PT674516E

PT674516E - Compostos de 5-tiapirimidinona e 5-selenopirimidinona substituidos antiproliferativos

Info

Publication number: PT674516E
Application number: PT94904399T
Authority: PT
Inventors: Michael D Varney; Judith G Deal; Cynthia L Palmer; William H Romines
Original assignee: Agouron Pharma
Priority date: 1992-12-16
Filing date: 1993-12-10
Publication date: 2000-05-31
Also published as: EP0674516A4; ES2145122T3; CA2151588A1; CA2151588C; EP0674516A1; US6207670B1; SG52739A1; JPH08504765A; WO1994013295A1; ATE189390T1; US20020173515A1; DE69327796T2; US5726312A; US5739141A; EP0674516B1; GR3033314T3; US6323210B2; DE69327796D1; US20010018443A1; AU5846494A

Description

M°éW51b \

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS DE 5-TIAPIRIMIDINONA E 5-SELENOPIRIMIDINONA SUBSTITUÍDOS ANTIPROLIFERATIVOS" A presente invenção relaciona-se com certos compostos de 5-tia e 5-selenopirimidinonilo substituídos que inibem a enzima glicinamida ribonucleotido formil transferase (GARFT), certos compostos de 5-tia e 5-selenopirimidinonilo substituídos que inibem a enzima amino imidazole carboxamida ribonucleotido formil transferase (AICARFT), com intermediários seus, com composições farmacêuticas contendo estes compostos, e com a sua utilização para inibir o crescimento e a proliferação das células de organismos superiores e de microrganismos tais como bactérias, leveduras e fungos. Esses efeitos incluem actividade antitumoral, anti-inflamatõria, antipsoriática e imunossupressora. Também é descrito um processo para a preparação destes compostos.

Uma classe ampla de agentes antiproliferativos inclui compostos antimetabolitos. Uma subclasse particular de antimetabolitos conhecida como antifolatos ou antifolos são antagonistas da vitamina ácido fólico. Tipicamente, os antifolatos assemelham-se de perto à estrutura do ácido fólico e incorporam a unidade P-benzoíl glutamato caracteristica do ácido fólico. A unidade glutamato do ácido fólico toma uma carga negativa dupla ao pH fisiológico. Consequentemente, este composto e os seus análogos têm um sistema de transporte conduzido por energia activa para atravessar a membrana celular e exercer um efeito metabólico. A GARFT e a AICARFT são enzimas dependentes de folato na via da biosslntese de novo da purina. Esta via é crítica para a divisão e proliferação celulares. Sabe-se que o encerramento 1 desta via tem um efeito antiproliferativo, em particular, um efeito antitumoral. Assim, foi sintetizado um número de análogos de folato e foram estudados quanto à sua capacidade para inibir a GARFT. Foi descrito como exibindo actividade antitumoral um inibidor de GARFT que se liga fortemente e é especifico, o ácido 5,10-didedzatetrahidrofólico. Ver F. M. Muggia, "Folate antimetabolites inhibitory of de novo purine synthesis" em New Drugs, Concepts and Results in Câncer Chemotherapy, páginas 65-87, Kluwer Academic Publishers, Boston (1992). A presente invenção introduz uma classe nova de compostos de 5-tia- ou 5-selenopirimidinonilo contendo uma unidade de ácido glutâmico. Estes compostos podem ser eficazes na inibição da GARFT e/ou da AICARFT e do crescimento e proliferação de células de organismos superiores e de microrganismos tais como bactérias, leveduras e fungos. A invenção relaciona-se adicionalmente com composições farmacêuticas contendo estes compostos ou sais adequados deles derivados e com a utilização destes compostos como inibidores das enzimas GARFT e/ou AICARFT.

Como afirmado acima, os compostos da invenção possuem actividade antiproliferativa, uma propriedade que pode exprimir,-se na forma de actividade antitumoral. Um composto da invenção pode ser activo per se, ou pode ser um precursor que é convertido in vivo num composto activo. Os compostos da presente invenção possuem pelo menos um centro quiral. Assim os compostos da invenção incluem misturas de diastereómeros ou enantiómeros, bem como diastereómeros e enantiómeros substancialmente isentos de outros diastereómeros ou enantiómeros.

Os compostos preferidos da invenção são activos na inibição do crescimento da linha celular L1210, uma linha celular de leucemia de murganhos que pode ser cultivada em cultura de tecidos. Os compostos da invenção também podem ser activos na inibição do crescimento de bactérias tais como 2 L-Cj ΐ Γ

Escherichia coli bactérias gram negativas que podem ser cultivadas em cultura.

Os compostos de acordo com a invenção, bem como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser incorporados em formas de dosagem convenientes tais como cápsulas, comprimidos, ou preparações injectáveis. Também podem ser utilizados veículos farmaceuticamente aceitáveis sólidos ou líquidos. Os veículos sólidos incluem amido, lactose, sulfato de cálcio, gesso, sacarose, talco, gelatina, agar, pectina, acácia, estearato de magnésio e ácido esteárico. Os veículos líquidos incluem melaço, óleo de amendoim, azeite, soro fisiológico e água. O veículo ou diluente pode incluir qualquer material de libertação retardada, tal como monoestearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo, só ou com cera. Quando é utilizado um veículo líquido, a preparação pode ser na forma de um xarope, elixir, emulsão, cápsula de gelatina mole, líquido injectável estéril (e.g. solução) ou uma suspensão líquida não-aquosa ou aquosa.

As preparações farmacêuticas (não necessariamente os compostos ou seus sais per se) são preparadas de acordo com técnicas convencionais do químico farmacêutico envolvendo passos tais como mistura, granulação, e compressão quando necessária para formas em comprimidos, ou mistura, enchimento e dissolução dos componentes consoante for apropriado para dar os produtos desejados para administração oral, parentérica, tópica, intravaginal, intranasal, intrabrônquico, intraocular, intra-auricular e rectal.

As composições da presente invenção podem compreender adicionalmente um ou mais outros compostos que são agentes antitumorais tais como: um inibidor mitótico (por exemplo: vinblastina); agentes alquilantes; inibidores de dihidrofolato redutase ou inibidores de TS; antimetabolitos (por exemplo, 5- 3 fluorouracilo e citosinoarabinosido); antibióticos intercalantes (por exemplo, adriamicina e bleomicina); enzimas (por exemplo, asparaginase); inibidores de topoisomerase (por exemplo, etoposido); ou modificadores da resposta biológica (por exemplo, interferão).

As composições da invenção também podem compreender um ou mais outros compostos incluindo agentes antibacterianos, antifúngicos, antiparasiticos, antivirais, antipsoriáticos anticoccideos. Exemplos de agentes antibacterianos incluem, por exemplo, sulfonamidas tais como sulfametoxazole, sulfadiazina, sulfameter ou sulfadoxina; inibidores de redutase dihidrofólica tais como trimetoprim, bromodiaprim, ou trimetrexato; penicilinas; cefalosporinas; aminoglicosidos; inibidores bacteriostáticos da sintese de proteínas; os ácidos guinolono carboxllicos e seus análogos isotiazolo fundidos.

Muitos dos fármacos antiproliferativos aqui descritos ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser utilizados no processo terapêutico da invenção. 0 composto pode ser administrado na forma de uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um diluente ou veículo tais como os descritos acima.

As doses dos compostos preferencialmente incluem unidades de dosagem farmacêuticas compreendendo uma quantidade eficaz do composto activo. Uma "quantidade eficaz" significa uma quantidade suficiente para inibir as vias metabólicas de folato e dal obter os efeitos benéficos através da administração de uma ou mciis das unidades de dosagem farmacêuticas.

Outro aspecto da invenção relaciona-se com a utilização de uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a presente invenção para o fabrico de um medicamento para a inibição do crescimento e da proliferação de células de microrganismos e de organismos superiores, em particular de mamíferos hospedeiros 4 Γ tais como hospedeiros humanos e de aves hospedeiras. Em particular, a invenção relaciona-se com a utilização de uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a presente invenção para o fabrico de um medicamento para a inibição da GARFT e/ou da AICARFT.

Uma unidade de dosagem diária exemplificativa para um hospedeiro vertebrado compreende uma quantidade até um grama de composto activo por quilograma de hospedeiro, preferencialmente meio grama, mais preferencialmente 100 miligramas, e mais preferencialmente ainda, cerca de 50 miligramas ou menos por quilograma de peso do hospedeiro. A dose seleccionada pode ser administrada a um animal de sangue quente ou mamífero, por exemplo, um doente humano necessitado de tratamento mediado pela inibição das vias metabólicas de folato, por qualquer método conhecido de administração da dose incluindo topicamente como, por exemplo, uma pomada ou creme; oralmente; rectalmente, por exemplo como um supositório; parentericamente por injecção; ou continuamente por infusão intravaginal, intranasal, intravenosa, intrabrônquica, intra-auricular ou intraocular. Para administração oral, pode utilizar-se os compostos da invenção na formei de éster ou de ácido livre.

Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser caracterizados como produzindo qualquer um ou mais de um efeito antiproliferativo, efeito antibacteriano, um efeito antiparasltico, um efeito antiviral, um efeito antipsoriático, um efeito antiprotozoário, um efeito anticoccideo, um efeito anti-inflamatório, um efeito imunossupressor ou um efeito antifúngico. Os compostos podem ser especialmente úteis na produção de um efeito antitumoral num hospedeiro vertebrado portador de um tumor.

A presente invenção relaciona-se com compostos antiproliferativos de fórmula I 5 Γ L-l ^

em que: A representa enxofre ou selénio; Z representa 1) um espaçador não-cíclico substituído ou não-substituído que separa A do carbono carbonílico do grupo amida por 1 até 10 átomos, sendo os referidos átomos seleccionados independentemente de carbono, oxigénio, enxofre, azoto, e fósforo; 2) um radical policarbocíclico ou heterocíclico mono ou fundido ou não-fundido substituído ou não substituído; ou 3) uma combinação de pelo menos um dos referidos espaçadores não-cíclicos e pelo menos um dos referidos radicais carbocíclico ou heterocíclico, em que o referido espaçador não-cíclico está ligado a A, o referido espaçador não-cíclico separa A de um dos referidos radicais carbocíclicos ou heterocíclicos por 1 até 10 átomos e além disso em que o referido espaçador não-cíclico está ligado a -C(0)-, em que o referido espaçador não-cíclico separa -C(O)- de um dos referidos radicais carbocíclicos ou heterocíclicos por 1 até 10 átomos;

Rl e R2 representam, independentemente, H ou Ci até Ce alquilo ou outros grupos prontamente lisáveis, preferencialmente hidrolizáveis; e R3 representa H ou um grupo Ci até C6 alquilo linear, ramificado ou cíclico (cíclico obviamente só se aplica a grupos C3 até C6 alquilo) opcionalmente tendo um ou mais grupos halogéneo, hidroxilo e amina; ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 6

Um subgénero preferido dos compostos da invenção tem a fórmula II

em que: A é enxofre ou selénio; (grupo) representa um espaçador não-ciclico que separa A do (anel) por 1 até 5 átomos, sendo os referidos átomos seleccionados independentemente de carbono, oxigénio, enxofre, azoto, e fósforo e tendo opcionalmente um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos Ci até Ce alquilo ou C2 até Cq alcenilo, grupos Ci até Ce alcoxi ou Ci até Ce alcoxi(Ci até C6)alquilo, grupos C2 até Ce alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos amina, grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterocíclicos monociclicos, e anéis poli-carbociclicos ou poli-heterocíclicos fundidos ou não fundidos; (anel) representa um ou mais de um anel carbo- ou heterociclico, monocíclico substituído ou não-substituído ou um anel policarbociclico ou heterociclico fundido ou não-fundido opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados dos listados para (grupo);

Rl e R2 representam, independentemente, hidrogénio, Ci até C6 alquilo ou outros grupos prontamente lisáveis, preferencialmente hidrolizáveis; e 7 R3 representa hidrogénio ou um grupo Ci até C6 alquilo linear, ramificado ou cíclico (cíclico obviamente só se aplica a grupos C3 até Ce alquilo) opcionalmente tendo uma substituição por halogéneo, hidroxilo ou amina; ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Numa forma de realização preferida do composto de fórmula I, a unidade 2 é representada por Q-X-Ar em que: Q representa um radical C1-C5 alcileno, ou C2-C5 alcenileno ou alcinileno opcionalmente tendo um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos Ci até C6 alquilo ou C2 até C6 alcenilo, grupos Cl até Ce alcoxi ou Cl até Ce alcoxi(Ci até C6)alquilo, grupos C2 até C6 alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos amina, grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterocíclicos monocíclicos, e anéis poli-carbocíclicos ou poli-heterocíclicos fundidos ou não fundidos; X representa um metileno, um anel carbo- ou heterocíclico monocíclico, um radical enxofre, oxigénio, ou amina, opcionalmente tendo um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos Ci até Cg alquilo ou C2 até C6 alcenilo, grupos Ci até C6 alcoxi ou Ci até Ce alcoxi(Ci até C6)alquilo, grupos C2 até C6 alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos amina, grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterocíclicos monocíclicos, e anéis poli-carbocíclicos ou poli-heterocíclicos fundidos ou não fundidos; e

Ar representa um um anel aromático carbo- ou heterocíclico monocíclico ou um anel carbo- ou heterocíclico bicíclico, de que toda ou uma parte do qual pode ser aromática, e em que o Ar pode estar fundido ao anel carbo- ou heterocíclico monocíclico de X, e em que o Ar opcionalmente tem um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos C\ até C6 alquilo ou 8

pV C2 até C6 alcenilo, grupos Cl até Cç, alcoxi ou Ci até Ce alcoxi(Ci até C6)alquilo, grupos C2 até Cs alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos aminaf grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterociclicos monoclclicos, e anéis poli-carbociclicos ou poli-heterocíclicos fundidos ou não fundidos; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Numa forma de realização preferida do composto de fórmula II, a unidade (grupo) representa um grupo Cl até C4 alcileno e a unidade (anel) representa um sistema anelar biciclico carbociclico ou heterociclico fundido ou não-fundido, substituído ou não-substituído, ou um sistema anelar monocíclico carbociclico ou heterociclico, substituído ou não-substituido, ou pelo menos dois sistemas anelares monoclclicos ligados por uma ligação simples, sendo os referidos sistemas anelares monoclclicos independentemente substituídos ou não-substituidos.

Outra forma de realização preferida da invenção tem a fórmula III

III. ou selénio, X é metileno, um anel carbo- ou heterociclico monocíclico, 0, S, ou -NH-, e Ar é um radical aromático, em que Ar pode formar um sistema anelar biciclico fundido com o referido anel de X, e Ri e R2, que podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio ou radicais alquilo com 1 até 6 átomos de carbono ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Ar na fórmula III pode ser qualquer anel aromático com 5 ou 6 membros substituído ou não-substituído tal como, por 9

V

U exemplo, 3-metil-2,5-tienilo, 4-metil-2,5-tienilo, 3-etil-2,5-tienilo, 1,4-fenileno, 1,3-fenileno, 2,5-tienilo, 2,4-tienilo, 2,5-pirrole, 2,4-pirrole, 2,5-furilo, 2,4-furilo, 2,5-piridilo, 2,4-piridilo, 2-metil-1,4-fenileno, e outros semelhantes.

Embora os compostos sejam ilustrados ao longo desta descrição nas fórmulas na forma 4-oxo e sejam designados como tal ao longo desta descrição, o grupo oxo existe em equilíbrio tautomérico com o correspondente grupo 4-hidroxilo e entender-se-á que em cada caso a forma hidroxilo tautomérica também está indicada.

Os compostos de fórmula I em que cada de Ri e R2 é hidrogénio são compostos activos antitumorais e antiproliferativos. Os compostos de fórmula I em que Ri e R2 são grupos alquilo inferiores ou outros grupos prontamente lisáveis são intermediários novos para a formação de formas de ácido glutâmico livre dos compostos e também podem ser metabolizados in vivo a poliglutamatos e por isso actuam como pró-fármacos. A invenção também se relaciona com compostos úteis como inibidores de AICARFT de fórmula x

em que: A representa enxofre ou selénio;

Ar representa um radical fenileno ou tienileno não-substituído; 10

r L-i

Rl e R2 representam, individualmente, hidrogénio ou Ci até Ce alquilo ou outros grupos prontamente lisáveis, preferencialmente hidrolizáveis; R3 representa hidrogénio ou um grupo Ci-Cç alquilo linear, ramificado ou cíclico (obviamente, quando o alquilo é cíclico, significa C3-C6) opcionalmente tendo um ou mais grupos halogéneo, hidroxilo e amina; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Preferencialmente, R3 na fórmula X é hidrogénio. A na fórmula X é preferencialmente -S-. Preferencialmente, Ri e R2 representam independentemente hidrogénio, metilo e etilo na fórmula X.

Os compostos de fórmula X em que cada de Ri e R2 é hidrogénio são compostos activos antitumorais e antiproliferativos. Os compostos de fórmula X em que Ri e R2 são grupos alquilo inferiores ou outros grupos prontamente lisáveis são intermediários novos para a formação de formas de ácido glutâmico livre dos compostos e também podem ser metabolizados in vivo a poliglutamatos e por isso actuam como pró-fármacos.

Tal como discutido acima, a invenção também inclui sais farmaceuticamente aceitáveis, incluindo, por exemplo, sais de metais alcalinos, metais alcalino-terrosos, outros metais não-tóxicos, amónio e amónio substituído das formas de realização de ácido glutâmico da invenção tais como, mas não limitadas a, sais de sódio, potássio, lítio, cálcio, magnésio, alumínio, zinco, amónio, trimetil amónio, trietil amónio, tetrabutil amónio, piridínio e piridínio substituído.

Os compostos novos de fórmula V 11 ο ο η2ν

V. em que: A representa enxofre ou selénio; Z representa 1) um espaçador não-ciclico substituído ou não-substituído que separa A do carbono carbonílico do grupo amida por 1 até 10 átomos, sendo os referidos átomos seleccionados independentemente de carbono, oxigénio, enxofre, azoto, e fósforo; 2) um radical policarbocíclico ou heterocíclico mono ou fundido ou não-fundido substituído ou não substituído; ou 3) uma combinação de pelo menos um dos referidos espaçadores não-cíclicos e pelo menos um dos referidos radicais carbocíclico ou heterocíclico, em que o referido espaçador não-cíclico separa A de um dos referidos radicais carbocíclicos ou heterocíclicos por 1 até 10 átomos; R3 representa H ou um grupo (Ci até Cg) alquilo linear, ramificado ou cíclico (obviamente, quando o alquilo é cíclico, significa C3-C6) opcionalmente tendo um ou mais grupos hidroxilo ou amina; R4 representa hidroxilo, um grupo (Ci até C6) alquiloxi opcionalmente tendo um ou mais grupos hidroxilo ou amina, ou um amino ácido protegido ou não-protegido ligado ao grupo acilo da fórmula V pela porção amino do amino ácido; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

podem ser preparados por reacção de um composto de fórmula VI 12 η2ν ο

Hal nhr3

VI.

em que Hal é bromo, cloro, flúor, ou iodo, preferencialmente bromo, e R3 é como definido acima com um composto de fórmula IV o

IV. em que A, Z, e R4 são como definidos acima, na presença de outra base, preferencialmente uma base auxiliar não-nucleófila, num solvente em que pelo menos um dos reagentes á pelo menos parcialmente solúvel em condições suficientes para se obter o composto de fórmula V.

