PT699676E - Forma fisica de derivado de di-hidro-2,3-benzodiazepina - Google Patents

Description

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DESCRICÀO "FORMA FÍSICA DE DERIVADO DE DI-HIDRO-2,3-BENZODIAZEPINA"

Esta invenção relaciona-se com uma forma física inovadora de um derivado de di-hidro-2,3-benzodiazepina útil como medicamento no tratamento de distúrbios do sistema nervoso. A publicação do pedido de patente europeia número EP-A1-0492485 revela o composto l-(4-aminofenil)-3-acetil-4-metil-7,8-metilenodioxi-3,4-di-hidro-5H-2,3-benzodiazepina. O composto é um antagonista potente e selectivo do receptor do amino ácido excitatório AMPA e acredita-se possuir a capacidade de tratar uma variedade de distúrbios neurológicos. O enantiómero (R) deste composto, daqui em diante referido como (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina, é o enantiómero mais potente. A presente invenção proporciona uma forma física da (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina possuindo um padrão de difracção de raios X do pó com espaçamentos da 10,61, 8,83, 6,78, 5,83, 4,13 e 3,74 Â. Também proporciona um processo para produzir esta forma, composições farmacêuticas contendo-a e métodos para a sua utilização.

Verificou-se que a (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina é polimórfica. -2- A primeira forma física da (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina a ser encontrada possuía um ponto de fusão de cerca de 168-172°C e um padrão de diffacção de raios X do pó com espaçamentos d típicos a 6,57 e 5,24 Á. Esta forma física é referida daqui em diante como forma I. Foi preparada por redução de (R)-7-acetil-8,9-di-hidro-8-metil-5-(4-nitrofenil)-7H-1,3-dioxolo[4,5-h] [2,3]benzodia-zepina em etanol utilizando hidrogénio e paládio sobre carbono como catalisador, removendo o catalisador por filtração, evaporando o etanol, aquecendo o resíduo em 5,7 volumes de água/etanol 1:1 sob refluxo e depois deixando a solução resultante arrefecer.

Surpreendentemente, modificando o processo utilizado para preparar a forma I utilizando formato de amónio e paládio sobre carbono em vez de hidrogénio e paládio sobre carbono deu uma nova forma física de (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-1,3-dioxolo[4,5-h] [2,3]benzodiazepina, daqui em diante referida como forma II. Assim, a forma II foi preparada por redução da (R)-7-acetil-8,9-di-hidro-8-metil-5-(4-nitrofenil)-7H-l ,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina em etanol utilizando formato de amónio e paládio sobre carbono como catalisador, removendo o catalisador por filtração, evaporando o etanol, aquecendo o resíduo em 6 volumes de água/etanol 1:1 sob refluxo e depois deixando a solução resultante arrefecer. Verificou-se que a forma II em pó possui um padrão de difracção de raios X com espaçamentos d característicos a 13,12 e 5,01 Á. A modificação do processo utilizado para preparar a forma II por utilização de formato de potássio e paládio sobre carbono em vez de formato de amónio e paládio sobre carbono deu surpreendentemente ainda outra forma física, -3- h*· d~-~c ( referida daqui em diante como forma 111. Assim, a forma III foi preparada por redução da (R)-7-acetil-8,9-di-hidro-8-metil-5-(4-nitrofenil)-7H-l ,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina em etanol utilizando formato de potássio e paládio sobre carbono como catalisador, removendo o catalisador por filtração, evaporando o etanol, aquecendo o resíduo em 6 volumes de água/etanol 1:1 sob refluxo e depois deixando a solução resultante arrefecer. Verificou-se que a forma III em pó possui um padrão de diffacção de raios X com espaçamentos d característicos a 10,61, 8,83, 6,78 e 5,83,4,13 e 3,74 Â. Esta forma física é proporcionada como um aspecto da presente invenção.

Surpreendentemente, ainda outra forma física, daqui em diante referida como forma IV, foi também encontrada. Esta forma foi inicialmente observada como tendo sido formada após aquecimento da forma II. Foi subsequentemente verificado que a forma IV pode ser preparada directamente modificando o processo utilizado para preparar a forma ΙΠ, em particular por aumento da relação do volume de água/etanol utilizado no passo de cristalização. Assim, a forma IV foi preparada por redução da (R)-7-acetil-8,9-di-hidro-8-metil-5-(4-nitrofenil)-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina em etanol utilizando formato de potássio e paládio sobre carbono como catalisador, removendo o catalisador por filtração, evaporando o etanol, aquecendo o resíduo em 8 volumes de água/etanol 5:3 ou 7 volumes de água/etanol 4:3 sob refluxo, opcionalmente semeando com cristais da forma IV a 70-80°C e deixando depois a mistura resultante arrefecer. Verificou-se que a forma IV em pó possui um padrão de difracção de raios X com espaçamentos d característicos a 12,78,9,48, 8,99, 8,64, 8,23, 6,39, 6,27, 5,73, 4,01 e 3,96 Â. Esta forma física é objecto de um pedido de patente copendente (ref. X-9386D). -4- f'P'' —-» λ. ( *-!

Verificou-se que a forma I possuía várias propriedades desvantajosas. Em particular, verificou-se que cristalizava como uma suspensão espessa que é difícil de mexer e transferir. Verificou-se que o tempo de filtração era inaceitávelmente longo para produção em grande escala e que o tempo de secagem do bolo húmido filtrado é também longo. Além disso, verificou-se que a forma I é termicamente instável e verific0u7.se que se converte na forma IV ou, ocasionalmente,'ainda noutra forma, daqui em diante referida como forma V. Verificou-se que a forma V em pó possui um padrão de difracção de raios X com espaçamentos d característicos a 6,12, 5,94 e 5,48 Â. A forma V mostra múltiplas transições de fase quando sujeita a calorimetria de varrimento diferencial.

Verificou-se que a forma II cristaliza como uma suspensão agitável que pode ser facilmente filtrada. Contudo, verificou-se que seca lentamente e retém solvente de cristalização. Tal como a forma I, verificou-se que é termicamente instável em relação à conversão para a forma IV.

Verificou-se que a forma III cristaliza como uma suspensão agitável que pode ser facilmente filtrada e seca. Também se verificou ser termicamente estável.

Também se verificou que a forma IV cristaliza como uma suspensão agitável que pode ser facilmente filtrada e seca. Tal como a forma III, verificou-se ser termicamente estável.

Cada uma das formas I, II, III, IV e V foram caracterizadas por difracção de raios X, espectroscopia de RMN do C no estado sólido e por calorimetria de varrimento diferencial. As técnicas utilizadas e as características -5-físicas determinadas para amostras de cada uma das formas indicadas acima são dadas abaixo, conjuntamente (somente para as formas III e IV) com variações gerais obtidas por calorimetria de varrimento diferencial utilizando um número de amostras diferentes. • -Os-padrões de difracção de raios X foram obtidos num difractó-v metro de raios X Siemens D5000 equipado com uma fonte Cu Κα (λ=1,54056 Â) operando com uma carga no tubo de 50 KV e 40 mA. Os dados foram recolhidos com um detector de estado sólido Kevex. Cada amostra foi varrida entre 4 e 35° 20 com um tamanho de passo de 0,03° e um ritmo máximo de varredura de 2 seg./passo.

