PT86022B - Processo para a preparacao de polipeptideos de peso molecular relativamente baixo uteis como inibidores da renina - Google Patents

Description

O presente invento diz respeito a um processo para a preparaçao de polipeptideos inibidores da resina de peso molecular relativamente baixo e tamanho pequeno; nomeadamente, derivados de ácidos 4-amino-3-hidr£ xi-4-substituido-butanóicos e de ácidos 5-amino-2,5-di-su^b stituido-4-hidroxipentanoicos.

PFIZER INC.

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE POLIPEPTIDEOS DE PESO MOLECULAR RELATIVAMENTE BAIXO ÚTEIS COMO INIBIDORES DE REGINA

Estes compostos apresentam a fórmula geral (I)

em que A é um sistema de anel heterocíclico de 5 ou 6 membros, benzo-condensado; n é zero ou 1; B é, por exemplo, -NH-CII(CH₃)-CO-; D é por exemplo 2-carboxi-pirrolidin-l-ilo; e Y é isobutilo ou alilo.

processo consiste, por exemplo em se acoplar um composto de formula

A-OH com um composto de fórmula (II)

na presença de um agente de acoplamento desidratante num solvente inerte à reacçao.

Este invento esta relacionado com novos polipeptídeos de peso molecular e tamanho relactivamente baixos; nomeadamente derivados dos ácidos butanóicos 4-amino-3-hidroxi-4-substituidos ou dos ácidos

5-amino-2,5-di-substituido-4-hidroxipentanóico, como ini. bidores da resina. Mais particularmente relacciona-se com determinados polipeptídeos, certos intermediários deles e utilização dos polipeptídeos para inibir a acçao de cli vagem do angiotensinogénio pela enzima renina.

A enzima proteolitica renina (EC 3.4.23.15) que tem um peso molecular de cerca de 40 000 é produzida e secretada pelo rim para o sangue. Sabe-se ser activa in vivo clivando selectivamente o angiotensinogenio, uma glicoproteina natural do plasma. No caso do angiotensinogénio humano, a clivagem é na ligaçao entre os resíduos de aminoácidos leucina (10^a) e valina (11^a) no extremo N-terminal do angiotensinogénio.

Asp-Arg-Val-Tir-Ile-His-Pro-Fen-His-Leu-Val-Ile-His-Ser-Glu

1	2	3	4	5	6	7 8 9 10 11 12 13	14 15
						0 decapeptideo N-terminal	cir-

culante (angiotensina I) formado pela acçao de clivagem acima da renina é subsequentemente convertido no corpo para dar um octapeptideo conhecido como angiotensina II. A angiotensina II é uma substância de pressão potente, i.e. uma substância que é capaz de induzir um aumento significativo da pressão sanguínea e pensa-se que actua através da constricçao de vasos sanguíneos e da libertação da aldosterona, hormona de retenção de sódio, da glândula supra-renal. Assim, o sistema renina-angiotensinogénio tem sido indicado como um factor responsável por certas formas de hipertensão.

Um meio de aliviar os efeitos adversos do funcionamento do sistema renina-angiotensinogénio é a administraçao de uma substância capaz de inibir a acçao de clivagem do angiotensinogénio da renina. Sao conhecidas várias dessas substâncias, incluindo anticorpos anti-renina, pepstanina e compostos fosfolipidicos naturais. A Patente U.S. 4 478 826 saida em 23 de Outubro, dé 1984, divulga uma série de compostos polipeptidicos inibidores da renina tendo uma estatina (Sta; acido 4-amino-3-hidroxi-6-metil-heptanóico) ou derivado da estatina nao terminal. Incluindo Sta, a grande maioria dos compostos exemplificados contem 6 ou mais resíduos de aminoácidos. Sao exemplos de algumas cadeias mais curtas ali divulgadas:

Acetil-Fen-His-Sta-Leu-Fen-NI^ e t-Butiloxicarbonil-Fen-His-Sta-Leu-Fen-Nl^.

Existem invariavelmente pelo menos dois resíduos de aminoácidos de cada lado da estatina. 0 grupo di-ou polipeptidil-estatilo está invariavelmente ligado a um aminoâcido lipofilico, geralmente leucina. (Ver também Patentes U.S. 4 470 971 e 4 478 826).

Pedido de Patente Europeia, Ν^θ 45 665 e a Patente U.S. 4 424 207 divulgam uma série de derivados polipeptidicos inibidores da renina da fórmula

A-B-Pro-Phe-His-N.

D-E-Y^a onde A é por exemplo t-butoxicarbonilo, B e His ou outro grupo amino acilo básicò, D é Vai, Ile ou outro residuo de aminoacilo lipofílico, E é Tir, Fen, His ou outro residuo aminoacilo aromático, R^a e R^ sao cada um isopropilo, isobutilo, benzilo ou outra cadeia lateral tipo amino acido lipofilico e Y e um grupo terminal tipo acido, ester ou amida. Incluindo os resíduos centrais de ácido 5-‘ -aminopentanóico, estes compostos sao invariavelmente hejq tapeptideos, i.e. derivados de aminoácidos N-tetrapeptidil-5-aminopentanoil-lipofilicos com aminoacil-aromático.

Pedido de Patente Europeia

132 304A também divulga a utilização de polipeptideos con tendo estatina como agentes anti-hipertensivos inibidores da renina e o Pedido de Patente Europeia 114 993A divulga polipeptideos contendo ciclostatina, uteis como agentes anti-hipertensivos inibidores da renina.

Encontrou-se agora que certos peptideos de tamanho relativamente pequeno e de peso molecular relativamente baixo sao importantes agentes inibidores da renina. Os compostos têm a fórmula (I):

onde A é

(A-4)

(A-5)

(A-6)

n é Ο ou 1;

Β é uma porção aminoácido aromático ou alifática que está ligada ao grupo A e ao grupo -NH do restante segmento de (I) através dos seus grupos amino e carboxilo respectivamente e é (i) alanina, (ii) norleucina ou (iii) histidina; as referidas porçoes tendo as fórmulas

-NH-ÇH-COCH(B-l)

Y é isobutilo, alilo ou benzilo ;

D e

-Ν I ou -Z-R

V

COOH onde —Z— é -0- ou -NH-; e

R é alquilo (0^_θ) ou fenilo, cada um dos quais podendo ser facultativamente substituido por amino, hidroxilo, carboxilo ou carboalcoxilo (C^ desde que quando o referido fôr amino ou hidroxilo, R é alquilo (^2_g)·

A porção interna da formula (I) que está representada estruturalmente em (I), inclui o seguinte:

resíduo de aminoácido (a), acima, é derivado de 3S_, 4S_-ciclo-hexil-estatina e (b) de 4S, 5S-homociclo-hexiles-tatina, a posição 2 do qual é substituída por isobutilo (2-metil-propilo), alilo ou beji zilo. Estes e outros resíduos de aminoácidos ou grupos serão aqui designados, por questões de brevidade e conveniência, pelas abreviaturas vulgarmente aceites enumeradas abaixo:

Abreviatura

Aminoácido

cSta	3S, 4S - ciclo-hexilestatina
hcSTA	48., 5S. - homociclo-hexilestatina
ahcSta	4.8, 5S. - alil-homociclo-hexilestatina
bhcSta	4.S, 5S. - benzil-homociclo-hexilestatina
ibhcSta	4S., 53. - isobutil-homociclo-hexilestatina
His	L - histidina
Ala	L - alanina
Fen	L - fenilalanina
Nle	L - norleucina
GABA	Ácido 4-aminobutanóico
BOC	t-butoxicarbonilo
CBz	carbobenzoxi
Bz	benzilo

Também estão incluídos neste invento os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula (I). Pelo termo sais farmaceuticamente aceitáveis pretende-se significar sais de adiçao ácida de qualquer um dos compostos da fórmula (I) que contenham uma função básica com um ácido como seja (mas nao limitado a) HC1, HNO₃, H₂SO₄, H₃PO₄, CH₃SO₃H, p-CI^C^SC^H, CH₃COOH ou HOOCCI^C^COOH. Quando 0 composto (I) contem mais do que uma função básica, o sal contem facultativamente mais do que um equivalente de acido. Como alternativa quando 0 composto da fórmula I possuir uma função acidica, a expressão também se refere a sais catiónicos tais como (e.g. Na, ou um sal mas nao limitados a, um sal de metal alcalino K) um sal de metal alcalino terroso (e.g. Ca,M de amina (e.g. dietanolamina, meglumina). Para preparar tais sais usam-se métodos convencionais.

presente invento também inclui composiçoes farmacêuticas contendo uma quantidade eficaz . inibidora de renina de um composto da formula (I) como ingrediente activo essencial num veiculo farmaceuticamente aceitável; e um método para inibição da clivagem do angiotensinogénio pela renina no corpo de um mamifero que compreende a administraçao ao mamifero de uma quantidade eficaz inibidora da renina de um composto com a fórmula (I).

Em adiçao, o presente invento inclui compostos intermediários da fórmula (II)

Ε (III)

(II)

(III) em que cada A, Β, Y e n sao como definidos atrás; e é alcoxilo (C^ ^), benziloxi ou hidroxilo;

e processos para fazer conipostso com as fórmulas (I), (II) e (III).

Os valores preferidos das variáveis dos compostso da fórmula (I) sao os seguintes:

A: (A-l), (A-4), (A-5), (A-6) e (A-7);

Y: isobutilo e alilo;

n: 0 e 1

Os valores preferidos dos compostos da fórmula (I) sao os compostos preferidos era que:

A: (A-l), (A-6), (A-7);

Β: (B-2) e (B-3);

D: ZR em que Z é -NH e R é alquilo (C^_g) facultativamente substituído;

Y: isobutilo;

η; 1

Sao especialmente preferidos os compostos da fórmula (I) tendo os valores:

A é (A-l) e (A-6);

B 6 (B-3); e

D é ZR em que R é -CH^.

Os compostso deste invento sao preparados por métodos familiares dos que estão dentro da matéria. Estes métodos gerais estão ilustrados na sequência de reacçoes abaixo onde, por simplicidade, os compostos da fórmula (I) sao Representados pela formula

A----------_B----------_C----------_D

onde A, B e D sao como previamente definidos e C represeii ta a unidade

onde n e y sao como definidos atras.

