PT94982B

PT94982B - Processo para a preparacao de peptidos com accao antagonista contra bradiquinina e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT94982B
Application number: PT94982A
Authority: PT
Inventors: Bernward Scholkens; Stephan Henke; Gerhard Bripohl; Herman Gerhards
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1989-08-14
Filing date: 1990-08-13
Publication date: 1997-04-30
Also published as: NO903545D0; HU904989D0; NO903545L; JP2997519B2; FI102759B1; JPH0386898A; NO178433B; RU2081880C1; FI102759B; CA2023194A1; EP0413277A1; CS397990A3; NO178433C; FI903971A0; IE65356B1; DK0413277T3; NZ234861A; IL95357A; HUT54712A; EP0413277B1

Description

DESCRIÇÃO

A presente invenção refere-se a novos peptidos com acção antagonista contra bradiquinina, bem como a um pre ι

cesso para a sua preparaçao.

Péptidos com acção antagonista contra bradi- { quinina são descritos na WO 86/07263, nos quais ê substituido entre outros, L-Pro na posição 7 da hormona peptídica bradiquinina ou de outros análogos da bradiquinina, por um D-aminoãcido, tal como D-Phe, D-Thi, D-Pal, CDF, D-Nal, MDY, D-Phg, D-His, D-Tyr, D-hPhe, D-Val, D-Ala, D-His, D-Ile, D-Leu e DOMT. j

A presente invenção tem como objectivo apresentar novos péptidos activos com efeito contra a bradiquinina.

Tal objectivo é solucionado através dos peptidos da Fórmula geral I j

A-B-C-E-F-K-(D)-Phe-G-M-F'-I (I) j na qual ;

A representa ' ί

- 1 a^) hidrogénio, alquilo com C1-V8, alcanoilo com Cl-C8,alcóxi-carbonilo com C1-C8 no radical alcoxi, ou alquil-sulfonilo com C1-C8, nos quais respectivamente 1,2 ou 3 ãtomos de hidrogénio são substituídos eventualmente por 1,2 ou 3 radiais iguais ou diferentes da série carboxi, amino, alquilo com C1-C4, alquil-amino com Cl-C4, hidroxi, alcoxi com C1-C4, halogênio, dialquil-amino tendo os radicais alquilo C1-C4, carbamoílo, sulfamoilo, alcõxi-carbonilo tendo o radical alcoxi C1-C4, arilo com C6-C12 e aril-alquilo tendo o radical arilo C6-C12 e o radical alquilo C1-C5, ou nos quais respectivamente ;

ãtomo de hidrogénio ê eventualmente substituído por um radical da série

I cicloalquilo com C3-C8, alquil-sulfonilo com C1-C4, alquil -sulfinilo com C1-C4, aril-alquilsulfonilo tendo o radical arilo C6-C12 e o radical alquilo C1-C4, aril-alquilsulfinilo tendo o radical arilo C6-C12 e o radical alquilo C1-C4, ariloxi com C6-C12, hetero-arilo com C3-C9 e heteroarilõxi com C3-C9, e

ou 2 ãtomos de hidrogénio são substituidos por 1 ou 2 radicais iguais ou diferentes da série carboxi, amino, alquil-amino com C1-C4, hidroxi, alcéxi som C1-C4, halogênio, dialquil-amino tendo os radicais alquilo C1-C4, carbamoílo, sulfamoilo, alcõxi-carbonilo tendo o radical alcoxi C1-C4, arilo com C6-C12 e aril-al quilo tendo o radical arilo C6-C12 e o radical alquilo C1-C5;

a₂) cicloalquilo com C3-C8, carbamoílo eventualmente substituído no ãtomo de azoto com alquilo com C1-C6 ou arilo ' com C6-C12, arilo com C6--C12, ariloilo com C7-C13, aril- j -sulfonilo com C6-C12 no radicai arilo, hetero-arilo com C3-C9 ou heteroarrloilo com C3-C9, em que nos radicais í

definidos em a^) e a^) respectivamente os radicais arilo, heteroarilo, ariloilo, aril-sulfonilo e heteroariloilo são eventualmente substituidos com 1,2 3 ou 4 radicais iguais ou diferentes da série j carboxi, amino, nitro, alquil-amino com C1-C4, hidró xi, alquilo com C1-C4, alcóxi com C1-C4, halogénio, ciano, dialquil-amino com C1-C4 nos radicais alquilo carbamoílo, sulfamoilo e alcõxicarbonilo com C1-C4 no radical alcóxi; ou a^) um radical com a fórmula geral II R¹-N-CH-C¹2'3 (IT)

RR 0 ^{1 }} na qual r! tem as definições apresentadas para A nas alíneas a^) ou a₉) ^z

R representa hidrogénio ou metilo,

R representa hidrogénio ou alquilo com C1-C6, de preferência alquilo com C1-C4, eventualmente substituido com amino, amino substituido, hidróxi, carboxi, carbamoilo, guanidino substituido, ureido, mercapto, metil-mercapto, fenilo, 4-cloro-fenilo, 4-fluor-fenilo, ! 4-nitro-fenilo, 4-metoxi-fenilo, 4-hidroxi-fenilo, fta limido, 4-imidazolilo, 3-indolilo, 2-tienilo, 3-tieniq lo, 2-piridilo, 3-piridilo ou ciclo-hexilo, em que amino substituido significa um agrupamento da fórmula -NH-A- e guanidino substituido significa um agrupamento da fórmula -NH-C(NH)-NH-A, nas quais A tem as definições apresentadas ι para A nas alíneas a^) ou a₂);

B representa um aminoácido básico com a configuração L ou D, no qual a cadeia lateral pode ser substituída;

I

C representa um agrupamento com as fórmulas Illa ou Illb

G'-G'-Gly (Illa) nas quais G' representa, com a fórmula IV

R⁴

I

- N G'-NH-(CH„) -CO 2 n (Illb) independente do outro, um radical

CH - C i na qual R e R representam em conjunto com os átomos aos quais se encontram ligados um sistema anelar heterociclico monocíclico, bicíclico ou triciclico com 2 a 15 átomos de carbono, e n representa 2 a 8;

E representa um radical de um aminoácido aromático;

F representa independentemente do outro, um radical de um aminoãcido neutro, ácido ou básico, alifático ou aromático, que pode ser substituído na cadeia lateral, ou representa uma ligação directa;

