anteriormente e mais abaixo é aqui incorporado coroo referência»
EXENPLOS que Stef seguem, todas as das graus Cel a ren t& 5 todas as partes e
Nos exemplos anteriores temperaturas são indicadas não cor não ser que indicado de um modo percentagens são em peso. P reparaçSes
Processos gerais» Os pontos de fusão são não corrigidos» os espectros de RMN foram registados num espectrómetro * 4 i
General Electric Ufc-3®©, operando a 30Θ MHz = Os desvios químicos C8> são indicados em ppm usando o sinal as protão residua] do solvente deuteradcs como refer@nc.ia íCHD„OD 83,300, CHUl^. 87,260, HDQ 84,= 80) ou o sinal "'“'C do solvente CCD^OD 849,,00¾ CDCI-T * .Js * *_ j >5'7750õ5,= Todos os solventes apresentavam qualidade de grau reagente» Guando foram necessários solventes secos, estes foram destilados a partir de Ca!-U ou Na antes da utilização»
Adamantan-í-ilcianamida foi preparada a partir da amina com brometo de cianogénio em Eto0, d esc r i to po r Ge 1 u k r, N»W,,, et ai », tal como foi préviamente » med» Unem» 12; 712—71 ô <1969)» (2-MetilfeniI )cianamida foi preparada de um modo seise-1han te»
Clorohidreto de Ν,Ν'-Di—íadamantan-í-ilJguanidina foi preparado de acordo com o processo de Seiuk et a3.»,, supra»
Exemplo í NH' -Di- (4~taromo-2--met i 1 f en i 1) -quanidina (4~Br~DT6) uma solução agitada brometo de cianogénio (846 mg, 8,06 mmol) em água destilada porções 2,997 g <16,11 mmol) recristalisado a partir de (70 ml) adicionou-se em de 4-bromo-2-metilanilina eter-pentano). Formou-se pequenas (Aldrich, durante a adição um durante 4 precipitado branco» A mistura foi agitada horas,, Após arrefecimento a Θ°C durante 12 a 80 °C horas» separou-se um óleo amarelo pegajoso aquosa transparente foi concentrada a pitado branco que se formou foi redis Esta foi então posta de lado a 4°C du. deu or igem a 43Φ mg da sólido branco di sso1 vida em 10 ml de água quente e que foi eliminado» A fase té cerca de 30 mi» 0 preci— solvido aquecendo a mistura» rante 12 horas» A filtração „ Uma porção de 2Θ@ mg foi tratada com 6 ml de solução de? KOH 10 N„ A mistura foi extraída, com CHCl^. e o extracto fai lavado com solução salina senda então seco (MgSO^) „ A evaporação do solvente deu origem a 171 mg de um sólido castanho que foi cristalizado a partir d e CHL-j d an d o origem a 4-Br-DTB sob a forma ri 0 agu1has brancas s ρ b f u 289 MHz, CD-JJD, TMS) 62,2 4 \ b· S{ O .· !$ / 1J A zl"™ f* ÍJ (AB, 2, < 12 5 IV (!·.úi'~) c*4ó^ g “ t 3348, 1638 cm HnáIise i C, 45,37 H, 3,815 N, 1Φ,5B * Encontr U T crx. * Kl 1 a *=ÍA Γ1 5 ·.-* α Ju , : Η , X :-J zj JV a J = 8 Hz) 120 mg (S%) de ~7 ~rnr .* 8 ·-.*·_/
Exemplo 2 Ι^Ήϊ-ΐΕΐΜ" -di—orto-tolil—quanidina (t’~'H3DT6)
Vinte e cinco mg (0,1 mmal) de 4-Br-DTG assim produzida foram submetidos a ftmersham Corporation (Arlington Hsights, 111«) para redução catalítica na presença de 28 Ci de gás-L ""'Hl, Duas porções mCI de produto ratíioactivo, crú, em 8,2 ml/cada de 25¾ de etanol foram purificados por cromatografia liquida de elevada psrformance ds fase reversa CRP-HPu) numa coluna de octa- decasí-lica Vydac TP218 usando gradiente de CB_,OH (8--35¾ em 68 minutos) em 831% ds ácido fluoroacético para eluição. A taxa de fluxo foi de 1 ml/min« Foram recolhidas fracções de um minuto. Porções aliquotas de fracções foram diluídas 188 vezes e porções aliquo-tas tis 18 μΐ das fracções diiuidas correspondendo a 8,1 μΐ das fracções originais foram dissolvidas em 18 ml de líquida de cintilação e contadas num espectrómetro de cintilação. 0 equipamento consistia em duas bambas de HPLC 2 Wsters, num controlador do g radi ente e I estr οΠ ÍCO -¾ utomático e num espec t r^f ry tónie -tr o ... Ufef CDfflp rime nto de onda V Γ* i, ck V 1 Kratos» A radioactiv idade elu ;iu. sob â f O riBs de um pico simétri C o principal coinc ::ídind o com um pi CQ de absc rrção UV (2 28 nm ) s i níé t r íco, pr i n c i pa 1 ac js 41 minuti CS « Es te á O HfS smo tempo de EHI Li '1. Ç ·:5 O Su qua Dltí não aiarc ado. aut .'i'n ti co, em@r ge d a col una istema HPLC RP. Veri f icou- q ue actividade específica de C'“Ή 1DTh era de 52 Ci/mmol tendo como base a quantidade de EjTS sob o pico de absorção UV principal tal como foi determinado por espectrofotometria UV e a quantidade de radioactividade associada a este pico tal como foi determinado por espectrometria de cintilação liquida quantitativa»
Seguindo este processo, sintéticas marcadas convencionais podem ser produzidas as versões guanidinas dissubstituidas em M,N do Quadro I, Se apenas um dos s material de partida apresentar um ou uma de entre outras técnicas bem conhecidas nesta técnica, marcadas com t ri tio de outras deste invento, por exemplo, as jrupos N e N' utilizados como grupo funcional convertlvel num dissubstituíds em M,N' 3e ambos apresentarei?? um i tu ida em IM,U’resu11ante grupo apresentando l'~H3, a guanidin resultante será marcada isoladamente * grupo funcional, a guanidina dissubs se râ po 1 i ma. rc ad a. E κ e i? ? ρ λ o N—(2-nati1-4—isotíocianatofanil - -ív --u- meti 1f eni 1?-guanidina___rpi-toi11-
Guanidina—Isotiocianato (DIG1T)j a
Clorohidreto de N guanidina e a faas-s 2---j??etí 1-4-ni trof eni 1 )-N' livre correspondente (2—meti 1™feni1)-
Uma nsmxda E1,10/ pelo método de -r? i t r oan i 1 i n a 3 horas sendo ama re i o c1 a r o mistura vigorosamente agitada de 2-meti1feni1-cia-g, 0,380 mmol, preparada a partir de o-toluidina Safter -et al. (1943)1 e clorohidreto de 2-n)etil-4- em clorobenzeno (45 ml) foi aqueci d. a a 90*C durante então deixada arrefecer C*. À-\J a 0 precipitado resultante foi recolhido. IÃVtídD com CH._C 1 _, e clorohidreto do produto 681 mg foi recristalizada para dar origem a ò&& mg de mic roc risiais amarelos seco, dando origem a 2,284 q <91%) do desejado (puro por RMN). Uma amostra de duas vezes a partir de EtOH absoluto (88%) do produto desejado sob a forma
apropriados para a reacçSo seguinte; p» f» 196-200; C CD-cOD, 300 nnz} o 2,oT <s, 3) 2,47 Cs, 3), 7,33- 7,40 (m, 4), 7,59 Cd, í), O 1 D ί r*rí 1 t: 1, O i ϋ ϋ i. ), 8,27 (d, 1). Uma amostra de 173 mg do clorohidreto foi dissolvida era 5© ml de água quente» filtrada, arrefecida até 25°5 e tratada com 5 ml ds Na.OH 5 N. 0 precipitado amarelo brilhante resultante do composto do titulo (base livre) foi seco (403 mg, 92%) s em seguida recristalizada duas vezes a partir de 95% de EtOH para dar origem á amostra analítica sob a farras de plaquetas amarelas; p.f. 177-179; CDC^OD, 30© MHz> S 2,31 (s, 6), 7,01-7,35 ím, 7,98 ídd, 1), 8,06 (d, i> = Análise calculada para Ο,,-Η >. ·. .·» i a SZ3 Η Π «Γ .4*^ τ?π u *f 1 ^ 3 ·-· · 9 Π|1 n, 5,41? N, 19,90, £>/ N. 19,71» Encontrados ; C,
Clorohidreto de N-C2-meti 1 -4~aminof eni 1 í -N' -(2~raeti 1 feni 1) quanidina
Um frasco de hidrogenação de Parr foi carregado com uma solução de clorohidreto de N-<2-metil~4-n.itrQfenil)—N' -2—< me til — feni1) -guanidina (478 mg) em 30 ml de EtOH absoluto» 30% de Pd sobre ca rvlo (71 i7»g) foi adicionado sendo então a mistura hidra- qenada 6Θ osi - rjcr “n*”' tó s-f - L- durante 12 horas» Todas as operações· posteriores foram realizadas sob uma atmosfera de Ar» A mistura foi cenirifugada, filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado in vácuo até 2 ml» Adicionou-se éter (21 rol) e apés 4
horas a 20°, o precipitado branco foi recolhido seco. dandí íriyem a 406 mg (78%) do composto do titulo íclorohidreto de smina) apropriado para a reacção seguint í CD-tOD , U: · 30Θ MHz) S 2,22 (s, 3), 2,34 e s» (d, 1), L· SÔ / -i :—Í !f t Sm/ \ U >2 i } rj / ij / b \ íTi K / e «_ e . 2Γ “{·*τ « et Λ P» T * ^ il'7 t[ —· ** s$ 6,ô© (dd , 1), 6,66
Clorahidreto de N-<2~metij
X β.Π -£A ’CO t ttH X X. -w ** - * *? metilfenil )quanidina (DIGIT)
NaOAc <1,767 g, 21,5 mmal) e r-iOAc {0,839 g, 14,0 mmal} foram di sso1vidos em MeOH seco de tal modo que o volume fina solução foi de 1Θ0 ml» i Jma porção a liques ta de 12,7 ml solução foi adicionada a 199 mg (0,686 mmol) de clorobidreto de N-(2-metil-4-aminofenil)-M' ·--<2-meti 1 feni 1 )guanidina sob uma atmosfera de Ar» Tiofosgénio (54,7 μΐ, 86,7 mg, '3,754 mmol, recentemente destilados) foi então injectada na mistura da reacção agitada, A reacçlp ficou completa após mistura tal como se concluiu por TL.U em gel de silica c003s 10©s 1, CHC1.7—MeuH—HQAc ), e a mistura foi concentrada xn vácuo
Adicionou-se -água (20 ml) até 19 ml»
Os passos seguintes foram realizados numa sucessão rápida a fira de minimizar a possível reacção do grupo xsotxocia- nato com o agrupamento base livre guanidina de outra molécula» 0 concentrado anterior de 19 ml foi arrefecido até Θ°s tratado com
NaBCO-, ficr ,, saturado arrefecido pelo gelo» A mistura resultan-o í. 1 o nu j te contendo um precipitado branco foi extraída com CHCl-, (4 u 15 ml)» Os extractos combinados foram lavados com solução salina arrefecida com gelo, secos íMgSO,,) , filtrados através de Celite, > até 0o» Em s =9QU ida , Q e KC o sso d0 Q -S S HC1 foi feito avé-s da 50 i uç So xnc o lo. 0 em seguida a soIlíç ão foi .Π V3CUO B.t.ê λΧ ·.»»* ml e ad i.c i. ΟΠ OU—S-& Π0 sano (2 0 ml)» ctu Xul ΟΠ δ X 5 a m ura foi oncen tra da de novo e ma i s he* :a.no« A eva por aq ão da mistura final ate a
Quatro brar deu origem ao clorohidr •eto crú sob a forma de UlTt só lido goffioso (2:63 mg, 115% >» Este foi misturado * com et anol to <2 ml), e di luido com éter (80 ml) para dar o r igem a uma suspensão branca turva a partir da qual pequenos tjrupos de agulhas brancas se tormaram em repouso» Os cristais foram
5,7 centrifugados, lavado-- coro éter <3 κ 5 rol), e secos, dando origem a 173 mg (76%) do composto do títulos p.f. 195—197°C (banho préaquecido) s CCu. _0D), 30© MHz) 8 2,347 (s, 3)? -ysr 1 ( -r- Ύ \ s ·«»**—’ X * J2 *j *«.*.» íj 7,23 (d, í), 7,31 is, 1), 7,34 (d, 1), 7,26-7,40 (m, 4)? IV (KBr) 3466, 3138, 2927, ·{ sr·-'·^ -~y -J -5 o í i/íí, X. X W 9} jL. XX/ π X W *Ί* U: sj —. i 1631 cm A» Rnà1ise ca1cu1ada pa r a C, H1 ,.TC l Η B s lo 1/ 4 C, 57,74? H, 5,15? N, 16,83. Encon t rados s C, 5 7,6® i H, 5,20 s N, 16,64»
Uma versão tri-tritiada de DIBIT é preparada começando com N~(2-meti1-4—aminofenil)—N'-í2—meti1fenil)—guanidina tritiada, que foi preparada por trifiação catalítica (Amersham) de N~(2~me~ ti 1 -4-n i tra-6—bromof en i 1) -N' - , Ξ-meti 1—4,6-d i bromof eni 1 > -guanid i— na» 0 composto a mi no tri-tritiado foi também usado como o precursor imediato para. a preparação da versão tritritiada do composto 4-azido cuja preparação é aqui a seguir descrita e que foi usado na solubilizacão de receptores siqma. hiifimplo 4 N—Adaman tan—1—i 1 —N" —ciclohex i 1 qusn id ina ·· HC1
