PT806410E - Compostos anti-virais - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "COMPOSTOS ANTI-VIRAIS"

Os vírus da gripe causam uma doença infecciosa para a qual não existe qualquer agente terapêutico. As desvantagens dos tratamentos existentes incluem o início de resistência clínica no espaço de trinta e seis horas e a ineficácia dos agentes contra influenza B. Encontram-se disponíveis, há mais de sessenta anos vacinas com vírus da gripe mortos. Contudo, estas vacinas não diminuiram a morbilidade, mortalidade ou perdas financeiras graves causadas por esta doença. Consequentemente um agente que trate ou evite uma infecção pela influenza ou que seja eficaz na prevenção dos sintomas clínicos associados a uma infecção com influenza irá resultar num benefício significativo para a sociedade.

Habitualmente, os únicos compostos aprovados para o tratamento terapêutico e profilático de infecções por influenza são os adamantanos: amantadina e rimantadina. Estes compostos inibem a influenza A ao inibirem a função da actividade do canal de iões M2 do vírus. A amantadina é um inibidor in vitro potente do vírus influenza A tal como é demonstrado por ensaios antivirais padrãos tais como o ensaio de redução da placa. A amantadina é eficaz na redução da duração da febre e de outras queixas sistémicas incluindo mas não se limitando a mialgia (dor muscular) e fadiga quando administrada a indivíduos infectados com influenza A no espaço de quarenta e oito horas a partir do início dos sintomas clínicos. Foi também observado que amantadina origina uma diminuição de cem vezes do título de vírus nos lavados nasais de voluntários humanos infectados com virus influenza do tipo selvagem que se correlacionam com uma diminuição dramática no nível da febre. Assim, a inibição de influenza in vitro vaticina efeitos úteis in vivo, isto é uma redução dos sintomas clínicos associados a infecção por influenza. O presente invento deriva do facto do vírus influenza ser um vírus envolvido que dita que o envólucro do vírus deverá ser reunido com a membrana endossomática da célula hospedeira a fim de iniciar o processo de introdução da sua informação genética para a célula. Porque este processo é comum a todos os vírus envolvidos, ele constitui um alvo atractivo para quimioterapia antiviral. Exemplos de vírus envolvidos que são inibidos de acordo com o presente invento incluem os vírus influenza, da diarreia bovina, da hepatite C, da encefalite da carraça, etc. O campo de acção da fusão da glicoproteina do envólucro da influenza, hemaglutinina (HA) tem sido bem caracterizado. Ver. White J.M., Annu. Rev. Physiol. vol. 52, páginas 675-697 (1990) que é aqui incorporado como referência. O vírus influenza HA proporciona pelo menos duas funções distintas: 1) reconhecimento do receptor da célula hospedeiro, isto é, resíduos do ácido siálico em glicoconjugados, e 2) fusão do envólucro virai com a membrana endossomática. Ambas as funções são essenciais para a preparação do vírus influenza in vitro e in vivo. Durante a maturação virai, HA monomérico é inserido numa bicamada lipídica, modificada de um modo pós-translacional e oligomerizada dando origem a um trímero com subunidades idênticas (HA trimérico). A infectividade da progenitura do vírus é contingente em relação a uma clivagem específica do sítio de HA por protease(s) da célula hospedeira. Esta clivagem dá origem à formação de duas cadeias polipeptidicas, HA1 e HA2, que permanecem associadas por interacções não covalentes assim como por ligações disulfureto intermolecular e intramolecular.

Foi estabelecido que a gripe HA tem duas conformações funcional- -3-

J mente relevantes. Uma conformação (Forma A) existe sob a forma de uma estrutura metastável com um pH neutro e faz a mediação do reconhecimento do receptor. A seguir a ligação mediada pelo receptor à célula hospedeira, o vírus é transportado para o compartimento endossomático onde encontra um meio acídico. O pH baixo desencadeia um rearranjo estrutural dramático de HA (Forma A) o que origina a formação da outra conformação de HA (Forma B) mais estável. A forma B de HA é necessária para fusão do envólucro do vírus com a membrana endossomática. É o rearranjo estrutural da Forma A para Forma B de HA que permite que o campo de acção da fusão interactue directamente com a membrana endossomática permitindo a libertação de informação genética virai para o citoplasma da célula hospedeira. Estas considerações levam-nos ao desenvolvimento de uma estratégia para intervenção antiviral tendo como base a revogação de fusão mediada por HA de membranas hospedeiras do vírus. US 2.750.405, Sircar et al., J. Org. Chem., 35,1970, páginas 3090 a 3093 e Dupont et al., Bulletin de la Societe Chimique de France 1955, páginas 708-715 apresenta certos derivados de ácido dehidroabético. O presente invento relaciona-se com um composto da fórmula: R1

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em que: R° e R1 são, de um modo independente, hidrogénio, hidroxi, Q-Có alquilo CpCô alcoxi, hidroxi(Ci-C6 alquilo), sulfidrilo, sulfamilo, -S02-C1, -S-C(O)-N(CH3)2, amino, CrC4 alquilamino, di(CrC4 alquil)amino, CrC4 alquilsul-fonilamino, di(Ci-C4 alquilsulfonil)amino -X0-O-C(O)-Ci-C4 alquilo, -0-(X1)i, X2, -C(0)-X3, N-C(0)-R2 ou -O-R3;

Xo é uma ligação ou (CrCc alquilo) divalente; X1 é um aminoácido; X é hidrogénio ou um grupo protector de amino; i é 1, 2 ou 3; X3 é CrC6 alquilo; CrC6 alcoxi, halo(CrC6 alquilo), hidroxi(CrC6 alquilo) ou fenilo; R é CrC4 alquilo, CrC4 alcoxi, halo (CrC4 alquilo), hidroxi(CrC4 alquilo), fenilo, p-metoxi-fenilo, p-fluorofenilo, naftilo, piridilo, piperidinilo, tiazolilo, oxazolilo, tienilo, furilo, tetra-hidrofurilo ou ciclo-hexilo; R3 é C2-C6 alquenilo, -CH2-R3a, -C(0)-R3b, -C(S)-R3c, -C(CH3)2C(0)NH2, fenilo ou um grupo da fórmula:

R3a é fenilo, p-fluorofenilo, piridilo, pirrolidinilo, piperidinilo, pipera-zinilo, morfolinilo, N-(CpC4 alcoxicarbonil)piperidinilo, N-(trifluorometil)-piperidinilo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo, isotiazolilo, isooxazolilo, quinolilo, isoquinolilo, tienilo, furilo, tetra-hidrotienilo, tetra-hidrofurilo, ciclo-hexilo, ciclopentilo, ciclopropilo ou naftilo; R3b é pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, N-(Ci-C4 -5-

alcoxicarbonil)piperidinilo, N-(trifluorometil)piperidinilo, benziloxi, piridilme-tiloxi, CpCô alcoxi, halo(Ci-C4 alcoxi), amino, CrC4 alquilamino ou di(Ci-C4 alquil)amino; R3c é amino, C1-C4 alquilamino ou di(CrC4 alquil)amino;

4 J R é oxigénio, hidroximino, hidrazino ou =CHZ; Z é hidrogénio, CrC4 alquilo, halogénio, di(Ci-C4 alquil)amino, C1-C4 alcoxicarbonilo, carbamoil(Ci-C4 alquilo), N-(Ci-C4 alquil)carbamoílo ou N,N-di(C]-C4 alquil)carbamoílo; R3e é hidrogénio ou trifluorometilo; X é uma ligação ou -(CH2)-; R4 é hidrogénio, hidroxi, amino, C1-C4 alquilamino, di(Ci-C4 alquil)amino, C1-C4 alcoxi, =0, -0-S(CH3)2C(CH3)3, C2-C6 alcanoiloxi, N-(C2-C6 alcanoil)amino, =N-R5 ou R4 e R6 combinam-se para formar uma ligação; R5 é hidroxi, amino, C1-C4 alquilamino, di(Ci-C4 alquil)amino, C1-C4 alcoxi, piridilmetoxi, benziloxi, piperazinilo, N-(metil)piperazinilo ou -0-CH2-C(0)-R5a; R5a é hidroxi ou C1-C4 alcoxi; R6 é hidrogénio, halo, C1-C4 alquilo ou =0; R é hidrogénio ou C1-C4 alquilo; α R é hidroxi, halo, C[-C6 alcoxi, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, 4-metil-piperazinilo, morfolinilo ou -N(R9)-R10; R9 é hidrogénio ou metilo; R10 é -(Ci-Cg alquilo divalente)-R10a; R10a é piridilo, com a condição de que i) quando R4 é hidrogénio ou =0; R8 é metoxi; e R1 é hidrogénio; então R° não pode ser hidrogénio, hidroxi, metoxi, -C(CH3)2OH, -C(0)CH3, -0C(0)CH3 ou -C(CH3)20C(0)CH3; ii) quando R4 é hidrogénio ou =0; R8 é metoxi; e R° é isopropilo; então R1 não pode ser hidroxi ou metoxi: iii) quando R4 é hidrogénio ou =0; R8 é hidroxi; e R° é hidrogénio; então R1 não pode ser hidrogénio ou isopropilo; iv) quando R4 é hidrogénio; R8 é metoxi; e R° é hidrogénio; então R1 não pode ser hidrogénio, hidroxi, .C(0)CH3 ou -0C(0)CH3; v) quando RI é hidrogénio; e R° é isopropilo; então R4 não pode ser hidrogénio, hidroxi, metoxi, etoxi, =0, -0C(0)CH3> -NOH ou combinam-se com R6 para formar uma ligação; vi) quando R1 é hidrogénio; R4 é hidrogénio e R8 é hidroxi; então R° não pode ser -C(CH3)20C(0)CH3: ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. O presente invento proporciona novos compostos da fórmula I, tal como foi acima descrito, que são úteis para o tratamento ou prevenção de uma infecção virai em que o vírus é um vírus envolvido que é submetido a fusão mediada por hemaglutinina com uma célula hospedeira e/ou os sintomas resultantes. Estes compostos, os seus sais farmaceuticamente aceitáveis e as formulações farmacêuticas correspondentes podem ser usados isoladamente ou em combinação com outros agentes antivirais, imunomoduladores, antibióticos ou vacinas.

Todas as temperaturas aqui referidas são em graus Celsius (° C). Todas as unidades de medição aqui usadas são em unidades de peso excepto para líquidos que são referidos em unidades de volume. O termo "halo" representa cloro, fluoro, bromo ou iodo. O termo "Q-Có alquilo" representa uma cadeia alquilo linear ou ramificada tendo de um a seis átomos de carbono. Grupos CrC6 alquilo típicos incluem metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, etc. O termo "CrC6 alquilo" inclui na sua definição o termo "C1-C4 alquilo". c -7-

Um "2As O termo "halo(Ci-C6)alquilo" representa uma cadeia alquilo linear ou ramificada tendo de um a seis átomos de carbono com 1, 2 ou 3 átomos de halogénio a ela ligados. Grupos halo(Ci-C6) alquilo típicos incluem clorometilo, 2-bromoetilo, 1-cloroisopropilo, 3-fluoropropilo, 2,3-dibromobutilo, 3-cloro-isobutilo, iodo-t-butilo, trifluorometilo, etc. O termo "hidroxi(CrC,5) alquilo" representa uma cadeia alquilo linear ou ramificada tendo de um a seis átomos de carbono com um grupo hidroxi a ela ligado. Grupos hidroxi(Ci-C6)alquilo típico incluem hidroximetilo, 2-hidroxietilo, 1-hidroxi-isopropilo, 2-hidroxipropilo, 2-hidroxibutilo, 3-hidroxi-isobutilo, hidroxi-t-butilo, hidroxipentilo, etc. O termo "C1-C4 alquilamino" representa uma cadeia alquilamino linear ou ramificada tendo de um a quatro átomos de carbono ligados a um grupo amino. Grupos C1-C4 alquil-amino típicos incluem metilamino, etilamino, propilamino, isopropilamino, butilamino, sec-butilamino, etc. O termo "di(Ci-C4)alquilamino" representa uma cadeia linear ou ramificada tendo duas cadeias alquilo, cada uma delas tendo de um modo independente de um a quatro átomos de carbono ligados a um grupo amino comum. Grupos di(Ci-C4) alquilamino típicos incluem dimetilamino, etilmetilamino, metilisopropilamino, t-butilisopropilamino, di-t-butilamino, etc. O termo "C\-C6 alcoxi" representa uma cadeia alquilo linear ou ramificada tendo de um a seis átomos de carbono ligados a um átomo de oxigénio. Grupos CrC6 alcoxi típicos incluem metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, t-butoxi, pentoxi, etc. O termo "Q-Cô alcoxi" inclui no âmbito da sua definição o termo "C1-C4 alcoxi". -8-