Conforme o técnico especializado reconhecera, os compostos da fórmula (I-A) podem ser produzidos por uma variedade de modos. Por exemplo, as unidades individuais podem ser ligadas por uam série de reacçoes sucessivas tais como A+B para produzir A-B que depois reage com a unidade C e o produto resultante A-B-C reage então com D. Como alternativa, a sequência de reacçoes pode começar por combinação de D e C seguido de reac

çoes sucessivas com B e A. Numa ser combinado com C-D ou com Ainda, B-C pode reagir com A ser combinado com D ou A de

D.

te outra modificação A-B poC seguido de reacçao com ou D e o produto resultan.

respectivamente.

metodologia geral

A formaçao de ligações peptidicas (ou amidicas tre grupos amino e de ácidos carboxilicos. B e C da fórmula (I dade A de um ácido

Certamente, gaçao de C com D quando e

envolve a -CONH-) unidades dos;

enAs ) sao derivadas de aminoáci carboxílico e a unidade D de uma amina.

D fôr ZR onde Z é -0-, a reacçao de liuma reacçao de esterificaçao.

a uniSe bem que possa ser empregue para forinar as ligações peptidicompreende acoplamento com desimétodos cas, um método preferido drataçao entre os reagentes adequados conforme descrito abaixo.

uma variedade de

Nos exemplos aqui apresentados sao especificamente ilustrados certos grupos protectores a activadores. No entanto, ura especialista na matéria reconhecerá que poderão ser usados escolha de outros grupos protectores ou activadores. A ticular está bastante reagente necessário, do composto da presença de outros sua solubilizaçao; i dependente efeito sobre a do seu protegido”, grupos moção.

pelo menos desejável, um grupo protector parda disponibilidade do solubilidade da sua facilidade de remoção e pela afectados

e. a sua que possam ser selectividade ou a sua r ePor exemplo, será necessário ou em muitas reacçoes proteger os grupos amino e/ou grupos carboxilo.

A via de sintese escolhi16

da para a preparaçao dos compostos da fórmula (I) pode necessitar da remoção de um dos referidos grupos protectores, ou de ambos, para permitir postarior reacçao do grupo amino ou carboxilo regenerado; i.e., os grupos protectores usados sao na maior parte dos casos, removíveis independentemente uns dos outros. Adicionalmente a escolha do grupo protector para ura determinado grupo amino dependerá do papel do referido grupo amino no esquema glo. bal de reacções. Serão usados grupos protectores de amino tendo niveis variáveis de susceptibilidade, i.e., facilidade de remoção. 0 mesmo e verdadeiro para os grupos protectores de carboxilo. Tais grupos sao conhecidos, devendo-se ter em atençao as revisões de Bodansky et al. , ^,;Peptide Synthesis, 2- Ed., John Viley &. Sons, N.Y. (1976); Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley δ Sons, N.Y. (1981); McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, H.Y. (1973); e Sheppard em Comprehensive Organic Chemistry, The Synthesis and Reactions os Organic Compounds, Pergaman Press, N.Y. (1979), editado por E. Haslam, Parte 23,6, páginas 321-339. Grupos protectores convencionais de amino e carboxilo sao conhecidos dos familiarizados com a matéria. Grupos protectores de amino representativos, mas de modo algum limitantes, sao os seguintes: benziloxicarbonilo;t-butoxicarbonilo; aralquilo substituído ou nao substituído como sejam benzilo, tritilo, benzidrilo e 4-nitrobenzilo; benzilideno; ariltio como sejam feniltio, nitrofeniltio e triclorofeniltio; derivados de fosforilo tais como dimetilf osf o'r ilo e 0,0-dibenzilf osf oril; derivados de trialquilsililo tais como trimetilsililo; e outros como descri, tos na Patente U.S. N- 4 322 341 e que sao incluídos por referência. 0 grupo protector de amino preferido é t-butoxicarbonilo. Sao bem conhecidos os processos para substituição do referido grupo num determinado grupo amino.

Em geral eles compreendem acilaçao do composto amino adequado com um agente de acilaçao de t-butoxicarbonilo, especialmente da fórmula fCIi\)„C-O-C-R₁ j j i onde Rj é F, ^ou O-CO-OCCCH^)^. As condiçoes de reacçao para introdução do grupo protector BOC sao bem conhecidas. 0 agente de acilaçao preferido é aquele em que R^ é 0-C0-OC(CH₃)₃.

valor do grupo BOC como agente protector nos processos aqui descritos reside na sua relativa facilidade de remoção (desbloqueaniento) em condiçoes ácidas relativamente suaves.

Ê especialmente importante quan. do B representa a porção histidina uma vez que é fácilme£ te removido da porção imidazolilo por tratamento com carbonato de potássio em metanol sem remoção de outros grupos BOC que possam estar presentas.

Grupos protectores de carboxilo representativos que podem ser usados, sao vários ésteres tais como ésteres de sililo, incluindo ésteres de trialquilsililo, ésteres de tri-halosililo e ésteres de haloalquilsililo; certos ésteres de hidrocarbiio tais como alquilo (C^ ^), especialmente grupos t-butilo; ésteres de benzilo e ésteres de benzilo substituído, benzidrilo e tritilo; ésteres de fenacilo e ftalimidometilo; certos esteres de hidrocarbiio substituído tais como clorometilo, 2,2,2-tricloroetilo, cianometilo; tetra-hidropiranilo;

metoximetilo; metiltiometilo; carbazoilo protegido como seja -CONII-NHR onde R é um grupo protector amino conforme divulgado atrás, especialmente benziloxicarbonilo; e outros tal como descrito na Patente U.S. N^e 4 322 341 e que aqui sao incluídos como referência. 0 grupo protector de carboxilo preferido é -CONII-NHR onde R e benziloxicarbonilo, sendo o referido grupo preferido designado por benziloxicarbonilcarbazida. Ura grupo protector de carboxilo altamente preferido é o grupo benzilo.

Os grupos carboxilo protegidos sao convertidos nos grupos carboxilo desprotegidos por processos conhecidos dos familiarizados com a matéria. 0 grupo benzilo, o grupo protector preferido dos grupos car boxilo é removido por hidrogenação catalítica sobre um ca talisador de metal nobre, especialmente sobre hidroxido de paládio em carbono ou paládio em carbono.

Quando 3 na fórmula (I) representa His, o método preferido para a produção dos referidos compostos compreende a seguinte reacçao:

Os reagentes sao combinados em quantidades equimolares num solvente inerte para a reacçao na presença de um aceitador de acido como seja M-metilmor. folina ou outra base de amina terciária. Para se conseguir a formaçao do grupo amida usa-se um agente de condensação ou acoplamento com desidrataçao, e.g. uma carbodiimida tal como diciclo-hexilcarbodiirâida, N ,N' -carbonildiiraidazolo, N-etil-5-fenilisoxazoleno-3’-sulfonato-dietilcianofosfonato e outros conhecidos na especialidade. Para minimizar a racemizaçao durante a reacçao de acoplamento, adiciona-se 1-hidroxibenzotriazolo à mistura de reacçao.

Um especialista na matéria reconhecerá que podem ser usados outros grupos protectores além de BOC no reagente histidina e que os grupos protectores nao necessitam de serem semelhantes.

A unidade contendo lactona, o precursos das unidades B-C da fórmula (I), é desbloqueada se necessário, e o composto desbloqueado é feito reagir com o reagente A-COOH pretendido para produzir um composto da fórmula (III), 0 referido composto reage então com a amina, aminoácido ou álcool adequados para clivar o anel de lactona para produzir compostos da fórmula (I). A reac çao é conduzida num solvente inerte para a reacçao, i.e., um solvente que nao reaja adversamente com os reagentes ou produtos de modo a reduzir o rendimento do produto pre^ tendido. Sao representativos de tais solventes os alcanois inferiores, cloreto de metileno, dimetilformamida, dioxana ou suas misturas. 0 grupo amino do reagente que contem amina (e.g. amina, aminoácido) reage suficientemente rápido com a lactona de modo a permitir o uso de álcoois como solvente.

Quando a unidade B nao fôr His, a metodologia descrita para B como também pode ser usada. Como alternativa, um reagente C adequado (e.g., BOC, cSta, BOC hcSta, BOC ibhcSta)reage directamente como reagente D adequado via formaçao de ligaçao peptídica quando D e ZR onde Z é -NH- ou via esterificaçao quando Z é -0-.

Quando se pretende produzir um

composto da fórmula (I) em que Z é -0-, a lactona reage com um excesso de álcool, reagente contendo OH, na presença de uma base como seja carbonato de potássio ou uma arai, na terciária como seja trietilamina.

Os compostos da fórmula (I) onde a porção 3 é derivado de fenilalanina sao preparados de acordo com processos descritos e exemplificados aqui para outros valores de B. Os compostos da fórmula (I) onde Y é benzilo sao também feitos de acordo com processos aqui divulgados. Os compostos da fórmula (I) portadores de tais substituintes têm a utilidade aqui divulgada e sao usados como descrito nesta especificação.

A actividade dos compostos do presente invento como inibidores da actividade de clivagem do angiotensinogénio pela renina é determinada através do estudo da (1) sua capacidade para inibir a actividade de clivagem do angiotensinogénio pela renina in vitro. Neste teste, plasma sanguíneo foi obtido de pessoal saudável do laboratório, reunido e guardado congelado até ser usado. Antes de usar, uma quantidade deste plasma é descongelado e centrifugado e o sobrenadante misturado com inibidores de proteases e tamponado para pH 7,4. Adicionam-se os inibidores da renina a diferentes concentrações às amostras do plasma preparado e as misturas resultantes (310 lambda) sao incubadas durante três horas a 37°C juntamente com misturas testemunhas sem inibidores da renina. Após incubaçao, param-se as misturas com mistura de gelo e água e cada uma delas é testada para angiotensina I usando o anticorpo contra angiotensina I. A angiotensina I nas misturas de incubaçao paradas é testada por meio de um ”Kit” de radioimunoensaio fornecido por Becton Dickinson e Co. (Orangeburg, N.Y.). Este radioim.uno ensaio baseia-se no desenvolvido por Haber et al., J, Clin Endocrinol., 29 pág 1349-1355(1969). A produção de angiotensina I na presença de um inibidor da renina é comparado com a produzida na ausência do inibidor e calculada uma percentagem de inibição. Usando dados obtidos a partir de incubações em duplicado para cada uma ads várias concentrações de diferentes inibidores, calculou-se para os vários inibidores diferente a concentração de inibidor na mistura de incubaçao necessária para produzir uma inibição de cinquenta por cento da actividade de clivagem do angiotensinogénio pela renina, i.e. o IC^q ^^n:*-bidor.