Numa forma de realização preferida do composto de fórmula V, z representa -(CH2)n-X-Ar- em que n é um número inteiro desde 0 até 5, A representa enxofre, X é metileno, anel carbo- ou heterociclico monociclico, 0, S, ou -NH-, e Ar é um radical aromático, em que Ar pode formar um sistema anelar biciclico fundido com o referido anel de X. A reacção é preferencialmente realizada num solvente adequado em que pelo menos um ou ambos os reagentes são solúveis à temperatura da reacção. O solvente e o meio reaccional são preferencialmente purgados de oxigénio antes da introdução dos reagentes fazendo borbulhar um gás inerte, tal como árgon ou azoto, através do solvente. Preferencialmente continua-se a fazer borbulhar o gás inerte até a reacção estar completa e ter sido terminada, tal como vertendo-a em água. Solventes adequados preferidos são solventes dipolares apróticos tais como, e.g., 13

·'- u K sulfóxido de dimetilo, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetil-acetamida, ou N-metil-2-pirrolidinona. 0 meio básico é preferencialmente proporcionado através de uma base auxiliar não-nucleófila que é definida como uma base capaz de neutralizar halogeneto de hidrogénio, preferencialmente brometo de hidrogénio, gasoso produzido pela reacção de substituição. A base é preferencialmente um carbonato de metal alcalino ou alcalino-terroso ou uma trialquilamina tal como, e.g., trimetilamina, trietilamina ou diisopropiletilamina.

Um método mais especifico para a realização da reacção de compostos de fórmulas IV e VI é suspender o composto de fórmula VI, preferencialmente 5-bromo-2,6-diamino-4(3H)-oxo-pirimidina, no solvente; o composto de fórmula IV e a base auxiliar são então adicionados sequencialmente. 0 vaso reaccional é então imerso num banho de óleo que foi aquecido até à temperatura apropriada (20-200°C; preferencialmente 70-120°C). A mistura reaccional é agitada a esta temperatura durante o periodo de tempo necessário (geralmente 30-330 minutos), depois arrefecida até à temperatura ambiente e vertida em água. O produto é então isolado por filtração ou extracção com um solvente orgânico e purificado por recristalização ou por cromatografia. O composto de fórmula V pode ser hidrolizado, em meio básico, à sua forma de ácido carboxílico livre, sofrer acoplamento peptídico, por meios bem conhecidos pelos especialistas na arte, com um cloridrato de diéster do ácido glutâmico e, finalmente, ser hidrolizado à forma de ácido glutâmico livre ilustrada na fórmula I (Ri e R2 = H). Nos exemplos que se seguem serão apresentadas sínteses pormenorizadas para vários compostos de fórmula I.

Exemplos específicos de compostos novos de fórmula I incluem: 14

ácido N-[4-(3-[2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio] -propil)benzoil-(S)-glutâmico (Exemplo 2); ácido N-[4-(N-[2-[2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]-tio)etil]amino)benzoil]-S-glutâmico (Exemplo 5); ácido N—[(4—[2—([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)-etil]tio)benzoil]-S-glutâmico (Exemplo 4); ácido N-[2-(5-[3-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]-tio)propil]tienoil)]-(S)-glutâmico (Exemplo 3); ácido N-[5-(3-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]-propil)-3-metil-tieno-2-il]-L-glutâmico (Exemplo 6); ácido N-[5-(3-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]-propil)-4-metil-tieno-2-il]-L-glutâmico (Exemplo 7); ácido N-(6[([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)-metil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)-S-glutâmico (Exemplo 8); ácido (5-[2-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)-etil]tieno-2-il)-L-glutâmico (Exemplo 9); e ácido N-(4[4-[2-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]ti.o)etil]benzoil)-L-glutâmico (Exemplo 10).

Entender-se-á que a aplicação dos ensinamentos da presente invenção a um problema ou meio especifico estará dentro das capacidades de uma pessoa com conhecimentos correntes da matéria à luz dos ensinamentos aqui contidos. Nos exemplos seguintes surgem exemplos de produtos da presente invenção e de processos representativos para a sua preparação e recuperação. EXEMPLO ΐ Síntese de 5-bromo-2.6-diamino-413H1-oxo-pirimidina

O

15

Este composto foi preparado de acordo com um procedimento descrito por C. 0. Okafor, J. Heterocyclic Chem., 17, 1587 (1980).

Oitenta mmol (10,09 g) de 2,6-diamino-4(3H)-pirimidinona comercialmente disponível foram colocados num balão de um litro suspensos numa mistura de 60 mL de metanol e 60 ml de água. Esta suspensão foi agitada vigorosamente e adicionou-se 12 gramas de bicarbonato de sódio numa só porção. Adicionou-se gota a gota oito mL (155 mmol) de bromo líquido ao balão reaccional ao longo de um período de 40 minutos. Adicionou-se então mais 30 mL de metanol aquoso 50% à mistura reaccional para facilitar a agitação. Após agitação durante mais 30 minutos, adicionou-se mais 8 gramas de bicarbonato de sódio numa só porção. A mistura reaccional resultante foi agitada durante 75 minutos e deixada em repouso à temperatura ambiente de um dia para o outro. O produto foi recolhido por filtração e recristalizado de 300 mL de água, dando 6,4 gramas (39% de rendimento) de agulhas amarelas com p.f. de 242°C (decompôs-se). EXEMPLO 2 Síntese de ácido N-f4-(3-r2.6-diamino-4f3Hl-oxoPÍrimidin-5-il)tio1propil)benzoil-(S)-qlutâmico

Este composto de fórmula III em que A é enxofre, n = 2, X = -CH2-/ Ar = fenileno, e Ri e R2 = hidrogénio foi sintetizado através do seguinte processo em 10 passos. a. 4-lodobenzoato de metilo

Cinquenta (50) mmol (12,4 g) de ácido 4-iodobenzóico comercialmente disponível foram dissolvidos em 200 mL de tetrahidrofurano e depois adicionados a uma solução etérea contendo diazometano preparado de fresco. 0 excesso de diazometano foi subsequentemente consumido por adição de ácido 16

1 V Γ acético glacial e a solução resultante foi concentrada sob vácuo. 0 resíduo assim obtido foi partilhado entre acetato de etilo e NaHC03 saturado. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 100 mL de acetato de etilo. Os extractos orgânicos foram combinados, secos sobre Na2S04, e concentrados sob vácuo, dando 13,01 gramas (99,3% de rendimento) de um sólido amarelo que fundiu a 111°C.

As análises seguintes indicam que se obteve 4-iodobenzoato de metilo. HRMN (300 MHZ, GE QE-300, CDCI3) ô = 7,80 (2H, d, J=8,6 Hz); 7,74 (2H, d, J=8,6 Hz); 3,91 (3H, s).

Análise elementar:

Calculada para C8H7O2I: C = 36,37; H = 2,69 e I =48,43

Encontrada: C = 36,91; H = 2,74 e I =48,23 b. 4-f3-HidroxipropinilIbenzoato de metilo

Dissolveu-se 4-iodobenzoato de metilo (9,0 g, 34,4 mmol) em 90 mL de dietilamina. A solução foi agitada vigorosamente e, sequencialmente, adicionou-se 121 miligramas de cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio e 65 miligramas de iodeto cuproso, cada um numa só porção, seguidos por 1,93 gramas de álcool propargílico. A mistura resultante foi agitada durante cerca de 20 horas à temperatura ambiente em atmosfera de árgon. No final deste período, a dietilamina foi removida por concentração sob vácuo. 0 resíduo foi diluído com 200 mL de água e extraído três vezes com 100 mL de benzeno e 75 mL de acetato de etilo. Os extractos orgânicos foram combinados, secos sobre Na2S04, e concentrados sob vácuo, dando um sólido castanho. Este resíduo em bruto foi purificado por cromatografia "flash”. Eluição com uma mistura de 2 para 1 (v:v) de hexano e acetato de etilo deu 17 5,44 gramas (83% de rendimento) de um sólido amarelo pálido fundindo a 81 a 82°C.

As análises seguintes foram obtidas para este material, indicando que era 4-(3-hidroxipropinil)benzoato de metilo. RMN (CDCI3) ô = 7,98 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,49 (2H, d, J=8,3 Hz), 4,52 (2H, s), 3,92 (3H, s)

Anál. (CHH10O3) C,H c. 4-f3-Hidroxipropil^benzoato de metilo

Três gramas (15,8 mmol) de 4-(3-hidroxipropinil)benzoato de metilo foram dissolvidos em 200 mL de etanol num frasco Parr e adicionou-se 0,3 g (10% eq. em peso) de 5% de Pd/C. Esta mistura foi agitada sob 45 psi de hidrogénio durante 3,5 horas. A mistura reaccional em bruto foi filtrada através de uma camada de Celite® e o filtrado foi então concentrado, sob vácuo, dando um óleo verde que foi purificado por cromatografia "flash" com vácuo. Eluição com uma mistura de 2 para 1 (v:v) de hexano e acetato de etilo deu 2,9 gramas (95% de rendimento) de um óleo amarelo. r

As análises seguintes foram obtidas para este material, indicando que era 4-(3-hidroxipropil)benzoato de metilo: RMN (CDCI3) δ = 7,96 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,27 (2H, d, J=8,3 Hz), 3,90 (3H, s), 3,68 (2H, J=6,4 Hz), 2,77 (2H, t, J=7,5 Hz), 1,91 (2H, tt, J=6,4, 7,5 Hz).

Anál. (CnHl4O3.0,3H2O) C,H 18

d. 4-f3-Bromopropilibenzoato de metilo

Dissolveu-se 4-(3-hidroxipropil)benzoato de metilo (3,49 g, 18 mmol) e 4,21 gramas de tetrabrometo de carbono em 25 mililitros de cloreto de metileno. Esta solução foi agitada vigorosamente e arrefecida até cerca de 0°C centígrados. Adicionou-se trifenilfosfina (5,67 gramas dissolvidos em 25 mL de cloreto de metileno) gota a gota a esta solução ao longo de um período de 10 minutos, com a temperatura de reacção mantida a cerca de 0°C. A solução amarela resultante foi agitada a 0°C durante cerca de 30 minutos, depois de um dia para o outro à temperatura ambiente. A mistura reaccional em bruto foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia "flash”. Eluição com uma mistura de 9 para 1 (v:v) de hexano e acetato de etilo deu 4,38 gramas (95% de rendimento) de produto como um óleo amarelo.

As análises seguintes foram obtidas para este material, indicando que era 4-(3-bromopropil)benzoato de metilo: RMN (CDCI3) δ = 7,97 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,27 (2H, d, J=8,2 Hz), 3,91 (3H, s), 3,39 (2H, t, J=6,5 Hz), 2,84 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,18 (2H, tt, J=6,5, 7,4 Hz)

Anál. (CnHi302Br) C,H,Br e. 4— Γ3—(Acetiltio^propillbenzoato de metilo

Dissolveu-se cinco (5) mmol (1,29 gramas) de 4-(3-bromopropil)benzoato de metilo em 40 mL de acetona e agitou-se vigorosamente enquanto se adicionava 10 mmol (1,14 gramas) de tioacetato de potássio numa só porção. A mistura foi aquecida a refluxo durante 35 minutos, depois foi levada de novo à temperatura ambiente e filtrada. 0 bolo de filtração foi lavado duas vezes com acetona. 0 filtrado e os líquidos de lavagem foram combinados e concentrados sob vácuo. 0 resíduo foi 19 Γ partilhado entre éter e água (25 mL de cada). As camadas foram separadas e fase aquosa foi extraída com 25 mL de éter. Os extractos orgânicos foram combinados, secos sobre Na2S04, e concentrados sob vácuo, dando um óleo vermelho. Este óleo foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexano/acetato de etilo (9 para 1 v:v) deu 1,22 g (97% de rendimento) de um óleo de cor âmbar.

As análises seguintes foram obtidas para este material indicando que era 4-[3-(acetiltio)propil)benzoato de metilo: RMN (CDC13) ô = 7,95 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,24 (2H, d, J=8,3 Hz), 3,90 (3H, s), 2,88 (2H, t, J=7,2 Hz), 2,74 (2H, t, J=7,7 Hz), 2,34 (3H, S), 1,91 (2H, tt, J=7,2, 7,7 Hz)

Anál. (C13H16O3S) C,H,S f. 4-f3-Tiopropil^benzoato de metilo

Adicionou-se lentamente um mL (1,1 gramas) de cloreto de acetilo a 10 mL de metanol num balão de 100 mL. Esta solução foi agitada rapidamente e adicionou-se-lhe uma solução de 4-[3-(acetiltio)propil]benzoato de metilo em 5 mL de metanol. A mistura reaccional foi aquecida a refluxo durante duas horas, depois foi arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura reaccional em bruto foi diluída com 10 mL de água. O metanol foi removido por concentração sob vácuo, e o resíduo aquoso foi extraído duas vezes com 25 mL de éter. Os extractos orgânicos foram combinados, secos sobre Na2S04, e concentrados sob vácuo, dando 815 miligramas (97,3% de rendimento) de um óleo de cor âmbar.

As análises seguintes foram obtidas para este material indicando que era o 4-(3-tiopropil)benzoato de metilo desejado: 20

V

L·, RMN (CDCI3) ô = 7,96 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,25 (2H, d, J=8,2 Hz), 3,90 (3H, s), 2,79 (2H, t, 3=1,6 Hz), 2,57-2,50 (2H, m), 2,00 (2H, m), 1,37 (1H, t, J=7,9 Hz)

Anál. (C11H14O2S) C,H,S g. 4-(3-Γ2.6-Diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il\tio1propil)-benzoato de metilo

Fez-se borbulhar árgon através de uma suspensão de 1,01 gramas (4,9 mmol) de 5-bromo-2,6-diamino-4(4H)-pirimidinona em 15 mlj de DMF. A esta suspensão adicionou-se uma solução de 1,11 gramas (5,3 mmol) de 4-(3-tiopropil)benzoato de metilo em 10 mL de DMF e 1,8 mL (1,34 g) de diisopropiletilamina. Esta mistura foi aquecida a 100°C durante 30 minutos, depois foi vertida sobre gelo. 0 precipitado resultante foi recolhido por filtração, lavado duas vezes com 30 mL de H2O, depois duas vezes com 30 mL de éter, dando 711 mg de um pó branco (73% de rendimento) fundindo a 248 até 251°C (decompôs-se).

As análises seguintes indicaram que este material era o 4-(3-[2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]propil)benzoato desejados RMN (DMSO-d6) ô = 9,95 (1H, s), 7,84 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,33 (2H, d, J=8,2 Hz), 6,28 (4H, largo), 3,82 (3H, s), 2,76 (2H, t, 3=1,2 Hz), 2,42 (2H, t, J=7,0 Hz), 1,70 (2H, tt, 3=1,0, 7,2 Hz)

Anál. (C15HI8N4O3S.0,3H20) C,H,N,S h. Ácido 4-f3-Γ2.6-diamino-4(3Hl-oxopirimidin-5-ilItiol-propiU benzóico

Uma suspensão de 669 mg (2 mmol) de 4-(3-[2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]propil)benzoato em 30 mL de NaOH 1 N 21

foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, depois filtrada. 0 filtrado foi acidicado a pH 5,0 com ácido acético. O precipitado que se formou foi recolhido por filtração e lavado 3 vezes com 5 mL de H2O dando 589 mg (91,9% de rendimento) de um produto em pó esbranquiçado.

As análises seguintes indicaram que este material era o ácido 4-(3-[2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]propil)-benzóico desejados RMN (DMS0-d6) ô = 12,72 (1H, largo), 9,97 (1H, largo), 7,82 (2H, d, J=8,l Hz), 7,29 (2H, d, J=8,l Hz), 6,29 (4H, largo), 2,74 (2H, t, J=7,2 Hz), 2,43 (2H, t, J=7,0 Hz), 1,70 (2H, tt, J=7,0, 7,2 Hz)

Anál. (C14H16N4O3S) C,H,N,S i. N-f 4-(3-f(2.6-Diamino-413H i-oxopirimidin-5-il1tio]-propillbenzoíll-S-alutamato de dietilo

Dissolveu-se ácido 4-(3-[2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il) tio]propil)benzóico (577 mg) em 40 mL de l-metil-2-pirrolidinona. Esta mistura foi agitada vigorosamente e adicionou-se 920 miligramas de 4-metil morfolina seguidos por 723 miligramas de N-fenilfosforoamidocloridrato de fenilo numa só porção. A mistura foi agitada sob atmosfera de árgon à temperatura ambiente durante 60 minutos seguida pela adição de 863 miligramas de cloridrato do éster dietilico do ácido S-glutâmico. Esta mistura foi deixada com agitação de um dia para o outro sob árgon durante 20 horas, depois concentrada sob vácuo. 0 resíduo obtido foi partilhado entre 30 mL de água e 30 mL de clorofórmio. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 30 mL de clorofórmio. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com 30 mL de H2O e secos sobre MgS04 depois concentrados sob vácuo para dar uma goma amarela, que foi purificada por cromatografia "flash". Eluição com 5% de metanol 22

V

em acetato de etilo deu 212 mg de um sólido branco fundindo a 78-81°C.

As análises seguintes indicaram que este material era o N-[4^(3-[(2,6-Diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]propil]-benzoil]-S-glutamato de dietilo desejado: RMN (CDCI3) ô = 7,67 (2H, d, J=8,l Hz), 7,28 (1H, d, J=8,0 HZ), 7, 16 (2H, d, J=8, 1 Hz), 6,64 (2H, s largo), 5, 84 (2H, s largo), 4, 78 (1H, ddd, J =5,0, 8,0, 12,8 Hz ), 4,21 (2H , q, J=' M Hz), 4, 09 (2H, q, J=7, 1 Hz), 2,64 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,57-2, ,25 (4H, m) , 2 !,21-2,09 (2H 9 m), ] L,83 (2H, tt, J=7,0, 7,3 Hz), 1, ,29 (3H, t f J= 7,1 Hz), 1,21 ( 3H, t :, J=7,1 Hz)

Anál. (C23H31N5O6S) C,H,N,S j. Ácido N-Γ 4-(3-Γ(2,6-diamino-4{3H)-oxopirimidin-5-il)tio1-propil1benzoil1-S-alutâmico

Uma solução de 192 mg (0,4 mmol) de N—[4—(3—[(2,6-diamino-4(3H) -rOxopirimidin-5-il)tio]propil]benzoil]-S-glutamato de dietilo em 15 mL de NaOH 1 N foi agitada à temperatura ambiente durante cerca de 70 horas, depois neutralizada com HC1 6 N. 0 precipitado que se formou foi recolhido por filtração e lavado 3 vezes com 10 mL de H2O dando 147 mg de um sólido branco que fundiu a 205-206°C.