(D)-Phe significa D-fenilalanina que pode eventualmente ser subs tituida no radical fenilo;

G tem as definições anteriormente apresentadas para G' ou repre senta uma ligação directa;

F' tem as definições anteriormente apresentadas para F ou repre senta um radical -NH-(CH₂) - com n = 2 a 8; ou se G não repre sentar uma ligação directa, pode representar uma ligação directa; e

I representa -OH, -NH₂ ou -NHC₂H,-;

K representa um radical -NH-(CH_) -CO- com x = 1-4 ou uma liga ção directa; e

M tem as definições apresentadas para F; ;

bem como os seus sais fisiologicamente toleráveis;

Salvo indicação em contrário, a abreviatura de um radical de aminoãcido sem indicador estereo representa um radical na forma

I

L (ver Schroder, Lubke, The Peptides, Vol. I, New York 1965, pá ginas XXII-XXIII; Houben-Weyl, Methodes der Organischen Chemie, Vol. XV/1 e 2, Stuttgart 1974); como por exemplo

Aad, Abu, 7'Abu, ABz, 2ABz, eAca, Ach, Acp, Adpd, Ahb, Aib, / Aib, Ala, h Ala, Λ Ala, Alg, All, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr,

Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys, j

Cyta, Daad, Dab, Dadd, Dap, Dapm, Dasu, Djen, Dpa, Dtc,

Fel, Gin, Glu, Gly, Guv, hAla, hArg, hCys, hGln, hGlu, His, hlle, hLeu, hLys, hMet, hPhe, hPro, hSer, hThr, hTrp, hTyr,

Hyl,	Hyp,	3Hyp,	Ile	, Ise,	Iva, Kyn, Lant, Lcn,	Leu, Lsg
í^Lys	, λ Lys	, Met	., Mim, Min	., nArg, Nle, Nva, Oly	, Orn,
Pan,	Pec,	Pen,	Phe,	Phg,	Pic, Pro, aPro, Pse,	Pya, Pyr,
Pza,	Qin,	Ros,	Sar,	Sec,	Sem, Ser, Thi, Thi,	Thr, Thy,
Thx,	Tia,	Tle,	Tly,	Trp,	Trta, Tyr, Vai.

Como radicais de um sistema anelar heterocíclí co da fórmula IV podem considerar-se em especial os radicais dos heterocíclos do seguinte grupo:

Acido pirrolidina-2-carboxílico; ãcido piperidina-2-carboxílico; ãcido 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3-carboxílico; ãcido decahdiroisoquinolina-3-carboxilico; ãcido octahidroindol-2-carboxílico; ãcido decahidroquinolina-2-carboxílico; ãcido octahidrociclopenta/b/pirrol-2-carboxílico; ãcido 2-aza-biciclo/2.2.2/octano-3-carboxílico; ãcido 2-azabiciclo/2.2.l/heptano-3-carboxílico; ãcido 2-azabiciclo-/3.1.0/hexano-3-carboxílico; ácido 2-azas piro/4.4/nonano-3-carboxílico; ãcido 2-azaspiro/4.5/decano-3-caf boxllico; ãcido spiro/(biciclo/2.2.l/-heptano)-2,3-pirrolidina-5-carboxílico/; ácido spiro/(biciclo/2.2.2/octano)-2,3-pirrolidina-5-carboxilico/; acido 2-azatriciclo/4.3.01 ' /decano-3-carboxílico; ãcido decahidrociclohepta/b/pirrol-2-carboxílico; ãcido decahidrocicloocta/b/pirrol-2-carboxílico; ãcido octahidrociclopenta/c/pirrol-2-carboxílico; ãcido octahidroisoindol-l- ; -carboxilico; ãcido 2,3,3a,4,6a-hexahidrociclopenta/b/pirrol-2- ; -carboxílico; ãcido 2,3,3a,4,5,7a-hexahidroindol-2-carboxílico; ; ãcido tetrahidrotiazol-4-carboxílico; ãcido isoxazolidin-3-carboxílico; ácido pirazolidin-3-carboxílico; ãcido hidroxiprolina-2-carboxílico; que podem todos ser substituídos:

N \

co-

0N (

coCO^c°- · CfVcoI Ν M

COHO coC>— co- ;

Ύ os heterociclos dos quais derivam os radicais acima referidos são conhecidos por exemplo das patentes

US-A 4 344 949, US-A 4 374 847, US-A 4 350 704,

EP-A	50	800, EP-A 31	741, EP-A 51 020	, EP-A 49	658,
EP-A	49	605, EP-A 29	488, EP-A 46 953	, EP-A 52	870,
EP-A	271	865, DE-A 32	26 768, DE-A 31	51 690,
DE-A	32	10 496, DE-A	32 11 397, DE-A	32 11 676	r
DE-A	32	27 055, DE-A	32 42 151, DE-A	32 46 503	e
DE-A	32	46 757.

Para além disso são propostos alguns desses heterociclos na DE-í -A 38 18 850.3.

Salvo indicação em contrário nalguns casos, os grupos alquilo podem ser de cadeia linear ou ramificada. O mesmo se aplica aos radicais destes derivados, tais como alcóxi, aralquilo ou alcanoilo.

Arilo com C6-C12 representa de preferência fenilo, naftilo ou bifenililo. Devem ser formulados correspondentemente os radicais ΐ destes derivados, tais como ariloxi, aralquilo ou aroilo. i . Halogénio representa flúor, cloro, bromo ou iodo, de preferên*) cia cloro.

Como sais podem considerar-se de preferência os sais alcalinos ou de terras alcalinas, sais formados com aminas fisiológicamente toleradas e sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos, como por exemplo HCl, HBr, H^SO^, H^PO^, ácido maleínico, ácido fumãrico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido acético.

Da-se preferência aos péptidos da fórmula I, na qual

B representa Arg, Lys, Orn, 2,4-diamino-butiroilo ou um radical L-homoarginina, podendo o grupo amino ou guanidino da cadeia lateral ser substituído com A conforme descrito nas alíneas a^) ou a₂);

E representa o radical de um aminoácido aromático na configuração L ou D, apresentando no radical arilo 6 a 14 átomos de carbono como elementos do anel, tais como fenilalanina, eventualmente substituído com halogénio na posição 2, 3 ou 4, tirosina, O-metil-tirosina, 2-tienil-alanina, 2-piridil-alanina ou naftil -alanina;

I

F' representa o radical de um aminoácido básico na configuração

L ou D, tal como Arg ou Lys, podendo o grupo amino ou guanidino da cadeia lateral ser substituído com A conforme descrito nas alíneas a.) ou a_), ou um radical -NH-(CKL) - com n = 2 a 8; i z 2. n

K representa o radical -NH-(CH-) -CO- com x = 2-4 ou uma ligaí. X ção directa;

(D)-Phe representa D-fenilalanina, que pode eventualmente ser ; substituída no radical fenilo com halogénio ou alcoxi com Cl-C4.