Adamantan—1-il—cianamida (514 mg, 2,92 mmol), e cloro— hidreto de l. i.c 1 ohs;·; i 1 amina C 3V8 mg, 2,93 mmol) foram finaments moidos em conjunto, e aquc idos a durante 10 minutos. 0 — f *! i «4 — Í&OA J.O U VÍ ti rso resultante foi p lí i verx z-scJo = , e e;;traido duas vezes c OíTi 5$ rol de HC1 a 5% em ebulição. 0 material insolúvel foi 1 traao, ο·...o» z*4-o mg, p» f » 264-2 70 ° (p „ h.. b» 24Θ °C)» Ao arrefe er os extractos aquos os combinados a 26°C, formou-se cem precipi— .ado branco, e que foi separado por f i1 tração, 56 mg. Rendimento rú combi nados 44% . A C ristali zacão de uma smcst ra .~í u e 5© mg do >ro duto c rú a par tir Ji % J tf EtOH/E i .*n L. p |··~ η pare íonou agulh as brancas •*JíT mg, p . f. 2 68-2 71 ° € ( p. h.fo. 24©°), 1 i t. 268-26 V°C ). JH(CDT QD) r 1 ,208-Ί , 474 5H) 3 1,744 ( s, 9H) 3 1,96 / (s, 8Η ), 1 , 119 C5? ;h) , 3,43 4 í m, 1H) 9 1 3 r* w (CD-,0.0) í hsnd a. ampl a desa. cop: i — id da ) 25, cr cr *—5 w 3 :6, 26, 3© ,96, t?’*!** “7 : 3 ·* 4, 3 6? 74, 42, 73, 4 f
?mplo 5 W-Cic hexil-M' -"(2-metilfenil )suanidina
Uma. suspensão d e clor oh -ul j qf c $./ de ciclohe xi lamina ( 310 mg, 2 OC*« H X.W mmo 1) e (2-met :L1 fenil>c .1<3 namida < 3 65 mg, A" J! 76 minol) em Cloro bens eno seco foi aq uecida & i •iLU'” 1 s* itr Ϊ-* durant ?n 4 horas» 0 so1ven te foi evaporado in vacuo com aquec imento, e Q resíduo foi divid ido entre 0Η.-,0.1.-ν e 0x8 ml 10% Hl; •i Ob oxtr* &C tos aquo SOS toram tor nados alealino 3 até pH 9- •? ? w 5 D p reciplt ?ãd o branco foi recol hido 3, pcr?S repouso a 4*C dur &n te a no ite „ Duas recristaliz Ztr* — Ses a par tir d e EtOH/K-j 0 deram or igem a 140 mg (22 % ) de agul f-.t - branc crlbj tj p»f» 145-146 ° p 1H (C D.-. OD) 5 1,1 49—2,05 Cm, i 0 H) , λ™' η I £/'4· í B ,i 354 > , 3?5Θ (m, H), ò, 8 (d, 1H Jf J rt w Hz ), 6,968 (t, 1H, J - 7 ,5 Hz >, 7,118 (t , 1H, J = 7,5 Hz }, WM) ^ M, « d, ÍH, J = 7,5 Hz) » Anal « ust 1c.» para Γ Η M 14 21 3 u « e, 72, 6V § H, 9, 15 ; Μ, 18, 1 ά « Encon trad 05 S C ç- -'l f. £· 3 u t ? « 9,24? iM, •í o ·? o JL Lf tj λ Q tt Exemo I o ò N- ( Adamantan -1 -i1)~N' -( 2—meti 1 fen .11) quan ;id ina
160-161 *H (CD_OD) δ í ,742 ( Wj. r ÒH ) r 2e 03'íí f rf íw ,1 o 4 \ 2,©29 (s, : 3H >, 6,956 \ j « 1 H, *7 u = 8,1 Hz), 7 ,056 ít, 1H, 3 = 8,1 Hz) , 7,168 <t, 1H, J =s 7 ,5- Hz) 3 7,213 (d, 1H !, J = 7,5 Hz) . Anal. Ca 1 c. , para C18H25W3s c3 ~r c. oo * W « Jf 1 H, 8,89? i\i, 1 4,83„ Encon trados s C, o pi. « l{ ww tf « -.·*; *í /? i» tf l 'i 5 4. i ij Uv n
Uma suspensão ds adamantan~l~iIcianamida CI51 mg, ©,857 mmol) e clorohidreto de o-fcoluidina (186 mg, ©,857 fíunol) em clorobenzeno seco foi aquecida entre 1©0“130OC durante 4,5 horas» 0 clorobenzeno foi evaporado in vacuo com aquecimento a o resíduo (285 mg) foi misturada com 18 ml de égua» Foi eliminado um material insolúvel, gomcso. Ao ajustar o extracto aquoso para pH 9-9,5, formou-se um precipitado (194 mg, 71%)» Duas recristaliza-çoss a partir de EtOH/H.-,Ο deram origem à amostra ana.lit.icaj p.f,
D 7 N-<Adamantan-1—il >-N' •iotiofenil )quanidina HC1
Sr* m 4 ml de EtOH, e -f ÇJt j[ tas pas sar ta < % *1 £ cm) envolvida tio fundo a ts? ao 1 Ull! in â SC tiv ada, e areia» 0 produto de dl lu i H o com 5 ml de Et .-,0 5 deix ado dif us ãO -1 __ Utó Et,-,G durante a no i te» As ί u; i Í Í4. S por f iltração por suc ÇãO , 4© mg ,
Adamantarv-i-ilcianamida (299 mg. 1,7Φ mmol) e clorohi-dreto de o~iodoan.il ina <433 mg, i, 7© miriol) foram finamente moidos em conjunto e aquecidos a 200° durante 10 minutos» 0 sólido vítrea preto resultante foi pulverizado, e recristalizado 5 vezes a partir de EtOH/Et.-,Ο» As agulhas ligeiramente azuis resultantes i ΒΘ iYsq ) foram dissolvidas repousar π uma •-s"? n__ .i. ·Ύ &. *C» A adiç ão de ou tros o m 1 de Et._, 0 p ropo rc ionou uma segun da co 1 hei ta < 31 mg) de ma ter í al i dtn tico » Re- ndim ©n to combi— naco s 2 17.» CD^O D) § 1,7' 79 < s, 6H), 2,090 { — 3 6H) .U- 3 164 f «s 3H) , 168 (t, 1H, 3 = g Hz >, 7 3 vsQO (d, 1 H 3 J _ Γ4 — *7 » í Hz ), 7 3 503 < t, 1 H _ ~t ,8 H z) , O ? w 5 0Θ4 < d, 1 H, J = 7,8 Hz
Exemplo 8 N— (2—Hst.il.—4—azido—fenil)— — <2—metilfenil íquanidina U 1 oruhí.dreto de N—(2—metilfenil )—N’ ~<2~mtítií“"4~aiiiiisotis·· nil) guani d i n a C112 mg, €5,3 41 íThTsc il) f D ram H-,0 j£. S 100 j.íl de HC il CumC « / i O ' «*· 3 *- mmol) » A num banho de g elo, Sf adie i onou" uma 50 ^ 3 ò 1 mmo 1 ) em 450 μΐ de Η.-,Ο» A mis fcun •w. m ΐΐΐ r ala. e foi agi. i :.ada dur ao te 43 0fÍO UtO: ia reacçao tornou-se mtes de se adicionar
MaN-? sólido (43 mg, €*,661 mmol/numa única porção» Depois de ser causada a 1 ibertação de N.-,, foi removido e eliminado um sólido ·&. espumoso <11 mg). Adicionou-se NaOH sólido (96 mg, 2,41 mmol), e o precipitado amarelo brilhante foi extraído com Et_0 <3 x 5 ml), A evaporação das camadas de Et?0 combinadas deu origem a um
-iscax ízaao a partir de EtOH/i-L-.O; RMN < CD-.-015 > $ 2, 279 í s, 3H) , 2,28< Hz, 8,4 Hz) , 6,914 íd, 1H, J : ί"Ί £~ ϊι / η 21 Hz 5 , ~7 Λ **T i /nlod- 7,229 <m, 4! òti5 5 fa ,tí&4 (ddj in, J — Hz), 7,Θ55 (td, 1H, J = 2 ? 41,8
EksíííP 1 d _9 H— (2—Meti I —4^-n i t r o—6·· br PtTsof en .11) — N' — (9—me t i1—4, fe— dibromofenil)guanidina N-(2-Met i1-4~ni trof sni1)-M'~<2—metilfenil)guan i d i n a, sob a. forma de base livre <281 mg, Θ, 987 mmol) foi dissolvida, em 4 ml de MeOH, e arrefecida num banho de gelo., N—bromosuccinimida <recristalizada recentemente a partir de H,-0) <531 rog, 2,98 mmol) foi adicionada em duas porções durante 15 minutos. Após 1,5 horas a mistura da reacção lamacenta castanha foi diluida com 4 ml de MeOH, e deixada aquecer até 25°G, Separaou-se por filtração um sólido castanho <266 mg), que cristalizou a partir de acetona/H^O para proporcionar agulhas castanhas (2,6 mg, 42%, p„f, 193-195°C) A sublimação de uma amostra de 56- mg destes cristais a ®,θ 1 mm Hg e 17è* proporcionou a amostra analítica sob a forma de sólido amo rfo ama rei o brilhante <38 mg, p„t 2,357 <s, 3H) , 2,4csU \ S , *3ri } ? f , 444 < d, 1H; J = 1,8 Hz), 8,033 (d, !H, H2 ) * Anal, Cale» para 715νι:,:Βγ._Ν4 n » .'“O ·’ C, í, 1H, J = 1,5 Hz) 1 Hz), 8,261 En c. on t r ad os s C, 34,64; H, 2,47; N, 10,65. Exemplo 1Θ Μ,N*-Bis<2-iodofeni1)quanidina <G , /, 669 1H. 2,4 N. 1&,75, orne tu de c i an og ên i o <4,4· 042 g, *.·* *m>*w g ib< ;8 g. 18., 9 mm o 1) em Η,-JJ <70 ml) foi 5 ha ras. A mistura da reacção foi lido e s b r a n q u i c a d o <1,90 g) que foi .an te foi aquecida á mesma tempera tura Ao arrefecer até 25°C, o composto do
Uma solução de br ffliTiO 1) e 2-iodoan i 1 ina <4,13 aquecida a 7Θ--8Θ°C durante decantada a partir de um só eliminado, e o produto flutu durante 16 horas adicionais» título precipitou, a brofflohidrsto e foi partir da solução sob a forma do seu. sal separado por centrifugação, e seco (5&0 mg;l i.0%), Este produto branco foi dissolvido em H._,0 em ebulição, e adicionou-se NaQH 5 N <2 ml) à solução transparente# Q precipitado branco resultante (29Θ mg) foi lavado com H._,0 <3 κ 4 ml), e cristalizado a partir de 95% de EtOH, para dar origem ao composto do titulo <119 mq, 39% a partir do sal bromohidreto) sob a forma
Uma posterior crista de agulhas brancas longass pf,= i /. 4 _____ -i f *~i ;~js~ lização proporcionou a amostra analíticas p.f, Iòl“-:162°C, Anal, 1c, par a c13nun T τι '7*7 * ·*- | N, 2 5 3V *» N, 9,0/, tncontrados , 80 ? m *7* ntjU« 1 Ί ^ Δ. I| J—t—· t| M, 8,78. ‘H RM N Q & 6,7 90 < t, 3 - 7,8 Hz, 2H) 3Θ4 <t. 3 -- 738 Hz, 2H), 7,506 < d , 3 = 7 ,8 Hz, 2H) , 7,817 < d, 7,8 Hz, ΞΗ)B IV: ’7··**(Γί ”Ttr“Τ' 4 Λ i *·? /i7? /«JO3 5 1502 1 O 2 7, 1613, 1647, 3056 -i & / cm b<emplo 11 N, N' -Et -meti 1 fen i 1) guan id ina
Brometo de cianogénio <788 mg, 7,44 mmoi) foi colocado num i râisCu de fundo redond' .«4 -a jío sul, e adicionou-se m—tolui d ma <1,8v g, 17,6 (ήπιοί) gota a QO'C a. Depois da reacção exoiérmics ter diminuído, α resídua foi íti X 5 turado com CH_L-1< 20 m 15, e foi extraído com 5% de HCI <5 X 1 0 ml). Os extractos aquosas f oram ajustados par a pH 10 com NaQH 6 N» 0 pre c ipi tado resu1tante <674 mg, 38%) foi separado por fil tração e cri sta1i zado a par ti r de 1Θ5~106°Ο» H RMN5 δ 2,289 (s, Hz), 6,939 <d, 2H, 3 = 7,5 Hz), 6,981 7,5 Hz), Anal, Cale, para C._Hfl7W^:
EtuH/hLJj sara dar origem ao composto do titulo <240 mq, 14%) sob ^ ~ ‘ 1 a forma de agulhas brancas: p.f, --------1 ff11: N, òH), 6,814 <d, íiH, 3 = ís, 2H>, 7.. 141 (t. 2H, C, 75,285 H, 7,165 N, 17,56, Encontrados: C, 75,4:1 i
Rg f grdnc ί -5.¾ tieluk, H»W» 5 et a1», J a HSfCí * l Jhem» 12;712 <1969), *7 Kassrinova, 1 vi.F. , et a.l», Zn» Anal » Khim» 28í1853 U973) ? L-hem»
Abstr, 8Φs97021 (1973),
êiK &ΠιΡ .1Q ím * n
-tol X • x m x n o-x mx dasoixna Síntese de N,N'DitoliI oxalodiamida : mmol) sm cloreto d a metileno τ ΐΰ •5. U.ÍIK9. soluç3o de o— toluidina ί 67 Jk f|* %_ y durante um periodo de 10 iuir a exotermia, a solução foi
Clorato de oxaliio ml) foi adicionado gota a got-; mmol) em cloreto de metileno minutos a 4°C» Depois de diminuir removida do banho ds gelo s agitada à temperatura ambiente durante 2 horas» Formou-se um precipitado branco» 0 precipitada foi separado por filtração,. e verificou-se que o seu peso era ds 724,6 mq (90%). A amida e os sais hidrooxalato foram parcialmente
Cl X 3 solvid os em c loret D dfcf me tile n vj \ 2® mi) e extra idos com HCl 1M <5 x, 15 ml) » A suspe ns So for •3.nCs ΓΒ5 ult ante foi fi 1 tra dl 3 3 fim de pro porcionar um só 1 i do ar nco (61 /e j p. f. 1Θ3-1 04 °C \ « *H R MN í CD .yCN/DM SO) s 8 *7 *7 E?f O ai. i; ai. a i òH s)« / g i. 28- 7»6-05 C 8H,, m) B IV (KBr % a r n 129 8,,7,, 1 642 g 7 \ amida 1-¾ 5.5 a Síntese de N a N ' B Is tio 1 il eti 1 eno di a mi π a 0 pl" uCfcTssSO CjUfô 33* 3SÇ|Lltr? foi adapt ado de H»C» ! Ora» Chem. 3 8;912 (1978)» Diborano (5 mmol) em THF foi gota. a gota a. uma solução em THF de N ? N' Ditolil ox \ rXií.jj f, Vi Π {Q * 1 ,65 mmol) durante 10 m inutos a 0°C» Após 3Θ a mistura, da reacção foi deixada agitar à tens per a tu r a durante 6 huras» A solução fopi então submetida a refluxo durante 3 horas» A solução amarelada resultante foi deixada arrefecer até 9cr o •A.·—»· C, A oluçao fo i sn fio ac idi f ica.d a gota a gota COflí : 15% f Λ ( .tlJ ml > por me ia i de um f: uni 1 1 adi cional duran te 20 ! Ver if ic ou -••se uma liberta ç Io de gás e formou—se um pre< bra no o» 0 THF fo X então s epa rad O por destilação a w. tir i air avés d e rotoe va poração a 25 Γ: 2 Γ~5 água foi entã o to rnad- com um Ό X cesso d e IMaOH se ndo en t Io e Mtraida com é ter.» A c· agua éter foi lavada com solução salinaf sendo então seca sobre carbonato de potássio anidro» A camada de éter foi então concentrada até à secura para proporcionar um liquido castanha escuro» 0 líquido foi imediatamente misturado de novo com éter seco» Seguindo este processo, a solução foi tornada acídica por adição de HC1 etéreo <1© ml) gota a gota hariROU-se um 5= A1 ·; ri ido branco.