As análises seguintes indicaram que este material era o ácido [4 — (3 —[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]- propil]benzoil]-S-glutâmico desejado: RMN (DMSO-dç) δ = 12,34 (2H, largo), 9,96 (1H, largo), 8,51 (1H, d, J=7,7 Hz), 7,76 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,27 (2H, d, J=8,2 Hz), 6,29 (4H, s largo), 4,37 (1H, ddd, J=4,8, 7,7, 9,7 Hz), 2,73 (2H, t, J=7,2 Hz), 2,43 (2H, t, J=6,9 Hz), 2,34 (2H, 23 Γ L—Ό t, J=7,9 Hz), 2,11-2,01 (1H, m), 1,99-1,89 (1H, m) , 1,69 (2H, tt, J=6,9, 7,2 Hz)

Anál. (C19H23N5O6S) C,H,N,S EXEMPLO 3

Sintese de Ácido N— Γ2—f5—Γ3—fr2.6-diamino-4f3H)-oxopirimidin-5-il1tio)propil1tienoll1-(S)-qlutâmico

Este composto de fórmula III, em que A é enxofre, n = 2, X = -CH2-/ Ar = 2,5-tienilo, e Ri e R2 = H, foi sintetizado pelo processo seguinte. a) Ácido 5-bromotiofeno-2-carboxilico A uma solução de 5-bromotiofeno-2-carboxaldeido (12 mL, 19,28 g, 0,1 mol) em acetona (400 mL), adicionou-se, em porções, KMn04 (19,57 g, 0,12 mol) ao longo de um intervalo de 10 minutos. A reacção levemente exotérmica foi deixada em agitação, sem controlo externo da temperatura, de um dia para o outro. A mistura reaccional em bruto foi filtrada e o bolo de filtração foi extraído, alternadamente, com NaOH IN (3 x 150 mL) e água morna (2 x 200 mL). Os extractos aquosos combinados foram lavados com éter (100 mL), depois acidificados por adição de HC1 concentrado. 0 precipitado que se formou foi recolhido por filtração para dar o produto como um sólido amarelo (17,31 g, 83% de rendimento) que fundiu a 140°C.

As análises seguintes indicam que o produto obtido era o ácido 5-bromotiofeno-2-carboxílico: RMN (CDCI3) ô = 7,64 (1H, d, J=4,0 Hz), 7,12 (1H, d, J=4,0

Hz)

Anál. (C5H302SBr) C,H,S,Br 24 p ^^ b) 5-Bromotiofeno-2-carboxilato de metilo

Uma solução de ácido 5-bromotiofeno-2-carboxílico (17,6 g, 85 mmol) em éter (200 mL) foi combinada com uma solução etérea contendo excesso de diazometano. O excesso de CH2N2 foi consumido por adição de ácido acético glacial e a solução resultante foi seca sobre K2CO3 e MgS04, depois concentrada, sob vácuo, para dar o produto como um sólido amarelo (18,72 g, 100% de rendimento), p.f. 58-59eC.

As análises seguintes indicam que o produto era o 5-bromotiofeno-2-carboxilato de metilo: KMN (CDCI3) ô = 7,55 (1H, d, J=4,0 Hz), 7,07 (1H, d, J=4,0 Hz), 3,87 (3H, S)

Anál. (C6H502SBr) C,H,S,Br c) 5-(3-Hidroxipropinilitiofeno-2-carboxilato de metilo

Este produto foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(b). A partir de 11,05 gramas (50 mmol) de 5-bromotiofeno-2-carboxilato de metilo obteve-se 7,41 gramas (76% de rendimento) de um sólido amarelo fundindo a 66 até 68°C.

As análises seguintes indicam que o produto era 5-(3-hidroxipropinil)tiofeno-2-carboxilato de metilo: RMN (CDCI3) δ = 7,64 (1H, d, J=3,9 Hz), 7,15 (1H, d, J=3,9 Hz), 4,52 (2H, largo), 3,88 (3H, s), 1,84 (1H, largo)

Anál. (C9H8O3S) C,H,S d) 5-(3-Hidroxipropilitiofeno-2-carboxilato de metilo 25 p' Lc, ^^ A uma solução de 5-(3-hidroxipropinil)tiofeno-2-carboxilato de metilo (7,41 g, 38 mmol) em THF (140 mL) adicionou-se hidrazida de 2,4,6-triisopropilbenzenossulfonilo (96,13 g, 0,32 mol) em quatro porções a intervalos de 9 0 minutos. Após a reacção ter sido aquecida a refluxo durante um total de 6,5 horas, o solvente foi removido por concentração, sob vácuo. 0 resíduo obtido foi partilhado entre NaOH 0,5 N (700 mL) e éter (500 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter (250 mL). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com NaOH 0,5 N (2 x 150 mL), secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo que foi purificada por cromatografia "flash". Eluição com hexano/EtOAc (2s 1) deu o produto como um óleo amarelo (3,67 g, 48% de rendimento).

As análises seguintes indicam que o produto era o 5-(3-hidroxipropil)tiofeno-2-carboxilato de metilo: RMN (CDCI3) ô = 7,64 (1H, d, J=3,8 Hz), 6,82 (1H, d, J=3,8 Hz), 3,86 (3H, s), 3,71 (2H, t, J=6,2 Hz), 2,96 (2H, t, J=7,6 Hz), 1,96 (2H, tt, J=6,2, 7,6 Hz)

Anál. (C9H12O3S) C,H,S e) 5-13-Bromopropilltiofeno-2-carboxilato de metilo

Este produto foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(d). A partir de 3,67 gramas (18,3 mmol) de 5-(3-hidroxipropil)tiofeno-2-carboxilato de metilo obteve-se 4,56 gramas (95% de rendimento) de um óleo amarelo.

As análises seguintes indicam que o produto era 5-(3-bromopropil)tiofeno-2-carboxilato de metilo: 26 V f u

RMN (CDCI3) δ = 7,64 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,85 (1H, d, J=3,7 Hz), 3,86 (3H, s), 3,43 (2H, t, J=6,4 Hz), 3,03 (2H, t, J=7,2 Hz), 2,22 (2H, tt, J=6,4, 7*2 Hz)

Anál. (C9Hn02SBr) C,H,S,Br £) 5-T3-fAcetiltio)propintiofeno-2-carboxilato de metilo

Este produto foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(e). A partir de 5,01 gramas (19 mmol) de 5-(3-bromopropil)tiofeno-2-carboxilato de metilo obteve-se 4,54 gramas (92% de rendimento) de um óleo amarelo.

As análises seguintes indicam que o produto era 5-[3-(acetiltio)propil]tiofeno-2-carboxilato de metilo: RMN (CDCI3) δ = 7,63 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,81 (1H, d, J=3,7 Hz), 3,86 (3H, s), 2,91 (4H, t, J=7,3 Hz), 2,34 (3H, S), 1,97 (2H, penteto, J=7,3 Hz)

Anál. (C11H14O3S2) C,H,S g) 5-(3-Tiopropil}tiofeno-2-carboxilato de metilo

Este produto foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(f). A partir de 4,29 gramas (16,6 mmol) de 5-[3-^(acetiltio)propil]tiofeno-2-carboxilato de metilo obteve-se 3,35 gramas (93% de rendimento) de um óleo cor de laranja.

As análises seguintes indicam que o produto era 5-(3-tiopropil)tiofeno-2-carboxilato de metilo: RMN (CDCI3) δ = 7,63 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,81 (1H, d, J=3,7 Hz), 3,86 (3H, s), 2,98 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,57 (2H, td, J=8,0, 7,1 Hz), 1,99 (2H, tt, J=7,l, 7,4 Hz), 1,36 (1H, t, J=8,0 Hz) 27 Γ

Anál. (C9H12O2S2) C,H,S h) 5-(3-Γ(2.6-Diamino-4(3ΗΪ-oxopirimidin-5-il)tiolbropili-tiofeno-2-carboxilato de metilo

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(g). A partir de 3,03 gramas (14 mmol) de 5-( 3--tiopropil)tiofeno-2-carboxilato de metilo obteve-se 1,88 gramas (44% de rendimento) de um sólido esbranquiçado fundindo a 196°C (dec.)·

As análises seguintes indicam que o produto era 5-(3-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]propil)-tiofeno-2-carboxilato de metilo: RMN (DMS0-d6) δ = 9,96 (1H, s largo), 7,61 (1H, d, J=3,8 Hz), 6,93 (1H, d, J=3,8 Hz), 6,29 (4H, largo), 3,77 (3H, s), 2,97 (2H, t, J=7,5 Hz), 2,45 (2H, t, J=6,8 Hz), 1,74 (2H, tt, J=6,8, 7,5 Hz)

Anál. (C13HI6N4O3S2) C,H,N,S i) Ácido 5 — f3 — Γ(2.6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-illtiol-propil)-tiofeno-2-carboxllico

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito para o exemplo 2(h). Por saponificação de 1,7 gramas (5 mmol) de 5-(3-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]propil)-tiofeno-2-carboxilato de metilo obteve-se 1,53 gramas (94% de rendimento) do ácido 5-(3-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]-propil)-tiofeno-2-carboxilico como um pó amarelo fundindo a 254°C (dec.).

As análises seguintes indicam que o produto era o ácido 5-(3-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]-propil)-tiofeno-2-carboxilico: 28 RMN (DMS0-d6) δ = 12,86 (1H, largo), 10,02 (1H, largo), 7,53 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,89 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,30 (4H, largo, s), 2,95 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,46 (2H, t, J=6,9 Hz), 1,73 (2H, tt, J=6,9, 7,4 Hz)

Anál. (C12H14N4O3S2.0,5H2O) C,H,N,S j) N-Γ2-(5-Γ3-(Γ2.6-Diamino-4(3HΪ-oxopirimidin-5-illtioi-propilItienoíin-S-alutamato de dietilo

Este produto foi preparado utilizando o procedimento descrito para o exemplo 2(i). A partir de 1,31 gramas (4 mmol) de ácido 5-(3-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]-propil)-tiofeno-2-carboxilico obteve-se 879 mg (43% de rendimento) de N-[2-(5-[3-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)-propil]tienoll)]-S-glutamato de dietilo como um sólido esbranquiçado fundindo a 136-138°C.

As análises seguintes indicam que aquele produto era N-[2-(5-[3-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)-propil]-tienoíl)]-S-glutamato de dietilo: RMN (CDCI3) δ = 11,24 (1H, s largo), 7,36 (1H, d, J=3,7 Hz), 7,02 (1H, d, J=7,8 Hz), 6,72 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,29 (2H, largo), 5,55 (2H, largo), 4,72 (1H, ddd, J=4,8, 7,8, 12,6 Hz), 4.22 (2H, q, J=7,1 Hz), 4,10 (2H, q, J=7,l Hz), 2,89 (2H, t, 3=1,2 Hz), 2,55 (2H, t, J=7,0 Hz), 2,45 (2H, t, 3=1,2 Hz), 2,34- 2.22 (1H, m), 2,18-2,08 (1H, m), 1,89 (2H, pentento, J=7,2 Hz), 1,29 (3H, t, 3=1,1 Hz)

Anál. (C21H29N5O6S2) C,H,N,S k) Ácido N-Γ2—f5—Γ3—fr2.6-diamino-4/3Hl-oxopirimidin-5-il1 tio)-propil1tienoll)1-S-olutâmico 29 V Γ

Este produto foi preparado utilizando o procedimento descrito para o exemplo 2(j). A saponificação de 716 mg (1,4 mmol) de N-[2-(5-[3-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)-propiljtienoíl)]-S-glutamato de dietilo deu 558 mg (87% de rendimento) de um pó amarelo fundindo a 171 até 173eC.

As análises seguintes indicam que aquele produto era ácido N-[2-(5-[3-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio Jpropil]-tienoíl)]-S-glutâmicos RMN (DMSO-de) δ = 12,41 (2H, largo), 10,09 (1H, largo), 8,49 (1H, d, J=7,7 Hz), 7,66 (1H, d, J=3,6 Hz), 6,85 (1H, d, J=3,6 Hz), 6,39 (4H, largo), 4,36-4,28 (1H, m), 2,92 (2H, t, J=7,2 Hz), 2,46 (2H, t, J=6,8 Hz), 2,32 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,11-2,00 (1H, m), 1,95-1,83 (1H, m), 1,73 (2H, tt, J=6,8, 7,2 Hz)

Anál. (Cl7H2lN5O6S2.0,3H2O) C,H,N,S EXEMPLO 4 Síntese de Ácido Ν-ΓΜ-Γ2-Ϊr2.6-diamino-4f3Hi-oxopirimidin-5-il11io)etil1tio)benzoll1-(S ^-alutâmico

Este composto de fórmula III, em que A é enxofre, n = 2, X = S, Ar = 1,4-fenileno, e Ri e R2 = H, foi sintetizado através do processo seguinte. a) Ácido 4-f2\(t-butildimetilsililoxiletintiolbenzóico e 4-Γ(2-hidroxietilltiolbenzoato de metilo

Adicionou-se uma solução de ácido 4-mercaptobenzóico (5,09 g, 33 mmol) em DMF (60 mL) a uma suspensão de NaOH 60% (2,64 g, 66 mmol) em DMF (60 mL) sob árgon a 0°C. Esta mistura foi agitada a 0°C durante 90 minutos antes da adição gota a gota de uma solução de l-(terc-butildimetilsililoxi)-2-iodoetano (8,59 g, 30 mmol) em DMF (30 mL). A reacção resultante foi agitada 30 p L·, durante 3 horas à temperatura ambiente, depois vertida sobre uma mistura de HC1 0,5 N (70 mL) e gelo (200 g) e diluída com água (500 mL). O precipitado que se formou foi recolhido por filtração para dar um sólido cor de pêssego (9,28 g, 99% de rendimento) que foi utilizado sem purificação adicional. 0 produto acima ácido 4 —[2[(t-butildimetilsililoxi)etil]-tio]benzóico (8,75 g, 28 mmol) foi dissolvido em CH3OH (300 mL) contendo H2SO4 concentrado (3 mL) e esta solução foi aquecida a refluxo de um dia para o outro. 0 solvente foi removido por conceintração, sob vácuo, e o resíduo foi partilhado entre NaHC03 saturado (300 mL) e éter (300 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (200 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dâr uma goma cor de laranja que foi purificada por cromatografia "flash". Eluição com hexano/EtOAc (2:1) deu o produto como um sólido branco (3,53 g, 59% de rendimento) que fundiu a 58°C.

As análises seguintes indicam que aquele produto era 4-(2-hidroxietil)tiobenzoato de metilo: RMN (CDCI3) δ = 7,94 (2H, d, J=8,5 Hz), 7,36 (2H, d, J=8,5 Hz), 3,90 (3H, s), 3,83 (2H, q, J=6,l Hz), 3,21 (2H, t, J=6,l Hz), 1,96 (1H, t, J=6,l Hz)

Anál. (C10H12O3S) C,H,S b) 4-Γ(2-Bromoetilitiolbenzoato de metilo

Este produto foi preparado de acordo com o procedimento tal como descrito para o exemplo 2(d). A partir de 1,06 gramas (5 mmol) de 4-(2-hidroxietil)tiobenzoato de metilo, obteve-se 1,34 gramas (97% de rendimento) de um sólido branco fundindo a 31

As análises seguintes indicam que aquele produto era 4-[(2-bromoetil)tio]benzoato de metilo: RMN (CDCI3) 5 = 7,97 (2H, d, J=8,5 Hz), 7,35 (2H, d, J=8,5 Hz), 3,91 (3H, s), 3,53-3,46 (2H, m), 3,42-3,36 (2H, m)

Anál. (CioHn02SBr) C,H,S,Br c) 4-tΓ 2-(Acetiltioletintiolbenzoato de metilo

Este produto foi preparado de acordo com o procedimento descrito para o exemplo 2(e). A partir de 1,24 gramas (45 mmol) de 4-[(2-bromoetil)tio]benzoato de metilo obteve-se 1,17 gramas (96% de rendimento) de um sólido amarelo fundindo a 62-63°C.

As análises seguintes indicam que o produto era 4 — ([2 — (acetiltio)etil]tio)benzoato de metilo: RMN (CDCI3) ô = 7,96 (2H, d, J=8,6 Hz), 7,39 (2H, d, J=8,6 Hz), 3,90 (3H, s), 3,19-3,09 (4H, m), 2,36 (3H, s)

Anál. (C12H14O3O3S2) C,H,S d) 4-Γ(2-Mercaptoetilϊtiolbenzoato de metilo

Este produto foi preparado de acordo com o procedimento descrito para o exemplo 2(f). A partir de 2,35 gramas (8,7 mmol) de 4-([2-(acetiltio)etil]tio)benzoato de metilo obteve-se 1,92 gramas (97% de rendimento) de um sólido amarelo fundindo a 51°C.

As análises seguintes indicam que aquele produto era 4-[(2-mercaptoetil)tio]benzoato de metilo: RMN (CDCI3) ô = 7,94 (2H, d, J=8,5 Hz), 7,32 (2H, d, J=8,5 Hz), 3,90 (3H, s), 3,22 (2H, t, J=7,2 Hz), 2,79 (2H, td, J=8,3, 7,2 Hz), 1,73 (1H, t, J=8,3 Hz) 32

V Γ L-Cj

Anál. (C10H12O2S2) C,H,S e) 4-Γ(2-Γ(2.6-Diamino-4(3Hi-oxopirimidin-5-il\tio1etill-tiolbenzoato de metilo

Este produto foi preparado de acordo com o procedimento descrito para o exemplo 2(g). A partir de 2,51 gramas (11 mmol) de 4-([2-(acetiltio)etil]tio)benzoato de metilo obteve-se 1,96 gramas (56% de rendimento) de um sólido branco fundindo a 219-221°C.