Dá-se especial preferência aos péptidos da fórmula I, na qual

B representa Arg, Orn, ou Lys, podendo o grupo guanidino ou ami_ no da cadeia lateral ser não substituído ou substituído com alcanoilo com C1-C8, ariloilo com C7-C13, hetero-ariloilo com C3C9, alquil-sulfonilo com C1-C8 ou aril-sulfonilo com C6-C12, po^ dendo os radicais arilo, hetero-arilo, ariloilo, aril-sulfonilo e hetero-ariloilo ser eventualmente substituídos como descrito na alínea a₂) com 1,2,3 ou 4 radicais iguais ou diferentes. j

E representa fenil-alanina, 2-cloro-fenilalanina, 3-cloro-fenil alanina, 4-cloro-fenilalanina, 2-fluor-fenilalanina, 3-fluor-fenilalanina, 4-fluor-fenilalanina, tirosina, O-metil-tirosina ou -(2-tienil)alanina;

K representa uma ligação directa;

M representa uma ligação directa e (D)-Phe representa D-fenilalanina, que pode eventualmente ser substituida com fluor, cloro, bromo ou metõxi.

Da-se muito especialmente preferência aos pêptidos da fórmula I na qual

A representa hidrogénio, (D)- ou (L)-H-Arg, (D)- ou (L)-H-Lys, ou (D)- ou (L)-H-Orn;

B representa Arg, Orn, ou Lys, podendo o grupo guanidino ou amino da cadeia lateral ser substituido por hidrogénio, alcanoilo com C1-C8, ariloilo com C7-C13, hetero-ariloilo com C3-C9, alquil-sulfonilo com C1-C8 ou aril-sulfonilo com C6-C12, podendo os radicais arilo, hetero-arilo, ariloilo, aril-sulfonilo e ₍hetero-ariloilo ser eventualmente substituídos com 1,2 3 ou 4 radicais iguais ou diferentes da série metilo, metõxi e halogênio.

C representa Pro-Pro-Gly, Hyp-Pro-Gly ou Pro-Hyp-Gly;

E representa Phe ou Thia; i j

F representa Ser, Hser, Lys, Leu, Vai, Nle, Ile, ou Thr;

I

K representa uma ligação directa; ί M representa uma ligação directa;

I

G representa um radical de um sistema anelar heterocíclico da fórmula IV, dando-se preferência aos radicais dos heterociclos : ãcido pirrolidina-2-carboxílico;

ãcido piperidina-2-carboxílico; ãcido 1,2,3,4-tetrahidroisoquiij nolina-3-carboxílico; ãcidos cis e trans-decahidroisoquinolinah -3-carboxílico; ãcidos cis-endo, cis-exo, trans-octahidroindol-2

-2-carboxílico; ácidos cis-endo-, cis-exo- trans-octahidrociclo ! pentano/b/pirrol-2-carboxílico ou ãcido hidroxiprolina-2-carbo' xílico;

^_! F' representa ARg;

I representa OH e (D)-Phe representa D-fenilalanina.

A presente invenção refere-se ainda a um processo para preparação dos péptidos da fórmula I, caracterizado por

a) se fazer reagir um fragmento com um grupo carboxilo livre na extremidade C ou um seu derivado activado com um correspondente fragmento com um grupo amino livre na extremidade N; ou

b) se construir o peptido passo a passo, eventualmente se elimi naram no composto obtido de acordo com a) ou b) um ou mais grupos de protecção inseridos temporariamente para protecção de outras funções, e eventualmente se transformarem os compostos da fórmula I assim obtidos nos seus sais fisiologicamente toleráveis .

Os péptidos da presente invenção foram prepar, í

rados de acordo com os métodos geralmente conhecidos da química’ dos péptidos, ver por exemplo Houben-Weyl, Methoden der orga- j nischen Chemie, Vol 15/2, de preferência com o auxílio da sín-i tese de fase sólida como por exemplo descrito por B.Merrifield,; J .Am. Chem. Soc. 85, 2149 (1963) ou R.C. Sheppard, Int. J. Peptide! Protein Res. 21, 118 (1983), ou através de métodos equivalentes' Como grupo de protecção da função i-amino são utilizados grupos’ de protecção uretano como por exemplo os grupos de protecção tert.-butil-oxicarbonilo (BOC) ou fluorenil-metiloxicarbonilo (Fmoc). Caso seja necessário para evitar reacções secundárias ou para a síntese de péptidos especiais, protegem-se adicional' I mente os grupos funcionais das cadeias laterais dos aminoãcidosÍ i - ~ ' í através de grupos de protecção adequados (ver p.e. T.W. Greene '

Protective Groups in Organic Synthesis), sendo utilizados de preferência

Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Arg(Pmc), Asp(OBzl), Asp(OBut), Cys(4-MeBzl), Cys(Acm), Cys(SBut), Glu(OBzl), Glu(OBut), His( Tos), His(Fmoc), His(Dnp), His(Trt), Lys(Cl-Z), Lys(Boc), Met (0), Ser(Bzl), Ser(But), Thr(Bzl), Thr(But), Trp(Mts), Trp(CHO) •jí Tyr(Br-Z), Tyr(Bzl) ou Tyr(but).