A actividade dos presentes compostos pode também ser determinada pela sua capaciade para antagonizar a resposta exógena pressora in vivo induzida pela renina. Ratos macho Sprague-Dawley (230 a 300g de peso) sao anestesiados com pentobarbital sódico (65 mg/kg peso do corpo, intraperitoneal), após o que sao implantados cateteres na veia femoral e na artéria carótida de cada animal. Após completada a cirurgia os animais sao colocados na posição prostrada e controlada continuamente a temperatura rectal. A pressão sanguínea arterial média (MAP) é registada via cateter da artéria carótida usando um tradutor de pressão Stathan P23 ID e um fisiografo. Após um periodo de estabilizaçao, respostas testemunha de pressão a renina (dp) de 20 a 30 mm HG sao obtidas por administraçao de renina de porco (30 a 80 mU/kg de peso do corpo, intravenosa), os animais sao testados de novo com renina de porco (a mesma dosagem da resposta testemunha) aos 5,15 e 30 minutos após administraçao do inibidor da renina e medidas as correspondentes respostas de pressão da renina (dP). A percentagem de antagonizaçao é calculada como (dP testemunha - dP experimental) x 100% dP testemunha onde dP testemunha e dP experimental sao as alterações de pressão em MAP respectivamente antes e depois da administração do inibidor da renina. De preferência sao usados pelo menos três animais em cada teste, com resultados médios.

Os compostos do presente invento podem ser administrados como agentes anti-hipertensivos por vias de administração oral ou parenteral e sao de rotina eficazes por esta última via, particularmente quando doseado como solução intravenosa. Quando a adsorçao gastrointestinal permite, é preferida a administraçao oral por razoes de conveniência e conforto do doente. Em geral estes compostos anti-hipertensivos sao normalmente administrados em dosagem que variam entre cerca de 0,1 mg e cerca de 10 mg por kg de peso de corpo por dia; dar-se-ao necessariamente variações que dependem do estado do indivíduo a ser tratado e do composto particular a ser administrado. Tipicamente, o tratamento começa com uma dosagem diária baixa que é aumentada pelo médico apenas se necessário. Deve-se notar que estes compostos podem ser administrados em combinação com veiculos farmaceuticamente aceitáveis por qualquer uma das vias préviamente indicadas e tal administraçao pode ser efectuada em dosagens simples ou múltiplas.

Para uso parenteral, os presentes compostos sao formulados de acordo com métodos conhecidos usando agentes de dispersão ou molhantes adequados e agentes suspensores. A solução injectavel esteril pode também ser uma solução ou suspensão num diluente ou sol vente nao-tóxico parenteralmente aceitável; por exemplo, como uma solução em 1,3-butanediol. Entre veículos e solventes aceitáveis encontram-se a água, solução de Ringer e solução isotónica de NaCl, óleos fixados incluindo mono ou diglicéridos, ácidos gordos tais como ácidos oleicos e suas misturas.

Para administraçao oral, e usada uma larga variedade de formas de dosagem, e.g., compr_i midos, cápsulas, pastilhas, cândis duros, pós, aerossoles. suspensões aquosas, elexires, xaropes e similares formulados com vários veículos inertes farmaceuticamente aceitáveis. Tais veiculos incluem diluentes sólidos ou agentes de enchimento, meios aquosos estéreis e vários solveri tes orgânicos nao tóxicos, etc. Em geral, os compostos deste invento estão presentes em tais formas de dosagem oral em níveis de concentração que variam entre cerca de 0,5% e cerca de 90% por peso da composição total, em quaii tidades que sao suficientes para proporcionar a dosagem unitária pretendida. Os comprimidos podem conter vários excipientes tais como citrato de sódio, carbonato de calcio e fosfato de cálcio, juntamente com vários desintegran tes tais como amido (preferencialmente amido de batata ou de tapioca), ácido alginico e certos silicatos complexos, juntamente com agentes de ligaçao tais como polivinilpirrolidona, sucrose, gelatina e acacia. Em adiçao sao muitas vezes úteis para usar em comprimidos agentes de lubrificação tais como estearato de magnésio, laurilsulfato de sódio e talco. As composiçoes solidas de um tipo semelhante podem também ser empregues como agentes de enchimento em cápsulas de gelatina mole ou dura; materiais preferidos relacionados com isto incluirão também lactose ou açúcar do leite assim como polietilenoglicóis de alto peso molecular. Quando se pretendem suspensões

aquosas e/ou elexires para administração oral, o ingrediente activo essencial que nelas entram pode ser combinado com vários agentes edulcorantes ou aromatizantes, corantes e caso se pretenda também agentes emulsionantes e/ou suspensores juntamente com diluentes tais como água, etanol, propilenoglicol, glicerina e várias combinações deles .

EXEMPLO 1

2-(2-Ciclo-hexil)-l-{di-hidro-4-(2-metil-2-propil)-5-oxo-2H-furan-2-ilj-l-{3-/ 4(5)-imidazolil7-2-(3-indolocarbonil amino-propion amido} etano

Uma mistura de ácido indolo-3-carboxilico (67,8 mg 0,4205 mM), N-metilmorfolina (85,1 mg, 92,5 ml, 0,8410 mH), 2-(2-ciclo-hexil)-1-/ l-amino-2-(4(5)-imidazolil)propionamido7-l-/ di-hidro-4-(2-metilpropil)-5-oxo-2H-furan-2-il7etano (201 mg, 0,4205 mM), 1-hidroxibenzotriazolo (56,0 mg, 0,4205 mM) e 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida (86,6 mg, 0,4205 mM) em cloreto de metileno (20 ml) foi agitado à temperatura ambiente durante 40 horas. Foi então filtrado e o filtrado seco sob pressão reduzida. Suspendeu-se o residuo em acetato de etilo, a suspensão resultante foi filtrada e o filtrado lavado sucessivamente com água (1 X 20 ml), a solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (1 X 20 ml) e solução saturada de cloreto de sódio (1 X 20 ml), depois seco sobre sulfato de magnésio. A evaporaçao do solvente sob pressão reduzida deu 198 mg de produto do titulo bruto na forma de espuma.

A espuma foi cromatografada numa coluna de gel de silica, eluindo primeiro com 99:1 de clorofórmio: metanol (sendo colhidas trinta fracções de 4 ’ml), depois com 97,5 : 2,5 de clorofórmio: metanol (220 fracções x 4 ml). A remoção do solvente sob pressão reduzida deu 36 mg do composto do titulo. ^H-nmr(CDCl^) delta:1,0/~d,J=5Hz, 6H, (CH₃)₉7.

Os compostos que se seguem foram preparados de modo semelhante a partir dos reagentes adequados:

^H-nmr(CDCln)delta:

ch₂chích₃)₂

CBZ

1.0 [d_z J=5Hz, 6H, (CH₃)₂] , 5.2 (s,

2H, metileno benzílico)

CH₂CH(CH₃)₂

1.0 [d, J=5Hz, 6H, (CH₃)₂)

CH₂CH(CH₃)₂

1.0 (d, J=5Hz, 6H, (ch₃)₂j

ch₂ch(ch₃)₂

1.0 [d, J=5Hz, 6H_Z (ch₃)₂]

O ch₂ch(ch₃)₂

1.0 [d, J=5Hz, 6H, (ch₃)₂1

Κ' ^H-nmr(CDClo)delta:

©0-	CH2CH(CH3)2	1.0 [d, (ch3)2i	u J=5Hz, 6H,
ex	CH2CH(CH3) 2	1.0 [d, ích3)2]	• J=5Hz, 6H,
	CH2CH(CH3)2	1.0 [d, (CH3)21	J=5Hz, 6H,
O^N-^-C0’ 1 H	CH2CH=CH2	4.8-5.2 metileno	(m, 2H, terminal)

EXEMPLO 2

Carbamato de t-butil-1-/ 2-ciclo-hexil-l-{di-hidro-4-alil-5-oxo-2H~furan-2-iljetilcarbamil7-2-/ 1-t-butoxicarbonil-4(5)-imidazolil7etilo___________________________________

DIBOCHis-ahcSta Lactona

Uma mistura de diBOC histidina | (101 mg, 0,2845 mM), ll-metilmorfolina (28,8 mg, 31,3 ml,

0,2845 mM), 1-hidroxibenzotriazolo (38,4 mg, 0,2845 mM), 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida (59,1 mg, o,2045 mH), 1-di-hidro-4-alil~2-/ (1-amino)-2-ciclo-hexil)etil7-5-oxo-2H-furano-hidrocloreto (42,5 mg, 0,2045 mH) em cloreto de metileno (20 ml) foi agitado à temperatura ambiente durante a noite (18 horas) depois filtrado e o filtrado seco sob pressão reduzida. 0 residuo foi suspenso em acetato de etilo, a suspensão filtrada e o filtrado lavado sucessivamente com ácido cítrico a 10Í? (1 x 20 ml), bicarbonato de sódio aquoso saturado (1 x 20 ml) e solução saturada de cloreto de sódio (1 x 20 ml) e depois seco sobre sulfato de magnésio. A remoção do solvente deu 183 mg do pro' duto do titulo na forma de espuma.

^H-nmrfCDCl^)delta : l,5(s, 9H, BOC), 1,7 (s, 9H, BOC).

Di BOCHis-íbhcSta Lactona

De modo semelhante, diBOC histidina (355 mg, 1 mM) reagiu com hidrocloreto de l-amino-2-ciclo-hexil-l-/^-di-hidro-4-(2-metil-propil)-5-oxo-2H-furan

-2-il7etano(304 mg, 1 mM) para dar 536 mg do produto de condensação di BOCHisibhcSta Laetona.

¹II-nmr(CDCl₃)delta : l,5(s, 9H, BOC), 1,7 (s, 9H, BOC).

