PT87008B

PT87008B - Processo para a preparacao de novos glicosidos de antraciclina e de composicoes farmaceuticas de accao citostatica que os contem

Info

Publication number: PT87008B
Application number: PT87008A
Authority: PT
Inventors: Hans Peter Kraemer; Hans-Wolfram Fehlhaber; Hans Gerd Berscheid; Harald Zilg
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1987-03-21
Filing date: 1988-03-18
Publication date: 1992-06-30
Also published as: AU611134B2; PT87008A; IL85796A0; JPS63250395A; AU1328788A; DE3709337A1; US5037971A; ZA881947B; KR880011190A; DK151888D0; EP0283931A1; DK151888A; CA1303608C

Description

Memória Descritiva

A presente vados de antraciclina de fórmula I invenção refere-se a deri-

H

CH₂CH₃ (I)

CR.

em que e R₂ são diferentes, e um dos dois grupos representa o açúcar L-Rodosamina ( Roa ) da fórmula

o respectivo N-óxido fórmula

enquanto que o outro grupo representa a combinação de açúcares L-Rodosamina-L-Rodinose-L-Rodinose (Roa-Rod-Rod) da fórmula

ou L-Rodosamina-L-Rodinose-L-Aculose (Roa-R.od-Acu), da fórmula

ou L-Rodosamina-2-Desoxi-L-Fucose-L-Cinerulose-A (Roa-dF-Cin-A), da fórmula

ou L-Rodosamina-2-Desoxi-L-Fucose-L-Cinerulose -B (Roa-dF=Cin B), da fórmula

ou L-Rodosamina-L-Rodinose-L-Cinerulose A (Roa-Rod-Cin A) da fórmula

ou L-Rodosamina-N-Õxido-L-Rodinose-L-Rodinose (Roa-N-Oxid -Rod-Rod), da fórmula

ou L-Rodosamina-N-Õxido-L-Rodinose-L-Aculose (Roa-N-õxid-Rod-Acu), da fórmula

ou L-Rodosamina-N-Õxído-L-Rodinose-L-Gínerulose A (Roa-N-Õxid-Rod-Cin A), da fórmula

ou L-Rodosamina-N-0xido-2-Desoxi-L-Fucose-L-Cinerulose A (Roa-N-Oxid-dF-Cin A), da fórmula

ou L-Rodosamina-N-Õxido-2-Desoxi-L-Fucose-L-Cinerulose B (Roa-N-Oxid-dF-Cin B), da fórmula

ou L-Rodosamina-N-óxido-L-Rodinose-L-Ginerulose A (Roa-N-Õxid-Rod-Cin A), da fórmula

com a condição de, pelo menos, um dos dois grupos R^ e R₂ representar o N-Oxido do açúcar correspondente.

A presente invenção refere-se ainda a um processo para a preparação dos compostos da fórmula I, ca racterizado por se transformar um dos compostos descritos na

EP-A-0 131 942 e na EP-A2-0 207 463, da fórmula II

CH CH

3

OH (II)

um dos dois substituintes e R^ representa uma das combinações de açúcar Roa-Rod-Rod, Roa-Rod-Acu, Roa-dF-CinA, Roa-Rod-Cin A, Roa-dF-Rod ou Roa-dF=Cin B, e o outro dos substituintes R^ e R^ representa a cadeia de açúcar Roa, em que Cin B representa cinerulose B e dF=Cin B significa que as duas cadeias de açúcar estão ligadas por uma ponte de éter adicional para além da ligação glicosídica habitual, no respectivo óxido de amina por meio de tratamento com um reagente fornecedor de oxigénio.

A reacção de N-oxidação efectua-se a temperaturas entre 0 e 35 2C, de preferência entre 10 e 302C. 0 tempo de reacção pode oscilar desde várias horas a alguns dias, sendo contudo diferente para cada um dos compostos.

Após reacção com sucesso recuperam-se os produtos desejados a partir do meio reaccional por meio de extracção das soluções tampão aquosas com solventes orgânicos e isolam-se e purificam-se por cromatografia em coluna ou por cromatografia em camada preparativa, de preferência em sílica gel ou em fase reversa.