A síntese de fase sólida inicia-se na extremidade C do péptido com a acoplação de um aminoácido protegido a uma resina adequada. Tais materiais de partida podem ser obi tidos através de ligaçao de um aminoácido protegido a uma resína de poliestireno ou poliacrilamida modificadas com um grupo clorometilo, hidroxi-metilo, benzhidrilamino(BHA), meitlbenzhi-: drilamino(MBHA), através de uma ligação éster ou amídica. As i resinas utilizadas como material de suporte são comercializadas As resinas BHA e MBHA são normalmente utilizadas quando se pretende que o péptido sintetizado apresente na extremidade C um grupo amino livre. No caso de se pretender que o péptido apre- i sente na extremidade C um grupo amido secundário, utiliza-se i uma resina cloro-metílica ou hidrõxi-metílica, e procede-se à cisão com as respectivas aminas. Se por exemplo se pretender ob ter a etilamida, o péptido pode ser eliminado da resina com e- _:tilamina, fazendo-se depois a eliminação dos grupos de protecção das cadeias laterais com outros reagentes adequados. No cai so de se pretender que se mantenham no péptido os grupos de proí tecção tert.- butilo da cadeia lateral do aminoácido, procede-se a síntese com o grupo de protecção Finco para bloqueio temporário do grupo -amínico do aminoácido, segundo a mdodologia descrita por R.C: Sheppard, J.Chem.Soc., Chem.Comm. 1982, 587, sendo a função guanidina da arginina protegida através de protonizaçao com perclorato de piridinio, e a protecção dos outros aminoácidos com funções nas cadeias laterais feita com grupos de protecção benzilo elimináveis por hidrogenação catalítica por transferência (A.Felix et al., J.Org.Chem. 13, 4194 (1978) ou por meio de sõdio em amoníaco líquido (W.Roberts, J.Am.Chem.Soc 76, 6203 (1954).

Após eliminação do grupo amino do aminoácido acoplado a resina com um reagente adequado, como p.e. ãcido tri -fluor-acético em cloreto de metileno no caso do grupo de protecção Boc ou uma solução de piperidina a 20% em dimetilformami da no caso do grupo de protecção Fmoc, são acoplados uns após os outros os aminoácidos protegidos, na sequência desejada. As resinas peptídicas protegidas na extremidade N, formadas intermediariamente, são desbloquedas antes da ligação com o derivado de aminoácido seguinte, por meio dos reagentes acima descritos.

Como reagentes de acoplação pode ser utilizados todos os reagentes possíveis na química dos péptidos para activação, ver p.e. Houben-Weyl, Methoden der organischen Che-| mie, Vol. 15/2, mas em especial as carbodiiminas tais como p. e. N ,N ¹-diciclohexil-carbodiimida, N,N¹-diisopropil-carbodiimida ou N-etil-N¹ -(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida, A acoplação pode ser feita directamente através de adição do derivado de aminoãcido com o reagente de activação, e eventualmente com adição de um agente para evitar a racemização, como p.e. 1-hidrõxi-benzotriazol (HOBt) (W.Konig, R. Geiger, Chem, Ber. 103, 708 (1970) ou 3-hidróxi-4-oxo-3,4-dihidrobenzotriazina (HOOBt) (W.Konig, R.Geiger, Chem.Ber. 103, 2054 (1970)) de modo a obter a resina, ou através de pré-activação do derivado de aminoãcido; como anidrido simétrico ou éster de HOBt ou HOObt em separado, e juntando-se a solução do composto activado num solvente adequado à resina peptídica para acoplação.

A acoplação ou activação dos derivados de aminoãcidos com um dos reagentes de activação acima referidos ί pode ser feita em dimetil-formamida, N-metil-pirrolidona ou cio reto de metileno, ou numa mistura dos solventes citados. O derivado de aminoãcido activado é normalmente utilizado num excesso de 1,5 a 4 vezes. Nos casos em que a acoplação seja incompleta, repete-se a reacção de acoplação, sem se proceder antes ao desbloqueamento do grupo J- -amino da resina peptidina necessário para acoplar o aminoãcido seguinte.

A evolução com êxito da reacção de acoplação ~ I pode ser controlada com a reacçao da ninhidrina, conforme des- i crita p.e. por E.Kaiser et al., Anal. Biochem. 34, 595 (1970).

A sintese também pode ser feita automaticamente por exemplo com o auxílio de um sintetizador de peptídeos modelo 430A da firma Applied Biosystems, podendo ser utilizados os programas de sintese previstos pelo fabricante ou também programas concebidos i pelo próprio utilizador. Estes últimos são utilizados em espe- ¹ciai quando se utilizam derivados de aminoácidos protegidos com; o grupo Fmoc. j

Depois da sintese dos péptidos pelos proces- í sos acima descritos, os péptidos podem ser separados da resina ι

com reagentes, como p.e. hidrofluoreto líquido (ao qual se da preferência para os péptidos preparados pelo método Boc) ou ãcido trifluoracético (ao qual se dã preferência para os peptidos preparados pelo método Fmoc). Estes reagentes não só separam o péptido da resina, como também os restantes grupos de protecção das cadeias laterais dos derivados de aminoácidos. Desta forma obtém-se, salvo quando se utilizem resinas BHA e MBHA, o péptido sob a forma de ãcido livre. Com as resinas BHA e MBHA obtém-se apõs cisão com hidrofluoreto ou ãcido trifluor-metanosulfõnico, o péptido sob a forma de amida. Outros proce£ sos para preparação de peptidamidas são descritos na patente alemã P 37 11 866.8 e P 37 43 620.1. Nestas, a cisão das peptidamidas da resina faz-se através de tratamento com ãcidos moderados normalmente utilizados na química dos péptidos (p.e. ãcidos trifluor-acético), sendo adicionados como captadores de catiões substâncias tais como fenol, cresol, tiocresol, anisol, tioanisol, etano-ditiol, dimetil-sulfureto, etil-metil-sulfureto ou outros captadores de catiões usuais na sintese de fase sólida, ou uma mistura de dois ou mais destes agentes. O ãcido trifluor-acético pode ser utilizado diluido com solventes adequados, como p.e. cloreto de metileno.

No caso de se pretender manter os grupos de protecção tert.-butili ou benzilo nas cadeias laterais dos peptidos, procede-se ã cisão do péptido sintetizado numa resina de suporte especialmente modificada, com ãcido trifluor-acético a 1% em cloreto de metileno, como descrito p.e. por R.C. Sheppard, J.Chem.Soc., Chem.Comm. 1982, 587. No caso de se pretender manter alguns grupos de protecção tert.-butilo ou benzilo isolados das cadeias laterais, utiliza-se uma combinação adequada de métodos de síntese e de cisão.