O termo "C2-C6 alquenilo" representa uma cadeia alquenilo linear ou ramificada tendo de dois a seis átomos de carbono. Grupos C2-C6 alquenilo típicos incluem etenilo, propendo, isopropenilo, buten-2-ilo, t-butenilo, penten-1-ilo, hexen-3-ilo, 3-metilpentenilo, etc. O termo "C1-C4 alcoxicarbonilo" representa uma cadeia alcoxi linear ou ramificada tendo de um a quatro átomos de carbono ligados a uma porção carbonilo. Grupos C1-C4 alcoxi carbonilo típicos incluem metoxicar-bonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, butoxicarbonilo, t-butoxicarbonilo, etc. O termo "carbamoil(Ci-C4)alquilo" representa uma cadeia alquilo linear ou ramificada tendo de um a quatro átomos de carbono com um grupo carbamoílo a ela ligado. Grupos carbamoil(C1-C4)alquilo típicos incluem carba-moilmetilo, carbamoiletilo, carbamoilpropilo, carbamoilisoprropilo, carbamoilbu-tilo e carbamoil-t-butilo, etc. O termo "N-(Ci-C4)alquilcarbamoílo" representa uma cadeia alquilo linear ou ramificada tendo de um a quatro átomos de carbono ligados ao átomo de azoto de uma porção carbamoílo. Grupos N-(Ci-C4 alquil)carbamoílo típicos incluem N-metilcarbamoílo, N-etilcarbamoílo, N-propilcarbamoílo, N-isopropilcarbamoílo, N-butilcarbamoílo, N-t-butilcarbamoílo, etc. O termo "N,N-di(Ci-C4 alquil)carbamoílo" representa uma cadeia alquilo linear ou ramificada tendo uma cadeia C1-C4 alquilo linear ou ramificada ligada a cada um dos átomos de azoto numa porção carbamoílo. Grupos N-(Cp C4)alquilcarbamoílo típicos incluem Ν,Ν-dimetilcarbamoílo, N-etil-N-metilcarbamoílo, N-propil-N-butilcarbamoílo, N,N-di-isopropilcarbamoílo, N-metil-N-butilcarbamoílo, etc. 9- tΜη

O termo "C1-C4 alquilsulfonilamino" representa um grupo alquilo linear ou ramificado tendo de um a quatro átomos de carbono ligados a uma porção sulfonilamino. Grupos C1-C4 alquilsulfonilamino típicos incluem metil-sulfonil-amino, etilsulfonilamino, propilsulfonilamino, isopropilsulfonilamino, butilsulfonilamino, isobutilsulfonilamino, sec-butilsulfonilamino, e t-butilsulfo-nilamino. O termo "di(Ci-C4 alquilsulfonilamino" representa duas porções C1-C4 alquilsulfonilo ligadas a uma porção amino. Grupos CrC4 alquilsulfonilamino típicos incluem metilmetilsulfonilamino, etilmetilsulfonilamino, propil-etilsulfonilamino, isopropilmetilsulfonilamino, t-butiletilsulfonilamino, butilbutil-sulfonilamino, etc. O termo "C2-Q alcanoílo" representa uma cadeia alquilo linear ou ramificada tendo de um a cinco átomos de carbono ligados a uma porção carbonilo. Grupos C2-C6 alcanoílo típicos incluem etanoílo, propanoílo, isopropanoílo, butanoílo, t-butanoílo, pentanoílo, hexanoílo, 3-metilpentanoílo, etc. O termo "C2-C6 alcanoiloxi" representa um grupo alquilo linear ou ramificado tendo de um a cinco átomos de carbono ligados a uma porção carbo-niloxi. Grupos C2-C6 alcanoiloxi típicos incluem etanoiloxi, propanoiloxi, isopro-panoiloxi, butanoiloxi, isobutanoiloxi, sec-butanoiloxi, t-butanoiloxi, penta-noiloxi, etc. O termo "C2-C6 alcanoilamino" representa um grupo alquilo linear ou ramificado de um a cinco átomos de carbono ligados a uma porção carbo-nilamino. Grupos C2-C6 alcanoilamino incluem etanoilamino, propanoilamino, isopropanoil-amino, butanoilamino, isobutanoilamino, sec-butanoilamino, t-butanoilamino, pentanoilamino, etc. 4si~ -10- Ι/ΐΛ,η

Tal como foi acima mencionado, o invento inclui os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos definidos pela fórmula I. Embora geralmente neutro, um composto deste invento pode possuir um grupo suficientemente acídico, um grupo suficientemente básico, ou ambos os grupos funcionais, e consequentemente reagir com qualquer um de um certo número de bases inorgânicas, e de ácidos inorgânicos e orgânicos, para formar um sal farmaceuticamente aceitável. O termo "sal farmaceuticamente aceitável" tal como é aqui usado, refere-se a sais dos compostos da fórmula acima indicada que são substancialmente não tóxicos para organismos vivos. Sais farmaceuticamente aceitáveis típicos incluem os sais preparados por reacção dos compostos do presente invento com um ácido mineral ou orgânico ou com uma base inorgânica. Esses sais são conhecidos como sais de adição de ácido e sais de adição de base. Ácidos habitualmente utilizados para formar sais de adição de ácido são ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido sulfurico, ácido fosfórico, etc., e ácidos orgânicos tais como ácido p-toluenossulfónico, ácido metanossulfónico, ácido oxálico, ácido p-bromofenilsulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético, etc.

Exemplos desses sais farmaceuticamente aceitáveis são o sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato, mono-hidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formato, isobutirato, caproato, hepta-noato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butino-l,4-dioato, hexino-l,6-dioato, benzoato, clorobenxoato, metil-benzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, sulfonato, - 11 -

xilenossulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, γ-hidroxibutirato, glicolato, tartarato, metanossulfonato, propanossulfonato, naftaleno-l-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, mandelato, etc. Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis preferidos são os sais formados com ácidos minerais tais como ácido clorídrico e ácido bromídrico, e os sais formados com ácidos orgânicos tais como ácido maleico e ácido metanossulfónico.

Sais de adição de base incluem os sais derivados de bases inorgânicas, tais como hidróxidos, carbonatos, bicarbonatos de amónio ou de metal alcalino ou terroso alcalino, etc. Essas bases úteis na preparação dos sais deste invento incluem assim hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de amónio, carbonato de potássio, carbonato de sódio, bicarbonato de sódio, bicarbonato de potássio, hidróxido de cálcio, carbonato de cálcio, etc. São particularmente preferidas formas de sal de potássio e de sódio.

Deverá ser reconhecido que o contra-ião particular formando uma parte de qualquer sal deste invento não é de natureza crítica, na medida em que o sal como um todo seja farmacologicamente aceitável e na medida em que o counterium não contribua para qualidades indesejáveis para o sal como um todo. O termo "grupo protector de amino" tal como é usado na especificação refere-se a substituintes do grupo amino habitualmente utilizado para bloquear ou proteger a funcionalidade amino fazendo entretanto reagir outros grupos funcionais do composto. Exemplos desses grupos protectores de amino incluem grupos formilo, tritilo, ftalimido, tricloroacetilo, cloroacetilo, bromoacetilo, iodoacetilo, ou grupos bloqueadores do tipo uretano tais como benziloxicarbonilo, 4-fenilbenziloxicarbonilo, 2-metilbenziloxicarbonilo, 4-metoxibenziloxicarbonilo, 4-fluorobenziloxicarbonilo, 4-clorobenziloxicarbonilo, 3-clorobenziloxicarbonilo, 2-clorobenziloxicarbonilo, 2,4-diclorobenziloxicarbo-nilo, 4-bromobenziloxicarbonilo, 3-bromobenziloxicarbonilo, 4-nitrobenzilo- - 12-

xicarbonilo, 4-cianobenziloxicarbonilo, í-butoxicarbonilo, 2-(4-xenil)isopropoxi-carbonilo, 1,1-difenilet-l-iloxicarbonilo, 1,1-difenilprop-l-iloxicarbonilo, 2-fenilprop-2-iloxicarbonilo, 2-(p-toluil)-prop-2-iloxicarbonilo, ciclopentaniloxi-carbonilo, 1-metilciclopentaniloxicarbonilo, ciclo-hexaniloxicarbonilo, 1-metil-ciclo-hexaniloxicarbonilo, 2-metilciclo-hexaniloxicarbonilo, 2-(4-toluilsulfonil)-etoxicarbonilo, 2-(metilsulfonil)etoxicarbonilo, 2-(trifenilfosfíno)-etoxicarbonilo, fluorenilmetoxicarbonilo ("FMOC"), 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo, aliloxicarbo-nilo, 1 -(trimetilsililmetil)prop-1 -eniloxicarbonilo, 5-benzisoxalilmetoxicarbonilo, 4-acetoxibenziloxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, 2-etinil-2-propoxicar-bonilo, ciclopropilmetoxicarbonilo, 4-(deciloxi)benziloxicarbonilo, isobomiloxi-carbonilo, 1-piperidiloxicarbonilo, etc.; grupos benzoilmetilsulfonilo, 2-nitro-fenilsulfenilo, óxido de difenilfosfina e grupos protectores de amino afins. As espécies de grupo protector de amino utilizadas não são de importância crítica na medida em que o grupo amino derivatizado seja estável em relação à condição de subsequente(s) reacção (reacções) noutras posições da molécula intermediária e podem ser selectivamente removidas no ponto apropriado sem fraccionamento da porção restante da molécula incluindo qualquer (quaisquer) outro(s) grupo(s) protector(es) de amino. Grupos protectores de amino preferidos são t-butoxi-carbonilo (t-BOC), aliloxicarbonilo e benziloxicarbonilo (CbZ). Outros exemplos de grupos referidos pelos termos acima apresentados são descritos por J. W. Barton, "Protective Groups in Organic Chemistry", J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, Chapter 2, and T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and sons, New York, N.Y., 1981, Chapter 7. O termo "grupo protector de carboxi" tal como é usado na especificação refere-se a substituintes do grupo carboxi habitualmente utilizados para bloquear ou proteger a funcionalidade carboxi fazendo-se reagir entretanto outros grupos funcionais no composto. Exemplos desses grupos protectores de carboxi incluem metilo, p-nitrobenzilo, p-metilbenzilo, p-metoxibenzilo, 3,4- -13-

dimetoxibenzilo, 2,4-dimetoxibenzilo, 2,4,6-trimetoxibenzilo, 2,4,6-trimetilben-zilo, pentametilbenzilo, 3,4-metilenodioxibenzilo, benzidrilo, 4,4'-dimetoxiben-zidrilo, 2,2',4,4'-tetrametoxibenzidrilo, t-butilo, t-amilo, tritilo, 4-metoxitritilo, 4,4'-dimetoxitritilo, 4,4',4"-trimetoxitritilo, 2-fenilprop-2-ilo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, fenacilo, 2,2,2-tricloroetilo, p-(dibutilmetilsilil)etilo, p-tolue-nossulfoniletilo, 4-nitrobenzilsulfoniletilo, alilo, cinamilo, l-(trimetilsililme-til)prop-l-en-3-ilo e porções afins. Grupos protectores de carboxi preferidos são alilo, benzilo e t-butilo. Outros exemplos destes grupos são encontrados em E. Haslam, "Protective Groups in Organic Chemistry", J.G.W. McOmie, eD., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, Chapter 5, and T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1981, Chapter 5.

Compostos preferidos são os compostos da fórmula I em que: R° é hidrogénio, hidroxi, Cj-Cô alquilo, CrC6 alcoxi, hidroxi(Ci-C6 alquilo), -X°-0-C(0)-CrC4 alquilo, -O-pcVx2, -C(0)-X3 ou -O-R3; R1 é hidrogénio, hidroxi, CrC6 alcoxi, sulfidrilo, sulfamilo, -SO2-CI, amino, di(CrC4 alquilsulfonil)amino -C(0)-X3, -N-C(0)-R2 ou -O-R3;

Xo é uma ligação ou (Q-Cô alquilo)divalente; X1 é um aminoácido; X é hidrogénio ou um grupo protector de amino; i é 1 ou 2; X3 é C,-C6 alquilo; R2 é hidroxi(Ci-C4 alquilo); R3 é C2-C6 alquenilo, -CH2-R3a, -C(0)-R3b, -C(S)-R3c, -C(CH3)2C(0)NH2 ou um grupo da fórmula:

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Ί R3' é fenilo, p-fluorofenilo, piridilo, piperidinilo, piperazinilo ou morfolinilo; R3b é piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, N-(CrC4 alcoxicar-bonil)piperidinilo, N-(trifluorometil)piperidinilo, halo(CrC4 alcoxi) ou di(C,-C4 alquil)amino; R3c é di(Ci-C4 alquil)amino; R3d é oxigénio ou hidroximino; R3e é hidrogénio ou trifluorometilo; X é uma ligação; R4 é hidrogénio, hidroxi, amino, =0, C2-C6 alcanoiloxi, =N-R5 ou -OSi(CH3)2. R5 é hidroxi, amino, di(CrC4 alquil)amino, CrC4 alcoxi, piridilmetoxi, N-(metil)piperazinilo ou -0-CH2-C(0)-R5a; R6 é hidrogénio, cloro, bromo, metilo ou =0; R é hidrogénio ou metilo; R8 é hidroxi, cloro, metoxi, 4-metilpiperazinilo ou -N(R9)-R10; R9 é hidrogénio; R10 é -CH2-R10a; e R10a é piridilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Destes compostos, mais preferidos são os compostos da fórmula I em que: R° é hidrogénio, hidroxi, Ci-C6 alcoxi, -0-(X1)i-X2, -X0-O-C(O)-CpC4 -i alquilo ou -0-R ; 1 3 R é hidrogénio, hidroxi, CrC6 alcoxi ou -0-R ;

Xo é uma ligação; X1 é um aminoácido; 2 X é hidrogénio ou um grupo protector de amino;

- *5- ijlM

ί / u i é 1 ou 2; R3 é C2-C6 alquenilo, -CH2-R3a ou -C(0)-R3b; R3a é p-fluorofenilo ou piridilo; R3b é piperidinilo; R4 é hidrogénio, hidroxi, =0 ou =N-R5; R5 é hidroxi, dimetilamino ou N-(metil)piperazinilo; R6 é hidrogénio, bromo ou =0; R é metilo; e R8 é metoxi; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

De entre estes compostos, compostos ainda mais preferidos são os compostos da fórmula I em que: R° é hidrogénio, hidroxi, C1-C4 alcoxi, -0-(X1)j-X2, -0-C(0)metilo ou -O- R3; R é hidrogénio, hidroxi, Q-C4 alcoxi ou -0-R , X1 é glicina, alanina ou valina; X é hidrogénio, t-butoxicarbonilo ou benziloxicarbonilo; R4 é =0 ou =N-R5; R5 é hidroxi; R6 é hidrogénio; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Os compostos da fórmula I podem ser preparados de acordo com processos conhecidos nesta técnica. Por exemplo, Os Esquemas de Reacção que se seguem podem ser usados, isoladamente ou em combinação a fim de proporcionar os compostos desejados. Uma vez que a reacção fique completa, o composto intermediário poderá ser isolado por processos bem conhecidos nesta técnica, por exemplo, o composto poderá ser cristalizado e em seguida recolhido por filtração, ou o solvente da reacção poderá ser removido por extracção, 7 -16 ΐΜη evaporação ou decantação. O composto intermediário poderá ainda ser purificado, caso seja desejado, por meio de técnicas comuns tais como cristalização ou cromatografia sobre suportes sólidos tais como gel de sílica ou alumina, antes da realização do passo seguinte do esquema da reacção.