As análises seguintes indicam que aquele produto era 4-[ (2— i; (2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]etil)-tio]benzoato de meitilo: RMN (DMS0-d6) δ = 10,08 (1H, largo, s), 7,81 (2H, d, J=8,5 Hz), 7,29 (2H, d, J=8,5 Hz), 6,39 (4H, largo), 3,82 (3H, s), 3,16 (2H, t, J=7,9 Hz), 2,66 (2H, t, J=7,9 Hz)

Anál. (C14H16N4O3S2·0,9Η2θ) C,H,N,S f) Ácido 4-Γ(2-ff2.6-Diamino-4(3Hl-oxopirimidin-5-iHtiol-etilli tio) benzóico

Este produto foi preparado utilizando o procedimento descrito para o exemplo 2(h). A saponificação de 1,76 gramas (5 mmol) de 4-[(2-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]etil)-tio]benzoato de metilo deu 1,57 gramas (93% de rendimento) de um sólido branco fundindo a 273-275°C (decompôs-se).

As análises seguintes indicam que aquele produto era o ácido 4-[(2-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]etil)-tio]benzóico: 33 L-Cj RMN (DMS0-d6) Ô = 10,11 (1H, largo, s), 7,79 (2H, d, J=8,5 Hz), 7,26 (2H, d, J=8,5 Hz), 6,40 (4H, largo), 3,15 (2H, t, J=7,8 Hz), 2,66 (2H, t, J=7,8 Hz)

Anál. (C13H14N4O3S2) C,H,N,S g) Ν-Γ(4 — Γ2— ír2,6-Diamino-4f 3H}-oxoDÍrimidin-5-intio\-etintio^benzoíll-S-alutamato de dietilo

Este produto foi preparado utilizando o procedimento descrito para o exemplo 2(i). A partir de 1,36 gramas (4 mmol) de ácido 4—[(2—[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]etil)-tiojbenzóico obteve-se 905 mg (43% de rendimento) de um sólido esbranquiçado fundindo a 87 até 89°C.

As análises seguintes indicam que aquele produto era o N-[(4-[2-([2,6-Diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)-etil]tio)-benzoil]-S-glutamato de dietilo: RMN (CDCI3) ô = 11,18 (1H, largo, s), 7,65 (2H, d, J=8,4 Hz), 7,38 (1H, d, J=7,9 Hz), 7,22 (2H, d, J=8,4 Hz), 6,54 (2H, largo), 5,67 (2H, largo), 4,77 (1H, ddd, J=4,8, 7,9, 12,7 Hz), 4,21 (2H, q, J=7,1 Hz), 4,08 (2H, q, J=7,1 Hz), 3,10 (2H, t, J=7,5 Hz), 2,70 (2H, t, J=7,5 Hz), 2,62-2,40 (2H, m), 2,37-2,24 (1H, m), 2,21-2,09 (1H, m), 1,29 (3H, t, J=7,l Hz), 1,21 (3H, t, J=7,1 Hz)

Anál. (C22H29N506S2) C,H,N,S h) Ácido N-Γf 4-Γ2-ί Γ2.6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il1-tio\-etil11io ibenzoí11-S-alutâmico

Este produto foi preparado utilizando o procedimento descrito para o exemplo 2(j). A partir de 649 mg (1,2 mmol) do éster dietilico correspondente, obteve-se 529 mg (91% de rendimento) de um sólido branco fundindo a 161-162°C (dec.). 34 r L-Cj

As análises seguintes indicam que aquele produto era o ácido n—[(4—[2—([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)etil]-tio)benzoil]-S-glutâmico: RMN (DMS0-d6) δ = 12,39 (2H, largo), 10,22 (1H, largo), 8,58 (1H, d, J=7,7 Hz), 7,78 (2H, d, J=8,4 Hz), 7,28 (2H, d, J=8,4 Hz), 6,56 (2H, largo), 6,44 (2H, largo), 4,37 (1H, ddd, J=4,9, 7,7, 12,6 HZ), 3,14 (2H, t, J=7,8 Hz), 2,66 (2H, t, J=7,8 Hz), 2,34 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,13-2,03 (1H, m), 2,01-1,87 (1H, m)

Anál. (Ci8H2lN506S2l,8HCl) C,H,N,S EXEMPLO 5 Síntese de Ácido ν-Γ4-(Ν-Γ2-(Γ2.6-diamino-4(3Hl-oxopiriinidin-5-j]itio)etil1amino)benzoil1-(S)-qlutâmico

Este composto de fórmula III, em que A é enxofre, n = 2, X = -NH-, Ar = 1,4-fenileno, e Ri e R2 = H, foi sintetizado através do processo seguinte. a) 4-/N-r2-(terc-Butildimetilsililoxi\etil1amino1benzoato de metilo A uma solução de l-(terc-butildimetilsililoxi)-2-iodoetano (45,10 g, 160 mmol) em DMP (50 mL) adicionou-se 4-aminobenzoato de metilo (4,54 g, 30 mmol) e diisopropiletilamina (6 mL, 34 mmol). Esta solução foi aquecida a 95°C durante aproximadamente 21 horas. O solvente foi removido por concentração, sob vácuo, e o resíduo obtido foi partilhado entre CH2CI2 (150 mL) e água (150 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (150 mL). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com Na2S203 10% (120 mL), secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo cor de laranja que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexanosEtOAc 35 (9:1) deu o produto como um óleo incolor (3,85 mg, 41% de rendimento).

As análises seguintes indicam que o produto era 4-(N-[2-(terc-butildimetilsililoxi)etil]amino)benzoato de metilo: RMN (CDCI3) ô = 7,86 (2H, d, J=8,8 Hz), 6,57 (2H, d, J=8,8 Hz), 4,48 (1H, largo), 3,85 (3H, s), 3,82 (2H, t, J=5,2 Hz), 3,27 (2H, q, J=5,2 Hz), 0,90 (9H, s), 0,06 (6H, s)

Anál. (G16H27NO3SÍ) C,H,N b) 4-ΓΝ-(2-Hidroxietil)aminolbenzoato de metilo

Adicionou-se uma solução 1,0 M de fluoreto de tetrabutilamónio em THF (30 mL, 30 mmol) a uma solução de 4-(N-[2-(terc-butildimetilsililoxi)etil]amino)benzoato de metilo (3,67 g, 12 mmol) em THF (50 mL). Esta mistura foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente, depois diluída com água (100 mL) e extraída com éter (2 x 75 mL) e EtOAc (75 mL). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio (90 mL), secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar uma goma amarela que foi purificada por cromatografia "flash". Eluição com hexanosEtOAc (1:1) deu 2,10 g (91%) de produto como um sólido branco fundindo a 116° até 117°.

As análises seguintes indicam que o produto era 4-[N-(2-hidroxietil)amino]benzoato de metilo: RMN (CDCI3) ô = 7,85 (2H, d, J=8,8 Hz), 6,58 (2H, d, J=8,8 Hz), 4,52 (1H, largo), 3,89-3,83 (5H, m), 3,34 (2H, q, J=5,2 HZ), 1,98 (1H, t, J=5,1 Hz)

Anál. (C10H13NO3) C,H,N 36 1 v

I li c) 4-/N-r2-/Acetiltio)etillamino^benzoato de metilo

Arrefeceu-se uma solução de trifenilfosfina (7,34 g, 28 mmol) em THF (60 mL) a 0°C. Adicionou-se a esta solução azidodicarboxilato de dietilo (4,4 mL, 28 mmol) que foi agitada a 0°C durante 30 minutos. A esta mistura adicionou-se uma solução de 4-[N-(2-hidroxietil)amino]benzoato de metilo (2,73 g, 14 mmol) e ácido tiolacético (2,0 mL, 28 mmol) em THF (30 mL). A mistura resultante foi agitada a 0°C durante 45 minutos, depois durante mais 2 horas à temperatura ambiente. 0 solvente foi então removido por concentração, sob vácuo, e o residuo obtido foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexano: EtOAc (4:1) deu 1,87 g (53%) de produto como um sólido branco fundindo a 90° até 91°.

As análises seguintes indicam que o produto era 4-(N-[2-(acetiltio)etil]amino)benzoato de metilo: RMN (CDC13) ô = 7,86 (2H, d, J=8,8 Hz), 6,58 (2H, d, J=8,8 Hz), 4,47 (1H, t, (1=6,5 Hz), 3,84 (3H, s), 3,39 (2H, q, J=6,5 Hz), 3,10 (2H, q, J=6,5 Hz), 2,37 (3H, s)

Anál. (C12H15NO3S) C,H,N,S d) 4-[N-(2-Tioetil)aminolbenzoato de metilo A uma solução de 4-(N-[2-(acetiltio)etil]amino)benzoato de metilo (1,95 g, 7,7 mmol) em metanol (40 mL) adicionou-se 15 mL de NaCl 2 N. Esta mistura foi aquecida a refluxo durante 18 horas, depois diluida com NaHC03 saturado (75 mL) e éter (75 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter (2 x 60 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo incolor que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com CH2CI2:hexano (4:1) deu 1,17 g (72%) de produto como um sólido branco fundindo a 46° até 47°. 37 1 1—' !—^ ^*» ¢-\1 ν

As análises seguintes indicam que o produto era 4-[N-(2-tioetil)amino]benzoato de metilo: RMN (CDCI3) ô = 7,87 (2H, d, J=8,8 Hz), 6,59 (2H, d, J=8,8 Hz), 3,85 (3H, s), 3,41 (2H, t, J=6,4 Hz), 2,87 (2H, td, J=8,3, 6,4 Hz), 1,42 (1H, t, J=8,3 Hz)

Anál. (C10H13NO2S) C,H,N,S e) 4-ΓΝ-(2-Γ(2.6-Diamino-4(3H\-oxopirimidin-5-ilΐtiol-etil)amino1benzoato de metilo

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(g). A partir de 1,96 gramas (9,3 mmol) de 4-[N-(2-tioetil)amino]benzoato de metilo obteve-se 916 mg (29%) de um sólido bege fundindo a 253e(dec.).

As análises seguintes indicaram que o produto era 4-[N-(2-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]-etil)amino]benzoato de metilo: RMN (DMS0-d6) δ = 10,11 (1H, s), 7,66 (2H, d, J=8,7 Hz), 6,55 (2H, d, J=8,7 Hz), 6,43 (2H, largo), 6,36 (2H, s largo), 3,72 (3H, S), 3,16 (2H, t, J=6,4 Hz), 2,59 (2H, t, J=6,4 Hz)

Anál. (C14H17N5O3S.0,1H10.0.6H3OH) C,H,N,S f) Ácido 4-ΓΝ-(2-Γ 2,6-diamino-4 t3H)-oxopirimidin-5-il) tio 1 -etil) amino 1 benzóico

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(h). A partir de 838 mg (2,5 mmol) de 4-[N-(2-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]etil)amino]benzoato de metilo obteve-se 786 mg (98%) de um sólido esbranquiçado fundindo a 263° (dec.). 38

As análises seguintes indicam que o produto era o ácido 4-[N-(2-[2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]etil)amino]-benzôico: RMN (DMS0-d6) δ = 11,34 (1H, largo), 7,93 (2H, largo), 7,65 (2H, d, J=8,7 Hz), 7,31 (2H, largo), 6,55 (2H, d, J=8,7

Hz), 3,20 (2H, t, J=6,7 Hz), 2,65 (2H, t, J=6,7 Hz)

Anál. (C13H15N5O3S.1,1HC1) C,H,N,S g) N- Γ 4- /N- Γ 2- (Γ Diamino-4 ( 3H) -oxopirimidin-5-intio)-etillamino)benzoil]-S-alutamato de dietilo

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito para o exemplo 2(i). A partir de 707 mg (2,2 mmol) de ácido 4-[N-(2-[2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)tio]etil)-amino]benzôico obteve-se 215 mg (19%) de um sólido banco fundindo a 173o-174o.

As análises seguintes indicam que o produto era N-[4-(N-[2-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)etil]amino)-benzoil]-S-glutamato de dietilo: RMN (DMSO-dg) Ô = 10,11 (1H, s), 8,23 (1H, d, J=7,3 Hz), 7,63 (2H, d, J=8,6 Hz), 7,08 (1H, largo), 6,54 (2H, d, J=8,6

Hz), 6,42 (2H, s largo), 6,36 (2H, s largo), 4,35 (1H, ddd, J=5,6, 7,3, 12,8 Hz), 4,07 (2H, q, J=7,0 Hz), 4,03 (2H, q, J=7,0 Hz), 3,16 (2H, t, J=6,4 Hz), 2,59 (2H, t, J=6,4 Hz), 2,40 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,09-1,91 (2H, m), 1,17 (3H, t, J=7,0 Hz), 1,15 (3H, t, J=7,0 HZ)

Anál. (C22H30N6O6S.0,6CH3OH) C,H,N,S h) Ácido N-r4-rN-f2-r r2.6-diamino-4f3H)-oxopirimidin-5-il1-tio )-etil1amino)benzoil1-S-alutâmico 39

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito para o exemplo 2(j). A partir de 175 mg (0,35 mmol) de N-[4-(N-[2-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)etil]-amino)benzoil]-S-glutamato de dietilo obteve-se 115 mg (75%) de um sólido branco fundindo a 227 até 228° (dec.)·

As análises seguintes indicaram que o produto era o ácido N-[4-(N-[2-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)etil]-amino)benzoil]-S-glutâmico: RMN (DMSO-d6) δ = 12,25 (2H, largo), 10,09 (1H, largo), 8,09 (1H, d, J=7,7 Hz), 7,61 (2H, d, J=8,6 Hz), 6,51 (2H, d, J=8,6 Hz), 6,42 (2H, s largo), 6,35 (2H, s largo), 4,30 (1H, ddd, J=5,3, 7,7 12,6 Hz), 3,13 (2H, t, J=6,4 Hz), 2,56 (2H, t, J=6,4 Hz), 2,29 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,05-1,95 (1H, m), 1,93-1,83 (1H, m)

Anál. (C18H22N606S) C,H,N,S EXEMPLO 6 Ácido Ν-Γ5-( 3-Γ2.6-diamino-4 (3Hl-oxopirimidin-5-ilitiolpropil)- 3-metil-tieno-2-il1-L-olutâmico (a) Éster dietilico do ácido 2-Γ(5-bromo-3-metil-tiofeno-2-carbonil\amino]alutâmico

A uma solução com agitação de 10,86 g (49,1 mmol) de ácido 5-bromo-3-metil-tiofeno-2-carboxflico (preparado de acordo com 40 p L·, ^^ D. Spinelli, JCS Perkin Trans. II, 1972, 1866), 6,97 g (51,6 mmol) de hidrato de 1-hidroxibenzotriazole, 9,0 mL (51,7 inmol) de diisopropiletilamina e 12,36 g (51,6 mmol) de cloridrato do éster dietílico do ácido L-glutâmico em 70 mL de DMF adicionou-se 9,89 g (51,6 mmol) de cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil-3-etil-carbodiimida. A mistura reaccional foi agitada sob árgon durante 18 horas, vertida sobre H2O e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada seguencialmente com HC1 0,5 N, solução saturada de NaHC03 e solução saturada de NaCl, seca sobre MgSC>4, depois concentrada a pressão reduzida. Este resíduo foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel eluindo com cloreto de métileno:acetato de etilo (20:1). Deste modo, obteve-se 19,70 g (99%) do produto desejado como um óleo incolor. IV (puro) 3329, 2982, 1738, 1651, 1545, 1514, 1417, 1377, 1258, 1206 cm”1. RMN (CDCI3) δ = 1,24 (3H, t, J=7,l Hz), 1,30 (3H, t, J=7,l Hz), 2,04-2,45 (4H, m), 2,48 (3H, s), 4,12 (2H, q, J=7,l Hz), 4,23 (2H, q, j=7,l Hz), 4,71 (1H, ddd, J=12,3, 7,2, 4,8 Hz), 6,56 (1H, d, J=7,3 Hz), 6,87 (1H, s).

Anál. (calc. para Ci5H20BrNOsS); C, H, Br, N, S. (b) Éster dietílico do ácido 2-{r5-f3-hidroxiprop-l-inill-3-metil-tiofeno-2-carbonil1amino}olutâmico

41

A uma solução com agitação de 13,73 g (33,8 mmol) de brometo 6(a) e 2,36 mL (40,5 mmol) de álcool propargílico em 170 mL de dietilamina adicionou-se 0,47 g (0,7 mmol) de cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) e 0,13 g (0,7 mmol) de iodeto cuproso. A mistura reaccional foi agitada sob árgon durante 18 horas. Os voláteis foram evaporados a pressão reduzida e o residuo castanho foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel eluindo com cloreto de metileno:acetato de etilo (9:1). Deste modo, obteve-se 12,36 g (96%) do produto desejado como um óleo amarelo. IV (puro) 3366, 2982, 2250, 1738, 1640, 1545, 1516, 1445, 1377 cm-1. RMN (CDCI3) ô = 1,24 (3H, t, J=7,l Hz), 1,30 (3H, t, J=7,l Hz), 1,80 (1H, t largo), 2,04-2,46 (4H, m), 2,47 (3H, s), 4,12 (2H, q, J=7,0 Hz), 4,24 (2H, q, J=7,l Hz), 4,50 (2H, d, J=5,2 Hz), 4,73 (1H, m), 6,63 (1H, d, J=7,3 Hz), 6,96 (1H, s).

Anál. (calc. para C18H23NO6S); C, Η, N, S. (c) Éster dietílico do ácido 2-{Γ5-(3-hidroxipropill-3-metil-tiofeno-2-carbonil1amino}alutâmico

Um frasco Parr contendo 10,32 g (27,1 mmol) do alcino 6(b), 4,00 g de 5% de Pd/C e 150 mL de etanol foi agitado sob 45 psi de hidrogénio durante 2 horas. A mistura reaccional foi filtrada através de uma camada de Celite e o filtrado foi 42 Γ u concentrado a pressão reduzida. Deste modo, obteve-se 9,80 g (94%) do produto desejado como um óleo incolor. IV (puro) 3354, 2980, 2930, 1732, 1634, 1514, 1447, 1377 cm”1. RMN (CDCI3) Ô = 1,23 (3H, t, J=7,l Hz), 1,30 (3H, t, J=7,l Hz), 1,93 (2H, penteto, J=7,2 Hz), 2,08-2,46 (4H, m), 2,47 (3H, s), 2,88 (2H, t, J=7,6 Hz), 3,70 (2H, t, J=6,3 Hz), 4,11 (2H, q, J=7,1 Hz), 4,23 (2H, q, J=7,l Hz), 4,75 (1H, m) > 6,47 (1H, d, J=7,3 Hz), 6,62 (1H, s).