Este sélido foi imediatamente separado por filtração e dissolvido em etanoi (5 ml) e colocado numa cimsrs de difusão de éter» Após 2 dias, foram encontradas prismas brancos <3.58,1 mg, 30,6%), p.f. iiõS ϋ -'C» IV (KBr)s em comparacle •í IV ds diamida as bandas em Lítll 1643,8 e 1298,7 cm tinham desaparecido» c. Síntese de N»N' Bistolil-S-imino-imidacalina N,N'Bistolil etileno diamina (105,8 mg, 0,44 mmol) foi misturada com EtOH (3 ml) para proporcionar uma solução de cor púrpura clara» Esta solução foi então colocada num frasco de fundo redondo com um gargalo (Ξ5 ml) equipada com haste para agitar e condensador de refluKO» A esta solução, adicionou—se brometo da cianogânia <50 mg, '3,47' mmol) em etanoi <2 ml) numa única, porção» A mistura da reacção resultante foi agitada durante 1. hora» Verificou-se que a solução se tornou transparente» A solução foi então levada a refluKO e mantida a essa temperatura durante 16 horas» 0 condensador da refluMa foi então removida, deixando o solvente evaporar—se» A mistura da reacção foi então
condensada a í5«°C durante 30 minutos para proporcionar um sólido castanho» 0 sólido foi imediatamente misturado com etanol <4 ml) e colocado num tubo de centrifugação» A esta solução adicionou--se MãDH 1M (8 ml) para proporcionar um precipitado castanho-amarela-do "whispy”. Após várias tentativas sem sucesso para formar pílulas a partir do precipitado, a solução foi simplesmente extraia a. com clorofórmio (2Θ ml). 0 clorofórmio foi concentrado até à secura para proporcionar um óleo transparente ίί,ΘΘ,;! mg, 92,6%)»
Exemplo 13 Síntese de M~Ciclohsxii~N"-\2-metii-4-bromQ- f enil) qu arϊ i d i n a
Li m a s o 1 u ç ã d de bromo (0,336 g, 2,1 mmol ) em ácido acético glacial (1 ml) foi adicionada gota a gota a uma sí jlu.cao agitada de N—ciclohsx i 1 —M '-(2-metilfenil)guanidina \ 0,231 0 5 1 mrnol) em ácido acético glacial (2 mJ.) à temperatura ambiente» Depois da adição, o funil de adição foi substituído por um condensador de refluxo e a solução da reacção vermelha foi aquecida num banho de água um tanto quente a 70*0 durante cerca tie uma hora. A mistura da reacção foi deixada arrefecer até á temperatura ambiente sendo então vertida em água arrefecida com gelo (30 ml) contendo 2ΘΘ mg de bissulfito de sódio» A mistura foi então extraída com diclorometano (3 κ 15 ml) e as camadas
OfCIcill xces combinadas foram secas sobre das s con centradas para dar ori gsíTê a g)x Este 1 í q u i d o f o :L pu r i f i c ad o SijbrS luminosa para dar origem a um produt 09-91*0. ílfato de sódio, filtra-x liquido incolor (0,475 ?. coluna de gel de sílica íspumoso (0,25 g>, p.f» 1H RMN- (CDCLT)s S 7,4 (s, ÍH, Ar—3—H) p 7,32 <dd, 1H, . - 8,29 e 1,52 Hz, Ar-5-Η)$ 6,99 (d, ÍH, 3 = 8,34 Hz, Ar-6-Η) 2,22 (s, 3H~Ar-CH3) e 1,95-1,11 <m, 11H, ciclohexilo)» ϊ
Massa (Cl)*31®, 312 CM ),232 (M -Br). Εκemolo 14 Síntese de M-Cadamantan-l-il )-M'' -(2-trif 1 uqromet.i 1 -4-f1uorofeni1Jquanidina 1 -Adamanti 1cianamida - Um frasco de fundo redondo com tr‘ê‘s gargalos de vidro de 2 litros equipado com um agitador mecânico, termómetro e 25® ml de pressão igual içando o funil de adição foi carregado com 1-adamantanamina (72,25 g, ®,48 mol), éter etílico anidro Cl L.) e a solução foi arrefecida num banho de gelo CΘ-5CC) , 0 funil de adição foi car regado C Ofli 1 cianogénio ( o i. / , --- g , '·', o j. mol) em éter aparelho da reacção foi pur i f ic :ado ao longo da reacção * D brom: etu de cia a gota com agitação de modo a manter— a da reacção abaimo Ufcí H Op •J UK A adição leetpe- minutos e depois de ficar completa o banho de gelo foi removido e deisou-se a mistura da reacção atingir a temperatura ambiente. DeiKou—se a mistura da reacção a agitar durante a noite. A mistura da reacção foi filtrada (funil de vidro aglomerado) a fim D b r orno h i d r e t o de ad amant i1amina e o f in vac uo i tíuc h i Ro tovap RE 113.) a 1® torr par a proporc iona* o produto crú. 0 prod SfJI e tan o1 q uen te í 1 Θ® ml) e adicionou- -se á: < aspirador ri vAi—Sif da í2Θ0 ml, temperatura ambiente?) ou até ao ponto em que se observou turvaçSo» 0 frasco e conteúdos foram colocados no rif ic o d u r a n t e a noite» Os cri stais do pn s por filtração e secos ao ar duran te um C15 minutos)» í 3 produto foi então seco espaço de tempo secagem Abderhalden de grande capacidade à temperatura ambiente a í;í,l mrn durante 48 horas para proporcionar 46,«51 g de l—adamantiΙο x an amid a»
Qlorohid rs to.....de, _N~ladaman tan-1 -1l.i~N- (2-MíimmOjstilz
-4-fluorofenil)guanidina, Um frasco de fundo redondo com um sé gargalo de 5® ml foi carregado com clorobenseno (14 ml), clorahi-dreto de 2-tr.ifluorometil-4—fluoroanilina (L.M. Weinstock et al», t.st.π Lett» 1419 (1978)) <1,® g, 4,64 mrool) e 1-adamantilcianamida (6,82 q, 4,64 mffioi), 0 aparelho de reacçSo foi purificado com N„, e a reacção foi aquecida á temperatura de refluxo sob N._s? resultando em seguida uma soluçSo incolor transparente» Ao fim de alguns minutos, tinha~se formado um precipitado branco espesso. Após 4,5 horas, o manto de aquecimento foi removido e após arrefecxmento á temperatura ambiente adicionou-se éter dieiílico (30 ml) e o sólido hr3,nc:a (1,3 g) foi recolhido por filtração. Uma porção deste sólido branco (6,6 g) foi cristalisaoo a partir de iso-propanol e os cristais brancos resultantes foram filtrados e secos in vacuo a 1®®°C para dar origem ao produto do título (0,35 q), p.f. 2ó0~é í °C«
Anal, calc» para u,1 r^ (391,83) s C, 55,17? H,, 5,66? N, 16,72, Encontrados: C, 55,32? H, 5,58? W, 10,88 Síntese de N-(adafl>antan-l-il)-N,-(2-trifluoro- ffljgtil f en±11 a uap i d 1 n a)
Um frasco de fundo redondo com um único gargalo de 16® ml foi carregado com clorobensena (25 ml), clorohidreto de 6-ítrifluorometil)-anilina (preparada a partir da base livre, Aldrich, dissolvendo em 5% HCL em MeOH e concentrando, 5,93 g, 30,® fflmol) e 1-adamantilcianamida (5,29 g, 36,6 mmol), 0 aparelho de reacção foi purificado com N7 e a reacçSo foi aquecida à temperatura de refluxo sob 1-1.--= resultando em seguida uma solução incolor transparente» Após- alguns minutas tinha-se formado um precipitado branco espesso e acrescentaram-se
15 ml adicionais de clorobenzena a. fim de facilitar uma agitação ma is eficiente» Após 3 horas, o manto de aquecimento foi removido e depois de arrefecimento até à temperatura ambiente o sólido branco foi recolhido por filtração» Este material foi dissolvido em EtOH em ebulição, filtrado para remover os elementos insolú- a o t i 11 r a d o até ã I izrjti com o repouso foi reco IZtSulpSiPíStli LirS díilblSntB para d. :9-200 C = :alc« para r- u M rip w 4 ,**ti Ι.~Ί·"ϊ·ί ·!·η·ξ./ J. C i *3 .£.-1'* *_> „r (373 'nc.Dntrado — -_c | -j H,, 6,2; ãólido talisou com o repouso foi recolhido por fili e seco in vacua do titulo D.f, H, 57 S2 *
Eitemplo 16 Síntese de M-<adamantan-l-il)-N' —(2,4—dif litoro-fenil)quanidina
Um frasco de fundo redondo com um único gargalo de 1ΘΘ ml foi carregado com ciarobenzeno \2Θ ml), clorohidreto de 2,4-difluoroariilina (preparado a partir da base livre, Aldrich, dissolvendo em
Hui em MeOH concentrando, 2,® q, 12 mmol) l-adamantaniIcianamida (v, 13 g, 12 mmol). 0 aparelho de reaí-çao foi purificado com SM·,, e a i aquecida á temperatura de reTIukq sob resultando uma soluç So incolor ti ranspa.ren te» Ao fim de alguns minutos tinha·—se formado um precipitado branco espesso. Após 2 horas, o manto de aquecimento foi removido e após arrefecimento até è temperatura ambiente o sólido branco foi recolhido por filtração» Este material foi recristalizado duas vezes a partir do etanol e o sólido branco resultante foi seco in vacuo à temperatura ambiente para dar origem ao composto do título p„f, 258--26Θ °C „ ι Γ
Anal. Cale» para 6,495 N, 12,29» Encontrados C.^H^N^CIF^ <341,82) s C, 59,735 H. : C, 59,625 H, 6,445 N? 12,23»
Exemplo 17 Síntese da Μ,Ν'--Bis (5-atilf anil >~2—imino-imidacolina
Ν,,Η' <3-etilf enil )oxalodiam±da Cloreto de oxalilo <19 ffimol) em cloreto de metileno <16 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução de 3-etiIanilina <4© mraol) em cloreto de meti leno <4 ml) durante um período de 1© minutos a 4*C, depois da exotermia do banho de qeio e agitada a i m .1 í"í u .1 r, a so lUÇSQ foi removida :5*C durante 2 horas» A m i s t u r a d a 4© ml de CH.-,C1.-,» A solução de cloreto de meti leno foi lavadas por HCl aquoso (IN, 4© m1 x 2), NaOH aquoso <3%, 3© m1 x i ) ϊ e so1ução salina < 2© ml), seca e concentrada» 0 produto cru foi 1 a vad 0 c οπι CR-, C1 <1© ml) assi m como HCl aquoso < IN» 5-8 ml), e o precipitado foi recolhido por filtração e seco sob vácuo pa r a proporcionar um sólido branco M,N' -di<3~etiIfenil>-oxalodiamida com um rendimento de 55%. P»f» 131 °C5 RnN (6© MHc, CDC1-,>3 S í,2 <t, 6H) , 2,6 <q, 4H) , 6,8-7,6 <m, 8H) » IV <CH._,01o) = 169©, 152© cm"'1»
Ν,'Ν* —Bis— <5—etilfenil) etí 1 eno diamina Diborano <27,4 aunei, 27,4 ml, 1M) em THF foi adicionado gota a gota a uma solução de THF de N,N*-di—<3—etilfenilloxalodiamida <6,76 mmol, 2g> durante í © minutos a 0 C‘C» A pés 3© minutos, a mistura da reacç-ão foi submetida a refluxo durante 16 horas» A solução amarelada resultante foi A solução foi então acidificada 15 ml) durante 2© minutos; verifi— ϊ formou-se um precipitado branco» 0 THF foi então separado por destilação a partir da áqua através de deixada arrefecer até 25 adiciona ndo HCL aquoso <15' cou-ss a i Libertação de gás rotoevaporação a excesso 25 °C» de NaOH sendo A água foi então tornada básica com sntão extraída com CH,:,C 1 - „ A camada de
CH<-jCl0 foi carbonato de concentrada rendimento. 3,2 is? 4H), lavada com solução =.a 1 ins, sendo po t a £’»ÍO anidro. A camada de até 6y á secura a fins de proporcionar RMN (6Θ MHs, CDCl-,)s S 1,2 <t, 3-7?2 (m, 8H). IV COUCl„5> = 14
ent ão Seca sobre CH.-j CL-, foi en tão um s 1 eo Cum 6o/a de 6H) , x. ? 5 (q, 4H), . <.· 5 1600 —1 cm C
H,H’-Bis (5-etilfenil)—2-iminp-imidasolína N,N'—Bis <3—etilfe~ 2 ml) foi nil >· •.ç ·; i
eno riiamina (0,4 α, 1,49 mmoil em EtOH colocada num frasco de fundo redondo com um gargalo equipado com uma haste para agitação e condensador de refluxo, fí esta solução, adicionou-se brometo de eianogénio (17'4 mg, 1,64 mmol) numa única porção, A solução foi então levada até refluxo durante 15 horas.. Após a reacção, a mistura, foi concentrada e recristal izada em HeOH/éter para proporcionar um cristal branco com um rendimento de 54%. P.F. 155°C; lH RMN <3ββ MH; He, 6H>, 2,72 Cq, 3 - 7,6 Hz, 4H) , 8H). 13C RMN (300 MHz» CDCU)s 147Θ, 1550 cm . Análise elementars Calc.s C, 58,76; doss C, 59,14; H, 6,33; N, 10,85.