EXEMPLO 3

N-Metil-2R_, 4S_, 5S^-/ 6-ciclo-hexil-4-hidroxi-5-{3-/ 4-(5)-imidazolil7j-2-£(3-indolocarbonil)amino^ propionamido-2-(-2-metilpropil) 7hexanamida ________________________________...

ou 3-indolocarbonil-His-ibhcSta-NIICH_o -----------------------——j produto do titulo do Exemplo (36 mg) é dissolvido em metanol (5 ml), a solução saturada com gás de metilamina e agitada durante 40 horas à temperatura ambiente. A reacçao foi seca in vacuo para dar 39 mg do composto do titulo como uma espuma amarela. ^H-nmr(CDCl^)delta: 2,8 (s, 3K, aminometilo) .

Os restantes compostos do Exemplo 1 foram convertidos mutatis mutandis nos produtos que se seguem pelo processo atras:

A'

CBZ

l_tT

H-nmr

Y_____ D t (CDCl₅)delta

CH₂CH(CH₃) ₂

NHCH₃ 1

2.8 (S, 3H),

5.2 (S, 2H), (metileno benzílico)

CH2CH(CH3) 2	nhch3 1	2.8 (s, 3H)
ch2ch(ch3)2	NHCH3 1	2.8 (s, 3H)

1_ΤΤ π-nmr

A '____________ *-______Y______ D t (CDClg) delta

a>0-	CH2CH(CH3)2	nhch3	1 2.8	(s, 3H)
V H	CH2CH=CH2	nhch3	1 2.8	(S, 3H)
0O-c°- H	CH2CH(CH3)2	nhch3	1 2.8	(s, 3H)
	CH2CH(CH3)2	nhch3	1 2.8	(s, 3H)
@X	CH2CH(CH3)2	NHCH3	1 2.8	(s, 3H)
ÔX	CH2CH(CH3)2	nhch3	1 2.8	(s, 3H)

Hidrocloreto de N-metil-2R, 4S, 5S-5-amino-6-ciclo-hexil-4-hidroxi-2-(2-metilpropil)hexanamida ou ibhcSta-NHCH₃HCl

Uma mistura de N-metil-6-ciclo-hexi 1-4-hidroxi-2-(2-metilpropil)-5-(t-butoxicarboni lamino ) hexanamida (140 mg) e UC1 4N em dioxana (4 ml) foi agitado à temperatura ambiente durante 60 minutos. A reacçao foi então seca sob pressão reduzida para chr 187 nig do produto desbloqueado na forma de espuma.

¹H-nmr(CD₃0D)delta : 2,8 (s, 3H).

Os compostos que se seguem forarn preparados a partir dos derivados BOC adequados de modo semelhante:

HC1

n

-nmr(CD_o0D ) de 11a

z*x		z-x	Z-X					Z~x
>—4			Hl··!		U-1	1-4 -i		h-.l	Hj-4
cn		CO	cn		co	ca		cn	cn
					·»	•x
N		N	N		N	N		N	Ν
E			hZ!			E		E	1w»4 Η·»1
LC	Z‘x	m	m	z**X	m	tn		m	ιη
II		II	II	kl»!	II	II	E3i	II	II
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ο			Ο	Ο		u	H—i	ω	CM	O	G
CM	C0	6	X...·'	CM	cn	CM	U	xz	E	CM	CM
h—<	Eu	Ρ) -ι Κ-4	Eu	Η—4 U-H	k—»1 f-M	E-í	hU	W»H	O	K	»«••1
Q	ω	Ο -	Ο	Ο	Ο	O	O -	Q	K-Z	u	u
Ε	t-U	>-Η W-4		h-Ll	1-.=4	,·—<	E		E	ixi	E
Ε	Ε			Ε	Η-· Ζ-1				S		lU

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O1

I1

I Eu1 o

CM

HU o

c|

ω	0)		o	CO	w	Cu
♦ri	rH	τΗ	ι—!	rH	•ri	rH
HU hU	Εΰ		E	<	Í-Ç»!	<

como sal di-hidrocloreto s

r—í τΉ r-i

o •H +J &

o

OD)delta co

O

E

C

I

X

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CN	CN	CN	<n
*			·»
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oo	CN	CN	00
	•k	<s
CN	tn	in	cn

cl rH rd rH

PQ

	1 «	ID
rH	1 rH	•rH
<	1 <

O

O

EXEMPLO 5

Os compostos apresentados abaixo foram preparados a partir dos derivados BOC adequados de acordo com o processo do Exemplo 4.

t	B	r	^H-nmr(CDo0D)delta
0	—__	CH2CII(CH3)2	1,0 (d,	J=5Hz, 6H)
0	—	cii2ch=cii	4,8-5,2	(m, 211)
j(a)	His	CH2CH(CH3)2	1,0 (d,	J=5Hz, 6H)
j(a)	Eis	ch9ch=ch2	4,8-5,2	(m, 211)
jCa)	His	i-i	2,2 (m,	2II)

(a)

Obtido como sais di-hidrocloreto

		•K.	EXEMPLO 6
			Os compostos	apresentados	abaixo
foram	preparados	a partir	de reagentes	adequados de	acordo
com ο	processo do	Exemplo	1.		l

η

Η - n m r Reacção (CDC1_o)delta

		to	to	to
		_	r*»
		X —·	X X	X X	X
X	X	cn x	cn cn	cn σι	σι
cn «· Ό · '•r N	cn *c » ’ N	m (ΛΌ ‘ N	tn tn »«·*	to to o) cn	* w
X σ tn * II O	X σι in ► II o ·□	X ιη σ tn ·-. * II HO t	tn co ·> r rd CS	in r* ·* r rH rH	in •s rH

O I u

I 0 +

o	0	Q	Q
1	1	1	1
o	u	u	u
4-	+	+	+
0	CQ	0	0

in x

CN U fO X u

X o

CN X u X X

ΙΠ X

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	tn		ιη		u-	N
	X		X		r—	0
	CM ‘		CN		cn	o
X o	U	X o	u		X u	o u
CN	cn	CN	cn			cn
X	X	X	X		X	*—
u	u	υ	u		u	CN
I		I		cn	CN	X
X	X	X	X	X	X	u
o -	u	Ο-	u	u	o	**
X		Χ		X	X	X
X		X		X	X	X

CN

CN 'cn X u

X u

CM X u cn X υ x υ

CN

« •rl X

o	O	rd	O	rd
	φ	<D	cn *r|	«J
	rd	rd	X	rd
Φ	z	X	o	<
rd	u	u	o	u
g	o	o	0	o
	0	0	H	0
rd	rd	rd	Ό rd	rd

I o u

H-nmr

Reacçao (CDC.1_O ) de 11 a

X CN tn CN •s tn	X cn Ό * N X o> tn r II ©	X cn •0 — N X σ> tn *> II o »v	·*« CN tn CN K tn	w. co Λ CN
O			O 1 o	X 1
1			u
u 1 X +	O 1 u	Q 1 O	+ X 1	1 X + *
	+ X	+ X	<

N α o o u cn

CN x u

X z tn X

CN υ cn X u

CN cn X u

X u

CN X u c| »H

tn	N
X	X
CN	u
u	X
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X	**
u	CN X	<n
X	υ	X
u X	*·* X	u X
z	z	z
	CN	CN
		z—
	cn	cn
	X	X
1 1 1	u	u
X	X
u	u
	CN	CN
	X	X
	u	u
o	rH

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	X	X	X	X
X	σι	CN	cn	CN
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Ci IA	in	CM	09	09
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		1		1
		o		o
		1	Q	1
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Q	Q	+	O	+
+	+	»	+	•
u	o	<	X	<

	ia X
	ia	CN
	X	O	N	cn	cn
	CN		X	X	X
	u	cn	o	o	O
X o CN X	CN cn X	X o X	X 2 ia	Q-3	Q-s
υ	O	o	CN
1	w	CN	X
X	X	X	u
ο-	•o	u	—
χ 2		X 2	X 2

	CN
	cn X
1 1	o
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1 1	X o CN X o

o	o	rH	o	O
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1	1	•rl	o	(D
1	1	X	o	•rH
1	1	u	X	X
		o	•rl
		X	Q

W| o

rH rH

EXEMPLO 7

N-Metil-2R, 4jS, 5S.,-/ 6-Ciclo-hexil-4-hidroxi-5-(3-/ 4(5)-imidazoli17-2-(2-indolocarbonilamino)propionamido}-2-(2-metilpropil)7hexanamida___________________________________ ou /~2-(2-Indolinocarbonil)-IIis-ibhcSta-NHCHg7

Uma mistura de 2-/ 2-(l-carbobenzoxi)indolinocarbonil)-His-ibhcSta-NHCH₃ (60 mg) e 10% de hidroxido de paladio em carvao (35 mg) em metanol (10 ml) foi hidrogenada a 3,52 Kg/cm (50 psi) e a temperatura ambiente durante 3 horas num agitador Paar. Retirou-se então do agitador, filtrourse através de terra de diatomaceas e o filtrado foi seco in vacuo.

NMR do residuo mostrou a presença do grupo CBz. Os passos de redução e secagem foram repetidos duas vezes usando catalizador novo de cada vez para dar 53 mg do composto desbloqueado na forma vítrea. ^H-nmr (CDCl₃)delta ; 2,8 (s, 3H).

De modo semelhante, seguindo o processo do primeiro paragrafo mas usando um período de reacçao de 18 horas desbloqueou-se / 2-(2-carbobenzoxi-3-isoquinilinocarbonil)-His-ibhcSta-NHCH^.

'‘H-nmr (CDCl^Jdelta do produto : 2,8 (s, 3H),

EXEMPLO 8

Ãcido 2R, 4S, 5S..-4-/ 6-ciclo-hexil-4-hidroxi-5-[(2-/ 2-indolocarbonil7 amino)propionalido]-2-(2-metilpropil)-hexanamido7butanóico__________________________________________ ou 4-/ 2-(2-Indolocarbonil)-Ala-ibhcSta7GABA

Uma mistura do éster benzilico de 4-/^-2-(2-indolocarbonil)-Ala-ibhcSta7GABA (36 mg) e 10% de paladio/C (20 mg) em metanol (10 ml) foi hidrogenado a 3,52 Icg/cm (50 psi) e a temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reacçao foi então filtrada através de terra de diatomáceas e seca in vacuo para dar 26 mg do produto do titulo na forma vítrea.

hl-nmr (CDCl₃)delta : 1,0 (d, J^5Hz, 6H).