Anál. (calc. para C18H27NO6S); C, Η, N, S. (d) éster dietllico do ácido 2-{Γ5— f3-acetilsulfanil-propil) -3-metil-tiofeno-2-carbonil1amino}alutâmico

Este material foi preparado de acordo com o procedimento descrito no exemplo 5(c) usando o álcool 6(c). O produto (67%) foi isolado como um óleo amarelo por cromatografia "flash" em silica gel eluindo com cloreto de metileno-acetato de etilo (20:1). IV (puro) 3366, 2980, 2936, 1736, 1692, 1649, 1510, 1447, 1377 cm"1. RMN (CDCI3) ô = 1,23 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,30 (3H, t, J=7,l Hz), 1,95 (2H, penteto, 7,3 Hz), 2,04-2,48 (4H, m), 2,34 (3H, S), 2,47 (3H, s), 2,83 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,91 (2H, t, J=7,2 43 ' b u t

Hz), 4,11 (2H, q, J=7,l Hz), 4,23 (2H, q, J=7,1 Hz), 4,75 (1H, m), 6,47 (1H, d, J=7,4 Hz), 6,61 (1H, s). (e) Éster dietllico do ácido Ν-Γ5-Γ3-Γ f2.6-diamino-4f3Hl-oxopirimidin-5-il)tio1propil)-3-metil-tieno-2-il1-L-alutâmico

Uma solução com agitação de 0,40 g (0,90 mmol) de tioacetato 6(d) em 10 mL de etanol saturado com HC1 gasoso seco foi aquecida a 50°c sob árgon durante 2 horas. Os voláteis foram removidos a pressão reduzida, o residuo foi dissolvido em cloreto de metileno e re-concentrado para remover vestígios de HC1. Este procedimento foi repetido duas vezes. O tiol em bruto resultante e 0,18 g (0,90 mmol) de 5-bromo-2,6-diamino-4(3H)-pirimidinona foram dissolvidos em DMF desgaseifiçada. A esta solução adicionou-se 0,15 mL (0,90 mmol) de diisopropiletilamina. Após aquecimento sob árgon a 100°C durante 2,5 horas, a mistura reaccional arrefecida foi vertida em H2O e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada duas vezes com solução saturada de NaCl, seca sobre MgS04 e concentrada a pressão reduzida. O resíduo foi submetido a cromatografia "flash" em sílica gel eluindo com cloreto de metileno:metanol (9:1). Deste modo, obteve-se 0,17 g (38%) do produto desejado como um sólido branco.

p.f. 164-165°C 44 Γ

IV (KBr) 3329, 2930, 1734, 1636, 1597, 1518, 1441 cm"1. RMN (DMSO-d6) ô 1,16 (3H, t, J=7,1 Hz)., 1,18 (3H, t, J=7,0 HZ), 1,71 (2H, m), 1,90-2,10 (2H, m), 2,32 (3H, s), 2,40 (4H, m), 2,86 (2H, t, J=7,4 Hz), 4,07 (4H, m), 4,32 (1H, m), 6,30 (4H, s largo), 6,67 (1H, s), 8,13 (1H, d, J=7,5 Hz), 9,95 (1H, s)

Anál. (calc. para C22H3lNsO6S2.1,0H2O); C, Η, N, S. (f) Ácido Ν-Γ5-Π-Γ(2.6-diamino-4f3Hi-oxopirimidin-5-ili-tio)propili-3-metil-tieno-2-il1-L-alutâmico

Este produto foi preparado de acordo com o procedimento geral descrito no exemplo 2(j) utilizando o éster dietílico 6(e). 0 produto (82%) foi recolhido como um sólido branco:

p.f. 217-220°C IV (KBr) 3341, 3200, 2922, 1709, 1620, 1516, 1468, 1263 cm-*« RMN (DMS0-d6) δ 1,71 (2H, pentento, J=7,2 Hz), 1,74-2,05 (2H, m)., 2,31 (2H, t, J—Ί, 5 Hz), 2,33 (3H, s), 2,46 (2H, t, 45

J=6,9 Hz), 2,86 (2H, t, J=6,9 Hz), 4,28 (1H, m), 6,33 (4H, s largo), 6,66 (1H, s), 7,96 (1H, d, J=7,7 Hz), 9,96 (1H, s largo)

Anál. (calc. para Ci8H23N506S2.1,3H20); C, Η, N, S. EXEMPLO 7 Ácido N-r5-(3-r2.6-diamino-4(3Hl-oxopirimidin-5-illtiolpropil\- 4-metil-tieno-2-11}-L-alutâmico (a) Éster dietílico do ácido 2-Γ(5-bromo-4-metil-tiofeno-2-carbonil\amino1alutâmico

0 ácido 5-bromo-4-metil-tiofeno-2-carboxilico de partida foi preparado de acordo com M. Nemec, Collection Czechoslav. Chem. Commun., 39, 3527 (1974). 0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral descrito no exemplo 6(a) e isolado (89%) como um óleo amarelo claro por cromatografia "flash" em sílica gel eluindo com cloreto de metileno-acetato de etilo (25:1). IV (puro) 3339, 2984, 1738, 1634, 1562, 1527, 1425, 1209 em"l. RMN (CDCI3) ô = 1,24 (3H, t, J=7,l Hz), 1,30 (3H, t, J=7,l Hz), 2,04-2,52 (4H, m), 2,20 (3H, s), 4,12 (2H, q, J=7,3 Hz), 4,23 (2H, q, J=7,3 Hz), 4,70 (1H, ddd, J=12,3, 7,7, 4,8 Hz), 6,84 (1H, d, J=7,4 Hz), 7,22 (1H, s). 46

Anál. (calc. para Ci5H20BrNOsS); C, H, Br, N, S. (b) éster dietllico do ácido 2-{r5-(3-hidroxiprop-l-inili-4~met;il-tiofeno-2-carbonillamino}alutâmico

Este material foi preparado de acordo com o procedimento geral descrito no exemplo 6(b) utilizando o composto bromado 7(a). 0 produto (94%) foi isolado como um óleo amarelo claro por cromatografia "flash" em silica gel eluindo com um gradiente de 8-11% de acetato de etilo em cloreto de metileno. IV (puro) 3329, 2980, 2222, 1738, 1634, 1557, 1532, 1447 cm-1. RMN (CDCI3) δ 1,23 (3H, t, J=7,l Hz), 1,29 (3H, t, J=7,2 Hz), 2,04 (3H, s), 2,07-2,50 (4H, m), 4,14 (2H, g, J=7,l Hz), 4,24 (2H, q, J=7,l Hz), 4,54 (2H, s), 4,71 (1H, m), 6,88 (1H, d, J=7,4 Hz), 7,27 (1H, s).

Anál. (calc. para C18H23NO6S); C, Η, N, S. (c) éster dietllico do ácido 2-{r5-(3-hidroxipropill-4-metil-tiofeno-2-carbonil1amino}alutâmico 47 Γ

U

C02Et

Este material foi preparado de acordo com o procedimento geral descrito no exemplo 6(c) utilizando o alcino 7(b). O produto (100%) foi isolado como um óleo incolor. IV (puro) 3337, 2980, 2938, 1738, 1632, 1560, 1530, 1449 cm"·'·. RMN (CDCI3) δ 1,23 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,30 (3H, t, J=7,1 Hz), 1,89 (2H, penteto, 3=1,2 Hz), 2,06-2,49 (4H, m), 2,16 (3H, s), 2,85 (2H, t, 3=1,5 Hz), 3,70 (2H, t, J=6,3 Hz), 4,11 (2H, q, 3=1,1 Hz), 4,23 (2H, q, 3=1,2 Hz), 4,74 (1H, m), 6,67 (1H, d, 3=1,6 Hz), 7,26 (1H, S).

Anál. (calc. para C18H27NO6S); C, Η, N, S. (d) Éster dietilico do ácido 2-{Γ5-(3-acetilsulfanil-propil)-4-metil-tiofeno-2-carbonil1amino}alutâmico

Este material foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 5(c) usando o álcool 7(c). O produto (56%) foi isolado como um óleo amarelo por cromatografia "flash" em silica gel eluindo com éter-hexanos (2:1). 48 f u ^^ IV (puro) 3337, 2982, 2938, 1736, 1694, 1634, 1526, 1449, 1206 cm"l. RMN (CDCI3) ô 1,20 (3H, t, J=7,1 Hz), 1,30 (3H, t, J=7,1 Hz), 1,91 (2H, penteto, J=7,4 Hz), 2,08-2,49 (4H, m), 2,15 (3H, S), 2,34 (3H, s), 2,80 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,91 (2H, t, J=7,2 Hz), 4,13 (2H, q, J=7,l Hz), 4,24 (2H, q, J=7,2 Hz), 4,74 (1H, m), 6,67 (1H, d, J=7,6 Hz), 7,26 (1H, s).

Anál. (calc. para C20H29NO6S2); C, Η, N, S. (e) Éster dietllico do ácido Ν-Γ5-(3-Γ(2.6-diamino-4í3H^-oxopirimidin-5-il)tiolpropil^-4-metil-tieno-2-il1-L-alutâmico

co2r R=Et

Este material foi preparado de acordo com o procedimento descrito no exemplo 6(e) usando o tioacetato 7(d). O produto (48%) foi isolado como um sólido branco por cromatografia "flash” eluindo com cloreto de metileno-metanol (9:1).

p.f. 159-160°C IV (KBr) 3324, 2980, 1734, 1657, 1632, 1603, 1466, 1206 cm-*. RMN (DMSO-d6) ô 1,15 (3H, t, J=7,l Hz), 1,17 (3H, t, J=7,l HZ), 1,68 (2H, m), 2,01 (2H, m), 2,11 (3H, s), 2,43 (4H, m), 2,85 (2H, t, J=7,3 Hz), 4,04 (2H, q, J=7,1 Hz), 4,12 (2H, q, 49

J=7,l Hz), 4,34 (1H, m), 6,31 (4H, s largo), 7,55 (1H, s), 8,52 (1H, d, J=7,5 Hz), 9,95 (1H, s)

Anál. (calc. para C24H31N5O6S); C, Η, N, S. (f) Ácido N-Γ5-(3-Γ(2.6-diamino-4(3Hi-oxQDÍrimidin-5-ili-tio1propil)-4-metil-tieno-2-il1-L-alutâmico

co2r

Este produto foi preparado de acordo com o procedimento geral descrito no exemplo 2 (j) utilizando o éster dietilico 7(e). 0 produto (87%) foi recolhido por filtração como um sólido branco.

p.f. 154-158°C IV (KBr) 3322, 3179, 2922, 1705, 1632, 1564, 1445 cm"1. RMN (DMSO-d6) δ 1,68 (2H, m), 1,92-2,01 (2H, m), 2,10 (3H, s), 2,31 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,47 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,82 (2H, t, J=7,4 Hz), 4,29 (1H, m), 6,29 (4H, s largo), 7,53 (1H, s), 8,36 (1H, d, J=7,7 Hz), 9,90 (1H, s largo)

Anál. (calc. para C18H23N5O6S2.0,40H20); C, Η, N, S. EXEMPLO 8 Síntese de ácido N-(6-nr2.6-diamino-4f3Hl-oxopirimidin-5-intiolmetil 1-4.5.6.7-tetrahidrobenzotieno-2-il) -S-qlutâmico 50 f u

Este composto de fórmula III, em que A = S, grupo = CH2, anel = 6,2-(4,5,6,7-tetrahidrobenzotienilo) e Ri, R2 e R3 = H, foi sintetizado através do processo seguinte. (a) Bromometil 3-tienil cetona A uma solução gelada de 3-acetiltiofeno (12,62 g, 100 mmol) em THF (350 mL) adicionou-se tribrometo de feniltrimetilamónio (39,10 g, 104 mmol). Esta mistura foi deixada em reposuo, com agitação ocasional, durante 2 horas a 0o. 0 precipitado foi removido por filtração e lavado com éter (2 x 75 mL). Os filtrados combinados foram vertidos numa mistura de NaHC03 saturado (200 mL) e 10% de Na2S203 (200 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (150 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo castanho que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexanoíCH2Cl2 (2:1) deu o produto como um sólido branco (15,54 g, 76% de rendimento) fundindo a 60-61°.

As análises seguintes indicaram que o produto era bromometil 3-tienil cetona: RMN (CDCI3) ô = 8,18 (1H, dd, J=l,3, 2,9 Hz), 7,58 (1H, dd, J=1,3, 5,1 Hz), 7,37 (1H, dd, J=2,9, 5,1 Hz), 4,34 (2H, s)

Anál. (CeHsOSBr) C, H, S, Br (b) 2-Γ2-0ΧΟ-2-Π-tienilletillmalonato de dietilo

Adicionou-se malonato de dietilo (6,5 mL, 6,86 g, 42,8 mmol) gota a gota a uma suspensão de hidreto de sódio (1,66 g, 41,5 mmol) em THF (15 mL) sob árgon a 0°. Após agitação a 0° durante 15 minutos, adicionou-se a esta mistura uma solução de bromometil 3-tienil cetona 8(a) (5,20 g, 25,4 mmol) em THF (60 mL). A suspensão amarela resultante foi agitada à temperatura 51 ambiente durante 1 hora, depois diluída com EtOAc (100 mL) e vertida em água (150 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 100 mL). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio (100 mL), secos sobre MgS04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo amarelo que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexano:EtOAc (5í1) deu o produto como um óleo amarelo pálido (5,63 g, 78%).

As análises seguintes indicaram que o produto era 2— [ 2 — oxo-2-(3-tienil)etil]malonato de dietilo: RMN (CDCI3) ô = 8,12 (1H, dd, J=l,2, 2,9 Hz), 7,55 (1H, dd, J=1,2, 5,1 Hz), 7,33 (1H, dd, J=2,9, 5,1 Hz), 4,23 (2H, q, J=7,1 Hz), 4,22 (2H, q, J=7,l Hz), 4,04 (1H, t, J=7,2 Hz), 3,54 (2H, d, J=7,2 Hz), 1,29 (6H, t, J=7,l Hz)

Anál. (C13H16O5S) C, H, S (c) Ácido 2-Γ2-οχο-2-(3-tienilletillmalónico

Suspendeu-se 2-[2-oxo-2-(3-tienil)etil]malonato de dietilo 8(b) (5,39 g, 19 mmol) em K0H 10% (50 mL) e deixou-se com agitação à temperatura ambiente durante 18 horas. A solução resultante foi acidificada a pH 1 por adição de HC1 6 N e o precipitado que se formou foi recolhido por filtração para dar o produto (4,22 g, 98%) como um sólido esbranquiçado fundindo a 161°-162° (dec.).

As análises seguintes indicaram que o produto era ácido 2-[2-oxo-2-(3-tienil)etilJmalónico: RMN (DMS0-d6) δ = 12,85 (2H, largo), 8,59 (1H, dd, J=l,2, 2,8 Hz), 7,62 (1H, dd, J=2,8, 5,1 Hz), 7,49 (1H, dd, J=l,2, 5,1 HZ), 3,75 (1H, t, J=7,2 Hz), 3,44 (2H, d, J=7,2 Hz) 52

V

(d) Ácido 4-f3-tienilibutírico

Adicionou-se hidrato de hidrazina (1,3 mL, 1,34 g, 26,8 mmol) gota a gota a uma solução de KOH (3,54 g, 63 mmol) e ácido 2-[2-oxo-2-(3-tienil)etil]malónico 8(e) (4,00 g, 17,5 mmol) em etileno glicol (30 mL). Esta solução foi aquecida a refluxo durante 6 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reaccional em bruto foi vertida numa mistura de HC1 6 N (50 mL) e gelo (200 g). Esta mistura aquosa foi saturada com NaCl, depois extraída com éter (3 x 70 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo cor de laranja (2,61 g) com pureza suficiente para ser utilizado na reacção subsequente sem qualquer purificação adicional. (e) 7-0XO-4.5.6.7-tetrahidrobenzotiofeno A uma solução (8% em peso) de P2O5 em ácido metanossulfónico (80 mL) adicionou-se ácido 4-(3-tienil)butlrico 8(d) em bruto (2,61 g, 15,3 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 90 minutos, depois foi cuidadosamente vertida sobre água (450 mL). Após arrefecimento até à temperatura ambiente, esta mistura aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 200 mL). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com NaHC03 saturado (2 x 150 mL) e solução saturada de cloreto de sódio (150 mL), secos sobre MgS04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo castanho que foi purificado por cromatografia "flash”. Eluição com hexano:EtOAc (4:1) deu o produto como um óleo amarelo (1,65 g, 71%).

As análises seguintes indicaram que o produto era 7-oxo-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno. 53

V Γ RMN (CDCI3) δ = 7,61 (1H, d, J=4,9 Hz), 6,97 (1H, d, J=4,9 Hz), 2,88 (2H, t, J=6,1 Hz), 2,61 (2H, t, J=6,5 Hz), 2,18 (2H, tt, J-6,5 Hz)

Anál. (C8H8OS) C, H, S (f) 7-0XO-4.5.6.7-tetrahidrobenzotiofeno-6-carboxilato de metilo

Uma solução de 7-oxo-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno 8(e) (1,37 g, 9 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionada gota a gota, sob atmosfera de árgon, a uma suspensão de NaH (800 mg, 20 mmol) em DMF (6 mL). A solução púrpura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos, depois foi arrefecida a 0o antes da adição gota a gota de carbonato de dimetilo (5 mL, 5,35 g, 59 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 90 minutos, depois foi vertida sobre água (150 mL) e extraída com éter (3 x 50 mL) e EtOAc (50 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo cor de laranja gue foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexanosEtOAc (4:1) deu o produto como um óleo amarelo (1,28 g, 68%).

As análises seguintes indicaram que o produto era 7-oxo-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno-6-carboxilato de metilo. RMN (CDCI3) δ = 7,66 (1H, d, J=4,8 Hz), 6,97 (1H, d, J=4,8 Hz), 3,77 (3H, s), 3,61 (1H, dd, J=4,8, 9,0 Hz), 3,05 (1H, ddd, J=4,9, 6,5, 17,1 Hz), 2,87 (1H, ddd, J=4,9, 8,2, 17,1 Hz), 2,62-2,50 (1H, m), 2,43-2,33 (1H, m)

Anál. (C10H10O3S) C, H, S (g) 7-Hidroxi-4,5.6,7-tetrahidrobenzotiofeno-6-carboxilato de metilo e 7-hidroxi-6-(hidroximetil)-4,5.6.7-tetrahidro-benzotiofeno 54 A uma solução de 7-oxo-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno-6-carboxilato de metilo 8(f) (2,57 g, 12,2 mmol) em THF (15 mL) e CH3OH (10 mL) a 0o adicionou-se, em porções, NaBH4 (456 mg, 12,2 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada durante 2 horas, gradualmente aquecendo até 15°, depois foi vertida sobre NH4CI saturado (30 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (30 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo amarelo que foi purificado por cromatografia "flash”. Eluição com hexano:EtOAc (3:2) deu dois produtos separados. O produto que elui mais rapidamente era um óleo amarelo (0,91 g, 35%).