Para esta reacção referem-se os seguin tes reagentes:

H^C^, perãcidos, como por exemplo ácido m-cloroperbenzóico, acido peracético, ácido monopermaleico, ácido trifluoroperacético;

hidroperóxidos, como por exemplo 2-hidrofenoxihexafluoro-2-pro panol ( Ganem et al., Tetrahedron Letters 21, 689 (1980)) ou

3-bromo-4,5-dihidro-5-hidrofenoxi-4,4-dimetil-3,5-difenil-2H-pirazole (Baumstark et al., Tetrahedron Letters 22, 4591 (1981)).

A reacção pode também efectuar-se por via microbiana com microorganismos apropriados ou com enzimas a partir dele isolados, por exemplo com Streptomyces purpurascens (DSM 2658).

A reacção efectua-se de preferência com H2O2 num solvente apropriado, por exemplo num álcool ou

-5_

ρΗ numa cetona de cadeia pequena, em água ou numa solução tampão aquosa, a uma temperatura entre 10 e 702C e a um valor de entre 3 e 8.

Através do processo de acordo com a invenção obtêm-se por exemplo os seguintes compostos, que se tratam de substâncias amorfas e vermelhas, facilmente solúvei em metanol, acetato de etilo, clorofórmio e tolueno, insolúveis pelo contrário ení ãgua e hexano e que se podem caracterizar por cromatografia em camada fina em sílica gel 60 ^254. (Merck), de preferência com o sistema eluente clorofórmio/metanol/ácido acético/ãgua/trietilamina =

A identificação mento quantitativo da reacção e o teste tuar-se também com vantagem, através de

Coluna: Lichrospher ® 100 RP-18,5 /im, 4x250 mm (Merck) Fase móvel: 14Z (Vol) CH3CN-86Z (Vol) solução tampão Solução tampão: 20Z(Vol) trietilamina em água com ácido (85%) ajustado a pH 3

80/10/10/2/0,01.

da formação, o seguide pureza podem efecanálise por HPLC:

ortofosfórico Fluxo: 0,5 ml/min Detecção: 254 nm ou 495 nm Tempo de retenção: Citorodina Citorodina Citorodina

S cerca de 55 min.

S-N-óxido cerca de 80 min.

S-bis-N-óxido cerca de 140 min.

Os compostos de acordo com a invenção possuem uma acção citostática, isto ê um efeito terapêutico contra tumores, em especial tumores malignos em animais e seres humanos.

Estas compostos e os seus sais de adição de ácido podem por isso empregar-se como medicamentos para o tratamento de tumores. Os compostos podem administrar-se de vários modos conforme a forma de dosagem.

De uma maneira geral os compostos ou os seus sais de adição de ácido, por exemplo com ácido D-glucónico, administram-se em mistura com veícúos ou aditivos farmacêuticos usuais. Podem assim administrar-se por exemplo isolados ou em mistura com veículos como maltose ou lactose,ou na forma de complexos não tóxicos, por exemplo como complexos

do ácido desoxiribonucleico.

Uma forma de administração típica é a injecção de uma solução do composto de acordo com a invenção em água destilada ou em soro fisiológico. A solução pode injectar-se por via intraperitoneal, intravenosa ou intraarterjí al.

As doses diárias e as unidades de dosagem podem estabelecer-se em ensaios com animais e também em testes in vitro, de modo que a dose total administrada continuamente ou com intervalos que não ultrapasse o valor pré-estabelecido. Assim, a dose total para um ciclo de tratamento é de cerca de 0,5-5 mg/kg de peso corporal. Esta dose pode administrar-se em quantidades parciais durante um período de 7 dias. É contudo claro que as doses concretas para o tratamento de pessoas ou animais se podem estabelecer individualmente em função da situação do paciente, por exemplo da idade, do peso corporal, do sexo, da sensibilidade, da alimentação, da altura da administração, de outros medicamentos administrados, do estado físico do paciente e da gravidade da doença.