As medidas de calorimetria de varrimento diferencial (DSC) foram efectuadas num calorímetro de varrimento diferencial Seiko. As amostras (2-5 mg) seladas em cápsulas de alumínio foram aquecidas desde a temperatura ambiente (25°C) até pelo menos 200°C a um ritmo de 10°C/min.

Os espectros de RMN do 13C em polarização cruzada/”spinning” de angulo mágico (CP/MAS) foram obtidos utilizando um espectrómetro Varian Unity 400 MHz operando a uma frequência do carbono de 100,577 MHz e equipado com um acessório completo para sólidos e sonda Varian VT CP/MAS de 5 ou 7 mm. As condições típicas de medida foram as seguintes: impulso r.f. do protão a 90 (graus) 5,0 ms, tempo de contacto 1-2 ms, tempo de repetição de impulso 5 s, frequência MAS 7 kHz, largura espectral 50 kHz e tempo de aquisição 50 ms. Os desvios químicos foram referenciados ao grupo CH3 de hexametilbenzeno (delta = 17,3 ppm) por substituição de amostra. -6- C-'—

Forma I DSC: Endotermia maior a 171,5 °C, endotermia menor a 107,4 °C. XRD:

Espaçamento, d (Â) 17,30 12,28 7,76 6,57 5,24 4,81 4,34 4,21 4,09 3,98 3,62 2,85

Intensidade relativa 100 34 71 37 35 94 30 29 19 14 18 12

Forma II DSC: Endotermia a 85,2 °C, exotermia a 91,4 °C, endotermia a 192,3 °C. XRD:

Intensidade relativa 100 23 37 60 28 94 70 41 28 25

Espaçamento, d (Â) 13,12 9.72 6.73 6,61 5,25 5,01 4,89 4,75 4,24 3.74 -7- h*-~

Forma ΙΠ DSC: Endotermia a 194,7 °C para esta amostra. Verificou-se que outras amostras mostravam endotermia a temperaturas que variavam entre 192 c 195°C. XRD:

Espaçamento, d (Â) 10,61 8.83 8,33 7.85 6.78 5.83 5,68 5,31 5,11 4,94 4.78 4,55 4.41 4,13 4,07 3,90 3,74 3,53 3.42 3,37 3,28 3,21 3,02 2.85 2.78

Intensidade relativa 78 73 15 9 100 17 6 25 68 62 20 5 25 71 19 24 40 16 18 26 11 30 5 7 6 -8- (ο*.γ*Γ*

Forma IV DSC: Endotermia a 203,2 °C para esta amostra. Verificou-se que outras amostras mostravam endotermia a temperaturas que variavam entre 201 e 207°C. XRD:

Espaçamento, d (Â) Intensidade relativa 12,78 100 9,48 29 8,99 17 8,64 23 8,23 59 6,53 58 6,39 13 6,27 20 5,73 33 5,37 44 5,22 14 5,18 11 5,10 15 4,95 32 4,89 61 4,75 12 4,56 10 4,41 29 4,32 20 4,01 53 3,96 35 3,77 22 3,59 31 3,39 15 3,11 19 -9- (>· —*· ^ ^

Forma V DSC: Endotermia a 170,6 °C, exotermia a 177,3°C, endotermia a 206,2°C. XRD:

Espaçamento, d (Â) Intensidade relativa 51 21 29 32 13 14 15 24 82 100 50 34 20 21 13 17,37 12,29 7,75 6,79 6,12 5,94 5,48 5,34 4,89 4,33 4,26 4,08 4,02 3,65 2,86

Tabela I. Dados do Desvio Químico do 13C RMN em Solução e Estado Sólido Formal Forma II Forma III Forma IV Forma V 176,4 173,7 175,4 174,1, 176,3 175,3 128,6 126,9 126,3 127,5, 129,4 148,5 115,9 150,4 109,4 114,1 149,4 148,9 147,6 116,1 116,31 146,7 146,3 134,5 149,9 148,0, 150,2 135,4 136,4 123,3 146,0 146,4 136,7 123,9 129,2 135,9 136,1 151,1 131,7 135,8 124,3 124,7 154,3 154,5 152,1 129,1 131,2, 133,6 155,1 168,4 170,7 132,8 152,7 163,0 22,2 22,2 153,5 167,7, 169,7 167,2 18,6 18,3 171,4 23,2, 23,7 20,6 24,3 18,5, 19,2 19,1 19,4 17,4 - 10-

De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um processo para a preparação da Forma III, que compreende a) fazer reagir um composto de fórmula

em que Ms é metanossulfonilo, R é metilo, X é acetilo e Arilo é p-nitrofenilo com soda cáustica para dar um composto de fórmula I

i em que R é metilo, X é acetilo e Arilo é p-nitrofenilo; b) reduzir o grupo p-nitrofenilo no composto de fórmula T para um grupo anilina utilizando formato de potássio em presença de paládio sobre carvão como catalisador para dar um composto de fórmula I em que Arilo é p-aminofenilo; e -11 - Aí

c) cristalizar o composto dc fórmula I cm que Arilo c p-aminofenilo a partir de uma mistura de água e etanol em que o número de volumes de água por volume de etanol é menor que 1,1 a 1,0.

Pode ser possível utilizar uma relação de volumes de água para etanol mais elevada no passo (c) se for utilizada uma semente da forma III. O passo (a) do processo é convenientemente realizado a uma temperatura situada entre 0 e 100°C. Solventes adequados incluem alcanóis, tais como metanol ou etanol e éteres, como o tetra-hidrofurano.

Os compostos de fórmula geral VII podem ser preparados por um processo multipasso, iniciado a partir de um derivado de metilenodioxifenil cetona. Este processo compreende: a) proporcionar uma quantidade de um composto possuindo a formula:

em que R é metilo; b) redução assimétrica do composto de fórmula II para dar um composto possuindo a fórmula:

(III) - 12- c) fazendo reagir o composto de fórmula III com /?-nitrobenzaldeído para dar um composto isocromano possuindo a fórmula:

d) fazendo reagir o composto de fórmula IV com um agente oxidante para dar um composto de fórmula:

e) fazendo reagir o composto de fórmula V com hidrazida acética para dar um composto de fórmula:

(VI) - 13-

C—J f) fazendo reagir o composto de fórmula VI com cloreto de metanossulfonilo e uma amina terciária para formar um composto de fórmula VII. O processo preferido envolve a redução quiral precoce de uma cetona para um álcool. Os substituintes são adicionados num processo multipasso para fechar o anel pirano benzo-fundido, antes de ser introduzido um reagente hidrazina para abrir o anel e adicionar os componentes azoto necessários. Finalmente, o anel secundário é fechado por adição de uma base forte e o composto é reduzido para formar o composto desejado.