De modo semelhante, N-(5-aminopentil)-/~6-ciclo-hexil-4-hidroxi-5 ^3-/ 4(5)-imidazolil7~ -2-(2-indolocarbonilamino)propionamido^-2-(2-metilpropil)7~ hexanamida foi preparado a partir do composto benziloxicarbonilo do Exemplo 9.

^H-nnir (CDCl₃)delta : 1,0 (d, J=Hz, 6H).

EXEMPLO 9

N-(5-Benziloxicarbonilaminopentil-2R, 4S_, 5S.,-/ 6-ciclo-hexil-4-hidroxi-5-t3-/ 4(5)-imidazolil7-2-(2-indolocarbonilamino)propionamido}-2-(2-metilpropil)7hexanamida_______

A uma solução de N-(5-benziloxicarbonilaminopentil)-/ 6-ciclo-hexil-4-hidroxi-5-3-(l-t-butoxicarbonil)-/^-4(5)-imidazolil7-2-(2-indolocarbonilamino)propionamido-2-(2-metilpropil27hexanamida (38,3 mg, 0,0456 mM) em metanol (2 ml) â remperatura ambiente foi adicionada sio (cerca agitada durante 3 horas, o reduzida e adicionado éter éter deu um residuo gomoso minimo de dioxana, a liofilizado para dar ^H-nmr (CDCl^delta :

uma quantidade catalítica de carbonato de potajs de 10% por peso do derivado BOC). A reacçao é metanol removido sob pressão ao residuo. A evaporaçao do que foi dissolvido num volume solução transferida 33 mg do produto do

1,0 (d, J=5Hz, 6H) para um frasco e titulo.

EXEMPLO 10

N-(3-Benziloxicarbonilpropil)-2R, 4S., 5S.,-/ 6-ciclo-hexil-4-hidroxi-2-(2-metilpropil)-5-{2-met11-2-(t-butilcarbonil^ amino)-etil|7hexanamida_____________________________________ ^{0 u} BOCAla-íbhcSta-NAfCHnjoCO^Bz

A uma solução do produto da Preparação 18 (277 mg, 0,5572 mM) e BOCAla (127 mg, 0,6686 mM) em cloreto de metileno (5 ml) a 0°C foi adicionado cianofosfonato dietílico (0,104 ml, 0,6686 mM) seguido de N-metilmorfolina (0,147 ml, 1,337 ml) e a reacçao agitada a 0°C durante uma hora, depois à temperatura ambiente durante 4 horas. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida, o residuo suspenso em acetato de etilo (20 ml) e a so luçao lavada sucessivamente com HCl a 5% (a x 20 ml), agua (1 x 20 ml), solução saturada de carbonato de sódio (2 x 20 ml) água (1 x 20 ml) e solução saturada de cloreto de sódio (1 x 20 ml), depois seco (MgSO^). A evaporaçao do solvente sob pressão reduzida deu 248 mg do produto bruto do titulo que foi purificado por cromatografia em 3,0 g de gel de sílica de crivagem fina usando como eluente 97,5 : : 2,5 de clorofórmio : metanol. Obteve-se 166 mg de produto do titulo.

^-nmr (CDCl^delta : 5,2 (s, 2H).

Preparaçao 1

S-3-Ciclo-hexi1-2-(t-butoxicarbonilamino)-propionaldeído jS-3-ciclo-hexi 1-2-(t-butoxicarbonilaminojpropionato de metilo (51,2 g, 0,179 moles) foi dissolvido em 728 ml de tolueno seco e arrefecido até -78°C.

Hidreto de diisobutilaluminio (449 ml de 1M em tolueno,

0,445 moles) foi adicionado gota a gota durante 1 hora, mantendo -70°C a -78°C. Adicionou-se metanol (13 ml) a -70°C, seguido de 608 ml de tartrato de sódio e potássio semi-saturado e a mistura foi aquecida até ã temperatura ambiente.

Adicionou-se éter e a fase orgânica foi separada e lavada com 1 litro de tartrato de sódio e potássio.

A fase aquosa original foi extraída com 600 ml de éter fresco e lavada de novo com 600 ml de tartrato de sódio e potássio saturado fresco.

Combinaram-se as fases orgânicas secaram-se sobre MgSO^ e secou-se para dar o produto do titulo como uma em ^H-nmr, 45,6 hexano); ⁱH-nmr goma, contaminada com tolueno com base g ; tlc Rf 0,45 (1:3 de acetato de etilo: (CDCl^delta : 0,9 a 2,3 (m), que inclui o singeleto t-butilo a 1,4, 3,0-4,8 (m),

4,9-5,2 (d), 9,6

Preparaçao 2

4RS, 5_S-6~Ciclo-h exi 1-5-(t-butoxic ar boni lamino )-4-hidroxi-2-hexinoato de etilo

THF seco recentemente destilado

(117 moles) e diisopropilamina (22,0 ml, 15,8 g, 0,156 ml) foram introduzidos num balao de reacçao seco à chama em atmosfera de N₂, a solução resultante arrefcida até -30°C e adicionado butil-litio (76,9 ml de 1,6M em hexano, 0,123 moles) durante 5 minutos. A solução foi então arrefecida até -78°C e propiolato de etilo (12,5 ml, 12,1 g, 0,123 moles) adicionado gota a gota durante 20 minutos mantendo a temperatura entre -65°C e -78°C. Após 30 minutos a -78°C adicionou-se o produto do titulo da Preparaçao precedente (19,52 g, 0,0866 moles) em 35 ml de THF durante 20 minutos de novo mantendo -65°C a

-se 200 ml de 0:1 de THF:

çao e deixou-se aquecer se com metade do volume cítrico a 10a.

-78°C.

ácido acético à mistura de até à temperatura ambiente e de éter e um

Apos 2 horas, adicionouvolume igual de reacdiluiuácido vou-se sequenciadamente fresco a 10%,

Separou-se com 2 x 200 a fase orgânica la200 ml de ml de ácido citrico solução saturada de cloreto de sódio e 2 x 200 ml de NaHCO^ saturado, secou-se sobre MgSO^ e evaporou-se até se obter um óleo vermelho escuro, 38,2 g.

Este último foi cromatografado numa coluna 10 cm x 42 cm de gel de silica com controle por tlc, eluindo com tros de 1:9 de acetato de etilo:hexano. Apos desenvolver a coluna colheram-se fracções de fracções 29-37 foram combinadas to do titulo na forma de um oleo de acetato de etilo:hexano); Hl-nmr (CDCl^)delta: 1,0-2,0 para o grupo t-butilo a 1,5, (m li1500 ml

500 para

As dar g ; tlc Rf e secas para

15,3 ml.

o produ0,44 (3:7

25H)

3,8-5 (m, incluindo singlet

6H).

Preparaçao 3

t-Butil /^_2-Ciclo-hexil-l-(di-hidro-5-oxo-2H-furan-2-il) etil/carbamato produto do titulo da Preparaçao precedente (18,28 g) e 5% Pd/BaSO^ (10,97 g) foram combinados com 150 ml de acetato de etilo e hidrogenados durante 2 horas sob uma pressão de 4 atmosferas de hidrogénio. 0 catalizador foi recuperado por filtraçao e o filtrado seco para dar o intermediário 4 RS, 5S,-6-ciclo-hexil-4-hidroxi-5-(t-butiloxiamino)hexanoato de etilo, 19 g.

o ·

Este último foi suspenso em 250 ml de ácido acético a 2,5% em tolueno, resíduo horas, gel de cm x sujeito a refluxo 2,5 a 3 cromatografado numa coluna de eluição com litros de 1:1 de éter seco e de

9:11 de cm, controle por tlc, éter:hexano,

11:9 de éter:hexano hexano, colhendo-se

150 ml e finalmente tros de de éter çoes de çoes 17-24 foram combinadas dar o produto pretendido, predominante

5_S do titulo na forma de um óleo, de silica litros de li3:2 hexano, litros e finalmente 3 fracções de 400 ml fracções de e evaporadas

400 ml de

As frac f rac

9,13 com eter menos polar, 4S, tlc Rf 0,5 (7:3 para éter:hexano). 0 epímero 4R., 5S_ mais polar do produto titulo foi isolado secando as fracções 28-45 combinadas e cristalizadas por trituração com hexano, 1,77 101,5-103,5°C.

do g '5 ; p.f.

Preparaçao 4 t-Butil/ 2-ciclo-hexil-l-{di-hidro-4-(2-meti1-2-profenil)-5-oxo-2H-furan-2-113etil7carbamato

THF seco recentemente destilado (30 ml) e diisopropilamina (3,51 ml, 2,52 g, 0,0249 moles) foram introduzidos num balao de reacçao seco à chama, sob Ν₂, a solução resultante foi arrefecida para -50°C, adicionou-se butil-litio (13,9 ml de 1,6M em hexano, 0,0222 moles) e a mistura foi ainda arrefecida para -78°C. 0 produto do titulo da Preparaçao precedente (2,77g, 0,0089 moles) em 15 ml de THF foi adicionado gota a gota durante 10 minutos e deixado formar o enolato durante mais 20 minutos a -78°C, altura em que 3-bromo-2-metil-l-propeno em 5 ml de THF foi adicionado durante 10 minutos e a mistura agitada durante mais 1 hora a -78°C, parada com 5 ml de NH^Cl saturado, aquecido até à temperatura ambiente, diluido com metade do volume de éter, lavado com 2 x 50 ml de ácido citrico a 10%, 2 x 50 ml de NaHCO^ saturado e x 25 ml de solução saturada de cloreto de sódio, seco sobre MgSO^ e seco para dar um óleo, 3,06 g, uma mistura dos epímeros do titulo. Estes foram separados por cromatografia em colunas de 7 cm x 20 cm com silica gel; controle por tlc; eluição sequenciada com 2 litros de 1:9 de éter:hexano, 4 litros de 3:17 de eter:hexano, 2 litros de 1:4 de éter:hexano, 2 litros de 1:3 de éter:hexano, litros de 7:13 de éter:hexano e 2 litros de 1:1 de éter: hexano; e colhendo fracções de 125 ml. 0 produto do titulo menos polar, tendo estereoquimica trans (2jR), foi colhido nas fracções 30-48 que se combinaram e secaram para dar o mesmo na forma de um óleo, 1,17 g ; tlc Rf 0,45, (2:3 de éter:hexano);

¹H-nmr (CDCl₃)delta 1,4 (s, 9H), 1,8 (s, 3H), 0,3-3,0 (m, 18H), 3,6-4,0 (m, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,1-4,8 (m, 2H). As fracções 55-76 deram o produto mais polar do titulo, também na forma de um óleo, 0,358 g, tendo estereo química cis (2SJ; tlc Rf 0,36 (2:3 de éter:hexano);

Il-nmr idêntico ao do epimero menos polar.