de cérebro ds cobaia CDu 1-.) s .·*« Λ * i , 25 (t , 3 = 7 , 6 •.. 36 <5, 4H} , 7,21 -7,39 í m, 08, Oh 47, 49,45 í 23* , 48.. 00 , 154 ,39. IV i CH _C 1 ) τζ 49; : Μ, 1Θ o-~* ^ U/ii B Encon tra- í de C3H 3DTG a membranas . tou num pro d-uto homog éneo A síntese de E°HJDTB re· puro com radioactivida.de tíe elevada especificidade (52 Ci/mmol). E°HXDTB liga-se específicamente, saturâvelmente, reversívelmente, e com elevada afinidade ã membrana do cérebro de cobaia. experimentação típica com l^í-uDTG ®,9 de contagem 5®%> a ligação total foi < ligação não especifica na presença de
Numa nl“ 1 <30. 0®0 cpm. eficiência CP 2.7ΘΘ cpm enqu ;anto que a Dl "8 10 μΜ ou de haloperidol i
iô μΜ foi de 5®-15© com
Como rotina5 o bse r vou --se uma ligação especifica de 90-9/¾ da ligação total, à temperatura ambiente a ligação de C'"'H'jOTi3 atingiu o equilíbrio após 60-9® minutos e
tornou-se completamente reversível após adição de DTS não marcado 10 μΜ. A ligação específica foi linear com concentração tissular entre 2-40 mg de tecido (peso de cérebro húmido de origem por tubo de ensaio), A ligação da radioactivida.de aos filtros de fibra de vidro na ausência de membranas foi de 10-20 cpm» A ebulição das membranas a i©©“rC durante 10 minutos antes do ensaio aboliu quase complatamente <90%) a ligação de C‘"H3DTG específica tal como aconteceu com o tratamento das membranas com tripsina e pronase (0,01 mg/ml durante 30 minutos à temperatura ambiente), indicando que os componentes proteicos eram importantes para a capacidade de ligação dos receptores.
Para determinar a ligação saturada de equilíbrio de E'“'H3BTB às membranas de cérebro ds cabaia, membranas preparadas tal como são aqui descritas foram incubadas com i"’H3DTS a várias concentrações de 0,3 nH a 90 nii em 1 ml de tampão Tris/HCl 5® nH, pH 7,4, durante Γ2Θ minutos à temperatura ambiente. Qs valores obtidos foram a média das determinações quadruplicadas.
I
Uma análise de Scatchard dos dados de saturação revela uma mancha Scatchard linear com um de 28 nM e um número más-cimo de sítios de ligação (Bmas<) de 85 pmol/g de tecido cerebral ípeso húmido de origem). A análise dos dados de ligação com o programa apropriado da curva LIBAÍMD, Munson, P.J., et al», An a 1. „ B inchem. 107s220-239 revelou elevada compatibilidade com um modelo de ligação a um sítio.
I -· 71 -
Exemplo 19 Ensaios da Liσa.uAy.ãjli4i-Í Cérebros congelados de cabaia <Pel-Freeze, Rogers, AK) foram homogeneizados em 10 volumes κρ/ν) de sucrose 0jC<2 M usando um homogeneizador Polytron» 0 produto homogeneizado foi feito girar a 9ΘΦ x g durante Í0 minutos a 4°C. 0 produto flutuante foi recolhido, e feito girar a 22-000 x g durante 20 minutos a 4°C. A pílula foi suspensa de novo em 10 volumes de tampão Tris/HCl 5Θ ftiM? pH 7,4, incubada a 37*C durante 3® minutos e feita girar de novo a 22.000 q durante 2® minutos a 4’-'C» A pílula foi sntão suspensa de novo em 10 volumes de tampão Tris/HL· 1 50 mH, pH 7,4 e porçoes aliquotas de 10 ml desta suspensão de membrana foram armazenadas congeladas a ~7€*°C atê serem usadas no ensaio de ligação» Não foram observados efeitos de armazenamento prolongado 03 meses) das membranas a —70‘-=C sobre o número de receptores *7 sigma ou afinidade para a ligação de t“H3DTB»
Para ensaios com radiureceptores porçses aliquotas de suspensão de membrana congelada foram descongeladas e diluídas dez vezes com tampão Tris/HCl 50 n.M, pH 7,4» A tubos da teste de pjolistireno ou vidro 12 x 75 mm foram adicionados Θ,8 ml de *7* "7* suspensão de membrana, 0,1 ml de C’"‘H3DT8 ou ( + > C°H33*~PPP para u.ma concentração final de 0,9 nM, e 0,1 ml de drogas não marcadas ou tampão» A concentração proteica no volume de incubação final de 1 ml foi de 8Θ0 pg, correspondendo a 32 mg de tecido cerebral (peso húmido de origem). Ligação não especifica foi definida corno a que permaneceu na presença de DTS 10 μ.ΙΊ ou da haloperidol para a ligação tanto de E0DH3DTB como de <·*·> E'~’33-PPP„ Após incubação durante 9Θ minutos à temperatura ambiente a suspensão de membrana foi filtrada rápidamente sob vácuo através ds filtros de fibra de vidro Wbatman 8F/B usando um recipiente para recolha de células Brandel 48 (Brande1, Saithersburg, MD>„ Os filtros foram lavados com 3 x 5 ml de tampão Tris 50 nM arrefecido pelo gelo (pH 7,4 à
temperatura ambiente). Os filtros foram dissolvidas em 1Θ rnl cada de Cytoscint CWestohem Productsf San Diego, CA) e a radioactivi-dade foi medida por espectrometria de cintilação liquida com um rendimento de contagem de 35~·5Θ%* Ds dados de saturação foram avaliados por análise Scatchard usando tanto EBDA NcPherson, 6.A.5 Computer Programs Biomed» 17;107-114 C1983>, como LIGAND Munsons P.J.? et a 1. Ana 1. Biochem. 1Θ7s220--2-39 (19S€í)? programas de análise de dados num Computador Pessoal AT IBM, Os valores de IC,--... foram determinados registando curvas de deslocamento em papel de gráfico semi logarítmico seguindo-se interpolação ou por adaptação computorizada de curvas de mínimos quadrados- não lineares ÍFisher, J»B,? et a 1J, Biol. Chem. 265;2008-281 & (1988)«
Utili zanrio d ens 31 o de an tcsr* i ormente, foi determi na da a to Γ 5 Í. .gma tendo como a ac ti' \ V a 1 ú í T r·- % ... μ- ra de s ( 1 h ) uLi ida em Ν5Μ''.1.η d x c a d os no Qu adro cada c omposto é re f e rido n O Quad ligação do radioligando descrito actividade de ligação ao recep-vidade de deslocamento de l"‘H3DT8 compostas de guanidina dissubsti-i ma is abai κ o. U valor I '-Ττ^ para ro I „
QUADRO
Composto Ϊ C_ vs Γ~'ΗϊΟ i B <nH > —--------------- N 3 M'' -d i-o- to 1 i 1 - guanidina ”7**7 1 M,, M-di-n—butil- guanidina 75Θ ± 37« N, N * —d i f en i 1 -gu-a nidina 397 + 2Í N, Ν' —dxadamantil y Xu Χί ί d 17 i. 3 n- sdamanti 1 -N' -2 -meti1f en i1-guan i d i na *7* ± 1 N, N'-d i-i2-meti1 -4-brDmofen i1)guan i din d* -í- 7 N- (2-iodofeni 13 ~ N'-í 2—meti1f eni 1> gu ani d ina 21 ± 1 u- \2-meti1-4-ni t rofsnil)-N'~ i2-meti 1 — feni1)guanid in •5 37 ± 5 n, N'-di-(2 ?6-d i metilfen i1)guan i d ina 9β ‘T 1 o N- (2,6-d i me t i1f en i1>~N'-(2-meti1fen il) - guanϊdina 7© ± "J· N- • (adaman ti1> ~M’ — icic1ohexi1)guan id ina 13 ·”? •ti. H, N' “dl (CXClohe;·; :il)guanxdina 71 ± ~7 N- • (2-iodofeni1)~ •N' - í adaman til) guan i din a 5 + 1 M— C2-metilfenil) -ÍM' - ( c i?" 1 ohex i 1) gua Π xd ina 17 ΠΓ N- • (2—meti1-4-azi dofeni1>-N'-(2-meti 1- f sn i1> g u an i d i n ia 2Θ ± * 1 N- • <2-metx1fen i13 -N'-í 4-amino—2-meti 1 *f*.cs n x 13 — guanidina 2S0 ± 14
Verificou-se que cator pcts.n capac tss dos receptores s idade para deslocar se destes compostos eram ligar 1 como foi determinado pela dos receptores sigma dos prc tos de o com homogeneização do cérebro de cabaia, sendo o mais ssto N—í2—metilfenil)—N’ — í adamantan—1 — il >gu.anidina poth ndos sua sdu— ?n te com um
I C.-E 2,6 ± 0,6 nM (n=6)
Numa segunda série seleccionados foram testados em de experimentações, compostos -mg· M)> relacSo a Γ~'Η1ΜΚ-801 e C^HjDTS,,
Os resultados indicados no Quadro '11 são os seguintes ínM) s
Quadro II I u-s·- vs.
Nome químico i"”H jDTB [ jHK-B’31 (N-<1-Ma f t i1)~N'-i2-iodofeni 13 ~ guanidina 40,1 ± 7,3(43 209 ± 50(43 N~< C-iclohexi 1) ~N' - < 4-bromo—2— me t i1feni13 guan id i na 4,67 ± 1,04(4) 23860 ± 8540( N,N'-Di-(4-indani1)guanidina 28,5 ± 7,5(3) 506 £ 99(23 N-(Adamanian-1-i1)—N1-( 2-tri-fluorometilfenil3guanidina 7,44 £ 0,56(3) Ξ310Θ ± 1310Θ C N-(Adamantan-l-il)-M"-{2-metil-fen i13-N'—meti1-guan id ina 22,6 £ 1,9(43 nâo feitos N- i Adaman tan- í -i 1) --N' - < ò~~ cxunaí^xri x 1) cju.an x d ina 21,9 £ 0,7(4) >10.000(23 N (fíQamantan i il) hl —^0— cumarinil)guanidina 43,9 £ 2,0(43 6.700(13 N-(Ad amantan—i~il)---M' — (2,4-d i f1uoro fen i1)guan id ina 8,92 £ &,48(43 >1& « 000(13 N~ ( Ad aman t an-i—i1)—M' — (2— trifluorometi 1-4-fluoro-f en i1)guan i d i n a 4,27 ± 0,45(43 31.900(13 t- , L ss . e. m« >; n) 3
£.;<gis;p 1 u _20 Especificidade da Droga em relação á ».· 3. L{ 1¾ C tf. Q Q © deslocamento foram realizadas com ligandos sigma t ípicosji assim como » sendo ligandos prototípicos parai neuromoduIadores, Q receptores de vs L-HJDTG e VS E3H33—PPP são droga» Os resultados de ICc,s v/v! indicados no Quadro III mais abaixo» Estas experimentações *?* revelaram que o sítio de ligação de Ϊ'"Ή3DTG é estereoselectivo em relação a opiáceos benzomorfan dextrorotatórios e em relação a C-)butac 1 amo 1 ξ não intercatua significativainente com drogas que apresentam elevadas afinidades em relação à acetilcolina, faenso-diasepina, GABA, nem com receptores de opioides mu, delta ou. kappas; apresenta uma elevada afinidade em relação ao haloperidol e a várias drogas pertencendo a classe fenotiazina de antipsicó--ticos (o haloperidol apresenta a mais elevada potência de de=slo~ cansento de todas as drogas testadas) ? e apresenta uma moderada afmxaade em reiaçao a varias outras classes de drogas psicoacti-vass que incluem vários antidepressivos f.ricic 1 icos„ POP, e o ligando ao receptor opioids kappa U5®? 488H»
GíUhíJKU i i i
V3, IC - vs h0 C^HjDTS <n!1) C -f- > C “Ή 3 3-PP! Droga C ±SEM) < ± SEM) Ha. I oporido 1 5 ± θ,3 17 ± 1 DTB 28 i' X 53 4· 53 Perfenazina 42 ± 10 21 ± 3 (+) Psn t a z oc. i n a 43 ± 2 p« + 3 (~) Pen ta z oc i n a 135 ± 3 81 ± 1 < ±) Pen t a z oc i n a 69 ± i MD (+)3—ppp 76 ± 4 35 + | o •m X .U. (-)3—ppp 280 ± 21 235 i. 60 C +)Cic1azoe ina 365 ± 25 47 ± 12 (“) C i c 1 a z oc. i n a 2.6Φ0 ± 210 1.000 + 0 Espiperona 690 ± 21 ND (-)Butaciamo1 530 ± 49 183 ·£· C.” <+)Butaclamai 2» i 50 ± 250 2.1Θ0 ± 71 (+)SKF 10,047 é>25 t 80 93 ± 5 í-)SKF 10,047 4.000 ± 566 2.850 ± 390 PCP 1.050 ± 106 1.000 ± 71 U50,4SSH 1.350 ± 106 ND Tr i f1uoperaz ina 345 ± 4 MD T ri f1uopromaz ina uvuí X O/ ND CIorpromaz ína i «475 ± 265 ND Amitriptilina 300 ± 7 ND IΜ í d r ara .1 n a 52Θ ± 14 ND Desipramina 4.000 ± 566 ND Mortriptilina 2.Φ00 ± 640 ND Suanabenz 4,600 ± 283 ND Clonidina y- 1 (A a 0Í10 MD Cocaína >10.000 ND ín« 77 IC. -.-. ê i'K>
.ν. a concentração melar da droga necessária para produzir imo de l'~’HjDTG dos receptores da. potência de ligação ao terminada
As ΙΟ-,., anteriormente referidas representam a média de 5¾
metade do deslocamento màx Esta é uma medição directa sigma da droga» ND = não de sigma. receptor 2 a 4 experimentações separadas (em triplicado)» Os compostos que se seguem não causaram qualquer deslocamento significativo á concentração de 16 μΜ: escopolamina, 5-OH-triptamina, diasepam, hicuculina, picrotoxina, hexametonio, dopamina, apomorfina, SAEfft, ácido tautírico gama-guanidino, morfina, DAGD, metorfamida, 5 dinorfin A, 11 eu’ Jencefalina, beta—endorfina, naioxona, ácido acético guanidino, creatina» creatinina, i , í-dimetil-4-guanidina, metil-guanidina, ácido propiónico beta-guanidino e eimetidina.