A preparação dos compostos de acordo com a invenção ilustra-se através do exemplo seguinte:

EXEMPLO

a) Dissolveram-se cerca de 400 mg de um composto de fórmula I acima mencionada, em que representa L-Rodosamina (Roa) e R£ representa a combinação de açucares L-Rodosamina-2-Desoxi-L-Fucose-L-Cinerulose B ( Roa-dF=Gin B), com a designação Cito rodina S , em 100 ml de metanol, agitou-se ã temperatura ambiente ao abrigo da luz e adicionaram-se 4 ml de peróxido de hidrogénio ( a 30Z). Repetiu-se a adição de 27 horas mais tarde.

Seguiu-se a reacção por análise por HPLC.

Após um total de 51 horas decompôs-se o reagente em excesso por adição de carvão de paládio, terminando-se assim a reacção.

Filtrou-se a solução reaccional através de uma pia

b) ca de vidro sinterizado coberta com uma camada de CeliteQEy e evaporou-se o filtrado num evaporador rotativo. Tomou-se o resíduo em 30 ml de uma solução tampão aquosa de acetato de sódio, a pH 3,5, adicionou-se 0,5 ml de uma solução 0,1 M de EDTA e extraiu-se oito vezes com cerca de 20 ml de CHCl^. Os extractos de CHCl^ reunidos lavaram-se com um pouco de agua e evaporam-se em vácuo. O resíduo pesava 244 mg.

Após reajustar o valor de pH a 7,0 com NaOH 1 N recuperaram-se mais 44 mg de produto após duas extracções com CHCl^. Por análise por HPLC verificou-se que ambos os extractos contêm principalmente dois compostos novos formados para além de um pouco do educto Citorodina S não transformado.

Produtos da reacção:

%N-Õxido Bis-N-óxido Citorodina S Extracto principal 65 30 2

Extracto secundário 25 - 10 extracto secundário contêm ainda cerca de 35% de um composto ainda não identificado com um tempo de retenção de cerca de 110 min.

Isolamento dos produtos da reacção por HPLC de fase reversa:

Dissolveram-se cerca de 240 mg do extracto principal em 20 ml de fase móvel CHCl^/MeOH/acetato de amónio a 10% em água 150:1050:375 e cromatografaram-se numa coluna de aço 3,2x25 cm com HOg de Lichrospher <J100-RP-18 , 10 p. (Merck) com um caudal de 2 ml/min. 0 decurso da eluição seguiu-se com um fotómetro ao comprimento de onda de 490 nm. As fracções de 5 ml, após identificação por DC (CCF, cromatografia em camada fina), reuniram-se e trataram-se. Diluíram-se com cerca de metade do volume de água, adicionou-se CHCl^ atê ã separação de fases e lavou-se a fase de CHCl^ separada com

água, secou-se sobre ^£50^ e evaporou-se em vácuo. Obtiveram-se:

Fracção mg

Composto

38-47 40

Citorodina S-bis-N-Õxido

100-150 90

Citorodina S-N-óxido

Citorodina S-N-õxido(fórmula I com R^=Roa-N-óxid e Rr>=Roa-dF=Cin B):^H-NMR:

Fig.l

Espectro de absorpção 235(4,6); 254(4,3);

2,93(3,86); 496(4,17)

X ^48^64^2θ18’ M (MS-FAB, espectro de massa;

confirmado).

Citorodina S-bis-N-Oxido (fórmula I com R^=Roa-N-Oxid e R2=Roa-N-Oxid.-dF=Cin B) ^-NMR : Fig. 2

Espectro de absorpção 235(4,6); 252(4,3);

294(3,87); 495(4,18) ^48^64^2θ18’ 972 (MS-FAB; confirmado)

A identificação dos compostos no exemplo anterior efectuou-se nas condições de medida a seguir indicadas :

- - 1

Os espectros de ressonância protonica (espectros de H-NMR) traçaram-se por meio de um espectrómetro de ressonância magnética nuclear HX-270 BRUKER de transformada de Fourier, a 270 MHZ. As concentrações foram de 2-4 mg/0,5 ml em CDCl^ a 99,8%; as soluções agitaram-se imediatamente após a preparação com 0,1 ml de uma solução de ^£00^ a 5Z em ϋ£θ a 99,5%.

Os sinais indicados com uma estrela nas figuras são devidos a impurezas de baixo peso molecular (em baixas percentagens) e a resíduos de solventes.