Para a sintese de péptidos com um grupo amido' ou w-amino ou w-guanidino-alquilo na extremidade C utiliza-se igualmente a resina de suporte modificada descrita por Sheppard Após a sintese, elimina-se o péptido totalmente protegido na cadeia lateral da resina de suporte, e em seguida faz-se reagiri numa sintese clássica com solvente, com a respeotiva amina ou ι w-aminoalquilamina ou w-guanidinoalquilamina, podendo eventual-j mente ser protegidos de forma temporária outros grupos fundo12 nais existentes pelos processos conhecidos,

Um outro processo para a preparação de peptidos com um grupo -aminoalquilo ê descrito na EP-A 264 802.

Os péptidos a que se refere a presente invenção foram sintetizados de preferência utilizando a técnica da fase sólida, segundo duas táticas gerais dos grupos de protecção :

A sintese foi efectuada com um sintetizador de péptidos automático, modelo 430 A da firma Applied Biosystems, utilizando grupos de protecção Boc ou Fmoc para bloqueio temporário do grupo -amínico.

Em caso de utilização do grupo de protecção Boc foram utilizados os ciclos de sintese programados pelo fabricante do aparelho.

A sintese dos péptidos com um grupo carboxilo livre na extremidade C-terminal fez-se sobre uma resina 4- (hidroximetil) fenilacetamido-metil-poliestireno funcionalizada com: o respectivo aminoácido protegido com Boc (R.B. Merrifield, J.

I

Org. Chem. 43, 2845 (1978)), da firma Applied Biosystems. Para a preparação das peptidamidas foi utilizada uma resina MBHA da i mesma firma. ί ~ I

Como reagentes de activaçao foram utilizados

N ,N ¹-diciclohexil-carbodiimida ou N,N'-diisopropil-carbodiimida

A activação fez-se sob a forma de anidrido simétrico, de éster

HOBt ou éster HOObt, em CH„C1„, misturas de CH_C1 -DMF ou NMP. !

2 2 2 í

Para a acoplação foram utilizados 2-4 equivalentes de derivados activado do aminoácido. Nos casos em que a acoplação foi incompleta, repetiu-se a reacção.

No caso da utilização do grupo de protecção ί Fmoc para protecção temporária do grupo -amínico, foram introduzidos para a sintese com o sintetizador automático de peptidos, modelo 430 A da firma Applied Biosystems, programas de sin tese próprios. A sintese foi efectuada com uma resina de álcool p-benziloxi-benzí lico (s.Wang J .Am. Chem. Soc. , 9 5, 1328 (1973)) da firma Bachem, que se apresentava sterificada pelos métodos usuais (E. Atherton et al., J.C.S.Chem.Comm. 1981, 336) com o respectivo aminoácido.

Ά activação dos derivados dos aminoácidos como ésteres de HOBt ί ou HOObt fez-se directamente nas cassetes de aminoácidos for-, necidas pelo fabricante do aparelho, através da adição de uma solução de diisopropil-carbodiimida em DMF à mistura previamente pesada do derivado de aminoácido e HOBt ou HOObt. Podem igualmente ser utilizados os ésteres Fmoc-aminoãcido-OObt preparados em substância tal como são descritos na EP-A 247 573. A eliminação do grupo de protecção Fmoc fez-se com uma solução a 20% de piperidina em DMF, no recipiente de reacção. O excesso de derivado reactivo do aminoácido utilizado era de 1,5 a 2,5 equivalentes. No caso de a acoplação não ser completa, foi repetida como no método do Boc.

Os péptidos a que se refere a presente invenção possuem em separado ou combinados, um efeito antagonista da bradiquinina, que pode ser testado em diferentes modelos (ver Handbook of Exp. Pharmacol. Vol. 25, Springer Verlag, 1970, pág. 53-55), assim por exemplo no útero isolada da ratazana, no ileo do porquinho da índia, ou na artéria pulmonar isolada do porquinho da índia.

Para testar os péptidos a que se refere a pre sente invenção na artéria pulmonar isolada, os porquinhos da índia (Dunkin Hartley) com um peso de 400-450 g foram sacrificados por golpe na nuca.

Abriu-se a caixa torãxica, e removeu-se cuida dosamente a artéria pulmonar. Separou-se cuidadosamente os te- í (

eidos adjacentes, e cortou-se a artéria pulmonar em espiral, com um ângulo de 45°.

Fixou-se o pedaço de tecido com 2,5 cm de comprimento e 3-4 mm de largura, num recipiente para banho de orgãos, com 10 ml de capacidade, contendo solução de Ringer. Composição da solução em mmol/1:

154

5,6

1,9 2,4 5,0

NaCl

KC1

CaCl₂

NaHCO₃

Glucose

Borbulhar através da solução 95% de 0„ e 5% de C0~ ^Y 2 2 e aquecer a ι

37°C. 0 pH ê de 7,4, e a sobrecarga prévia na tira de tecido ê de 1,0 g.

As alterações isotõnicas de contracção são j detectadas com uma alavanca e um HF-Modem de Hugo Sachs, e registadas com um sistema de compensação (BEC, Goerz Metrawatt SE 460) .

Ao fim de 1 hora para equilibrar, inicia-se o ensaio. Depois de^ as tiras de tecido terem atingido a sua máxima sensibilidade a -7 x lo mol/1 de bradiquinina- a bradiquinina conduz a uma contracção das tiras de tecido - deixam-se actuar os péptidos _ g durante respectivamente 10 minutos, em doses de 5 x 10 a 1 x -5 mol/1, e apos nova adiçao de bradiquinina, compara-se a redução do efeito da bradiquinina em comparação com o controle.

Para conhecimento de um efeito parcialmente antagónico são uti-í -5 -3 lizados péptidos em doses de 1 x 10 a 1 x 10 mol/1.

Os valores de ΙΟ^θ calculados a partir das curvas de dose/efeito para os péptidos a que se refere a presente invenção são apresentados na Tabela 1.

Tabela 1:

!

Composto ^IC50 ·

H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Phe-Oic-Arg-OH 1,4x10 θ

I

As vantagens terapêuticas dos péptidos a que se refere a pre- ; sente invenção abrangem todos os estados patológicos, que podem ser mediados, provocados ou apoiados pela bradiquinina. Trata-se por exemplo de traumatismos, tais como feridas, queimaduras erupções, eritemas, edemas, angina de peito, artrites, asma, alergias, rinites, estados de choque, inflamações, tensão arterial baixa, dores, prurido e alterações da motilidade dos esper matozõides.

Assim, a presente invenção refere-se também à utilização de pep tidos da fórmula I como medicamentos e composições farmaceuti- ί cas que contêm estes compostos.