Exemplo 21 Especificidade da droga em relação à ligação de
í H3SFG em comparação com a ligação dg-:· (·*·)C~N3 — PPF idade da droga em relação à '"‘HT3-PPP na cobaia, verificou-se s pec íf icamente, saturáve1men te sivelmente e com elevada afini— 3Θ nm, Bmax = B© pmol/g de peso
Comparando a especific •y ligação de C'"’H3-DTG com a de ( + )£' "7" que (+) C"~Ή23—PPP se ligava &· (regista Scatchard linear), rsver dade ès membranas da cobaia (K_ =
cérebro fresco). 0 perfil da especificidade da droga da ligação de te (+ 5 [ -'H’J3-ppp na cobaia (Quadro ΪΪ) ao referido no rato» Larçent et al perfis de especificidade da droga revelou ser muito semelhan-(1984), supra.» Além disso, das drogas activas típicas no receptor sigma nos ensaios de ••ff CH.1 -DTS tiveram uma correlação elsv ligação com ( + ) í ~ΉII3-PPP da (r = 0,95? ρίΦ,ΘΘΘΘί)
O que é consistente com o facto das dois compostos marcarem os mesmos sítios»
Exemplo
Estudos Autoradioqráf icoí
Ratos machos Spraqyg Dawley (200-"2t€í g) © cobaias ΝΪΗ {300—350 a) foram sscrxficadas, os seus cérsbf Os i orsni ràpxdsmen·" te removidos s processados guante à suiore.dxoçi' stxs no receptor de acordo com o método de Herkenbam ‘sL·____Mg.yX.QSS.isn.ee 2 s 1129-1149 <1982)=,
Uiuinze cuftss de cérebro espessos- montados em ISminss foram incubados durante 45 minutos em Tris-HCl 5© πΜ (ρΗ θ,β, Ύ 22°C> contendo 1 mg/ml de albumina do soro bovino <BSA> e Γ'ΉίΟΤΘ 2 nru Cortes adjacentes foram incubados com haloperidol 10 μΜ ou DTfâ μΜ a fim de medir a ligação não especifica. As incubações terminaram com lavagens de 4 >< 2 minutos em Tris—HCL 1*3 nM (pH 7,4, 4°C) com 1 mg/ml de BSA, sendo secas rápidamente sob uma corrente de ar Trio & colocadas em cassetes de raios X com T **jr película sensível a "Ή íultrapelículs '"H? LKB) As películas foram desenvolvidas 0-8 semanas mais tarde ÍD-19, Kodak). •γ 01ELlQ__23s Vigualização autoradiográfica da ligação de Γ~'Η3ΡΤΒ
Estudos autoradiográficos de receptores em cortes de cérebro de cobaxas e de ratos usando C'“*H3DTB revelaram uma baixa densidade de ligação especifica distribuída através da massa cinzenta do cérebro do rato e da cobaia, Sobrepondo—se a estes padrões de ligação homogénea verificou-se uma distribuição heterogénea de ligação enriquecida nas estruturas límbicas e sensoríomotoras. 0 padrão de ligação era mais nítido na cobaia do gue no rato. Foram referidas observações semelhantes para autora— d logra fia de < + ) ΕώΗ33-ΡΡΡ. Largent efc ai . (1986), suara. Assim,, a descrição da ligação de C^HjDTG' foi dirigida principalmente à cubaia. No cérebro anterior, estruturas límbicas moderada a uens-amente marcadas por E~‘H3DTB foram a banda diagonal de Broca, o septo, ο hipotaiamo (especialmente d núcleo paraventricuter),, o núcleo talãmico anterodorsal ε a zona incsrta* Núcleos tatemiCOS sensorio/noiores moderada a densamente marcados incluiram t. 3.= ,=5 p> '*en= reticulares. Outros núcleos í Π .i. &- s>0u λΙ Λ d ÍFf .1. C. O *Jw C{0«}làw te hUt. F cfi-·*»·** ta lia micos marcados foram os núcleos paraventricular e hsLenul.=f » Verificou-se 1 igaçso muito densa no pls;<° coroideu. No córtex III/IV dos dos córtex continha denso a marcação com E'“Hl ocupou a camaoa retrospenial piriforme e entor—hinal» Q rs~-to do córtex um baixo nível de ligação homogénea» A formação do hipocampo apresentava uma ligação descontínua nas camadas celulares granulares piramidais» As áreas sensor i omotoria= d° cérebro médio apresentavam-se marcadas sslecfcivamenie Por C"H1DTG» 0 núcleo oculomotor, e mais cauda1mente, o núcleo trociear encontravam-se densamente marcados, a o núcleo coiizcuiúS ^upar ior e -/ei me lho apresentavam níveis moderados de ligaç^'-** Outros núcieos do cérebro médio marcados eram a rafe dorsal? α núcleo interpeduncu-lar;, substancia cinzenta central, e a substancia nigra, para compacta» A marcação selectiva da para compacta na cobaia contrastava com a densidade de marcação bai'<a a moderada presente através da substancia nigra do rato» Al'ém disso, verificou-se ligação muito densa no orgão subcomissural- No cérebro posterior o locus coeruleus foi o núcleo mais der»s®mente marcado. Núcleos sensoriomotores enriquecidos nos sítios de ligação de Γ’ΉίΟΤΘ foram o núcleo motor trigémio, o núcleo do nervo facial, o núcleo do tracto solitário» o núcleo motor dorsal do vago, e o núcleo hipoqlosso» Verificou-se também ligação moderada a densa através da massa cinzenta do cerebelo, s nos núcleos reticulares ponti- Π05 »
" SU
Exemplo 24 Esoecific.idade da Droga em rs1scso à 1igaçaa de myf
C°H3AZ-DTG 0 rsceptor sigma sensível ao haloperido] ( + )3“í3-hidrDxifenil-W~C l-propil)pipsridins( E'~H j {+J-3-PPP) e a Ε'Ή]! ?3-di~o-"tDlilguanidine (Ε'ΉιΒΤΒ), com elevada afinidade» A fim de elucidar a sua estrutura, marcação por foto-afinidade do ΓΒΐ_. ΒμίΟΓ sigma do * cérebro da cabaia foi f esl derivado fotolábil radioactivo de DTB, E"‘H3 lilguanidina i Ε'-Ή 3 A2-DTB, No escuro, E'~‘H.l AZ--DTG liga-se reversível mente aos sítios- sigma nas membranas cerebrais com elevada -afinidade íkd=28 nM)« 0 perfil da especificidade da droga em relação à ligação da ['"'HjAZ-DTG ás membranas cerebrais é idêntico ao dos ligandos sigma prototípicos C‘"‘H1DTG e Γ"‘H3 (+)-3-PPP» Para a marcação por fotoafinidade? suspensões de membrana contendo inibidoras da proteasa foram préincubadas no escure? com C"Ή3AZ-~DT85 sendo então filtradas e lavadas com filtros de fibra de vidro Whatman 8F/B» Os filtros foram então irradiados com luz UV com comprimento de onda longo durante um período de 15 minutos» Proteínas ligadas ao filtro foram solubilizadas com Tris 5Θ mH pH 74, sulfato dodecilo de sódio a 0,17» As proteínas solubil izadas foram submetidas a electroforese em gel poliacrilamida—SDS» Fluorografia dos geles SDS-PABE revelou que Γ'ΉΪ AZ-DTG era incorporado selectivamente num polipeptídeo 29 kD» A marcação deste polipeptídeo foi completamente bloqueada pelos ligandos sigma DIB, <+>-3-PPPs (+)pentazocina5 e haloperidol a uma concentração de 10 uri, enquanto que a marcação não era afectada por morfina, serotonina, dopamina, escopolamina, ou GABA nas mesmas concentrações» Gs resultados representam a primeira estimativa do tamanho da subunidads de ligação do rsceptor sigma sensível ao haloperidol. Ε_κΒ!ηο1]2._2§. Ensaios adicionais dg lio-acão ao recestor sigma
Ensaios de ligação ao recepior sigma usando produtos homogeneizados de membrana de cérebro de cobaia e os radioligan-dos Γ e ( + ) C"H33—PPP foram realizados tal como foi prévia- mente descrito (Weber et. al., PJ.A.S, (USA) 83s8784-87BS (1986)). Resumidamente, cérebros de cobaia totais congelados (E-íiotrol, ϊnd ianapolis, IN) foram homogeneizados em 1Θ- volumes (p/v) ds sucrose 320 mH usando um polytron Brinkman» O produto homogeneizado foi centrifugado a 1»ΘΘΘ ·< g durante 20 minutos a 4°C, 0 produto flutuante foi centrifugado a 2Θ.ΘΘΘ x g durante 2Θ minutos a 4°C. A pílula resultante foi ressuspensa em 10 volumes iniciais de tampão Tris/HCl g® mH a pH 7„4 e centrifugada a 20.000 κ g durante 2ô minutos a 4°C. A pílula resultante foi ressuspensa em 5 volumes iniciais de Tris/HCl 5Θ mH arrefecido pelo gelo (pH 43,4), e o volume final foi ajustado para proporcionar uma concentração proteica de 3 mg/m, tal como foi determinado pelo ensaio de proteína ligando—se a corante (Biorad) usando B8A como padrão» Porções a. 1 íquotas de 2& ml foram armazenadas a —70°C até serem utilizadas, sem se detectar qualquer perda na ligação»
Para ensaios de ligação com C'"'H3DTB, porções aliquotas de 20 mi de suspensão de membrana congelada foram descongeladas e diluídas 1:3 em Tris/HCl 50 ®H <PH 7,4). A tubos de teste 12 x 75 mm de polistirena adicionaram-se 0,8 ml de suspensão diluída de membrana, 0,1 ml de í“H3DT8 (46 Ci/mmol; ver Weber et, al»» p.-83£8784-8788 (1986) ou < + ) l3Hj3-PPP (NEN, 98 Ci/mmol) para proporcionar uma concentração final de 1,4 nM, e 0,1 ml de drogas não marcadas ou tampão» A concentração de proceina no volume de incubação final de í ml foi de ΒΘΘ μα/mi» correspondendo a c·*·: mg de tecido cerebral (peso húmido original) e a uma concentração de tecido na variação linear para ligação específica» A ligação não específica foi definida como a restante πs presença de haloperidol ÍO μΜ. A ligação específica constituiu >9ô% da totalidade da ligação de CWH3DTG. As incubações foram terminadas após 9A minutos à temperatura ambiente por adição de 4 ml de Tris/HCl 5© mM arrefecido pelo gelo (pH 7,4) e filtração rápida da suspensão de membrana através de filtros de fibra de vidro Whatman 6F/B sob vácuo, usando um aparelho para recolher células com 48 recipientes (Brandel, Saithersfourg, MD). Os filtros foram lavados 2 vezes com 4 ml de Tris/HCl 30 mM (pH 7,4)« A filtração total e o tempo de lavagem foram inferiores a 20 segundos. Cada filtro foi dissolvido em 10 ml de Cytoscint (Westchem, San Diego., CA), e a radioactivicJade foi medida por espectrometria de cintilação líquida com uma eficiência de rendimento de aproximadamente 50%. Os valores da IC,__ foram determinados por interpolação a partir de registos da curva de deslocação em papel milimétrico semiloqaritmico.
Os valores de ligação IC,_a CnM> são os seguintes; N,M—di(o—tolil)guanidina CDTS, 32); M-<2—iodofenil)—N'—(adamant— -í-i 1/guanidina (AdlpG, 6,2±Θ,7)q N-(o~to1i1)—N' — (adamant~í i 1 > -guanidina ÍAdTG, 7?6±θ3 3) ; N,N‘—dKadamant—i—il )guanidina <DAS, 11,8±3,4) ; N-<cicloheK.il )-N' ~(adaman t·-1 --.iI )guanidina (AdChíS, i $ «jÍãi. , k 5 5 M *- O1*** cu í x l) IM cic i. dhsx i 1) guan id xna C 3. 0 r. V i j,, 0} q N,M‘-di"í2?6-dimetilfenil)guanidina (DX6, 90 ± Í85 5 N~(o-to 1 i 1)--W" - < i~amino-2-iTieti 1 f εη i 1) guan id ina (MH--DT6, 28Θ ± 2Θ); Ν,Ν'-di-( fenil Jguanidina ÍDPG, 397 ± 215 q N~í o-iodofenil )quanidina <10--,-, = 21); N,N’-di-íg-brQma-o-metilfenil)guanidina < ICc.-^ = 37); tanidina íic50 — -Sé) ; N-<g-tolil)~N'- 1 * ^50 = 37) ; N 3 H1 -d i ~ (1 - te fcra 1 in i 1) ·-- j,—tal i 1) - M' - < 0- ;i i. 1.1.1) gu anidina < 1%β ~ lanidina í ICba = 71); N-(3,5-uime t i1~ g uan i d i n a (IC c- = 58 3 -1-adamantanil )-N' -ío-tolil )gu.anidina < 10^ = 15); M-<3,5--dimetil·· ~i-adamantanil )-N' ~í g~iodofen.il )guanidina < IC,-^ = 16); W-íl-ada-maniil )-M' -{g-nitrofenil)guanidina < ICe·^ - 30);
Ν,Ν'—di-íendo-2~norbornil)guanidina ÍICL·^ = 16)? N-(eso-^-isobor- w'U nil)-T4' -í o-iodofen.11)çjuanidina (= 18); Ν,Ν'-di~(exo-2~norbor~ n i1)guan idi na (ICW. N~ (exo—2—isoborn i 1) ~N' - (o ta 1 í 1) guani - dina ('ÍC,-.^ ·- 2b) s N-ío-iodoíenil >--N*-C t--butil )quanidina = 50 — ~ ·~ίΐ? 20)? Ν,Ν'—dibenzilquanidina (ΙΟ—.-. = 9€D? N—(adamant—1—il)—Ν’—(o- •J9 · iscpropilfenil )guanidina CíC-.^ 24)? N~íadaraant-2-i 1)~M'-(p~iodo-fen i 1) auan id ina. (10,-
Kl— i r i r 1 i :- 11 í -η 1 ~ ( p~ÍOdO~ r- bromo -o— tolil)— .odof en il) guani— í 1 *33™ dia zepina (BMB, 10 i.000)? i tazoe i na í 43 ± f r? A/A/S + 21Θ)? auan id ina (IC,-.,, ~ 5 „ 5) s N-(adamantan-2-il >~N*-ío—iodoíenil )guani-zm · — -a d ina < Ϊ Cc-... = 5,2)? 2-imino- i , 3H-d i ben zoL d ,' CBridqe-DP6, >10, ΘΘΒ)? Ν,Ν’-diímetil)guanidin< C +)—3—PPP (76 ± 4)? (-)-3-PPP (28Θ ±21)? ( + )-) 2) j) ( —)—pentazocins (135 ± 3)? <—) — ci cIaz oc in< <-)-SKF10€*47 <4ηΘ00 ± 566)haloperidol (5 ± Θ = 35 ? BHY 148Θ2 ( 120 ± 15)? rimcazole (1.400 ± )5 tiospirona (233 ± 52)? perfenasina (42 ± 1Θ) | clorpromazina (1.475 ± 265)? sulpirids (10» 0ΘΘ) ? TCP (1.1Θ0 ± 110)? POP (1-050 T 106)í e MK—801 010,000).