Preparaçao 5 t-Butil/~2-ciclo-hexil-l-|di-hidro-4-(2-metilpropil)-5-oxo-2II-f uran-2-ilj; -etil7carbamato________________________________ produto menos polar do titulo da Preparaçao precedente (1,17 g) e 10% Pd/C (0,351 g) foram combinados com 20 ml de acetato de etilo e hidrogena^ do à pressão de 4 atmosferas durante 2,5 horas, o catalisador foi recuperado por filtraçao e o filtrado seco para dar o produto menos polar do titulo (igualmente tendo estereoquimica trans, i.e., 2R.) na forma de um óleo que cris talizou quando deixado em repouso, 1,20 g;p.f. 88-93°C; tlc Rf 0,65 (1:1 de éter : hexano), Rf 0,73 (2:1 de acetçi to de etilo:hexano). 0 outro isómero, tendo estereoquimica cis (2S.) , foi obtido de modo idêntico; tlc Rf 0,59 (1:1 de éter:hexano). Nas Preparações subsequentes que empregam este epimero menos polar de Rf 0,65 (1:1 de eter:hexano) está especificada estereoquimica 2R.

Preparaçao 6

2R, 4S_, 5S_-6-Ciclo-hexil-5-(t-butoxicarbonilamino)-4-hidroxi-2-(2-metilpropil)hexanoato produto menos polar 2R_ do titulo da Preparaçao precedente (1,0 g, 2,72 mmoles), DME (14 ml) e NaOH (4,4 ml de 5N, o,o22 moles) foram combina dos, agitados durante 12 horas e depois secos com liber tação do solvente orgânico. 0 residuo aquoso foi diluido com água (5 ml), coberto com um volume igual de éter, arre fecido até 0°C e acidificado com 22 ml de HC1 IN altura em que a fase aquosa ficou turva. A fase de éter foi separada e a fase aquosa (pH 2,0) lavada com um volume igual de éter fresco. As fases de eter foram combinadas, secas sobre MgSO^ e evaporadas para dar o intermediário ácido 2R, 4S_, 5_S-6-ciclo-hexil-5-(t-butoxicarbonilamino)-4-hidroxi-2-(2-metilpropil)-hexanóico na forma de uma espuma branca 0,909 g (2,36 mmoles). Esta última foi introduzida em 20 ml de DMF juntamente com Ι^ΟΟ^Ο,ΟΟΟ g, e arrefecido até 0°C. Adicionou-se brometo de

2,36 mmoles) benzilo (0,308 ml, 0,443 g,

2,59 mmoles) e a mistura em agitaçao foi deixada aquecer até à temperatura ambiente.

Após 4 oi diluida com um volume ml de ácido citrico a 10%, seco sobre MgSO^ e evaporaEste último foi cromatograsilica; controlado por tlc;

éter:hexano, 1 litro de de 1:4 de éter:hexano e fi:hexano e colhidas fracções horas, a mistura de reacçao f igua de éter, lavada com 1 x x 75 ml de NaHC0_o saturado, o do para dar um óleo, 1,35 g. fado em 4 cm x 2) cm de gel de eluição com 1 litro de 1:9 de 3:17 de éter : hexano, 1 litro nalmente 1 litro de 3:7 de ete de 23 ml.

As fracções 46-75 foram combinadas e evaporadas para dar o material de partida cristalino, 0,583 g, adequado a reciclagem. Combinaram-se as fracções 85-119 e evaporaram-se para dar o produto do titulo na forma de um óleo, 0,275 g; tlc Rf 0,47 (1:1 de éter:hexano); ¹II-nmr(CDCl₃): 0,3-2,0 (m, 24H), 1,4 (s, 9H), 2-2,4 (m, 1H), 2,6-3,0 (m, 1H), 3,2-3,7 (m, 2H), 4,65 (d, 1H), 5,1 (s, 2H), 7,3 (s, 5H) .

Preparação 7

2R, 4S_, 5S^-6-Ciclo-hexil-5-(t-butoxicarbonilamino)-2-(2-metilpropil)-4-(2-tetra-hidropiraniloxi)hexanoato produto da Preparaçao precedente (0,442 g, 0,929 mmoles), 3,4-di-hidro-2H-pirano (97%, 0,255 ml, 0,235g, 2,79 mmoles) e p-tosilato de piridinio (23mg, 0,093 mmoles) foram combinados em 6,5 ml de CE^C^ e agitados num frasco fechado durante 18 horas, depois removido o solvente por evaporaçao e o residuo suspenso em 100 ml de éter, lavado com 2 x 100 ml de cloreto de sódio semi-saturado, seco sobre MgSO^, coevaporado com CH2CI2 e seco sob vácuo elevado para dar 0 produto do presente titulo na forma de um óleo, 0,565 g; tlc Rf 0,59 (2:3 de éter:hexano).

Preparaçao 8

Acido 2R, 4S, 5S.-6-ciclo-hexil-5-(t-butoxicarbonilamino)-2-(2-metilpropil)-4-(2-tetra-hidropiraniloxi)hexanoico produto da Preparaçao precederi te (0,565 g) e 10% Pd/C (0,17) foram combinados em 10 ml de acetato de etilo e hidrogenados à pressão de 4 atmosferas durante 2,5 horas. Recuperou-se o catalizador por filtraçao e o filtrado foi coevaporado com Cl^C^ para dar o produto do titulo na forma de um óleo, 0,55 g, o qual contem o rendimento teórico (0,474 g) do produto; tlc Rf 0,0 (2:3 de éter:hexano), 0,35 (1:1 de acetato de etilo: hexano);

iH-nmrCCDCl^inclui 9,5-101 (bs, 1H, COOH) e sem picos devidos a um grupo benzilo.

Esta Preparaçao foi repetida numa escala de 300 mg com secagem do produto sob vácuo elevado para produzir 250,5 mg (um rendimento quantitativo do produto do titulo na forma de uma espuma branca).

Preparaçao 9

2R, 4S_, 5í5-6-Ciclo-hexil-5-(t-butoxicarbonilamino)-4-hidroxi-2-(2-metilpropil)-N-metil-hexanamida

2R, 4S_, 5S_-6-Ciclo-hexil-5-(t-butoxicarbonilamino )-2-(2-metilpropil)-gama-hexanolactona

(197 mg, 0,536 mmoles, Preparação 5) foi dissolvido em ml de água e arrefecido num banho de gelo-água. A solução fria foi aspergida com CH^NE^ durante 3 minutos, rolhada e deixada à temperatura ambiente durante 2 horas, altura em que tlc indicou estar completa a reacçao. Foi retirado o solvente à mistura e secou-se sob vácuo elevado para dar o produto do titulo na forma de uma espuma branca e sólida, 204 mg; tlc Rf 0,31 (3:1 de acetato de etilo:hexano) .

Preparaçao 10

Hidrocloreto de 2R,

4S, 5S.-6-Ciclo-hexil-5-amino-4-hidroxi-2-(2-metilpropil)-N-metil-hexanamida produto do titulo do Exemplo precedente (199 mg,0,499 mmoles) foi dissolvido em HC1 4N em dioxana (1 ml) e agitado durante 25 minutos sob N_2> altura em que tlc indicou consumo completo do material de partida. 0 solvente foi então evaporado da mistura de reaç: I çao e esta seca sob vácuo elevado para produzir o produto do titulo na forma de pó amarelo pálido nao totalmente seco 185 mg; tlc Rf 0,20 (18:2:1 de CHCl^:etanol:ácido acético; a placa de tlc foi exposta a vapor de NH^ antes da eluiçao ι para converter o sal de HC1 na base livre).

Preparaçao 11

t-Butil/^-2-ciclo-hexil-l-[di-hidro-4-benzil-5-oxo-2H-furan-2-ilj etilZcarbamato

(2,48 ml, 0,0177 moles; destilado a partir de Ca.^) em

THF seco (7,4 ml, destilado a partir de K) foi arrefecido até 0°C. Durante 5 minutos adicionou-se gota a gota butillitio (11,0 ml de 1,6214 em hexano, 0,0177 moles). Após agitaçao durante 15 minutos a 0°C, a mistura foi arrefecida até -78°C e o produto menos polar 4S_, 5jS do titulo da Preparaçao 3 (2,30 g, 0,0074 moles) em 3,7 ml de THF seco foi adicionado durante 5 minutos. Apos agitaçao duran. te mais 30 minutos a -78°C, adicionou-se, gota a gota, ao longo de 5 minutos, brometo de benzilo (0,923 ml, 0,0078 moles) em 3,7 ml de THF seco. Após 1 hora a -78°C, a reaç_ çao foi parada pela adiçao de 10 ml de NH^Cl saturado, aquecido até à temperatura ambiente, diluído com 25 ml de éter e as fases separadas. A fase orgânica foi lavada com 2 x 15 ml de NaHC0_o saturado, seca (MgSO^)e evaporado para dar um óleo (3,29 g). 0 óleo foi cromatografado em 150 g de gel de sílica eluindo com 2,5 litros de 1:9 de acetato de etilo:hexano e controlando por tlc. As fracções com produto limpo foram combinadas e evaporadas para dar o produto do titulo purificado na forma de um sólido branco oleoso, 1,46 g; tlc Rf 0,60 (1:1 de acetato de etiloihexa, no). 0 material de partida mais polar (0,91 g de oleo amarelo cerca de 70% puro, tlc Rf 0,4 no mesmo sistema) foi também recuperado da coluna.

Preparagao 12

2R, 4S_, 5S_-6-Ciclo-hexil-5-(t-buto?:icarbonilairiino)-4-hidro_ xi-2-benzil-N-metil-hexanamida produto do titulo da Preparagao precedente (157 mg) foi dissolvido em 2 ml de CHgOH, arrefecido até 0°C perfused com durante 3 minutos. 0 frasco foi rolhado deixado em repouso à temperatura ambiente durante 1,5 horas, processado com 2 x 2ml de eter e seco sob vácuo elevado para dar o produto do titulo na forma de espuma sólida branca, 164 mg; tlc Rf 0,17 (1:1 de acetato de etilo:hexano), Rf 0,29 (3:1 de acetato de etilo:hexano); ^H-nmr/~CDCln7 300MHz apresentou o C(CH_n)_o7 — O .3 Ξ7 esperado (s, 9H) , N-CH^ (d, 3H), resonâncias aromáticas e picos de t-butoxicarbonil-NH (d, 1H).