Mais preferencialmente, o passo de redução quiral é o passo inicial na síntese dos composto de fórmula (I) a partir de cetonas. A redução quiral pode ser efectuada por utilização de químicos específicos ou, preferencialmente, por utilização de agentes biológicos como revelado abaixo. O estabelecimento precoce da estereoquímica no processo é benéfico e permite que os passos sequentes serem efectuados em material enantioméricamente relativamente puro. Isto aumenta tanto o rendimento como a pureza enantiomérica. O primeiro passo do processo envolve uma redução quiral da 3,4-metilenodioxifenil acetona para produzir um álcool enantioméricamente virtualmente puro derivado de 1,2-metilenodioxibenzeno. Preferencialmente, o enantiómero formado é o estereoisómero S ou (+) do álcool.

Altemativamente, o passo inicial pode envolver a combinação de um haloderivado de 1,2-metilenodioxibenzeno com um epóxido enatioméricamente enriquecido. Também resulta na produção de um álcool derivado do 1,2-metilenodioxibenzeno enantioméricamente muito enriquecido. - 14- 0 material utilizado para efectuar o passo inicial de redução quiral pode ser químico ou preferencialmente biológico. No caso de agentes biológicos, os agentes preferidos são enzimas redutoras, sendo mais preferencialmente leveduras do grupo Zygosaccharomyces. Outros agentes biológicos que também podem ser utilizados incluem: Pichia fermentans, Endomycopsis fibuligera, Nematospora 'coryli, Saccharomyces- sp., Candida -famata, Saccharomyces pastorianus, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces uvarum, Candida utilis, Saccharomyces globosus, Kluyveromyces dobzhansk, Kluyveromyces lactis, Candida albicans, fermento de padeiro, Zygosaccharomyces rouxii,

Lactobacillus acidofilus, Aureobasidium pullulans, Mortierella isabelina, Rhizopus oryzae, Kloeckeva javanica, Hanseniaspora valbyensis,

Octosporomyces octospori, Candida guiliermondi, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Torulopsis taboadae, Torulopsis ethanolitolerans, Torulopsis ptarmiganii, Torulopsis sonorensis, Trigonopsis variabilis, Torulopsis enokii, Torulopsis methanothermo, fermento instantâneo SAF, levedura “ashland” inact., Candida boidinii, Candida blankii e fermento “Red Star”. O intermediário desejado formado no passo inicial é um álcool substituído congénere de 1,2-metilenodioxibenzeno, consistindo o congénere mais preferido em (S)-a-metil-l,3-benzodioxole-5-etanol. O composto intermediário desejado no passo inicial é então sujeito a uma reacção de Pictet-Spengler proporciona a fusão convergente dos constituintes carbono da benzodiazepina. O reagente preferido para escolha éop-nitrobenzaldeído, apesar de outros reagentes conhecidos pelos técnicos da matéria, tais como acetais, poderem ser utilizados. Os intermediários preferidos são di-hidrobenzopiranos sendo o composto mais preferido o 7,8-di-hidro-7-metil-5-(4-nitrofenil)-5H-1,3-dioxolo-benzo[b]pirano. - 15- O congénere di-hidrobenzopirano é depois oxidado na posição C5 para dar um derivado hemicetal de fórmula geral

Os agentes oxidantes preferidos incluem permanganato de potássio, DDQ (2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona) ou outros, sendo o agente preferido uma combinação de hidróxido de sódio e ar.

Faz-se então reagir o C5-hemicetal com hidrazida acética em presença de um ácido de modo a formar a hidrazona intermediária. Neste passo, o anel benzopirano é aberto de modo que o componente hidrazona se liga ao carbono C5. A reacção é convenientemente efectuada num solvente aromático ou prótico em refluxo, sendo a hidrazona de fórmula geral

em que R é CH3, X é acetilo e Arilo é p-nitrofenilo. -16-

At* Γ O processo pode ser sumariado nos esquemas seguintes. ESQUEMA (I)

H P

No esquema (I), o passo inicial do processo envolve a adição de agentes biológicos, preferencialmente Zygosaccharomyces rouxii, para reduzir a cetona para o álcool desejado. Uma quantidade adequada de resina adsorvente tal como AD-7, XAD-7, HP2MGL (polimetacrilatos de ligações cruzadas da Rohm & Haas), HP20 (polistirénica) ou SP207 (polistireno bromado da Mitsubishi) pode ser adicionada para evitar a morte do organismo e para adsorver o álcool conforme se for formando. -17-

ESQUEMA II

>#Λ

No esquema (II), o passo inicial do processo envolve a reacção de um derivado de haleto de arilo, tal como o 4-bromo-l,2-(metilenodioxi) benzeno, com um hidrocarboneto de metal alcalino (é preferido o sec-butilítio) e um epóxido enantioméricamente puro. Altemativamente, um haleto de arilo pode ser primeiro convertido num reagente de Grignard por reacção com magnésio, fazendo-o depois reagir com um epóxido enantioméricamente puro em presença de óxido de cobre (I), como catalisador. O preferido é o óxido de (S)-(-)-propileno. Tanto no esquema (I) como no esquema (II) o objectivo é estabelecer a estereoquímica do átomo C8 no anel benzodiazepina tão cedo quanto possível. Observou-se que ambos os esquemas cumprem este objectivo e formaram álcoois enantioméricamente enriquecidos (ee) com uma pureza de 98%.

Sabe-se que a (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina é um antagonista selectivo do receptor AMPA. Ainda de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização da forma III para a manufactura de um medicamento para bloquear os receptores AMPA num mamífero necessitando de tal tratamento.

Uma variedade de funções fisiológicas sujeitas à influência da estimulação excessiva ou inadequada da neurotransmissão de amino ácidos excitatórios. Acredita-se que a (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina possui a capacidade para tratar uma -18-variedade de distúrbios neurológicos associados, em mamíferos, com esta condição que incluem distúrbios neurológicos agudos, tais como deficiência cerebral subsequentes a “bypass” coronário e enxerto, síncope, isquémia cerebral, traumatismo da medula espinal, traumatismo da cabeça, hipoxia perinatal, paragem cardíaca e dano neuronal hipoglicémico. Acredita-se que o composto tem capacidade para tratar uma variedade de doenças neurológicas crónicas tais como doença de Alzheimer, coreia de Huntington, esclerose lateral amiotróficà, demência induzida pela SIDA, damos oculares e retinopatia e doença de Parkinson idiopática ou induzida por fármacos. A presente invenção também proporciona a utilização da forma II para a manufactura de um medicamento para tratamento destes distúrbios.