Exemplo aò
Efeito do Diazepam e de Guanidinas Oissubstituídas em N»N*sobre a Exploração Lu. z / Esc ia r i d ao de Ratinhos
Os inventores desejam agradecer a Brenda Costa 3.1* Universidade de Bradford, Bradford, BD7 1DP, England* por avaliar os ligandos ao receptor sigma de acordo com o processo apresenta do por ela e outras em Jones et al, Sr. J» Fharmacol. 95;985-995 (1988). De acordo com este processo, ratinhos BKW albinos machos, g r, foram alojado liy acesso a alimentos e água. invertido com luz entre as 22 por gaiola permitindo-lhes livre Foram mantidos num ciclo de luz horas e as 10 horas. caixa de topo aberto, 45 cm 7 cm de altura* dividida numa ande (3/5) por meio de uma acima aas paredes·. Existia. 0 aparelho consistia numa de comprimento* 27 cm de largura e 2 área peauena (2/5) & numa área nr divisória que se estendia até 20 cm
tu.ra de 7,5 x 7,5 * i a d ã. V X Só í ria ao nível do cheio» 0 mento pequeno foi pintado CÍ ereto c e o compartimento e branca» 0 chão de cada um dos compartimentos foi rriín nttarifados de *? “s " cm» 0 ca mpartiment o branco foi ilumi- nado com uma lampada de tungsténio 1S0W 17 cm acima da cai na ε o compartimento preto foi iluminado com uma iampads vermelha, de hêM colocada de um modo semelhante» 0 laboratório foi iluminado com luz vermelha»
Todos os testes foram realizadas entre as 13 horas e as IS horas» Cada ratinho foi testado colocando-o no centro da área branca e deixando-o explorar o novo meio ambiente durante 5 minutos» 0 seu comportamento foi registado num videotape e a análise do comportamento foi realizada subsequentemente a partir do registo» Foram medidos cinco parâmetros; o período de lat'§nc.ia para a entrada no compartimento escuro, o tempo gasto em cada área, o número de transições entre os compartimentos, o número de linhas atravessadas em cada compartimento e o número de empinamen-tos e?n cada compartimento» com água. destilada e admin i strado í rat inhos p ;or cada nivsl de dosagem» nas Figura ,s 1-6 CA zons. tracej ada = das ··= área escuda) ii
As guanidinas dissubstituídas em , dissolvidas em água destilada, foram administradas suhcutSneamente 4@ minutos antes do teste com uma taxa de dosagem de Θ„Θ1 pg a Φ,Ι mg/kg (5 ratinhos por nível de dosagem)= Diazepam (θ,Θ63--1Θ mg/kq) foi dissolvido na quantidade mínima de polietileno glicol, diiuido até ao volume apropriado com área iluminada? colunas sólidas içado n a Fiqura 1, o di azepam ose a proporção do tem 1 μΟ CjLX , maior ·, da câm ara do teste» aumentou, de o ratinho Os números
Tal como é ind um modo dependent.e da d gastou na área. i Iuminada de travessias da ϋ< aumentaram à custa nha s empinamentos no compartimento do número no compartimento escuro» Com a iluminado dose mais elevada de diasepam de travessias da linha (10 mg/kg) os números tíe empinamen tos e diminuiram significativamente reve1ando que a droga era acentuadamente sedativa» entrada no compartimento escuro aumentou □ período de lafência com um efeito de pico da a Θ,2'ο mg/kg (latfncia : ram uma lafência de 9 30 seg) enquanto que os controlos segundos (S.E.M.s < 12,1%, p<0,001> rsvela-
Tal como é indicado Na Figura 2, N,N‘ -di-~(adamantan-l--· -xl)guanidina teve tendencia para aumentar a proporção do tempo que os ratinhos gastaram na área maior, iluminada, da câmara do teste, com um pico a θ,ΘΙ gg/kgOs números de travessias da linha e empinamentos no compartimento iluminado aumentaram à custa dos números no compartimento escuro» Com a dose mais elevada de N,N'-di-íadamant-i—ilIguanidina (0,1 mg/kg), os números de empinamentos e de travessias da linha não diminuíram significativamente revelando que a droga não era sedativa a este nível. 0 período de latfncia para a entrada no compartimento escuro aumentou, com um efeito de pico a 0,01 p.g/kg (lafência = 20 seg) enquanto que os controlos revelaram uma latfncia de 12 seg <F'<0,05<0,001}.
Tal como é ind “(2-meii1fen i1> guan i d ina proporção de tempo que içado na Figura 3, M-íadamantan-l-il>~M’-aumentou de um modo dependente da dose a cs ratinhos gastaram na área maior. iluminada, da Câmara do teste» Ds números de travessias da linha e de empinamentos no compartimento iluminado aumentaram è custa dos números no compartimento escuro» Com a dose mais elevada de M--(adamantan~:i~il )“N' -(2-metilf enil )guanidina (0,1 mg/kg), os não diminuíram sedativa a este números de empinamentos e de travessias da linha significativamente revelando que a droga não era
entrar no compartimento escura
indicada na Figura 5, N—íadamantan-l-il)-N'— também aumentou, de um mado dependente da
lirsh*3 e empinamentas na compartimenta iluminada aumentaram à
elevada de N-<adamant-i-il)-N‘-o-iadofenil guanidina <õ, 1 mg/kg), PS números de empinamentos e de travessias da linha não aumentaram significativamente revelando que a droga não é sedativa a este nível.. 0 período de latência da entrada no compartimento escuro também aumentou de um modo dependente da dose.
Para comparação, um composto com uma afinidade para o receptor sigma relativamente baixa foi testada quanta à activida-de ansiolítica. Tal como é indicado na Figura 6, N—(3,5~dimeti1-adamantan-l-il 5-Ν' —l C (E)-2-fsn.i.letil jfenil Iguanidins < I= Ι.ΦΘβ nll) geralmente não aumentou a proporção de tempo que as ratinhos gastaram na área maior, iluminada, da câmara do teste. Os números de travessias e de empinamentas no compartimento iluminado tiveram tendência para permanecer iguais exceptuando com a dosa mais elevada. Com a dose mais elevada de W-<3,5™dime-ti 1 adamantan-l~.il )~!\T —L l (£)-2-feni 1 eti 11 feni 1 'J-guan.idina í €*, 1 mg/kg), os números de empinamentas e de travessias da linha não diminuíram significativamente revelando que a droga não era sedativa s este nível.
Tal como é indicado na Figura 7, 1*4,N* — dí— (2—meíilfenil
nível de ligação ao receptor deste composto < I= 32, Θ τ 1)» Embora os inventores não se desejem ligar a qualquer teoria particular, parece que DTB não apresenta sctivida.de ansieiítica no ensaio in vivo visto ser rápidamente mobilizado e desse modo desactivado pelo animal.
Em seguida, N~(adamantan-1-i 1 >-N dina, N,N'-di-íadamantan—i-ilJguanidina e -ío-iodofeni1)qusnidina foram administradas
I ' - C 2-ffle t i 1 í en i. 1) g uan i ~ N*“ ^ adaman tan Ϊ i 1 / N oralmente aos rati nhos numa dose de 1 mg/feg. Tal como é indicado ria Figura 4, H~ í adaman tan- 3. -i 1) -N' - í 2-meti 1 f eni 1) guanidina administrada oralmente aumentou significativamente a proporção de tempo gasta pelos ratinhos na área maior, iluminada, da caixa. Além disso, os números de travessias da linha s empiriamentos no compartimento iluminado aumentaram è custa dos números no compartimento escuro»
Tal como έ indicado na Figura 8, N,N'-di-íadamantan-i-~ilJguanidina e N-íadamantan-i-il>-N*-(o-iodofenilJguanidina levaram a um aumento nas números de travessias da linha e de empinamentDs no compartimento iluminado è custa dos números no compartimento escuro. Em comparação com os controlos, os números cie empinamentos e de travessias da linha não diminuíram significativamente revelando que as duas drogas não eram sedativas na nível de dosagem administrado. As duas drogas causaram também um aumento no tempo de latência de entrada no compartimento escuro em comparação com os controlos. Estas experiências confirmam que N-<adamantan-l-il>-N‘-<2-metiIfenilJguanidina, N,N'-di-íadaman-tan-i-ilJguanidina s M-Cadamantan-l-il)-M'-Co-iodcfenilJguanidina apresentam actividade ansieiitica quando adminxstradas oralmente.
Figura 9, N—ciclohexil-hT-í2-me-ificativamente a proporção de área maior, iluminada da caixa»
Tal como é indicado na tilfenilJguanidina aumenta sign tempo que os ratinhos gastam na ί
Além disso, os números de travessias da linha e empinamentos no compartimento iluminado aumentaram de um modo dependente da dose ã custa dos numeros no compartimento sscurc« izm comp-aração com os-controlos, o número total de empinamentos e de travessias da linha não diminuiu significativamente, revelando que a droga não era sedativa aos níveis de dosagem administrados. A droga também causou um aumento no período da latência de entrada no compartimento escuro em comparação com controlos.
Tal como á indicada na Figura 1Φ, N-<(±>—endo-2-norbor-nil )~M* “-i2--iodofen.il Iguanidina causou um aumento significativo dependente da dose no número de empinamentos no compartimento iluminado à custa do número no compartimento escuro. Em comparação com os controlos, o número total de empinamentos e de travessias da linha não diminuiu significativamente, revelando que a droga não era sedativa nos níveis de dosagem administrados. A tíroga também levou a um aumento dependente da dose na. latfncia de entrada no compartimento escuro em comparação com os controlos.
Tal como é indicado na Figura 11, N-Ce^o-Z-norbornil)— -N'“<2-metilfenilIguanidina levou a um aumento no número de empinamentos no compartimento iluminado à custa do número no compartimenta escuro. Em comparação com os controlos, o número total de empinamentos e de travessias da linha não diminuiu significativamente, revelando que a droga não era sedativa no nível de dosagem administrado» A droga também levou a um aumento no período de latência de entrada no compartimento escuro quando administrada a Θ,Ι mg/kg em comparação com os controlos»
Tal como é indicado na Figura 12, N-(adamantan-1-iI>--N' -cic loheKilquan.idins levou s um aumento do número de empina— mentos no compartimento iluminado -à custa do número no compartimento escuro» tm comparação com os controlos» o número total de
empinamentos e de travessias da linha não vamente, revelando que a droga não era. dosagens administrada. A droga, também 1 período de latincia dependente da dose na to escsj.ro em comparação com os controlos. se alterou _____5 „ L .! t . .. seus i-JV-s evou a um entrada no signific no nível aumento comparti ati- de do -msn-
Tal como é indicado na Figura 13, M-íciclobexil )-N'-C2-•-•metilfenil Jguanidina, quando administrada oral mente, levou a um aumento nos números totais de empinamentos no compartimento iluminado à custa dos números no compartimento escuro» Em comparação com os controlos, o número de empinamentos e de travessias da linha não se alterou significativamente, revelando que o composto não era sedativo no nível ds dosagem administrado. 0 composto também levou a um ligeira aumento no período de lat@ncia de entrada no compartimento escuro em comparação com os controlos» Contudo, observou-se uma diminuição significativa na percentagem de tempo no compartimento escuro.
Tal como é indicado na Figura 14, N-íí±>~endQ™2~norborrei. 1 >-Nr -2-iodof anil }guanidina;i administrada oralmente, levou a um aumento no número de empinamentos no compartimento iluminado à. custa da número no compartimento escuro. Em comparação com os controlos, o número total de empinamentos e de travessias da linha não diminuiu significativamente, revelando que a droga não era sedativa no nível de dosagem administrado» A droga também levou a um aumento na período de latCncia da entrada no compartimento escuro em comparação com controlos e a u.ma diminuição na percentagem do tempo gasto no compartimento escuro»
Tal como é indicado na Figura 15, N—Csko—2—norbornil)-~N'-(2-metilfeniI)guanidina, quando administrada oralmente, levou a um aumento no número de empinamentos no compartimento luminosa k custa do número no compartimento escuro» Em comparação com os controlos* o ‘número total de empinamentos e de travessias da linha não diminuiu significativamente* revelando que a droga não era sedativa nos níveis de dosagens administrados. A droga também levou a um aumento no período de lattfncia da entrada no compartimenta escura em comparação com controlos* e a uma diminuição na percentagem de tempo gasta no compartimento escuro»
Tal como á indicado na Figura 16* N--C2---estirilfenil )--Ν'-(2-iodofenilIguanidina, um composto de controlo não activo* não -sfectou os números de travessias ou de empinamentos no compartimento iluminado» Além disso* a. droga na realidade diminuiu o período de latência da entrada no compartimento escuro em comparação com os controlos» Não se verificou alteração significativa na percentagem de tempo no compartimenta escura»
Exemolo 27 0 Potencial Ansiaiítico de Diazepam e N—(adaman— tan-l-il )~N' -<2~metil fenil jqu.anidina num Teste de Interseção Social no Rato f oram rial d pares
Ratos machos Hooded Lister <ninhada S1 aο* 2ΘΦ-25Θ g>* alojados 5 por gaiola e foram mantidos nuns meio lafaorato-urante pelo menos uma semana antes do teste» Os ratos aos no teste foram retirados de gaiolas separadas. 0 ía CQíH pos tos to ram ísí V al iados qu ai § to S, sua actividade ans iol ítica por Brenda Γ: :osta 11 d0 acordo com Θ. apresentação de uon es * b>«3 .. e t a 1. . Br a J. P har ma col» 93s 985- P9'3 C1988) e File* S * L· a W t al» s í?í’ u *T U « Pharmacol a 6 '?». 19-24 <1 Q‘7 R \ s Pt arena do teste con sis tia n uma c ais a ij topo *ci£3Sfr’ to * 62 X ét 2 X 33 cm com uma mat ri z / K 7 de fei κ 85 TQ toce lul er es infra v© í*" {1)0 1 hos nas paredes* à d X S fc Sncia UH 2 *5 cm do COíMo a U â. -S zepam e N- < adaman tan—1 —i. 1) -N' - —£2—metilfeni1/guanidina foram testados tratando ambos os membros de um par de ratos com α mesmo tratamento minutos antes do » X * t
testa (Os ratos foram colocados isoladamente em pequenas gaiolas imediaiamante depois da dosagem até serem testados).