As composiçoes farmacêuticas contêm uma quantidade eficaz dos I ingredientes activos da fórmula I - isoladamente ou em combina-.

ção - em conjunto com um excipiente orgânico farmaceuticamente utilizável.

A aplicação pode ser feita por via entérica, parentéríca - como¹p.e. subcutânea, i.m. ou i.v. - sublingual, epicutânea, nasal, rectal, intravaginal, intrabucal ou através de inalação. A dosagem do ingrediente activo depende da espécie do mamífero, do peso corporal, da idade e da forma de aplicação.

As composições farmacêuticas da presente invenção são preparadas pelos processos de dissolução, mistura, granulação e drageificação já conhecidos.

Para as formas de aplicação orais ou para aplicação sobre as i mucosas, os compostos activos são misturados com os adjuvantes usuais para o efeito, tais como excipientes, estabilizadores ou diluentes inertes, e transformados pelos métodos usuais nas formulações galénicas adequadas, tais como comprimidos, drageias, cápsulas, suspensões aquosas, alcoólicas ou oleosas, ou so luções aquosas, alcoólicas ou oleosas. Como excipientes inertes podem ser utilizados, por exemplo, goma arábica, magnésia, carbonato de magnésio, fosfato de potássio, lactose, glucose, estearil-fumarato de magnésio ou amido, em especial amido de milho. A preparação pode ser feita tanto sob a forma de granulado húmido como seco. Como excipientes os solventes oleosos podem ser considerados, por exemplo, óleos vegetais ou animais, tais como óleo de girassol ou óleo de fígado.

Uma preparação para aplicação tópica podem apresentar-se sob a forma de solução loção, emulsão ou geleias aquosa ou oleosa, pomada ou pomada gorda, ou se possível, sob a forma de spray, podendo a aderência ser eventualmente melhorada através da adição de um polímero.

Para as formas de aplicação intranasais, os compostos são misturados com os adjuvantes usuais para o efeito, tais como estabilizadores ou diluentes inertes, e transformados pelos métodos usuais nas formulações galénicas adequadas, tais como suspensões aquosas,, alcoólicas ou oleosas, ou soluções aquosas, alcoólicas ou oleosas. As preparações intranasais aquosas podem conter ainda agentes formadores de quelatos, ãcido etilenodiamino-N,N,N ,N -tetracético, ãcido cítrico, ãcido tartárico ou os seus sais. A aplicação das soluções nasais pode ser feita por meio de pulverizadores de dosagem, ou sob a forma de gotas nasais contendo componentes para aumentar a viscosidade ou sob a forma de geles ou cremes nasais.

Para a aplicação inalativa podem ser utilizados nebulizadores ou embalagens com gãs de pressão, contendo gases inertes como excipiente.

Para a aplicação intravenosa, subcutânea, epicutânea ou intradérmica, os compostos activos sao incorporados em soluçoes, suspensões ou emulsões, se desejado com os adjuvantes farmacêu-j ticos usuais, por exemplo para isotonização, ou acerto do pH, bem como agentes de dissolução, emulsionantes, ou outros adjuvantes .

* ou os seus sais fisiolõgicamente toleráveis.

Devido ao curto tempo de semi-vida de alguns dos compostos farmacêuticos referidos nos fluidos orgânicos, é recomendável a utilização de preparações retard injectáveis. Como composições farmacêuticas podem ser utilizadas por exemplo suspensões oleosas de cristais, micro-cãpsulas, ou implantes, podendo estes últimos ser feitos de polímeros tolerados pelos tecidos, em especial polímeros biodegradáveis, como por exemplo à base de copolímeros de ãcido polilãctico e poliglicólico, ou de albumina humana.

Os limites de dosagem adequadas para as formas de aplicação tópica e inalativa são soluções com 0,01 - 5 mg/ml, e para as for mas de aplicação sistémicas são 0,01 - 10 mg/kg.

índice das abreviaturas:

As abreviaturas utilizadas para os aminoácidos correspondem ao cõdigo de três letras usual na química dos péptidos, tal como é descrito in Europ.J.Biochem. 138, 9 (19 84). As outras abrevia^ turas utilizadas são apresentadas em seguida. |

Acm acetamido-metilo

E-Ahx E-amino-hexanoilo i

Aoc cis, endo-2-azabiciclo/3.3.O/octano-3-S-carbo nilo ι

Boc tert.-butiloxi-carbonilo

But

Bzl

CDF

Cha

Chg

Cl-Z

DMF

DOMT

Dnp

Fmoc

MDY

Me

4-Mebzl

Mtr

Mts

Nal

NMP

Npg

Oic

Opr

Pal

Pmc

Tbg

TFA

Tes

Thia

Tic

Trt tert.-butilo benzilo cloro-(D)-fenilalanilo ciclohexil-alanilo ciclohexil-glicilo

4-cloro-benziloxi-carbonilo dimetilformamida

0-metil-(D)-treonilo

2.4- dinitro-fenilo

9-fluorenilmetiloxicarbonilo

0-metil-(D)-tirosilo metilo

4-metil-benzilo

4-metoxi-2,3,6-trimetilfenil-sulfonilo metisileno-4-sulfonilo naftil-alanilo

N-meti1-pirrolidina neopentil-glicilo cis-endo-octahidroindol-2-carbonilo isoxazolidina-3-il-carbonilo piridil-alanilo

2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonilo tert.-butil-glicilo ãcido trifluor-acêtico 4-metil-fenil-sulfonilo 2-tienil-alanilo

1.2.3.4- tetrahidroisoquinolina-3-il-carbonilo tritilo

Os exemplos seguintes destinam-se a ilustrar os métodos preferidos para a sintese de fase sólida dos péptidos a que se refere a presente invenção, sem no entanto limitarem a presente invenção .

Utilizaram-se os seguintes derivados de aminoácidos:

Fmoc-Arg(Mtr)-OH, Boc-(D)-Arg-OH, Fmco-Arg(Pmc)-OH; Fmoc-Hyp-OH Fmoc-Pro-OObt, Fmoc-Gly-OObt, Fmoc-Phe-OObt- Fmoc-Ser(tBu)-OObt , Fmoc-(D)-Phe-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Aoc-OH, Fmoc-Thia-OH, Fmoc -Opr-OH, Fmoc-(D)-Asn-OH, Fmoc- -Ala-OH, Fmoc-Oic-OH.