Também se acredita que o composto possui capacidade para tratar em mamíferos uma variedade de outros distúrbios neurológicos que estão associados com disfunção do glutamato incluindo espasmos musculares, convulsões, enxaqueca, dor de cabeça, incontinência urinária, psicoses, tolerância a drogas e privação, ansiedade, emese, edema cerebral, dor crónica, e disquinésia tardia. O agente também é útil como agente analgésico. Assim, a presente invenção também proporciona a utilização da forma III para a manufactura de um medicamento para tratamento desses distúrbios. O termo “quantidade eficaz” é aqui utilizado para representar uma quantidade de forma III que é capaz de bloquear o receptor de amino ácido excitatório AMPA. A dose particular de composto administrada de acordo com esta invenção será, claro, determinada pelas circunstâncias particulares que rodeiam o caso, incluindo o composto administrado, a via de administração, o estado particular a ser tratado e considerações semelhantes. A forma pode ser administrada por uma variedade de vias incluindo a via oral, rectal, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intranasal. Altemativamente, a forma -19- J''{"i -—V ( *Λ pode ser administrada por perfusSo contínua. Uma dose típica diária conterá desde cerca de 0,01 mg/kg até cerca de 30 mg/kg de composto activo desta invenção. As doses diárias preferidas serão de cerca de 0,05 mg/kg a cerca 24 mg/kg, mais preferencialmente de cerca de 0,1 a cerca de 20 mg/kg. A forma III será geralmente administrada a pacientes numa composição farmacêutica. De.acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica, que compreende a forma III e um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

No fabrico das composições da presente invenção, o ingrediente activo será geralmente misturado com um veículo, ou diluído com um veículo, ou encerrado num veículo que pode Ter a forma de uma cápsula, saqueta, papel o outro recipiente. Quando o veículo serve como diluente, ele pode ser um material sólido, semi-sólido ou líquido que actua como veículo, excipiente ou meio para o ingrediente activo. A composição pode ser sob a forma de, por exemplo, comprimidos, pílulas, pós, pastilhas, saquetas, hóstias, suspensões, aerossóis, cápsulas de gelatina mole e rígida e pós em embalagem estéril.

Alguns exemplos de veículos, excipientes e diluentes adequados incluem lactose, dextrose sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma, acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, metilcelulose, hidroxibenzoatos de metilo e de propilo, talco, estearato de magnésio e óleo mineral. As formulações podem incluir adicionalmente agentes lubrificantes,agentes molhantes, agentes emulsionantes e de suspensão, agentes conservantes, agentes edulcorantes ou agentes aromatizantes. As composições da invenção podem ser formuladas de modo a proporcionar libertação rápida, controlada ou retardada do ingrediente activo após administração ao paciente por emprego de processos bem conhecidos na técnica. -20- d*—

As composições são preferencialmente formuladas numa forma de

dosagem unitária, contendo cada dosagem desde cerca de 5 a cerca de 5000 mg do ingrediente activo. A forma de dosagem unitária mais preferida contém cerca de 100 a cerca de 2000 mg do ingrediente activo. O termo “forma de dosagem unitária” refere-se a uma unidade física discreta adequada como dosagem unitária para sujeitos humanos e outros mamíferos,' contendo cada unidade uma quantidade predeterminada de material activo calculado para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com um veículo farmacêutico adequado.

Os exemplos que se seguem ilustram a invenção.

Exemplo 1 Síntese de (SVa-metil-1,3-benzodioxole-5-etanol 1 Equiv. de 3,4-metilenodioxifenil acetona, 0,45 equiv. de fosfato disódico, 0,03 equiv. de ácido fosfórico, 12,5 volumes de resina AD-7 e 5,8 volumes de água são misturados conjuntamente e agitados durante 15-60 minutos a 20-25°C. Adicionam-se 2,27 equiv. de glucose e adiciona-se Z. rouxii ATCC 14462 numa quantidade de 1,5 gramas de pasta húmida de células por grama de cetona (ou sejam 0,375 gramas/grama numa base seca). Esta mistura foi diluída com água até 25 volumes e depois agitada suavemente a 33-3 5°C durante 8-16 horas. A mistura foi filtrada num crivo de aço inoxidável de malha 100 (-150 microns) e a resina que ficou retida no crivo foi lavada com 25 volumes de água repartida em quatro porções separadas. O produto, que estava absovido pela resina, foi então desabsorvido a partir da resina com 25 volumes de acetona. A solução de acetona/produto foi seca sob vácuo para dar o intermediário em epígrafe como um óleo amarelo de viscosidade intermédia. O rendimento in situ -21 - h*.vfr C-— foi dc 97-100%, enquanto que o rendimento do isolado foi de 85-90% A potência foi de 80-95% e o EE é de 100%.

Exemplo 2 Síntese de (5RS.7SV7.8 di-hidro-7-metil-5-(4-nitmfftnii). -5H-1.3-dioxoló-r4.5-Gir21~benzoDÍrann O intermediário acima foi dissolvido em 4,64 volumes de tolueno, filtrado com hyflo e lavado com 1,55 volumes de tolueno. Adicionaram-se 1,05 equiv. de /?-nitrobenzaldeído e 1,05 equiv. de ácido clorídrico concentrado, e a mistura foi aquecida a 55-65°C e agitada durante 1 hora. Foi então conduzida uma troca de solventes a 250 mm Hg, substituindo o tolueno com 12,4 volumes de 93% de isopropanol/7% de água. O volume durante esta troca de solventes varia entre 11-14 volumes, e o volume final era de ~11 volumes. A mistura foi arrefecida até 0-10°C e agitada durante 1 hora. Os cristais aciculares de produto foram filtrados e lavados 2 vezes com 1,85 vols. de isopropanol e secos sob vácuo a 50-60°C. O rendimento in situ do composto em epígrafe foi de 95+% enquanto que o rendimento do isolado foi de 87-93%. A potência foi de 99+% e o EE é de 100%.

Exemplo 3 Síntese alternativa de fSVa-metil-1.3 benzodioxole-5-etanol

Dissolveram-se 3,47 gramas de 4-bromo-l,2(metileno-dioxi)benze-no em 100 mL de tetra-hidrofurano a -78°C e adicionaram-se depois 13,9 mL de sec-butilítio 1,3M em tetra-hidrofurano para consumir o haleto de arilo em menos -22-de 30 minutes. Adicionou-se com uma seringa 1,00 grama de óxido de (S)-(-)-propileno em 2 mL de THF e a solução foi agitada durante 45 minutos. A solução foi então aquecida até 23°C durante 16 horas. A mistura reaccional foi vertida numa solução 3M de cloreto de amónio, e o produto isolado por extracção com acetato de etilo. Os extractos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio filtrados através de "florisil" e concentrados por evaporação em rotação. O óleo residual foi purificado por cromatografia em sílica gel e eluído com uma mistura 50:50 de hexeno e éter dietílico para dar 1,40 g (45%) do intermediário em epígrafe. Dquim: [a]365 +117,2° (c 1,0, CHCI3); TLC Ry = 0,26 ( hexano:éter 50:50); IR (CHC13) 3598, 3012, 2973, 2887, 1490, 1249, 1041 cm'1; 13C RMN (CDCI3) d 147,75, 146,19, 132,26, 122,27, 109,68, 108,30; espectro de massa, m/z (FD, M*) 180; Análise calc. para CioHi203: C: 6,65; H, 6,71. Encontrada: C, 66,42; H, 6,66.