Os espectros de massa traçaram-se com um espectrómetro de massa MS-902 S, AEI,utilizando uma fonte iónica FAB(Fast-Atom-Bom

bardment). As substâncias introduziram-se na fonte iónicas incorporadas numa matriz de álcool 3-nitrobenzílico ou de tioglicerina, utilizando-se por vezes cloreto de amónio.

Os espectros de absorpção traçaram-se na gama de 200 a 700 nm em HC1 1 N a 10Z em metanol.

A concentração das substâncias foi de 10 a 30 mg/1; indicam-se os máximos de absorpção em nm e os coeficientes de extinção molar ( log & ).

Claims

REIVINDICAÇÕES

-ia.Processo para a preparação de compostos de fórmula I em que e

são diferentes, e um dos dois grupos representa o açúcar L-Rodosamina (Roa) de fórmula

0 — -A^H3 0— <^CH3 f )—OH ou o respectivo N-0xido de -< OH \ / fórmula \ / 0 N(CH3)₂ ^(CH^

enquanto que o outro grupo representa a combinação de açúcares L-Rodosamina-L-Rodinose-L-Rodinose (Roa-Rod-Rod), de fórmula ou L-Rodosamina-L-Rodinose-L-Aculose (Roa-Rod-Acu), de fórmula ou L-Rodosamina-2-Desoxi-L-Fucose-L-Cinerulose-A (Roa-dF-Cin-A) de fórmula ou L-Rodosamina-2-Desoxi-L-Fucose-L-Cinerulose-B (Roa-dF=Cin B), de fórmula ou L-Rodosamina-L-Rodinose-L-Cinerulose A (Roa-Rod-Cin A), de fórmula ou L-Rodosamina-N-óxido-L-Rodinose-L-Rodinose (Roa-N-Oxid-Rod -Rod), de fórmula ou L-Rodosamina-N-óxido-L-Rodinose-L-Aculose (Roa-N-Oxid-Rod-Acu), de fórmula ou L-Rodosamina-N-Oxido-L-Rodinose-L-Cinerulose-A, (Roa-N-Oxid-Rod-Cin-A), de fórmula ou L-Rodosamina-N-0xido-2-Desoxi-L-Fucose-L-Cinerulose A(Roa-N-Oxid-dF-Cin-A), de fórmula com a condição de, pelo menos, um dos dois grupos R^ e R₂ representar o N-Õxido do açúcar correspondente, caracterizado por se fazer reagir um fórmula II composto de

-13b em que um dos dois substituintes e significa o açúcar Roa e o outro significa uma das combinações de açúcares Roa-Rod-Rod, Roa-Rod-Acu, Roa-dF-Cin A, Roa-Rod-Cin A, Roa-dF-Rod ou Roa-dF=Cin B, com um reagente fornecedor de oxigénio.

-2ê.-

I Processo de acordo com a reivindica- j

1 _ru ~ I çao 1, caracterizado por se efectuar a reacçao num solvente I apropriado a uma temperatura entre 0 e 35°C.

-3ê.Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se efectuar a reacçao com peróxido de hidrogénio num álcool ou cetona de cadeia pequena, em água ou numa solução tampão aquosa, a uma temperatura entre 10 e 30QC, e a um valor de pH entre 3 e 8.

-4§. Processo de acordo com as reivindicações 1 a 3, caracterizado por o grupo na fórmula I representar o N-óxido da L-Rodosamina.

-5ê.Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por o grupo R2 representar a combinação de açúcares Roa-dF=Cin B.

-6§. Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por o grupo representar o N-õxido da combinação de açúcares Roa-N-Oxid-dF=-Cin B.

-7*.Processo para a preparaç-ão de uma composição farmacêutica de acção eitostática, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo um composto de fórmula I, ou um dos seus sais de adição de ácido fisiológicamente as1 /.

similável, quando preparado de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, com veículos e/ou outros aditivos farmacêuticos usuais e fisiológicamente assimiláveis, de modo a obter formas de administração adequadas.

A requerente declara que o primeiro pedido desta patente foi apresentado na República Federal Alemã em 21 de Março de 1987, sob ο ηθ. P 37 09 337.1