Preparagao 13

Hidrocloreto de 21?, 4S_, 5S_-6-ciclo-hexil-5-amino-4-hidroxi-2-benzil-N-metil-hexanamida produto da Preparagao precedente (159 mg) foi dissolvido em 2 ml de HC1 4N em dioxana, agitado sob N₂ durante 0,5 hora, evaporado, e processado com 3 x 2 ml de éter e o residuo seco sob vácuo elevado para dar o produto do titulo na forma de umlpó amarelo pálido, 135 mg; tlc 0,20 (18:2:1 de CHCl^: etanol: ácido acético; a placa em que se aplicou os pontos foi exposta a NHg para neutralizar o sal de HCl antes da eluição).

Preparaçao 14

Hidrocloreto de 2R, 4S-, 5S.-6-ciclo-hexil-5-amino-4-hidroxi-2-(ciclo-hexilmetil)-N-metil-hexanamida

Pelo método da Preparaçao 13, o produto do titulo da Preparaçao precedente (75 mg) foi convertido no produto do presente titulo, 64,1 mg; tlc Rf 0,18 (18:2:1 de CHCl^:etanol:ácido acético; a placa com os pon. tos aplicados foi neutralizada com vapor de antes da eluição).

Preparaçao 15

Ãcido N-carbobenzoxi-indolino-2-carboxilico

Uma solução de cloroformato de benzilo (1,05 ml, 1,254 g, 7,353 mM) em tetra-hidrofurano (THF, 5 ml) foi adicionada lentamente a uma solução de ácido indolino-2-carboxilico (1,00 g, 6,127 mM) e bicarbonato de sódio (514 mg, 6,127 mM) em THF:água (20 ml de 1:1) a 0-5°C. 0 pH foi mantido a cerca de 8,0 pela adiçao de uma solução de NaOH IN. Usou-se um total de 6,13 ml de NaOH IN, o pH sendo estabilizado acerca de 8,13. A mistura de reacçao foi deixada aquecer até â temperatura ambiente e depois removido o THF. 0 residuo aquoso foi lavado com éter e a fase de éter removida. A fase aquosa foi extraida com acetato de etilo a pH 2,0 (ajustado com HC1 IN). A extracçao com acetato de etilo foi repetida e os extractos combinados de acetato de etilo foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio, depois secos (MgSO^).

A evaporaçao do solvente deu 1,46 g do produto.

¹H-nmr (CDClg)delta: 5,2 (s, 211).

De modo semelhante preparou-se o ácido N-carbobenzoxi-isoquinolino-3-carboxilico. ¹H-nmr(CDCl₃)delta: 5,2 (s, 2H).

Preparaçao 16 t-Butil/ 2-ciclo-hexil-l-{di-hidro-4-alil-5-oxo-2H-furan-2-ilj etil7carbamato

A uma solução de diisopropilamjL na (928 mg, 129 ml, 9,1715 mM) em THF (30 ml) arrefecida até -40°C adicionou-se n-butil-litio (5,12 ml de 1,6 M era hexano, 8,1888 mM) gota a gota. A mistura de reacçao foi então arrefecida até -75°C e adicionado t-butil/ 2-ciclo-hexil-1-(di-hidro-5-oxo-2H-furan-2-il) etil7carbamato (1,02 g, 3,2755 ιηΤφ em 10 ml de THF. A mistura de reaç^ çao foi agitada durante 30 minutos à -75°C altura em que se adicionou gota a gota brometo de alilo (476 mg, 340 pl, 3,9306 mM) , sendo a temperatura mantida entre -75°C e -65°C. Após adiçao de brometo de alilo a reacçao foi agitada durante 2 horas a -75°C. Adicionou-se mais brometo de alilo (170 pl, 288 mg) a -75°C e a reacçao foi agitada durante 2,5 horas. Adícionou-se então cloreto de amonio (5 ml de solução aquosa saturada) gota a gota e deixou-se aquecer a reacçao até à temperatura ambiente. 0 THF foi removido por evaporaçao, o residuo suspenso em éter e a solução de éter lavada sucessivamente com 10% de solução aquosa de ácido citrico, solução saturada de bicarbonato de sodio e solução saturada de cloreto de sódio e depois seca (MgSO^). A remoção do solvente sob pressão reduzida deu 1,04 g do composto do titulo.

Ele foi purificado por cromatografia numa coluna de gel de silica, eluindo com hexano: acetato (fe etilo, 97,5:2,5 (140 fracções de 12 ml), hexano: acetato de etilo, 95:5 (170 fracções de 12 ml) e hexano: acetato de etilo, 9:1 (50 fracções de 12 ml). A remoção do solvente das 55 últimas fracções deu 372 mg de composto do titulo puro.

^H-nmr ( CDClg) delta : 4,8-5,2 (m, 2H).

Preparaçao 17

2R_, 4S., 5S.-6-Ciclo-hexil-5-(t-butoxicarbonilamino-4-(2-tetra-hidropiraniloxi)-2-(2-metilpropil)-N-(3-carbobenzoxi-propil)hexanamida ou Éster benzilico de BOC-ibhcSta-GABA

A uma solução de hidrocloreto de 4-aminobutanoato de benzilo (118 mg, 0,7026 mM), 2R_, 4S_, 5S59

-6-ciclo-hexil-5-t-butoxicarbonilamino-4-(2-tetra-hidropiraniloxi)-2-(2-metilpropil)hexanóico (300 mg, 0,638 mM) em cloreto de metileno (5 ml) a 0°C adicionou-se cianofosfonato dietilico (114,6 mg, 0,109 ml, 0,7026 mM), seguido de N-metilmorfolina (0,147 ml, 1,34 mM). A reacçao foi agitada a 0°C durante uma hora e depois à temperatura ambiente durante 4 horas. 0 cloreto de metileno foi então removido sob pressão reduzida e adicionado acetato de etilo (20 ml) ao resíduo. A solução resultante foi lavada sucessivamente com HC1 a 5% (2 x 20 ml), água (1 x 20 ml), solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x 20 ml), água (1 x 20 ml) e solução saturada de cloreto de sódio (1 x 20 ml), depois secou-se sobre MgSO^. A remoção do solvente sob pressão reduzida deu 385 mg do produto bruto do titulo que foi usado sem posterior purificação. ¹H-nmr(CDCl₃)delta:1,5 (s, 9H).

Preparaçao 18

Hidrocloreto de 2R, 4S, 5S_, 5-amino-6-ciclo-hexil-4-hidro I xi-2-(2-metilpropil)-N-carbobenzoxipropil)hexanamida_____ ou Éster benzílico de ibhcSta - GABA produto da Preparaçao precedente (359 mg, 0,5507 mM) em ácido acético (8 ml) e água (2 ml) foi agitado durante 16 horas e a reacçao foi então evaporada sob vácuo elevado à temperatura ambiente para dar o produto de (2-tetra-hidropiranil).

residuo foi dissolvido em éter (3 ml), adicionado HC1 4,7N/dioxana (4 ml) a 0°C e a reaç çao foi agitada durante 4 horas. Os materiais voláteis foram evaporados sob pressão reduzida e o residuo triturado com éter/hexano para dar o produto do titulo na forma de um sólido branco.

Preparaçao 19

3-/~4(5)-imidazoli17-2-(2-indolocarbonilamino)-propionato de metilo

A uma solução de di-hidrocloreto do éster metilico de histidina (5,50 g, 22,7 mM) em cloreto de metileno (225 ml) a 0°C foi adicionado trietilamina (6,92 ml, 49,8 mM) e a reacçao foi agitada durante 30 minutos a 0°C. Adicionaram-se então ácido indolo-2-carboxilico (4,2 g, 26,0 mM), 1-hidroxibenzotriazolo (5,56 g, 36,3 mM) e 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida (5,35 g, 26,0 mM) à reacçao pela ordem indicada (sob atmosfera de azoto) a 0°C. A agitaçao continuou a 0°C durante 3 horas apos o que a reacçao foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e a agitaçao continuou durante 18 hoars. Adicionouse água (100 ml) à reacçao, a mistura foi filtrada e depois concentrada in vacuo. A adiçao de acetato de etilo (200 ml) ao concentrado deu um sólido amarelo gomoso. 0 acetato de etilo foi removido por evaporaçao, adicionado clorofórmio (200 ml) e a mistura extraida com uma solução de NaOH IN (4 x 30 ml), cloreto de sódio saturado (2 x 20 ml), depois seca sobre Na2S0^. A concentração do extrato seco deu 7,2 g (102%) de espuma amarela.

Adicionaram-se agua (20 ml) e HC1 IN (25 ml) à espuma amarela e extariu-se a solução com clorofórmio (2x5 ml). A fee aquosa foi ajustada a pH 6,0 e arrefecida durante a noite. A água foi removida in vacuo e o residuo tornado azeotrópico com tolueno para dar 4,3 g de sólido compreendendo 25% de sal conforme determinado

-3 por HPLC no sistema 35:65 de acetonitrilo: PO^ O,1M, pH 2,1 e 75% do produto do titulo.

^H-nmr(CDCl₃)delta : 3,8 (s, 3H).

Preparaçao 20

Ãcido l-(t-butox±arbonil)-3-/ 4(5)-imidazolil7-2-(2-indolo_ carbonilamino)propiónico produto da Preparaçao 19 (4,3 (60 ml) e depois adicionou-se arrefecida até 0°C, adicionouA solução foi

A reacçao foi arredje

A solução ajustada a pH 10,5 mM) de uma só vez à mistura de

g) foi adicionado a metanol água (20 ml).