Os compostos da fórmula I em que R4 é =0 ou =N-R podem ser preparados de acordo com processos apresentados mais abaixo no Esquema de Reacção I.

Esquema de Reacção I

/ - 17- ΙΜη "Is-, / /

em que Reacções I. 4A e 4B representam reacções alternativas que seguem a Reacção I. 3. O esquema da reacção I é efectuado realizando reacções 1-4 em ordem sequncial. A reacção I. 1 é realizada oxidando um composto da fórmula IA, por exemplo, por reacção com trióxido de crómio numa mistura ácido acético/água, a fim de proporcionar a cetona correspondente. O trióxido de crómio é geralmente utilizado numa quantidade variando entre proporções equimolares e cerca de um excesso 4 molar em relação ao composto da fórmula IA, de preferência num excesso 2-4 molar. A mistura ácido acético/água é geralmente uma mistura 10:1 a 2:1 de ácido acético para água, de preferência cerca de 4:1. A reacção fica geralmente completa após cerca de 1 a 10 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 23° C e cerca de 60° C. A reacção é de preferência conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 23° C e cerca de 30° C durante cerca de 5 a 10 horas. -18-

Í/LMJ S

Na Reacção I. 2, a cetona obtida a partir da Reacção I. 1 é feita reagir com bromo num solvente apropriado tal como éter dietílico, tetra-hidrofurano ou dimetoxietano, a fim de proporcionar uma mistura de bromo-cetonas as quais são então separadas usando técnicas de separação padrão tais como cromatografia. Estas bromocetonas isomericamente puras são então usadas para preparar vários compostos isomericamente puros da fórmula I. O bromo é geralmente utilizado numa quantidade variando entre mais ou menos proporções equimolares e mais ou menos um excesso 2 molar em relação ao reagente cetona, de preferência num excesso mais ou menos 1-1,5 molar. A escolha de solvente não é de importância crítica na medida em que o solvente utilizado é inerte em relação à reacção em curso e os reagentes são suficientemente solubilizados para efectuar a reacção desejada. A reacção fica geralmente substancialmente completa após cerca de 1 a 3 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 23° C e cerca de 30° C. A reacção é de preferência conduzida à temperatura ambiente durante cerca de 1 a 1,5 horas.

De um modo alternativo, a cetona obtida a partir da Reacção I. 1 é feita reagir com um agente de sililação na presença de uma base num solvente apropriado tal como cloreto de metileno, éter dietílico ou tetra-hidrofurano a fim de proporcionar o éter enol sililado correspondente. Bases preferidas incluem 2,6-lutidina e colidina. Um agente de sililação preferido é trifluorometanossulfonato de t-butildimetilsililo. O agente de sililação é geralmente utilizado numa quantidade variando entre mais ou menos proporções equimolares e mais ou menos um excesso 2 molar em relação ao reagente cetona, de preferência num excesso mais ou menos molar 1-1,5. A escolha de solvente não é de importância crítica na medida em que o solvente utilizado é inerte em relação à reacção em curso e os reagentes são suficientemente solubilizados para efectuar a reacção desejada. A reacção fica geralmente substancialmente completa após cerca de 30 minutos a 2 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 0o C e cerca de 50° C. A reacção é de preferência conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 10° C e cerca de 25° C durante cerca de 30 minutos a cerca de 1 hora. O éter enol sililado é então feito reagir com bromo substancialmente tal como foi acima descrito exceptuando o facto da reacção ser realizada na presença de ácido acético. Solventes típicos apropriados para utilização nesta reacção incluem qualquer solvente orgânico tal como cloreto de metileno, éter dietílico ou tetra-hidrofurano. A escolha de solvente não é de importância crítica na medida em que o solvente utilizado seja inerte em relação à reacção em curso e os reagentes sejam sufícientemente solubilizados para efectuar a reacção desejada.

Na Reacção I. 3, a bromocetona é reduzida, por exemplo por reacção com poeira de zinco e acetato de sódio em ácido acético glacial, a fim de proporcionar as cetonas correspondentes. O zinco é geralmente utilizado numa quantidade variando entre mais ou menos proporções equimolares e mais ou menos um excesso 4 molar em relação ao reagente cetona, de preferência num excesso 1,5-3 molar. O acetato de sódio é geralmente utilizado numa quantidade variando entre mais ou menos 0,6 equivalentes molares e mais ou menos 1,2 equivalentes molares em relação ao reagente cetona. A reacção fica geralmente completa após cerca de 1 a 10 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 60° C e a temperatura de refluxo da mistura. A reacção é de preferência conduzida à temperatura de refluxo durante cerca de 1 a 2 horas.

De um modo alternativo, hidrocloreto de hidroxilamina é feito reagir com acetato de sódio num solvente apropriado tal como etanol. O acetato de sódio é geralmente utilizado numa quantidade variando entre mais ou menos 1,1 equivalentes molares e mais ou menos um excesso 50 molar em relação à -20- hidroxilamina. A reacção fica geralmente substancialmente completa após cerca de 1 a 72 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 25° C e cerca de 80° C. A reacção é de preferência conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 25° C e cerca de 30° C durante cerca de 5 a 24 horas.

Na Reacção I. 4A, a cetona obtida a partir da Reacção I. 3 é feita reagir com hidrocloreto de hidroxilamina numa mistura de metanol, água e ácido acético a fim de proporcionar o composto oxima desejado. O hidrocloreto de hidroxilamina é geralmente utilizado numa quantidade variando entre mais ou menos proporções equimolares e mais ou menos um excesso 4 molar em relação ao reagente cetona, de preferência num excesso de cerca de 1,3-3 molar. O racio entre metanol e água e ácido acético é geralmente de 10-20:1:0,1, de preferência de 15:1:0,1. A reacção fica geralmente substancialmente completa após cerca de 1 hora a cerca de 2 dias quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 40° C e a temperatura de refluxo da mistura. A reacção é conduzida de preferência à temperatura de refluxo durante cerca de 1 a 6 horas.

Na Reacção I. 4B, a cetona obtida a partir da Reacção I. 3 é feita reagir com um hidrocloreto de hidrazina tal como l-amino-4-metilpiperazina, 1,1-dimetil-hidrazina ou hidrazina na presença de uma base num solvente inerte a uma temperatura variando entre cerca de 25° C e 80° C durante 2 a 24 horas. Bases típicas incluem acetato de sódio, hidróxido de potássio, trietilamina, etc. Solventes apropriados incluem etanol, isopropanol, e dimetilformamida. A escolha de solvente não é de importância crítica na medida em que o solvente utilizado seja inerte na reacção em curso e os reagentes sejam suficientemente solubilizados para efectuar a reacção desejada. A porção fenilo dos compostos da fórmula I acima preparada pode ser substituída de acordo com o Esquema de Reacção II, como se segue.

Esquema de Reaccão II

onde R° e R1 são independentemente hidrogénio ou -C(0)CH3; e R° e R1" são independentemente hidrogénio ou hidroxi.

Na Reacção II. 1, o composto da fórmula I onde R° e R1 são cada um deles hidropgénio é submetido a uma acilação de Friedel-Crafts fazendo reagir o composto da fórmula I com um haleto ácido, na presença de um catalisador num solvente inerte tal como disulfureto de carbono. O haleto ácido é geralmente utilizado numa quantidade variando entre mais ou menos proporções equimolares e mais ou menos um excesso 1,5 molar em relação ao composto da fórmula I, de preferência num excesso de mais ou menos 1,1-1,3 molar. Haletos de ácido preferidos incluem cloreto de acetilo, brometo de acetilo, etc. Catalisadores preferidos incluem tricloreto de alumínio, tribrometo de alumínio, etc. A escolha de solvente não é de importância crítica na medida em que o solvente utilizado seja inerte em relação à reacção em curso e os reagentes sejam suficientemente solubilizados para efectuar a reacção desejada. A reacção fica geralmente substancialmente completa após cerca de 1 a 10 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 50° C e a temperatura de refluxo da mistura. A reacção é de preferência conduzida à temperatura de refluxo durante cerca de 1 a 2 horas.

Na Reacção II.2, o composto acilado da fórmula I obtido a partir da Reacção II. 1 é oxidado a fim de proporcionar o fenol correspondente numa reacção em dois passos. Em primeiro lugar, a porção acilo é feito reagir com um perácido na presença de um catalisador ácido num solvente inerte tal como dimetoxietano a fim de proporcionar o éster correspondente o qual é então feito reagir com bicarbonato de sódio numa mistura de álcool/água a fim de proporcionar o fenol desejado. O perácido é geralmente utilizado numa quantidade variando entre mais ou menos proporções equimolares e mais ou menos um excesso 2 molar em relação à porção acilo, de preferência num excesso 1-1,3 molar. A quantidade de catalisador tipicamente utilizada varia entre 0,005-0,04 equivalentes em relação à porção acilo. Um perácido preferido é metacloro-ácido peroxibenzoico. Um catalisador preferido é ácido p-toluenossulfónico. A escolha de solvente não é de importância crítica na medida em que o solvente utilizado seja inerte em relação à reacção em curso e os reagentes sejam suficientemente solubilizados para efectuar a reacção desejada. A reacção fica geralmente substancialmente completa após cerca de 1 a 10 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 50° C e a temperatura de refluxo da mistura. A reacção é de preferência conduzida à temperatura de refluxo durante cerca de 1 a 3 horas. O éster resultante é tipicamente submetido a refluxo com uma base numa mistura de metanol/água durante cerca de 1 a 7 horas a fim de proporcionar 0 composto fenol desejado. Bases preferidas incluem bicarbonato de sódio, carbonato de sódio, hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio, etc. A base é geralmente utilizada num excesso, por exemplo desde mais ou menos um excesso 1 molar até mais ou menos um excesso 6 molar em relação à porção éster, de preferência num excesso de mais ou menos 2-5 molar.

Os compostos fenol obtidos a partir do Esquema de Reacção II podem ser usados para preparar vários compostos substituídos da fórmula I, tal como é descrito mais abaixo.

Por exemplo, a porção hidroxi poderá ser alquilada por reacção do composto fenol com um agente de alquilação apropriado na presença de uma base num solvente inerte. Exemplos de bases incluem trietilamina, di-isopropiletilamina, hidreto de sódio e carbonato de potássio. Solventes típicos incluem cloreto de metileno, tetra-hidrofurano, dimetilformamida, etc. A escolha do solvente não é de importância crítica na medida em que o solvente utilizado seja inerte em relação à reacção em curso e os reagentes sejam suficientemente solubilizados para efectuar a reacção desejada. Agentes de alquilação apropriados incluem iodometano, iodeto de alilo, brometo de p-fluorofenilo, 3-bromometil-piridina e 2-fluorobenzofenona, etc. A reacção fica geralmente substancialmente completa após cerca de 1 a 20 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 0o C e 170° C. A reacção é de preferência conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 25° C e cerca de 80° C durante cerca de 4 a 16 horas.