As análises seguintes indicaram que este produto era 7-hidroxi-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno-6-carboxilato de metilo. RMN (CDC13) δ = 7,25 (1H, d, J=5,l Hz), 6,78 (1H, d, J=5,l Hz), 5,23-5,16 (1H, m), 3,78 (3H, s), 3,09 (1H, largo), 2,90-2,57 (1H, m), 2,38-2,05 (2H, m)

Anál. (C10H12O3S) C, H, S 0 produto que elui mais lentamente era uma goma branca leitosa (1,28 g, 57%).

As análises seguintes indicaram que este produto era 7-hidroxi-6-(hidroximetil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno. RMN (CDCI3) δ = 7,24 (1H, d, J=5,l Hz), 6,79 (1H, d, J=5,l Hz), 5,03-4,85 (1H, m), 3,96-3,79 (2H, m), 2,86-2,54 (3H, m), 2,07-1,94 (1H, m), 1,91-1,80 (1H, m), 1,77-1,71 (1H, m), 1,63-1,48 (1H, m)

Anál. (C9H12O2S) C, H, S (h) 4.5.6.7-Tetrahidrobenzotiofeno-6-carboxilato de metilo 55 ι \

Li A uma solução de 7-hidroxi-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno-6-carboxilato de metilo 8(g) (459 mg, 2,2 mmol) e Et3SiH (0,7 mL, 510 mg, 4,4 mmol) em CH2CI2 (10 mL), sob árgon a -5o, adicionou-se BF3-Et20 (0,55 mL, 635 mg, 4,5 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada durante 3 horas, gradualmente aquecendo até 15°, depois foi vertida sobre NaHCC>3 saturado (30 mL). Após a adição de K2CO3 (~1 g), as camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (10 mL) e éter (2 x 15 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo amarelo que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexano:EtOAc (95:5) deu o produto como um óleo incolor (300 mg, 71%).

As análises seguintes indicaram que o produto era 4,5,6,7-tetrêihidrobenzotiofeno-6-carboxilato de metilo. RMN (CDCI3) ô = 7,07 (1H, d, J=5,l Hz), 6,75 (1H, d, J=5,l Hz), 3,73 (3H, s), 3,11-2,94 (2H, m), 2,85-2,59 (3H, m), 2,27-2,18 (1H, m), 1,94-1,81 (1H, m)

Anál. (C10H12O2S) C, H, S (i) 6-lHidroximetilϊ-4.5.6,7-tetrahidrobenzotiofeno Método A:

Uma solução de 4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno-6-carboxilato de metilo 8(h) (209 mg, 1,1 mmol) em THF (6 mL) foi adicionada a uma suspensão de LÍAIH4 (50 mg, 1,3 mmol) em THF (3 mL). A mistura reaccional resultante foi aquecida a refluxo durante 3 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reaccional em bruto foi diluída com NH4CI saturado (20 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter (10 mL), depois com EtOAc (2 x 10 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados, sob vácuo, para dar o produto como um óleo incolor (167 mg, 93%). 56

V

u

Método B: A uma solução de 7-hidroxi-6-(hidroximetil)-4,5,6,7-tetrcLhidrobenzotiofeno (988 mg, 5,4 mmol) e Et3SiH (1,8 mL, 1,31 g, 11,3 mmol) em CH2CI2 (25 mL), sob árgon a -5o, adicionou-se BF3-Et20 (1,4 mL, 1,62 g, 11,3 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada durante 3 horas, gradualmente aquecendo até 10°, depois foi vertida sobre NaHC03 saturado (50 mL). Após a adição de K2CO3 (1,5 g), as camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter (2 x 40 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo amarelo que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexano:EtOAc (2:1) deu o produto como um óleo incolor (593 mg, 66%).

As análises seguintes indicaram que o produto era 6-(hidroximetil)-5,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno. RMN (CDCI3) ô = 7,06 (1H, d, J=5,1 Hz), 6,76 (1H, d, J=5,l Hz), 3,66 (2H, d, J=6,4 Hz), 2,94 (1H, dd, J=5,2, 16,2 Hz), 2,79-2,71 (1H, m), 2,68-2,46 (2H, m), 2,11-1,96 (2H, m), 1,54-1,46 (1H, m)

Anál. (C9H12OS) C, H, S (j) 6-Γ/t-Butildimetilsililoxi^metin-4.5.6.7-tetrahidro-benzotiofeno A uma solução de cloreto de t-butildimetilsililo (4,38 g, 29,1 mmol) em CH2CI2 (25 mL) adicionou-se Et3N (41, mL, 2,98 g, 29,4 mmol) seguida por uma solução de 6-(hidroximetil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno 8(i) (4,44 g, 26,4 mmol) em CH2CI2 (50 mL) e 4-(dimetilamino) piridina (100 mg). A mistura reaccional resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas, depois foi vertida sobre água (100 mL). As camadas foram separadas e a fase orgânica foi lavada com HC1 0,5 N (100 mL) e 57 solução saturada de cloreto de sódio (100 mL), depois seca sobre MgS04 e concentrada, sob vácuo, para dar um óleo amarelo que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexanosEtOAc (95:5) deu o produto como um óleo incolor (6,49 g, 86%).

As análises seguintes indicaram que o produto era 6-[(t-butildimetilsililoxi)metil]-4,5,6,7-tetrahidro-benzotiofeno. RMN (CDCI3) ô = 7,05 (1H, d, J=5,l Hz), 6,75 (1H, d, J=5,l Hz), 3,60 (2H, d, J=6,2 Hz), 2,89 (1H, dd, J=5,2, 16,2 Hz), 2,76-2,68 (1H, m), 2,65-2,42 (2H, m), 2,03-1,92 (2H, m), 1,53-1,41 (1H, m), 0,91 (9H, s), 0,06 (6H, s)

Anál. (C15H26OSSÍ) C, H, S (k) N-(6-Γ(t-Butildimetilsililoxi)metil1-4,5.6.7-tetra-hidrobenzotieno-2-ilIqlutamato de dietilo A uma solução de 6-[(t-butildimetilsililoxi)metil]- 4.5.6.7- tetrahidrobenzotiofeno 8(j) (7,69 g, 27,2 mmol) em THF (100 mL), sob árgon a -70°, adicionou-se n-butil litio 2,5 M em hexano (12 mL, 30 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada durante mais 40 minutos a -70°, depois a -10® durante 45 minutos enquanto se borbulhava CO2 seco através da solução. A mistura reaccional em bruto foi subsequentemente vertida sobre NH4CI saturado (300 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter (2 x 150 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar um sólido amarelo (8,24 g). Este intermediário foi utilizado na reacção subsequente sem qualquer purificação adicional. A uma solução do ácido 6-[(t-butildimetilsililoxi)metil]- 4.5.6.7- tetrahidrobenzotiofeno-2-carboxílico em bruto referido anteriormente (8,24 g), 1-hidroxibenzotriazole (4,05 g, 30 mmol) e cloridrato do éster dietílico do ácido glutâmico (7,19 g, 30

mmol) em DMF (65 mL) adicionou-se diisopropiletilamina (5,2 mL, 3,86 g, 30 mmol) e cloridrato de l-(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida (5,75 g, 30 mmol). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas, depois vertida em solução saturada de cloreto de sódio (400 mL), diluída com água (150 mL) e extraída com éter (3 x 250 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo amarelo que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexanorEtOAc (4x1) deu o produto como um óleo amarelo (6,63 g, 48%).

As análises seguintes indicaram que o produto era N-(6-[(t-butildimetilsililoxi)metil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutamato de dietilo. RMN (CDCI3) ô = 7,23 (1H, s), 6,67 (1H, d, J=7,7 Hz), 4,73 (1H, ddd, J=4,8, 7,7, 12,6 Hz), 4,22 (2H, q, J=7,l Hz), 4,11 (2H, q, J=7,1 Hz), 3,59 (2H, d, J=6,2 Hz), 2,89 (1H, dd, J=5,l, 16,7 Hz), 2,75-2,23 (6H, m), 2,15-1,91 (3H, m), 1,56-1,42 (1H, m), 1,29 (3H, t, J=7,1 Hz), 1,23 (3H, t, J=7,l Hz), 0,90 (9H, s), 0,06 (6H, s)

Anál. (C25H41NO6SSÍ) C, Η, N, S (1) N-Γ6-(HidroximetilΪ-4.5.6.7-tetrahidrobenzotieno-2-illglutamato de dietilo

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 5(b). A partir de N-(6-[(t-butildimetilsililoxi)metil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)-glutamato de dietilo 8(k) (6,03 g, 11,8 mmol) obteve-se uma goma amarela (3,62 g, 77%).

As análises seguintes indicaram que o produto era N-[6-(hidroximetil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutamato de dietilo. 59

V

L·.. RMN (CDCI3) δ = 7,23 (1H, s), 6,70 (1H, d, J=7,6 Hz), 4,73 (1H, ddd, J=4,8, 7,6, 12,6 Hz), 4,22 (2H, q, J=7,l Hz), 4,11 (2H, q, J=7,1 Hz), 3,66 (2H, d, J=6,3 Hz), 2,94 (1H, dd, J=5,0, 16,9 Hz), 2,77-2,22 (6H, m), 2,15-1,97 (3H, m) , 1,57-1,44 (1H, m), 1,29 (3H, t, J=7,l Hz), 1,23 (3H, t, J=7,l Hz)

Anál. (Ci9H27NO6S.0,5H2O) C, Η, N, S (m) N-f 6-(Bromometil>-4.5.6.7-tetrahidrobenzotieno-2-illalutamato de dietilo

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(d). A partir de N-[6-(hidroximetil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutamato de dietilo 8(1) (3,45 g, 8,7 mmol) obteve-se uma goma incolor (3,68 g, 92%).

As análises seguintes indicaram que o produto era N-[6-(bromometil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutamato de dietilo. RMN (CDCI3) ò - 7,23 (1H, S), 6,73 (1H, d, J=7,6 Hz), 4,73 (1H, ddd, J=4,8, 7,6, 12,6 Hz), 4,23 (2H, q, J=7,2 Hz), 4,10 (2H, q, J=7,2 Hz), 3,49-3,41 (2H, m), 3,04 (1H, dd, J=5,0, 16,8 Hz), 2,79-2,03 (9H, m), 1,67-1,53 (1H, m), 1,29 (3H, t, J=7,2 HZ), 1,23 (3H, t, J=7,2 Hz)

Anál. (Cl9H26N05SBr) C, Η, N, S, Br (n) N-f6-Γ(Acetiltiolmetin-4.5.6.7-tetrahidrobenzotieno-2-inialutamato de dietilo

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(e). A partir de N-[6-(bromometil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutamato de dietilo 8(m) (3,68 g, 8,0 mmol) obteve-se um óleo cor de laranja (3,46 g, 95%). 60 Γ L·,

As análises seguintes indicaram que o produto era N-(6-[(acetiltio)metil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutamato de dietilo. RMN (CDCI3) δ = 7,21 (1H, s), 6,69 (1H, d, J=7,6 Hz), 4,72 (1H, ddd, J=4,8, 7,6, 12,6 Hz), 4,22 (2H, q, J=7,l Hz), 4,11 (2H, q, J=7,1 Hz), 3,02-2,92 (3H, m), 2,74-2,38 (5H, m), 2,36 (3H, s), 2,35-2,22 (1H, m), 2,15-1,96 (3H, m), 1,57-1,46 (1H, m), 1,29 (3H, t, J=7,l Hz), 1,23 (3H, t, J=7,l Hz)

Anál. (C2lH29NO6S2.0,5H2O) C, Η, N, S (o) N-Γ 6-(TiometiH-4.5.6.7-tetrahidrobenzotieno-2-ill-glutamato de dietilo

Uma solução de N-(6-[(acetiltio)metil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutamato de dietilo 8(n) (3,52 g, 7,7 mmol) em HC1 etanólico 0,5 N (60 mL) foi aquecida a refluxo durante 3 horas. A reacção foi diluída com água (25 mL) e o etanol foi removido por concentração, sob vácuo. O resíduo aquoso foi extraído com éter (2 x 50 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar o produto como um xarope cor de laranja (3,09 g, 97%).

As análises seguintes indicaram que o produto era N-(6-(tiometil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)-glutamato de dietilo. 61

V L~<j , ^ RMN (CDCI3) δ = 7,23 (1Η, S), 6,69 (1Η, d, J=7,6 Hz), 4,73 (1Η, ddd, J=4,8, 7,6, 12,6 Hz), 4,23 (2H, q, J=7,l Hz), 4,12 (2H, q, J=7,1 Hz), 3,04 (1H, dd, J=5,0, 16,6 Hz), 2,77-2,23 (8H, m), 2,15-1,92 (3H, m), 1,59-1,48 (1H, m), 1,38 (1H, t, J=8,3 Hz), 1,30 (3H, t, J=7,l Hz), 1,23 (3H, t, J=7,l Hz)

Anál. (C19H27NO5S2.0,25H2O) C, Η, N, S (p) N-f 6-Γ(r2.6-Diamino-4(3Hl-oxopirimidin-5-intio)-metill-4.5.6.7-tetrahidrobenzotieno-2-iHalutamato de dietilo

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(g). A partir de N-[6-(tiometil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutamato de dietilo 8(0) (3,00 g, 7,3 mmol) e 5-bromo-2,6-diamino-4(3H)-pirimidinona (1,44 g, 7,0 mmol) obteve-se um sólido amarelo (712 mg, 19%) fundindo a 122o-128°.

As análises seguintes indicaram que o produto era N-(6-[([2,6-Diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)metil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutamato de dietilo. RMN (DMS0-d6) ô = 9,92 (1H, S), 8,53 (1H, d, J=7,5 Hz), 7,54 (1H, s), 6,28 (4H, s largo), 4,34 (1H, ddd, J=5,3, 7,5, 9,4 Hz), 4,08 (2H, q, J=7,1 Hz), 4,03 (2H, q, J=7,l Hz), 3,07 (1H, dd, J=4,4, 16,6 Hz), 2,66-2,43 (5H, m), 2,40 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,09-1,89 (3H, m), 1,83-1,73 (1H, m), 1,48-1,37 (1H, m), 1,17 (3H, t, J=7,1 Hz), 1,15 (3H, t, J=7,1 Hz)

Anál. (C23H31N5O6S2) C, H, N, S (q) Ácido N-(6-Γ( Γ 2.6-diamino-4(3H1-oxopirimidin-5-ilΊtiolmetil1-4,5.6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il\qlutâmico 62

Este material foi preparado utilizando o procedimento descrito no exemplo 2(j). A partir de N-(6-[([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)metil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)-glutamato de dietilo 8(p) (594 mg, 1,1 mmol) obteve-se um sólido branco (493 mg, 93%) fundindo a 227°-230° (dec.)·

As análises seguintes indicaram que o produto era o ácido N-(6-[([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)metil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotieno-2-il)glutâmico. RMN (DMS0-d6) ô = 12,38 (2H, largo), 10,08 (1H, largo), 8,42 (1H, d, J=7,8 Hz), 7,53 (1H, s), 6,44 (4H, s largo), 4,30 (1H, ddd, J=4,6, 7,8, 12,6 Hz), 3,07 (1H, dd, J=4,3, 16,6 Hz), 2,66-2,36 (5H, m), 2,31 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,10-1,77 (4H, m), 1,46-1,37 (1H, m)

Anál. (C19H23N5O6S2.0,7H20) C, Η, N, S EXEMPLO 9 Síntese de ácido N-f5-r(r2.6-diamino-4(3Hl-oxopirimidin-5-illtioletintieno-2-il^-L-alutâmico

Este composto de fórmula X, em que Ar é tienileno não-substituído, A é enxofre e Ri, R2 e R3 são todos hidrogénio, foi sintetizado através do processo seguinte. 63

9a) 2-r2-(t-Butildimetilsililoxi)etintiofeno

S A uma solução de cloreto de t-butildimetilsililo (26,38 g, 0,18 mol), trietilamina (25 mL, 0,18 mol) e 4-(dimetilamino)-piridina (300 mg, 2,5 mmol) em CH2CI2 (200 mL) sob atmosfera de árgon a -5°C adicionou-se, gota a gota, 2-(2-tienil)etanol (18 mL, 0,16 mol). A mistura reaccional resultante foi agitada a 0°C durante 30 minutos, depois à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional em bruto foi vertida em água (300 mL), e as camadas foram separadas. A fase orgânica foi lavada com HC1 0,5 N (200 mL), depois com solução saturada de cloreto de sódio (200 mL), seca sobre Na2S04 e concentrada, sob vácuo, para dar um óleo amarelo contaminado com um sólido branco que foi purificado por cromatografia "flash”. Eluição com hexano/acetato de etilo (95:5) deu o produto como um óleo amarelo (38,73 g, 99% de rendimento). RMN (CDCI3) δ = 7,13 (1H, d, J=5,l Hz), 6,92 (1H, dd, J=3,3, 5,1 Hz), 6,83 (1H, d, J=3,3 Hz), 3,82 (2H, t, J=6,7 Hz), 3,03 (2H, t, J=6,7 Hz), 0,89 (9H, S), 0,03 (6H, S),

Anál. (C12H22OSSÍ) C, H, S 9b) Ácido 5-Γ 2 ft-butildimetilsililoxi)etilltiofeno-2-carboxilico e 5-(2-Hidroxietil)tiofeno-2-carboxilato de metilo

64 Γ

Lz

Adicionou-se uma solução 1,6 M de n-butil litio em hexano (140 mL, 0,22 mol) a uma solução de 36,16 g (0,15 mol) de 9a em 350 mL de THF sob árgon a -75°C. A mistura reaccional resultante foi éigitada durante 1 hora a -70°C. Fez-se então borbulhar C02 seco através desta solução durante 40 minutos a -65°C, depois durante 60 minutos a -5°C e finalmente durante mais 75 minutos enquanto aquecia até à temperatura ambiente. A mistura reaccional em bruto foi vertida numa mistura de NH4CI saturado (600 mL) e gelo (600 g) e extraida com 300 mL de éter, depois duas vezes com porções de 300 mL de acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar 47 g de um sólido amarelo que foi utilizado sem purificação adicional. O produto acima (47 g) foi dissolvido em metanol (1 L) contendo H2SO4 concentrado (10 mL), e esta solução foi aquecida a refluxo de um dia para o outro. 0 solvente foi removido por concentração, sob vácuo, e o resíduo foi partilhado entre NaHC03 saturado (300 mL) e éter (300 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraida duas vezes com 300 mL de acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo cor de laranja que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexano/acetato de etilo 2:1 deu o produto como um óleo amarelo (12,31 g, 44% de rendimento). RMN (CDCI3) ô = 7,66 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,88 (1H, d, J=3,7 Hz), 3,89 (2H, t, J=6,2 Hz), 3,86 (3H, s), 3,09 (2H, t, J=6,2 Hz)