EXEMPLO 1

H-(D)-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-(D)-Phe-Oic-Arg-OH foi montado passo a passo com um sintetizador de péptidos modelo 430 A da firma Applied Biosystems, utilizando o método Fmoc numa resina de álcool p-benziloxi-benzílico esterificado com Fmoc-Arg(Mtr)-OH, da firma Novabiochem (carga aprox. 0,5 mmol/ j /g de resina).

Utilizou-se 1 g de resina, e a síntese foi realizada com o auxílio de um programa de síntese modificado para o método Fmoc.

Nos cartridges do sintetizador foram pesados respectivamente ^!1 mmol dos derivados de aminoácidos com grupo carboxílico livre junto com 0,95 mmol de HOObt. A prê-activação destes aminoãcidos foi feita directamente nos cartridges através de dissolução em 4 ml de DMF e adição de 2 ml de uma solução 0,55 molar de diisopropil-carbodiimina em DMF.

Os ésteres HOObt dos outros aminoácidos foram dissolvidos em 6 ml de NMP e depois acoplados tal como os aminoácidos activados in situ, ã resina previarnente desbloqueada com 20% de piperidina em DMF. Depois de terminada a sintese, o péptido foi separado da resina, com eliminação simultânea dos grupos de protecção das cadeias laterais, por meio de ãcido trifluor-acético, utili zando tioanisol e etanoditiol como agentes captadores de catiões. O resíduo obtido após evaporação do ãcido trifluor-acético! foi várias vezes digerido com acetato de etilo e centrifugado.

O resíduo assim obtido foi cromatografado sobre ^RSephadex LH 20 com ãcido acético a 10%. As fracções contendo o péptido puro foram reunidas z liofilizadas.

Claims

REIVINDICAÇÕES a₂)

Processo para a preparação de um péptido com acção antagonista contra bradiquinina de fórmula I

A-B-C-E-F-K-(D)-Phe-G-M-F’-I (I) na qual

A significa

I a^) hidrogénio, alquilo em C^-Cg, alcanóilo em C^-Cg, alcoxi -carbonilo em C^-Cg ou alquilo em C₁~Cg-sulfonilo, nos quais 1,
2 ou 3 átomos de hidrogénio são eventualmente substituídos por 1, 2 ou 3 radicais iguais ou diferentes escolhidos da série formada por carboxi, amino, alquilo em C₁~C₄, alquilamino em ^c1^-c4/ hidroxi, alcoxi em C₁~ C₄, halogénio, di-(alquilo em C^-C₄)-amino, carbamoílo, sulfamoílo, alcoxi-carbonilo em C^-C₄, arilo em Cg-C^g, (arilo em Cg-C^-alquilo em C^-Cg, ou respectivamente 1 átomo de hidrogénio é eventualmente substituído por um radical escolhido do conjunto que consiste em cicloalquilo em Cg-Cg, alquilo em C^-C^sulfonilo, alquilo em C^-C₄-sulfinilo, (arilo em Cg-C^g)(alquilo em sulfonilo, arilo em Cg-C^g)-(alquilo em C^-C₄)-sulfinilo ariloxi em C,-C_in, heteroarilo em C_o, heteroariloxi em b 12 □

Cg-Cg e 1 ou 2 átomos de hidrogénio são substituídos por

1 ou 2 radicais diferentes escolhidos do conjunto que consiste em carboxi, amino, alquilamino em C^-C₄, hidroxi, alcoxi, em ^c^“^c4, halogénio, di-(alquilo em C^-C^-amino, carbamoílo, sulfamoílo, alcoxicarbonilo em C^-C„, arilo em C--C.~ e (arilo em C,-C.„)-(alquilo em C.4 6 12 6 12 1

Cg) , OU cicloalquilo em Cg, carbamoílo que pode eventualmente ser substituído no átomo de azoto por alquilo em C^-Cg ou arilo em C arilo em C,-C_n^, arilõxi em C_-C_1O, b 12 6 12 /lo (arilo em C^₂)-sulfonilo ou heteroarilo em C^-C^ ^ou hete roariloilo em C^-C , em que, □ y a₃) nos radicais definidos em a^) e a₂), respectivamente os radicais heteroarilo, ariloílo, aril-sulfonilo e heteroariloilo são eventualmentej substituidos por 1, 2, 3 ou 4 substituintes escolhidos ί do conjunto formado por carboxi, amino, nitro, alquilamino em C^-C^, hidroxi, alquilo em C^-C^, alcoxi em C^~ -C^, halogênio, ciano, di-(alquilo em C^-C^)-amino, car bamoílo, sulfamoilo e alcoxicarbonilo em C -C., ou 14 significa um radical da fórmula II

R - N - CH - C (II)

R em que R¹ é definido como A sob as alineas a^) ou a₂),

R significa hidrogénio ou metilo e
3 R significa hidrogénio ou alquilo em C.-C,, de preferencia,

1 D alquilo em C^-C^, que eventualmente ê monosubstituido por amino, amino substituído, hidroxi, carboxi, carbamoílo, guanidino, guanidino substituído, ureído, mercapto, metil -mercapto, fenilo, 4-clorofenilo, 4-fluorfenilo, 4-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, 4-hidroxifenilo, ftalimido, 4-imi dazolilo, 3-indolilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo,

3-piridilo ou ciclo-hexilo, i em que amino substituído significa um agrupamento de fõr-í mula -NH-A e guanidino substituido significa um agrupamerr to de fórmula -NH-C(NH)-NH-A, em que A é definido como sej referiu em a^) ou a₂);

B significa um aminoãcido bãsico com a configuração L ou D que pode ser substituido na cadeia lateral;

G'-NH-(CH„) -CO 2 n significa um agrupamento das fórmulas Illa ou Illb G'-G'-Gly (Illa) (Illb) em que

- 21 G', independentemente do outro significa um radical de fórmula IV
4 5

R R 0 ' ' (IV)

- N - CH -C em que

4 5

R e R conjuntamente com os átomos a que se encontram ligados formam um sistema de anel heterocíclico monocíclico, bicíclico ou tricíclico com 2 a 15 átomos de C, e n é um número de 2 a 8;

E significa um radical de um aminoácido aromático;

F, independentemente do outro, significa o radical de um aminoãcido neutro, ácido ou básico, alifático ou aromático, que na cadeia lateral pode ser substituído ou uma ligação directa;