De um modo alternativo, a porção hidroxi poderá ser alquilada fazendo reagir o fenol com um álcool na presença de trifenilfosfina e um agente de activação apropriado num solvente inerte, tal como tetra-hidrofurano ou éter -24

'j dimetílico etileno glicol. Exemplos de agentes de activação apropriados incluem azodicarboxilato de dietilo, azodicarboxilato de dimetilo, azodicarboxilato de di-isopropilo, etc. Exemplos de álcoois incluem 3-piridilcarbinol, N-t-butoxicar-bonil-3-piperidinometanol, etc. A reacção fica geralmente substancialmente completa após cerca de 0,5 a 2 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 0o C e 85° C. A reacção é de preferência conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 25° C e cerca de 70° C durante cerca de 30 minutos a 1 hora. A porção hidroxi pode ser convertida num éster ou num carbonato fazendo reagir o fenol com um agente de acilação na presença de uma base num solvente inerte tal como cloreto de metileno, tetra-hidrofurano ou dimetilforma-mida. Bases típicas incluem trietilamina, di-isopropiletilamina, hidreto de sódio, etc. Agentes de acilação típicos incluem N-(t-butoxicarbonil)-4-clorocarbonil piperidina, cloroformato de 2,2,2-tricloroetilo, aminoésteres de N-(t-butoxicarbo-nil)-hidroxibenzotriazole. A reacção fica geralmente substancialmente completa após cerca de 1 a 20 horas quando conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 0o C e 60° C. A reacção é de preferência conduzida a uma temperatura variando entre cerca de 10° C e cerca de 25° C durante cerca de 1 hora a 15 horas. A porção hidroxi poderá ser convertida na anilina correspondente numa reacção em três passos. Em primeiro lugar, o fenol é feito reagir com uma amida substituída apropriadamente tal como 2-metil-2-bromo-propanamida na presença de uma base tal como hidreto de sódio ou trietilamina num solvente inerte, tal como dioxano ou tetra-hidrofurano a uma temperatura variando entre 25° C e 100° C a fim de proporcionar o amido-éster correspondente. Este amido-éter é então feito reagir com hidreto de sódio num solvente inerte tal como dimetilformamida, l,3-dimetil-3,4,5,6-tetra-hidro-2(lH)-pirimidona ou uma sua mistura a temperaturas variando entre 25° C e 145° C a fim de proporcionar o - 25 - [A^i

J Λ.-Ί ,/U y).y

amido-álcool rearranjado.Finalmente, o amido-álcool é feito reagir com um ácido, tal como ácido clorídrico em dioxano a de 50° C a 100° C a fim de proporcionar a anilina desejada. A anilina poderá ser convertida na sulfonamida correspondente fazendo reagir a anilina com um cloreto de sulfonilo tal como cloreto de metanossulfonilo ou cloreto de isopropilsulfonilo na presença de uma base, tal como trietilamina, di-isopropiletilamina ou hidreto de sódio a uma temperatura variando entre cerca de 0o C e 50° C num solvente inerte, tal como cloreto de metileno, tetra-hidrofurano ou dimetilformamida. A porção hidroxi pode ser convertida num tiofenol numa reacção em três passos. Em primeiro lugar o fenol é feito reagir com um tio-carbamoílo (por exemplo cloreto de dimetiltiocarbamoílo) na presença de uma base num solvente apropriado, tal como água ou dimetilformamida a uma temperatura variando entre 25° C e 50° C durante 1 a 3 horas afim de proporcionar o oxo-tiocarbamato. Bases típicas incluem hidróxido de potássio, trietilamina, etc. O oxo-tiocarbamato é convertido no correspondente composto tio-oxocarbamato por isolamento e aquecimento do sólido puro até ao seu ponto de fusão. Finalmente, o tio-oxocarbamato é feito reagir com uma base, tal como hidróxido de potássio ou hidróxido de sódio num solvente alcoólico, tal como metanol ou etanol a uma temperatura variando entre 20° C e 80° C durante 20 minutos a 1 hora a fim de proporcionar o correspondente tiofenol. O tiofenol poderá ser convertido nas sulfonamidas correspondentes fazendo reagir o tiofenol com um agente de oxidação (por exemplo, nitrato de potássio) num solvente inerte tal como acetonitrilo, seguindo-se a adição de um agente de clorinação (por exemplo, cloreto de sulfurilo) a temperaturas variando entre 0o C e 25° C a fim de proporcionar uma mistura de cloretos de sulfonilo que são separáveis usando técnicas cromatográficas padrão. Estes cloretos de sulfonilo podem ser convertidos nas sulfonamidas desejadas por reacção com uma amina substituída apropriadamente tal como hidróxido de amónio, metilamina, isopropilamina ou benzilamina a uma temperatura variando entre cerca de 0o C e 40° C num solvente inerte tal como tetra-hidrofurano. A porção hidroxi poderá ser convertida nos ésteres amino correspondentes fazendo reagir o fenol com um aminoácido amino protegido na presença de um reagente de acoplamento e de um catalisador num solvente inerte tal como éter dietílico, tetra-hidrofurano ou cloreto de metileno. Grupos amino prrotectores preferidos incluem t-butoxicarbonilo ou benziloxicarbonilo. O reagente amino é geralmente utilizado em proporções equimolares até se obter um excesso ligeiro (1,3 equivalentes) em relação ao reagente fenol na presença de uma quantidade equimolar até um excesso ligeiro (1,5 equivalentes) do reagente de acoplamento. Agentes de acoplamento típicos incluem diciclo-hexilcarbodi-imida (DCC), l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida, hexa-fluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi-tris(dimetilamino)fosfónio (BOP), N,N'-dietilcarbodi-imida, carbonildi-imidazole, bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfónico (BOP-C1) ou N-etoxicarbonil-2-etoxi-l,2-di-hidroquinolina (EEDQ), etc. Agentes de acoplamento preferidos incluem DCC e BOP. Catalisadores típicos incluem DMAP e 4-pirrolopiridina. A reacção fica substancialmente completa em 1 a 10 horas quando realizada a uma temperatura variando entre cerca de -30° C e cerca de 35° C, de preferência entre cerca de 0o C e cerca de 25° C.

Os materiais de partida usados nos processos acima descritos detalhadamente podem ser obtidos comercialmente ou preparados de acordo com processos conhecidos nesta técnica. Por exemplo, os compostos da fórmula IA:

OCH3 podem ser preparados substancialmente de acordo com o processo detalhado em Ohta and Ohmuri. Chem. Pharm. Buli. (Tokyo), vol. 5, page 91 (1957). A mistura isomérica de compostos pode ser separada usando técnicas de separação padrão tais como recristalização ou cromatografia de coluna ou podem ser submetidos à metodologia de brominação acima descrita no Esquema de Reacção I. De preferência estes isómeros são obtidos usando a metodologia de brominação acima descrita no Esquema de Reacção I.

As Preparações e Exemplos que se seguem ilustram ainda aspectos específicos do presente invento. Deverá ser compreendido, contudo, que estes exemplos são incluídos apenas com finalidades ilustrativas e não pretendem limitar o âmbito do invento em qualquer aspecto e não deverão ser assim construídos.

Exemplo 1 (Intermediário)

CH(CH3)2 i: -28- i: -28-

/ 4 A uma solução de NaOMe (preparada in situ a partir de 2,6 g de sódio em 400 ml de MeOH anidro (0,108 mol), sob N2), foram adicionados 15,0 g (0,035 mol) de ácido abiético a 70%. Após agitação da mistura durante 10 minutos, foram adicionados 14,0 ml (0,22 mol) de iodometano e a mistura foi submetida a refluxo durante 24 horas, arrefecida e concentrada in vacuo a fim de proporcionar um resíduo o qual foi dissolvido em 500 ml de EtOAc, foi lavado sequencialmente com 500 ml de solução saturada de NaHCCh e com uma solução saturada de cloreto de sódio (NaCL), seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada in vacuo. O material crú foi purificado usando cromatografia "flash" (eluente de 2% de EtOAc em hexanos).

Rendimento: 10,0 g de um óleo amarelo escuro (90,4%). IV (CHCI3): 2952, 1718 e 1251 cm'1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 5,78 (s, 1H); 5,38 (brs, 1H); 3,66 (s, 3H); 2,17-2,30 (m, 3H); 1,68-2,16 (m, 8H); 1,50-1,65 (m, 2H); 1,26 (s, 3H); 1,24 (m, 2H); 1,02 (d, J = 2,6 Hz, 3H); 1,00 (d, J = 2,6 Hz, 3H) e 0,83 (s, 3H). EM(DC): m/e 316 (M+)

Análise Elementar para C21H32O2:

Calculados : C, 79,70; H, 10,19;

Encontrados : C, 79,49; H, 9,94 (Exemplo 2) (Composto de referência)

I ΛΑ'» -29

A uma mistura de 5,0 g (15,8 mmol) do composto no Exemplo 1 em 100 ml de anidrido acético, foram adicionados 2,5 g (22,5 mmol) de óxido de selénio (IV), sob N2. A mistura da reacção foi aquecida até 70° C, foi agitada durante 16 horas, arrefecida, filtrada e em seguida diluída até 500 ml com CH2C12. As camadas resultantes foram separadas e a camada orgânica foi lavada com 500 ml de NaCl, seca sobre Na2S04, filtrada e em seguida concentrada in vacuo a fim de proporcionar um sólido amarelo escuro. Este sólido foi purificado usando cromatografia "flash" (eluente de 5% de EtOAc em hexanos) a fim de proporcionar duas fracções major. A primeira fracção foi concentrada a fim de proporcionar 537 mg de um óleo. Este óleo foi hidrogenado com 135 mg de Pd/C a 5% em 25 ml de MeOH (8 horas, temperatura ambiente, 6,0 psi). A mistura da reacção foi filtrada e o produto filtrado foi concentrado in vacuo. O material crú foi purificado usando cromatografia "flash" (eluente de 2% de EtOAc em hexanos) a fim de proporcionar o composto do Exemplo 3 (400 mg de um óleo transparente (75%) p.f. 50° C). A segunda fracção foi concentrada in vacuo a fim de proporcionar o composto.

Rendimento: 2,8 g de um sólido amarelo claro (47%). p.f. 165-167° C IV (KBr): 2956, 1722 e 1251 cm'1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,23 (m, 2H); 7,04 (d, J = 1,8 Hz, 1H); 5,90 (m, 1H); 3,64 (s, 3H); 2,86 (m, 1H); 2,60 (dd, J - 1,5, 11,0 Hz, 1H); 2,31 (d, J = 12,1 Hz, 1H); 2,08 (s, 3H); 2,07 (m, 1H); 1,60-1,80 (m, 6H); 1,26 (s, 3H); 1,24 (s, 3H); 1,22 (s, 3H) e 1,19 (s, 3H). EM(DC): m/e 372 (M+).

Análise Elementar para C23H3204:

Calculados : C, 74,16; H, 8,66;

Encontrados : C, 74,44; H, 8,71.

Exemplo 3 (Composto de referência)

A uma mistura de 23,6 g (0,063 mmol) do composto no Exemplo 2 em 1.500 ml de MeOH, foram adicionados 5,8 g de Pd/C a 10% e 5,8 g (0,030 mmol) de mono-hidrato de ácido p-toluenossulfónico. A mistura da reacção foi feita reagir durante 16 horas à temperatura ambiente, 60 psi, foi filtrada e em seguida concentrada in vacuo a fim de proporcionar um resíduo. Este resíduo foi dissolvido em 700 ml de EtOAc, foi lavado sequencialmente com 700 ml de soluções saturadas de NaHC03 e de NaCl, seco sobre Na2S04, filtrado e em seguida concentrado in vacuo.

Rendimento: 19,3 g (97,5%) de um óleo. IV (CHC13): 2955,1718 e 1254 cm'1 !H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7,16 (d, J = 8 Hz, 1H); 7,00 (d, J - 8 Hz, 1H); 6,88 (s, 1H); 3,66 (s, 3H); 2,80-2,90 (m, 3H); 2,23-2,32 (m, 2H); 1,35-1,90 (m, 7H); 1,28 (s, 3H); 1,24 (s, 3H) e 1,21 (s, 6H). EM(DC): m/e 314 (M+).

Análise Elementar para C21H30O2:

Calculados : C, 80,21; H, 9,62 Encontrados : C, 80,34; H, 9,73 -31- ΙΜ'Ί ρ ί· /

Exemplo 4 (Composto de referência)

A uma suspensão de 185 mg (0,50 mmol) do composto do Exemplo 2 em 10 ml de MeOH, foram adicionados 5 ml (0,50 mmol) de NaOH 0,1N. A mistura da reacção foi submetida a refluxo durante 2 horas, foi arrefecida e dividida entre 50 ml de EtOAc e 50 ml de HC1 0,2N. As camadas resultantes foram separadas e a camada orgânica foi lavada com 50 ml de uma solução saturada de NaCl, foi seca sobre Na2SC>4, filtrada e em seguida concentrada in vacuo a fim de proporcionar um óleo amarelo. Este óleo foi purificado usando cromatografia "flash" (eluente de 10% de EtOAc em hexanos).

Rendimento: 158 mg de um óleo transparente (96%). p.f. 105-107° C. IV (KBr): 2957, 3500 e 1719 cm'1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,20 (m, 3H); 4,75 (t, J = 4,8 Hz, 1H); 3,69 (s, 3H); 2,88 (m, 1H); 2,50 (dd, J - 1,8, 13,2 Hz, 1H); 2,30 (brd, J = 12,1 Hz, 1H); 2,06-2,17 (m, 1H); 1,98 (d, J = 7,0 Hz, 1H); 1,69-1,84 (m, 4H); 1,55 (m, 2H); 1,29 (s, 3H); 1,25 (s, 3H); 1,23 (s, 3H) e 1,17 (s, 3H). EM(DC): m/e 330 (M+)

Exemplo 5 (Composto de referência)

\ CH3 och3 CH(CH3)2 -32-

A uma solução de 112 mg (0,30 mmol) do composto do Exemplo 4 em 4 ml de AcOH glacial e 1 ml de H20, foram adicionados 10 mg (1,0 mmol) de trióxido de crómio. A mistura da reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora sendo em seguida dividida entre 50 ml de EtOAc e 50 ml de uma solução saturada de NaCl. As camadas resultantes foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre Na2S04, foi filtrada e em seguida concentrada in vacuo a fim de proporcionar um óleo escuro o qual foi purificado usando cromatografia "flash" (eluente de 5% de EtOAc em hexanos) a fim de proporcionar um óleo o qual solidificou ao repousar.

Rendimento: 100 mg (90%). IV (CHC13): 2965,1722,1675 e 1253 cm'1 ‘H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7,88 (d, J - 1,8 Hz, 1H); 7,42 (dd, J = 1,8, 8,1 Hz, 1H); 7,30 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 3,66 (s, 3H); 2,862,98 (m, 1H); 2,66-2,76 (m, 2H); 2,28-2,40 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,35 (s, 3H); 1,26 (s, 6H) e 1,24 (s, 3H). MS/FD): m/e 329 (M+).

Análise Elementar para C2iH2803:

Calculados : C, 76,79; H, 8,59;

Encontrados : C, 76,52; H, 8,53.