Anál. (C8H10O3S) C, H, S 65 t—1 L-Cj 9c) 5-f2-Bromoetil^tiofeno-2-carboxilato de metilo

Adicionou-se gota a gota uma solução de 11,2 g (42 mmol) de trifenilfosfina em 50 mL de cloreto de metileno a uma solução de 6,52 g (35 mmol) de 9b) e 13,93 g (42 mmol) de CBr4 em 100 mL de cloreto de metileno a 0°C. A mistura reaccional resultante foi agitada durante 60 minutos a 0o, depois de um dia para o outro à temperatura ambiente. 0 solvente foi removido por concentração, sob vácuo, e o resíduo obtido foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexano/acetato de etilo (9;1) deu o produto como um óleo amarelo (7,74 g, 89% de rendimento). RMN (CDCI3) ô = 7,66 (1H, d, J=3,8 Hz), 6,89 (1H, d, J=3,8 Hz), 3,87 (3H, s), 3,58 (2H, t, J=7,l Hz), 3,38 (2H, t, J=7,l Hz)

Anál. (C8H902SBr) C, H, S, Br 9d) 5-r2-Acetiltio^etil1tiofeno-2-carboxilato de metilo

Aqueceu-se a refluxo durante 30 minutos uma mistura de 6,23 g (25 mmol) de 9c e 5,71 g (50 mmol) de tiolacetato de potássio em 100 mL de acetona. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reaccional em bruto foi filtrada, e o filtrado foi concentrado, sob vácuo. O resíduo obtido foi partilhado entre éter e água (150 mL de cada). As 66

camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 100 mL de éter e 100 mL de acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar um óleo vermelho que foi purificado por cromatografia "flash". Eluição com hexano/acetato de etilo (9:1) deu o produto como um sólido amarelo (5,61 g, 92% de rendimento) p.f. 67o-68°C. RMN (CDCI3) ò = 7,64 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,85 (1H, d, J=3,7 Hz), 3,86 (3H, s), 3,19-3,06 (4H, m), 2,35 (3H, s)

Anál. (C10H12O3S2) C, H, S 9el 5-(2-TioetiHtiofeno-2-carboxilato de metilo

O

S

Aqueceu-se a refluxo durante 2 horas uma solução de 4,89 g (20 mmol) de 9d em HC1 metanólico 1 N (75 mL). A reacção foi diluída com água (50 mL) e o metanol foi removido por concentração, sob vácuo. 0 resíduo aquoso foi extraído com éter (2 x 75 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, sob vácuo, para dar o produto como um óleo amarelo (3,93 g, 97% de rendimento). RMN (CDCI3) ô = 7,66 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,86 (1H, d, J=3,7 Hz), 3,87 (3H, s), 3,14 (2H, t, J=7,l Hz), 2,83 (2H, td, J=8,2, 7,1 Hz), 1,50 (1H, t, J=8,2 Hz)

Anál. (C8H10O2S2) C, H, S 67

9f) 5-Í2-F(2.6-Diamino-4í3H)-oxopirimidin-5-il)tioletil)-tiofeno-2-carboxilato de metilo

O

OCH3 h2n

Fez-se borbulhar árgon através de uma suspensão de 3,00 g (14,6 mmol) de 5-bromo-2,6-diamino-4(3H)-pirimidinona em 25 mL de DMF. A esta suspensão adicionou-se uma solução de 3,24 g (16,0 mmol) de 9e em 30 mL de DMF e 5 mL (3,71 g, 28,7 mmol) de diisopropiletilamina. A mistura reaccional resultante foi aquecida a 100°C durante 90 minutos, depois vertida em água (350 mL). O precipitado que se formou foi recolhido por filtração, lavado duas vezes com 75 mL de água depois duas vezes com 75 mL de éter para dar o produto como um sólido esbranquiçado (3,22 g, 67% de rendimento) p.f. 228°-229°C. RMN (DMS0-d6) δ = 9,98 (1H, s), 7,62 (1H, d, J=3,6 Hz), 7,02 (1H, d, J=3,6 Hz), 6,33 (4H, s largo), 3,77 (3H, s), 2,98 (2H, t, J=7,l Hz), 2,72 (2H, t, J=7,l Hz)

Anál. (C12H14N4O3S2) C, Η, N, S 9q) Ácido 5-(2-Γ(2.6-diamino-4/3H)-oxopirimidin-5-il)tioT-etilλ-tiofeno-2-carboxllico o

OH h2n 68

Uma suspensão de 2,94 g (9,0 mmol) de 9f em 125 mL de NaOH 1 N foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, depois foi filtrada. O filtrado foi acidificado a ~pH 5 por adição de ~30 mL de HC1 6 N. 0 precipitado que se formou foi recolhido por filtração e lavado duas vezes com 25 mL de água para dar o produto como um pó amarelo (2,65 g, 94% de rendimento, p.f. 273° (dec.)). RMN (DMS0-d6) δ = 12,86 (1H, largo), 9,99 (1H, s largo), 7,53 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,97 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,34 (4H, s largo), 2,97 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,72 (2H, t, J=7,3 Hz)

Anál. (C11H12N4O3S2) C, H, N, S 9h\ N-(5-Γ2-(Γ2,6-diamino-4(3Hl-oxopirimidin-5-intioi -etintieno-2-in-L-alutamato de dietilo O ÇO2C2H5

co2c2h5 NH2 h2n

Uma solução de 1,87 g (6,0 mmol) de 9g, 3,3 irtL (3,04 g, 30 mmol) de 4-metilmorf olina e 2,41 g (9,0 mmol) de N-fenilfosforamidocloridato de fenilo em 75 mL de l-metil-2-pirrolidinona foi agitada durante uma hora antes da adição de 2,88 g (12,0 mmol) de cloridrato do éster dietílico do ácido L-glutâmico. A mistura reaccional resultante foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, depois foi concentrada, sob vácuo. 0 residuo obtido foi partilhado entre clorofórmio e água (100 mL de cada). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 100 mL de clorofórmio. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados, dando uma goma cor de laranja que foi purificada por cromatografia 69 pv U- "flash". Eluição com 4% de metanol em clorofórmio deu o produto como um sólido amarelo pálido (1,41 g, 47% de rendimento, p.f. 95°-96°C) . RMN (DMS0-d6) δ = 9,98 (1H, S), 8,61 (1H, d, J=7,5 Hz), 7,67 (1H, d, J=3,0 Hz), 6,94 (1H, d, J=3,0 Hz), 6,32 (4H, s largo), 4,40-4,33 (1H, m), 4,09 (2H, q, J=7,l Hz), 4,03 (2H, q, J=7,1 Hz), 2,94 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,70 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,40 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,13-2,01 (1H, m), 2,00-1,91 (1H, m), 1,17 (3H, t, J=7,l Hz), 1,15 (3H, t, J=7,1 Hz)

Anál. (C20H27N5O6S2í0,5H2O) C, Η, N, S 9i) Ácido N-(5-Γ 2-(Γ 2.6-diamino-4(3H i-oxopirimidin-5-il1tio)-etil1tieno-2-il1-L-glutâmico

Uma solução de 1,16 g (2,3 mmol) de 9h em 90 mL de NaOH 1 N foi agitada à temperatura ambiente durante 70 horas, depois foi acidificada a ~pH 5 por adição de -20 mL de HC1 6N. O precipitado que se formou foi recolhido por filtração e lavado três vezes com 10 mL de água para dar o produto como um pó esbranquiçado (878 mg, 85% de rendimento, p.f. 228e-230°C (dec.)). RMN (DMSO-d6) δ = 12,41 (2H, largo), 10,02 (1H, s largo), 8,51 (1H, d, J=7,7 Hz), 7,67 (lH, d, J=3,3 Hz), 6,94 (1H, d, J=3,3 Hz), 6,36 (4H, s largo), 4,36-4,28 (1H, m), 2,94 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,70 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,32 (2H, t, J=7,1 Hz), 2,12-2,00 (1H, m), 1,95-1,85 (lH, m) 70

Anál. (C16H19N5O6S2) C, H, N, S EXEMPLO 10 Síntese de ácido Ν-(4-Γ4-Γ2-{\2.6-diamino-4l3H)-oxopirimidin-5-il 11 io) et in benzoil) -L-alutâmico

Este composto de fórmula X, em que A é enxofre, Ar é fenileno não-substituído e Ri, R2 e R3 são todos hidrogénio, foi sintetizado através do processo seguinte. 10a) 4-í2-Bromoetilibenzoato de metilo

Br

Uma solução de 9,16 g (40 mmol) de ácido 4-(2-bromoetil)benzóico em 100 mL de THF foi combinada com uma solução etérea contendo excesso de diazometano. O excesso de diazometano foi consumido por adição de ácido acético glacial e a solução resultante foi concentrada, sob vácuo. O resíduo obtido foi partilhado entre NaHC03 saturado (150 mL) e acetato de etilo (150 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com de acetato de etilo (70 mL). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e concentrados sob vácuo, dando o produto como um óleo amarelo (9,65 g, 99% de rendimento). RMN (CDCI3) ô = 8,01 (2H, d, J=8,3 Hz), 7,30 (2H, d, J=8,3 Hz), 3,92 (3H, s), 3,59 (2H, t, J=7,4 Hz), 3,23 (2H, t, J=7,4

Hz)

Anál. (CioHn02Br) C, H, Br 71 10b) 4-r2-(Acetiltio)etiDbenzoato de metilo

OCH3 S CH3

Preparou-se 4-[2-(acetiltio)etil]benzoato de metilo seguindo o procedimento descrito para 9d. Assim a partir de 1,22 g (5,0 mmol) de 10a obteve-se 1,14 g de 10b (96% de rendimento) como um sólido amarelo (p.f. 68°C). RMN (CDCI3) ô = 7,97 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,29 (2H, d, J=8,2 Hz), 3,91 (3H, s), 3,13 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,92 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,33 (3H, s)

Anál. (C12H14O3S) C, H, S 10c) 4-f2-Tioetilibenzoato de metilo 0

HS'

Preparou-se 4-(2-tioetilJbenzoato de metilo seguindo o procedimento descrito para 9e. Assim a partir de 1,05 g (4,4 mmol) de 10b obteve-se 8,53 mg de 10c como um óleo amarelo (99% de rendimento). RMN (CDCI3) ô = 7,98 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,27 (2H, d, J=8,2 Hz), 3,91 (3H, s), 2,98 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,81 (2H, td, J=7,9, 7,3 Hz), 1,37 (1H, t, J=7,9 Hz) 72

Anál. (C10H12O2S) C, H, S

^A OCH3 0

Preparou-se 4-(2-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)-tio]etil)benzoato de metilo seguindo o procedimento descrito para 9f. Assim, a partir de 2,45 g (12,5 mmol) de 10c obteve-se 1,58 g de lOd como um sólido branco (43% de rendimento, p.f. 286°-288°C (dec.))· RMN (DMSO-d6) ô 9,98 (1H, s largo), 7,85 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,36 (2H, d, J=8,2 Hz), 6,33 (4H, largo), 3,82 (3H, s), 2,81 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,70 (2H, t, J=7,3 Hz)

Anál. (C14HI6N4O3S) C, Η, N, S

^A

OH

O

HN

73

V

L-Cj t

Preparou-se ácido 4-(2-[(2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il)-tio]etil)benzóico seguindo o procedimento descrito para 9g. Assim a partir de 1,44 g (4,5 mmol) de lOd, obteve-se 1,27 g de lOe como um sólido branco (93% de rendimento, p.f. 291e-292°C). RMN (DMSO-d6) ô = 12,78 (1H, s largo), 9,98 (1H, s largo), 7,82 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,32 (2H, d, J=8,2 Hz), 6,31 (4H, largo), 2,80 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,69 (2H, t, J=7,3 Hz)

Anál. (Ci3Hi4N4O3S:0,5H2O) C, Η, N, S lOf) N-f4-Γ2-fΓ2.6-Diamino-4f SH^oxooirimidin-S-illtioi-etinbenzolll-L-qlutamato de dietilo

C02C2H5

Preparou-se N-(4-[2-([2,6-diamino-4(3H)-oxopirimidin-5-il]tio)etil]benzoil)-L-glutamato de dietilo seguindo o procedimento descrito para 9h. Assim, a partir de 919 mg (3,0 mmol) de lOe, obteve-se 660 mg de lOf como um sólido branco (45% de rendimento, p.f. 105°-107°C). RMN (acetona- d 6) ô = 10, 72 (1H, s), r*· 00 (1H, d, J II 00 o Hz) o 00 r-' (2H , d, J: =7,8 Hz) , 7, 31 (2H, d, J =7, 8 Hz), 6,62 (2H, s), 6,11 (2H, s), 4, 65 ( 1H, ddd, , J= =5,3, 8,0, 13 r 3 Hz), 4,15 (2H, q* J=7,1 Hz), 4,07 (2H, q/ J=7 /1 Hz), 2,93- -2, 78 (4H, m), 2,50 (2H , t,. J =7,3 Hz), 2,29 -2,17 ( 1H, m), 2,15- -2, 05 (1H, m), 1,23 (3H , t, J= =7,1 Hz), 1 f 18 (3H, t, J=7 ,1 Hz ) 74 Γ

Anál. (C22H29N5O6S) C, Η, Ν, S 10α) Ácido Ν- Μ- Γ 2- (Γ 2.6-diamino-4(3Η)-oxopirimidin-5-il1tio)etil]benzoil)-L-olutâmico

C02H

Preparou-se ácido N-(4-[2-([2,6-diamino-4(3H)-oxo-pirimidin-5-il]tio)etil]benzoil)-L-glutâmico seguindo o procedimento descrito para 9i. Assim a partir de 246 mg (0,5 mmol) de lOf obteve-se 7 6 mg de lOg (35% de rendimento, p.f. 177°-181eC). RMN (DMSO-d6) δ = 10,01 (1H, s largo), 8,49 (1H, d, J=7,6 Hz), 7,77 (2H, d, J=8,l Hz), 7,30 (2H, d, J=8,l Hz), 6,33 (4H, largo), 4,35 (1H, ddd, J=5,3, 7,6, 13,0 Hz), 2,78 (2H, t, J=6,8 Hz), 2,69 (2H, t, J=8,6 Hz), 2,33 (2H, t, J=7,3 Hz), 2,09-1,89 (2H, m)

Anál. (Cl8H2lN5O6S:l,05H2O) C, Η, N, S EXEMPLO 11

Avaliação Biológica e Bioquímica

Ensaios in Vitro O crescimento celular na presença dos compostos de acordo com a presente invenção foi avaliado utilizando duas linhas 75 Γ

t celulares: a linha de leucémia murina L1210 (ATCC CCL 219) e a CCRF-CEM, uma linha de leucémia linfoblástica humana com origem em células T (ATCC CCL 119). Ambas as linhas foram mantidas em meio RPMI 1640 contendo 5% de soro fetal de bovino sem antibióticos inactivado pelo calor.

Os valores da IC50 foram determinados em microculturas de 160 microlitros cada uma contendo 1500 (L1210) ou 10.000 (CCRF-CEM) células estabelecidas em placas com 96 poços em meio de crescimento suplementado com 50 UI/mL de penicilina e 50 mcg/mL de estreptomicina. O crescimento foi medido ao longo de 3 dias (L1210) ou 5 dias (CCRF-CEM) de exposição contínua a concentrações variadas de cada composto de teste adicionado 4 horas após o plaqueamento de células inicial pelo ensaio de redução de MlTT-tetrazólio de Mosmann T. J. (Immunol. Meth. 65, 55-63 (1983)), modificado de acordo com Alley et al. (Câncer Res., 48, 589-601 (1988)). Os derivados insolúveis em água foram dissolvidos em DMSO e diluídos até uma concentração final de 0,5% de solvente nas culturas de células.

Determinação das Constantes de Inibição para GARFT Método I (utilizado para os exemplos 2-5 e 10):

As constantes de inibição para GARFT foram medidas pelo método de Cleland (Biochim. Biophys. Acta 67, 173-187 (1963)). Os ensaios foram realizados a 22°C e iniciados pela adição da enzima utilizando o ensaio espectrofotométrico de Young et al. (Biochemistry 23, 3979-3986 (1984)) e monitorizando a reacção a 295 nm. Uilizou-se o domínio de GARFT da enzima humana. O substrato variável era 10-formil-5-8-didesazafolato a concentrações de 0,83 μΜ, 1,25 μΜ, 2,5 μΜ e 5 μΜ enquanto que o outro substrato, GAR (glicinamida ribonucleotido), foi mantido constante a 20 μΜ. A mistura de teste continha 20 mM de Hepes pH 7,5, 20 μΜ de GAR, e quantidades variáveis de 10-formil-5,8-didesazafolato e inibidor. Para cada inibidor foram utilizadas 76

cinco concentrações variando desde 0 até aproximadamente 3Ki. Os resultados foram traçados num gráfico como a velocidade da reacção em função do inverso da concentração de 10-formil-5,8-didesazafolato. As constantes de inibição foram medidas a partir do traçado de um outro gráfico dos declives destas linhas obtidas para cada concentração de inibidor em função da concentração de inibidor. Método II (utilizado para os exemplos 6, 7, 8 e 9): 0 método de ensaio de GARFT de Young, et ai. (Biochemistry 23, 3979-3986 (1984)) foi modificado e utilizado tal como descrito a seguir. As misturas reaccionais continham o dominio catalítico de GARFT humana, inibidor, 20 μΜ de glicinamida ribonucleotido (GAR), 10 ou 20 μΜ de 0-f ormil-5,8 - didesazafolato (FDDF), e 50 mM de Tris-HCl a pH 7,5. A reacção foi iniciada com a adição de enzima para uma concentração final de 11 nM e seguida por monitorização do aumento da absorvância a 294 mm a 20eC (ε294 = 18,9 mM”l cm"^).

As constantes de GARFT (Kj.) foram determinadas a partir da dependência da velocidade catalítica do estado estacionário da concentração de inibidor e substrato. Determinou-se que o tipo de inibição observada era competitivo em relação à FDDF pela dependência da Kj. aparente (Kj.,app) da concentração de FDDF e mostrou-se que era descrita por Kj.,ap = Kj. + (Kj./Km) [FDDF]. A constante de Michaelis Km, foi determinada independentemente pela dependência da velocidade catalítica em função da concentração de FDDF. Os resultados para ambas as determinações de Km e Ki foram ajustados por métodos não-lineares à equação de Michaelis ou à equação de Michaelis para inibição competitiva conforme fosse apropriado. Os dados resultantes da inibição por ligação forte foram analisados, e a Ki foi determinada por ajustamento dos resultados à equação de Morrison para ligação forte (Biochem. Biophys. Acta 185, 269-286 (1969)) por métodos não lineares. 77

Inibição de GARFT e Resultados das Culturas de Células Ex. GARFT Kj. μΜ Linha Celular, IC50 L1210 L1210-C192 (μΜ) CRRF-CEM 2 0,11 0,079 5,0 0,065 4 0,11 0,11 10,0 0,13 3 0,035 0,04 10,5 0,049 5 0,088 0,09 4,2 0,08 6 0,008 0,12 >25 0,068 7 0,032 0,089 28 0,099 8 0,030 0,01 9,0 0,008 9 2,00 0,25 22 0,62 10 30 1,5 12 1,2 Determinação das Constantes de Inibição Dara AICARFT 0 método de ensaio de Black et al. (Anal, Biochem. 9C / 397-401 (1978)) foi modificado e utilizado como descrito a seguir.