Exemplo 4 Síntese alternativa de (5RS.7S)-7.8-di-hidro-7-metil-5-(4--nitrofenil)-5H-1.3-dioxolo- Í4.5-G1 Γ 21benzopirano

Adicionaram-se 244 gramas de /»-nitrobenzaldeído a uma solução de 300 gramas do intermediário formado no passo de redução biocatalisado do Exemplo 1 em 4,45 L de tolueno. Adicionaram-se gota a gota 166,5 mL de ácido clorídrico concentrado durante cerca de 15-20 min. e a mistura resultante foi aquecida até 60°C durante 2,5 h. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada por evaporação rotativa. Adicionaram-se 3 L de etanol e a mistura foi concentrada até um sólido. Adicionou-se uma segunda porção de 3 L de etanol e a mistura foi agitada durante 1 h. A suspensão foi arrefecida de um dia para o outro e o produto cristalino isolado por filtração com vácuo. O bolo -23-filtrado foi lavado com etanol e depois seco num fomo de vácuo a 40-60°C para dar 450 g (86%) de um sólido quase branco que se determinou ser uma mistura isomérica do intermediário ópticamente activo epigrafado acima. P chem: [a]365 + 55° (c0,4, CHC13).

Exemplo 5 Síntese de 15RS.7SV7.8-di-hidro-7-metil-5-f4-nitrofenil)--5H-1.3-dioxolo-r4.5-Gl Γ 21benzopiran-5-ol

Adicionaram-se 350 gramas do intermediário isomérico do Exemplo 4 a uma solução de 731 mL de sulfóxido de dimetilo e 2923 mL de dimetilformamida. A mistura foi arrefecida até 8-12°C e fez-se passar ar comprimido através da mistura. Adicionaram-se 117,5 mL de uma solução aquosa a 50% de hidróxido de sódio de uma só vez e a mistura resultante foi agitada durante 4,5 h. A mistura reaccional foi transferida através de uma cânula ao longo de 30-60 min. para 8, 25 L de uma solução agitada de ácido clorídrico IN a 10-15°C. O precipitado resultante foi filtrado e lavado com 3 L de água e seco ao ar até peso constante (384 g). O bolo húmido foi transferido para o Exemplo 6 sem secagem adicional. D quím: dados recolhidos a partir de uma mistura isomérica 3:1. TLC Rf = 0,19 (hexano: acetato de etilo 75:25); IV (CHCI3) 3605, 3590, 3015, 3000, 2960, 1608, 1522, 1484, 1352, 1240, 1042 cm' *; iH RMN (CDCI3, 300 MHz) d (isómero maioritário) 8,16 (d, 2H, J=6,9 Hz), 7,73 (d, 2H, J=6,9 Hz), 6,55 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,83 (s, 1H), 4,38 (m, 1H), 2,70 (m, 2H), 1,39 (d, 3H, J=6,3 Hz); d (isómero minoritário) 8,27 (d, 2H, J=8,9 Hz), 7,90 (d, 2H, J=8,6 Hz), 6,87 (s, 1H), 6,73 (s, 1H), 6,03 (s, 1H), 6,02 (s, 1H), 3,95 (m, 1H), 2,7 (obscurecido, m, 2H), 1,24 (d, 3H, J=6,l Hz; -24-espectro de massa, m/z (FD, M*) 329; Anál. Cale. para Ci7H15N06: C, 62,01; H, 4,59; N, 4,25. Encontrada: C, 62,22, H, 4,79; N, 4,29.

Exemplo 6 Síntese de (S)-ácido acético-rr6-í2-hidroxipropilV1.3-benzo-dioxol-5-ill(4-nitròfenil)metileno1hidrazida A 350 g do bolo húmido do Exemplo 5 em 2300 mL de etanol adicionaram-se 94,5 g de hidrazida acética e 1 mL de ácido clorídrico concentrado. A solução resultante foi aquecida em refluxo durante 2,5 h. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada até uma espuma amarela por evaporação rotativa. O concentrado foi dissolvido em 4,9 L de acetato de etilo e lavado com 1,5 L de solução saturada de bicarbonato de sódio e depois com 1,5 L de solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada para dar 373 g de uma espuma amarela (91%). O material foi identificada como uma mistura 1:1 não separável de isóme-ros do composto em epígrafe (pureza 97% por HPLC). D quim.: Dados registados a partir de uma mistura isomérica 1:1. p.f. 167,8-169,7°C; TLC Rf = 0,55 (acetato de etilo); IV (CHC13) 3590, 3485, 3310, 1694, 1673, 1520, 1485, 1346 cm1; ‘H RMN (CDC13, 300 MHz) d 8,64, 8,50 (s, 1H, NH), 8,18 (d, 2H, Ar-H), 7,74, 7,71 (d, 2H, J=8, Ar-H), 6,99, 6,95 (s, 1H, Ar-H), 6,52, 6,50 (s, 1H, Ar-H), 6,06, 6,05 (d, 2H, J=5, 02CH2), 2,44 (s, 3H, CH3), 3,87 (m, 1H, CH), 2,4-2,2 (m, 2H, CH2), 1,12, 1,10 (d, 3H, CH3); 13C RMN (CDC13, 75 MHz) d 209,94 (C), 173,38, 173,43 (C), 149,38, 149,62 (C), 148,31, 148,58 (C), 147,90, 148,18 (C), 147,54 (C), 142,5, 143,04 (C), 132,64 (C), 127,53, 127,61 (CH), 123,75, 123,77 (CH), 122,86, 123,27 (C), 112,13 (CH), 110,55 (CH), 108.03, 108,10 (CH), 108,03, 108,10 (CH), 101,83 (CH2), 67,51, 68,08 (CH), 42,37, 42,97 (CH2), -25-

Mh*.rb C-..Li 23,48, 23,83 (CH3), 23,48, 23,83 (CH3), 20,47, 20,55 (CH3); [a]589 + 103,8° (c 1, CHC13); espectro de massa, m/z (FD, M4) 385; Anál. Cale. para Ci9Hi9N306: C, 59,22; H, 4,97; N, 10,90. Encontrada: C, 58,99; H, 5,04; N, 10,68.