Exemplo 6 (Composto de referência)

\ α och3 NOH CH(CH3)2

Uma mistura contendo 118 mg (0,36 mmol) do composto do Exemplo 5, 40 mg (0,58 mmol) de hidrocloreto de hidroxilamina, 40 mg (0,48 mmol) de NaHC03,1 gota de AcOH glacial, 1,0 ml de H2O e 15 ml de MeOH foi submetida a refluxo com um sifão Dean-Stark durante 5 horas. A mistura da reacção foi concentrada in vacuo a fim de proporcionar um resíduo. Este resíduo foi dividido entre H20 e CH2C12 e a camada orgância foi seca sobre Na2S04, foi filtrada e concentrada in vacuo. O material crú foi purificado usando cromatografia "flash".

Rendimento: 120 mg (97%). IV (CHCI3): 3582,2962,1721 e 1261 cm'1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,71 (s, 1H); 7,43 (s, 1H); 7,21 (s, 2H); 3,66 (s, 3H); 2,85-2,95 (m, 1H); 2,67 (m, 2H); 2,26-2,37 (m, 2H); 1,75 (m, 5H); 1,38 (s, 3H); 1,26 (s, 3H); 1,24 (s, 3H); 1,13 (s, 3H); EM(DC) m/e 343 (M+).

Exemplo 7 (Composto de referência)

Uma mistura de 500 mg (1,59 mmol) do composto do Exemplo 3, 1,0 g (17,8 mmol) de KOH e 20 ml de álcool n-butílico foi submetida a refluxo durante 16 horas, sob N2. Após arrefecimento, a mistura foi acidificada com HC1 5N e concentrada in vacuo a fim de proporcionar um resíduo. Este resíduo foi suspenso em 50 ml de H20 e filtrado. O sólido resultante foi dissolvido em 50 ml de MeOH, foi filtrado e o produto filtrado foi concentrado in vacuo. -34-

Rendimento: 330 mg de uma espuma (69%). p.f. 143-145° C. IV (KBr): 2958,1695 e 1279 cm"1 *H RMN (300 MHz, CDC13): Ô 7,25 (d, J = 3 Hz, 1H); 7,17 (d, J = 8 Hz, 1¾). 7,00 (dd, J = 3,9 Hz, 1H); 6,89 (brs, 1H); 2,80-3,00 (m, 3H); 2,20-2,40 (m, 2H); 1,65-1,96 (m, 5H); 1,43-1,60 (m, 2H); 1,29 (s, 3H); 1,24 (s, 3H); 1,22 (s, 3H); 1,21 (s, 3H); EM(DC) m/e 301 (M+).

Análise Elementar para C2oH2802*0,5 H20:

Calculados : C, 79,01; H, 9,47;

Encontrados : C, 79,19; H, 9,52.

Exemplo 8 (Composto de referência)

A uma solução fria (0° C) de 8,0 g (25,0 mmol) do composto do Exemplo 3 em 50 ml de anidrido acético e 38 ml de AcOH, foram adicionados 11,0 g (0,11 mmol) de trióxido de crómio lentamente, sob N2. A mistura da reacção foi dividida entre EtOAc e solução salina e a camada orgânica foi seca sobre Na2S04, foi filtrada e concentrada a fim de proporcionar um óleo amarelo. Este óleo foi purificado usando cromatografia "flash" (Si02, eluente de 10% de EtOAc em hexanos) a fim de proporcionar um sólido o qual foi filtrado com o auxílio de hexanos.

Rendimento: 2,5 g (30,5%). / /As ί

Sbs-XSLS'

Ln // -35- '[/^Ί p.f. 144-145° C. IV (KBr): 2951,1725 e 1680 cm'1 lK RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,55 (d, J = 2 Hz, 1H); 8,17 (dd, J = 2,8 Hz, 1H); 7,50 (d, J = 8 Hz, 1H); 3,66 (s, 3H); 2,75 (m, 2H); 2,64 (s, 3H); 2,37-2,50 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,37 (s, 3H) e 1,29 (s, 3H). EM(DC): m/e 328 (M+).

Análise Elementar para C20H24O4:

Calculados : C, 73,15; H, 7,37;

Encontrados : C, 72,86; H, 7,42.

Exemplo 9 (Composto de referência)

O composto foi isolado a partir da mistura da reacção descrita no

Exemplo 8.

Rendimento: 4,2 g de um sólido branco (43,5%). p.f. 130-133° C. IV (KBr): 2934, 1734, 1720 e 1680 cm'1 !H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,98 (d, J = 2 Hz, 1H); 7,54 (dd, J = 2, 8 Hz, 1H); 7,33 (d, J = 8 Hz, 1H); 3,66 (s, 3H); 2,75 (m, 2H); 2,30-2,42 (m, 2H); 2,2 (m, 1H); 2,04 (s, 3H); 2,00-2,10 (m, 1H); 1,70-1,90 (m, 3H); 1,76 (s, 6H); 1,35 (s, 3H) e 1,26 (s, 3H). EM(DC): m/e 386 (M+).

Análise Elementar para C23H30O5:

Calculados : C, 71,84; H, 7,82;

Encontrados : 71,75; H, 8,03.

Exemplo 10 (composto de referência)

A uma solução de 4,14 g (10,7 mmol) do composto do Exemplo 9 em 40 ml de MeOH, foram adicionados 13,4 ml (13,4 mmol) de NaOH IN. A mistura da reacção foi submetida a refluxo durante 2,5 horas, foi arrefecida e em seguida dividida entre 200 ml de HC1 0,2 N e 200 ml de EtOAc. As camadas resultantes foram separadas e a camada orgânica foi lavada com 200 ml de solução salina, foi seca sobre Na2S04, filtrada e em seguida concentrada in vacuo a fim de proporcionar um óleo amarelo escuro. Este óleo foi purificado usando cromatografia "flash" (Si02, eluente de 15% de EtOAc em hexanos).

Rendimento: 2,9 g de uma espuma branca (80%). p.f. 57-60° C IY (KBr): 3444,2936,1727 e 1682 cm1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,06 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 7,74 (dd, J = 2,2, 8,5 Hz, 1H); 7,36 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 3,66 (s, 3H); 2,70 (m, 2H); 2,40 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 6H); 1,60 (s, 3H); 1,55 (s, 3H); 1,35 (s, 3H) e 1,27 (s, 3H). EM(DC): m/e 344 (M+).

Análise Elementar para C2iH2804: - 37 ÁA^j

Calculados : C, 73,23; H, 8,19;

Encontrados : C, 73,50; H, 8,46.

Exemplo 11 (Composto de referência)

Uma mistura de 500 mg (1,52 mmol) do composto do Exemplo 8, 620 mg (1,80 mmol) de ácido m-cloroperbenzoico a 50%, 5,0 mg (0,03 mmol) de mono-hidrato de ácido p-toluenossulfónico e 5 ml de 1,2-dicloroetano foi submetida a refluxo durante 4 horas sendo em seguida agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi diluida com 25 ml de EtOAc e foi lavada sequencialmente com 25 ml de iodeto de potássio a 10%, tiosulfato de sódio a 10%, NaHCC>3 saturado e solução salina, foi seca sobre N2SO4, filtrada e em seguida concentrada in vacuo. O material crú foi purificado por cromatografia radial (eluente de 25% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 30 mg (6%). IV (CHCI3): 3020, 1723 e 1684 cm"1 lU RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7,69 (d, J = 3 Hz, 1H); 7,39 (d, J - 9 Hz, 1H); 7,24 (d, J = 3 Hz, 1H); 3,67 (s, 3H); 2,84 (m, 2H); 2,25-2,42 (m, 2H); 2,31 (s, 3H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,35 (s, 3H) e 1,28 (s, 3H). EM(DC): m/e 344 (M+).

Análise Elementar para C20H24O5:

Calculados : C, 69,75; H, 7,02;

Encontrados : C, 69,77; H, 6,92. 38 Λ/'^Ι

Exemplo 12 (Composto de referência)

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado em Matsumoto et al.. Buli. Chem. Soc. Jpn., vol. 61, pages 723-727 (1988), usando os compostos do Exemplo 8.

Rendimento: 42%. IV (CHC13): 3389,2948,1725,1670, 1606 cm*1 *H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7,45 (d, J = 3 Hz, 1H); 7,27 (d, J = 9 Hz, 1H); 7,07 (dd, J = 3, 9 Hz, 1H); 5,20 (s, 1H); 3,66 (s, 3H); 2,65-2,80 (m, 2H); 2,27-2,42 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,34 (s, 3H) e 1,25 (s, 3H). EM(DC): m/e 302 (M+).

Análise Elementar para C18H22O4:

Calculados : C, 71,50; H, 7,33;

Encontrados : C, 71,22; H, 7,19.

Exemplo 13 (Composto de referência)

0

Ο composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado em Matsumoto et al.. Buli. Chem. Soc. Jpn., vol. 61, 723-727 (1988), usando o composto do Exemplo 12.

Rendimento: 86%. IV (CHC13): 2941, 1722,1677 e 1252 cm1 *H RMN (300 MHz, CDCI3): Ô 7,48 (d, J = 3 Hz, 1H); 7,29 (d, J = 9 Hz, 1H); 7,11 (dd, J = 3, 9 Hz, 1H); 3,84 (s, 3H); 3,66 (s, 3H); 2,70 (m, 2H); 2,30-2,43 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,34 (s, 3H) e 1,25 (s, 3H). EM(DC): m/e 316 (M+).

Análise Elementar para C19H24O4:

Calculados : 72,13; H, 7,65;

Encontrados : C, 72,16; H, 7,35.

Exemplo 14 (Composto de referência)

Uma mistura de 475 mg (1,5 mmol) do composto do Exemplo 3, 425 mg (3,19 mmol) de cloreto de alumínio anidro em 15 ml de tolueno foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, sob N2. A mistura da reacção foi dividida entre tolueno e HC1 IN. As camadas resultantes foram separadas e a camada orgânica foi lavada com solução salina, foi seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada in vacuo a fim de proporcionar um óleo. Este óleo foi purificado -40-

usando cromatografía "flash" (Si02, eluente de 2% de EtOAc em hexanos) a fim de proporcionar um óleo o qual foi cristalizado a partir de MeOH. *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,00-7,30 (m, 4H); 3,30 (s, 1,5 H); 3,28 (s, 1,5 H); 2,90 (m, 2H); 2,30 (m, 2H); 2,00 (m, 1H); 1,40-1,80 (m, 6H); 1,30 (s, 1,5 H); 1,22 (s, 3H) e 1,10 (s, 1,5 H).

Uma solução de 285 mg (2,8 mmol) de trióxido de crómio em 4 ml de AcOH glacial e 1 ml de H20 foi adicionada gota a gota a uma solução de 275 mg (1 mmol) do composto do Exemplo 14A em 5 ml de AcOH glacial. A mistura da reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas sendo em seguida dividida entre EtOAc e solução salina (duas vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, filtradas e em seguida concentradas in vacuo a fim de proporcionar um óleo amarelo o qual foi purificado usando cromatografía "flash" (Si02, eluente de 5% de EtOAc em hexanos).

Rendimento: 50 mg de um sólido amarelo brilhante (17%). p.f. 121-123° C. IV (CHC13): 3019, 2954, 1727, 1688 e 1248 cm'1 XU RMN (300 MHz, CDC13): Ô 8,14 (d, J - 8 Hz, 1H); 7,70 (7, J = 7 Hz, 1H); 7,47 (m, 2H); 3,73 (s, 3H); 3,39 (s, 1H); 2,64 (d, J = 12 Hz, 1H); 2,01-2,11 (m, 1H); 1,40-1,80 (m, 4H); 1,29 (s, 3H) e 0,69 (s, 3H). EM(DC): m/e 300 (M+).

Análise Elementar para Ci8H20O4:

Calculados : C, 71,98; H, 6,71;

Encontrados : C, 72,10; H, 6,66. -41 - Í/U^ u

O composto foi isolado Exemplo 14B.

Rendimento: 136 mg de um óleo (47,5%). RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,01 (m, 1H); 7,55 (m, 1H); 7,30 (m, 2H); 3,30 (s, 1,5 H); 3,28 (s, 1,5H); 3,28 (s, 1,5H); 3,10 (dd, J = 4, 12 Hz, 0,5H); 2,70 (m, 1,5H); 2,40 (m, 2H); 1,40-1,90 (m, 5H); 1,30 (s, 1,5H); 1,28 (s, 1,5H); 1,23 (s, 1,5H); 0,65 (s, 1,5H).

Exemplo 15 (Intermediários)

Uma solução de 0,9 ml (17 mmol) de bromo em 30 ml de Et20 foi adicionada a uma solução de 3,8 g (13,3 mmol) do composto do Exemplo 14C em 200 ml de Et20 anidro, gota a gota. A mistura da reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora sendo em seguida lavada sequencialmente com H20, uma solução saturada de NaHC03 e tiosulfato de sódio a 19%, foi seca sobre Na2SC>4, filtrada e concentrada in vacuo a fim de proporcionar um resíduo. Este resíduo foi purificado usando cromatografia "flash" (eluente de CH2Cl2/hexanos 3:2).

Rendimento: 1,2 g de óleo amarelado (25%). *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,00 (dd, J = 2, 5 Hz, 1H); 7,60 (dt, J = 2, 5 Hz, 1H); 7,40 (m, 2H); 4,60 (s, 1H); 3,78 (s, 3H); 3,25 (s, 1H); 2,50 (d, J = 7 Hz, 1H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,60 (s, 3H); 0,57 (s, 3H).

O composto foi isolado a partir do Exemplo 15 A.