-se carbonato de potássio (7,6 g) e a reacçao foi agitada durante uma hora a 0°C. Aqueceu-se até à temperatura ambiente e agitou-se durante duas horas, fecida até 10°C, ajustada a pH 3 por adiçao de HC1 6N, pois evaporado o metanol sob pressão reduzida, aquosa restante foi arrefecida até 0°C, pela adiçao de uma solução de NaOH 6N e adicionou-se dio xana (150 ml). Adicionou-se então di-(t-butoxicarbonil) óxido (3,9 g, 4,2 ml, reacçao em agitaçao e deixou-se aquecer até à temperatura ambiente. 0 pH da reacçao foi mantido a 9-10,5 pela adiçao de NaOH 6N conforme necessário. Após áuas horas de agitaçao

adicionou-se ã reacçao uma segunda porção de di-(t-butoxicarbonil)óxido (2 ml) e continuou-se a agitaçao durante mais 15 minutos. A dioxana foi removida por destilação sob pressão reduzida e adicionou-se água (100 ml) ao resíduo que foi então extraído com éter (3 x 25 ml). Adicionaramse gelo muido e acetato de etilo (500 ml) ao residuo aquq so que foi então ajustado a pH 1,3 por meio de HC1 6N e agitado fortemente. A fase de acetato de etilo foi separja da, a fase aquosa extraída com acetato de etilo (2 x 50 ml) e os extractos combinados lavados com solução saturada de cloreto de sódio (1 x 50 ml) e secou-se (Í^SO^). A remoção do acetato de etilo sob pressão reduzida deu 3,1 g (56%) do produto do titulo na forma de pó amarelo. ^H-nmr(CDCl₃)delta : 1,7 (s, 9H).

Preparaçao 21

N-(5-Benziloxicarbonilaminopentil)-/_ 6-ciclo-hexi 1-2-( 2-metilpropil)-5-(t-butoxicarbonilamino)-4-(2-tetra-hidropiraniloxi)7-hexanamida_____________________________________

I éter tetra-hidropiranilico de BOChcSta (299 mg, 0,6367 mM), o derivado mono CBz do hidrobrometo 1,5-diaminopentano (202 mg, 0,6367 mM), N-metil) morfolina (0,14 ml, 1,273 mM), dietilcianofosfonato (0,10 ml, 0,6367 mM) e cloreto de metileno (5 ml) foram combinados a 0°C e agitados durante 3 horas. Deixou-se então subir a temperatura até à temperatura ambiente e eontinuou-se a agitaçao durante a noite. 0 cloreto de metileno foi remo vido sob pressão reduzida e o acetato de etilo adicionado

ao residuo. A solução de acetato de etilo foi lavada sucessivamente com 2 x 10 ml de HC1 a 5%, água e bicarbonato de sódio aquoso saturado. Secou-se então sobre MgSO^ e evaporou-se sob pressão reduzida para dar 356 mg de produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna de gel de silica usando 99,5:5 de clorofórmio:metanol como eluente.

Rendimento do produto do titulo : 280 mg.

^H-nmr(CDC1_O)delta : 5,2 (s, 2H).

Preparaçao 22 t-Butil/ 2-ciclo-hexil-l-di-hidro-4-benzil-5-oxo-2H-furan-2-il etil7carbamato

Sob K^T2 , di ( isopropil) amina seca (2,48 ml, 0,0177 moles; destilado a partir de CarL·) em

THF seco (7,4 ml, destilado a partir de K) foi arrefecido até 0°G. Durante 5 minutos adicionou-se gota a gota butil-litio (11,0 ml de 1,62M em hexano, 0,0177 moles). Apos agitaçao 15 minutos a 0°C, a mistura foi arrefecida até -78°C e o produto menos polar 4_S, 5S. do titulo da Prepara, çao 3 (2,30 g, 0,0074 moles) em 3,7 ml de THF seco foi adicionado durante 5 minutos. Apos agitaçao mais 30 minutos a -78°C adicionou-se gota a gota durante 5 minutos brometo de benzilo (0,923 ml, 0,0078 moles) em 3,7 ml de THF seco. Após 1 hora a -78°C a reacçao foi parada pela adição de 10 ml de NH^Cl saturado, aquecida até à temperatura ambiente, diluida com 25 ml de éter e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com 2 x 15 ml

de NalICOg saturado, secou-se dar um óleo (3,29 g). 0 óleo de gel de silica eluindo com de etilo:hexano e controlado fracções de produto limpo e duto do titulo -purificado na oleoso, 1,46 g; tlc Rf 0,60 no). 0 material de par relo aproximadamente 70% foi também recuperado da tida mais puro, coluna.

(MgSO^) e evaporou-se para foi cromatografado em 150 g

2,5 litros de 1:9 de acetato por tlc. Combinaram-se as evaporaram-se para dar o proforma de um sólido branco (1:1 de acetato de etilo:hexa polar (0,91 g de óleo ama.

tlc Rf 0,4 no mesmo sistema)

Preparaçao 23

2R., 4S, 5_S-6-Ciclo-hexil-5-(t-butoxicarbonilamino)-4-hidro xi-2-benzil - N-me til-hexanamida produto do titulo da Preparaçao precedente (157 mg) foi dissolvido em 2 ml de CHgOH, arrefecido até 0°C e perfused com CII^Nl^ durante 3 minutos. 0 frasco foi rolhado, deixado permanecer à temperatura ambiente durante 1,5 horas, evaporado com 2 x 2 ml de éter e seco sob vácuo elevado para dar o produto do titulo na forma de uma espuma branca e sólida, 164 mg; tlc Rf 0,17 (1:1 de acetato de etilo:hexano), Rf o,29 (3:1 de acetato de etilo:hexano;

^H-nmr/ CDCln, 300MHz mostrou o CÍCE^)^ esperado7(s, 9H), N-CHg (d, 3H), ressonâncias aromáticas e picos de t-butoxicarbonil-ΠΗ (d, 1H).

Preparaçao 24

Hidrocloreto de 2R, 4S_, 5S.-6-Ciclo-hexil-5-amino-4-hidroxi-2-benzil-N-metil-hexanamida produto da Preparaçao precedeii te (159 mg) foi dissolvido em 2 ml de HC1 em dioxana, agi. tado durante 0,5 hora sob evaporado, processado com 3 x 2 ml de éter e o residuo foi seco sob vacuo elevado para dar o produto do titulo na forma de um pó amarelo pálido, 135 mg; tlc 0,20 (18:2:1 de CHCl^:etanol:ácido acético; a placa com pontos aplicados foi exposta a para neutralizar o sal de HC1 antes da eluiçao).

Preparaçao 25

Hidrocloreto de Metil/ l-[ciclo-hexil-3-hidroxi-4-aminopentanoil}7pirrolidino-2-carboxilato

Pelo processo do Exemplo 1, mas usando hidrocloreto do éster metilico de prolina (41,3 mg, 0,25 mM), N-metilmorfolina (25,3 mg, 0,25 mM), 1-hidroxibenzolotriazolo (33,0 mg, 0,25 mM), diciclo-hexilcarbodiimida (51,5 mg, 0,25 mM) e cloreto de metileno (20 ml) para dar o derivado BOC do composto do titulo com 151 mg de rendimento.

Desbloqueou-se pelo processo do Exemplo 2 para dar o composto do titulo (113 mg).

Claims (9)

1. REIVINDICAÇÕES çao de um composto tendo a l^ã. - Processo para a prepara fórmula onde A e

   B é

   -NH-ÇH-COch₃ (B-l)

   -NH-ÇH-CO- ou (CH₂)₃-^CH₃ (B-
2. 2)

   COOH onde -Z- é -0- ou -NH; R é alquilo C^-Cg ou fenilo cada um dos quais pode ser facultativamente substítuido por amino, hidroxilo, carboxilo ou carbo-alcoxilo C^-Οθ ^^es<^^e que quando o referido substituinte fôr amino ou hidroxilo, R seja alquilo C₂~C^; e Y é.isobutilo ou alilo; ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável caracterizado por se efectuar o acoplamento “úe um composto da fórmula

   A-OH com um composto da fórmula na presença de um agente de acoplamento desidratante num solvente inerte à reacçao.

   (A-l;

   (A-4);

   a reivindicação 1, caracterizado por A ser (A-6); ou (A-7); n ser 0; D ser -NH alquil C^-C^; e B ser (B-2) ou (B-3).
3. 3^a. - Processo de acordo com a reivindicação 2, caraçterizado por A ser (A-l) ou (A~6); B ser (B-3); Y ser isobutilo e D ser -NHCH^.
4. 4^a. - Processo para a preparaçao de um composto tendo a fórmula * onde A é (A-2) (Α-6) (A-8) ou

   -NH-ÇH-CO- (B-l)

   COOH

   -NH-ÇH-CO(&₂)₃-CH₃ (B-2) onde -Z- é -0- ou -NH; R é alquilo C^-Cg ou fenilo cada um dos quais pode ser facultativamente substituido por amino, hidroxilo, carboxilo ou carbo-alcoxilo C^-C^ desde que, quando o referido substituinte fôr amino ou hidroxilo, R seja alquilo e Y é isobutilo ou alilo; ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável caracterizado por se fazer a reacçao de um composto tendo a fórmula * com um composto tendo a fórmula

   HD onde A, Β, Y e D sao como definidos atrás num solvente inerte à reacçao.
5. 5^â. - Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por A ser (A-l), (A-4), (A-5), (A-6) ou (A-7); n ser 1, B ser (B-2) ou (B—3) ; e D ser -NHalquil C^_^.
6. 6-. - Processo de acordo com a reivindicação 5 em qub A e (A—1) ou (A-6; B é (B-3); Y é isobutilo e D é -NHCH^.
7. 7-, - Método para a utilização de um composto como definido na reivindicação 1, para inf. biçao da clivagem de angiotensinogénio pela renina no cor. po de um mamífero, caracterizado por se administrar a um paciente o referido composto, sendo a gama de dosagem de 0,1 mg a 10 mg por quilograma de peso corporal por dia.

   çao de um composto
8. 8^â. - Processo para a preparatendo a fórmula onde A e

   I

   Η (Α-6)

   s.

   B é

   -NH-ÇH-COCh₃

   -NH-ÇH-CO(ch₂)₃-ch₃ ou

   D, é alcoxilo C, ,, OH ou benziloxi; Y é isobutilo ou ali1 l-o lo; ou de um seu sal farmaceuticamente aceitavel, caracterizado por se fazer reagir um composto de fórmula

   A-OH com um composto de fórmula
9. 9^a. - Processo para a preparação de um composto tendt» a fórmula

   - 80 onde A e (A-5) “NH-ÇH-COCh₃