Exemplo 7 Síntese de (Si-ácido acético-[T6-f2-IYmetilssulfonilloxnpropill-1.3.benzodioxoÍ-5-il1(4-nitrofeniDmetileno1hidrazida

Dissolveram-se 340 gramas do intermediário do Exemplo 6 em 2380 mL de cloreto de metileno. A solução foi arrefecida até 0 a -10°C e adicionaram-se 187 mL de trietilamina. Adicionaram-se depois 78,2 mL de cloreto de metanossulfonilo e a mistura resultante foi agitada durante 10-15 min. Adicionaram-se 510 mL de água. A fase orgânica isolada foi lavada com 460 mL de uma solução IN de ácido clorídrico e depois com 500 mL de solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução de cloreto de metileno foi aquecida até 35-45°C e adicionaram-se 4760 mL de hexano ao longo de 90 min. A mistura foi lentamente arrefecida até à temperatura ambiente e depois arrefecida até 0-5°C. O produto foi isolado por filtração com vácuo e seco num fomo com vácuo a 40-50°C para dar 356,2 gramas (87%) de uma mistura isomérica do composto em epígrafe como um sólido amarelo. D quím.: Dados registados a partir de uma mistura isomérica 3:1. P.f. 150,5-152,5°C; TLC Rf = 0,80 e 0,73 (acetato de etilo); IV (CHC13) 1696, 1520, 1486, 1346, 1175, 1041, 923 cm'1; ‘H RMN (CDC13, 300 MHz) d, 8,44 (s, 1H, NH), 8,20 (d, 2H, J=8,8 Hz, Ar-H), 7,73 (d, 2H, J=8,6 Hz), 6,94 (d, 1H, J=2,7 Hz, Ar-H), 6,57 (d, 1H, 2,6 Hz, Ar-H), 6,08 (d, 2H, J=5,4 Hz), 4,77 (m, 1H, CH), 2,90 (s, 3H, SCH3, maioritário), 2,83 (s, 3H, SCH3, minoritário), 1,26 (d, 3H, CH3, maioritário); espectro de massa, m/z (FD, M4) 385; Anál. Cale. para C2oH21N308S: C, 51,83; H, 4,57; N, 9,07; S, 6,92. Encontrada: C, 52,05; H, 4,53; N, 8,84; S, 6,96. -26-

Exemplo 8 Síntese de ÍR)-7-acetil-8.9-di-lridro-8-metil-5-í4-nitrofenil)--7H-1.3-dioxoloí4.5-hir2.31benzodiazepina t >-}·. I . í .. h

Dissolveram-se 325 g do intermediário'do Exemplo 7 em 3174 mL de metanol, à solução agitada adicionaram-se 38,1 mL de solução de soda cáustica a 50%. A mistura resultante foi agitada durante 4 h. Adicionaram-se 6348 ml de água à mistura e agitou-se durante 3 horas após o que o precipitado resultante foi isolado por filtração com vácuo. O material foi seco num forno com vácuo a 45-55°C para dar 255 gramas (97%) de composto em epígrafe que possuía uma pureza de 97,6% por % de área de HPLC. 221 gramas do material seco foram adicionalmente purificadas por resuspensão em 1105 mL de etanol que foi aquecido em refluxo. A mistura resultante foi arrefecida até à.temperatura ambiente e o precipitado foi isolado por filtração com vácuo. O isolado foi seco nu fomo com vácuo a 45-5 5°C para dar 199 gramas (90%) do composto em epígrafe que tinha uma pureza de 100% por ensaio de potência em HPLC.

Exemplo 9 Síntese da forma IV de (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8.9-di-hidro- -8-metil-7H-1.3-dioxolo 14.5-hl r2.31benzodiazepina A 5 gramas do intermediário do Exemplo 8 em 50 mL de etanol adicionaram-se 0,5 gramas de Pd 10%/C humedecido com água. A suspensão agitada foi tratada com uma solução de 4 g de formato de potássio em 4 mL de -27-água. A mistura resultante foi agitada durante 2,5 h e depois filtrada com hyflo. O filtrado foi concentrado até 10-20 mL por destilação e adicionaram-se lentamente 22 mL de água à solução quente (78°C). A mistura resultante foi aquecida até 90°C e depois lentamente arrefecida até à temperatura ambiente. O produto foi isolado por filtração com vácuo e lavado com 10-20 mL de água. O sólido isolado foi seco sob vácuo a 50°C para dar 4,17 gramas (93%) do composto em epígrafe que tinha uma purezá de 100% por ensaio de potência de HPLC. [a]365 = -303,7 (c=l, metanol).

Verificou-se posteriormente que o produto, cristalino, possuía a forma IV.

Exemplo 10 Síntese de í5RS.7SV7.8-di-hidro-7-metil-5-(4-nitrofeniD--5H-1.3-dioxolor4.5-Gir21benzopiran-5-ol

Dissolveram-se 15 gramas do intermediário do Exemplo 4 (derivado da redução da cetona mediada por Z. rouxii numa solução de 75 mL de sulfó-xido de dimetilo e de 75 mL de dimetilformamida. A solução foi arrefecida até 7-9°C e depois arejado com 40% e oxigénio em azoto. Adicionaram-se 7,62 gramas de hidróxido de sódio a 50% em água e a mistura resultante foi agitada durante 3-4 h. A reacção foi terminada e enquanto se mantinha a temperatura < ou igual a 12°C, adicionaram-se 120 mL de tolueno seguido por uma mistura de 45 mL de água e 10 mL de ácido clorídrico. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com 75 mL de uma solução aquosa a 10% de tiosulfato de sódio. A camada orgânica contendo o intermediário em epígrafe foi transferido para o passo seguinte. -28-

Exemplo 11 Síntese de (SVácido acético-rr6-(2-hidroxipropilV1.3.benzodioxol-5-il]f4-nitrofenilímetilenolhidrazida À solução em,.toluppp, do intermediário do Exemplo 10 adicionaram-se 4,26 gramas de hidrazida acética (0,01 volumes) e ácido clorídrico. A mistura resultante foi aquecida em refluxo durante 3,5 h com remoção da água por uma trapa de Dean-Stark. A mistura reaccional foi concentrada por destilação sob vácuo até 1 volume. O concentrado foi diluído com 105 mL de cloreto de metileno e lavado com 50-55 mL de solução saturada de bicarbonato de sódio e de solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio (0,25% em peso) e filtrada num bolo de hyflo. O filtro foi enxaguado com 1 volume de cloreto de metileno. A fase orgânica combinada contendo o intermediário em epígrafe foi transferida para o passo seguinte.