0 teste envolveu o colocar cada membro de um par de ratos em cantos opostos da arena e deixando-os então nlo perturbados durante 1® minutos registando-se entretanto o seu comportamento remotamente em videotape. As avaliações comporiameniais foram realizadas subsequente® gasto em interseção social fo um total cumulativo para a se ente a partir dos registos. 0 tempo d medido e expresso sob a forma de ssão de i® minutos. Os comportamen tos que compreendiam interacçãc foramε seguir com contac to s cheirai' cima e par« (mas não cheirar os quartas traseiros), rastejar para baixo, dar trambolhões, esmurrar s limpar.
Diazepam administrado intraperitonealmente foi testado na gama de dosagens de 125-1 mg/kg. N-(adamantan—1—il)—N'— <2--metil fenil )guanidina foi testada na gama de dosagens de €»,€>©!--0,1 mg/kg. Os resultados aparecem na Figura 17 (n = é, P<®,€i®i ). Tal como ê indicado na Figura Í7, tanto a diazepam como M-Cadamantan-1—il>—N'-(2-metilfenil /guanidina aumentaram significativamente as interacçSes sociais. Contudo, N-Cadamantan-l-il)--N'~í2-metilfenil/guanidina produziu mais ou menos o mesmo resultado com um décimo da dose de diazepam <1 rog/kg para o diazepam e 0,1 mg/kg para N-(adamantan-1-il )-N" ~<2-metilfenil )-guanidina). Estes resultados proporcionam uma forte evidencia de que N~(adamanfcan-l-il)—N' -C2-meti 1 fenil '/guanidina apresentará actividade ansiolítica no ser humana, especialmente porque o teste de interacçSo social nos ratos é um dos testes com validação mais considerável. (Ver File et al». supra).
Os exemplos anteriores podem ser repetidos com um êxito semelhante substituindo os reagentes s/ou condições de actuação

Claims (2)

  1. descritos genéricamente ou específicsmente, nos exemplos anteriores» deste invento, usados A partir especia1ista nesta da descrição feita snteriormente, técnica pode fácilmente verificar as qualquer caracte~ risticas essenciais deste invento, e espirito e âmbito, pode realizar várias do invento a fim de o adaptar a várias sem se afastar do seu alterações e modificações utilizações e condições» Reivindicações: 1β. - Método para determinar a actividade da ligação ao receptor cerebral sigma de um composto orgânico, caracterizado por compreender os passos de: a. se fazer contactar num meio aquoso uma quantidade entre cerca de 1 e cerca de 100 mg de membrana cerebral de mamífero isolada, de preferência porcina, de ratazana, humana ou de cobaia, que apresenta actividade de ligação ao receptor “12 semelhante a sigma, com uma mistura de (i) numa dosagem de 10 —7 , até 10 M de uma guanidma dissubstituída em N,N' marcada radioactivamente seleccionada de entre o grupo consistindo em N,N'-di(m-n-propilfenil)guanidina; N,N'-di(p-bromo-o-tolil)guanidina, N-(o-tolil)-Ν'-(p-nitro-o--tolil)guanidina; N,N'-di-(1-tetralinil)guanidina; N-(o-tolil)--Ν'-(p-xilil)guanidina; N,N'-di-(o-xilil)guanidina; N-(3,5-di-metil-l-adamantil)-N'-(o-tolil)guanidina; N-(3,5-dimetil-l-ada-mantil)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina; N-(1-adamantil)-N'-(o-nitro-fenil)guanidina; (+)-N,N'-di-(endo-2-norbornil)guanidina; (-)--N,N'-di-(endo-2-norbornil)guanidina; (+)-N-(exo-2-isobornil)--Ν'-(o-iodofenil)guanidina; (-)-N-(exo-2-isobornil)-Ν'-(o-iodo-fenil)guanidina; (+)-N,N'-di-(exo-2-norbornil)guanidina; (-)--N,N'-di-(exo-2-norbornil)guanidina; (+)-N-(exo-2-isobornil)-N'--(o-tolil)guanidina; (-)-N-(exo-2-isobornil)-N'-(o-tolil)guanidina; N-(o-iodofenil)-Ν'-(t-butil)guanidina; N,N'-dibenzilguanidi-na; N-(adamant-l-il)-Ν'-(o-isopropilfenil)guanidina; N-(adamant--1-il)-Ν'-(p-bromo-o-tolil)guanidina; N-(ciclo-hexil)-Ν'-(p-bro-mo-o-tolil)guanidina; N-(adamant-2-il)-Ν'-(o-iodofenil)gua nidina ;N,N'-di(p-metilbenzil)guanidina; e N,N'-di(1-adamantanome-til)guanidina, N-(ciclo-hexil)-Ν'-(4-bromo-2-metilfenil)guanidina, N-(adamant-l-il)-Ν'-(2-trifluorometil-fenil)guanidina, N-(adamant-l-il)-N'-(2,4-difluoro-fenil)guanidina, e N-(adamantan--1-il)-N'-(2-trifluoro-metil-4-fluorofenil)-guanidina numa 94
    quantidade conhecida capaz de ser ligada aos receptores sigma dessa membrana do cérebro; e (íi) de 10 até 10 M, de um composto orgânico solúvel na água a ser ensaiado quanto à activi-dade de ligação ao receptor sigma; b. se separar a membrana do cérebro do composto marcado radioactivamente que não se liga à membrana do cérebro no passo a); c. se determinar, a partir da relação molar entre a proporção de composto marcado radioactivamente ligado que é separado no passo b) e a quantidade molar de composto orgânico utilizado no passo a), a actividade de ligação ao receptor sigma do composto orgânico. 2β. - Método para determinar a actividade de ligação ao receptor cerebral sigma de um composto orgânico, caracterizado por compreender os passos de: a. se fazer contactar num meio aquoso uma quantidade entre cerca de 1 e cerca de 100 mg de membrana cerebral de mamífero isolada, de preferência porcina, de ratazana, humana ou de cobaia, que apresenta actividade de ligação ao receptor *15 —3 semelhante a sigma, com uma mistura de (i) de 10 até 10 M de um composto dissubstituído em N,N' marcado com rádio tendo a fórmula: NH II R-X-N-C-N-Y-R' <CH2>n em que n é 2, 3, 4 ou 5; 95 Xe Y são independentemente uma ligação simples, um C^-C^ alquileno de cadeia linear ou ramificada ou um C2-C12 alçuil®110 não saturado de cadeia linear ou ramificada; R e R' são independentemente hidrogénio, um grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos de carbono, um grupo arilo carbocíclico I com pelo menos 6 átomos de carbono, aralquilo com pelo menos 6 átomos de carbono, e contendo 1 a 3 aneis separados ou condensados, um anel heterocíclico, e em que cada um de entre R e R' pode ser substituído em 1 a 3 posições, ou em que R e R' em conjunto com o grupo guanidina ao qual estão ligados formam um anel I cíclico saturado ou não saturado contendo pelo menos 4 átomos de carbono com exclusão do átomo de carbono da guanidina, e em que o referido anel cíclico pode ser substituído com um ou mais grupos alquilo com 1-6 átomos de carbono, grupos carbocíclicos com pelo menos 6 átomos de carbono, grupos cicloalquilo com 3-12 átomos de crabono, ou 1 a 2 aneis aromáticos condensados; em que o referido composto apresenta uma elevada afinidade em relação ao receptor sigma e está presente numa quantidade conhecida capaz de ser ligada aos receptores sigma dessa membrana —15 —3 cerebral; e (ii) de 10 até 10 M de um composto solúvel na água a ser ensaiado quanto à actividade de ligação ao receptor sigma; b. se separar a membrana do cérebro do composto marcado radioactivamente que não se liga à membrana do cérebro no passo a); c. se determinar, a partir da relação molar entre a proporção de composto marcado radioactivamente ligado que é separado no passo b) e a quantidade molar de composto orgânico utilizado no passo a), a actividade de ligação ao receptor sigma do composto orgânico. 96 3δ. - Método de acordo com a reivindicação 2, carac-terizado por o referido composto ser N,N'-di(m-etilfenil)-2-imi-no-imidazolidina. 96 4a. - Método de acordo com a reivindicação caracterizado por o referido marcador radioactivo ser 1 ou 2, trítio, 11 C, 14c, 18f, 125 1/ 131 I, 1SN, 35S ou 32F. 5a. - Método para determinar a relação entre um comportamento de carácter psicótico anormal num mamífero, por exemplo humano psicótico apresentando esse comportamento e uma uma disfunção do sistema receptor sigma, caracterizado por compreender a administração ao mamífero apresentando esse comportamento numa quantidade eficaz de preferência numa gama de dosagem de 0,1 mg a 5 g para alterar a actividade mental modulada pelo receptor cerebral sigma desse mamífero, de uma guanidina dissubstituída em N,N' seleccionada de entre o grupo consistindo em N,N'-di(m-n--propilfenil)guanidina;N,N'-di(p-bromo-o-tolil)guanidina, N- -(o-tolil)-Ν'-(p-nitro-o-tolil)guanidina; N,N'-di-(l-tetra- linil)guanidina; N-(o-tolil)-N'-(o-xilil)guanidina; N,N'-di-(o--xilil)guanidina; N-(2-adamanti1)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina, N-(3,5-dimetil-l-adamantil)-N'-(o-tolil)guanidina; N-(3,5-dimetil--1-adamant-il)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina; N-(1-adamantil)-N'--(o-nitrofenil)guanidina; (+)-N-(2-exonorbornil)-Ν'-(o-tolil)guanidina ; (-)-N-(2-exonorbornil)-N'-(o-tolil)guanidina; (+)-N,N'-di--(endo-2-norbornil)guanidina; (-)-N,N'-di-(endo-2-norbornil)- guanidina; (+)-N-(exo-2-isobornil)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina; (-)-N-(exo-2-isobornil)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina; (+)-N,N'-di--(exo-2-norbornil)guanidina; (-)-N,N'-di-(exo-2-norbor- nil)guanidina; (+)-N-(exo-2-isobornil)-Ν'-(o-tolil)guanidina; (-)-N-(exo-2-isobornil)-Ν'-(o-tolil)guanidina; N-(o-iodofenil)-“Ν'-(t-butil)guanidina; Ν,Ν'-dibenzilguanidina; N-(adamant-l-il)--Ν'-(o-isopropilfenil)guanidina; N-(adamant-l-il)-Ν'-(p-bromo-o--tolil)guanidina; N-(ciclo-hexil)-Ν'-(p-bromo-o-tolil)guanidina; N-(adamant-2-il)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina; N,N'-di(o-metilben-zil)guanidina; N,N'-di(1-adamantanometil)guanidina; N,N'-di(o--tolil)-2-iminoimidazolina; N,N'-di(m-etilfenil)-2-iminoimidazol-ina; N-(ciclo-hexil)-N'-(4-bromo-2-metilfenil)-guanidina, N-(ada-mantan-l-il)-N'-(2-trifluorometil-fenil)guanidina, N-(adamant-—1—il)-Ν'-(2,4-difluoro-fenil)guanidina, e N-(adamantan-l-il)-N'--(2-trifluorometil-4-fluorofenil)-guanidina. 6â. - Método para determinar a relação entre um comportamento de carácter psicótico anormal num mamífero apresentando esse comportamento e uma disfunção do sistema receptor sigma, caracterizado por comprender a administração ao mamífero apresentando esse comportamento numa quantidade eficaz de preferência de 0,1 mg a 5 g para alterar a actividade mental modulada pelo receptor cerebral sigma desse mamífero, de uma guanidina dissubs-tituída em N,N' tendo a fórmula NH II R-X-N-C-N-Y-R' <c»2>n em que n é 2, 3, 4 ou 5; Xe Y são independentemente uma ligação simples, um ci”c^2 alquileno de cadeia linear ou ramificada ou um c2"ci2 alquileno não saturado de cadeia linear ou ramificada; R e R' são independentemente hidrogénio, um grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos de carbono, um grupo arilo carbocíclico 98