Os tampões foram desgaseifiçados sob vácuo antes da preparação das soluções de substrato e utilizou-se tampão desgaseifiçado nas misturas reaccionais. As misturas reaccionais continham AICARFT parcialmente purificada de células CEM cultivadas, inibidor, 100 μΜ de AICAR {5-aminoimidazole-4-carboxamido-ribonucleotido), 50 μΜ de uma mistura racémica de Νιο-formil-tetrahidrofolato (FTHF), 25 mM de KC1, 50 mM de 2-mercaptoetanol e 50 mM de Tris-Cl pH 7,4. A reacção foi iniciada com a adição da solução de enzima até uma concentração final de 0,1 mg/mL e a reacção foi acompanhada por monitorização do aumento da absorvância a 298 nm a 37°C (ε298 = 28 mM-l cm-l).

As constantes de inibição de AICARFT (Kj.) foram determinadas a partir da dependência da velocidade catalítica do estado estacionário da concentração de inibidor e substrato. O tipo de inibição observada e a determinação de Ki foram realizadas tal como descrito acima para inibidores de GARFT com os substratos apropriados e o ensaio de AICARFT. O tratamento dos resultados experimentais foi essencialmente o mesmo.

Determinou-se que os valores de Ki para AICARFT para os exemplos 9 e 10 eram 35 e 60 μΜ respectivamente.

Será evidente para os especialistas na matéria que podem ser feitas várias modificações e variações nos processos e nos produtos da presente invenção. Assim, pretende-se que a presente invenção abranja modificações e variações desta invenção que caiam dentro do âmbito das reivindicações anexas e equivalentes.

Especificamente, reconhece-se que não foi apresentado um exemplo específico para fazer a forma de poliglutamato polimérica dos compostos da presente invenção. Contudo, um especialista na matéria pode fazer isto sinteticamente de acordo com os métodos da literatura. Além disso, normalmente, como explicado acima, a poliglutamação, preferencialmente com a adição de uma até cinco unidades de glutamato aos compostos da presente invenção, mais preferencialmente, uma até quatro unidades de glutamato, ocorrerá no interior das células.

Lisboa, 21 de Fevereiro de 2000 agente oficial da propriedade industrial

79

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula I

em gue: A representa enxofre ou selénio; Z representa 1) um espaçador não-cíclico substituído ou não-substituido que separa A do carbono carbonilico do grupo amida por 1 até 10 átomos, sendo os referidos átomos seleccionados independentemente de carbono, oxigénio, enxofre, azoto, e fósforo; 2) um radical policarbociclico ou heterociclico mono ou fundido ou não-fundido substituído ou não substituído; ou 3) uma combinação de pelo menos um dos referidos espaçadores não-cíclicos e pelo menos um dos referidos radicais carbocíclico ou heterociclico, em que o referido espaçador não-cíclico está ligado a A, o referido espaçador não-cíclico separa A de um dos referidos radicais carbocíclicos ou heterocíclicos por 1 até 10 átomos e além disso em que o referido espaçador não-cíclico está ligado a -C(O)-, em que o referido espaçador não-cíclico separa -C(0)- de um dos referidos radicais carbocíclicos ou heterocíclicos por 1 até 10 átomos; Rl e R2 representam, independentemente, H ou Cl até C6 alquilo ou outros grupos prontamente lisáveis; e 1 R3 representa H ou um grupo Οχ até Ce alquilo linear, ramificado ou ciclico, opcionalmente tendo um ou mais grupos halogéneo, hidroxilo e amina; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1 tendo a fórmula II

II. em que: A é enxofre ou selénio; Z é -(grupo)- ou -(anel), em que (grupo) representa um espaçador não-cíclico que separa A do (anel) por 1 até 5 átomos, sendo os referidos átomos seleccionados independentemente de carbono, oxigénio, enxofre, azoto e fósforo e tendo opcionalmente um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos Ci até C6 alquilo ou C2 até C6 alcenilo, grupos Ci até Ce alcoxi ou Ci até Ce alcoxi(Ci até Ce)alquilo, grupos C2 até C6 alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos amina, grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterociclicos monocíclicos, e anéis poli-carbociclicos ou poli-heterociclicos fundidos ou não fundidos; 2 r- U, ^ e em que (anel) representa um ou mais de um anel carbo- ou heterociclico, monociclico substituído ou não-substituído ou um anel policarbociclico ou heterociclico fundido ou não-fundido opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados dos listados para (grupo); Rl e R2 representam, independentemente, H, Ci até Cs alquilo ou outros grupos prontamente lisáveis; e R3 representa hidrogénio ou um grupo Ci até C6 alquilo linear, ramificado ou cíclico, opcionalmente tendo um ou mais grupos halogéneo, hidroxilo e amina; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que a unidade Z é representada por Q-X-Ar em que: Q representa um radical C1-C5 alcileno, ou C2-C5 alcenileno ou alcinileno opcionalmente tendo um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos Ci até C6 alquilo ou C2 até C6 alcenilo, grupos Cl até Ce alcoxi ou Ci até Cq alcoxi(Ci até C6)alquilo, grupos C2 até Ce alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos amina, grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterocíclicos monocíclicos, e anéis poli-carbociclicos ou poli-heterocíclicos fundidos ou não fundidos; X representa um metileno, um anel carbo- ou heterociclico monociclico, um radical enxofre, oxigénio, ou amina, opcionalmente tendo um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos Cl até C6 alquilo ou C2 até C6 alcenilo, grupos Cl até C6 alcoxi ou Cl até C6 alcoxi(Ci até C6)alquilo, grupos C2 até C6 alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos amina, grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterocíclicos 3 monocíclicos, e anéis poli-carbocíclicos ou poli-heterociclicos fundidos ou não fundidos; e Ar representa um um anel aromático carbo- ou heterocíclico monociclico ou um anel carbo- ou heterocíclico bicíclico, de que toda ou uma parte do qual pode ser aromática, e em que o Ar pode estar fundido ao anel carbo- ou heterocíclico monociclico de X, e em que o Ar opcionalmente tem um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos Cl até Cs alquilo ou C2 até Ce alcenilo, grupos Ci até C6 alcoxi ou Ci até C6 alcoxi(Ci até C6)alquilo, grupos C2 até C6 alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos amina, grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterocíclicos monocíclicos, e anéis poli-carbocíclicos ou poli-heterocíclicos fundidos ou não fundidos; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que a unidade (grupo) representa um grupo Ci até C4 alcileno; e a unidade (anel) representa um sistema anelar bicíclico carbocíclico ou heterocíclico fundido ou não-fundido, substituído ou não-substituído, ou um sistema anelar monociclico carbocíclico ou heterocíclico, substituído ou não-substituído, ou pelo menos dois sistemas anelares monocíclicos ligados por uma ligação simples, sendo os referidos sistemas anelares monocíclicos independentemente substituídos ou não-substituídos.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que a fórmula I é representada pela fórmula III 4

III. em que: n representa um número inteiro desde 0 até 5? A representa enxofre ou selénio; X é metileno, um anel carbo- ou heterocíclico monociclico, 0, S, ou -NH-; Ar é um radical aromático, em que Ar pode formar um sistema anelar biciclico fundido com o referido anel de X; e Rl e R2, que podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio ou radicais alquilo com 1 até 6 átomos de carbono; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
6. Composto ou sal de acordo com a reivindicação 5 em que n é 2, A é enxofre, X é metileno, Ar é fenileno e Ri e R2 são hidrogénio.
7. Composto ou sal de acordo com a reivindicação 5 em que n é 2, A é enxofre, X é metileno, Ar é 2,5-tienilo e Ri e R2 são hidrogénio. 5
8. Composto ou sal de acordo com a reivindicação 5 em que n é 2, A é enxofre, X é S, Ar é fenileno e Ri e R2 são hidrogénio.
9. Composto ou sal de acordo com a reivindicação 5 em que n é 2, A é enxofre, X é -NH-, Ar é fenileno e Rj e R2 são hidrogénio.
10. Composto ou sal de acordo com a reivindicação 5 em que n é 2, A é enxofre, X é metileno, Ar é fenileno e Ri e R2 são radicais alquilo com 1 até 6 átomos de carbono.
11. Composto ou sal de acordo com a reivindicação 5 em que n é 2, A é enxofre, X é metileno, Ar é 2,5-tienilo e Ri e R2 são grupos etilo.
12. Composto ou sal de acordo com a reivindicação 5 em que n é 2, A é enxofre, X é enxofre, Ar é fenileno e Ri e R2 são grupos etilo.
13. Composto ou sal de acordo com a reivindicação 5, em que n é 2, A é enxofre, X é -NH-, Ar é fenileno e Ri e R2 são grupos etilo.
14. Composição antiproliferativa compreendendo um composto de acordo com a reivindicação 5 em combinação com um veiculo farmaceuticamente aceitável.
15. Composição de acordo com a reivindicação 14 em que n é 2, A é enxofre, X é metileno, e Ar é fenileno.
16. Composição de acordo com a reivindicação 14 em que n é 2, A é enxofre, X é metileno, e Ar é 2,5-tienilo.
17. Composição de acordo com a reivindicação 14 em que n é 2, A é enxofre, X é S, e Ar é fenileno. 6
18. Composição de acordo com a reivindicação 14 em que n é 2, A é enxofre, X é -NH-, e Ar é fenileno.
19. Composição antiproliferativa compreendendo um composto de acordo com a reivindicação 1 em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.
20. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 no fabrico de uma composição farmacêutica para a inibição do crescimento e proliferação das células d e microrganismos e de organismos superiores.
21. Utilização de acordo com a reivindicação 20, em que é utilizado um composto de acordo com a reivindicação 5.
22. Utilização de acordo com a reivindicação 21 em que n é 2, A é enxofre, X é metileno, e Ar é fenileno.
23. Utilização de acordo com a reivindicação 21 em que n é 2, A é enxofre, X é metileno, e Ar é 2,5-tienilo.
24. Utilização de acordo com a reivindicação 21 em que n é 2, A é enxofre, X é enxofre, e Ar é fenileno.
25. Utilização de acordo com a reivindicação 21 em que n é 2, A é enxofre, X é -NH-, e Ar é fenileno.
26. Processo para a preparação de compostos de pirimidinona 5-substituídos de fórmula V O O

7 V.

em gue: A representa enxofre ou selénio; Z representa 1) um espaçador não-ciclico substituído ou não-rsubstituido que separa A do carbono carbonilico do grupo amida por 1 até 10 átomos, sendo os referidos átomos seleccionados independentemente de carbono, oxigénio, enxofre, azoto, e fósforo; 2) um radical policarbociclico ou heterociclico mono ou fundido ou não-fundido substituído ou não substituído; ou 3) uma combinação de pelo menos um dos referidos espaçadores não-ciclicos e pelo menos um dos referidos radicais carbociclico ou heterociclico, em que o referido espaçador não-cíclico separa A de um dos referidos radicais carbocíclicos ou heterocíclicos por 1 até 10 átomos; R3 representa H ou um grupo Ci até C$ alquilo linear, ramificado ou cíclico, opcionalmente tendo um ou mais grupos hidroxilo ou amina; e R4 representa hidroxilo, um grupo (Cl até C6) alquiloxi opcionalmente tendo um ou mais grupos hidroxilo ou amina, ou um amino ácido protegido ou não-protegido ligado ao grupo acilo da fórmula V pela porção amino do amino ácido; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; processo esse que compreende fazer reagir um composto de fórmula VI O H2N

8 VI.

em que Hal é bromo, cloro, flúor, ou iodo, e R3 é como definido acima, com um composto de fórmula IV 0

IV. em que A, Z, e R4 são como definidos acima, na presença de uma base auxiliar não-nucleófila num solvente em que pelo menos um dos reagentes é pelo menos parcialmente solúvel em condições suficientes para se obter o composto de fórmula V.
27. Processo de acordo com a reivindicação 26 em que a base auxiliar não-nucleófila é seleccionada de carbonatos de metais alcalinos ou alcalino-terrosos e trialquil aminas.
28. Processo de acordo com a reivindicação 27 em que o solvente é um solvente aprótico dipolar.
29. Processo de acordo com a reivindicação 28 em que o solvente é seleccionado de sulfóxido de dimetilo, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, e N-metil-2-pirrolidinona.
30. Processo de acordo com a reivindicação 26 em que A representa enxofre e z representa -(CH2)n-X-Ar- em que n é um número inteiro desde 0 até 5, X representa um metileno, um anel carbo- ou heterociclico monociclico, um radical enxofre, oxigénio, ou amina, opcionalmente tendo um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos Ci até Ce alquilo ou C2 até Ce alcenilo, grupos Ci até Ce alcoxi ou Ci até Ce alcoxi(Ci 9 até Cg)alquilo, grupos C2 até C6 alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos amina, grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterociclicos monociclicos, e anéis poli-rcarbociclicos ou poli-heterocíclicos fundidos ou não fundidos; e Ar representa um um anel aromático carbo- ou heterociclico monociclico ou um anel carbo- ou heterociclico bieiclico, de que toda ou uma parte do qual pode ser aromática, e em que o Ar pode estar fundido ao anel carbo- ou heterociclico monociclico de X, e em que o Ar opcionalmente tem um ou mais substituintes seleccionados independentemente de grupos Cl até C6 alquilo ou C2 até Ce alcenilo, grupos Cl até C6 alcoxi ou Cl até C6 alcoxi(Ci até C6)alquilo, grupos C2 até C6 alcinilo, grupos acilo, halogéneo, grupos amina, grupos hidroxilo, grupos nitro ou grupos mercapto, anéis carbo- ou heterociclicos monociclicos, e anéis poli-carbociclicos ou poli-heterociclicos fundidos ou não fundidos.
31. Processo de acordo com a reivindicação 30 em que a base auxiliar não-nucleófila é seleccionada de carbonatos de metais alcalinos ou alcalino-terrosos e trialquil aminas.
32. Processo de acordo com a reivindicação 31 em que o solvente é um solvente aprótico dipolar.
33. Processo de acordo com a reivindicação 32 em que o solvente é seleccionado de sulfóxido de dimetilo, N,N-dimetilformamida, Ν,Ν-dimetilacetamida, e N-metil-2-pirrolidinona.
34. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para a inibição de GARFT. 10 V

Lcj ^
35. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que a fórmula I é representada pela fórmula X

0R2 X em que: A representa enxofre ou selénio; Ar representa um radical fenileno ou tienileno não-substituido; Rl e R2 representam, individualmente, hidrogénio ou C\ até C6 alquilo ou outros grupos prontamente lisáveis; R3 representa hidrogénio ou um grupo Ci até C6 alquilo linear, ramificado ou ciclico, opcionalmente tendo um ou mais grupos halogéneo, hidroxilo ou amina; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
36. Composto de acordo com a reivindicação 35 em que A é enxofre e Ar representa um radical fenileno não substituído.
37. Composto de acordo com a reivindicação 35 em que A é enxofre e Ar representa um radical tienileno não substituído. 11
38. Composto de acordo com a reivindicação 35 em que A é enxofre, Ar é tienileno não substituído; e Ri, R2 e R3 são hidrogénio.
39. Composto de acordo com a reivindicação 35 em que A é enxofre, Ar é fenileno não substituído; e Ri, R2 e R3 são hidrogénio.
40. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 35 no fabrico de uma composição farmacêutica para a inibição do crescimento e proliferação das células d e microrganismos e de animais superiores.
41. Utilização de acordo com a reivindicação 40 em que A é enxofre e Ar representa um radical fenileno não-substituido.
42. Utilização de acordo com a reivindicação 40 em que A é enxofre e Ar representa um radical tienileno não-substituido.
43. Utilização de acordo com a reivindicação 40 em que A é enxofre, Ar é um radical tienileno não substituído; e Ri, R2 e R3 são hidrogénio.
44. Utilização de acordo com a reivindicação 40 em que A é enxofre, Ar é um radical fenileno não substituído; e Ri, R2 e R3 são hidrogénio.
45. Composição antiproliferativa compreendendo um composto de fórmula X de acordo com a reivindicação 35 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável. 12
46. Composição de acordo com a reivindicação 45 em que A é enxofre e Ar representa um radical fenileno não-substituído.
47. Composição de acordo com a reivindicação 45 em que A é enxofre e Ar representa um radical tienileno não-substituido.
48. Composição de acordo com a reivindicação 45 em que A é enxofre, Ar é um radical tienileno não substituído; e Ri, R2 e R3 são hidrogénio.
49. Utilização de acordo com a reivindicação 45 em que A é enxofre, Ar é um radical fenileno não substituído; e Ri, R2 e R3 são hidrogénio.
50. Composto de fórmula V 0 0

V. em que: A representa enxofre ou selénio; Z representa 1) um espaçador não-cíclico substituído ou não-substituído que separa A do carbono carbonílico do grupo amida por 1 até 10 átomos, sendo os referidos átomos seleccionados independentemente de carbono, oxigénio, enxofre, azoto, e fósforo; 2) um radical policarbocíclico ou heterocíclico mono ou fundido ou não-fundido substituído ou não substituído; ou 3) uma combinação de pelo menos um dos referidos espaçadores não-cíclicos e 13 pelo menos um dos referidos radicais carbociclico ou heterociclico, em que o referido espaçador não-ciclico separa A de um dos referidos radicais carbociclicos ou heterocíclicos por 1 até 10 átomos; R3 representa H ou um grupo C\ até Ce alquilo linear, ramificado ou cíclico, opcionalmente tendo um ou mais grupos hidroxilo ou amina; e R4 representa hidroxilo, um grupo (Ci até C6) alquiloxi opcionalmente tendo um ou mais grupos hidroxilo ou amina, ou um amino ácido protegido ou não-protegido ligado ao grupo acilo da fórmula V pela porção amino do amino ácido; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
51. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 35 no fabrico de uma composição farmacêutica para a inibição de AICARFT.
52. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-13, 35-39 e 50 como um agente terapêutico. Lisboa, 21 de Fevereiro de 2000 agente oficial da propriedade INDUSTRIAL

14