Exemplo 12 Síntese de (SVácido acético- ΓΓ6- Γ2-ΙΪmetilssulfonilloxilpropill-1,3 -benzodioxol-5-ill('4-nitrofenil)metilenolhidrazida A solução de cloreto de metileno contendo o intermediário do Exemplo 11 foi arrefecida até 0 a -5°C e adicionaram-se 10 mL de trietilamia. Adicionaram-se lentamente 4,1 mL de cloreto de metanossulfonilo de modo a manter a temperatura da reacção menor ou igual a 0°C. Adicionaram-se 1,5 volumes de água à solução resultante. A fase orgânica foi separada e lavada com 2,5 volumes de solução IN de ácido clorídrico. A fase orgânica foi isolada e concentrada até metade do volume original por destilação atmosférica. O produto foi precipitado por adição gota a gota de heptano (volume de heptano para o -29- Μ (κι'*·» C-<-( <-Λ concentrado orgânico de 2:1) à solução a 45°C. A mistura agitada foi arrefecida até 20-25°C durante 1 h e depois arrefecia até 0 a -5°C durante 1-2 h. O precipitado foi isolado por filtração com vácuo e lavado com 3 volumes de heptano:cloreto de metileno 4:1 e depois seco num forno com vácuo a 45-50°C. Obtiveram-se 17,43 gramas do intermediário em epígrafe (78%) como uma mistura, ópticamente activa de isómeros da hidrazona que tinha uma pureza de 97,7% segundo o ensaio de potência por HPLC.

Exemplo 13 Síntese de (R)-7-acetil-8.9-di-hidro-8-metil-5-(4-nitrofenil)7H-l,3-άϊοχο1οΓ4.5- hlT2. 31benzodiazepina

Suspenderam-se 17,5 gramas do intermediário do Exemplo 12 em 175 mL de álcool etílico. À mistura agitada adicionaram-se 1,7 gramas de hidróxido de sódio em pó. A mistura resultante foi agitada durante 1 h. Adicionaram-se 88 mL de água à mistura e agitou-se durante 1 h, após o que o precipitado resultante foi isolado por filtração com vácuo e lavado com 175 mL de água. O material foi seco num forno com vácuo a 70°C para dar 12,2 gramas (86%) do composto em epígrafe que tinha uma pureza de 99,9% segundo o ensaio de potência por HPLC.

Exemplo 14 fR)-7-Acetil-5-f4-aminofenil)-8.9-di-hidro-8-metil-7H-1.3-dioxolor4.5- hl|~2.31benzodiazepina

Utilizando o produto do Exemplo 13, foi preparado o composto em epígrafe por um procedimento experimental semelhante ao descrito no Exemplo 9. 9. -30- K (**3 ( •'i

Exemplo 15 (R)-7-Acetil-8.9-di-hidro-8-metil-5-('4-nitrofenilV7H- -1.3-dioxolor4.5-hlí2.31benzodiazepina

Arrefeceram-se até 0°C 1,05 gramas de (S)-acido acético-[[6-[2-[hidroxi]propil]-l,3-benzodioxol-5-il] (4-nitrofenil)metileno]hidrazida e 0,78 gramas de trifenilfosfina em 70 mL de tetra-hidrofurano. Adicionaram-se gota a gota ao longo de 15 min. 0,57 g de azodicarboxilato de dietilo em 5 mL de tetra-hidrofiirano. A mistura resultante foi agitada durante 2 h e depois aquecida até à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi transferida para uma ampola de decantação e a solução foi lavada com HC1 IN, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada por evaporação rotativa' O resíduo foi eluído através de uma coluna de silica gel (acetato de etilorhexano 1:1). As fracções contendo o composto desejado foram concentradas até um óleo amarelo que solidificou em repouso. O material cristalino amarelo foi suspenso em 30 mL de CH2C12 e hexano (3:7) a 0°C. O precipitado foi removido por filtração e o filtrado concentrado até uma espuma amarela. O resíduo foi suspenso em 10 mL de etanol que foi aquecido até refluxo e depois lentamente arrefecido até à temperatura ambiente. O precipitado foi recolhido por filtração e seco num fomo com vácuo a 60°C para dar 0,51 gramas (50%) do composto em epígrafe (ee 100%) que tinha uma pureza de 98,3% segundo ensaio de potência por HPLC.

Exemplos 16-18

Adicionou-se 0,5 mL de suspensão de levedura congelada contendo -31-o micioiganismo da Tabela 1 a 50 mL de um meio de malte de levedura num balão de 250 mL. Após 48 horas de agitação adiciona-se 1,0 mL de cultura a 50 mL adicionais de meio e agita-se durante mais 48 horas. Adiciona-se 3,4-metilenodioxifenil acetona até a concentração final ser de 10 gramas/litro assim como 1 mL de glucose a 10%. As culturas são incubadas e agitadas durante 24 horas, e depois .analisadas por HPLC quanto à presença do álcool quiral intermediário do Exemplo 1. TABELA 1

Ex. Microrganismo Origem % de conversão % EE 16 Candida famata (C.f.) A.T.C.C. 0,0 — 26418 17 Zigosaccharomyces (Z.r) A.T.C.C. 77,8 99,5 rouxii 14462 18 Mortierrela (M.i.) N.R.R.L. 1,7 94,3 isobellina 1557

Exemplo 19 Síntese da Forma I de (RV7-acetil-5-(4-aminofenir)-8.9-di-hidro--8-metil-7H-1.3-dioxolof4.5-hir2.31benzodiazepina

Hidrogenou-se (R)-7-acetil-8,9-di-hidro-8-metil-5-(4-nitrofenil)-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina (38,93 g) em 730 mL (19 volumes) de etanol 2B-3 utilizando 7,79 g de 10% de paládio sobre carbono e hidrogénio a 1 atmosfera. Quando a análise por HPLC indicou que o material de partida tinha sido consumido, o catalisador foi removido por filtração, e o filtrado evaporado para dar 38,7 g de produto crú. O produto crú foi dissolvido em 220 mL (5,7 -32- lQA.yfo volumes) de água/etanol 1:1 por aquecimento em refluxo. Deixou-se a mistura arrefecer e o produto precipitou próximo da temperatura ambiente. A resultante suspensão espessa, de difícil agitação foi agitada à temperatura ambiente e depois arrefecida num banho de gelo/água. O sólido foi isolado por filtração e seco numa estufa de vácuo a 55°C de um dia para o outro para dar 31,6 g de produto purificado. Uma segunda recristalização utilizando as.rnesmas condições deu 28,7 g (80%) de produto após secagem sob vácuo durarite'3 dias a 65°C e 3 dias à temperatura ambiente. O produto secou muito lentamente, e a amostra nesta altura ainda continha 1,6% de etanol. A análise por difracção de raios X (XRD), RMN do estado sólido (SSNMR) e calorimetria de varrimento diferencial (DSC) indicaram que foi formado o polimorfo de Forma I.

Exemplo 20 Síntese da Forma II de fRV7-acetil-5-(4-aminofenilV8.9-di-hidro--8-metil-7H-1.3-dioxolor4.5-hir2.31benzodiazepina

Hidrogenou-se (R)-7-acetil-8,9-di-hidro-8-metil-5-(4-nitrofenil)-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina (8,63 g) em 170 mL (19 volumes) de etanol 2B-3 utilizando 0,86 g de 10% de paládio sobre carbono e 4,59 g de carbonato de amónio em 5 mL de água como fonte de hidrogénio para transferência. Quando a análise por HPLC indicou que o material de partida tinha sido consumido, o catalisador foi removido por filtração, e o filtrado evaporado para dar 8,19 g de produto crú. O produto crú foi dissolvido em 50 mL (6 volumes) de água/etanol 1:1 por aquecimento em refluxo. Deixou-se a mistura arrefecer até à temperatura ambiente e arrefeceu-se num banho de gelo/água. O sólido foi isolado por filtração e seco numa estufa com vácuo a 60°C de um dia para o outro para dar 7,41 g (93%) de produto purificado. Os cristais grandes continham 5,0% de etanol (CG) e 4,2% de água (KF). A análise por XRD, -33- SSNMR e DSC indicou que foi formado o polimorfo de Forma II.