Rendimento: 1,2 g de um óleo (25%). *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,01 (d, J = 6 Hz, 1H); 7,60 (m, 1H); 7,40 (m, 2H); 5,00 (d, J = 9 Hz, 1H); 3,65 (s, 3H); 3,23 (d, J = 9 Hz, 1H); 2,60 (m, 1H); 2,38 (d, J = 7 Hz, 1H); 1,80 (m, 4H); 1,52 (s, 3H) e 1,25 (s, 3H).

Exemplo 16 (Composto de referência)

Uma mistura de 960 mg (2,6 mmol) do composto do Exemplo 15B, 4,0 g (61,2 mmol) de poeira de zinco, 2,0 g (24,4 mmol) de NaOAc e 50 ml de AcOH glacial foi submetida a refluxo durante 1 hora, sob N2. Após arrefecimento, a mistura da reacção foi filtrada e o produto filtrado foi dividido entre Et20 e solução salina. As camadas resultantes foram separadas e a camada

orgânica foi seca sobre Na2S04, filtradas e em seguida concentradas in vacuo. O material crú foi purificado usando cromatografia "flash" (Si02, eluente de 10% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 500 mg de um óleo (67,2%). IV (CHC13): 3028, 1722, 1679, 1258 cm'1 Ή RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,01 (d, J = 8 Hz, 1H); 7,54 (7, 6 Hz, 1H); 7,29 (m, 2H); 3,67 (s, 3H); 2,74 (dd, J = 3, 7 Hz, 2H); 2,30-2,45 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,36 (s, 3H) e 1,28 (s, 3H). EM(DC): m/e 286 (M+).

\ CH3 och3 B. O composto foi isolado a partir do Exemplo 16A. Rendimento: 150 mg (21%).

Exemplo 17 (Composto de referência)

\ ch3 och3 A.

Uma solução de 1,54 g (5,66 mmol) do composto do Exemplo 14A e 1,5 g de Pd/C a 10% em 150 ml de éter dimetílico trietilenoglicol foi submetida a refluxo durante 3 horas, sob N2. Após arrefecimento, a mistura foi filtrada e o -44- ^ /

β / produto filtrado foi dividido entre EtOAc e solução salina (três vezes). As camadas resultantes foram separadas e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, filtradas e concentradas in vacuo a fim de proporcionar 1,5 g de um resíduo. Uma fracção deste resíduo (300 mg) foi purificada por cromatotron (eluente de 2% de CH2CI2 em hexanos inicialmente, seguindo-se a adição à fase móvel de 50 ml de CH2CI2 após eluição com 200 ml, e finalmente 4 ml de EtOAc depois de terem sido eluidos 300 ml).

Rendimento: 29 mg Ή RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,00-7,30 (m, 4H); 3,63 (s, 3H); 2,83 (m, 2H); 2,30 (m, 3H); 2,00 (m, 2H); 1,30-1,70 (m, 3H); 1,25 (s, 3H); 1,10 (m, 1H); 1,02 (s, 3H).

\ ch3 och3 ; ch3 h och3 B. Uma mistura de

Os compostos foram isolados a partir do Exemplo 17A.

Rendimento: 216 mg.

Exemplo 18 (Composto de referência)

A. Uma mistura de -45 - /

tsl 1 4

Os compostos foram preparados substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 14B, usando uma solução de 325 mg (1,2 mmol) do resíduo não purificado a partir do Exemplo 17A em 5 ml de AcOH glacial. O material crú foi purificado usando cromatografia "flash" (S1O2, eluente de 15% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 62 mg de um óleo.

Exemplo 19

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 6, usando uma solução contendo 140 mg (0,49 mmol) dos compostos do Exemplo 18A em 10 ml de MeOH. O material crú foi purificado usando cromatografia "flash" (Si02, eluente de 20% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 38 mg de um sólido (26%). p.f. 139-141° C IV (CHCI3): 3584, 3020 e 1720 cm'1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,92 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,56 (s, 1H); 7,30 (m, 2H); 7,20 (m, 1H); 3,72 (s, 3H); 3,44 (dd, J = 4,0, 18,4 Hz, 1H); 3,12 (dd, J = 14,0, 18,7 Hz, 1H); 2,35 (m, 2H); 2,03 (m, 1H); 1,50-1,80 (m, 3H); 1,32 (s, 3H); 1,10 (m, 1H); e 1,02 (s, 3H). EM(DC): m/e 301 (M+).

Análise Elementar para C18H23NO3:

Calculados : C, 71,74; H, 7,69; N, 4,65; Encontrados : C, 71,97; H, 7,77; N, 4,39.

O composto foi isolado a partir do Exemplo 19A.

Rendimento: 38 mg de uma resina (26%). IV (CHCI3): 3583,3027,2935,1721 e 1263 cm'1 !H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7,85 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 7,43 (s, 1H); 7,10-7,20 (m, 3H); 3,66 (s, 3H); 2,67 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 2,28-2,37 (m, 2H); 1,76 (m, 4H); 1,39 (s, 3H); 1,26 (m, 1H) e 1,14 (s, 3H). EM(DC): m/e 301 (M+).

Exemplo 20

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 6, usando o composto do Exemplo 12. IV (KBr): 3393, 2932,1727 e 1702 cm'1 - 471 - 471

ν- lU RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,00 )brs, 1H); 7,29 (d, J = 3 Hz, 1H); 7,16 (d, J = 9 Hz, 1H); 6,85 (dd, J = 3,9 Hz, 1H); 5,25 (brs, 1H); 3,68 (s, 3H); 2,65 (m, 2H); 2,20-2,40 (m, 2H); 1,55-2,04 (m, 5H); 1,40 (s, 3H) e 1,10 (s, 3H). EM(DC): m/e 318 (M+).

Análise Elementar para Ci8H2304:

Calculados : C, 68,12; H, 7,30; N, 4,41;

Encontrados : C, 67,95; H, 7,46; N, 4,12.

Exemplo 21

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 6, usando o composto do Exemplo 13. Rendimento: 93%. IV(KBr): 3421,2936, 1727 cm'1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,37 (d, J = 3 Hz, 1H); 7,29 (s, 1H); 6,92 (d, J = 9 Hz, 1H); 6,91 (dd, J = 3, 9 Hz, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,66 (s, 3H); 2,65 (m, 2H); 2,25-2,65 (m, 2H); 1,60-1,80 (m, 5H); 1,38 (s, 3H) e 1,11 (s, 3H). EM(DC): m/e 331 (M+).

Análise Elementar para C19H25NO4:

Calculados : C, 68,86; H, 7,60; N, 4,23;

Encontrados : C, 69,10; H, 7,83; N, 4,23.

48 l-yU/ή

Exemplo 22 (Intermediário)

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 15A, usando o composto do Exemplo 13. Rendimento: 74%. p.f. 146-148° C. IV (KBr): 2900, 1725 e 1679 cm'1 ’H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,46 (d, J = 3 Hz, 1H); 7,28 (d, J = 9 Hz, 1H); 7,14 (dd, J = 3, 9 Hz, 1H); 4,98 (d, J = 13 Hz, 1H); 3,85 (s, 3H); 3,65 (s, 3H); 3,20 (d, J = 13 Hz, 1H); 2,35 (m, 1H); 1,70-1,90 (m, 5H); 1,50 (s, 3H); 1,26 (s, 3H). EM(DC): m/e 397 (M+).

Análise Elementar para Ci9H23Br04:

Calculados : C, 57,73; H, 5,86;

Encontrados : C, 57,78; H, 6,06.

Exemplo 23 (Composto de referência)

OCH3 O -49-

Λ/Ί" -7-- Α uma solução agitada de 70 mg (0,245 mmol) do composto do Exemplo 16A em 20 ml de THF anidro, foram adicionados 32 mg (0,80 mmol) de NaH a 60% em óleo mineral, sob N2. A mistura resultante foi agitada durante 15 minutos seguindo-se a adição de 0,15 ml (2,25 mmol) de iodometano, por meio de uma seringa. A mistura da reacção foi agitada durante 3 horas, arrefecida bruscamente pela adição gota a gota de H20 sendo em seguida dividida entre Et20 e H20. As camadas resultantes foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre Na2S04, foram filtradas e concentradas in vacuo a fim de proporcionar um resíduo o qual foi purificado por cromatografia radial (eluente de 10% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 16 mg de um óleo transparente (22%). IV(CHC13): 3692, 3022,2950,1724 e 1678 cm'1 !H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7,95 (d, J = 7,7 Hz, 1H); 7,54 (s, J = 8,8 Hz, 1H); 7,25 (m, 2H); 3,63 (s, 3H); 2,80 (m, 2H); 2,39 (d, J - 7,7 Hz, 1H); 1,70-2,05 (m, 5H); 1,43 (s, 3H); 1,28 (s, 3H) e 1,13 (d, J = 6,2 Hz, 3H). EM(DC): m/e 300 (M+).

Análise Elementar para Ci9H2403:

Calculados: C, 75,97; H, 8,05;

Encontrados : C, 75,80; H, 7,96.

Exemplo 24

\ CH3 och3 -50-

Uma mistura de 50 mg (0,165 mmol) do composto do Exemplo 12, 35 mg (0,165 mmol) de carbobenziloxiglicina, 35 mg (0,170 mmol) de 1,3-diciclo-hexilcarbodi-imida (DCC), 2 mg (0,0165 mmol) de 4-dimetilamino-piridina em 25 ml de Et20 anidro foi agitada durante 16 horas dando origem à formação de um sólido. Este sólido foi removido por filtração e o produto filtrado foi lavado sequencialmente com H20, uma solução de AcOH a 5% e solução salina. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, filtradas e em seguida concentradas in vacuo a fim de proporcionar uma resina. Esta resina foi purificada usando cromatografia "flash'' (Si02, eluente de 20% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 54 mg de um sólido amarelo claro (66%). IV(KBr): 3330, 2934, 1779,1725,1685 cm1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,70 (s, 1H); 7,36 (m, 8H); 6,20 (s, 2H); 4,26 (d, J = 6 Hz, 2H); 3,67 (s, 3H); 2,73 (dd, J = 3, 6 Hz, 2H); 2,40 (m, 2H); 1,50-2,00 (m, 5H); 1,35 (s, 3H); 1,28 e (s, 3H). EM(DC): m/e 494 (M+).

Exemplo 25

C(0)-OC(CH3)3 O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 24, usando o composto do Exemplo 12 e N-t- -51 -

butoxicarbonil-L-alanina.

Rendimento: 96%. IV(CHC13): 3444,2938,1763,1714 cm1 *H RMN (300 MHz, CDC13): Ô 7,69 (d, J = 2,6 Hz, 1H); 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1¾). 7,30 (d, J = 2,6 Hz, 1H); 5,10 (brm, 1H); 4,55 (brm, 1H); 3,65 (s, 3H); 2,73 (dd, j = 3,3, 6,6 Hz, 2H); 2,32-2,42 (m, 2H); 1,70-2,20 (m, 5H); 1,55 (d, J = 7,0 Hz 3H); 1,47 (s, 6H); 1,43 (s, 3H); 1,35 (s, 3H) e 1,28 (s, 3H). EM(DC): m/e 474 (M+).

Exemplo 26

Uma mistura de 100 mg (0,21 mmol) do composto do Exemplo 25 em 2 ml de CH2CI2 foi adicionada a 2 ml de uma mistura CH2Cl2/CF3COOH 1:1. Após agitação durante 1 hora, a mistura da reacção foi concentrada in vacuo. O resíduo resultante foi concentrado repetitivamente em Et20 até se obter uma espuma.

Rendimento: 85 mg (83%). IV(CHC13): 2941, 1715, 1711 e 1682 cm'1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,65 (m, 2H); 7,41 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 4,30 (m, 1H); 3,62 (s, 3H); 2,63 (m, 2H); 2,25-2,40 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,34 (s, 3H)e 1,24 (s, 3H); 1,22 (d, J - 7,0 Hz, 3H). EM(DC): m/e 374, base livre (M+). Μ''

Exemplo 27

A uma solução de 550 mg (1,0 mmol) do composto do Exemplo 25 em 10 ml de CH2CI2, foram adicionados 3 ml (39 mmol) de CF3COOH. Após agitação durante 1 hora, a mistura da reacção foi concentrada in vacuo a fim de proporcionar uma espuma. Esta espuma foi dissolvida em 20 ml de CH2CI2 seguindo-se a adição de 0,17 ml (1,2 mmol) de EtsN. As camadas resultantes foram separadas e a camada orgânica foi lavada com H20, seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada in vacuo a fim de proporcionar uma espuma. ch3 0

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 24, usando o composto do Exemplo 27A e 230 mg (1,2 mmol) de N-t-butiloxicarbonil-L-alanina.

Rendimento: 255 mg (47%). IV (KBr): 3334,2938,1770,1725 e 1687 cm'1 'H RMN (300 MHz, CDClj): δ 7,69 (d, J = 3 Hz, 1H); 7,41 (d, J = 9 Hz, 1H); 7,29 (d, J = 3 Hz, 1H); 6,70 (m, 1H); 5,00 (m, 1H); 4,80 (m, 1H); 4,20 (m, 1H); 3,67 (s, 3H); 2,73 (m, 2H); 2,36 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,58 (d, J = 7 Hz, 3H); 1,45 (s, 9H); 1,38 (d, J = 7 Hz, 3H); 1,35 (s, 3H) e 1,27 (s, 3H). EM(DC): m/e 544 (M+).

Análise Elementar para C29H4oN208-0,75H20:

Calculados : C, 62,40; H, 7,43; N, 5,02;

Encontrados : C, 62,30; H, 7,24; N, 4,77.