(D)-Phe significa D-fenilalanina que eventualmente pode ser substituída no agrupamento fenilo; j

G é como se definiu G' acima ou significa uma ligação directa;

F* é como se definiu F acima, significa um radical -NH-(CH₂-em que n = 2 a 8 ou, se G não significar uma ligação directa, pode representar uma ligação directa,

I é -OH, -NH₂ ou -NHC₂H₅ e

K significa o radical -NH-(CH„) -CO- em que x significa um £ X numero de 1 a 4 ou significa uma ligação directa e M é como se define F, assim como dos seus sais fisiologicamente aceitáveis, caracterizado por

a) se fazer reagir um fragmento com um grupo carboxilo livre,' na extremidade C ou um seu derivado activado com um correspondente fragmento com um grupo amino livre na extremidade N, ou

b) se construir o péptido passo a passo, no composto obtido de acordo com a) ou b), eventualmente se eliminarem um ou mais

I i

grupos de protecção inseridos temporariamente para a protecção de outras funções e eventualmente se transformarem os compostos de fórmula I assim obtidos nos seus sais fisiologicamente aceitáveis. !

í

0^a

- 2 - !

I

Processo de acordo com a reivindicação 1, ca-i racterizado por, como produto final, se obter um péptido de fórmula I, em que

B significa Arg, Lys, 2,4-diaminobutiroílo ou um radical de L-homoarginina, em que respectivamente o grupo amino ou o grupo guanidino da cadeia lateral pode ser substituido por A como se descreveu nas alíneas a^) ou a₂) na reivindicação 1;

E significa o radical de um aminoácido na configuração L ou D, que contêm 6 a 14 átomos de C como membros do anel, tal como fenilalanina, que eventualmente ê substituída por halogénio na posição 2, 3 ou 4, tirosina, O-metil-tirosina, 2-tienilalanina, 2-piridilalanina ou naftilalalina;

F' significa o radical de um aminoácido básico com a configuração L ou D como Arg ou Lys, em que o grupo guanidino ou o grupo amino da cadeia lateral pode ser substituido por A como se descreve nas alíneas ap ou a₂) na reivindicação 1 ou um radical

-NH-(CH- ( -em que n = 2 a 8 e 2 n

K representa o radical de fórmula -NH-(CH-) -CO- em que x = 2 a

4 e D-Phe significa D-fenilalanina em que eventualmente pode ser substituida no agrupamento fenilo por halogénio ou alcoxi em C.-C . .

1 4

Processo de acordo com as reivindicações 1 e/ou 2, caracterizado por, como produto final, se obter um péptido de fórmula I em que

B significa Arg, Orn ou Lys em que o grupo guanidino ou o grupo amino é não substituido ou pode ser substituido por alcanoilo em Ο^-Οθ, ariloílo em C-y-C^, heteroarilóilo em C^-C^, alquil·

-sulfonilo em C.-C- ou aril-sulfonilo em C,-C_n„, em que os ral o 6 12 dicais arilo, heteroarilo, arilóilo, aril-sulfonilo e heteroariloílo podem ser eventualmente substituídos por 1, 2, 3 ou 4 radicais iguais ou diferentes como se descreveu na alínea a^),

E significa fenilalanina, 2-clorofenillalanina, 3-clorofenilala nina, 4-clorofenilalanina, 2-fluorfenilalanina, 3-fluorfenilalanina, 4-fluorfenilalanina, tirosina, O-metil-tirosina ou p-( (2-tienil)-alanina e

K significa uma ligação directa,

M significa uma ligação directa e (D)-Phe significa D-fenilalanina que eventualmente pode ser substituída por cloro, bromo ou metoxi.

Processo de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 3, caracterizado por, como produto final, se obter um péptido de fórmula I, em que

A significa hidrogénio, (D)-H-Arg, (L)-H-Arg, (D)-H-Lys, (L)-H-Lys, (D)-H-Orn ou (L)-H-Orn;

B significa Arg, Orn ou Lys em que o grupo guanidino ou o grupo amino da cadeia lateral pode ser substítuido por hidrogénio, alcanoilo em C-C_o, arilóilo em C_-C._, heteroariloílo lo / U em C-.-C , alquil-sulfonilo em C.-C- ou aril-sulfonilo em C □ y io b

-C^2 ^em que ^os radicais arilo, heteroarilo, arilõxi, aril-sulfonilo e heteroariloílo podem ser eventualmente substituidos por 1, 2, 3 ou 4 radicais iguais ou diferentes escolhido do conjunto formado por metilo, metoxi e halogénio;

C significa Pro-Pro-Gly, Hyp-Pro-Gly ou Pro-Hyp-Gly;

E significa Phe ou tia;

F significa Ser, Hser, Lys, Leu, Vai, Nle, Ile, ou Thr;

K significa uma ligação directa;

M significa uma ligação directa;

G significa um radical de um sistema de anel heterocíclico da fórmula IV, em que os radicais dos heterociclos são, de preferência, ãcido pirrolidino-2-carboxílico, ãcido piperidino-2-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetra-hidro-isoquinolino-3-carboxílico, ácido cis-deca-hidro-isoquinolino-3-carboxíli24 co, ácido trans-deca-hidro-isoquinolino-3-carboxílico, ácido cis-endo-octa-hidro-indol-2-carboxílico, ãcido cis-exo-octa-hidro-indol-2-carboxílico, ãcido trans-octa-hidro-indol-2-carboxílico, ácido cis-endo-octa-hidro-ciclopentano / b_/ pirrol-2-carboxílico, ãcido cis-exo-octa-hidro-ciclopentano / b_/ pirrol-2-carboxílico, ãcido trans-octa-hidro-ciclopentano / b^_/ pirrol-2-carboxílico ou ãcido hidroxiprolino-2-carboxílico;

F' significa Arg;

I significa OH e (D)-Phe significa D-fenilalanina.

- 5^a Processo para a preparação de composições farmacêuticas para o tratamento de estados patológicos que são facilitados, provocados ou auxiliados por bradiquinina e péptidos que utilizam bradiquinina, caracterizado por se incorporar pelo menos um péptido da fórmula I quando preparado de acordo com o processo das reivindicações 1 a 4, num veiculo fisiologicamente aceitável e eventualmente com outros agentes auxiliares e aditivos e se conferir à mistura a forma de apresentação apropriada.

A requerente reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado em 14 de Agosto de 1989, sob ο N9 P