    com pelo menos 6 átomos de carbono, aralquilo com pelo menos 6 átomos de carbono, aralquilo com pelo menos 6 átomos de carbono e contendo l a 3 aneis separados ou condensados, um anel heterocí-clico, e em que cada um de entre R e R' pode ser substituído em l a 3 posições, ou em que R e R' em conjunto com o grupo guanidina ao qual estão ligados formam um anel cíclico saturado ou não saturado contendo pelo menos 4 átomos de carbono com exclusão do átomo de carbono da guanidina, e em que o referido anel cíclico pode ser substituído com um ou mais grupos alquilo com 1-6 átomos de carbono, grupos carbocíclicos com pelo menos 6 átomos de carbono, grupos cicloalquilo com 3-12 átomos de carbono, ou 1 a 2 aneis aromáticos condensados; em que o referido composto apresenta uma elevada afinidade em relação ao receptor sigma. 7®. - Método de acordo com a reivindicação 6, carac-terizado por o referido composto ser N,N'-di(m-etilfenil)-2-imi-no-imidazolidina. 8a. - Método de tratamento de um ser humano sofrendo de uma doença mental psicótica associada a alucinações, caracte-rizado por compreender a administração a esse ser humano, numa quantidade de 0,1 mg a 5 g, de uma guanidina dissubstituída em N,N' seleccionada de entre o grupo consistindo em N,N'-di-(m-n--propilfenil)guanidina; N,N'-di-(l-tetralinil)guanidina; N-(o--tolil)—Ν'—(o-xilil)guanidina; N,N'-di-(o-xilil)guanidina; N-(3,5-diemtil-l-adamantil)-Ν'-(o-tolil)guanidina; N-(3,5-di-metil-l-adamantil)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina; N-(1-adamantil)-Ν' --(o-nitrofenil)guanidina; (+)-Ν,Ν'-di-(endo-2-norbornil)guanidina; (-)-N,N,-di-(endo-2-norbornil)guanidina; (+)-N-(exo-2-isobor-nil)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina; (-)-N-(exo-2-isobornil)-N'-(o-io-dofenil)guanidina; (+) -N, N'-di-(exo-2-norbornil)guanidina; (-)-N,N'-di-(exo-2-norbornil)guanidina; 99 - (+)-Ν-(exo-2-isobornil)-Ν'-(g-tolil)guanidina; (-)-N-(exo-2-iso-bornil)-Ν'-(o-tolil)guanidina; N-(o-iodofenil)-Ν'-(t-butil)guanidina; Ν,Ν'-dibenzilguanidina; N-(adamant-l-il)-Ν'-(o-isopropil-fenil)guanidina; N-(adamant-l-il)-N'-(p-bromo-o-tolil)guanidina; N-(ciclo-hexil)-N'-(p-bromo-o-tolil)guanidina; N,N'-di-(o-metil-benzil)guanidina; N-(ciclo-hexil)-N'-(p-iodofenil)guanidina; N, N'-di(1-adamantanometil)guanidina; N-(ciclo-hexil)-N'-(4-bromo--2-metilfenil)guanidina, N-(adamantan-l-il)-Ν'-(2-trifluorometil--fenil)guanidina, N-(adamantan-l-il)-N'-(2,4-difluoro-fenil)-guanidina, e N-(adamantan-l-il)-Ν'-(2-trifluoro-metil-4-fluoro-fenil) -guanidina. ga. - Método para o tratamento de um ser humano sofrendo de uma doença mental psicótica associada a alucinações, caracterizado por compreender a administração a esse ser humano, numa quantidade 0,1 mg a 5 g, de uma guanidina dissubstituída em N,N' com a fórmula: NH II R-X-NH-C-NH-Y-R' em que X e Y são independentemente um C^-C^ alquileno de cadeia linear ou ramificada ou um c2~Ci2 al3uileno nao saturado de cadeia linear ou ramificada ou em que um de entre X e Y é uma ligação simples; R e R' são independentemente hidrogénio, um grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos de carbono, um grupo arilo carbocíclico com pelo menos 6 átomos de carbono, aralquilo com pelo menos 6 átomos de carbono, e contendo 1 a 3 aneis separados ou condensados, um anel heterociclico, e em que cada um de entre R e R' pode ser substituído em 1 a 3 posições. 100 10a. - Método de acordo com a reivindicação 9, carac-terizado por a referida guanidina dissubstituída em N,N' ser Ν,Ν'-dibenzilguanidina, N,N'-di(o-metilbenzil) guanidina, ou N,N'-di(adamantanometil)guanidina. 11a. - Método de tratamento de um ser humano sofrendo de uma doença mental psicótica associada a alucinações, caracte-rizado por compreender a administração a esse ser humano, numa quantidade de 0,1 mg a 5 g, de uma guanidina dissubstituída em N,N' com a fórmula: NH II R-X-N-C-N-Y-R' I I <CH2>n em que n é 2, 3, 4 ou 5; Xe Y são independentemente uma ligação simples, um c1-c12 alquileno de cadeia linear ou ramificada ou um c2~ci2 alquileno não saturado de cadeia linear ou ramificada; R e R' são independentemente hidrogénio, um grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos de carbono, um grupo arilo carbocíclico } com pelo menos 6 átomos de carbono, aralquilo com pelo menos 6 átomos de carbono, e contendo 1 a 3 aneis separados ou condensados, um anel heterocíclico, e em que cada um de entre R e R' pode ser substituído em 1 a 3 posições, ou em que R e R' em conjunto com o grupo guanidina ao qual estão ligados formam um anel I cíclico saturado ou não saturado contendo pelo menos 4 átomos de carbono com exclusão do átomo de carbono da guanidina, e em que o referido anel cíclico pode ser substituído com um ou mais grupos alquilo com 1-6 átomos de carbono, grupos carbocíclicos com pelo menos 6 átomos de carbono, grupos cicloalquilo com 3-12 átomos de carbono, ou 1 a 2 aneis aromáticos condensados; 101 em que o referido composto apresenta uma elevada afinidade em relação ao receptor sigma. 12a, - Método de acordo com a reivindicação 11, carac-terizado por o referido composto ser N,N'-di(m-etilfenil)-2-imi-noimidazolidina. 13a. - Método para o tratamento da hipertensão, carácter izado por compreender a administração a uma pessoa hipertensa, numa quantidade de 0,1 mg a 5 g, de uma guanidina dissubstituída em N,N' seleccionada de entre o grupo consistindo em N,N'-di--(m-n-propilfenil)guanidina; N,N'-di(p-bromo-o-tolil)guanidina, N-(o-tolil)-Ν'-(p-nitro-o-tolil)guanidina; N,N'-di-(1-tetralinil)-guanidina; N-(o-tolil)-Ν'-(o-xilil)guanidina; N,N'-di-(o-xilil)-guanidina; N-(3,5-dimetil-l-adamantil)-Ν'-(o-tolil)guanidina; N-(3,5-dimetil-l-adamantil)-N'-(o-iodofenil)guanidina; N-(1-ada-mantil)-N'-(o-nitrofenil)guanidina; (+)-N,N'-di-(endo-2-norbor- nil)guanidina; (-)-N,N'-di-(endo-2-norbornil)guanidina; (+)-N--(exo-2-isobornil)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina; (-)-N-(exo-2-iso-bornil)-Ν'-(o-iodofenil)guanidina; (+)-N,N'-di-(exo-2-norbornil)-guanidina; (-)-N,N'-di-(exo-2-norbornil)guanidina; (+)-N-(exo--2-isobornil)-Ν'-(o-tolil)guanidina; (-)-N-(exo-2-isobornil)-N'--(o-tolil)guanidina; N-(o-iodofenil)-Ν'-(t-butil)guanidina; Ν,Ν'-dibenzilguanidina; N-(adamant- l-il)N'-(o-isopropilfenil)-guanidina; N-(adamant-l-il)-Ν'-(p-bromo-o-tolil)guanidina; N-(ciclo-hexil)-N'-(p-bromo-o-tolil)guanidina; N-(adamant-2-il)--N'-(o-iodofenil)guanidina; N,N'-di(p-metilbenz il)guanidina; N,N'-di(l-adamantanometil)guanidina; N-(ciclo-hexil)-N'-(4-bromo--2-metilfenil)guanidina, N-(adamantan-l-il)-N'-(2-trifluorometil-fenil)guanidina, N-(adamantan-l-il)-Ν'-(2,4-difluoro-fenil)guanidina, e N-(adamantan-l-il)-Ν'-(2-trifluoro-metil-4-fluorofenil)--guanidina. 102 14a. - Método para o tratamento da hipertensão, carac-terizado por compreender a administração a uma pessoa hipertensa, numa quantidade de 0,1 mg a 5 g, de uma guanidina dissubstituída em N,N' com a fórmula NH II R—X—N-C-N-Y-R' I I em que né2, 3, 4 ou 5; X e Y são independentemente uma ligação simples, um c1“c12 alquileno de cadeia linear ou ramificada ou um C2-C12 alquileno não saturado de cadeia linear ou ramificada; R e R' são independentemente hidrogénio, um grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos de carbono, um grupo arilo carbocíclico com pelo menos 6 átomos de carbono, aralquilo com pelo menos 6 átomos de carbono, e contendo 1 a 3 aneis separados ou condensados, um anel heterocíclico, e em que cada um de entre R e R' pode ser substituídos em 1 a 3 posições, ou em que R e R' em conjunto com o grupo guanidina ao qual estão ligados formam um anel cíclico saturado ou não saturado contendo pelo menos 4 átomos de carbono com exclusão do átomo de carbono da guanidina, e em que o referido anel cíclico pode ser substituído com um ou mais grupos alquilo com 1-6 átomos de carbono, grupos carbocíclicos com pelo menos 6 átomos de carbono, grupos cicloalquilo com 3-12 átomos de carbono, ou 1 a 2 aneis aromáticos condensados; em que o referido composto apresenta uma elevada afinidade em relação ao receptor sigma. 15a. - Método de acordo com a reivindicação 14, carac-terizado por o referido composto ser N,N'-di(m-etilfenil)-2-imi-noimidazolidina. 103 16a. - Método para o tratamento ou profilaxia da ansiedade num animal susceptivel à ansiedade, caracterizado por compreender a administração a um animal apresentando sintomas de ansiedade ou susceptivel à ansiedade, de uma quantidade ansiolí-tica de 0,1 mg a 5 g de uma guanidina dissubstituída em N,N', seleccionada de entre o grupo consistindo em N-(2-metilfenil)-N'--(o-iodofenil)guanidina; N,Ν'-di-(p-bromo-£>-metilfenil)guanidina; N,N'-di(m-n-propilfenil)guanidina; N-(2-metilfenil)-Ν'-(4-nitro--2-metilfenil)guanidina; N,N'-di-(l-tetralinil)guanidina; N-(2--metilfenil)-N'-(o-xilil)guanidina; N,N'-di-(o-xilil)guanidina; N,N'-di-(ciclo-hexil)guanidina; N-(3,5-dimetil-adamantan-l-il)--Ν'-(2-metilfenil)guanidina; N-(3,5-dimetil-l-adamantil)-Ν'-(o--iodofenil)guanidina; N-(1-adamantil)-N'-(o-nitrofenil)guanidina; N,N'-di-((±)-endo-2-norbornil)guanidina; N-(exo-2-isobornil)-N'--(o-iodofenil)guanidina; N,N'-di-(exo-2-norbornil)guanidina; N-(exo-2-isobornil)-Ν'-(2-metilfenil)guanidina; N-(o-iodofenil)--N'-(t-butil)guanidina; Ν,Ν'-dibenzilguanidina; N-(adamantan-l--il)-N'-(o-isopropilfenil)guanidina; N-(adamantan-l-il)-Ν'-(4--bromo-2-metilfenil)guanidina; N-(ciclo-hexil)-N'-(4-bromo-2-me-tilfenil)guanidina; N-(4-azido-2-metilfenil)-Ν'-(2-metilfenil)-guanidina; N-(2-metil-4-nitro-5-bromofenil)-N'-(2-metil-4,5-di-bromofenil)guanidina; N,N'-di-(o-iodofenil)guanidina; N,N'-di-(3--metilfenil)guanidina; N,N'-di-(m-etilfenil)-2-imino-imidazolidi-na; N-(l-naftil)-N'-(2-iodofenil)guanidina; N,N'-di-(4-indanil)-guanidina; N-(adamantan-l-il)-N'-(2-trifluorometil)guanidina; N-(adamantan-1-i1)-N'-(2-meti1feni1)-N'-metilguanidina; N-(ada-mantan-l-il)-N'-(6-cumarinil)guanidina; N-(adamantan-l-il)-N'--(2,4-difluorofenil)guanidina; e N-(adamantan-l-il)-N'-(2-triflu-orometil)-4-fluorofenil)guanidina. 17a. - Método de acordo com a reivindicação 16, caracterizado por a referida guanidina dissubstituída em N,N' ser N-(ciclo-hexil)-Ν'-(4-bromo-2-metilfenil)-guanidina. 104 18a. - Método de acordo com a reivindicação 16, carácter izado por a referida guanidina dissubstituída em N,N' ser N-(adamantan-l-il)-Ν'-(2-trifluorometilfenil)guanidina. 19a. - Método de acordo com a reivindicação 16, carácter izado por a referida guanidina dissubstituída em N,N' ser N-(adamantan-l-il)-Ν'-(2,4-difluoro-fenil)guanidina. 20a. - Método de acordo com a reivindicação 18, carac-terizado por a referida guanidina dissubstituída em N,N' ser N-(adamantan-l-il)-N'-(2-trifluoro-metil-4-fluorofenil)guanidina. 2ia. - Método para o tratamento ou profilaxia da ansiedade num animal susceptível à ansiedade, caracterizado por compreender a administração a um animal apresentando sintomas de ansiedade ou susceptível à ansiedade, de uma quantidade ansiolí-tica de 0,1 mg a 5 g de uma guanidina dissubstituída em N,N' tendo a fórmula: NH II R-X-NH-C-NH-Y-R' em que X e Y são independentemente um C^-C^ alquileno de cadeia linear ou ramificada ou um c2-ci2 alquileno não saturado de cadeia linear ou ramificada ou em que um de entre X e Y é uma ligação simples; R e R' são independentemente hidrogénio, um grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos de carbono, um grupo arilo carbocíclico com pelo menos 6 átomos de carbono, aralquilo com pelo menos 6 átomos de carbono, e contendo 1 a 3 aneis separados ou condensados, um anel heterocíclico, ou um grupo heteroarilo; e em que cada um de entre R e R' pode ser substituídos em 1 a 3 posições, 105 ou em que R e R' em conjunto com o grupo guanidina ao qual estão ligados formam um anel cíclico saturado ou não saturado contendo pelo menos 2 átomos de carbono com exclusão do átomo de carbono da guanidina, e em que o referido anel cíclico pode ser substituído com um ou mais grupos alquilo com 1-6 átomos de carbono, grupos carbocíclicos com pelo menos 6 átomos de carbono, grupos cicloalquilo com 3-12 átomos de carbono, ou 1 a 2 aneis aromáticos condensados. 22a. - Método de acordo com a reivindicação 21, carácter izado por o referido composto ser dibenzilguanidina.
  2. 232. - Método para o tratamento ou profilaxia da ansiedade num animal susceptível à ansiedade, caracterizado por compreender a administração a um animal apresentando sintomas de ansiedade ou susceptível à ansiedade, de uma quantidade ansiolí-tica de 0,1 mg a 5 g uma guanidina dissubstituída em N,N' tendo a fórmula: NH II R-X-N-C-N-Y-R' em que n é 2, 3, 4 ou 5; X e Y são independentemente uma ligação simples, um c^~c±2 alquileno cadeia linear ou ramificada ou um ^2~C12 al<luiieno não saturado de cadeia linear ou ramificada; R e R' são independentemente hidrogénio, um grupo cicloalquilo com pelo menos 3 átomos de carbono, um grupo arilo carbocíclico com pelo menos 6 átomos de carbono, aralquilo com pelo menos 6 átomos de carbono, e contendo 1 a 3 aneis separados ou condensados, um anel heterocí-clico, ou um grupo heteroarilo; e em que cada um de entre Re R'
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