Exemplo 28 ch3 o

\ ch3 och3 ΥγΛΑ- -OOCCF3

O H H O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 26, usando o composto do Exemplo 27B. Rendimento: 95%. IV(KBr): 2950,1770 e 1681 cm"1 !H RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,17 (brs, 3H); 7,60 (s, 1H); 7,40 (d, J = 2,6 Hz, 1H); 7,27 (m, 1H); 4,65 (brs, 1H); 4,40 (brs, 1H); 3,70 (d, J = 2 Hz, 1H); 3,62 (s, 3H); 2,70 (m, 7H); 2,35 (m, 2H); 1,50-1,85 (m, 6H); 1,32 (s, 3H) e 1,23 (s, 3H). EM(DC): m/e 445 base livre (M+). i. -54-

Exemplo 29

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 24, usando o composto do Exemplo 12 e N-t-butoxicarbonil-L-valina.

Rendimento: 47%. IV(KBr): 3377,2969,1766,1724 e 1688 cm’1 ‘H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,68 (d, J = 2,6 Hz, 1H); 7,41 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 7,29 (d, J = 2,6 Hz, 1H); 5,06 (brm, 1H); 4,45 (brm, 1H); 3,65 (s, 3H); 2,74 (dd, J = 3,3, 7,0 Hz, 2H); 2,30-2,43 (m, 1H); 1,70-1,90 (m, 6H); 1,48 (s, 9H); 1,35 (s, 3H); 1,28 (s, 3H); 1,09 (d, J - 6,6 Hz, 3H); 1,02 (d, J = 7,0 Hz, 3H). EM(DC): m/e 502 (M+).

Análise Elementar para C28H39NO7:

Calculados : C, 67,04; H, 7,84; N, 2,79;

Encontrados : C, 66,82; H, 7,73; N, 2,58.

Exemplo 30

-55-

.Λ,Ί, Ο composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 26, usando o composto do Exemplo 29. Rendimento: rendimento de 99%. IV(KBr): 3068, 2943,1758, 1722 e 1668 cm’1 'H RMN (300 MHz, CDClj): δ 7,68 (m, 1H); 7,40 (m, 2H); 4,08 (d, J = 4,8 Hz, 1H); 3,65 (s, 3H); 2,70 (m, 2H); 2,30-2,40 (m, 2H); 1,70-1,90 (m, 6H); 1,34 (s, 3H); 1,26(s, 3H); l,16(d, J = 2,9Hz,3H)e l,14(d, J = 2,9Hz,3H). EM(DC): m/e base livre 402 (M+).

Análise Elementar para C25H32NO7:

Calculados : C, 58,25; H, 6,26; N, 2,72;

Encontrados : C, 57,98; H, 6,32; N, 2,64.

Exemplo 31

Uma mistura de 4,0 g (14,7 mmol) do composto do Exemplo 14A e 1,2 ml (16,9 mmol) de cloreto de acetilo em 60 ml de disulfureto de carbono a uma suspensão de 2,6 mg (19,5 mmol) de cloreto de alumínio anidro em 100 ml de disulfureto de carbono, por meio de um funil para gota a gota. A mistura da reacção foi submetida a refluxo durante 1 hora e em seguida disulfureto de carbono foi removido por destilação downward". O resíduo resultante foi arrefecido bruscamente de um modo cuidadoso pela adição de 100 ml de HC1 0,2Ν. Ο composto desejado foi extraído usando 100 ml de CH2CI2, seco sobre Na2S04, foi filtrado e em seguida concentrado in vacuo a fim de proporcionar um óleo vermelho escuro. Este óleo foi purificado usando cromatografia "flash" (S1O2, eluente de 20% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 1,7 g de um óleo (87% tendo como base material de partida recuperado). *H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7,90 (d, J = 4 Hz, 1H); 7,75 (d, J = 4 Hz, 0,5H); 7,63 (d, J = 4 Hz, 0,5H); 7,37 (d, J = 6 Hz, 0,5H); 7,10 (d, J = 6 Hz, 0,5H); 3,70 (s, 1,5H); 3,68 (s, 1,5H); 2,92 (m, 2H); 2,60 (s, 3H); 2,00-2,50 (m, 3H); 1,40-1,98 (m, 6H); 1,29 (s, 1,5H); 1,26 (s, 1,5H); 1,24 (s, 1,5H) e 1,10 (s, 1,5H).

OH

Uma mistura de 1,7 g (5,4 mmol) do composto do Exemplo 31 A, 1,9 g (5,5 mmol) de ácido 3-cloroperoxibenzoico a 50%, 18 mg (0,095 mmol) de mono-hidrato de ácido p-toluenossulfónico em 25 ml de 1,2-dimetoxietano foi submetida a refluxo durante 3 horas, sob N2. Após arrefecimento, a mistura da reacção foi diluida com Et20 e foi lavada sequencialmente com iodeto de potássio a 10%, tiosulfato de sódio a 10%, uma solução saturada de NaHC03 e solução salina, seca sobre Na2S04, filtrada e em seguida concentrada a fim de proporcionar uma resina a qual foi dissolvida em 25 ml de MeOH e 10 ml de H20 contendo 1,6 g (19,0 mmol) de NaHC03. A mistura foi submetida a refluxo durante 1,5 horas, foi arrefecida, filtrada e concentrada in vacuo a fim de proporcionar um resíduo que foi dividido entre H20 e Et20. As camadas

Vc^7··

resultantes foram separadas e a camada orgânica foi lavada sequencialmente com HC1 IN e solução salina, seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada in vacuo. Rendimento: 1,55 g (99%). *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 6,85 (m, 1H); 6,70 (d, J = 6 Hz, 1H); 6,55 (dd, J = 6 Hz, 1H); 3,63 (s, 3H); 2,80 (m, 2H); 1,90-2,30 (m, 3H); 1,40-1,88 (m, 6H); 1,25 (s, 1,5H); 1,20 (s, 1,5H); 1,17 (s, 1,5H) e 1,02 (s, 1,5H).

A uma suspensão de 1,55 g (5,4 mmol) do composto do Exemplo 31B e 275 mg (6,87 mmol) de NaOH a 60% em óleo mineral em 50 ml de DMF anidra, foi adicionado 0,5 ml (7,50 mmol) de idodometano, sob N2. A mistura da reacção foi agitada durante 1 hora sendo em seguida arrefecida bruscamente com cuidado pela adição gota a gota de solução salina. A mistura da reacção foi dividida entre Et20 e solução salina. As camadas resultantes foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre Na2S04, foi filtrada e concentrada in vacuo a fim de proporcionar um resíduo que foi purificado usando cromatografía "flash" (Si02, eluente de 20% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 1,3 g de um óleo amarelo claro transparente (88,5% tendo como base material de partida recuperado). *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,00 (d, J = 6 Hz, 1H); 6,82 (m, 1H); 6,70 (m, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,70 (s, 3H); 2,80 (m, 2H); 2,00-2,40 (m, 3H); 1,40-1,90 (m, 6H); 1,25 (s, 1,5 H); 1,20 (s, 3H); 1.10 (s, 1,5 H). 4 - ss - ' JÁ/··

Nota: A mistura da reacção também continha 200 mg do composto do Exemplo 31A.

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 14B, usando 1,3 g (4,3 mmol) do composto do Exemplo 31C. O material crú foi purificado usando cromatografia "flash" (Si02, eluente de 20% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 820 mg de um óleo (60,5%). RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,00 (m, 1H); 6,80 (m, 2H); 3,87 (s, 1,5H); 3,85 (s, 1,5H); 3,63 (s, 1,5H); 3,61 (s, 1,5H); 3,01 (dd, J = 5, 12 Hz, 0,5H); 2,70 (m, 1,5H); 2,40 (m, 2H); 1,40-1,95 (m, 5H); 1,32 (s, 1,5H); 1,30 (s, 1,5H); 1,22 (s, 1,5H); 0,65 (s, 1,5H).

O composto foi isolado a partir do Exemplo 31 D. Rendimento: 35,4 mg de um óleo. Λ

Ο composto foi isolado a partir do Exemplo 31D.

Rendimento: 150 mg de um óleo (10,6%). !H RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,17 (d, J = 6 Hz, 1H); 6,95 (m, 1H); 6,80 (m, 1H); 3,90 (s, 3H); 3,70 (s, 3H); 3,36 (s, 0,5H); 2,50 (m, 1,5H); 1,80-2,10 (m, 1H); 1,42-1,80 (m, 4H); 1,40 (s, 1,5H); 1,20 (s, 1,5H); 1,17 (s, 1,5H); 0,65 (s, 1,5H).

Exemplo 31 G-eliminado.

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 15A, usando 975 mg (3,08 mmol) do composto do Exemplo 31D. O material crú foi purificado usando cromatografia "flash" (Si02, eluente de 15% de Et20 em hexanos).

Rendimento: 532,6 mg (44%). !H RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,03 (d, J = 6 Hz, 1H); 6,81 (m, 2H); 4,50 (s, 1H); -60-

Ι'ί-

3,90 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 3,21 (s, 1H); 2,40 (m, 1H); 1,60-2,00 (m, 5H); 1,58 (s, 3H) e 0,60 (s, 3H).

O composto foi isolado a partir do Exemplo 31H.

Rendimento: 465,1 mg de um óleo (38%). *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,00 (d, J = 6 Hz, 1H); 6,85 (m, 2H); 4,97 (d, J = 9 Hz, 1H); 3,90 (s, 3H); 3,62 (s, 3H); 3,22 (d, J = 9 Hz, 1H); 2,30 (m, 1H); 1,80 (m, 5H); 1,48 (s, 3H) e 1,28 (s, 3H).

Exemplo 31J-eliminado

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 16, usando 465 mg (1,17 mmol) do composto do Exemplo 311.

Rendimento: 328 mg de um óleo transparente (89%). Μ Sis' -61-Í/U4 IV (CHC13): 2942,1721,1667 e 1596 cm'1 *H RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,01 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 6,85 (s, 1H); 6,81 (d, J -2,6 Hz, 1H); 3,90 (s, 3H); 3,66 (s, 3H); 2,70 (m, 2H); 2,30 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,35 (s, 3H)e 1,26 (s, 3H). EM(DC): m/e 316 (M+).

Exemplo 32

O composto foi preparado substancialmente de acordo com o processo detalhado no Exemplo 6, usando o composto do Exemplo 31K. Rendimento: 61%. p.f. 162-165° C. IV (CHCIs): 3018, 2951, 1720 e 1600 cm"1 'H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,81 (d, J = 6 Hz, 1H); 6,82 (m, 3H); 3,90 (s, 3H); 3,70 (s, 3H); 2,62 (d, J - 6 Hz, 2H); 2,20-2,43 (m, 2H); 1,60-1,90 (m, 5H); 1,40 (s, 3H) e 1,10 (s, 3H). EM(DC): m/e 331 (M+).

Análise Elementar para C19H25NO4:

Calculados : C, 68,86; H, 7,60; N, 4,23;

Encontrados : C, 68,79; H, 7,42; N, 4,33.

Tal como foi acima indicado, os compostos do presente invento são

úteis para a inibição de um vírus com envólucro que sofre fusão mediada por hemaglutinina com uma célula hospedeiro. Assim, os compostos reivindicados podem ser usados para o tratamento ou prevenção de uma infecção virai onde o vírus é um vírus com envólucro que sofre fusão mediada com hemaglutinina que compreende a administração a uma célula infectada com vírus, a uma célula susceptível a infecção ou a um mamífero necessitado desse tratamento de uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I ou de um seu sal farmaceuti-camente aceitável. Os compostos reivindicados podem também ser usados para inibir replicação virai num vírus com envólucro que sofre fusão mediada por hemaglutinina que compreende a administração a uma célula infectada com vírus, uma célula susceptível a infecção ou um mamífero necessitado desse tratamento, de uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. O termo "quantidade eficaz" tal como é aqui usado, significa uma quantidade de um composto do presente invento que seja capaz de inibir a fusão mediada por hemaglutinina do viris com a célula hospedeiro. A inibição contemplada pelo presente invento inclui tratamento tanto terapêutico como profilático, como seja apropriado. A dose específica de composto administrado de acordo com este invento para se obter efeitos terapêuticos e/ou profiláticos irá, evidentemente, ser determinada pelas circunstancias paerticulares que envolvem o caso, incluindo, por exemplo, o composto administrado, a via de administração, a condição a ser tratada e o indivíduo a ser tratado. Uma dose diária típica (administrada em doses únicas ou divididas) irá conter um nível de dosagem variando entre cerca de 0,01 mg/kg e cerca de 50 mg/kg do peso corporal de um composto activo deste invento. Doses diárias preferidas irão, geralmente, variar entre cerca de 0,05 mg/kg e cerca de 20 mg/kg e idealmente entre cerca de 0,1 mg/kg e cerca de 10 mg/kg. L/s-

Os compostos podem ser administrados por um série de vias incluindo a via oral, rectal, transdermica, sucutânea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Os compostos do presente invento são de preferência formulados antes da administração. Assim, outra apresentação do presente invento consiste numa formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um veículo diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável, para esse fim. O ingrediente activo nessas formulações compreende de 0,1% a 99,9% em peso da formulação. "Farmaceuticamente aceitável" significa que o veículo, diluente ou excipiente é compatível com os outros ingredientes da formulação e que não é prejudicial para o seu recipiente.

As presentes formulações farmacêuticas são preparadas por meio de processos conhecidos usando ingredientes conhecidos e rapidamente disponíveis. Ao produzir as composições do presente invento, o ingrediente activo será usualmente misturado com um veículo, ou diluído por um veículo, ou incluído num veículo que se pode apresentar sob a forma de uma cápsula, saquinho, papel ou outro recipiente. Quando o veículo serve como um diluente, ele poderá ser um material sólido, semí-sólido ou líquido que actua como um veículo, excipiente ou meio para o ingrediente activo. Assim, as composições podem apresentar-se sob a forma de comprimidos, pílulas, pós, pastilhas, saquinhos, pílulas, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis, (sob a forma de um sólido ou num meio líquido), unguentos contendo, por exemplo, até 10% em peso do composto activo, cápsulas de gelatina dura, supositórios, soluções injectáveis estéreis, pós embalados de um modo estéril, etc.

As experimentações que se seguem foram realizadas a fim de demonstrar a capacidade dos compostos do presente invento para inibir a gripe.

Ensaio CPE/XTT in vitro Células MDCK foram dispersas numa placa de microtitulação (96 cavidades) a 10.000 células por cavidade com Médium 199 contendo solução salina equilibrada de Earl (EBSS), 1% de soro bovino fetal (FBS), penicilina (100 unidades/ml) e estreptomicina (100 gg/ml). Após repouso durante a noite a 37° C num incubador de dióxido de carbono (C02), as células MDCK foram infectadas com —0,1 moi (multiplicidade de infecção) do vírus da influenza (isto é, A/Kawasaki/89 ou B/Hong King e B/GReat Lakes) a 0,03 moi. Depois de deixar o vírus adsorver nas células durante 1-2 horas, meio contendo diluições seriadas de droga ou meio isoladamente foi adicionado às cavidades. As misturas resultantes foram incubadas durante 2-3 dias (até cpe extensivo se tomar aparente em cavidades apenas com meio). O efeito antiviral de um composto do teste foi avaliado realizando o ensaio XTT que se segue.

Foi preparada uma solução fresca (0,4 mg/ml) de XTT (2,3-bis(metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-2H-tetraazólio-5-carboxanilida, sal interno, sal de sódio] em meio quente sem FBS. Para cada 5 ml da solução de XTT, foram adicionados 25 μΐ de PMS 5mM (metosulfato de fenazina) em solução salina de tampão fosfato. Depois de se retirar a porção flutuante em cultura, 100 μΐ da mistura XTT/PMS preparados recentemente foram adicionados a cada uma das cavidades de microtitulação. As cavidades foram então incubadas a 37° C (sob C02) durante 3-4 horas ou até a modificação da cor se tomar proeminente. A absorvência a 450 nm (ref. 650 nm) foi lida num espectrofotómetro. A concentração do composto do teste requerida para causar efeito citotóxico a 50% (CT50) em relação a um controlo sem droga e sem vírus presente e que inibe o desenvolvimento de efeito citopático do vírus (cpe) em 50% (CI50) ou 90% (CI90) foi determinada a partir da porção linear de cada curva de resposta à dose.

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V

-65-

Usando este ensaio CPE/XTT, a CI50 dos compostos da fórmula I foi determinada como variando entre 1,0-2,4 pg/ml para influenza A/Kawasaki/89 e variando entre 8-47 pg/ml para influenza B/Lee.

Ensaio de Redução de Placa Células MDCK susceptíveis foram feitas crescer em placas de 6 cavidades de grupos tratados com cultura de tecido a lxlO6 células/cavidade em Minimum 199 com 1 por cento de soro bovino fetal, penicilina (100 unidades/ml) e estreptomicina (100 pg/ml). Após incubação a 37° C durante a noite, o meio de crescimento foi removido e foi adicionado 0,2 ml/cavidade de uma diluição apropriada de vírus. Após adsorção durante 1-2 horas à temperatura ambiente, a lâmina de células infectadas foi revestida com partes iguais de solução de agarose estéril a 1,5% e uma concentração de duas vezes de meio 199 (com soro bovino fetal a 2%, 100 unidades/ml de penicilina e 100 pg/ml de estreptomicina) contendo várias concentrações de compostos.

Os compostos foram dissolvidos em DMSO numa concentração de 20 mg/ml e uma porção aliquota foi diluida até à concentração desejada em DMSO e em seguida foi adicionada à mistura de meio de agar. As placas foram incubadas num incubador com CO2 a 37° C até cavidades de controlo DMSO conterem placas de um tamanho óptimo. Em seguida, uma solução contendo 10 por cento de formalina e 2 por cento de acetato de sódio foram adicionados a cada cavidade a fim de inactivar o vírus e fixar a lâmina de células à superfície plástica. As lâminas de células fixadas foram coradas com 0,5 por cento de violeta cristal e as placas foram contadas. Resultados a partir de cavidades em duplicado em cada concentração foram avaliados e comparados com cavidades de controlo DMSO. A inibição da formação de placa em 50 ou 90 por cento (CI50 -66- ou CI90) foi calculada a partir da região linear da curva de concentração de inibição usando o método de Reed and Muench, Am. J. Hyg., vol. 27, páginas 493-497 (1958).

Usando este ensaio de redução da placa, foi determinado que a CI50 dos compostos da fórmula I varia entre 0,02-100 pg/ml para influenza A/Kawasaki e foi determinado que varia entre 1,6-60 pg/ml para influenza B/Lee.

Lisboa, 17 de Julho de 2001

LU!S SILVA CARVALHO

Agente Oficial da Propfedads Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims (3)

-1 - * REIVINDICAÇÕES 1. Um composto da fórmula: R1 em que: R° e R1 são, de um modo independente, hidrogénio, hidroxi, CrC6 alquilo, CrC6 alcoxi, hidroxi(Ci-C6 alquilo), sulfidrilo, sulfamilo, -S02-C1, -S-C(O)-N(CH3)2, amino, C1-C4 alquilamino, di(CrC4 alquil)amino, C1-C4 alquilsul-fonilamino, di(Ci-C4 alquilsulfonil)amino -X0-O-C(O)-Ci-C4 alquilo, -0-(X1)j-X2, -C(0)-X3, N-C(0)-R2 ou -O-R3; Xo é uma ligação ou (CrC6 alquilo) divalente; X1 é um aminoácido; X2 é hidrogénio ou um grupo protector de amino; i é 1,2 ou 3; X3 é CrC6 alquilo; Ci-C6 alcoxi, halo(CpC6 alquilo), hidroxi(Ci-C6 alquilo) ou fenilo; R2 é C1-C4 alquilo, C1-C4 alcoxi, halo (C1-C4 alquilo), hidroxi(Ci-C4 alquilo), fenilo, p-metoxi-fenilo, p-fluorofenilo, naftilo, piridilo, piperidinilo, tiazolilo, oxazolilo, tienilo, furilo, tetra-hidrofurilo ou ciclo-hexilo; R3 é C2-C6 alquenilo, -CH2-R3a, -C(0)-R3b, -C(S)-R3c, -C(CH3)2C(0)NH2, fenilo ou um grupo da fórmula: ou X R3a é fenilo, p-fluorofenilo, piridilo, pirrolidinilo, piperidinilo, pipera-zinilo, morfolinilo, N-(Ci-C4 alcoxicarbonil)piperidinilo, N-(trifluorometil)pipe-ridinilo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo, isotiazolilo, isooxazolilo, quinolilo, isoquinolilo, tienilo, furilo, tetra-hidrotienilo, tetra-hidrofurilo, ciclo-hexilo, ciclopentilo, ciclopropilo ou naftilo; R3b é pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, N-(Ci-C4 alcoxicarbonil)piperidinilo, N-(trifluorometil)piperidinilo, benziloxi, piridil-metiloxi, Q-Cô alcoxi, halo(Ci-C4 alcoxi), amino, C1-C4 alquilamino ou di(Ci-C4 alquil)amino; R3c é amino, C1-C4 alquilamino ou di(CrC4 alquil)amino; R3d é oxigénio, hidroximino, hidrazino ou =CHZ; Z é hidrogénio, CrC4 alquilo, halogénio, di(Ci-C4 alquil)amino, C1-C4 alcoxicarbonilo, carbamoil(Ci-C4 alquilo), N-(CpC4 alquil)carbamoílo ou N,N-di(CrC4 alquil)carbamoílo; R3e é hidrogénio ou trifluorometilo; X é uma ligação ou -(CH2)-; R4 é hidrogénio, hidroxi, amino, C1-C4 alquilamino, di(Ci-C4 alquil)-amino, CrC4 alcoxi, =0, -0-S(CH3)2C(CH3)3, C2-C6 alcanoiloxi, N-(C2-C6 alcanoil)amino, =N-R5 ou R4 e R6 combinam-se para formar uma ligação; R5 é hidroxi, amino, C1-C4 alquilamino, di(CrC4 alquil)amino, C1-C4 alcoxi, piridilmetoxi, benziloxi, piperazinilo, N-(metil)piperazinilo ou -0-CH2- Τ\ \ - 3 - j , ,-η /ί ,'L· " - R5a é hidroxi ou C1-C4 alcoxi; R6 é hidrogénio, halo, C1-C4 alquilo ou =0; R7 é hidrogénio ou CrC4 alquilo; R é hidroxi, halo, CrC6 alcoxi, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, 4-metil-piperazinilo, morfolinilo ou -N(R9)-R10; R9 é hidrogénio ou metilo; R10 é -(Ci-C6 alquilo divalente)-R10a; R10a é piridilo, com a condição de que i) quando R4 é hidrogénio ou =0; R8 é metoxi; e R1 é hidrogénio; então R° não pode ser hidrogénio, hidroxi, metoxi, -C(CH3)2OH, -C(0)CH3, -0C(0)CH3 ou -C(CH3)20C(0)CH3; ii) quando R4 é hidrogénio ou =0; R8 é metoxi; e R° é isopropilo; então R1 não pode ser hidroxi ou metoxi: iii) quando R4 é hidrogénio ou =0; R8 é hidroxi; e R° é hidrogénio; então R1 não pode ser hidrogénio ou isopropilo; iv) quando R4 é hidrogénio; R8 é metoxi; e R° é hidrogénio; então R1 não pode ser hidrogénio, hidroxi, .C(0)CH3 ou -0C(0)CH3; v) quando RI é hidrogénio; e R° é isopropilo; então R4 não pode ser hidrogénio, hidroxi, metoxi, etoxi, =0, -0C(0)CH3) -NOH ou combinam-se com R6 para formar uma ligação; vi) quando R1 é hidrogénio; R4 é hidrogénio e R8 é hidroxi; então R° não pode ser -C(CH3)20C(0)CH3: ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. -4- -4- R1 é hidrogénio, sulfidrilo, sulfamilo, -S02-C1, amino, di(Ci-C4 alquilsulfonil)amino -C(0)-X3, -N-C(0)-R2 ou -O-R3; Xo é uma ligação ou (CpCô alquilo) divalente; X1 é um aminoácido; •y t X é hidrogénio ou um grupo protector de amino; i é 1 ou 2; X é Q-Cô alquilo; R2 é hidroxi(CrC4 alquilo); R3 é C2-C6 alquenilo, -CH2-R3a, -C(0)-R3b, -C(S)-R3c, -C(CH3)2C(0)NH2, fenilo ou um grupo da fórmula: R3a é fenilo, p-fluorofenilo, piridilo, piperidinilo, piperazinilo ou morfolinilo; R3b é piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, N-(CrC4 alcoxicarbo-nil)piperidinilo, N-(trifluorometil)piperidinilo, halo(Ci-C4 alcoxi) ou di(CpC4 alquil)amino; R3c é di(Ci-C4 alquil)amino; R3d é oxigénio ou hidroximino; R3e é hidrogénio ou trifluorometilo; X é uma ligação; R4 é hidrogénio, hidroxi, amino, =0, C2-C6 alcanoiloxi, =N-R5 ou 'OSl(CH3)2; R5 é hidroxi, amino, di(CrC4 alquil)amino, CpC4 alcoxi, piridilmetoxi, N-(metil)piperazinilo ou -0-CH2-C(0)-R5a; -5- {/Αη R6 é hidrogénio, cloro, bromo, metilo ou =0; R7 é hidrogénio ou metilo; R8 é hidroxi, cloro, metoxi, 4-metilpiperazinilo ou -N(R9)-R10; R9 é hidrogénio; R10 é -CH2-R10a; e R10a é piridilo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 3. Um composto de acordo com a reivindicação 2 onde: R° é hidrogénio, hidroxi, CrC6 alcoxi, -O-ÇXVx2, -X°-0-C(0)-CrC4 alquilo ou -0-R3; 1 3 R é hidrogénio, hidroxi, Q-Có alcoxi ou -0-R ; Xo é uma ligação; X1 é um aminoácido; X2 é hidrogénio ou um grupo protector de amino; i é 1 ou 2; R3 é C2-C6 alquenilo, -CH2-R3a ou -C(0)-R3b; R3a é p-fluorofenilo ou piridilo; R é piperidinilo; R1 é hidrogénio, hidroxi, =0 ou =N-R5; R2 é hidroxi, dimetilamino ou N-(metil)piperazinilo; R6 é hidrogénio, bromo ou =0; R7 é metilo; e R é metoxi; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

1 Um composto de acordo com a reivindicação 3 onde:

2 R° é hidrogénio, hidroxi, C1-C4 alcoxi, -0-(X1)j-X2, -0-C(0)metilo ou -O- -6- 1

3 R é hidrogénio, hidroxi, CrC4 alcoxi ou -O-R ; X1 é glicina, alanina ou valina; X2 é hidrogénio, t-butoxicarbonilo ou benziloxicarbonilo; R4 é =0 ou =N-R5; R5 é hidroxi; R6 é hidrogénio; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 17 de Julho de 2001 LUIS SILVA CARVALHO ' Agente Oficial da Propriedade Industrie RUA V1CT0R CORDON, 14 1200 LISBOA