Exemplo 21 Síntese da Forma ΠΙ de (RV7-acetil-5-(4-aminofeni1V8.9-di-hidro--8-metil-7H-1.3-dioxolo r4,5-h]|~2.31benzodiazepina

Hidrogenou-se (R)-7-acetil-8,9-di-hidro-8-metil-5-(4-nitrofenil)-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina (2,04 g) em 20 mL (10 volumes) de etanol 2B-3 utilizando 0,20 g de 10% de paládio sobre carbono e 1,47 g de formato de potássio em 4 mL de água como fonte de hidrogénio para transferência. Quando a análise por HPLC indicou que o material de partida tinha sido consumido, o catalisador foi removido por filtração, e o filtrado evaporado para dar 2,09 g de produto crú. O produto crú foi dissolvido em 12 mL (6 volumes) de água/etanol 1:1 por aquecimento em refluxo. Deixou-se a mistura arrefecer e a cerca de 40°C foi semeada com cristais da Forma II. Depois de ter atingido a temperatura ambiente, a mistura foi arrefecida num banho de gelo/água. O sólido foi isolado por filtração e seco numa estufa com vácuo a 50°C durante 24 h para dar 1,45 g (77%) do produto purificado. A análise mostrou 0,05% de etanol (GC) e 0,75% de água (KF). Apesar de se terem utilizado cristais do polimorfo de Forma II como semente, a análise por XRD, SSNMR e DSC indicou que foi formado o polimorfo de Forma III.

Exemplo 22 Síntese da Forma FV de (RV7-acetil-5-(4-aminofenil)-8.9-di-hidro--8-metil-7H-1.3-dioxolo [4.5-hl r2.31benzodiazepina

Hidrogenou-se (R)-7-acetil-8,9-di-hidro-8-metil-5-(4-nitrofenil)-7H- ^-*-(«"1 -34- l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina (25,2 g) em 250 mL (10 volumes) de etanol 2B-3 utilizando 2,0 g de 10% de paládio sobre carbono e 18,0 g de formato de potássio em 20 mL de água como fonte de hidrogénio para transferência. Quando a análise por HPLC indicou que o material de partida tinha sido consumido, o catalisador foi removido por filtração. O filtrado foi concentrado por destilação.até restarem cerca de 70 mL (3 volumes) de etanol. Adicionou-se água (93 mL, 4 volumes) à solução em refluxo. Deixou-se a mistura arrefecer e semeou-se com o produto cristalino do Exemplo 9 a 80°C. Deixou-se a suspensão resultante arrefecer até à temperatura ambiente com agitação de um dia para o outro. O sólido foi isolado por filtração e seco num fomo com vácuo a 50°C durante 24 horas para dar 19,8 g (85%) de produto purificado. A análise mostrou um nível não detectável de etanol(GC) e 1,0% de água (KF). A análise por XRD, SSNMR e DSC indicou que se tinha formado o polimorfo de Forma IV.

Exemplo 23 Síntese alternativa de (S)-a-metil-1.3-benzodioxole-5-etanol A uma suspensão de palhetas de magnésio (tumings) (17 g) em 50 mL de tetra-hidrofurano adicionou-se gota a gota uma solução de 5-bromo-l,3-benzodioxole (93,6 g). Após completa adição, a mistura foi diluída com 250 mL de tetra-hidrofurano e a mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. Transferiram-se 13 mL da solução (0,78 mol) para um balão de fundo redondo contendo iodeto de cobre (I) (0,12 g). A mistura resultante foi arrefecida até -50°C e adicionou-se lentamente uma solução de óxido de (S)-(-)-propileno em 3 mL de tetra-hidrofurano e agitou-se durante 10 min. A mistura foi diluída com éter. A fase orgânica foi isolada e lavada com água e solução aquosa saturada de -35- cloreto de sódio. O resíduo foi purificado por crornatografia em silica gel (50% de éter em pentano) para dar 1,66 g do produto desejado (91%). A análise quiral por HPLC indicou que a pureza óptica do material era de 98,3%.

Exemplo 24 2 ft»—i ·..· i _ ...

Formulação Farmacêutica £

Ingrediente activo 1 mg 10 50 100 Amido 444,5 mg 435,8 396,2 346,6 Silicone fluido 4,49 mg 4,22 3,84 3,36

Os ingredientes foram misturados e encheram-se cápsulas de gelatina rija tamanho 0 até um peso de enchimento de 450 mg.

Lisboa, 9 de Fevereiro de 2001 c—

ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON. 14 1200 LISBOA

Claims (4)

1. -í- Αί REIVINDICAÇÕES 1. Forma física de (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina possuindo um padrão de difrac-ção de raios X do pó com espaçamentos d a 10,61, 8,83, 6,78, 5,83, 4,13 e 3,74 Â (Forma III)
2. 2. Processo para a preparação de uma forma física III de (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodia-zepina como reivindicado na Reivindicação 1, que compreende: a) a reacção de um composto de fórmula

   em que Ms é metanosulfonilo, R é metilo, X é acetilo e Arilo é p-nitrofenilo com soda cáustica para dar um composto de fórmula I

   I -2-em que R é metilo, X é acetilo e Arilo é p-nitrofenilo; b) redução do grupo p-nitrofenilo no composto de fórmula I para um grupo anilina utilizando formato de potássio em presença de paládio sobre carvão como catalisador para dar um composto de fórmula I em que Arilo é p-aminofenilo; e c) cristalização do composto de fórmula I em que Arilo é p-aminofenilo a partir de uma mistura de água e etanol em que o número de volumes de água por volume de etanol é é menor do que 1,1 a 1,0.
3. 3. Composição farmacêutica que compreende uma forma física III de (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-1,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina possuindo um padrão de diffacção de raios X do pó com espaçamentos d a 10,61, 8,83, 6,78, 5,83, 4,13 e 3,74 Â e um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
4. 4. Utilização de uma forma física III de (R)-7-acetil-5-(4-aminofenil)-8,9-di-hidro-8-metil-7H-l,3-dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepina possuindo um padrão de difracção de raios X do pó com espaçamentos d a 10,61, 8,83, 6,78, 5,83, 4,13 e 3,74 À para a manufactura de um medicamento para utilização como um antagonista do receptor AMPA. Lisboa, 9 de Fevereiro de 2001

   ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA