PT2256106E - Compostos de 1h-pirazole 3,4-dissubstituídos e sua utilização como moduladores de cinases dependentes de ciclina (cdk) e de glicogénio sintase-cinase-3 (gsk-3) - Google Patents

Compostos de 1h-pirazole 3,4-dissubstituídos e sua utilização como moduladores de cinases dependentes de ciclina (cdk) e de glicogénio sintase-cinase-3 (gsk-3) Download PDF

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PT2256106E
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group
carbocyclic
pyrazole
formula
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PT101753291T
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English (en)
Inventor
Valerio Berdini
Paul Graham Wyatt
Maria Grazia Carr
Andrew James Woodhead
Michael Alistair O'brien
Theresa Rachel Early
Gary Trewartha
Alison Jo-Ann Woolford
Adrian Liam Gill
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Astex Therapeutics Ltd
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Description

DESCRIÇÃO COMPOSTOS DE 1H-PIRAZOLE 3,4-DISSUBSTITUÍDOS E SUA UTILIZAÇÃO COMO MODULADORES DE CINASES DEPENDENTES DE CICLINA (CDK) E DE GLICOGÉNIO SINTASE-CINASE-3 (GSK-3)
Esta invenção refere-se a compostos de pirazole que inibem ou modulam a actividade de cinases dependentes de ciclina (CDK) e glicogénio sintase-cinase-3 (GSK-3), à utilização dos compostos no tratamento ou profilaxia de estados ou condições patológicas mediadas por cinases dependentes de ciclina e glicogénio sintase-cinase-3, e a novos compostos possuindo actividade inibidora ou moduladora de cinase dependente de ciclina ou glicogénio sintase-cinase-3. Também são proporcionadas composições farmacêuticas contendo os compostos e novos intermediários químicos.
Antecedentes da Invenção
As proteína-cinases constituem uma grande família de enzimas estruturalmente relacionadas que são responsáveis pelo controlo de uma grande variedade de processos de transdução de sinal dentro da célula (Hardie, G. e Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book. I e II, Academic Press, San Diego, CA). As cinases podem ser classificadas em famílias com base nos substratos que estes fosforilam (e. g., proteína-tirosina, proteína-serina/treonina, lípidos, etc.). Foram identificados motivos de sequências que correspondem em geral a cada destas famílias de cinase (e. g. , Hanks, S.K., Hunter, T., FASEB J., 9:576-596 (1995); Knighton, et al., Science, 253:407-414 (1991); Hiles, et al., Cell, 70:419-429 (1992); Kunz, et al., Cell, 73:585-596 (1993); Garcia-Bustos, et al., EMBO J., 13:2352-2361 (1994)).
As proteína-cinases podem ser caracterizadas pelos seus mecanismos de regulação. Estes mecanismos incluem, por exemplo, autofosforilação, transfosforilação por outras cinases, interacções proteína-proteína, interacções proteína-lípidos e interacções proteína-polinucleótido. Uma proteína-cinase particular pode ser regulada por mais do que um mecanismo.
As cinases regulam muitos processos celulares diferentes incluindo, mas não estando limitado a, proliferação, diferenciação, apoptose, mobilidade, transcrição, tradução e outros processos de sinalização, por adição de grupos fosfato a proteínas alvo. Estes eventos de fosforilação actuam como interruptores moleculares que podem modular ou regular a função biológica da proteína alvo. A fosforilação de proteínas alvo ocorre em resposta a uma variedade de sinais extracelulares (hormonas, neurotransmissores, factores de crescimento e diferenciação, etc.), eventos do ciclo celular, stresses ambientais ou nutritivos, etc. A proteína-cinase apropriada actua nas vias de sinalização para activar ou inactivar (directa ou indirectamente) , por exemplo, uma enzima metabólica, proteína reguladora, receptor, proteína citoesquelética, canal ou bomba iónico, ou factor de transcrição. A sinalização descontrolada devido a um controlo deficiente da fosforilação da proteína foi implicada num número de doenças, incluindo, por exemplo, inflamação, cancro, alergia/asma, doenças e estados do sistema imunitário, doenças e estados do sistema nervoso central, e angiogénese. 0 processo de divisão das células eucarióticas pode ser dividido em termos gerais numa série de fases sequenciais designadas Gl, S, G2 e M. Foi demonstrado que a progressão correcta através das várias fases do ciclo celular depende, de um modo critico, da regulação espacial e temporal de uma família de proteínas conhecidas como cinases dependentes de ciclina (CDK) e de um conjunto variado dos seus parceiros cognatos da proteína designadas ciclinas. As CDK são proteínas serina-treonina-cinase homólogas de cdc2 (também conhecida como CDK1) que são capazes de utilizar o ATP como um substrato na fosforilação de vários polipéptidos numa sequência dependente do contexto. As ciclinas são uma família de proteínas caracterizadas por uma região de homologia, contendo aproximadamente 100 aminoácidos, designada a "caixa de ciclina" que é utilizada na ligação, e que define selectividade para, proteínas parceiras de CDK específicas. A modulação dos níveis de expressão, velocidades de degradação e níveis de activação de várias CDK e ciclinas ao longo do ciclo celular leva à formação cíclica de uma série de complexos de CDK/ciclina, nos quais as CDK são enzimaticamente activas. A formação destes complexos controla a passagem através de pontos de controlo discretos do ciclo celular e permite, desse modo, que o processo de divisão celular prossiga. O insucesso em satisfazer os critérios bioquímicos de pré-requisito num dado ponto de controlo do ciclo celular, i. e. o insucesso em formar um complexo de CDK/ciclina necessário, pode levar à paragem do ciclo celular e/ou à apoptose celular. A proliferação celular aberrante, como se manifesta no cancro, pode ser frequentemente atribuída à perda do controlo correcto do ciclo celular. Por conseguinte, a inibição da actividade enzimática de CDK proporciona um meio através do qual as células em divisão anormal podem ter a sua divisão parada e/ou ser mortas. A variedade de CDK, e complexos de CDK, e os seus papéis críticos na mediação do ciclo celular, proporciona um grande espectro de alvos terapêuticos potenciais seleccionados com base numa base racional bioquímica definida. A progressão da fase G1 para a fase S do ciclo celular é principalmente regulada pelas CDK2, CDK3, CDK4 e CDK6 através da associação a membros das ciclinas de tipo D e E. As ciclinas de tipo D parecem determinantes para permitir a passagem para além do ponto de restrição Gl, enquanto o complexo de CDK2/ciclina E é chave para a transição da fase Gl para a S. Pensa-se que a progressão subsequente através da fase S e a entrada em G2 requer o complexo de CDK2/ciclina A. A mitose, e a transição da fase G2 para a M que a desencadeia, são reguladas por complexos de CDK1 e as ciclinas de tipo A e B.
Durante a fase Gl a proteína Retinoblastoma (Rb) e as proteínas de cavidade relacionadas tal como a pl30, são substratos para os complexos de CDK(2, 4 & 6)/ciclina. A progressão através de Gl é em parte facilitada por hiperfosforilação e, desse modo, pela inactivação, de Rb e pl30 pelos complexos de CDK(4/6)/ciclina-D. A hiperfosforilação de Rb e pl30 origina a libertação de factores de transcrição, tal como o E2F, e desse modo a expressão de genes necessários para a progressão através de Gl e para a entrada na fase S, tal como o gene para a ciclina E. A expressão de ciclina E facilita a formação do complexo CDK2/ciclina E, o qual aumenta, ou mantém, os níveis de E2F através da fosforilação adicional de Rb. 0 complexo de CDK2/ciclina E também fosforila outras proteínas necessárias para a replicação de ADN, tal como a NPAT que tem sido implicada na biossíntese de histonas. A progressão de Gl e a transição Gl/S também são reguladas através da via Myc estimulada por mitogénio, a qual entra na via de CDK2/ciclina E. A CDK2 também está relacionada com a via de resposta a danos de ADN mediada por p53 através da regulação dos niveis de p21 pela p53. A p21 é um inibidor proteico de CDK2/ciclina E e é, deste modo, capaz de bloquear ou retardar, a transição Gl/S. 0 complexo de CDK2/ciclina E pode assim representar um ponto no qual os estímulos bioquímicos das vias Rb, Myc e p53 estão em certa medida integrados. Por conseguinte, a CDK2 e/ou o complexo de CDK2/ciclina E representam bons alvos para terapêuticas concebidas para parar ou recuperar o controlo do ciclo celular em células em divisão aberrante. 0 papel exacto de CDK3 no ciclo celular não é claro. Até à data não foi identificado qualquer parceiro ciclina cognata, mas uma forma negativa dominante de CDK3 retardada as células em Gl, sugerindo desse modo que a CDK3 tem um papel na regulação da transição Gl/S.
Embora a maioria das CDK tenham sido implicadas na regulação do ciclo celular, há prova que determinados membros da família CDK estão envolvidos noutros processos bioquímicos. Isto é exemplificado pela CDK5 que é necessária para o desenvolvimento neuronal correcto e a qual também foi implicada na fosforilação de várias proteínas neuronais, tais como Tau, NUDE-1, sinapsinal, DARPP32 e o complexo Muncl8/SintaxinalA. A CDK5 neuronal é convencionalmente activada por ligação às proteínas p35/p39. No entanto, a actividade de CDK5 pode ser desregulada pela ligação de p25, uma versão truncada de p35. A conversão de p35 em p25, e a desregulação subsequente da actividade de CDK5, pode ser induzida por isquemia, excitotoxicidade e péptido β-amilóide. Consequentemente, a p25 foi implicada na patogénese de doenças neurodegenerativas, tais como Alzheimer e é, por conseguinte, de interesse como um alvo para terapêuticas dirigidas contra estas doenças. A CDK7 é uma proteína nuclear que tem actividade CAK de cdc2 e liga-se à ciclina H. A CDK7 foi identificada como componente do complexo de transcrição TFIIH, o qual tem a actividade do domínio C-terminal (CTD) da ARN-polimerase II. Isto foi associado à regulação da transcrição do HIV-1 através de uma via bioquímica mediada por Tat. A CDK8 liga a ciclina C e foi implicada na fosforilação do CTD da ARN-polimerase II. Analogamente o complexo de CDK9/ciclina-Tl (complexo P-TEFb) foi implicado no controlo do alongamento da ARN-polimerase II. 0 PTEF-b também é necessário para a activação da transcrição do genoma do HIV-1 pelo transactivador virai Tat através da sua interacção com a ciclina Tl. As CDK7, CDK8, CDK9 e o complexo P-TEFb são por conseguinte alvos potenciais para terapêuticas antivirais. A um nível molecular, a mediação da actividade do complexo de CDK/ciclina requer uma série de eventos de fosforilação, ou desfosforilação, estimuladores e inibidores. A fosforilação de CDK é realizada por um grupo de cinases de activação de CDK (CAKs) e/ou cinases, tais como weel, Mytl e Mikl. A desfosforilação é realizada por fosfatases, tais como cdc25(a & c), pp2a ou KAP.
A actividade do complexo de CDK/ciclina pode ser ainda regulada por duas famílias de inibidores proteicos celulares endógenos: a família Kip/Cip ou a família INK. As proteínas INK ligam especif icamente as CDK4 e CDK6. 0 pl6ink4 (também conhecido como MTS 1) é um gene supressor de tumores potencial que está mutado, ou suprimido, num grande número de cancros primários. A família Kip/Cip contém proteínas, tais como p21ciP1'Wafl, ρ27κ1Ρτ e p57KiP2. Como anteriormente discutido, a p21 é induzida pela p53 e é capaz de inactivar os complexos de CDK2/ciclina(E/A) e CDK4/ciclina(D1/D2/D3). Níveis atipicamente baixos de expressão de p27 foram observados nos cancros da mama, cólon e próstata. Contrariamente, foi demonstrado que a sobreexpressão de ciclina E em tumores sólidos correlaciona com um mau prognóstico para o doente. A sobreexpressão de ciclina Dl foi associada a carcinomas do esófago, da mama, escamoso e das células não pequenas do pulmão.
Os papéis essenciais das CDK e suas proteínas associadas, na coordenação e condução do ciclo celular em células em proliferação foram delineados acima. Também foram descritas algumas das vias bioquímicas nas quais as CDK desempenham um papel chave. 0 desenvolvimento de monoterapias para o tratamento de distúrbios proliferativos, tais como cancros, utilizando terapêuticas genericamente direccionadas para CDK, ou para CDK específicas é, por conseguinte, potencialmente muito desejável. Possivelmente, os inibidores de CDK também poderiam ser utilizados para tratar outros estados, tais como infecções virais, doenças auto-imunes e doenças neurodegenerativas, entre outras. As terapêuticas dirigidas para CDK também podem proporcionar vantagens clínicas no tratamento das doenças anteriormente descritas quando utilizadas em terapia de associação com agentes terapêuticos já existentes ou novos. Potencialmente, as terapias anticancerígenas dirigidas para CDK poderiam ter vantagens em relação a muitos agentes antitumorais habituais já que não interagiriam directamente com o ADN e reduziriam, por conseguinte, o risco de desenvolvimento de tumor secundário. A glicogénio sintase-cinase-3 (GSK3) é uma serina-treonina cinase que ocorre como duas isoformas ubiquamente expressas em humanos (GSK3a & beta GSK3p) . A GSK3 foi implicada como tendo papéis no desenvolvimento embrionário, síntese de proteínas, proliferação celular, diferenciação celular, dinâmica de microtúbulos, mobilidade celular e apoptose celular. Como tal, a GSK3 foi implicada na progressão de estados patológicos, tais como diabetes, cancro, doença de Alzheimer, acidente vascular cerebral, epilepsia, doença do neurónio motor e/ou traumatismo craniano. Filogeneticamente, a GSK3 está muito estreitamente relacionada com as cinases dependentes de ciclina (CDK). A sequência consenso do substrato peptídico reconhecida para a GSK3 é (Ser/Thr) -X-X-X- (pSer/pThr) , em que X é qualquer aminoácido (nas posições (n+1), (n+2), (n+3)) e pSer e pThr são fosfosserina e fosfotreonina, respectivamente (n+4). A GSK3
fosforila a primeira serina, ou treonina, na posição (n). A fosfosserina, ou fosfotreonina, na posição (n+4) parece ser necessária para preparar a GSK3 para dar a ciclização máxima do substrato. A fosforilação de GSK3a na Ser21, ou GSK3p na Ser9, leva à inibição de GSK3. Estudos de mutagénese e competição de péptidos conduziram ao modelo de que a extremidade N-terminal fosforilada da GSK3 é capaz de competir com o substrato fosfopeptídico (S/TXXXpS/pT) através de um mecanismo autoinibidor. Também existem dados que sugerem que as GSK3a e
GSK3p podem ser subtilmente reguladas por fosforilação das tirosinas 279 e 216, respectivamente. A mutação destes resíduos numa Phe originou uma redução da actividade cinase in vivo. A estrutura cristalográfica de raios X da GSK33 ajudou a lançar luz sobre todos aspectos da activação e regulação da GSK3. A GSK3 faz parte da via de resposta à insulina em mamíferos e é capaz de fosforilar e, desse modo, inactivar, a glicogénio-sintase. A regulação positiva da actividade da glicogénio-sintase e, desse modo, da síntese de glicogénio, através da inibição de GSK3, tem sido assim considerada como um meio potencial para combater a diabetes mellitus de tipo II ou não insulino-dependente (NIDDM): uma condição em que os tecidos corporais se tornam resistentes à estimulação pela insulina. A resposta celular à insulina nos tecidos hepático, adiposo ou muscular, é desencadeada pela ligação da insulina a um receptor extracelular de insulina. Isto origina a fosforilação, e recrutamento subsequente para a membrana do plasma, das proteínas substrato do receptor de insulina (IRS). A fosforilação adicional das proteínas IRS inicia o recrutamento de fosfoinositida-3-cinase (PI3K) para a membrana do plasma onde é capaz de libertar o mensageiro secundário 3,4,5-trisfosfato de fosfatidilinositilo (PIP3). Isto facilita a co-localização de proteína-cinase 1 dependente de 3-fosfoinositida (PDK1) e proteína-cinase B (PKB ou Akt) para a membrana, onde a PDK1 activa a PKB. A PKB é capaz de fosforilar e, desse modo, inibir a GSK3a e/ou GSKp através da fosforilação da Ser9, ou ser21, respectivamente. A inibição de GSK3 desencadeia em seguida a regulação positiva da actividade glicogénio-sintase. Os agentes terapêuticos capazes de inibir a GSK3 podem ser assim capazes de induzir respostas celulares análogas à observadas na estimulação pela insulina. Um outro substrato in vivo de GSK3 é o factor eucariótico de iniciação de síntese de proteínas 2B (eIF2B) . 0 eIF2B é inactivado através de fosforilação e é assim capaz de suprimir a biossíntese de proteínas. A inibição de GSK3, e. g., por inactivação da proteína "alvo da rapamicina em mamíferos" (mTOR) , pode assim regular positivamente a biossíntese de proteínas. Finalmente, há algumas provas da regulação da actividade de GSK3 pela via proteína-cinase activada por mitogénio (MAPK) através da fosforilação de GSK3 por cinases tal como a proteína-cinase 1 activada pela proteína-cinase activada por mitogénio (MAPKAP-K1 ou RSK) . Estes dados sugerem que a actividade de GSK3 pode ser modulada por estímulos de mitogénios, insulina e/ou aminoácidos.
Foi também demonstrado que a ΰ3Κ3β é um componente chave na via de sinalização Wnt de vertebrados. Foi demonstrado que esta via bioquímica é crítica para o desenvolvimento embrionário normal e regula a proliferação celular em tecidos normais. A GSK3 é inibida em resposta a estímulos da Wnt. Isto pode levar à desfosforilação de substratos de GSK3, tais como a Axina, o produto genético da polipose adenomatosa coli (APC) e β-catenina. A regulação aberrante da via Wnt foi associada a muitos cancros. Mutações na APC e/ou β-catenina são comuns no cancro colorrectal e outros tumores. Foi também demonstrado que a β-catenina é importante na adesão celular. Assim, a GSK3 também pode modular em certa medida os processos de adesão celular. Além das vias bioquímicas já descritas, também existem dados que implicam a GSK3 na regulação da divisão celular através da fosforilação da ciclina-Dl, na fosforilação de factores de transcrição tal como c-Jun, proteína α de ligação CCAAT/intensificador (C/ΕΒΡα), c-Myc e/ou outros substratos, tais como o Factor Nuclear de células T Activadas (NFATc), Factor de Choque Térmico-1 (HSF-1) e a proteína de ligação ao elemento de resposta a c-AMP (CREB). A GSK3 também parece desempenhar um papel, se bem que específico em relação ao tecido, na regulação da apoptose celular. 0 papel de GSK3 na modulação da apoptose celular, através de um mecanismo pró-apoptótico, pode ser particularmente relevante para estados clínicos em que pode ocorrer apoptose neuronal. São exemplos destas os traumatismo craniano, acidente vascular cerebral, epilepsia, Alzheimer e doenças do neurónio motor, paralisia supranuclear progressiva, degenerescência corticobasal e doença de Pick. In vitro foi demonstrado que a GSK3 é capaz de hiperfosforilar a proteína Tau associada ao microtúbulo. A hiperfosforilação da Tau rompe a sua ligação normal aos microtúbulos e também pode levar à formação de filamentos intracelulares de Tau. Pensa-se que a acumulação progressiva destes filamentos conduz a eventual disfunção e degenerescência neuronal. A inibição da fosforilação da Tau, através da inibição de GSK3, pode assim proporcionar um meio para limitar e/ou prevenir efeitos neurodegenerativos. Técnica Anterior 0 documento WO 02/34721 de Du Pont divulga uma classe de indeno[1,2-c]pirazol-4-onas como inibidores de cinases dependentes de ciclina. O documento WO 01/81348 de Bristol Myers Squibb descreve a utilização de 5-tio-, sulfinil- e sulfonilpirazolo[3,4-b]-piridinas como inibidores de cinase dependente de ciclina. O documento WO 00/62778 também de Bristol Myers Squibb divulga uma classe de inibidores de proteína tirosina-cinase. O documento W002/068406 da Amgen Inc. descreve compostos de pirazol que inibem as proteínas quinases, tais como CDK-2 e CDK-5. 0 documento WO 01/72745A1 de Ciclacel descreve 4-heteroaril-pirimidinas substituídas na posição 2 e a sua preparação, composições farmacêuticas contendo-as e a sua utilização como inibidores de cinases dependentes de ciclina (CDK) e, consequentemente, a sua utilização no tratamento de distúrbios proliferativos, tais como cancro, leucemia, psoríase e semelhantes. 0 documento WO 99/21845 de Agouron descreve derivados de 4-aminotiazole para inibir cinases dependentes de ciclina (CDK), tais como CDK1, CDK2, CDK4 e CDK6. A invenção também é dirigida à utilização terapêutica ou profiláctica de composições farmacêuticas contendo tais compostos e a métodos de tratamento de malignidades e outros distúrbios administrando quantidades eficazes de tais compostos. 0 documento WO 01/53274 de Agouron divulga como inibidores de cinase de CDK uma classe de compostos que pode compreender um anel benzeno substituído com amida ligado a um grupo heterocíclico contendo N. O documento WO 01/98290 (Pharmacia & Upjohn) divulga uma classe de derivados de 3-aminocarbonil-2-carboxamido tiofeno como inibidores de proteína-cinase.
Os documentos WO 01/53268 e WO 01/02369 de Agouron divulgam compostos que medeiam ou inibem a proliferação celular através da inibição de proteína-cinases, tais como a cinase dependente de ciclina ou tirosina-cinase. Os compostos da Agouron têm um anel arilo ou heteroarilo ligado directamente, ou através de um grupo CH=CH ou CH=N, à posição 3 de um anel de indazole.
Os documentos WO 00/39108 e WO 02/00651 (ambos da Du Pont Pharmaceuticals) descrevem compostos heterocíclicos que são inibidores de enzimas serina-protease tipo tripsina, especialmente o factor Xa e trombina. Os compostos são especificados como sendo úteis como anticoagulantes ou para a prevenção de distúrbios tromboembólicos.
Os documentos US 2002/0091116 (Zhu et al.), WO 01/19798 e WO 01/64642 divulgam, cada, vários grupos de compostos heterocíclicos como inibidores do Factor Xa. São divulgadas e exemplificadas algumas pirazolecarboxamidas substituídas na posição 1.
Os documentos US 6 127 382, WO 01/70668, WO 00/68191, WO 97/48672, WO 97/19052 e WO 97/19062 (todos de Allergan) descrevem, cada, compostos possuindo actividade tipo retinóides para utilização no tratamento de várias doenças hiperproliferativas incluindo cancros. O documento WO 02/070510 (Bayer) descreve uma classe de compostos de ácido amino-dicarboxílico para utilização no tratamento de doenças cardiovasculares. Embora os pirazoles sejam genericamente mencionados, neste documento não existem quaisquer exemplos específicos de pirazoles. O documento WO 97/03071 (Knoll AG) divulga uma classe de derivados de heterociclil-carboxamida para utilização no tratamento de distúrbios do sistema nervoso central. Os pirazoles são geralmente mencionados como exemplos de grupos heterocíclicos, mas não são divulgados ou exemplificados quaisquer compostos de pirazole específicos. 0 documento WO 97/40017 (Novo Nordisk) descreve compostos que são moduladores de proteína tirosina-fosfatases. O documento WO 03/020217 (Univ. Connecticut) divulga uma classe de pirazole-3-carboxamidas como moduladores do receptor de canabinóides para o tratamento de estados neurológicos. É especificado (página 15) que os compostos podem ser utilizados na quimioterapia de cancro mas não está claro se os compostos são activos como agentes anticancerígenos ou se estes são administrados para outros fins. O documento WO 01/58869 (Bristol Myers Squibb) divulga moduladores do receptor de canabinóides que podem ser utilizados inter alia para tratar uma variedade de doenças. A utilização principal considerada é o tratamento de doenças respiratórias, embora seja feita referência ao tratamento de cancro. O documento WO 01/02385 (Aventis Crop Science) divulga derivados de 1-(quinolin-4-il)-lH-pirazole como fungicidas. São divulgados pirazoles não substituídos na posição 1 como intermediários sintéticos. O documento WO 2004/039795 (Fujisawa) divulga amidas contendo um grupo pirazole substituído na posição 1 como inibidores da secreção de apolipoproteína B. Os compostos são especificados como sendo úteis no tratamento de estados, talcomo hiperlipidemia. O documento WO 2004/000318 (Celular Genomics) divulga vários monociclos substituídos com amino como moduladores de cinases. Nenhum dos compostos exemplificados são pirazoles.
Sumário da Invenção
Compostos de fórmula (II) que têm actividade inibidora ou moduladora de cinases dependentes de ciclina, e que se considera que serão úteis na prevenção ou tratamento de estados ou condições patológicas mediadas pelas cinases.
Assim, por exemplo, é considerado que os compostos da fórmula (II) serão úteis no alívio ou redução da incidência de cancro.
Por conseguinte, num primeiro aspecto, a invenção proporciona uma combinação compreendendo: (i) Um composto da fórmula (II):
ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que Y é uma ligação ou uma cadeia alquileno de 1, 2 ou 3 átomos de carbono de comprimento; R1 é um grupo carbocíclico ou heterocíclico possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, em que os grupos carbocíclicos ou heterocíclicos sao nao substituídos ou substituídos com um ou mais grupos substituintes R10; R2 é hidrogénio ou metilo; R3 é seleccionado de grupos carbocíclicos e heterocíclicos não aromáticos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, em que os grupos carbocíclicos ou heterocíclicos estão não substituídos ou substituídos com um ou mais grupos substituintes R10; e R10 é seleccionado de halogéneo, hidroxilo, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxilo, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino
Ci-4, grupos carbocíclicos e heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos; um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, X1C(X2), C(X2)X2, X1C(X2)X1, S, SO, S02, NRC, S02NRc ou NRcS02; e Rb é seleccionado de hidrogénio, grupos carbocíclicos e heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, e um grupo alquilo C1-8 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxilo, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, grupos carbocíclicos e heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos,
Rc é seleccionado de hidrogénio e hidrocarbilo C1-4; e X1 é 0, S ou NRC e X2 é =0, =S ou =NRC; e e providenciado esde que quando o grupo substituinte R10 compreende ou inclui um grupo carbocíclico ou heterocíclico, o referido grupo carbocíclico ou heterocíclico pode ser não substituído ou pode ele próprio ser substituído com um ou mais grupos substituintes R10 e adicionalmente em que (a) esses outros grupos substituintes R10 incluir grupos carbociclicos ou heterocíclicos, que não são eles próprios ainda substituídas; ou (b) o referido outros substituintes não incluem grupos carbociclicos ou heterocíclicos, mas são de outro modo seleccionados a partir dos grupos listados acima na definição de R10; e (ii) um ou mais outros agentes terapêuticos.
Num segundo aspecto, a invenção proporciona o composto de fórmula (II) como definido acima para utilização no tratamento de uma doença que é:
Infecções virais, por exemplo vírus do herpes, vírus da varíola, vírus de Epstein-Barr, vírus Sindbis, adenovirus, HIV, HPV, HCV e HCMV; prevenção do desenvolvimento de AIDS em indivíduos infectados pelo HIV; ou - Tipo II ou diabetes não insulino-dependente mellitus; ou - Doenças auto-imunes; ou - Traumatismo craniano; ou - Acidente vascular cerebral; ou - Epilepsia; ou - Doenças neurodegenerativas, de doenças exemplo de Alzheimer, demência relacionada com a SIDA, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, a retinite pigmentosa, atropy muscular espinal e degeneração cerebelar ou, tal como, doença de Alzheimer do neurónio motor, paralisia supranuclear progressiva, degeneração córtico-basal e a doença de Pick; ou - Doenças inflamatórias crónicas, por exemplo, lúpus sistémico eritematoso, glomerulonefrite mediada auto-imune, artrite reumatóide, psoriase, doença inflamatória do intestino, e diabetes mellitus auto-imune; ou - Doenças cardiovasculares, por exemplo, hipertrofia cardíaca, restenose, e aterosclerose, ou tal como a arritmia; ou - Glomerulonefrite; ou - Síndrome mielodisplásica; ou
Lesão isquêmica associada infartos do miocárdio, acidente vascular cerebral e lesão de reperfusão; ou - Ou doenças do fígado relacionadas com o álcool induzida por toxinas; ou - Doenças hematológicas, por exemplo, anemia crónica e anemia aplástica; ou
Doenças degenerativas do sistema músculo-esquelético, por exemplo, osteoporose e artrite, ou - Rinossinusite aspirina-senstive; ou - Fibrose cística; ou - Esclerose múltipla, ou - doenças renais; ou - Dor do câncer; ou - Cancro, em particular RB + ve tumores.
Qualquer uma ou mais das seguintes condições opcionais, em qualquer combinação, podem ser aplicadas aos compostos de fórmula (II) e seus subgrupos: (a-i) R1 é diferente de uma unidade contendo um grupo nucleósido de purina. (a-ii) Quando Y-R3 é cicloalquilo, então R1 é diferente de um grupo tetra-hidronaftaleno, tetra-hidroquinolinilo, tetra-hidrocromanilo ou tetra-hidrotiocromanilo substituído ou não substituído. (a-iii) R3 é diferente de uma unidade contendo um grupo 1,2,8,8a-tetra-hidro-7-metil- ciclopropa[c]pirrolo[3,2,e]indole-4-(5H)-ona. (a-iv) R1(CO)NH é diferente de 4-(terc- butiloxicarbonilamino)-3-metilimidazol-2-ilcarbonilamino. (b-i) R3 é diferente de um grupo azabiciclo em ponte. (b-ii) Quando R1 ou R3 contém uma unidade na qual um anel heterocíclico possuindo um membro endocíclico S(=0)2 está fundido com um anel carbocíclico, o referido anel carbocíclico é diferente de um anel benzeno substituído ou não substituído A referência na condição (a-i) a um grupo nucleósido de purina, refere-se a grupos purina substituídos e não substituídos possuindo ligado no mesmo um grupo monossacárido (e. g.f uma pentose ou hexose) ou um derivado de um grupo monossacárido, por exemplo, um grupo desoximonossacárido ou um grupo monossacárido substituído. A referência na condição (b-i) a um grupo azabiciclo em ponte refere-se a sistemas de anel de bicicloalcano em ponte nos quais um dos átomos de carbono do bicicloalcano foi substituído com um átomo de azoto. Nos sistemas de anel em ponte, dois anéis partilham mais do que dois átomos, ver por exemplo, Advanced Organic Chemistry, de Jerry March, 4th Edition, Wiley
Interscience, páginas 131-133, 1992. A invenção também proporciona a utilização de um composto da fórmula (II) como aqui definido para o fabrico de um medicamento para a profilaxia ou tratamento de um estado ou condição patológica mediada por uma cinase dependente de ciclina.
As condições (a-i) a (a-iv) e (b-i) a (b-ii) na fórmula (II) acima referem-se às divulgações nos seguintes documentos da técnica anterior. (a-i) WO 03/014137 (a-ii) WO 97/48672, WO 97/19052 (a-iv) US 5 502 068 (b-i) WO 03/040147 (b-ii) WO 00/59902
Qualquer uma ou mais das condições opcionais anteriores, (a-i) a (a-iv) e (b-i) a (b-ii) em qualquer combinação, também se podem aplicar aos compostos de fórmulas (IV), (IVa), (Va) , (Vb), (Via) (VIb) e seus subgrupos como aqui definidos. A invenção também proporciona: • A utilização da combinação como aqui definidos para o fabrico de um medicamento para a profilaxia ou tratamento de um estado ou condição patológica mediada por uma cinase dependente de ciclina. • Combinação como aqui definida para utilização na profilaxia ou tratamento de um estado ou condição patológico que é um distúrbio proliferativo em que o distúrbio proliferativo é um cancro. A invenção também proporciona combinações da invenção para utilização em: • Um método para aliviar ou reduzir a incidência de uma doença ou estado compreendendo ou resultando de crescimento celular anormal num mamífero, método esse que compreende administrar uma combinação como aqui definido numa quantidade eficaz para inibir o crescimento celular anormal. • Um método para aliviar ou reduzir a incidência de um estado ou condição patológica mediada por uma cinase dependente de ciclina ou glicogénio sintase-cinase-3, método esse que compreende administrar a um indivíduo necessitado do mesmo uma combinação de subgrupos como aqui definida. • Um método para a profilaxia ou tratamento de um estado ou condição patológica mediada por uma cinase dependente de ciclina, método esse que compreende administrar a um indivíduo necessitado do mesmo uma combinação como aqui definida. • Um método de tratamento de uma doença ou condição compreendendo ou resultando de crescimento celular anormal num mamífero, método esse que compreende administrar ao mamífero uma combinação como aqui definida numa quantidade eficaz para inibir crescimento celular anormal. • Um método de tratamento de uma doença ou condição compreendendo ou resultando de crescimento celular anormal num mamífero, compreendendo o método administrar ao mamífero uma combinação como aqui definida numa quantidade eficaz para inibir uma cinase dependente de ciclina (e. g., CDK2). • Um método de inibição de uma cinase dependente de ciclina, método esse que compreende pôr em contacto a cinase com uma combinação inibidora de cinase como aqui definida. • Um método de modulação de um processo celular (por exemplo, divisão celular) por inibição da actividade de uma cinase dependente de ciclina utilizando uma combinação e seus subgrupos como aqui definidos. • Um método para o tratamento ou profilaxia de qualquer um dos estados ou condições patológicas aqui divulgados, método esse que compreende administrar a um doente (e. g., um doente necessitado do mesmo) uma combinação (e. g., uma quantidade terapeuticamente eficaz) como aqui definida. • Um método para aliviar ou reduzir a incidência de um estado ou condição patológico aqui divulgado, método esse que compreende administrar a uma doente (e. g., um doente necessitado do mesmo) uma combinação como aqui definidos. • Um método para o diagnóstico e tratamento de um estado ou condição patológica mediada por uma cinase dependente de ciclina, método esse que compreende (II) rastrear um doente para determinar se uma doença ou estado do qual o doente sofre ou possa sofrer é uma que seria susceptivel a tratamento com uma combinação possuindo actividade contra cinases dependentes de ciclina; e (ii) onde é indicado que a doença ou condição da qual o doente é assim susceptivel, administrar subsequentemente ao doente uma combinação como aqui definida.
Os compostos da invenção também são considerados ser inibidores da glicogénio sintase-cinase-3 (GSK3) e, por conseguinte, a invenção também proporciona métodos e utilizações de combinações de inibição ou modulação como aqui definidos mas em que a cinase é glicogénio sintase-cinase-3.
Noutros aspectos, a invenção proporciona: • Uma composição farmacêutica compreendendo uma combinação como aqui definida e um veiculo farmaceuticamente aceitável. • Combinações como aqui definidos para utilização em medicina. • A utilização de uma combinação como aqui definida, para o fabrico de um medicamento para a profilaxia ou tratamento de qualquer um dos estados ou condições patológicas aqui divulgados. • A utilização de uma combinação como aqui definida para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou profilaxia de um estado ou condição patológico num doente que foi rastreado e que se determinou que sofre ou está em risco de sofrer de uma doença ou condição que seria susceptível a tratamento com um composto possuindo actividade contra a cinase dependente de ciclina.
Em cada das anteriores utilizações, métodos e outros aspectos da invenção, bem como em quaisquer aspectos e formas de realização da invenção como indicadas abaixo, as referências a compostos das fórmulas (II), (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e seus subgrupos como aqui definidos incluem no seu âmbito os sais ou solvatos ou tautómeros ou N-óxidos dos compostos.
Preferências e Definições Gerais
As seguintes preferências e definições gerais são aplicáveis a cada das unidades Y, R1 a R3 e a qualquer subdefinição, subgrupo ou forma de realização destas, a menos que o contexto indique em contrário.
Nesta descrição, as referências à fórmula (II) incluem as fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e subgrupos, exemplos ou formas de realização das fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb), a menos que o contexto indique em contrário.
Assim, por exemplo, as referências a, inter alia, utilizações terapêuticas, formulações farmacêuticas e processos de preparação de compostos, onde se refere a fórmula (II), também são para ser consideradas como se referindo às fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e subgrupos, exemplos ou formas de realização das fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb).
Analogamente, quando são dadas preferências, formas de realização e exemplos para os compostos da fórmula (II), eles também são aplicáveis às fórmulas, (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e subgrupos, exemplos ou formas de realização das fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb), a menos que o contexto exija em contrário.
As referências a grupos "carbocíclicos" e "heterocíclicos" como aqui utilizadas devem, a menos que o contexto indique em contrário, incluir sistemas de anéis aromáticos e não aromáticos. Assim, por exemplo, o termo "grupos carbocíclicos e heterocíclicos" inclui no seu âmbito sistemas de anéis carbocíclicos e heterocíclicos aromáticos, não aromáticos, insaturados, parcialmente saturados e completamente saturados. Em geral, tais grupos podem ser monocíclicos ou bicíclicos e podem conter, por exemplo, 3 a 12 membros endocíclicos, mais geralmente 5 a 10 membros endocíclicos. Exemplos de grupos monocíclicos são grupos contendo 3, 4, 5, 6, 7 e 8 membros endocí clicos, mais geralmente 3 a 7 e, de um modo preferido, 5 ou 6 membros endocíclicos. Exemplos de grupos bicíclicos são aqueles contendo 8, 9, 10, 11 e 12 membros endocíclicos, e mais geralmente 9 ou 10 membros endocíclicos.
Os grupos carbocíclicos ou heterocíclicos podem ser grupos arilo ou heteroarilo possuindo desde 5 a 12 membros endocíclicos, mais geralmente desde 5 a 10 membros endociclicos. O termo "arilo" como aqui utilizado refere-se a um grupo carbociclico possuindo carácter aromático e o termo "heteroarilo" é aqui utilizado para denotar um grupo heterocíclico possuindo carácter aromático. Os termos "arilo" e "heteroarilo" abrangem sistemas de anéis policíclicos (e. g., bicíclicos) em que um ou mais anéis são não aromáticos, com a condição de que pelo menos um anel seja aromático. Em tais sistemas policíclicos, o grupo pode estar ligado pelo anel aromático ou por um anel não aromático. Os grupos arilo ou heteroarilo podem ser grupos monocíclicos ou bicíclicos e podem estar não substituídos ou substituídos com um ou mais subst ituintes, por exemplo, um ou mais grupos R10 como aqui definidos. O termo "grupo não aromático" abrange sistemas de anéis insaturados sem carácter aromático, sistemas de anéis carbocíclicos e heterocíclicos parcialmente saturados e completamente saturados. Os termos "insaturado" e "parcialmente saturado" referem-se a anéis em que a estrutura ou estruturas do anel contêm átomos que partilham de ligação com mais do que uma valência, i. e., o anel contém pelo menos uma ligação múltipla, e. g., uma ligação C=C, C=c ou N=C. O termo "completamente saturado" refere-se a anéis onde não existem ligações múltiplas entre átomos endociclicos. Os grupos carbocíclicos saturados incluem grupos cicloalquilo como definidos abaixo. Os grupos carbocíclicos parcialmente saturados incluem grupos cicloalcenilo como definidos abaixo, por exemplo, ciclopentenilo, ciclo-heptenilo e ciclooctenilo. Um outro exemplo de um grupo cicloalcenilo é ciclo-hexenilo.
Os exemplos de grupos heteroarilo são grupos monocíclicos e bicíclicos contendo desde cinco até doze membros endocíclicos, e mais geralmente desde cinco até dez membros endocíclicos. 0 grupo heteroarilo pode ser, por exemplo, um anel monocíclico de cinco membros ou seis membros ou uma estrutura bicíclica formada a partir de anéis de cinco e seis membros fundidos ou dois anéis de seis membros fundidos ou, a título de um outro exemplo, dois anéis de cinco membros fundidos. Cada anel pode conter até cerca de quatro heteroátomos tipicamente seleccionados de azoto, enxofre e oxigénio. Tipicamente o anel heteroarilo conterá até 4 heteroátomos, mais tipicamente até 3 heteroátomos, mais geralmente até 2, por exemplo, um único heteroátomo. Numa forma de realização, o anel heteroarilo contém pelo menos um átomo de azoto endocíclico. Os átomos de azoto nos anéis heteroarilo podem ser básicos, como no caso de um imidazole ou piridina, ou essencialmente não básicos como no caso de um azoto de indole ou pirrole. Em geral, o número de átomos de azoto básicos presentes no grupo heteroarilo, incluindo quaisquer grupos amino substituintes do anel, será inferior a cinco.
Os exemplos de grupos heteroarilo de cinco membros incluem mas não estão limitados aos grupos pirrole, furano, tiofeno, imidazole, furazano, oxazole, oxadiazole, oxatriazole, isoxazole, tiazole, isotiazole, pirazole, triazole e tetrazole.
Os exemplos de grupos heteroarilo de seis membros incluem mas não estão limitados a piridina, pirazina, piridazina, pirimidina e triazina.
Um grupo heteroarilo bicíclico pode ser, por exemplo, um grupo seleccionado de: a) um anel benzeno fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos endocíclicos; b) um anel de piridina fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos endocíclicos; c) um anel de pirimidina fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos; d) um anel de pirrole fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos endocíclicos; e) um anel de pirazole fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos; f) um anel de imidazole fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos; g) um anel de oxazole fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos; h) um anel de isoxazole fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos; i) um anel de tiazole fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos; j) um anel de isotiazole fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos; k) um anel de tiofeno fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos endocíclicos; l) um anel de furano fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos endocíclicos; m) um anel de oxazole fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos; n) um anel de isoxazole fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos; o) um anel de ciclo-hexilo fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos endocíclicos; e p) um anel de ciclopentilo fundido com um anel de 5 ou 6 membros contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos endocíclicos.
Os exemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos contendo um anel de cinco membros fundido com outro anel de cinco membros incluem mas não estão limitados a imidazotiazole (e. g., imidazo[2,1-b]tiazole) e imidazoimidazole (e. g., imidazo[1,2-a]imidazole).
Os exemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos contendo um anel de seis membros fundido com um anel de cinco membros incluem mas não estão limitados aos grupos benzofurano, benzotiofeno, benzimidazole, benzoxazole, isobenzoxazole, benzisoxazole, benzotiazole, benzisotiazole, isobenzofurano, indole, isoindole, indolizina, indolina, isoindolina, purina (e. g., adenina, guanina), indazole, pirazolopirimidina (e. g., pirazolo[1,5-a]pirimidina), triazolopirimidina (e. g., [1,2, 4]triazolo[1,5-a]pirimidina), benzodioxole e pirazolopiridina (e. g., pirazolo[1,5-a]piridina).
Os exemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos contendo dois anéis de seis membros fundidos incluem mas não estão limitados aos grupos quinolina, isoquinolina, cromano, tiocromano, cromeno, isocromeno, cromano, isocromano, benzodioxano, quinolizina, benzoxazina, benzodiazina, piridopiridina, quinoxalina, quinazolina, cinolina, ftalazina, naftiridina e pteridina.
Um subgrupo de grupos heteroarilo compreende os grupos piridilo, pirrolilo, furanilo, tienilo, imidazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, oxatriazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirazolilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidinilo, triazinilo, triazolilo, tetrazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzofuranilo, benzotienilo, cromanilo, tiocromanilo, benzimidazolilo, benzoxazolilo, benzisoxazole, benzotiazolilo e benzisotiazole, isobenzofuranilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, indolinilo, isoindolinilo, purinilo (e. g., adenina, guanina), indazolilo, benzodioxolilo, cromenilo, isocromenilo, isocromanilo, benzodioxanilo, quinolizinilo, benzoxazinilo, benzodiazinilo, piridopiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinolinilo, ftalazinilo, naftiridinilo e pteridinilo.
Os exemplos de grupos arilo e heteroarilo policíclicos contendo um anel aromático e um anel não aromático incluem os grupos tetra-hidronaftaleno, tetra-hidroisoquinolina, tetra-hidroquinolina, di-hidrobenzotieno, di-hidrobenzofurano, 2,3-di-hidro-benzo[1,4]dioxina, benzo[1,3]dioxole, 4,5,6,7-tetra-hidrobenzofurano, indolina e indano.
Os exemplos de grupos arilo carbocíclicos incluem os grupos fenilo, naftilo, indenilo e tetra-hidronaftilo.
Os exemplos de grupos heterocíclicos não aromáticos incluem os grupos heterocíclicos não substituídos ou substituídos (com um ou mais grupos R10) possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, tipicamente 4 a 12 membros endocíclicos e, mais geralmente, desde 5 a 10 membros endocíclicos. Tais grupos podem ser, por exemplo, monocíclicos ou bicíclicos e tipicamente têm desde 1 a 5 membros endocíclicos de heteroátomo (mais geralmente 1, 2, 3 ou 4 membros endocíclicos de heteroátomo) tipicamente seleccionados de azoto, oxigénio e enxofre.
Quando o enxofre está presente, este pode existir como -S-, — S(O)— ou — S(O)2—, quando a natureza dos átomos e grupos adjacentes o permita.
Os grupos heterocíclicos podem conter, por exemplo, unidades éter cíclicas (e. g., como em tetra-hidrofurano e dioxano), unidades tioéter cíclicas (e. g., como em tetra-hidrotiofeno e ditiano), unidades amina cíclicas (e. g., como em pirrolidina), unidades amida cíclicas (e. g., como em pirrolidona), tioamidas cíclicas, tioésteres cíclicos, unidades éster cíclicas (e. g., como em butirolactona), sulfonas cíclicas (e. g., como em sulfolano e sulfoleno), sulfóxidos cíclicos, sulfonamidas cíclicas e suas associações (e. g., morfolina e tiomorfolina e seus S-óxidos e S, S-dióxidos) . Outros exemplos de grupos heterocíclicos são aqueles que contêm uma unidade ureia cíclica (e. g., como em imidazolidin-2-ona).
Num subconjunto de grupos heterocíclicos, os grupos heterocíclicos contêm unidades éter cíclicas (e. g., como em tetra-hidrofurano e dioxano), unidades tioéter cíclicas (e. g., como no tetra-hidrotiofeno e ditiano), unidades amina cíclicas (e. g., como em pirrolidina) , sulfonas cíclicas (e. g., como em sulfolano e sulfoleno), sulfóxidos cíclicos, sulfonamidas cíclicas e suas associações (e. g., tiomorfolina).
Os exemplos de grupos heterociclicos monociclicos não aromáticos incluem os grupos heterociclicos monociclicos de 5, 6 e 7 membros. Os exemplos particulares incluem morfolina, piperidina (e. g., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo e 4-piperidinilo), pirrolidina (e. g., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo e 3-pirrolidinilo), pirrolidona, pirano (2H-pirano ou 4H-pirano), di-hidrotiofeno, di-hidropirano, di-hidrofurano, di-hidrotiazole, tetra-hidrofurano, tetra-hidrotiofeno, dioxano, tetra-hidropirano (e. g., 4-tetra-hidropiranilo), imidazolina, imidazolidinona, oxazolina, tiazolina, 2-pirazolina, pirazolidina, piperazina e N-alquilpiperazinas tal como N-metilpiperazina. Outros exemplos incluem a tiomorfolina e seus S-óxido e S,S-dióxido (particularmente tiomorfolina). Ainda outros exemplos incluem azetidina, piperidona, piperazona e N-alquilpiperidinas, tal como N-metilpiperidina.
Um subconjunto preferido de grupos heterociclicos não aromáticos consiste de grupos saturados, tais como azetidina, pirrolidina, piperidina, morfolina, tiomorfolina, S,S-dióxido de tiomorfolina, piperazina, N-alquilpiperazinas e N-alquilpiperidinas.
Outro subconjunto de grupos heterociclicos não aromáticos consiste de pirrolidina, piperidina, morfolina, tiomorfolina, S,S-dióxido de tiomorfolina, piperazina e N-alquilpiperazinas tal como N-metilpiperazina.
Um subconjunto particular de grupos heterocíclicos consiste de pirrolidina, piperidina, morfolina e N-alquilpiperazinas (e. g., N-metilpiperazina) e, opcionalmente, tiomorfolina.
Os exemplos de grupos carbocíclicos não aromáticos incluem os grupos cicloalcano, tais como ciclo-hexilo e ciclopentilo, grupos cicloalcenilo, tais como ciclopentenilo, ciclo-hexenilo, ciclo-heptenilo e ciclooctenilo, bem como ciclo-hexadienilo, ciclooctatetraeno, tetra-hidronaftenilo e decalinilo.
Os grupos carbocíclicos não aromáticos preferidos são anéis monocíclicos e, de um modo muito preferido, anéis monocíclicos saturados.
Os exemplos típicos são os anéis carbocíclicos saturados de três, quatro, cinco e seis membros, e. g., os anéis ciclopentilo e ciclo-hexilo opcionalmente substituídos.
Um subconjunto de grupos carbocíclicos não aromáticos inclui grupos monocíclicos não substituídos ou substituídos (com um ou mais grupos R10) e particularmente grupos monocíclicos saturados, e. g., grupos cicloalquilo. Exemplos de tais grupos cicloalquilo incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo e ciclo-heptilo; mais tipicamente ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo, particularmente ciclo-hexilo .
Outros exemplos de grupos cíclicos não aromáticos incluem os sistemas de anéis em ponte, tais como bicicloalcanos e azabicicloalcanos, embora tais sistemas de anéis em ponte sejam geralmente menos preferidos. Por "sistemas de anéis em ponte" pretende-se referir sistemas de anéis em que dois anéis partilham mais do que dois átomos, ver por exemplo, Advanced Organic Chemistry, de Jerry March, 4a Edição, Wiley Interscience, páginas 131-133, 1992. Os exemplos de sistemas de anéis em ponte incluem biciclo[2.2.1]heptano, aza-biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[2.2.2]octano, aza-biciclo[2.2.2]octano, biciclo[3.2.1]octano e aza-biciclo[3.2.1]octano. Um exemplo particular de um sistema de anel em ponte é o grupo 1-aza-biciclo[2.2.2]octan-3-ilo.
Quando é aqui feita referência a grupos carbociclicos e heterociclicos, o anel carbociclico ou heterociclico pode, a menos que o contexto indique em contrário, estar não substituído ou substituído com um ou mais grupos subst ituintes R10 seleccionados de halogéneo, hidroxilo, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxilo, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino Ci-4, grupos carbociclicos e heterociclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos; um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, X^X2), C(X2)X2, X1C(X2)X1, S, SO, S02, NRC, S02NRc ou NRcS02; e Rb é seleccionado de hidrogénio, grupos carbociclicos e heterociclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, e um grupo hidrocarbilo C1-8 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxilo, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, grupos carbociclicos e heterociclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos e em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo C1-8 podem estar opcionalmente substituídos com 0, S, SO, S02, NRC, X2C(X2), C(X2)X2 ou X1C(X2)X1;
Rc é seleccionado de hidrogénio e hidrocarbilo C1-4; e X1 é 0, S ou NRC e X2 é =0, =S ou =NRC.
Quando o grupo substituinte R10 compreende ou inclui um grupo carbociclico ou heterocíclico, o referido grupo carbociclico ou heterocíclico pode estar não substituído ou pode estar ele próprio substituído com um ou mais de outros grupos substituintes R10. Num subgrupo de compostos da fórmula (II), esses outros grupos substituintes R10 podem incluir grupos carbocíclicos ou heterocíclicos, os quais tipicamente não estão eles próprios adicionalmente substituído. Noutro subgrupo de compostos da fórmula (II), os referidos outros substituintes não incluem grupos carbocíclicos ou heterocíclicos mas são em contrário seleccionados dos grupos listados acima na definição de R10.
Os substituintes R10 podem ser seleccionados de tal forma que contenham não mais do que 20 átomos diferentes de hidrogénio, por exemplo, não mais do que 15 átomos diferentes de hidrogénio, e. g.r não mais do que 12, ou 11, ou 10, ou 9, ou 8, ou 7, ou 6, ou 5 átomos diferentes de hidrogénio.
Quando os grupos carbocíclicos e heterocíclicos têm um par de substituintes em átomos endocíclicos adjacentes, os dois substituintes podem ser ligados de modo a formar um grupo cíclico. Assim, dois grupos R10 adjacentes, em conjunto com os átomos de carbono ou heteroátomos aos quais estão ligados podem formar um anel heteroarilo de 5 membros ou um anel carbociclico ou heterocíclico não aromático de 5 ou 6 membros, em que os referidos grupos heteroarilo e heterocíclico contêm até 3 membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de N, 0 e S. Por exemplo, um par de substituintes adjacentes em átomos de carbono adjacentes de um anel podem ser ligados através de um ou mais heteroátomos e grupos alquileno opcionalmente substituídos para formar um grupo oxa-, dioxa-, aza-, diaza- ou oxa-aza-cicloalquilo fundido.
Os exemplos de tais grupos substituintes unidos incluem:
Os exemplos de substituintes halogéneo incluem flúor, cloro, bromo e iodo. 0 flúor e o cloro são particularmente preferidos.
Na definição dos compostos da fórmula (II) acima e como utilizado a seguir, o termo "hidrocarbilo" é um termo genérico abrangendo grupos alifáticos, alicíclicos e aromáticos possuindo um esqueleto totalmente de carbono e consistindo de átomos de carbono e hidrogénio, excepto quando indicado em contrário.
Em determinados casos, como aqui definidos, um ou mais dos átomos de carbono que constituem o esqueleto de carbono podem estar substituídos com um átomo ou grupo de átomos especificado.
Os exemplos de grupos hidrocarbilo incluem os grupos alquilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, arilo carbocíclico, alcenilo, alcinilo, cicloalquilalquilo, cicloalcenilalquilo, e aralquilo, aralcenilo e aralcinilo carbocíclicos. Tais grupos podem estar não substituídos ou, onde especificado, substituídos com um ou mais substituintes como aqui definidos. Os exemplos e preferências expressas abaixo, aplicam-se a cada um dos grupos substituintes hidrocarbilo ou grupos substituintes contendo hidrocarbilo referidos nas vários definições de substituintes para os compostos da fórmula (II) a menos que o contexto indique em contrário.
Os grupos hidrocarbilo não aromáticos preferidos são grupos saturados, tais como grupos alquilo e cicloalquilo.
Geralmente, a título de exemplo, os grupos hidrocarbilo podem ter até oito átomos de carbono, a menos que o contexto requeira em contrário. No subconjunto de grupos hidrocarbilo possuindo 1 a 8 átomos de carbono, os exemplos particulares são os grupos hidrocarbilo Ci-6, tal como os grupos hidrocarbilo C1-4 (e. g., grupos hidrocarbilo C1-3 ou grupos hidrocarbilo C1-2) , sendo os exemplos específicos qualquer valor particular ou combinação de valores seleccionados de grupos hidrocarbilo Ci, C2, C3, C4, C5, C6, C7 e Os. 0 termo "alquilo" abrange grupos alquilo de cadeia linear e cadeia ramificada. Os exemplos de grupos alquilo incluem metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, e n-hexilo e seus isómeros. No subconjunto de grupos alquilo possuindo 1 a 8 átomos de carbono, os exemplos particulares são os grupos alquilo C1-6, tal como os grupos alquilo C1-4 (e. g., grupos alquilo C1-3 ou grupos alquilo C1-2) ·
Os exemplos de grupos cicloalquilo são aqueles derivados de ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclo-hexano e ciclo- heptano. No subconjunto de grupos cicloalquilo, o grupo cicloalquilo terá desde 3 a 8 átomos de carbono, sendo exemplos particulares os grupos cicloalquilo C3-6.
Os exemplos de grupos alcenilo incluem, mas não estão limitados a, etenilo (vinilo), 1-propenilo, 2-propenilo (alilo), isopropenilo, butenilo, buta-1,4-dienilo, pentenilo e hexenilo. No subconjunto de grupos alcenilo, o grupo alcenilo terá 2 a 8 átomos de carbono, sendo exemplos particulares os grupos alcenilo C2-6, tal como os grupos alcenilo C2-4.
Os exemplos de grupos cicloalcenilo incluem, mas não estão limitados a, ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclopentadienilo e ciclo-hexenilo. No subconjunto de grupos cicloalcenilo, os grupos cicloalcenilo têm desde 3 a 8 átomos de carbono e os exemplos particulares são os grupos cicloalcenilo C3-6.
Os exemplos de grupos alcinilo incluem, mas não estão limitados aos grupos etinilo e 2-propinilo (propargilo) . No subconjunto de grupos alcinilo possuindo 2 a 8 átomos de carbono, os exemplos particulares são os grupos alcinilo C2-6, tal como os grupos alcinilo C2-4.
Os exemplos de grupos arilo carbocíclicos incluem grupos fenilo substituídos e não substituídos.
Os exemplos de grupos cicloalquilalquilo, cicloalcenilalquilo, aralquilo carbocíclico, aralcenilo e aralcinilo incluem os grupos fenetilo, benzilo, estirilo, feniletinilo, ciclo-hexilmetilo, ciclopentilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopropilmetilo e ciclopentenilmetilo.
Quando presente, e onde especificado, um grupo hidrocarbilo pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, oxo, alcoxilo, carboxilo, halogéneo, ciano, nitro, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, e grupos carbocíclicos e heterocíclicos monocíclicos ou bicíclicos possuindo desde 3 a 12 (tipicamente 3 a 10 e mais geralmente 5 a 10) membros endocíclicos. Os substituintes preferidos incluem halogéneos tal como flúor. Assim, por exemplo, o grupo hidrocarbilo substituído pode ser um grupo parcialmente fluorado ou perfluorado tal como difluorometilo ou trifluorometilo. Numa forma de realização, os substituintes preferidos incluem grupos carbocíclicos e heterocíclicos monocíclicos possuindo 3-7 membros endocíclicos, mais geralmente 3, 4, 5 ou 6 membros endocíclicos.
Onde especificado, um ou mais átomos de carbono de um grupo hidrocarbilo podem estar opcionalmente substituídos com O, S, SO, SO2, NRC, X1C(X2), C (X2) X1 ou X1C(X2)X1 (ou um subgrupo dos mesmos) em que X1 e X2 são como definidos acima, com a condição de que permaneça pelo menos um átomo de carbono do grupo hidrocarbilo. Por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono do grupo hidrocarbilo podem estar substituídos com um dos átomos ou grupos listados, e os átomos ou grupos substituintes podem ser iguais ou diferentes. Em geral, o número de átomos de carbono lineares ou do esqueleto substituídos, corresponderá ao número de átomos lineares ou do esqueleto no grupo que os substitui. Exemplos de grupos nos quais um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo foram substituídos com um átomo ou grupo substituinte como definido acima incluem éteres e tioéteres (C substituído com O ou S), amidas, ésteres, tioamidas e tioésteres (C-C substituído com X2C(X2) ou C(X2)X2), sulfonas e sulfóxidos (C substituído com SO ou SO2) , aminas (C substituído com NRC) . Outros exemplos incluem as ureias, carbonatos e carbamatos (C-C-C substituído com X1C(X2)X1).
Quando um grupo amino tem dois substituintes hidrocarbilo, eles podem ligar-se, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, e opcionalmente com outro heteroátomo tal como azoto, enxofre ou oxigénio, para formar uma estrutura de anel de 4 a 7 membros endocíclicos, mais geralmente 5 a 6 membros endocíclicos. 0 termo "aza-cicloalquilo" como aqui utilizado refere-se a um grupo cicloalquilo em que um dos membros endocíclicos de carbono foi substituído com um átomo de azoto. Assim, os exemplos de grupos aza-cicloalquilo incluem piperidina e pirrolidina. 0 termo "oxa-cicloalquilo", como aqui utilizado, refere-se a um grupo cicloalquilo em que um dos membros endocíclicos de carbono foi substituído com um átomo de oxigénio. Assim, os exemplos de grupos oxa-cicloalquilo incluem tetra-hidrofurano e tetra-hidropirano. De um modo análogo, os termos "diaza-cicloalquilo", "dioxa-cicloalquilo" e "aza-oxa-cicloalquilo" referem-se respectivamente a grupos cicloalquilo em que dois membros endocíclicos de carbono foram substituídos com dois átomos de azoto, ou com dois átomos de oxigénio, ou com um átomo de azoto e um átomo de oxigénio. A definição "Ra-Rb" como aqui utilizada, no que se refere aos substituintes presentes uma unidade carbocíclica ou heterocíclica ou no que se refere a outros substituintes presentes noutras localizações nos compostos da fórmula (II), inclui inter alia compostos em que Ra é seleccionado de uma ligação, 0, CO, 0C(0), SC(0), NRcC(0), 0C(S), SC(S), NRCC(S), OC(NRc), SC(NRc), NRcC (NRC) , C(0)0, C(0)S, C(0)NRc, C(S)0, C(S)S, C(S) NRC, C (NRC) 0, C (NRC) S, C(NRC)NRC, 0C(0)0, SC(0)0, NRcC(0)0, 0C(S)0, SC(S)0, NRCC (S) 0, 0C(NRc)0, SC(NRc)0, NRcC(NRc)0, 0C(0)S, SC(0)S, NRCC (0) S, 0C(S)S, SC(S)S, NRCC(S)S, 0C(NRc)S, SC(NRC)S, NRcC (NRC) S, 0C (0) NRC, SC(0)NRc, NRcC(0) NRC, OC(S)NRc, SC(S) NRC, NRcC(S)NRc, OC (NRC) NRC, SC(NRc)NRc, NRcC (NRCNRC, S, SO, S02, NRC, S02NRc e NRcS02 em que Rc é como definido acima. A unidade Rb pode ser hidrogénio ou pode ser um grupo seleccionado de grupos carbociclicos e heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endociclicos (tipicamente 3 a 10 e mais geralmente desde 5 a 10), e um grupo hidrocarbilo C1-8 opcionalmente substituído como definido acima. Os exemplos de grupos hidrocarbilo, carbociclicos e heterocíclicos são como indicados, acima.
Quando Ra é 0 e Rb é um grupo hidrocarbilo C1-8, Ra e Rb formam em conjunto um grupo hidrocarbiloxilo. Os grupos hidrocarbiloxilo preferidos incluem hidrocarbiloxilo saturado, tais como alcoxilo (e. g., alcoxilo C1-6, mais geralmente alcoxilo C1-4, tais como etoxilo e metoxilo, particularmente metoxilo) , cicloalcoxilo (e. g., cicloalcoxilo C3-6, tais como ciclopropiloxilo, ciclobutiloxilo, ciclopentiloxilo e ciclo-hexiloxi) e cicloalquilalcoxilo (e. g., cicloalquil C3-6-alcoxilo C1-2 tal como ciclopropilmetoxilo) .
Os grupos hidrocarbiloxilo podem estar substituídos com vários substituintes como aqui definidos. Por exemplo, os grupos alcoxilo podem estar substituídos com halogéneo (e. g., como em difluorometoxilo e trifluorometoxilo), hidroxilo (e. g., como em hidroxietoxilo) , alcoxilo C1-2 (e. g., como em metoxietoxilo), hidroxi-alquilo C1-2 (como em hidroxietoxietoxilo) ou um grupo cíclico (e. g., um grupo cicloalquilo ou grupo heterocíclico não aromático como definido acima). Exemplos de grupos alcoxilo que têm um grupo heterocíclico não aromático como um substituinte são aqueles em que o grupo heterocíclico é uma amina cíclica saturada, tais como morfolina, piperidina, pirrolidina, piper az ina, alqui l-Ci-4-piperaz inas, cicloalquil-C3-7-piperaz inas, tetra-hidropirano ou tetra-hidrofurano e o grupo alcoxilo é um grupo alcoxilo C1-4, mais tipicamente um grupo alcoxilo C1-3, tais como metoxilo, etoxilo ou n-propoxilo.
Os grupos alcoxilo substituídos com um grupo monocíclico, tais como pirrolidina, piperidina, morfolina e piperazina e seus derivados N-substituídos, tais como N-benzilo, N-acilo C1-4 e N-alcoxi Ci-4-carbonilo. Os exemplos particulares incluem pirrolidinoetoxilo, piperidinoetoxilo e piperazinoetoxilo.
Quando Ra é uma ligação e Rb é um grupo hidrocarbilo C1-8, os exemplos de grupo hidrocarbilo Ra-Rb são como definidos acima. 0 grupos hidrocarbilo pode ser grupos saturados, tais como cicloalquilo e alquilo e os exemplos particulares de tais grupos incluem metilo, etilo e ciclopropilo. Os grupos hidrocarbilo (e. g., alquilo) podem estar substituídos com vários grupos e átomos como aqui definidos. Exemplos de grupos alquilo substituídos incluem grupos alquilo substituídos com um ou mais átomos de halogéneo, tais como flúor e cloro (incluindo os exemplos particulares bromoetilo, cloroetilo e trifluorometilo) , ou hidroxilo (e. g., hidroximetilo e hidroxietilo), aciloxilo Ci-8 (e. g., acetoximetilo e benziloximetilo) , amino e mono- e dialquilamino (e. g., aminoetilo, metilaminoetilo, dimetilaminometilo, dimetilaminoetilo e terc-butilaminometilo), alcoxilo (e. g., alcoxilo C1-2 tal como metoxi- como em metoxietilo) e grupos cíclicos, tais como grupos cicloalquilo, grupos arilo, grupos heteroarilo e grupos heterocíclicos nao aromáticos como definidos acima).
Os exemplos particulares de grupos alquilo substituídos com um grupo cíclico são aqueles em que o grupo cíclico é uma amina cíclica saturada, tais como morfolina, piperidina, pirrolidina, piper az ina, alqui l-Ci-4-piperaz inas, cicloalquil-C3-7-piperaz inas, tetra-hidropirano ou tetra-hidrofurano e o grupo alquilo é um grupo alquilo C1-4, mais tipicamente um grupo alquilo C1-3 tais como metilo, etilo ou n-propilo. Os exemplos específicos de grupos alquilo substituídos com um grupo cíclico incluem pirrolidinometilo, pirrolidinopropilo, morfolinometilo, morfolinoetilo, morfolinopropilo, piperidinilmetilo, piperazinometilo e as formas N-substituídas dos mesmos como aqui definidos.
Os exemplos particulares de grupos alquilo substituídos com grupos arilo e grupos heteroarilo incluem os grupos benzilo e piridilmetilo.
Quando Ra é S02NRC, Rb pode ser, por exemplo, hidrogénio ou um grupo hidrocarbilo C1-8 opcionalmente substituído, ou um grupo carbocíclico ou heterocíclico. Exemplos de Ra-Rb em que Ra é S02NRc incluem os grupos aminossulf onilo, alquil C1-4-aminossulf onilo e di-alquil Ci-4-aminossulf onilo, e as sulfonamidas formadas a partir de um grupo amino cíclico, tais como piperidina, morfolina, pirrolidina, ou uma piperazina opcionalmente N-substituída tal como N-metilpiperazina.
Os exemplos de grupos Ra-Rb em que Ra é SO2 incluem os grupos alquilsulfonilo, heteroarilsulfonilo e arilsulfonilo, em particular grupos aril- e heteroaril-sulfonilo monocíclicos. Os exemplos particulares incluem metilsulfonilo, fenilsulfonilo e toluenossulfonilo.
Quando Ra é NRC, Rb pode ser, por exemplo, hidrogénio ou um grupo hidrocarbilo Ci-s opcionalmente substituído, ou um grupo carbocíclico ou heterocíclico. Exemplos de Ra-Rb em que Ra é NRC incluem amino, alquil Ci-4-amino (e. g., metilamino, etilamino, propilamino, isopropilamino, terc-butilamino) , di-alquil C1-4-amino (e. g., dimetilamino e dietilamino) e cicloalquilamino (e. g., ciclopropilamino, ciclopentilamino e ciclo-hexilamino).
Formas de Realização Específicas e Preferências para Y, R1 a R3 e R10 R2 é hidrogénio ou metilo, de um modo muito preferido hidrogénio. R1 é um grupo carbocíclico ou heterocíclico possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, em que o grupo carbocíclico ou heterocíclico está não substituído ou substituído com um ou mais grupos subst ituintes R10, ou um grupo hidrocarbilo Ci-s opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo (e. g., flúor), hidroxilo, hidrocarbiloxilo C1-4, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, e grupos carbocíclicos ou heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, em que o grupo carbocíclico ou heterocíclico está não substituído ou substituído com um ou mais grupos subst ituintes R10, e em que 1 ou 2 dos átomos de carbono do grupo hidrocarbilo podem estar opcionalmente substituídos com um átomo ou grupo seleccionado de 0, S, NH, SO, SO2. Exemplos de grupos carbocíclicos ou heterocíclicos e grupos hidrocarbilo e as preferências gerais para tais grupos são como indicadas acima na secção de Preferências e Definições Gerais, e como especificado abaixo.
Numa forma de realização, R1 é um grupo arilo ou heteroarilo.
Quando R1 é um grupo heteroarilo, os grupos heteroarilo particulares incluem grupos heteroarilo monocíclicos contendo até três membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de 0, S e N, e grupos heteroarilo bicíclicos contendo até 2 membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de 0, S e N e em que ambos os anéis são aromáticos.
Os exemplos de tais grupos incluem furanilo (e. g., 2-furanilo ou 3-furanilo), indolilo (e. g., 3-indolilo, 6 indolilo), 2,3-di-hidro-benzo[1,4]dioxinilo (e. g., 2,3-di- hidro-benzo[1,4]dioxin-5-ilo) , pirazolilo (e. g., pirazole-5-ilo) , pirazolo[1,5-a]piridinilo (e. g., pirazolo[1,5-a]piridina-3-ilo), oxazolilo (e. g. ) , isoxazolilo (e. g., isoxazol-4-ilo) , piridilo (e. g., 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo), quinolinilo (e. g., 2-quinolinilo), pirrolilo (e. g., 3-pirrolilo), imidazolilo e tienilo (e. g., 2-tienilo, 3-tienilo).
Um subgrupo de grupos heteroarilo R1 consiste de furanilo (e. g., 2-furanilo ou 3-furanilo), indolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridilo, quinolinilo, pirrolilo, imidazolilo e tienilo.
Um subconjunto preferido de grupos heteroarilo R1 inclui 2-furanilo, 3-furanilo, pirrolilo, imidazolilo e tienilo.
Os grupos arilo R1 preferidos são os grupos fenilo. 0 grupo R1 pode ser um grupo carbociclico ou heterocíclico não substituído ou substituído em que um ou mais substituintes podem ser seleccionados do grupo R10 como definido acima. Numa forma de realização, os subst ituintes em R1 podem ser seleccionados do grupo R10a consistindo de halogéneo, hidroxilo, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxilo, um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, X3C(X4), C(X4)X3, X3C(X4)X3, S, SO ou S02, e Rb é seleccionado de hidrogénio e um grupo hidrocarbilo Ci-s opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxilo e grupos carbocíclicos ou heterocíclicos monocíclicos não aromáticos possuindo desde 3 a 6 membros endocíclicos; em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo Ci-s podem estar opcionalmente substituídos com 0, S, SO, SO2, X3C(X4), C(X4)X3 ou X3C (X4) X3; X3 é 0 ou S; e X4 é =0 ou =S.
Quando os grupos carbocíclicos e heterocíclicos têm um par de substituintes em átomos endocíclicos adjacentes, os dois substituintes podem ser ligados de modo a formar um grupo cíclico. Assim, dois grupos R10 adjacentes, em conjunto com os átomos de carbono ou heteroátomos aos quais estão ligados podem formar um anel heteroarilo de 5 membros ou um anel carbocíclico ou heterocí clico não aromático de 5 ou 6 membros, em que os referidos heteroarilo e grupos heterocíclicos contêm até 3 membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de N, 0 e S. Em particular, os dois grupos R10 adjacentes, em conjunto com os átomos de carbono ou heteroátomos aos quais estão ligados, podem formar um anel heterocíclico não aromático de 6 membros, contendo até 3, em particular 2, membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de N, 0 e S. Mais particularmente, os dois grupos R10 adjacentes podem formar um anel heterocíclico não aromático de 6 membros, contendo 2 membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de N, ou 0, tal como dioxano, e. g., [ 1, 4-dioxano] . Numa forma de realização, R1 é um grupo carbocíclico, e. g., fenilo possuindo um par de substituintes em átomos endocíclicos adjacentes ligados de modo a formar um grupo cíclico, e. g., para formar 2,3-di-hidro-benzo[1,4]dioxina.
Mais particularmente, os substituintes em R1 podem ser seleccionados de halogéneo, hidroxilo, trifluorometilo, um grupo Ra_Rb em que £ uma ligação ou 0, e Rb é seleccionado de hidrogénio e um grupo hidrocarbilo C1-4 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, halogéneo (de um modo preferido flúor) e grupos carbocíclicos e heterocíclicos saturados de 5 e 6 membros (por exemplo, grupos contendo até dois heteroátomos seleccionados de 0, Se N, tais como piperidina, pirrolidino, morfolino, piperazino e N-metilpiperazino não substituídos). 0 grupo R1 pode estar substituído com mais do que um substituinte. Assim, por exemplo, podem existir 1 ou 2 ou 3 ou 4 substituintes. Numa forma de realização, quando R1 é um anel de seis membros (e. g., um anel carbocíclico tal como um anel fenilo), podem existir um, dois ou três substituintes e estes podem estar localizados nas posições 2, 3, 4 ou 6 em torno do anel. A título de exemplo, um grupo fenilo R1 pode ser 2-monossubstituído, 3-monossubstituído, 2,6-dissubstituído, 2,3-dissubstituído, 2,4-dissubstituído 2,5-dissubstituído, 2,3,6-trissubstituído ou 2, 4,6-trissubstituído. Mais particularmente, um grupo fenilo R1 pode estar monossubstituído na posição 2 ou dissubstituído nas posições 2 e 6 com substituintes seleccionados de flúor, cloro e Ra-Rb, em que Ra é 0 e Rb é alquilo Ci-4 (e. g., metilo ou etilo) . Numa forma de realização, o flúor é um substituinte preferido. Noutra forma de realização, os substituintes preferidos são seleccionados de flúor, cloro e metoxilo.
Os exemplos particulares de grupos R1 não aromáticos incluem grupos cicloalquilo monocíclicos não substituídos ou substituídos (com um ou mais grupos R10) . Os exemplos de tais grupos cicloalquilo incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo e ciclo-heptilo; mais tipicamente ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo, particularmente ciclo-hexilo.
Outros exemplos de grupos R1 não aromáticos incluem grupos heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, tipicamente 4 a 12 membros endocíclicos, e mais geralmente desde 5 a 10 membros endociclicos, não substituídos ou substituídos (com um ou mais grupos R10). Tais grupos podem ser, por exemplo, monociclicos ou biciclicos e têm tipicamente desde 1 a 5 membros endociclicos de heteroátomo (mais geralmente 1, 2, 3 ou 4 membros endociclicos de heteroátomo) tipicamente seleccionados de azoto, oxigénio e enxofre.
Quando o enxofre está presente, este pode existir como -S-, — S(O)— ou —S(O)2~ r quando a natureza dos átomos e grupos adjacentes o permita.
Os grupos heterocíclicos podem conter, por exemplo, unidades éter cíclicas (e. g, como em tetra-hidrofurano e dioxano) , unidades tioéter cíclicas (e. g., como em tetra-hidrotiofeno e ditiano), unidades amina cíclicas (e. g., como em pirrolidina), amidas cíclicas (e. g., como em pirrolidona), ésteres cíclicos (e. g., como em butirolactona), tioamidas e tioésteres cíclicos, sulfonas cíclicas (e. g., como em sulfolano e sulfoleno), sulfóxidos cíclicos, sulfonamidas cíclicas e suas associações (e. g., morfolina e tiomorfolina e seus S-óxido e S,S-dióxido).
Num subconjunto de grupos heterocíclicos R1, os grupos heterocíclicos contêm unidades éter cíclicas (e. g., como em tetra-hidrofurano e dioxano), unidades tioéter cíclicas (e. g., como em tetra-hidrotiofeno e ditiano), unidades amina cíclicas (e. g., como em pirrolidina), sulfonas cíclicas (e. g., como em sulfolano e sulfoleno), sulfóxidos cíclicos, sulfonamidas cíclicas e suas associações (e. g., tiomorfolina).
Os exemplos de grupos heterocíclicos monocíclicos não aromáticos R1 incluem grupos heterocíclicos monocíclicos de 5, 6 e 7 membros, tais como morfolina, piperidina (e. g., 1- piperidinilo, 2-piperidinilo 3-piperidinilo e 4-piperidinilo), pirrolidina (e. g., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo e 3-pirrolidinilo), pirrolidona, pirano (2H-pirano ou 4H-pirano), di-hidrotiofeno, di-hidropirano, di-hidrofurano, di-hidrotiazole, tetra-hidrofurano, tetra-hidrotiofeno, dioxano, tetra-hidropirano (e. g., 4-tetra-hidropiranilo), imidazolina, imidazolidinona, oxazolina, tiazolina, 2-pirazolina, pirazolidina, piperazina e N-alquilpiperazinas tal como N-metilpiperazina. Outros exemplos incluem tiomorfolina e seus S-óxido e S,S-dióxido (particularmente tiomorfolina). Ainda outros exemplos incluem N-alquilpiperidinas tal como N-metilpiperidina.
Um subgrupo de grupos heterocíclicos não aromáticos R1 inclui grupos heterocíclicos monocíclicos de 5, 6 e 7 membros não substituídos ou substituídos (com um ou mais grupos R10) , tais como morfolina, piperidina (e. g., 1-piperidinilo, 2- piperidinilo 3-piperidinilo e 4-piperidinilo), pirrolidina (e. g., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo e 3-pirrolidinilo), pirrolidona, piperazina e N-alquilpiperazinas tal como N-metilpiperazina, em que um subconjunto particular consiste de pirrolidina, piperidina, morfolina, tiomorfolina e N-metilpiperazina.
Em geral, os grupos heterocíclicos não aromáticos preferidos incluem pirrolidina, piperidina, morfolina, tiomorfolina, S,S-dióxido de tiomorfolina, piperazina, N-alquilpiperazinas e N-alquilpiperidinas.
Outro subconjunto particular de grupos heterocíclicos consiste de pirrolidina, piperidina, morfolina e N-alquilpiperazinas e, opcionalmente, N-metilpiperazina e tiomorfolina.
Quando R1 é um grupo hidrocarbilo Ci-s substituído com um grupo carbocíclico ou heterocíclico, os grupos carbocíclicos e heterocíclicos podem ser aromáticos ou não aromáticos e podem ser seleccionados dos exemplos desses grupos indicados acima. 0 grupo hidrocarbilo substituído é tipicamente um grupo hidrocarbilo C1-4 saturado tal como um grupo alquilo, de um modo preferido um grupo CH2 ou CH2CH2. Quando o grupo hidrocarbilo substituído é um grupo hidrocarbilo C2-4, um dos átomos de carbono e os seus átomos de hidrogénio associados podem estar substituídos com um grupo sulfonilo, por exemplo, como na unidade SO2CH2.
Quando o grupo carbocíclico ou heterocíclico ligado a um grupo hidrocarbilo C1-8 é aromático, os exemplos de tais grupos incluem grupos arilo monocíclicos e grupos heteroarilo monocíclicos contendo até quatro membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de 0, S e N, e grupos heteroarilo bicíclicos contendo até 2 membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de 0, S e N e em que ambos os anéis são aromáticos.
Os exemplos de tais grupos são indicados na secção de "Preferências e Definições Gerais" acima.
Os exemplos particulares de tais grupos incluem furanilo (e. g., 2-furanilo ou 3-furanilo), indolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridilo, quinolinilo, pirrolilo, imidazolilo e tienilo. Os exemplos particulares de grupos arilo e heteroarilo como substituintes para um grupo hidrocarbilo Ci-s incluem fenilo, imidazolilo, tetrazolilo, triazolilo, indolilo, 2- furanilo, 3-furanilo, pirrolilo e tienilo. Tais grupos podem estar substituídos com um ou mais subst ituintes R10 ou R10a como aqui definidos.
Quando R1 é um grupo hidrocarbilo Ci-s substituído com um grupo carbocíclico ou heterocíclico não aromático, o grupo heterocíclico ou não aromático pode ser um grupo seleccionado das listas desses grupos indicadas acima. Por exemplo, o grupo não aromático pode ser um grupo monocíclico possuindo desde 4 a 7 membros endocíclicos, e. g., 5 a 7 membros endocíclicos, e tipicamente contendo desde 0 a 3, mais tipicamente 0, 1 ou 2, membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de O, Se N. Quando o grupo cíclico é um grupo carbocíclico, este pode ser adicionalmente seleccionado de grupos monocíclicos possuindo 3 membros endocíclicos. Os exemplos particulares incluem grupos cicloalquilo monocíclicos, tais como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo e ciclo-heptilo, e grupos heterocíclicos monocíclicos de 5, 6 e 7 membros, tais como morfolina, piperidina (e. g., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3- piperidinilo e 4-piperidinilo), pirrolidina (e. g., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo e 3-pirrolidinilo), pirrolidona, piperazina e N-alquilpiperazinas tal como N-metilpiperazina. Em geral, os grupos heterocíclicos não aromáticos preferidos incluem pirrolidina, piperidina, morfolina, tiomorfolina e N-metilpiperazina.
Quando R1 é um grupo hidrocarbilo Ci-s opcionalmente substituído, o grupo hidrocarbilo pode ser como definido acima, e é, de um modo preferido, de até quatro átomos de carbono de comprimento, mais geralmente até três átomos de carbono de comprimento, por exemplo, um ou dois átomos de carbono de comprimento.
Numa forma de realização, o grupo hidrocarbilo é saturado e pode ser aciclico ou cíclico, por exemplo, acíclico. Um grupo hidrocarbilo saturado acíclico (i. e., um grupo alquilo) pode ser um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificado.
Os exemplos de grupos alquilo de cadeia linear R1 incluem metilo, etilo, propilo e butilo.
Os exemplos de grupos alquilo de cadeia ramificada R1 incluem isopropilo, isobutilo, terc-butilo e 2,2-dimetilpropilo.
Numa forma de realização, o grupo hidrocarbilo é um grupo saturado linear possuindo desde 1-6 átomos de carbono, mais geralmente 1-4 átomos de carbono, por exemplo, 1-3 átomos de carbono, e. g., 1, 2 ou 3 átomos de carbono. Quando o grupo hidrocarbilo está substituído, os exemplos particulares de tais grupos são os grupos metilo e etilo substituídos (e. g., com um grupo carbocíclico ou heterocíclico).
Um grupo hidrocarbilo Ci-s R1 pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo (e. g.r flúor), hidroxilo, hidrocarbiloxilo Ci-4, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino Ci-4, e grupos carbocíclicos ou heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, e em que 1 ou 2 dos átomos de carbono do grupo hidrocarbilo podem estar opcionalmente substituídos com um átomo ou grupo seleccionado de 0, S, NH, SO, SO2. Os substituintes particulares para o grupo hidrocarbilo incluem hidroxilo, cloro, flúor (e. g., como em trifluorometilo), metoxilo, etoxilo, amino, metilamino e dimetilamino, sendo os substituintes preferidos os hidroxilo e flúor.
Os grupos R1-CO particulares são os grupos indicados no Quadro 1 abaixo.
No Quadro 1, o ponto de ligação do grupo ao átomo de azoto do grupo pirazol-4-amino é representado pela ligação simples terminal que se prolonga a partir do grupo carbonilo. Assim, a titulo de ilustração, o grupo B no quadro é o grupo trifluoroacetilo, o grupo D no quadro é o grupo fenilacetilo e o grupo I no quadro é o grupo 3-(4-clorofenil)propionilo.
Um subgrupo de grupos R1-CO consiste dos grupos A a BF no Quadro 1 acima.
Outro subgrupo de grupos R1-CO consiste dos grupos A a BS no Quadro 1 acima.
Um conjunto de grupos R1-CO preferidos consiste dos grupos J, AB, AH, AJ, AL, AS, AX, AY, AZ, BA, BB, BD, BH, BL, BQ, BS e BAI
Outro conjunto de grupos R1-CO preferidos consiste dos grupos J, AB, AH, AJ, AL, AS, AX, AY, AZ, BA, BB, BD, BH, BL, BQ e BS.
Os grupos R1-CO- mais preferidos são os AJ, AX, BQ, BS e BAI .
Um subconjunto particularmente preferido de grupos R1-CO-consiste de AJ, BQ e BS.
Outro subconjunto particularmente preferido de grupos R1-CO-consiste de AJ e BQ.
Quando R1 é um anel fenilo que tem um substituinte na posição 4, o substituinte na posição 4 é de um modo preferido diferente de um grupo fenilo possuindo um grupo SO2NH2 ou SO2 Me na posição orto.
Numa forma de realização geral, R1 pode ser diferente de um grupo tetra-hidroquinolina, cromano, cromeno, tiocromano, tiocromeno, di-hidro-naftaleno ou tetra-hidronaftaleno substituído ou não substituído. Mais particularmente, R1 pode ser diferente de um grupo tetra-hidroquinolina, cromano, cromeno, tiocromano, tiocromeno, di-hidro-naftaleno ou tetra-hidronaftaleno ligado pelo seu anel aromático à unidade A-NR4-, substituído ou não substituído.
Noutra forma de realização geral, quando R1 é um grupo fenilo substituído ou não substituído, a unidade Y-R3 pode ser diferente de cicloalquilo C5-10 não substituído.
Quando R1 é um grupo hidrocarbilo opcionalmente substituído e o grupo hidrocarbilo compreende ou contém um grupo alceno substituído ou não substituído, é preferido que a ligação dupla carbono-carbono do grupo alceno não esteja directamente ligada ao grupo A.
Quando R1 é um grupo hidrocarbilo opcionalmente substituído, o grupo hidrocarbilo pode ser diferente de um grupo alceno.
Y
Nos compostos da fórmula (II), Y é uma ligação ou uma cadeia alquileno de 1, 2 ou 3 átomos de carbono de comprimento. 0 termo "alquileno" tem o seu significado habitual e refere-se a uma cadeia bivalente de hidrocarboneto saturado aciclico. A cadeia de hidrocarboneto pode ser ramificada ou não ramificada. Quando uma cadeia alquileno é ramificada, esta pode ter uma ou mais cadeias laterais de grupo metilo. Exemplos de grupos alquileno incluem -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, CH(CH3)-, -C(CH3)2-, -CH2-CH (CH3)-CH2-C (CH3) 2- e -CH(CH3) -CH(CH3)
Numa forma de realização, Y é uma ligação.
Noutra forma de realização, Y é uma cadeia alquileno.
Quando Y é uma cadeia alquileno, de um modo preferido, esta é não ramificada e mais particularmente contém 1 ou 2 átomos de carbono, de um modo preferido, 1 átomo de carbono. Assim, os grupos preferidos Y são -CH2- e -CH2-CH2-, sendo um grupo muito preferido o (CH2)-.
Quando Y é uma cadeia ramificada, de um modo preferido, esta não tem mais do que duas cadeias laterais metilo. Por exemplo, ela pode ter uma única cadeia lateral metilo. Numa forma de realização, Y é um grupo -CH(Me)-.
Num subgrupo de compostos, Y é uma ligação, CH2, CH2CH2 ou CH2CH(CH3) .
Ri 0 grupo R3 é seleccionado de grupos carbociclicos e heterociclicos não aromáticos possuindo desde 3 a 12 membros endociclicos.
Num outro subgrupo de compostos, Y é uma ligação ou uma cadeia alquileno (e. g., um grupo -(CH2)-) e R3 é um grupo carbocíclico ou heterocíclico não aromático.
Num outro subgrupo de compostos, Y é uma ligação e R3 é um grupo carbocíclico ou heterocíclico não aromático.
Ainda num outro subgrupo de compostos, Y é uma cadeia alquileno (e. g., um grupo -(CH2)-) e R3 é um grupo carbocíclico ou heterocíclico não aromático.
Os grupos carbocíclicos e heterocíclicos R3 podem ser carbocíclicos não aromáticos ou heterocíclicos não aromáticos e os exemplos de tais grupos são como indicadas em pormenor acima na secção de Preferências e Definições Gerais, e como indicado abaixo.
Os exemplos de grupos R3 não aromáticos incluem os grupos cicloalquilo, oxa-cicloalquilo, aza-cicloalquilo, diaza-cicloalquilo, dioxa-cicloalquilo e aza-oxa-cicloalquilo opcionalmente substituídos (com R10 ou R10a) . Outros exemplos incluem os grupos aza-bicicloalquilo C7-10 tal como o 1-aza-biciclo[2.2.2]octan-3-ilo.
Os exemplos particulares de tais grupos incluem os grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, tetra-hidropirano, morfolina, tetra-hidrofurano, piperidina e pirrolidina não substituídos ou substituídos.
Um subconjunto de grupos R3 não aromáticos consiste dos grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, tetra-hidropirano, tetra-hidrofurano, piperidina e pirrolidina.
Os grupos R3 não aromáticos preferidos incluem os grupos ciclopentilo, ciclo-hexilo, tetra-hidropirano, tetra-hidrofurano, piperidina e pirrolidina não substituídos ou substituídos.
Os grupos não aromáticos podem estar não substituídos ou substituídos com um ou mais grupos R10 ou R10a como definidos acima.
Os substituintes particulares para R3 são seleccionados do grupo R10a consistindo de halogéneo; hidroxilo; grupos carbocíclicos e heterocíclicos monocíclicos possuindo desde 3 a 6 membros endocíclicos e contendo até 2 membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de 0, Ne S; e um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, CO2, SO2, NH, SO2NH ou NHSO2; e Rb é seleccionado de hidrogénio, um grupo carbocíclico ou heterocíclico com 3-6 membros endocíclicos e contendo até 2 membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de 0, Ne S; e um grupo hidrocarbilo C1-6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, oxo, halogéneo, carboxilo, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, um grupo carbocíclico ou heterocíclico com 3-6 membros endocíclicos e contendo até 2 membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de 0, N e S; e em que um ou dois átomos de carbono do grupo hidrocarbilo C1-6 podem estar opcionalmente substituídos com 0, S, SO, SO2 ou NH.
Numa forma de realização, os grupos substituintes R10a preferidos em R3 incluem halogéneo, um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, C(X2)X1, e Rb é seleccionado de hidrogénio, grupos heterocíclicos possuindo 3-7 membros endocíclicos e um grupo hidrocarbilo C1-4 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, carboxilo, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, e grupos heterociclicos possuindo 3-7 membros endociclicos.
Os grupos subst ituintes R10a particularmente preferidos em R3 incluem halogéneo, especialmente flúor, alcoxilo C1-3 tal como metoxilo, e hidrocarbilo C1-3 opcionalmente substituído com flúor, hidroxilo (e. g., hidroximetilo), alcoxilo C1-2 ou um anel heterociclico saturado de 5 ou 6 membros, tais como piperidino, morfolino, piperazino e N-metilpiperazino.
Noutra forma de realização, os substituintes para R3 são seleccionados de: • halogéneo (e. g., flúor e cloro) • alcoxilo C1-4 (e. g., metoxilo e etoxilo) opcionalmente substituído com um ou substituintes seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-2 e anéis heterociclicos saturados de cinco e seis membros contendo 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de 0, Ne S, estando ainda os anéis heterociclicos opcionalmente substituídos com um ou mais grupos C1-4 (e. g., metilo) e em que o S, quando presente, pode estar presente como S, SO ou S02; • alquilo C1-4 opcionalmente substituído com um ou substituintes seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-4, amino, alquil Ci-4-sulf onilamino, grupos cicloalquilo de 3 a 6 membros (e. g., ciclopropilo), fenilo (opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de halogéneo, metilo, metoxilo e amino) e anéis heterociclicos saturados de cinco e seis membros contendo 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de 0, N e S, estando ainda os anéis heterociclicos opcionalmente substituídos com um ou mais grupos C1-4 (e. g., metilo) e em que o S, quando presente, pode estar presente como S, SO ou SO2; • hidroxilo; • amino, mono-alquil Ci-4-amino, di-alquil Ci-4-amino, benziloxicarbonilamino e alcoxi Ci-4-carbonilamino; • carboxilo e alcoxi Ci-4-carbonilo; • alquil Ci-4-aminossulfonilo e alquil Ci-4-sulfonilamino; • alquil Ci-4-sulfonilo; • um grupo 0-Hets ou NH-Hets em que Hets é um anel heterocíclico saturado de cinco ou seis membros contendo 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de 0, Ne S, estando ainda os anéis heterociclicos opcionalmente substituídos com um ou mais grupos C1-4 (e. g., metilo) e em que o S, quando presente, pode estar presente como S, SO ou S02; • anéis heterociclicos saturados de cinco e seis membros contendo 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de 0, Ne S, estando ainda os anéis heterociclicos opcionalmente substituídos com um ou mais grupos C1-4 (e. g., metilo) e em que o S, quando presente, pode estar presente como S, SO ou S02; • oxo; e • anéis arilo e heteroarilo de seis membros contendo até dois membros endocíclicos de azoto e estando opcionalmente substituído com um ou substituintes seleccionados de halogéneo, metilo e metoxilo.
Numa outra forma de realizaçao, R3 é seleccionado de: • grupos cicloalquilo C3-C7 opcionalmente substituídos com 1-4 (por exemplo, 1-2, e. g., 1) substituintes R10 ou R10a; • anéis heterocíclicos saturados de cinco membros contendo 1 heteroátomo endociclico seleccionado de 0, N e S e estando opcionalmente substituído com um grupo oxo e/ou com 1-4 (por exemplo, 1-2, e. g., 1) subst ituintes R10 ou R10a; • anéis heterocíclicos saturados de seis membros contendo 1 ou 2 heteroátomos endocíclicos seleccionados de 0, N e S e estando opcionalmente substituídos com um grupo oxo e/ou com 1-4 (por exemplo, 1-2, e. g., 1) subst ituintes R10 ou R10a; • grupos mono-azabicicloalquilo e diazabicicloalquilo cada possuindo 7 a 9 membros endocíclicos e estando opcionalmente substituídos com 1-4 (por exemplo, 1-2, e. g., 1) subst ituintes R10 ou R10a.
Os exemplos específicos do grupo Y-R3 são indicados no
Quadro 2. No Quadro 2, o ponto de ligação do grupo ao átomo de azoto do grupo pirazole-3-carboxamida é representado pela ligação simples terminal que se prolonga a partir do grupo.
Um subconjunto de grupos seleccionados do quadro 2 consiste dos grupos CA a EU.
Outro subconjunto de grupos seleccionados do quadro 2 consiste dos grupos CA a CV.
Os grupos preferidos seleccionados do Quadro 2 incluem os grupos CL, CM, ES, ET e FC.
Os grupos particularmente preferidos seleccionados do Quadro 2 incluem os grupos CL, CM e ES, e de um modo muito preferido os CL e CM.
Quando R3 é um grupo aza-cicloalquilo, o átomo de azoto do grupo aza-cicloalquilo está de um modo preferido não substituído com uma cadeia alquileno ligada a um grupo 2,3-di-hidro-benzo[1,4]dioxina ou tetra-hidronaftaleno.
Noutro forma de realização geral, R3 é diferente de uma unidade contendo um anel heteroarilo de cinco membros ligado directamente por uma ligação simples a um grupo arilo monocíclico ou bicíclico ou R3 é diferente de uma unidade contendo um grupo bis heteroarilo compreendendo dois anéis heteroarilo de cinco membros ligados em conjunto por uma ligação simples.
Numa outra forma de realização geral, R1 é diferente de uma unidade contendo um anel heteroarilo de cinco membros ligado directamente por uma ligação simples a um grupo arilo monocíclico ou bicíclico ou R1 é diferente de uma unidade contendo um grupo bis heteroarilo compreendendo dois anéis heteroarilo de cinco membros ligados em conjunto por uma ligação simples.
Noutra forma de realização geral, R1-(CO)-NH é diferente de um grupo nicotinoil-amino ou benzoil-amino opcionalmente substituído quando Y-R3 é um grupo alquilo, cicloalquilo, fenilo opcionalmente substituído ou fenilalquilo opcionalmente substituído.
Numa forma de realização, Y-R3 pode ser diferente de um grupo cicloalquilo substituído na posição 1 com uma cadeia hidrocarboneto que tem simultaneamente um substituinte oxi tal como hidroxilo, um substituinte arilo e um substituinte diazole ou triazole.
De um modo preferido, R1 ou R3 são, cada, diferentes de uma unidade contendo um grupo fenilo substituído possuindo substituintes tio e/ou oxi, tais como hidroxilo, alcoxilo e alquiltio em ambas as posições 3 e 4 do anel fenilo.
De um modo preferido, o grupo Y-R3 não inclui um grupo lactama fundido com benzeno possuindo ligado no mesmo um grupo imidazole não substituído ou substituído.
De um modo preferido, o grupo Y-R3 não inclui a unidade -CH=C (CC>2Rq)-S- em que R'? é hidrogénio ou alquilo.
Noutra forma de realização geral, nenhum de R1 ou R3 contém uma unidade em que um grupo heteroarilo contendo azoto de cinco membros está ligado directamente ou via um grupo alquileno, oxa-alquileno, tia-alquileno ou aza-alquileno a um grupo piridilo não substituído ou a um anel de arilo, heteroarilo ou piperidina substituído, possuindo cada dos referidos anéis ligados no mesmo um substituinte seleccionado de ciano, e grupos amino, aminoalquilo, amidina, guanidina e carbamoílo substituídos ou não substituídos.
Numa outra forma de realização geral, R1 e R3 são, cada, diferentes de um grupo heterocíclico insaturado contendo azoto, ou um grupo benzofurano ou benzotiofeno em que o referido grupo heterocíclico contendo azoto, grupo heteroarilo contendo azoto, grupo bicíclico de benzofurano ou benzotiofeno estão ligados directamente por uma ligação simples a um grupo piridilo ou fenilo substituído.
Noutra forma de realização geral, nenhum de R1 ou R3 contém uma unidade em que um grupo heteroarilo contendo azoto de cinco membros está ligado directamente ou via um grupo alquileno, oxa-alquileno, tia-alquileno ou aza-alquileno a um grupo arilo, heteroarilo ou piperidina substituído ou a um grupo piridilo não substituído.
Em geral, é preferido que os compostos da invenção, quando contêm um grupo ácido carboxílico, possuam não mais do que um grupo desse tipo.
Subgrupos Particulares e Preferidos das fórmulas (II)
Os compostos da fórmula (II) são representados pela fórmula (II):
ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R1, R2, R3 e Y são, cada, independentemente seleccionados de R1, R2, R3 e Y como aqui definidos.
Na fórmula (II) é preferido que R2 seja hidrogénio ou alquilo C1-4 (e. g., alquilo C1-3) e, de um modo mais preferido, R2 é hidrogénio.
Num subgrupo de compostos da fórmula (II), R1 é: (i) fenilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes (e. g., 1, 2 ou 3) seleccionados de flúor; cloro; hidroxilo; grupos heterocíclicos saturados de 5 e 6 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de 0, N e S, estando os grupos heterocíclicos opcionalmente substituídos com um ou mais grupos alquilo C1-4; hidrocarbiloxilo C1-4; e hidrocarbilo C1-4; em que os grupos hidrocarbilo C1-4 e hidrocarbiloxilo C1-4 estão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes escolhidos de hidroxilo, flúor, alcoxilo C1-2, amino, mono e di-alquil Ci-4-amino, fenilo, halofenilo, grupos carbocíclicos saturados possuindo 3 a 7 membros endocíclicos (de um modo mais preferido 4, 5 ou 6 membros endocíclicos, e. g., 5 ou 6 membros endocíclicos) ou grupos heterocíclicos saturados de 5 ou 6 membros endocíclicos e contendo até 2 heteroátomos seleccionados de 0, Se N; ou 2,3-di-hidro-benzo[1,4]dioxina; ou (ii) um grupo heteroarilo monocíclico contendo um ou dois heteroátomos seleccionados de 0, Se N; ou um grupo heteroarilo bicíclico contendo um único heteroátomo seleccionado de 0, Se N; estando cada dos grupos heteroarilo monocíclicos e bicíclicos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de flúor; cloro; hidrocarbiloxilo C1-3; e hidrocarbilo C1-3 opcionalmente substituídos com hidroxilo, flúor, metoxilo ou um grupo carbocíclico ou heterocíclico saturado de cinco ou seis membros contendo até dois heteroátomos seleccionados de 0, Se N; ou (iii) um grupo cicloalquilo substituído ou não substituído possuindo desde 3 a 6 membros endocíclicos; ou (iv) um grupo hidrocarbilo Ci-4 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de flúor; hidroxilo; hidrocarbiloxilo C1-4; amino; mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4; e grupos carbocíclicos ou heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, e em que um dos átomos de carbono do grupo hidrocarbilo pode estar opcionalmente substituído com um átomo ou grupo seleccionado de 0, NH, SO e SO2.
No grupo (i), um subgrupo de grupos R1 consiste de fenilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de flúor; cloro; hidroxilo; hidrocarbiloxilo C1-3; e hidrocarbilo C1-3 em que o grupo hidrocarbilo C1-3 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes escolhidos de hidroxilo, flúor, alcoxilo C1-2, amino, mono e di-alquil Ci-4-amino, grupos carbocíclicos saturados possuindo 3 a 7 membros endocíclicos (de um modo mais preferido 4, 5 ou 6 membros endocíclicos, e. g., 5 ou 6 membros endocíclicos) ou grupos heterocíclicos saturados de 5 ou 6 membros endocíclicos e contendo até 2 heteroátomos seleccionados de 0, Se N.
Noutro subgrupo de compostos da fórmula (II), R1 é seleccionado de (i) e (iii) acima e adicionalmente de um subconjunto (aii) em que o subconjunto (aii) consiste de 2-furanilo, 3-furanilo, imidazolilo, 2-piridilo, indolilo, 2-tienilo e 3-tienilo, cada opcionalmente substituído com urn ou mais substituintes seleccionados de flúor, cloro, hidrocarbiloxilo C1-3 e hidrocarbilo C1-3 opcionalmente substituído com hidroxilo, flúor ou metoxilo.
No grupo de compostos definidos pela fórmula (II), em que R1 é (i) um grupo fenilo opcionalmente substituído, este pode ser, por exemplo, um grupo fenilo não substituído ou um grupo fenilo 2-monossubstituído, 3-monossubstituído, 2,3-dissubstituído, 2.5- dissubstituído ou 2,6-dissubstituído ou 2,3-di-hidro- benzo[1,4]dioxina, em que os substituintes são seleccionados de halogéneo; hidroxilo; alcoxilo C1-3; e grupos alquilo C1-3 em que o grupo alquilo C1-3 está opcionalmente substituído com hidroxilo, flúor, alcoxilo C1-2, amino, mono e di-alquil C1-4-amino, ou grupos carbocíclicos saturados possuindo 3 a 6 membros endocíclicos e/ou grupos heterocíclicos saturados de 5 ou 6 membros endocíclicos e contendo 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de N e 0.
Numa forma de realização, R1 é seleccionado de fenilo não substituído, 2-fluorofenilo, 2-hidroxifenilo, 2-metoxifenilo, 2- metilfenilo, 2-(2-(pirrolidin-l-il)etoxi)-fenilo, 3- fluorofenilo, 3-metoxifenilo, 2,6-difluorofenilo, 2-fluoro-6- hidroxifenilo, 2-fluoro-3-metoxifenilo, 2-fluoro-5-metoxifenilo, 2-cloro-6-metoxifenilo, 2-fluor0-6-metoxifenilo, 2.6- diclorofenilo e 2-cloro-6-fluorofenilo, e é ainda opcionalmente seleccionado de 5-fluoro-2-metoxifenilo.
Noutra forma de realização, R1 é seleccionado de fenilo não substituído, 2-fluorofenilo, 2-hidroxifenilo, 2-metoxifenilo, 2- metilfenilo, 2-(2-(pirrolidin-l-il)etoxi)-fenilo, 3- fluorofenilo, 3-metoxifenilo, 2,6-difluorofenilo, 2-fluoro-6- hidroxifenilo, 2-fluoro-3-metoxifenilo e 2-fluoro-5- metoxifenilo.
Os grupos R1 particulares são 2,6-difluorofenilo, 2-fluoro-6-metoxifenilo e 2,6-diclorofenilo.
Um grupo R1 particularmente preferido é 2,6-difluorofenilo.
Outro grupo R1 particularmente preferido é 2,6-diclorofenilo.
Quando R1 é (ii) um grupo heteroarilo monociclico contendo um ou dois heteroátomos seleccionados de 0, S e N ou um grupo heteroarilo biciclico contendo um único heteroátomo, os exemplos de grupos heteroarilo monociclicos e biciclicos incluem os grupos furanilo (e. g., 2-furanilo e 3-furanilo), imidazolilo, piridilo (e. g., 2-piridilo), indolilo, tienilo (e. g., 2- tienilo e 3-tienilo). Os substituintes opcionais para tais grupos podem incluir os grupos cloro, flúor, metilo, metoxilo, hidroximetilo, metoximetilo, morfolinometilo, piperazinometilo, N-metilypiperazinometilo e piperidinilmetilo. Os exemplos particulares de grupos (ii) incluem 2-furanilo não substituído, 3- metil-2-furanilo, 4-(1H)-imidazolilo não substituído, 5-(lH)- imidazolilo não substituído, 3-furanilo não substituído, 3-tienilo não substituído, 2-metil-3-tienilo e 3-pirrolilo não substituído, e outros exemplos incluem os grupos 4-metoxi-3-tienilo, 5-(1-pirrolidinil) metil-2-furilo e 5-(4-morfolino)metil-2-furilo.
Quando R1 é (iii) um grupo cicloalquilo opcionalmente substituído, este pode ser, por exemplo, um grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo ou ciclo-hexilo substituído ou não substituído. Quando o grupo cicloalquilo está substituído, os substituintes preferidos incluem metilo, flúor e hidroxilo. Os exemplos particulares de grupos cicloalquilo incluem 1-metilciclopropilo, 1-hidroxiciclopropilo, e ciclo-hexilo, ciclopentilo e ciclobutilo não substituídos.
No contexto da fórmula (II) e do grupo R1, os exemplos de grupos hidrocarbilo opcionalmente substituídos são os grupos metilo, etilo e propilo opcionalmente substituídos em que um dos átomos de carbono do grupo hidrocarbilo está opcionalmente substituído com 0, NH, SO ou SO2. Os exemplos particulares de tais grupos incluem metilo, etilo, trifluorometilo, metilo e etilo substituídos com um grupo carbocíclico ou heterocíclico possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, sulfonilmetilo substituído com um grupo carbocíclico ou heterocíclico possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, hidroximetilo, hidroxietilo, 3-hidroxi-2-propilo, propilo, isopropilo, butilo e butilo terciário. Os exemplos de grupos hidrocarbilo e grupos carbocíclicos e heteroacíclicos são como indicados acima nas definições gerais desses grupos. Os grupos carbocíclicos e heterocíclicos particulares incluem fenilo, indolilo, tetrazolilo, triazolilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, N-metilpiperazinilo, imidazolilo não substituídos ou substituídos, em que os substituintes opcionais podem ser seleccionados do grupo R10, e seus subgrupos, como aqui definidos.
Noutro subgrupo de compostos da fórmula (II), R1 é um grupo hidrocarbilo C1-4 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de flúor, hidroxilo, hidrocarbiloxilo C1-4, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, e grupos carbocíclicos ou heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endocíclicos, e em que 1 dos átomos de carbono do grupo hidrocarbilo pode estar opcionalmente substituído com um átomo ou grupo seleccionado de 0, NH, SO e SO2.
Numa forma de realização, R1 é um grupo Rla-(V)n- em que: n é 0 ou 1; V é seleccionado de CH2, CH2CH2 e SO2CH2; e
Rla é um grupo carbocíclico ou heterocíclico seleccionado de fenilo; anéis heteroarilo de cinco membros possuindo até 4 membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de N, 0 e S; anéis heteroarilo de seis membros contendo um ou dois membros endocíclicos de azoto; anéis heterocíclicos não aromáticos saturados de cinco ou seis membros contendo um ou dois membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de N, 0, S e SO2; grupos cicloalquilo C3-6; indole; e quinolina; em que cada dos grupos carbocíclicos e heterocíclicos Rla pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de grupos carbocíclicos e heterocíclicos não aromáticos saturados de cinco ou seis membros contendo até dois membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de N, 0, S e SO2; hidroxilo; amino; oxo; mono-alquil Ci-4-amino; di-alquil Ci-4-amino; flúor; cloro; nitro; alquil Ci-4-(0)q- em que q é 0 ou 1 e a unidade alquilo C1-4 está opcionalmente substituída com flúor, hidroxilo, alcoxilo C1-2 ou um grupo carbocíclico ou heterocíclico não aromático saturado de cinco ou seis membros contendo até dois membros endocíclicos de heteroátomo seleccionados de N, 0, S e SO2; fenilo e alquilenodioxilo-Ci-2.
Os exemplos específicos de grupos R1-CO- na fórmula (II) sao indicados no Quadro 1 acima.
Um subgrupo de grupos R1-CO preferidos consiste dos grupos J, AB, AH, AJ, AL, AS, AX, AY, AZ, BA, BB, BD, BH, BL, BQ e BS.
Outro subgrupo de grupos R1-CO consiste dos grupos A a BF.
Um outro subgrupo de grupos R1-CO consiste dos grupos A a BS .
Os grupos particularmente preferidos são os grupos AJ, BQ e BS no Quadro 1, e. g., o subconjunto consistindo de AJ e BQ.
Outro subgrupo de compostos da fórmula (II) pode ser representado pela fórmula (IV):
ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R1 e R2 são como aqui definidos; uma segunda ligação opcional pode estar presente entre os átomos de carbono numerados 1 e 2; um de U e T é seleccionado de CH2, CHR13, CR41R13, NR14, N(0)R15, 0 e S(0)t; e o outro de U e T é seleccionado de, NR14, 0, CH2, CHR11, C(R41)2 e C=0; r é 0, 1, 2, 3 ou 4; t é 0, 1 ou 2; R11 é seleccionado de hidrogénio, halogéneo (particularmente flúor), alquilo C1-3 (e. g., metilo) e alcoxilo C1-3 (e. g., metoxilo); R13 é seleccionado de hidrogénio, NHR14, NOH, NOR14 e Ra-Rb; R14 é seleccionado de hidrogénio e Rd-Rb;
Rd é seleccionado de uma ligação, CO, C(X2)X4, SO2 e SChNR0;
Ra, Rb e Rc são como definidos acima; e R15 é seleccionado de hidrocarbilo C1-4 saturado opcionalmente substituído com hidroxilo, alcoxilo C1-2, halogéneo ou um grupo carbocíclico ou heterocíclico monocíclico de 5 ou 6 membros, com a condição de que U e T não possam ser 0 simultaneamente.
Os exemplos e preferências para os grupos R1 e R2 são como indicados acima para os compostos da fórmula (II), a menos que o contexto indique em contrário.
Na fórmula (IV), r pode ser 0, 1, 2, 3 ou 4. Numa forma de realização, ré 0. Noutra forma de realização, r é 2, e numa outra forma de realização r é 4.
Na fórmula (IV), um subconjunto de compostos preferidos é o conjunto de compostos em que existe apenas uma ligação simples entre os átomos de carbono numerados 1 e 2.
No entanto, noutro subconjunto de compostos, existe uma ligação dupla entre os átomos de carbono numerados 1 e 2.
Outro subconjunto de compostos é caracterizado por dissubstituição geminai no carbono 2 (quando existe uma ligação simples entre os átomos de carbono números 1 e 2) e/ou o carbono 6. Os dissubstituintes geminados preferidos incluem difluoro e dimetilo.
Um outro subconjunto de compostos é caracterizado pela presença de um grupo alcoxilo, por exemplo, um grupo metoxilo no átomo de carbono numerado 3, i. e., numa posição α em relação ao grupo T.
Na fórmula (IV) estão compostos em que, por exemplo, R3 é seleccionado de qualquer dos seguintes sistemas de anel:
Os sistemas de anel preferidos incluem G1 e G3.
Um subgrupo preferido de compostos na fórmula (IV) pode ser representado pela fórmula (IVa):
ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R1 e R2 são como definidos acima; um de U e T é seleccionado de CH2, CHR13, CR41R13, NR14, N(0)R15, 0 e S(0)t; e o outro de U e T é seleccionado de CH2, CHR11, C(R11)2 e C=0; r é 0, 1 ou 2; t é 0, 1 ou 2 ; R11 é seleccionado de hidrogénio e alquilo C1-3; R13 é seleccionado de hidrogénio e Ra-Rb; R14 é seleccionado de hidrogénio e Rd-Rb;
Rd é seleccionado de uma ligação, CO, C(X2)X4, SO2 e SC>2NRC;
Ra, Rb e Rc são como definidos acima; e R15 é seleccionado de hidrocarbilo C1-4 saturado opcionalmente substituído com hidroxilo, alcoxilo C1-2, halogéneo ou um grupo carbocíclico ou heterocíclico monocíclico de 5 ou 6 membros.
Os exemplos e preferências para os grupos R1 e R2 são como indicados acima para os compostos da fórmula (II), a menos que o contexto indique em contrário.
Na fórmula (IVa), T é de um modo preferido seleccionado de CH2, CHR13, CR41R13, NR14, N(0)R15, 0 e S (0) t; e U é, de um modo preferido seleccionado de CH2, CHR11, C(R11)2 e C=0.
Nas definições para os subst ituintes R11 e R14, Rb é de um modo preferido seleccionado de hidrogénio; grupos carbocíclicos e heterocíclicos monocíclicos possuindo desde 3 a 7 membros endocíclicos; e hidrocarbilo Ci-4 (de um modo mais preferido grupos Ci-4 acíclicos saturados) opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, oxo, halogéneo, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino Ci-4, e grupos carbocíclicos e heterocíclicos monocíclicos possuindo desde 3 a 7 membros endocíclicos (de um modo mais preferido 3 a 6 membros endocí clicos) e em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo Ci-4 podem estar opcionalmente substituídos com 0, S, SO, S02, NRC, X4C (X2) , C (X2) X1 ; Rc é seleccionado de hidrogénio e hidrocarbilo C1-4; e X1 é 0, S ou NRC e X2 é =0, =S ou =NRC. R11 é de um modo preferido seleccionado de hidrogénio e metilo e de um modo muito preferido é hidrogénio. R13 é de um modo preferido seleccionado de hidrogénio; hidroxilo; halogéneo; ciano; amino; mono-hidrocarbilamino C1-4 saturado; di-hidrocarbilamino C1-4 saturado; grupos carbocíclicos e heterocíclicos monocíclicos de 5 ou 6 membros; hidrocarbilo C1-4 saturado opcionalmente substituído com hidroxilo, alcoxilo
Ci-2 , halogéneo ou um grupo carbocíclico ou heterocíclico monocíclico de 5 ou 6 membros.
Os exemplos particulares de R13 são hidrogénio, hidroxilo, amino, alquilamino C1-2 (e. g., metilamino) alquilo C1-4 (e. g., metilo, etilo, propilo e butilo) , alcoxilo C1-2 (e. g., metoxilo), alquil Ci-2-sulfonamido (e. g., metanossulfonamido), hidroxi-alquilo C1-2 (e. g., hidroximetilo) , alcoxi-Ci-2-alquilo C1-2 (e. g., metoximetilo e metoxietilo) , carboxilo, alcoxi Ci-4-carbonilo (e. g., etoxicarbonilo) e amino-alquilo-Ci-2 (e. g., aminometilo) .
Os exemplos particulares de R14 são hidrogénio; alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou um grupo heterocíclico saturado de cinco ou seis membros (e. g., um grupo seleccionado de (i) metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo, 2,2,2-trifluoroetilo e tetra-hidrofuranilmetilo; e/ou (ii) 2-fluoroetilo e 2,2-difluoroetilo); ciclopropilmetilo; piridil-alquilo C1-2 substituído ou não substituído (e. g., 2-piridilmetilo); fenil-alquilo C1-2 substituído ou não substituído (e. g., benzilo) ; alcoxi Ci-4-carbonilo (e. g., etoxicarbonilo e t-butiloxicarbonilo); fenil-alcoxi-Ci-2-carbonilo substituído e não substituído (e. g., benziloxicarbonilo); grupos heteroarilo de 5 e 6 membros substituídos e não substituídos, tais como piridilo (e. g., 2-piridilo e 6-cloro-2-piridilo) e pirimidinilo (e. g., 2-pirimidinilo) ; alcoxi-Ci-2-alquilo C1-2 (e. g., metoximetilo e metoxietilo); alquil Ci-4-sulfonilo (e. g., metanossulfonilo).
Os compostos preferidos incluem aqueles em que (i) U é CHR13 (de um modo mais preferido CH2) e T é NR14, e (ii) T é CHR13 (de um modo mais preferido CH2) e U é NR14.
Um subgrupo particular preferido de compostos da fórmula (IV) pode ser representado pela fórmula (Va):
ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R14a é seleccionado de hidrogénio, alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro (e. g., metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo e 2,2,2-trifluoroetilo), ciclopropilmetilo, fenil-alquilo C1-2 (e. g., benzilo), alcoxi Ci-4-carbonilo (e. g., etoxicarbonilo e t-butiloxicarbonilo) , f enil-alcoxi-Ci-2-carbonilo (e. g.r benziloxicarbonilo) , alcoxi-Ci-2-alquilo C1-2 (e. g., metoximetilo e metoxietilo) e alquil Ci-4-sulfonilo (e. g., metanossulfonilo), em que as unidades fenilo, quando presentes, estão opcionalmente substituídas com um até três substituintes seleccionados de flúor, cloro, alcoxilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2, e alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2; w é 0, 1, 2 ou 3; R2 é hidrogénio ou metilo, de um modo muito preferido hidrogénio; R11 e r são como definidos acima; e R19 é seleccionado de flúor; cloro; alcoxilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2; e alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2.
Outro subgrupo particular preferido de compostos da fórmula (IV) pode ser representado pela fórmula (Vb):
ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R14a é seleccionado de hidrogénio, alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro (e. g., metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo e 2,2,2-trifluoroetilo), ciclopropilmetilo, fenil-alquilo C1-2 (e. g., benzilo), alcoxi Ci-4-carbonilo (e. g., etoxicarbonilo e t-butiloxicarbonilo) , f enil-alcoxi-Ci-2-carbonilo (e. g., benziloxicarbonilo) , alcoxi-Ci-2-alquilo C1-2 (e. g., metoximetilo e metoxietilo) e alquil Ci-4-sulfonilo (e. g.metanossulfonilo), em que as unidades fenilo, quando presentes, estão opcionalmente substituídas com um até três substituintes seleccionados de flúor, cloro, alcoxilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2, e alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2; w é 0, 1, 2 ou 3; R2 é hidrogénio ou metilo, de um modo muito preferido hidrogénio; R11 e r são como definidos acima; e R19 é seleccionado de flúor; cloro; alcoxilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2; e alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2.
Nas fórmulas (Va) e (Vb) , quando w é 1, 2 ou 3, é preferido que o anel fenilo seja 2-monossubstituído, 3-monossubstituído, 2.6- dissubstituído, 2,3-dissubstituído, 2,4-dissubstituído, 2,5-dissubstituído, 2,3,6-trissubstituído ou 2.4.6- trissubstituído. De um modo muito preferido o anel fenilo está dissubstituído nas posições 2 e 6 com substituintes seleccionados de flúor, cloro e metoxilo. R11 é de um modo preferido hidrogénio (ou r é 0). R14a é de um modo muito preferido hidrogénio ou metilo.
Um subgrupo preferido de compostos da fórmula (Va) pode ser representado pela fórmula (Via):
ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R20 é seleccionado de hidrogénio e metilo; R21 é seleccionado de flúor e cloro; e R22 é seleccionado de flúor, cloro e metoxilo; ou um de R21 e R22 é hidrogénio e o outro é seleccionado de cloro, metoxilo, etoxilo, difluorometoxilo, trifluorometoxilo e benziloxilo.
Outro subgrupo preferido de compostos da fórmula (Va) pode ser representado pela fórmula (VIb):
ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R20 é seleccionado de hidrogénio e metilo; R21a é seleccionado de flúor e cloro; e R22a é seleccionado de flúor, cloro e metoxilo.
Compostos particulares na fórmula (VIb) incluem: piperidin-4-ilamida do ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-ΙΗ-pirazole-3-carboxilico; (l-metil-piperidin-4-il)-amida do ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxilico; piperidin-4-ilamida do ácido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxilico; e piperidin-4-ilamida do ácido 4-(2-fluoro-6-metoxi- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxilico; ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos. (II) Para que não fiquem dúvidas, é para ser entendido que cada preferência, forma de realização e exemplo geral e especifico dos grupos R1 pode ser combinado com cada preferência, forma de realização e exemplo geral e especifico dos grupos R2 e/ou R3 e/ou R4 e/ou R10 e/ou Y e/ou Rg e/ou seus subgrupos como aqui definidos e que todas estas associações estão abrangidas por este pedido.
Os vários grupos funcionais e substituintes que constituem os compostos da fórmula (II) são tipicamente escolhidos de tal forma que o peso molecular do composto da fórmula (II) não excede 1000. Mais geralmente, o peso molecular do composto será inferior a 750, por exemplo, inferior a 700, ou inferior a 650, ou inferior a 600, ou inferior a 550. De um modo mais preferido, o peso molecular é inferior a 525 e, por exemplo, é de 500 ou menos.
Os compostos particulares da fórmula (II) são como ilustrados nos exemplos abaixo.
Sais, Solvatos, Tautómeros, Isómeros, N-Óxidos, Ésteres,
Profármacos e Isótopos
Salvo indicação em contrário, uma referência a um composto particular também inclui as formas iónicas, de sal, solvato e protegidas do mesmo, por exemplo, como discutido abaixo.
Muitos compostos da fórmula (II) podem existir na forma de sais, por exemplo, sais de adição de ácido ou, em determinados casos sais de bases orgânicas e inorgânicas, tais como sais de carboxilato, sulfonato e fosfato. Todos esses sais estão no âmbito desta invenção e as referências a compostos da fórmula (II) incluem as formas de sal dos compostos. Como nas secções anteriores deste pedido, todas as referências a fórmula (II) devem ser consideradas como se referindo também às fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e a seus subgrupos, a menos que o contexto indique em contrário.
As formas de sal podem ser seleccionadas e preparadas de acordo com métodos descritos em Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, livro de capa dura, 388 páginas, Agosto 2002.
Os sais de adição de ácido podem ser preparados com uma grande variedade de ácidos, inorgânicos e orgânicos. Exemplos de sais de adição de ácido incluem sais preparados com um ácido seleccionado do grupo consistindo de ácidos acético, 2,2-dicloroacético, adipico, alginico, ascórbico (e. g., L-ascórbico), L-aspártico, benzenossulfónico, benzóico, 4-acetamidobenzóico, butanóico, (+) canfórico, canforsulfónico, (+)-(IS)-canfor-10-sulfónico, cáprico, capróico, caprilico, cinâmico, cítrico, ciclâmico, dodecilsulfúrico, etano-1,2- dissulfónico, etanossulfónico, 2-hidroxietanossulfónico, fórmico, fumárico, galactárico, gentísico, gluco-heptónico, D-glucónico, glucurónico (e. g., D-glucurónico), glutâmico (e. g., L-glutâmico), α-oxoglutárico, glicólico, hipúrico, bromídrico, clorídrico, iodídrico, isetiónico, (+)-L-láctico, (±)-DL-láctico, lactobiónico, maleico, málico, (-)-L-málico, malónico, (±)-DL-mandélico, metanossulfónico, naftaleno-2-sulfónico, naftaleno-1,5-dissulfónico, l-hidroxi-2-naftóico, nicotínico, nítrico, oleico, orótico, oxálico, palmítico, pamóico, fosfórico, propiónico, L-piroglutâmico, salicílico, 4-amino-salicílico, sebácico, esteárico, succínico, sulfúrico, tânico, (+)-L-tartárico, tiociânico, p-toluenossulfónico, undecilénico e valérico, bem como aminoácidos acilados e resinas de troca catiónica.
Um grupo particular de sais consiste de sais preparados a partir dos ácidos clorídrico, iodídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, cítrico, láctico, succínico, maleico, málico, isetiónico, fumárico, benzenossulfónico, toluenossulfónico, metanossulfónico, etanossulfónico, naftalenossulfónico, valérico, acético, propanóico, butanóico, malónico, glucurónico e lactobiónico.
Um grupo preferido de sais consiste de sais preparados a partir dos ácidos clorídrico, acético, adípico, L-aspártico e DL-láctico.
Os sais particularmente preferidos são sais de cloridrato.
Por exemplo, se o composto é aniónico, ou tem um grupo funcional que pode ser aniónico (e. g. , -COOH pode ser -COO-) , então pode ser preparado um sal com um catião adequado. Exemplos de catiões inorgânicos adequados incluem, mas não estão limitados a, iões de metais alcalinos, tais como Na+ e K+, catiões alcalino-terrosos, tais como Ca2+ e Mg2+, e outros catiões tal como Al3+. Exemplos de catiões orgânicos adequados incluem, mas não estão limitados a, ião amónio (i. e., NH4+) e iões amónio substituídos (e. g., NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+) . Exemplos de alguns iões amónio substituídos adequados são aqueles derivados de: etilamina, dietilamina, diciclo-hexilamina, trietilamina, butilamina, etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, benzilamina, fenilbenzilamina, colina, meglumina e trometamina, bem como aminoácidos, tais como lisina e arginina. Um exemplo de um ião amónio quaternário comum é o N(CH3)4+.
Quando os compostos da fórmula (II) contêm uma função amina, estes podem formar sais de amónio quaternário, por exemplo, por reacção com um agente alquilante de acordo com métodos bem conhecidos do especialista. Tais compostos de amónio quaternário estão no âmbito da fórmula (II).
As formas de sal dos compostos da fórmula (II) são tipicamente sais farmaceuticamente aceitáveis, e os exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são discutidos em Berge et al. , 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts", J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19. No entanto, sais que não são farmaceuticamente aceitáveis também podem ser preparados como formas intermediárias que podem ser depois convertidas em sais farmaceuticamente aceitáveis. Tais formas de sais não farmaceuticamente aceitáveis, as quais podem ser úteis, por exemplo, na purificação ou separação dos compostos da fórmula (II), também fazem parte da invenção.
Os compostos da fórmula (II) contendo uma função amina também podem formar N-óxidos. A referência aqui a um composto da fórmula (II) que contém uma função amina também inclui o N-óxido.
Quando um composto contém várias funções amina, um ou mais do que um átomo de azoto podem ser oxidados para formar um N-óxido. Exemplos particulares de N-óxidos são os N-óxidos de uma amina terciária ou de um átomo de azoto de um heterociclo contendo azoto.
Os N-óxidos podem ser preparados por tratamento da amina correspondente com um agente oxidante, tais como peróxido de hidrogénio ou um per-ácido (e. g., um ácido peroxicarboxílico) , ver por exemplo, Advanced Organic Chemistry, de Jerry March, 4a Edição, Wiley Interscience, páginas. Mais particularmente, os N-óxidos podem ser preparados pelo processo de L. W. Deady (Syn. Comm. 1977, 7, 509-514) no qual o composto de amina é feito reagir com ácido m-cloroperoxibenzóico (MCPBA), por exemplo, num solvente inerte tal como diclorometano.
Os compostos da fórmula (II) podem existir num número de formas isoméricas geométricas e tautoméricas diferentes e as referências a compostos da fórmula (II) incluem todas essas formas. Para que não fiquem dúvidas, quando um composto pode existir em uma de várias formas isoméricas geométricas ou tautoméricas e apenas é especificamente descrita ou mostrada uma, todas as outras estão, apesar disso, abrangidas pela fórmula (II).
Por exemplo, nos compostos da fórmula (II), o grupo pirazole pode adquirir qualquer uma das seguintes duas formas tautoméricas A e B (em que X representa R1(CO)NH). Para facilitar, a fórmula geral (II) ilustra a forma A mas a fórmula é para ser considerada como abrangendo ambas as formas tautoméricas.
Outros exemplos de formas tautoméricas incluem, por exemplo, as formas ceto, enol e enolato, como, por exemplo, nos seguintes partes tautoméricos: ceto/enol (ilustrado abaixo), imina/enamina, amida/iminoálcool, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enetiol e nitro/aci-nitro.
Quando os compostos da fórmula (II) contêm um ou mais centros quirais, e podem existir na forma de dois ou mais isómeros ópticos, as referências a compostos da fórmula (II) incluem todas as suas formas ópticas isoméricas (e. g., enantiómeros, epimeros e diastereoisómeros), como isómeros ópticos individuais, ou misturas (e. g., misturas racémicas) ou dois ou mais isómeros ópticos, a menos que o contexto requeira em contrário.
Os isómeros ópticos podem ser caracterizados e identificados pela sua actividade óptica (i. e. como isómeros + e - ou isómeros del) ou podem ser caracterizados em termos da sua estereoquimica absoluta utilizando a nomenclatura "R e S" desenvolvida por Cahn, Ingold e Prelog, ver Advanced Organic Chemistry de Jerry March, 4a Edição, John Wiley & Sons, Nova
Iorque, 1992, páginas 109-114, e ver também Cahn, Ingold & Prelog, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1966, 5, 385-415.
Os isómeros ópticos podem ser separados por um número de técnicas incluindo cromatografia quiral (cromatografia sobre um suporte quiral) e tais técnicas são bem conhecidas do especialista na técnica.
Quando os compostos da fórmula (II) existem como duas ou mais formas ópticas isoméricas, um enantiómero num par de enantiómeros pode exibir vantagens em relação ao outro enantiómero, por exemplo, em termos de actividade biológica.
Assim, em certas circunstâncias, pode ser desejável utilizar como um agente terapêutico apenas um de um par de enantiómeros, ou apenas um de uma multiplicidade de diastereoisómeros. Por conseguinte, a invenção proporciona composições contendo um composto da fórmula (II) possuindo um ou mais centros quirais, em que pelo menos 55% (e. g., pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou 95%) do composto da fórmula (II) está presente como um único isómero óptico (e. g., enantiómero ou diastereoisómero). Num forma de realização geral, 99% ou mais (e. g., substancialmente toda) da quantidade total do composto da fórmula (II) pode estar presente como um único isómero óptico (e. g., enantiómero ou diastereoisómero).
Os compostos da fórmula (II) incluem compostos com uma ou mais substituições isotópicas e uma referência a um elemento particular inclui no seu âmbito todos os isótopos do elemento. Por exemplo, uma referência a hidrogénio inclui no seu âmbito 2H, 2H (D), e 3H (T) . Analogamente, as referências a carbono e oxigénio incluem no seu âmbito 12C, 13C e 14C e 160 e 18°, respectivamente.
Os isótopos podem ser radioactivos ou não radioactivos. Numa forma de realização da invenção, os compostos não têm quaisquer isótopos radioactivos. Tais compostos são preferidos para utilização terapêutica. Noutra forma de realização, contudo, o composto pode conter um ou mais radioisótopos. Os compostos contendo tais radioisótopos podem ser úteis num contexto de diagnóstico.
Os ésteres, tais como os ésteres de ácido carboxílico e ésteres de aciloxilo dos compostos de fórmula (II) que têm um grupo ácido carboxílico ou um grupo hidroxilo também estão abrangidos pela Fórmula (II) . Os exemplos de ésteres são compostos contendo o grupo -C(=0)0R, em que R é um substituinte éster, por exemplo, um grupo alquilo C1-7, um grupo heterociclilo C3-20 ou um grupo arilo C5-20, de um modo preferido um grupo alquilo C1-7. Os exemplos particulares de grupos éster incluem, mas não estão limitados a, -C(=0)0CH3, C (=0) OCH2CH3, -C (=0) 0C (CH3) 3 e -C(=0)0Ph. Os exemplos de grupos aciloxilo (éster inverso) são representados por -0C(=0)R, em que R é um substituinte aciloxilo, por exemplo, um grupo alquilo Ci-7, um grupo heterociclilo C3-20 ou um grupo arilo C5-20, de um modo preferido um grupo alquilo C1-7. Os exemplos particulares de grupos aciloxilo incluem, mas não estão limitados a, -00(=0)0¾ (acetoxi), -0C (=0) CH2CH3, -0C (=0) C (CH3) 3, -0C(=0)Ph e -OC(=0)CH2Ph.
Também estão abrangidas pela fórmula (II) quaisquer formas polimórficas dos compostos, solvatos (e. g., hidratos) e complexos (e. g., complexos de inclusão ou clatratos com compostos, tais como ciclodextrinas, ou complexos com metais) dos compostos. Por exemplo, alguns profármacos são ésteres do composto activo (e. g., um éster metabolicamente instável fisiologicamente aceitável). Durante o metabolismo, o grupo éster (-C(=0)0R) é dissociado para produzir o fármaco activo. Tais ésteres podem ser preparados por esterificação, por exemplo, de qualquer dos grupos ácido carboxilico (-C(=0)0H) no composto parental com, quando apropriado, protecção anterior de quaisquer outros grupos reactivos presentes no composto parental, seguida de desprotecção se necessário.
Os exemplos de tais ésteres metabolicamente instáveis incluem aqueles da fórmula - C(=0)0R em que R é: alquilo C1-7 (e. g., -Me, -Et, -nPr, -iPr, -nBu, -sBu, -iBu, -tBu); aminoalquilo C1-7 (e. g. , aminoetilo; 2-(N,N-dietilamino)etilo; 2-(4-morfolino)etilo); e aciloxi-alquilo C1-7 (e. g., aciloximetilo; aciloxietilo; pivaloiloximetilo; acetoximetilo; 1-acetoxietilo; 1-(1-metoxi-l-metil)etil-carboniloxietilo; 1-(benzoiloxi)etilo; isopropoxi-carboniloximetilo; 1-isopropoxi-carboniloxietilo; ciclo-hexil-carboniloxime- tilo; 1-ciclo-hexil-carboniloxietilo; ciclo-hexiloxi-carboniloximetilo; 1-ciclo-hexiloxi-carboniloxietilo; (4-tetra-hidropiraniloxi)carboniloximetilo; 1-(4-tetra-hidropiraniloxi)carboniloxietilo; (4-tetra-hidropiranil)carboniloximetilo; e 1-(4-tetra-hidropiranil)carboniloxietilo).
De igual modo, alguns profármacos são enzimaticamente activados para produzir o composto activo, ou um composto que, após reacção química subsequente, produz o composto activo (por exemplo, como em ADEPT, GDEPT, LIDEPT, etc.). Por exemplo, o profármaco pode ser um açúcar derivado ou outro glicósido conjugado, ou pode ser um derivado éster de aminoácido.
Actividade Biológica
Os compostos das fórmulas (II), (IV), (IVa), (Va), (Vb) , (Via) ou (VIb) e seus subgrupos são inibidores de cinases dependentes de ciclina, e em particular cinases dependentes de ciclina seleccionadas de CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5 e CDK6.
Os compostos preferidos são compostos que inibem uma ou mais cinases CDK seleccionados de CDK1, CDK2, CDK4 e CDK5, por exemplo, CDK1 e/ou CDK2.
Os compostos da fórmula (II) também são considerados ser inibidores da glicogénio sintase-cinase-3 (GSK3).
Como uma consequência da sua actividade na modulação ou inibição de cinases CDK e glicogénio sintase-cinase é esperado que sejam úteis para proporcionar um meio de parar ou recuperar o controlo do ciclo celular em células em divisão anormal. Por conseguinte, antecipa-se que os compostos serão úteis no tratamento ou prevenção de distúrbios proliferativos, tais como cancros. Prevê-se também que os compostos da fórmula (II) serão úteis no tratamento de condições tais como, por exemplo, infecções virais, diabetes mellitus de tipo II ou não insulino-dependente, doenças auto-imunes, traumatismo craniano, acidente vascular cerebral, epilepsia, doenças neurodegenerativas, tais como Alzheimer, doença do neurónio motor, paralisia supranuclear progressiva, degenerescência corticobasal e doença de Pick. Um subgrupo de estados e condições patológicas em que se prevê que os compostos da fórmula (II) serão úteis consiste de infecções virais, doenças auto-imunes e doenças neurodegenerativas.
As CDK desempenham um papel na regulação do ciclo celular, apoptose, transcrição, diferenciação e função do SNC. Por conseguinte, os inibidores de CDK poderiam ser úteis no tratamento de doenças em que existe um distúrbio da proliferação, apoptose ou diferenciação tal como o cancro. Em particular, os tumores RB+vo podem ser particularmente sensíveis a inibidores de CDK. Os tumores RB-vo também podem ser sensíveis a inibidores de CDK.
Os exemplos de cancros que podem ser inibidos incluem, mas não estão limitados a, um carcinoma, por exemplo, um carcinoma da bexiga, mama, cólon (e. g., carcinomas colorrectais, tais como adenocarcinoma do cólon e adenoma do cólon) , rim, epiderme, fígado, pulmão, por exemplo, adenocarcinoma, cancro das células pequenas do pulmão e carcinomas das células não pequenas do pulmão, esófago, vesícula biliar, ovário, pâncreas, e. g., carcinoma pancreático exócrino, estômago, cérvix, tireoide, próstata ou pele, por exemplo, carcinoma de células escamosas; um tumor hematopoiético de linhagem linfóide, por exemplo, leucemia, leucemia linfocítica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma de não-Hodgkin, linfoma de tricoleucitos ou linfoma de Burkett; um tumor hematopoiético de linhagem mielóide, por exemplo, leucemias mielóides agudas e crónicas, síndrome mielodisplásica ou leucemia promielocítica; cancro folicular da tireoide; um tumor de origem mesenquimal, por exemplo, fibrossarcoma ou rabdomiossarcoma, um tumor do sistema nervoso central ou periférico, por exemplo, astrocitoma, neuroblastoma, glioma ou schwannoma; melanoma; seminoma; teratocarcinoma; osteossarcoma; xeroderma pigmentosum; queratoacantoma; cancro folicular da tireoide; ou sarcoma de Kaposi.
Os cancros podem ser cancros que são sensíveis à inibição de qualquer ou mais cinases dependentes de ciclina seleccionadas de CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5 e CDK6, por exemplo, uma ou mais cinases CDK seleccionadas de CDK1, CDK2, CDK4 e CDK5, e. g., CDK1 e/ou CDK2.
Se um cancro particular é ou não um que é sensível à inibição por uma cinase dependente de ciclina pode ser determinado por meio de um ensaio de crescimento de células como indicado no Exemplo 250 abaixo ou por um método como indicado na secção intitulada "Métodos de Diagnóstico".
As CDK também são conhecidas por desempenhar um papel na apoptose, proliferação, diferenciação e transcrição e, por conseguinte, os inibidores de CDK também poderiam ser úteis no tratamento das seguintes doenças que não o cancro; infecções virais, por exemplo, virus do herpes, virus da variola, virus de Epstein-Barr, virus Sindbis, adenovirus, HIV, HPV, HCV e HCMV; prevenção do desenvolvimento de SIDA em indivíduos infectados por HIV; doenças crónicas inflamatórias, por exemplo, lúpus eritematoso disseminado, glomerulonefrite mediada por auto-imune, artrite reumatóide, psoríase, doença inflamatória do intestino e diabetes mellitus auto-imune; doenças cardiovasculares, por exemplo, hipertrofia cardíaca, restenose, aterosclerose; distúrbios neurodegenerativos, por exemplo, doença de Alzheimer, demência relacionada com SIDA, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, retinite pigmentosa, atrofia muscular espinhal e degenerescência cerebelosa; glomerulonefrite; síndromes mielodisplásicas, lesão isquémica associada a enfartes do miocárdio, acidente vascular cerebral e lesão por reperfusão, arritmia, aterosclerose, doenças hepáticas induzidas por toxina ou relacionada com álcool, doenças hematológicas, por exemplo, anemia crónica e anemia aplástica; doenças degenerativas do sistema musculoesquelético, por exemplo, osteoporose e artrite, rinossinusite sensível a aspirina, fibrose quística, esclerose múltipla, doenças renais e dor do cancro.
Foi também verificado que alguns inibidores de cinase dependente de ciclina podem ser utilizados em associação com outros agentes anticancerígenos. Por exemplo, o inibidor de cinase dependente de ciclina flavopiridol foi utilizado com outros agentes anticancerígenos em terapia de associação.
Assim, nas composições farmacêuticas, utilizações ou métodos desta invenção para o tratamento de uma doença ou condição compreendendo crescimento celular anormal, a doença ou condição compreendendo crescimento celular anormal realizaçao é, numa forma de, um cancro.
Um grupo de cancros inclui cancros da mama humanos (e. g., tumores primários da mama, cancro da mama com gânglios linfáticos negativos, adenocarcinomas ductais invasivos da mama, cancros da mama não endometrióides); e linfomas das células do manto. Além disso, outros cancros são os cancros colorrectais e do endométrio.
Outro subconjunto de cancros inclui o cancro da mama, cancro do ovário, cancro do cólon, cancro da próstata, cancro esofágico, cancro escamoso e carcinomas das células não pequenas do pulmão. A actividade dos compostos da fórmula (II) como inibidores de cinases dependentes de ciclina e de glicogénio sintase-cinase-3 pode ser medida utilizando os ensaios estabelecidos nos exemplos abaixo e o nivel de actividade exibida para um dado composto pode ser definida em termos do valor de IC50. Os compostos preferidos da presente invenção são compostos possuindo um valor de IC50 inferior a 1 micromole, de um modo mais preferido inferior a 0,1 micromole. Métodos para a Preparação de Compostos da fórmula (II)
Os compostos da fórmula (II) e os vários subgrupos dos mesmos podem ser preparados de acordo com métodos de síntese bem conhecidos do especialista. Salvo indicação em contrário, R1, R2, R3 e Y são como definidos acima.
Nesta secção, como em todas as outras secções deste pedido, as referências à fórmula (II) devem ser consideradas como referindo também às fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e a subgrupos das mesmas, a menos que o contexto indique em contrário.
Os compostos da fórmula (II) podem ser preparados fazendo reagir um ácido carboxilico da fórmula R1-C02H ou um derivado activado do mesmo com um 4-amino-pirazole apropriadamente substituído como se mostra no Esquema 1.
0 material de partida para a via sintética mostrada no Esquema 1 é o ácido 4-nitro-pirazole-3-carboxí lico (X) o qual pode ser obtido comercialmente ou pode ser preparado por nitração do correspondente composto de pirazole carboxilo não substituído na posição 4. 0 ácido 4-nitro-pirazole carboxilico (X) , ou um derivado reactivo do mesmo, é feito reagir com a amina H2N-Y-R3 para dar a 4-nitro-amida (XI). A reacção de acoplamento entre o ácido carboxílico (X) e a amina é de um modo preferido realizada na presença de um reagente do tipo geralmente utilizado na formação de ligações peptídicas. Exemplos desses reagentes incluem 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) (Sheehan et al. , J. Amer. Chem Soc. 1955, 77, 1067), 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)-carbodiimida (aqui referido como EDC ou EDAC mas também conhecido na técnica como EDCI e WSCDI) (Sheehan et al, J. Org. Chem., 1961, 26, 2525,), agentes de acoplamento à base de urónio tal como hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilurónio (HATU) e agentes de acoplamento à base de fosfónio tal como hexafluorofosfato de 1-benzo-triazoliloxitris-(pirrolidino)fosfónio (PyBOP) (Castro et al., Tetrahedron Letters, 1990, 31, 205). Os agentes de acoplamento à base de carbodiimida são vantajosamente utilizados em associação com l-hidroxi-7-azabenzotriazole (HOAt) (L. A. Carpino, J. Amer. Chem. Soc., 1993, 115, 4397) ou 1-hidroxibenzotriazole (HOBt) (Konig et al., Chem. Ber., 103, 708, 2024-2034). Os reagentes de acoplamento preferidos incluem EDC (EDAC) e DCC em associação com HOAt ou HOBt. A reacção de acoplamento é tipicamente realizada num solvente não prótico, não aquoso tal como acetonitrilo, dioxano, dimetilsulfóxido, diclorometano, dimetilformamida ou N-metilpirrolidina, ou num solvente aquoso opcionalmente em conjunto com um ou mais co-solventes miscíveis. A reacção pode ser realizada à temperatura ambiente ou, quando os reagentes são menos reactivos (por exemplo, no caso de anilinas pobres em electrões que têm grupos atractores de electrões, tais como os grupos sulfonamida) a uma temperatura apropriadamente elevada. A reacção pode ser realizada na presença de uma base não interferente, por exemplo, uma amina terciária tal como trietilamina ou N,N-diisopropiletilamina.
Como uma alternativa pode ser utilizado um derivado reactivo do ácido carboxilico, e. g., um anidrido ou cloreto de ácido. A reacção com um derivado reactivo tal como um anidrido, é tipicamente conseguida agitando a amina e o anidrido à temperatura ambiente na presença de uma base tal como piridina.
As aminas de fórmula H2N-Y-R3 podem ser obtidas a partir de fontes comerciais ou podem ser preparadas por qualquer de um grande número de métodos de síntese correntes bem conhecidos dos especialistas na técnica, ver por exemplo, Advanced Organic Chemistry de Jerry March, 4a Edição, John Wiley & Sons, 1992, e Organic Synthesis, Volumes 1-8, John Wiley, editado por Jeremiah P. Freeman (ISBN: 0-471-31192-8), 1995, e ver também os métodos descritos na secção experimental abaixo. A nitro-pirazole amida (XI) é reduzida para dar o composto 4-amino correspondente da fórmula (XII). A redução pode ser realizada por métodos correntes tal como hidrogenação catalítica, por exemplo, na presença de paládio sobre carvão num solvente polar tal como etanol ou dimetilformamida à temperatura ambiente. Como uma alternativa, a redução pode ser efectuada utilizando um agente de redução tal como cloreto de estanho (II) em etanol, tipicamente com aquecimento, por exemplo, à temperatura de refluxo do solvente. O composto 4-amino-pirazole (XII) é então feito reagir com um ácido carboxilico da fórmula íV-CChH, ou um derivado reactivo do mesmo, utilizando os métodos e condições descritos acima para a formação da amida (XI), para dar um composto da fórmula (II).
Os ácidos carboxílicos da fórmula R1-C02H podem ser obtidos comercialmente ou podem ser sintetizados de acordo com métodos bem conhecidos do especialista, ver por exemplo, Advanced Organic Chemistry e Organic Synthesis, cujos detalhes são dados acima.
Numa via sintética alternativa, os compostos da fórmula (II) podem ser preparados por reacção de um composto da fórmula (XIII) (em que X representa R1(CO)NH) com um composto da fórmula R3-Y-NH2. A reacção pode ser realizada utilizando as condições de acoplamento de amida descritas acima.
Uma vez formado, um composto da fórmula (II) pode ser transformado noutro composto da fórmula (II) utilizando processos químicos correntes bem conhecidos na técnica. Para exemplos de interconversões de grupo funcional, ver por exemplo, Fiesers' Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-17, John Wiley, editado por Mary Fieser (ISBN: 0-471-58283-2) e Organic Synthesis, Volumes 1-8, John Wiley, editado por Jeremiah P. Freeman (ISBN: 0-471-31192-8), 1995.
Os materiais de partida para as vias sintéticas mostradas nos Esquemas acima, e. g., os pirazoles de fórmula (X), podem ser obtidos comercialmente ou podem ser preparados por métodos conhecidos dos especialistas na técnica. EStes podem ser obtidos utilizando métodos conhecidos, e. g., de cetonas, tal como num processo descrito em EP308020 (Merck), ou os métodos discutidos por Schmidt em Helv. Chim. Acta., 1956, 39, 986-991 e Helv. Chim. Acta., 1958, 41, 306-309. Alternativamente, estes podem ser obtidos por conversão de um pirazole comercialmente disponível, por exemplo, aqueles contendo funcionalidades halogéneo, nitro, éster ou amida, em pirazoles contendo a funcionalidade desejada por métodos correntes conhecidos de um especialista na técnica. Por exemplo, no 3-carboxi-4-nitropirazole, o grupo nitro pode ser reduzido a uma amina por métodos correntes. O ácido 4-nitro-pirazole-3-carboxílico (XII) pode ser obtido comercialmente ou pode ser preparado por nitração do correspondente composto de pirazole carboxilo não substituído na posição 4, e os pirazoles contendo um halogéneo podem ser utilizados em reacções de acoplamento com química de estanho ou paládio.
Grupos de Protecção
Em muitas das reacções descritas acima pode ser necessário proteger um ou mais grupos para impedir que ocorra reacção numa localização indesejável da molécula. Exemplos de grupos de protecção, e métodos de protecção e desprotecção de grupos funcionais, podem ser encontrados em Protective Groups in Organic Synthesis (T. Verde e P. Wuts; 3a Edição; John Wiley e Sons, 1999).
Por exemplo, um grupo hidroxilo pode ser protegido como um éter (-OR) ou um éster (-0C(=0)R), por exemplo, como: um éter de t-butilo; um éter de tetra-hidropiranilo (THP); um éter de benzilo, benzidrilo (difenilmetilo) ou tritilo (trifenilmetilo); um éter de trimetilsililo ou t-butildimetilsililo; ou um éster de acetilo (-0C(=0)CH3, -OAc).
Um grupo aldeído ou cetona pode ser protegido, por exemplo, como um acetal (R-CH(0R)2) ou cetal (R2C(OR)2), respectivamente, no qual o grupo carbonilo (>C=0) é convertido num diéter (>C(0R)2) por reacção com, por exemplo, um álcool primário. 0 grupo aldeído ou cetona é facilmente regenerado por hidrólise utilizando um grande excesso de água na presença de ácido.
Um grupo amina pode ser protegido, por exemplo, como uma amida (-NRCO-R) ou um uretano (-NRCO-OR), por exemplo, como: uma metilamida (-NHCO-CH3) ; uma benziloxilamida (-NHCO-OCH2C6H5, -NH-Cbz ou NH-Z); como uma t-butoxilamida (-NHCO-OC(CH3) 3, -NH-Boc); uma 2-bifenil-2-propoxilamida (-NHCO-OC (CH3) 2C6H4C6H5, -NH-Bpoc) , como uma 9-f luorenilmetoxilamida (-NH-Fmoc), como uma 6-nitroveratriloxilamida (-NH-Nvoc), como uma 2-trimetilsililetiloxilamida (-NH-Teoc), como uma 2,2,2-tricloroetiloxilamida (-NH-Troc), como uma aliloxilamida (-NH-Alloc) ou como uma 2(-fenilsulfonil)etiloxilamida (-NH-Psec) .
Por exemplo, no Esquema 1 acima, quando a unidade R3 na amina H2N-Y-R3 contém um segundo grupo amino, tal como um grupo amino cíclico (e. g., um grupo piperidina ou pirrolidina), o segundo grupo amino pode ser protegido por meio de um grupo de protecção como definido acima, sendo um grupo preferido o grupo terc-butiloxicarbonilo (Boc). Quando não é necessária modificação subsequente do segundo grupo amino, o grupo de protecção pode ser levado ao longo da sequência reaccional para dar uma forma N-protegida de um composto da fórmula (II), o qual pode ser depois desprotegido por métodos correntes (e. g., tratamento com ácido no caso do grupo Boc) para dar o composto de fórmula (II).
Outros grupos de protecção para aminas, tais como aminas cíclicas e grupos N-H heterocíclicos, incluem os grupos toluenossulfonilo (tosilo) e metanossulfonilo (mesilo), os grupos benzilo tal como um grupo para-metoxibenzilo (PMB) e grupos tetra-hidropiranilo (THP).
Um grupo ácido carboxílico pode ser protegido como um éster por exemplo, como: um éster de alquilo C1-7 (e. g. , um éster metílico; um éster t-butílico); um éster de haloalquilo C1-7 (e. g. , um éster de tri-haloalquilo C1-7) ; um éster de tri-alquil Ci-7-silil-alquilo C1-7; ou um éster de aril C5-20-alquilo C1-7 (e. g., um éster benzílico; um éster nitrobenzílico); ou como uma amida, por exemplo, como uma metilamida. Um grupo tiol pode ser protegido, por exemplo, como um tioéter (-SR), por exemplo, como: um tioéter de benzilo; um éter de acetamidometilo (-S-CH2NHC(=0)CH3) .
Isolamento e purificação dos compostos da fórmula (II)
Os compostos da fórmula (II) podem ser isolados e purificados de acordo com técnicas correntes bem conhecidas do especialista na técnica. Uma técnica de particular utilidade na purificação dos compostos é a cromatografia líquida preparativa utilizando espectrometria de massa como um meio de detectar os compostos purificados que emergem da coluna de cromatografia. A LC-MS preparativa é um método corrente e eficaz utilizado para a purificação de moléculas orgânicas pequenas, tal como os compostos aqui descritos. Os métodos para a cromatografia liquida (LC) e espectrometria de massa (MS) podem ser modificados para proporcionar melhor separação dos materiais em bruto e melhorar a detecção das amostras por MS. A optimização do método de LC de gradiente preparativo envolverá a modificação de colunas, eluentes e modificadores voláteis, e gradientes. Na técnica são bem conhecidos métodos para optimizar os métodos de LC-MS preparativos e de os utilizar em seguida para purificar compostos. Tais métodos são descritos em Rosentreter U, Huber U.; Optimal fraction collecting in preparative LC/MS; J Comb Chem.; 2004; 6(2), 159-64 e Leister W, Strauss K, Wisnoski D, Zhao Z, Lindsley C., Development of a custom highthroughput preparative liquid chromatography/mass spectrometer platform for the preparative purification and analytical analysis of compound libraries; J Comb Chem.; 2003; 5(3); 322-9.
Um exemplo de um sistema desse tipo para purificar compostos via LC-MS preparativa é descrito abaixo na secção de Exemplos deste pedido (sob o titulo "Sistema de LC-MS para Purificação Coordenada por Massa"). No entanto, entender-se-á que poderiam ser utilizados sistemas e métodos alternativos aos descritos. Em particular, podem ser utilizados métodos à base de LC preparativa de fase normal em vez dos métodos de fase inversa aqui descritos. A maioria dos sistemas de LC-MS preparativos utilizam LC de fase inversa e modificadores ácidos voláteis, uma vez que a abordagem é muito eficaz para a purificação de moléculas pequenas e porque os eluentes são compatíveis com espectrometria de massa de electropulverização de iões positivos. A utilização de outras soluções cromatográficas, e. g., LC de fase normal, fase móvel alternativamente tamponada, modificadores básicos etc como delineadas nos métodos analíticos descritos abaixo poderiam ser alternativamente utilizadas para purificar os compostos.
Formulações Farmacêuticas
Embora se possa administrar o composto activo sozinho, é preferível apresentá-lo como uma composição (e. g., formulação) farmacêutica compreendendo, pelo menos, um composto activo da invenção em conjunto com um ou mais veículos, adjuvantes, excipientes, diluentes, enchimentos, tampões, estabilizantes, conservantes, lubrificantes farmaceuticamente aceitáveis, ou outros materiais bem conhecidos dos especialistas na técnica e, opcionalmente, outros agentes terapêuticos ou profilácticos.
Assim, a presente invenção proporciona ainda composições farmacêuticas, como definidas acima, e métodos de preparar uma composição farmacêutica compreendendo a combinação de pelo menos um composto activo, como definido acima, em conjunto com um ou mais veículos, excipientes, tampões, adjuvantes, estabilizantes, ou outros materiais farmaceuticamente aceitáveis, como descritos aqui. 0 termo "farmaceuticamente aceitável" como aqui utilizado refere-se a compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, no âmbito de um parecer médico idóneo, adequados para utilização em contacto com os tecidos de um indivíduo (e. g., humano) sem toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação excessivo, dotado de uma relação benefício/risco razoável. Cada veículo, excipiente, etc. também tem de ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação.
Por conseguinte, num outro aspecto, a invenção proporciona compostos da fórmula (II) e seus subgrupos, tais como das fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e seus subgrupos como aqui definidos na forma de composições farmacêuticas .
As composições farmacêuticas podem estar em qualquer forma adequada para administração oral, parentérica, tópica, intranasal, oftálmica, ótica, rectal, intra-vaginal ou transdérmica. Quando as composições se destinam a administração parentérica, elas podem ser formuladas para administração intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutânea ou para administração directa num órgão ou tecido alvo por injecção, infusão ou outro meio de administração.
Numa forma de realização preferida da invenção, a composição farmacêutica está numa forma adequada para administração i.v., por exemplo, por injecção ou infusão.
Noutra forma de realização preferida, a composição farmacêutica está numa forma adequada para administração subcutânea (s.c.).
As formas de dosagem farmacêuticas adequadas para administração oral incluem comprimidos, cápsulas, comprimidos ovais, pílulas, pastilhas, xaropes, soluções, pós, granulados, elixires e suspensões, comprimidos sublinguais, hóstias ou adesivos e adesivos bucais.
As composições farmacêuticas contendo compostos da fórmula (II) podem ser formuladas de acordo com técnicas conhecidas, ver por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack
Publishing Company, Easton, PA, USA.
Assim, as composições em comprimido podem conter uma dosagem unitária de composto activo em conjunto com um diluente ou veículo inerte, tais como um açúcar ou açúcar-álcool, e. g. ; lactose, sacarose, sorbitol ou manitol; e/ou um diluente não derivado de açúcar, tais como carbonato de sódio, fosfato de cálcio, carbonato de cálcio, ou uma celulose ou derivado da mesma, tais como metilcelulose, etilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, e amidos tal como amido de milho. Os comprimidos também podem conter ingredientes padrão, tais como aglutinantes e agentes de granulação, tais como polivinilpirrolidona, desintegrantes (e. g., polímeros reticulados expansíveis, tais como carboximetilcelulose reticulada), lubrificantes (e. g., estearatos), conservantes (e. g., parabenos), antioxidantes (e. g., BHT), agentes tamponizantes (por exemplo, tampões de fosfato ou citrato), e agentes efervescentes, tais como misturas de citrato/bicarbonato. Tais excipientes são bem conhecidos e não precisam de ser aqui discutidos em pormenor.
As formulações em cápsula podem ser da variedade de gelatina dura ou gelatina mole e podem conter o componente activo na forma sólida, semi-sólida ou líquida. As cápsulas de gelatina podem ser preparadas a partir de gelatina animal ou seus equivalentes de origem sintética ou vegetal.
As formas de dosagem sólidas (e. g., comprimidos, cápsulas etc.) podem ser revestidas ou não revestidas, mas tipicamente têm um revestimento, por exemplo, um revestimento de protecção por película (e. g., uma cera ou verniz) ou um revestimento de libertação controlada. 0 revestimento (e. g., um polímero de tipo Eudragit™) pode ser concebido para libertar o componente activo numa localização desejada dentro do aparelho gastrointestinal. Assim, o revestimento pode ser seleccionado de modo a degradar sob determinadas condições de pH no aparelho gastrointestinal, libertando selectivamente desse modo o composto no estômago ou no íleo ou duodeno.
Em vez ou além de um revestimento, o fármaco pode ser apresentado numa matriz sólida compreendendo um agente de controlo de libertação, por exemplo, um agente de retardação da libertação que pode estar adaptado para libertar selectivamente o composto sob condições de acidez ou alcalinidade variáveis no aparelho gastrointestinal. Alternativamente, o material da matriz ou revestimento de retardação da libertação pode tomar a forma de um polímero erodível (e. g., um polímero de anidrido maleico) que é substancialmente erodido de modo contínuo à medida que a forma de dosagem passa ao longo do aparelho gastrointestinal. Como uma outra alternativa, o composto activo pode ser formulado num sistema de administração que proporciona controlo osmótica da libertação do composto. A libertação osmótica e outras formulações de libertação retardada ou libertação prolongada podem ser preparadas de acordo com métodos bem conhecidos dos especialistas na técnica.
As composições para utilização tópica incluem pomadas, cremes, formulações para pulverização, adesivos, geles, gotas líquidas e implantes (por exemplo, implantes intra-oculares). Tais composições podem ser formuladas de acordo com métodos conhecidos.
As composições para administração parentérica são tipicamente apresentadas como soluções aquosas ou oleosas ou suspensões finas estéreis, ou podem ser proporcionadas na forma de pó finamente dividido estéril para preparação extemporânea com água estéril para injecção.
Os exemplos de formulações para administração rectal ou intra-vaginal incluem pessários e supositórios que podem ser, por exemplo, preparados a partir de um material moldável ou ceroso perfilado contendo o composto activo.
As composições para administração por inalação podem tomar a forma de composições em pó inaláveis ou formulações para pulverização de liquido ou pó, e podem ser administradas de forma corrente utilizando dispositivos inaladores de pó ou dispositivos de distribuição de aerossol. Tais dispositivos são bem conhecidos. Para administração por inalação, as formulações em pó compreendem tipicamente o composto activo em conjunto com um diluente sólido em pó inerte tal como lactose.
Os compostos da fórmula (II) serão geralmente apresentados na forma de dosagem unitária e, como tal, conterão tipicamente composto suficiente para proporcionar um nivel desejado de actividade biológica. Por exemplo, uma formulação destinada a administração oral pode conter desde 0,1 miligrama a 2 grama de ingrediente activo, mais geralmente desde 10 miligrama a 1 grama, por exemplo, 50 miligrama a 500 miligrama. O composto activo será administrado a um doente necessitado do mesmo (por exemplo, um humano ou animal doente) numa quantidade suficiente para alcançar o efeito terapêutico desejado. Métodos de Tratamento
Considera-se que os compostos da fórmula (II) e seus subgrupos, tais como das fórmulas (IV), (IVa), (Va) (Vb) , (Via) ou (VIb) e seus subgrupos como aqui definidos, serão úteis na profilaxia ou tratamento de uma gama de estados ou condições patológicas mediadas por cinases dependentes de ciclina. Exemplos de tais estados e condições patológicas são indicados acima.
Os compostos são geralmente administrados a um indivíduo necessitado dessa administração, por exemplo, um humano ou animal doente, de um modo preferido, um humano.
Os compostos serão tipicamente administrados em quantidades que são terapêutica ou profilacticamente úteis e que geralmente não são tóxicas. No entanto, em determinadas situações (por exemplo, no caso de doenças potencialmente fatais), os benefícios da administração de um composto da fórmula (II) podem superar as desvantagens de quaisquer efeitos tóxicos ou efeitos secundários, em cujo caso pode ser considerado desejável administrar os compostos em quantidades que estão associadas a um grau de toxicidade.
Os compostos podem ser administrados ao longo de um período prolongado para manter os efeitos terapêuticos benéficos ou podem ser administrados apenas durante um período curto. Alternativamente, estes podem ser administrados de um modo pulsátil ou contínuo.
Uma dose diária típica do composto pode estar na gama desde 100 picograma a 100 miligrama por quilograma de peso corporal, mais tipicamente 5 nanograma a 25 miligrama por quilograma de peso corporal, e mais geralmente 10 nanograma a 15 miligrama por quilograma (e. g., 10 nanograma a 10 miligrama) por quilograma de peso corporal, embora possam ser administradas doses maiores ou menores quando necessário. Em última análise, a quantidade de composto administrada e o tipo de composição utilizada será adequada à natureza da doença ou estado fisiológico a ser tratado e estará à discrição do médico.
Os compostos da fórmula (II) podem ser administrados como o único agente terapêutico ou eles podem ser administrados em terapia de associação com um ou mais de outros compostos para tratamento de um estado patológico particular, por exemplo, uma doença neoplásica, tal como um cancro como definido acima. Exemplos de outros agentes terapêuticos que podem ser administrados em conjunto (simultaneamente ou em intervalos de tempo diferentes) com os compostos da fórmula (II) incluem mas não estão limitados a inibidores de topoisomerase, agentes alquilantes, antimetabolitos, aglutinantes de ADN e inibidores de microtúbulo (agentes de direccionamento para tubulina), tal como cisplatina, ciclofosfamida, doxorrubicina, irinotecano, fludarabina, 5FU, taxanos, mitomicina C ou radioterapia. Alternativamente, os compostos da fórmula (II) podem ser administrados numa terapia de associação com anticorpos monoclonais ou inibidores da transdução de sinal. Para o caso de inibidores de CDK combinados com outras terapias, os dois ou mais tratamentos podem ser administrados em regimes posológicos que variam individualmente e através de vias diferentes.
Quando o composto da fórmula (II) é administrado em terapia de associação com um, dois, três, quatro ou mais outros agentes terapêuticos (de um modo preferido um ou dois, de um modo mais preferido um) , os compostos podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente. Quando administrados sequencialmente, estes podem ser administrados em intervalos pouco espaçados (por exemplo, ao longo de um período de 5-10 minutos) ou em intervalos mais longos (por exemplo, separados de 1, 2, 3, 4 ou mais horas, ou em intervalos ainda mais afastados quando necessário), sendo o regímen de dosagem exacto adaptado às propriedades do(s) agente(s) terapêutico(s).
Os compostos da fórmula (II) também pode ser administrados em conjunto com tratamentos não quimioterapêuticos, tais como radioterapia, terapia fotodinâmica, terapia de genes; cirurgia e dietas controladas.
Para utilização em terapia de associação com outro agente quimioterapêutico, o composto da fórmula (II) e um, dois, três, quatro ou mais outros agentes terapêuticos podem ser, por exemplo, formulados em conjunto numa forma de dosagem contendo dois, três, quatro ou mais agentes terapêuticos. Numa alternativa, os agentes terapêuticos individuais podem ser formulados separadamente e apresentados em conjunto na forma de um kit, opcionalmente com instruções para a sua utilização.
Um especialista na técnica sabe, através do seu conhecimento geral comum, quais os regimes de dosagem e terapias de associação a utilizar. Métodos de Diagnóstico
Antes da administração de um composto da fórmula (II), um doente pode ser rastreado para determinar se uma doença ou condição da qual o doente sofre ou pode sofrer é uma que seria susceptivel a tratamento com um composto possuindo actividade contra cinases dependentes de ciclina.
Por exemplo, uma amostra biológica colhida de um doente pode ser analisada para determinar se uma condição ou doença, tal como cancro, de que o doente sofre ou pode sofrer é uma que é caracterizada por um anormalidade genética ou expressão proteica anormal que leva à sobreactivação de CDK ou à sensibilização de uma via para a actividade CDK normal. Exemplos de tais anormalidades que resultam na activação ou sensibilização do sinal de CDK2 incluem a regulação positiva de ciclina E, (Harwell RM, Mull BB, Porter DC, Keyomarsi K.; J Biol Chem. 2004 Mar 26; 279 (13) :12695-705) ou a perda de p21 ou p27, ou a presença de variantes de CDC4 (Rajagopalan H, Jallepalli PV, Rago C, Velculescu VE, Kinzler KW, Vogelestein B, Lengauer C.; Nature. 2004 Mar 4; 428 (6978 ) :77-81) . O termo regulação positiva inclui a expressão elevada ou sobreexpressão, incluindo amplificação de gene (i. e., múltiplas cópias de gene) e expressão aumentada por um efeito transcricional, e hiperactividade e activação, incluindo activação por mutações. Assim, o doente pode ser submetido a um teste de diagnóstico para detectar um marcador caracteristico da regulação positiva de ciclina E, ou de perda de p21 ou p27, ou da presença de variantes de CDC4. O termo diagnóstico inclui rastreio. Por marcador as requerentes incluem marcadores genéticos incluindo, por exemplo, a medição da composição do ADN para identificar mutações de CDC4. O termo marcador também inclui marcadores que são caracteristicos da regulação positiva de ciclina E, incluindo actividade enzimática, níveis de enzima, estado da enzima (e. g., fosforilada ou não) e níveis de ARNm das proteínas supramencionadas.
Os tumores com regulação positiva de ciclina E, ou perda de p21 ou p27 podem ser particularmente sensíveis a inibidores de CDK. De um modo preferido, os tumores podem ser rastreados em relação à regulação positiva de ciclina E, ou perda de p21 ou p27 antes do tratamento. Assim, o doente pode ser submetido a um teste de diagnóstico para detectar um marcador característico da regulação positiva de ciclina E, ou perda de p21 ou p27. Os testes de diagnóstico são tipicamente realizados numa amostra biológica seleccionada de amostras de biópsia de tumor, amostras de sangue (isolamento e enriquecimento de células tumorais depositadas), biópsias de fezes, expectoração, análise de cromossoma, líquido pleural, líquido peritoneal ou urina.
Verificou-se, Rajagopalan et al. (Nature. 2004 Mar 4; 428(6978):77-81), que existiam mutações presentes no CDC4 (também conhecido como Fbw7 ou Arquipélado) em cancros colorrectais e cancros do endométrio humanos (Spruck et al., Cancer Res. 2002 Ago 15; 62 (16) :4535-9) . A identificação de indivíduos que têm uma mutação em CDC4 pode significar que o doente seria particularmente adequado para tratamento com um inibidor de CDK. De um modo preferido, Os tumores podem ser rastreados quanto à presença de uma variante de CDC4 antes do tratamento. O processo de rastreio envolverá tipicamente sequenciação directa, análise de micromatriz de oligonucleótidos ou um anticorpo específico para o mutante.
Os métodos de identificação e análise de mutações e regulação positiva de proteínas são conhecidos de um especialista na técnica. Os métodos de rastreio poderiam incluir, mas não estão limitados a, métodos correntes, tais como transcriptase inversa associada a reacção em cadeia da polimerase (RT-PCR) ou hibridação in situ.
No rastreio por RT-PCR, o nivel de ARNm no tumor é avaliado criando uma cópia de ADNc do ARNm seguida de amplificação do ADNc por PCR. Os métodos de amplificação por PCR, a selecção de iniciadores e as condições de amplificação, são conhecidas de um especialista na técnica. As manipulações de ácido nucleico e a PCR são realizadas por métodos correntes, como descritas por exemplo, em Ausubel, F.M. et ai., eds. Current Protocols in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc., ou Innis, M.A. et-al., eds. PCR Protocols: a guide to methods and applications, 1990, Academic Press, San Diego. As reacções e manipulações envolvendo técnicas de ácido nucleico também são descritas em Sambrook et ai., 2001, 3a Ed, Molecular Cloning: A Laboratory
Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Alternativamente pode ser utilizado um kit comercialmente disponível para RT-PCR (por exemplo, Roche Molecular Biochemicals) ou metodologia como estabelecida nas patentes dos Estados Unidos 4666828; 4683202; 4801531; 5192659, 5272057, 5882864, e 6218529.
Um exemplo de uma técnica de hibridação in situ para avaliar a expressão de ARNm seria a hibridação in situ de fluorescência (FISH) (ver Angerer, 1987 Meth. Enzymol., 152: 649) .
Geralmente, a hibridação in situ compreende os seguintes passos principais: (1) fixação do tecido a ser analisado; (2) tratamento de pré-hibridação da amostra para aumentar a acessibilidade do ácido nucleico alvo e para reduzir a ligação não específica; (3) hibridação da mistura de ácidos nucleicos com o ácido nucleico na estrutura ou tecido biológico; (4) lavagens de pós-hibridação para remover os fragmentos de ácido nucleico não ligado na hibridação, e (5) detecção dos fragmentos de ácido nucleico hibridizados. As sondas utilizadas em tais aplicações são tipicamente marcadas, por exemplo, com radioisótopos ou repórteres fluorescentes. As sondas preferidas são suficientemente compridas, por exemplo, desde cerca de 50, 100 ou 200 nucleótidos até cerca de 1000 ou mais nucleótidos, para permitir a hibridação específica com o(s) ácido(s) nucleico(s) alvo(s) sob condições estringentes. Os métodos correntes para realizar FISH são descritos em Ausubel, F.M. et al. , eds. Current Protocolos in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc e Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview de John M. S. Bartlett em Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2a ed.; ISBN: 1-59259-760-2; March 2004, p. 077-088; Series: Methods in Molecular Medicine.
Alternativamente, os produtos proteicos expressados a partir dos ARNms podem ser analisados por imuno-histoquímica de amostras de tumor, imunoensaio de fase sólida com placas microtítulo, transferência de Western, electroforese em gel de poliacrilamida-SDS bidimensional, ELISA, citometria de fluxo e outros métodos conhecidos na técnica para a detecção de proteínas específicas. Os métodos de detecção incluiriam a utilização de anticorpos específicos para um sítio. O especialista reconhecerá que todas estas técnicas bem conhecidas para detecção da regulação positiva de ciclina E, ou perda de p21 ou p27, ou detecção de variantes de CDC4 poderiam ser aplicáveis no presente caso.
Por conseguinte, todas estas técnicas também poderiam ser utilizadas para identificar tumores particularmente adequados para tratamento com inibidores de CDK. Os doentes com linfoma das células do manto (MCL) poderiam ser seleccionados para tratamento com um inibidor de CDK utilizando os testes de diagnóstico aqui delineados. 0 MCL é uma entidade clinicopatológica distinta de linfoma de não-Hodgkin, caracterizada por proliferação de linfócitos de tamanho pequeno a médio com co-expressão de CD5 e CD20, um curso clinico agressivo e incurável, e translocação t(ll;14)(ql3;q32) frequente. A sobreexpressão de ARNm de ciclina Dl, encontrado no linfoma das células do manto (MCL), é um marcador critico de diagnóstico. Yatabe et al. (Blood. 2000 Apr 1; 95 ( 7) :2253-61) propôs que a positividade em relação à ciclina Dl deveria ser incluída como um dos critérios padrão para MCL e que deveriam ser exploradas terapias inovadoras para esta doença incurável com base nos novos critérios. Jones et al. (J Mol Diagn. 2004 Maio; 6(2):84-9) desenvolveu um ensaio de PCR de transcrição inversa, quantitativo, em tempo real para a expressão de ciclina Dl (CCND1) para auxiliar no diagnóstico do linfoma das células do manto (MCL) . Howe et al. (Clin Chem. 2004 Jan; 50 (1) :80-7) utilizou a RT-PCR quantitativa de tempo real para avaliar a expressão do ARNm da ciclina Dl e determinou que a RT-PCR quantitativa para o ARNm da ciclina Dl normalizado ao ARNm de CD19 pode ser utilizado no diagnóstico de MCL no sangue, medula e tecido. Alternativamente, os doentes com cancro da mama poderiam ser seleccionados para tratamento com um inibidor de CDK utilizando os testes de diagnóstico delineados acima. As células tumorais geralmente sobreexpressam a ciclina E e foi demonstrado que a ciclina E está sobreexpressada no cancro da mama (Harwell et al., Cancer Res, 2000, 60, 481-489) . Por conseguinte, o cancro da mama pode ser, em particular, tratado com um inibidor de CDK.
Utilização Antifúngica
Num outro aspecto, a invenção proporciona a utilização dos compostos das fórmulas (II), (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e seus subgrupos, como aqui definidos, como agentes antifúngicos.
Os compostos podem ser utilizados em medicina animal (por exemplo, no tratamento de mamíferos, tal como humanos), ou no tratamento de plantas (e. g., em agricultura e horticultura), ou como agentes antifúngicos gerais, por exemplo, como conservantes e desinfectantes.
Numa forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (II) e seus subgrupos, tais como das fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e seus subgrupos como aqui definidos para utilização na profilaxia ou tratamento de um infecção fúngica num mamífero tal como um humano. É também proporcionada a utilização de um composto da fórmula (II) e seus subgrupos, tais como das fórmulas (IV), (IVa), (Va) , (Vb) , (Via) ou (VIb) e seus subgrupos como aqui definidos para o fabrico de um medicamento para utilização na profilaxia ou tratamento de um infecção fúngica num mamífero tal como um humano.
Por exemplo, os compostos da fórmula (II) podem ser administrados a doentes humanos que sofrem ou estão em risco de infecção por infecções fúngicas tópicas provocadas por, entre outros organismos, espécies de Candida, Trichophyton,
Microsporum ou Epidermophyton, ou em infecções da mucosa provocadas por Candida albicans (e. g., afta e candidiase vaginal). Os compostos da fórmula (II) também podem ser administrados para o tratamento ou profilaxia de infecções fúngicas sistémicas provocadas, por exemplo, por Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Coccidioidies, Paracoccidioides, Histoplasma ou Blastomyces.
Noutro aspecto, a invenção proporciona uma composição antifúngica para utilização agrícola (incluindo hortícola), compreendendo um composto da fórmula (II) e seus subgrupos, tais como das fórmulas (IV), (V) e (VI) como definidos acima em conjunto com um diluente ou veículo agricolamente aceitável. A invenção proporciona ainda um método de tratamento de um animal (incluindo um mamífero tal como um humano), planta ou semente possuindo uma infecção fúngica, o qual compreende tratar o referido animal, planta ou semente, ou o local da referida planta ou semente, com uma quantidade eficaz de um composto da fórmula (II) e seus subgrupos, tais como das fórmulas (IV), (V) e (VI) como definidos acima. A invenção também proporciona um método de tratamento de uma infecção fúngica numa planta ou semente, o qual compreende tratar a planta ou semente com uma quantidade eficaz em termos antifúngicos de uma composição fungicida como definida acima.
Podem ser utilizados ensaios de selecção diferencial para seleccionar os compostos da presente invenção com especificidade para enzimas CDK não humanas. Os compostos que actuam especificamente nas enzimas CDK de agentes patogénicos eucarióticos podem ser utilizados como agentes antifúngicos ou antiparasitários. Os inibidores da cinase CDK da Candida, CKSI, podem ser utilizados no tratamento de candidiase. Os agentes antifúngicos podem ser utilizados contra infecções do tipo acima definido, ou infecções oportunistas que geralmente ocorrem em doentes debilitados e imunossuprimidos, tais como doentes com leucemias e linfomas, pessoas que recebem terapia imunossupressora e doentes com estados predisponentes, tais como diabetes mellitus ou SIDA, bem como para doentes não imunossuprimidos.
Os ensaios descritos na técnica podem ser utilizados para rastrear agentes que podem ser úteis para inibir pelo menos um fungo implicado em micoses, tais como candidiase, aspergilose, mucormicose, blastomicose, geotricose, criptococose, cromoblastomicose, coccidiodomicose, conidiosporose, histoplasmose, maduromicose, rinosporidiose, nocardiose, para-actinomicose, peniciliose, monoliase ou esporotricose. Os ensaios de rastreio diferencial podem ser utilizados para identificar agentes antifúngicos que possam ter valor terapêutico no tratamento de aspergilose utilizando os genes de CDK clonados a partir de levedura tal como Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus nidulans ou Aspergillus terreus, ou quando a infecção micótica é mucormicose, o ensaio de CDK pode ser derivado de levedura, tais como Rhizopus arrhizus, Rhizopus oryzae, Absidia corymbifera, Absidia ramosa ou Mucorpusillus. As fontes de outras enzimas CDK incluem o agente patogénico Pneumocystis carinii. A titulo de exemplo, a avaliação in vitro da actividade antifúngica dos compostos pode ser realizada determinando a concentração inibidora minima (M.I.C.) que é a concentração dos compostos de ensaio, num meio adequado, à qual o crescimento do microrganismo particular deixa de ocorrer. Na prática, uma série de placas de agar, possuindo cada o composto de ensaio incorporado a uma concentração particular é inoculada com uma cultura padrão de, por exemplo, Candida albicans e cada placa é, em seguida, incubada durante um período apropriado a 37 °C. As placas são em seguida examinadas quanto à presença ou ausência de crescimento do fungo e é anotado o valor M.I.C. apropriado. A avaliação dos compostos in vivo pode ser realizada a uma série de níveis de dose por injecção intraperitoneal ou intravenosa ou por administração oral, a ratinhos que foram inoculados com um fungo, e. g., uma estirpe de Candida albicans ou Aspergillus flavus. A actividade dos compostos pode ser avaliada com base na sobrevivência de um grupo de ratinhos tratado após a morte de um grupo de ratinhos não tratado. A actividade pode ser medida em termos de nível de dose à qual o composto proporciona 50% de protecção contra o efeito letal da infecção (PD50) .
Para utilização antifúngica humana, os compostos podem ser administrados sozinhos ou em combinação com um veículo farmacêutico seleccionado de acordo com a via de administração pretendida e prática farmacêutica corrente. Assim, por exemplo, eles podem ser administrados por via oral, parentérica, intravenosa, intramuscular ou subcutânea por meio das formulações descritas acima na secção intitulada "Formulações Farmacêuticas".
Para administração oral e parentérica em doentes humanos, o nível de dosagem diário dos compostos antifúngicos da fórmula (II) pode ser desde 0,01 a 10 mg/kg (em doses divididas), dependendo, inter alia, da potência dos compostos quando administrados por via oral ou parentérica. Os comprimidos ou cápsulas dos compostos podem conter, por exemplo, desde 5 mg a 0,5 g de composto activo para administração individual ou de dois ou mais ao mesmo tempo, conforme apropriado. Em qualquer caso, o médico determinará a dosagem efectiva (quantidade eficaz) que será mais adequada para um doente particular e variará com a idade, peso e resposta do doente particular.
Alternativamente, os compostos antifúngicos podem ser administrados na forma de um supositório ou pessário, ou estes podem ser aplicados por via tópica na forma de uma loção, solução, creme, pomada ou pó para polvilhar. Por exemplo, eles podem ser incorporados num creme consistindo de uma emulsão aquosa de polietileno glicóis ou parafina liquida; ou estes podem ser incorporados, a uma concentração entre 1 e 10%, numa pomada consistindo de uma base de cera branca ou parafina mole branca em conjunto com estabilizantes e conservantes, conforme possa ser necessário.
Além das utilizações terapêuticas descritas acima, os agentes antifúngicos desenvolvidos com os ensaios de selecção diferencial podem ser utilizados, por exemplo, como conservantes em géneros alimentícios, suplementos alimentares para promover o ganho de peso em gado, ou em formulações desinfectantes para tratamento de matéria não viva, e. g., para descontaminação de equipamento e salas de hospital. De um modo semelhante, a comparação lado a lado da inibição de uma CDK de mamífero e uma CDK de insecto, tal como o gene de CDK5 de Drosophilia (Hellmich et al. (1994) FEBS Lett 356:317-21), permitirá a selecção entre os compostos aqui de inibidores que discriminam entre as enzimas de humano/mamífero e de insecto. Por conseguinte, o presente pedido descreve a utilização e formulações dos compostos da fórmula (II) em insecticidas, tal como para utilização no controlo de insectos como a mosca da fruta.
Ainda noutra forma de realização, alguns dos inibidores de CDK objecto podem ser seleccionados com base na especificidade de inibição para CDK vegetais relativamente à enzima de mamífero. Por exemplo, uma CDK vegetal pode ser disposta num rastreio diferencial com uma ou mais das enzimas humanas para seleccionar aqueles compostos com maior selectividade para inibir a enzima vegetal. Assim, a presente invenção considera especificamente formulações de inibidores de CDK objecto para aplicações agrícolas, tal como na forma de um desfolhante ou semelhantes.
Para fins agrícolas e hortícolas, os compostos da fórmula (II) podem ser utilizados na forma de uma composição formulada conforme apropriado para a utilização e finalidade pretendida particulares. Assim, os compostos podem ser aplicados na forma de pós para polvilhar, ou granulados, tratamentos de sementes, soluções aquosas, dispersões ou emulsões, formulações para imersão, formulações para pulverização, aerossoles ou vapores. As composições também podem ser fornecidas na forma de pós dispersíveis, granulados ou grãos, ou concentrados para diluição antes da utilização. Tais composições podem conter veículos, diluentes ou adjuvantes convencionais como são conhecidos e aceitáveis em agricultura e horticultura, e são fabricadas de acordo com o Processos convencionais. As composições também podem incorporar outros ingredientes activos, por exemplo, compostos possuindo actividade herbicida ou insecticida ou um outro fungicida. Os compostos e composições podem ser aplicados por um número de modos, por exemplo, estes podem ser aplicados directamente na folhagem, caules, ramos, sementes ou raízes vegetais ou no solo ou noutro meio de crescimento, e estes podem ser utilizados não só para erradicar a doença, mas também profilacticamente para proteger as plantas ou sementes de ataque. A titulo de exemplo, as composições podem conter desde 0,01 a 1% em peso de ingrediente activo. Para utilização no campo, as taxas de aplicação prováveis do ingrediente activo podem ser desde 50 a 5000 g/hectare. A invenção também considera a utilização dos compostos da fórmula (II) e seus subgrupos, tais como das fórmulas (IV) , (IVa), (Va) , (Vb) , (Via) ou (VIb) e seus subgrupos como aqui definidos no controlo de fungos de decomposição da madeira e no tratamento de solos cultivados, arrozais de transplante ou água para perfusão. É também considerada pela invenção a utilização dos compostos da fórmula (II) e seus subgrupos, tais como das fórmulas (IV), (IVa), (Va), (Vb), (Via) ou (VIb) e seus subgrupos como aqui definidos para proteger grãos armazenados e outros locais não vegetais de infestação fúngica.
EXEMPLOS A invenção será agora ilustrada, mas não limitada, por referência às formas de realização especificas descritas nos seguintes exemplos.
Nos exemplos, os compostos preparados foram caracterizados por cromatografia liquida e espectroscopia de massa (LC-MS) utilizando o sistema e as condições operacionais indicadas abaixo. Quando está presente cloro e é indicada uma única massa, a massa indicada para o composto é para o 35C1. Os dois sistemas foram munidos de colunas de cromatografia idênticas e foram ajustados para serem executados nas mesmas condições operacionais. As condições operacionais utilizadas também são descritas abaixo. Nos exemplos, os tempos de retenção são dados em minutos.
Sistema Plataform
Sistema: Waters 2790/Platform LC
Detector de Esp. Massa: Micromass Platform LC
Detector PDA: Waters 996 PDA
Condições analíticas:
Eluente A: 5% CH3CN em 95% H2O (0,1% de ácido fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1 % de ácido fórmico)
Gradiente: 10-95% de eluente B
Caudal: 1,2 mL/min
Coluna: Synergi 4 pm Max-RP C12, 80A, 50 x 4,6 mm (Fenomenex)
Condições de MS:
Tensão do capilar: 3,5 kV
Tensão do cone: 30 V
Temperatura da Fonte: 120 °C
Sistema FractionLynx
Sistema: Waters FractionLynx (duplo analítico/prep)
Detector de Esp. Massa: Waters-Micromass ZQ
Detector PDA: Waters 2996 PDA
Condições analíticas:
Eluente A: H2O (0,1% de ácido fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de ácido fórmico)
Gradiente: 5-95% de eluente B
Caudal: 1,5 mL/min
Coluna: Synergi 4 pm Max-RP C12, 80A, 50 x 4,6 mm (Fenomenex)
Condições de MS:
Tensão do capilar: 3,5 kV
Tensão do cone: 30 V
Temperatura da Fonte: 120 °C
Temperatura de 300 °C
Dessolvatação:
Sistema Analítico de LC-MS
Foram utilizados vários sistemas, como descritos abaixo, e estes estavam equipados e foram ajustados em condições operacionais rigorosamente semelhantes. As condições operacionais utilizadas também são descritas abaixo.
Sistema de HPLC: Waters 2795
Detector de Esp. Massa: Micromass Platform LC
Detector PDA: Waters 2996 PDA
Condições Analíticas Ácidas:
Eluente A: H2O (0,1% de ácido fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de ácido fórmico)
Gradiente: 5-95% de eluente B ao longo de 3,5 minutos
Caudal: 0,8 mL/min
Coluna: Fenomenex Synergi 4 μ MAX-RP 80A, 2,0 x 50 mm
Condições Analíticas Básicas:
Eluente A: H2O (tampão NH4HCO3 10 mM ajustado a pH=9,5 com NH4OH) Eluente B: CH3CN
Gradiente: 05-95% de eluente B ao longo de 3,5 minutos Caudal: 0,8 mL/min
Coluna: Thermo Hypersil-Keystone BetaBasic-18 5 pm 2,1 x 50 mm ou
Coluna: Fenomenex Luna C18(2) 5 pm 2,0 x 50 mm
Condições Analíticas Polares:
Eluente A: H2O (0,1% de ácido fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de ácido fórmico)
Gradiente: 00-50% de eluente B ao longo de 3 minutos
Caudal: 0,8 mL/min
Coluna: ou Thermo Hypersil-Keystone HyPurity Aquastar, 5 μ, 2,1 X 5 0 mm
Coluna: Fenomenex Synergi 4 μ MAX-RP 80A, 2,0 x 50 mm ou
Condições Analíticas Mais Longas:
Eluente A: H2O (0,1% de ácido fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de ácido fórmico)
Gradiente: 05-95% de eluente B ao longo de 15 minutos
Caudal: 0,4 mL/min
Coluna: Fenomenex Synergi 4 μ MAX-RP 80A, 2,0 x 150 mm
Condições de MS:
Tensão do capilar: 3,6 kV
Tensão do cone: 30 V
Temperatura da Fonte: 120°C
Gama de Varrimento: 165-700 amu
Modo de Ionização: Electropulverização Positiva ou
Electropulverização Negativa ou Electropulverização Positiva & Negativa
Sistema de LC-MS para Purificação Coordenada por Massa
Podem ser utilizados os seguintes sistemas de cromatografia preparativa para purificar os compostos da fórmula (II). • Hardware:
Sistema Fractionlynx da Waters: 2767 Amostrador Automático/Colector de Fracções Duplo 2525 bomba preparativa CFO (organizador da fluidida das colunas) para selecção da coluna RMA (gestor de reagentes da Waters) como bomba de compensação
Espectrómetro de Massa Waters ZQ
Detector de Matriz de Fotodiodos 2996 da Waters • Software:
Masslynx 4.0 • Colunas : 1. Cromatografia a pH baixo: Fenomenex Synergy MAX-RP, 10 μ, 150 x 15 mm (alternativamente utilizou o mesmo tipo de coluna com dimensões 100 x 21,2 Mm). 2. Cromatograf ia a pH alto: Fenomenex Luna C18 (2), 10 μ, 100 x 21,2 mm (alternativamente utilizou Thermo Hypersil Keystone BetaBasic C 18, 5 μ, 100 x 21,2 mm) • Eluentes: 1. Cromatografia a pH baixo:
Solvente A: H2O + 0,1% de ácido fórmico, pH 1,5 Solvente B: CH3CN + 0,1% de ácido fórmico 2. Cromatografia a pH alto:
Solvente A: H20 + NH4HCO3 10 mM + NH4OH, pH 9,5 Solvente B: CH3CN 3. Solvente de compensação: MeOH + 0,1% de ácido fórmico (para ambos os tipos de cromatografia) • Métodos:
Antes de utilizar a cromatografia preparativa para isolar e purificar os compostos do produto, pode utilizar-se primeiro LC-MS analítica (ver acima) para determinar as condições mais apropriadas para cromatografia preparativa. Uma rotina típica é correr uma LC-MS analítica utilizando o tipo de cromatografia (pH baixo ou alto) mais adequado para a estrutura do composto. Assim que o perfil analítico mostra uma boa cromatografia pode escolher-se um método preparativo adequado do mesmo tipo. As condições típicas de ensaio para os métodos de cromatografia a pH baixo e alto são:
Caudal: 24 mL/min
Gradiente: Geralmente todos os gradientes têm um passo inicial de 0,4 min com 95% A + 5% B. Em seguida, de acordo com o perfil analítico é escolhido um gradiente de 3,6 min para conseguir uma boa separação (e. g., desde 5% a 50% B para compostos de retenção baixa; desde 35% a 80% B para compostos de retenção média, etc.)
Lavagem: é realizado um passo de lavagem de 1 minuto no final do gradiente
Re-equilíbrio: é realizado um passo de re-equilíbrio de 2,1 minutos para preparar o sistema para o ensaio seguinte
Caudal de Compensação: 1 mL/min 1 1
Solvente:
Todos os compostos foram geralmente dissolvidos em MeOH a 100% ou DMSO a 100% • Condições de ensaio de MS:
Tensão do capilar: 3,2 kV
Tensão do cone: 25 V
Temperatura da Fonte: 120 °C
Multiplicador: 500 V
Gama de Varrimento: 125-800 amu
Modo de Ionização: Electropulverização Positiva
Os materiais de partida para cada um dos Exemplos estão comercialmente disponíveis, salvo indicação em contrário. * = exemplo comparativo EXEMPLO 1 1
Fenilamida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico IA. Fenilamida do ácido 4-nitro-lH-pirazole-3-carboxílico
Foi adicionado ácido 4-nitropirazole-3-carboxílico (2,5 g; 15,9 mmol) a uma solução, mantida sob agitação, de anilina (1,6 mL; 17,5 mmol), EDO (3,7 g; 19,1 mmol) e HOBt (2,6 g; 19,1 mmol) em N,N-dimetilformamida (DMF) (25 mL) , em seguida agitado à temperatura ambiente de um dia para o outro. O 1 solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo triturado com acetato de etilo/solução saturada de NaHCCt. 0 sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água e éter dietílico, em seguida seco sob vácuo para dar 2,85 g do composto em epígrafe (sal de sódio) como um sólido amarelo/castanho. (LC/MS: Tr 2,78, [M+H]+ 232,95). 1B. Fenilamida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico
Fenilamida do ácido 4-nitro-lH-pirazole-3-carboxílico (100 mg; 0,43 mmol) foi dissolvida em etanol (5 mL), tratada com di-hidrato de cloreto de estanho (II) (500 mg; 2,15 mmol), em seguida aquecida a refluxo de um dia para o outro. A mistura reaccional foi arrefecida e evaporada. O resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e a camada de acetato de etilo foi separada, seca (MgSCg) , filtrada e evaporada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash eluindo com acetato de etilo /éter de petróleo 1:1, em seguida 5% de metanol/diclorometano. A evaporação das fracções contendo o produto, seguida de LC/MS preparativa deu 15 mg do produto como um sólido esbranquiçado. (LC/MS: Tr 1,40, [M+H]+ 202,95). EXEMPLO 2* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-acetilamino-lH-pirazole- 3- carboxílico 2A. (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-nitro-lH-pirazole-3- carboxílico
Foi adicionado ácido 4-nitropirazole-3-carboxílico (10 g; 63,66 mmol) a uma solução, mantida sob agitação, de 4- fluoroanilina (6,7 mL; 70 mmol), EDO (14,6 g; 76,4 mmol) e HOBt (10,3 g; 76,4 mmol) em DMF (25 mL), em seguida agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo triturado com acetato de etilo/solução aquosa saturada de cloreto de sódio. O sólido amarelo resultante foi recolhido por filtração, lavado com ácido clorídrico 2 M, em seguida seco sob vácuo para dar 15,5 g do composto em epígrafe. (LC/MS: Tr 2,92 [M+H]+ 250,89) . 2B. (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3- carboxilico
(4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-nitro-lH-pirazole-3-carboxilico (15 g) foi dissolvida em 200 mL de etanol, tratada com 1,5 g de paládio a 10% sobre carvão sob uma atmosfera de azoto, em seguida hidrogenada à temperatura e pressão ambiente de um dia para o outro. O catalisador foi removido por filtração através de Celite e o filtrado evaporado. O produto em bruto foi dissolvido em acetona/água (100 mL:100 mL) e após evaporação lenta da acetona o produto foi recolhido por filtração como um sólido castanho cristalino (8,1 g). (LC/MS: Tr 1,58, [M+H]+ 220,95). 2C. (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-acetilamino-lH- pirazole-3-carboxílico
(4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (500 mg; 2,27 mmol) foi dissolvida em 5 mL de piridina, tratada com anidrido acético (240 pL, 2,5 mmol), em seguida agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O solvente foi removido por evaporação, em seguida foram adicionados diclorometano (20 mL) e ácido clorídrico 2 M (20 mL). O sólido não dissolvido foi recolhido por filtração, lavado com mais diclorometano e água, em seguida seco sob vácuo. O produto foi isolado como um sólido esbranquiçado (275 mg). (LC/MS: Tr 2,96, [M+H]+ 262,91). EXEMPLO 3* ( 4-Fluoro-f enil) -amida_do_ácido_4-(2,2,2-trifluoro- acetilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
(4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3- carboxílico (Exemplo 2B) (500 mg; 2,27 mmol) foi dissolvida em 5 mL de piridina, tratada com anidrido trifluoroacético (320 pL, 2,5 mmol) em seguida agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O solvente foi removido por evaporação, o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e ácido clorídrico 2 M (50 mL) , e a camada de acetato de etilo foi separada, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), seca (MgSCh) , filtrada e evaporada para dar 560 mg de produto como um sólido castanho. (LC/MS: [M+H]+ 317). EXEMPLO 4* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[ (5-oxo-pirrolidina-2-carbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A uma solução, mantida sob agitação, de (4-fluorofenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (Exemplo 2B) (50 mg; 0,23 mmol), EDAC (52 mg; 0,27 mmol) e HOBt (37 mg; 0,27 mmol) em 5 mL de DMF foi adicionada 2-oxoprolina (33 mg; 0,25 mmol), e a mistura foi então deixada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional foi evaporada e o resíduo purificado por LC/MS preparativa, para dar 24 mg do produto como um sólido branco. (LC/MS: Tr 2,27 [M+H]+ 332). EXEMPLO 5* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-fenilacetilamino-lH- pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4 mas utilizando ácido fenilacético (34 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (14 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 3,24 [M+H]+ 339). EXEMPLO 6* ( 4-Fluoro-f enil) -amida_do_ácido_4- (2-lH-indol-3-il- acetilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido indole-3-acético (44 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. 0 produto em epígrafe (14 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 3,05 [M+H]+ 378) . EXEMPLO 7* (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(2-benzenossulfonil- acetilamino-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido 2-(fenilsulfonil)acético (50 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (29 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 3,00 [M+H]+ 403). EXEMPLO 8* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[2-(5-amino-tetrazol-l-il)-acetilamino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas foi utilizado ácido 5-aminotetrazole-l-acético (36 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (23 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Rt 2,37 [M+H]+ 346) . EXEMPLO 9* N-[3-(4-Fluoro-fenilcarbamoil)-lH-pirazol-4-il]-6-hidroxi-nicotinamida
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido 6-hidroxinicotínico (38 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. 0 composto em epígrafe (17 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 2,32 [M+H]+ 342). EXEMPLO 10* ( 4-Fluorof enil) -amida_do_ácido_4-[3-(4-cloro-fenil)- propionilamino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido 3-(4-clorofenil)propiónico (46 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (40 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 3,60 [M+H]+ 388) . EXEMPLO 11 * ( 4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(3-4H-[1,2,4]triazol-3-il-propionilaminol-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido 3-triazol-3-ilpropiónico (36 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (18 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 2,39 [M+H]+ 344). EXEMPLO 12* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[2-(l-metil-lH-indol-3-il)-acetilamino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido N-metilindole-3-acético (48 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (20 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 3,34 [M+H]+ 392). EXEMPLO 13 * ( 4-Fluoro-f enil) -amida_do_ácido_4- [ (1-hidroxi- ciclopropanocarbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido 1-hidroxiciclopropanocarboxílico (26 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (24 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 2,55 [M+H]+ 305) . EXEMPLO 14* [3-(4-Fluoro-fenilcarbamoil)-lH-pirazol-4-il]-amida_do ácido 1-acetil-piperidina-4-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido N-acetilpiperidina-acético (43 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (19 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 2,49 [M+H]+ 374) . EXEMPLO 15* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[3-(4-metil-piperazin-l-il)-propionilamino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido 4-N-metilpiperazina-l-N-propiónico (31 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (19 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 1,77 [M+H]+ 375) . EXEMPLO 16* (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(2-lH-imidazol-4-il- acetilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido imidazole-4-acético (32 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (35 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 1,82 [M+H]+ 329). ( 4-Fluorof enil) -amida_do_ácido_4- (3-morfolin-4-il- EXEMPLO 17* propionilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido 3-morfolin-4-il-propiónico (40 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (15 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 1,84 [M+H]+ 362). EXEMPLO 18* ( 4-Fluorof enil) -amida_do_ácido_4- (3-piperidin-l-il- propionilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A reacção foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 4, mas utilizando ácido 3-piperidina-4-il-propiónico (39 mg; 0,23 mmol) como o material de partida. O composto em epígrafe (19 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 1,92 [M+H]+ 360) . EXEMPLO 19* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-ciclo-hexilamino-lH- pirazole-3-carboxílico
A uma solução de (4-fluoro-fenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (200 mg; 1 mmol) e ciclo-hexanona (107 mg; 1,1 mmol) em diclorometano (10 mL) foram adicionados peneiros moleculares 3Ã (1 g) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (315 mg; 1,5 mmol), e a mistura foi então agitada à temperatura ambiente ao longo do fim de semana. A mistura reaccional foi filtrada através de Celite®, diluída com acetato de etilo, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgSCb) e evaporada para dar o 48 mg do produto como uma goma cinzenta. (LC/MS: Tr 2,95, [M+HJ+285). ( 4-Fluoro-f enil) -amida_do_ácido_4-isopropilamino-1H- EXEMPLO 20* pirazole-3-carboxílico
O composto em epígrafe foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 19, mas utilizando acetona em vez de ciclo-hexanona. (LC/MS: Tr 2,08, [M+H]+ 245). EXEMPLO 21* ( 4-Fluorof enil) -amida_do_ácido_4- (2-hidroxi-l-metil- etilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
O composto foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 19, mas utilizando hidroxiacetona em vez de ciclo-hexanona. RMN de ΤΗ (400MHz, D6-DMSO) : 9,9 (1H, s 1), 7,8 (2H, dd) , 7,3 (1H, s), 7,15 (2H, t), 5,15 (1H, d), 4,7 (1H, s 1), 3,4 (2H, m), 3,2 (1H, m), 1,1 (3H, d). EXEMPLO 22* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(1-etil-propilamino)-1H-pirazole-3-carboxílico
0 composto foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 19, mas utilizando 3-pentanona em vez de ciclo-hexanona. RMN de ΤΗ (400MHz, D6-DMSO): 12,85 (lh,s 1), 9,9 (1H, s 1), 7,8 (2H, t 1), 7,3 (1H, s), 7,15 (2H, t), 5,0 (1H, d), 2,9 (1H, m 1), 1,5 (4H, m) , 3,2 (1H, m), 0,9 (6H, t). EXEMPLO 23* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(3-cloro-pirazin-2- ilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
Uma mistura de (4-fluoro-fenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (50 mg; 0,23 mmol) e 2,3-dicloropirazina (140 mg; 0,92 mmol) foi aquecida a 150°C (50W) durante 20 minutos num sintetizador de microondas CEM Discover™. A mistura reaccional em bruto foi purificada por cromatografia em coluna flash eluindo com acetato de etilo/hexano (1:3 em seguida 1:2). As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas para dar 15 mg do composto em epígrafe como um sólido branco. (LC/MS: Tr 4,06 M+H]+ 332). EXEMPLO 2 4* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(pirazin-2-ilamino)-1H-pirazole-3-carboxílico
0 composto foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 23, mas utilizando 2-cloropirazina em vez de 2,3-dicloropirazina. (LC/MS: Tr 3,28 [M+H]+ 299). EXEMPLO 25* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(2-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
Foi adicionado ácido 2-metoxi-benzóico (38 mg, 0,25 mmol) a uma solução de (4-fluoro-fenil)-amida do ácido 4-amino-lH- pirazole-3-carboxí lico (50 mg, 0,23 mmol), EDO (53 mg, 0,27 mmol) e HOBt (37 mg, 0,27 mmol) em DMF (5 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por LC/MS preparativa e, após a evaporação das fracções contendo o produto, produziu o produto como um sólido rosado (12 mg, 15%). (LC/MS: Tr 4,00, [M+H]+ 354,67). EXEMPLO 26* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-benzoilamino-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 25 utilizando ácido benzóico (31 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido cor-de-rosa (26 mg, 35%). (LC/MS: Tr 3,96, [M+H]+ 324,65). EXEMPLO 2 7* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(ciclo-hexanocarbonil-amino-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 25 utilizando ácido ciclo-hexanocarboxílico (32 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido cor-de-rosa (28 mg, 37%). (LC/MS: Tr 4,16, [M+H]+ 330,70). EXEMPLO 28 * Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[(l-metil-ciclopropanocarbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 25 utilizando ácido 1-metil-ciclopropanocarboxílico (25 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido cor-de-rosa (24 mg, 35%) . (LC/MS: Tr 3,72, [M+H] + 302,68). EXEMPLO 29* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(2-hidroxi-acetilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 25 utilizando ácido hidroxi-acético (19 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido branco (26 mg, 41%). (LC/MS: Tr 2,65, [M+H]+ 278,61). EXEMPLO 30* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(2,2-dimetil-propionilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 25 utilizando ácido 2,2-dimetil-propiónico (26 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido cor-de-rosa (21 mg, 30%). (LC/MS: Tr 3,83, [M+H]+ 304,68). EXEMPLO 31 * Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(3-hidroxi-propionilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 25 utilizando ácido 3-hidroxi-propiónico (75,1 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido bege (5 mg, 8%). (LC/MS: Tr 2,58, [M+H]+ 292,65). EXEMPLO 32* Síntese de (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(2-fluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
Foi adicionado ácido 2-fluorobenzóico (36 mg, 0,25 mmol) a uma solução de (4-fluoro-fenil)-amida do ácido 4-amino-lH- pirazole-3-carboxí lico (50 mg, 0,23 mmol), EDO (53 mg, 0,27 mmol) e HOBt (37 mg, 0,2 7 mmol) em DMSO (1 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas e purificada por LC/MS preparativa. A evaporaçao das fracções contendo o produto produziu o produto como um sólido branco (15 mg, 19%). (LC/MS: Tr 3,91, (M+H]+, 342,66) . EXEMPLO 33 * Síntese de 4-Fluorofenil-amida do ácido 4-(3-fluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 32 utilizando ácido 3-fluorobenzóico (36 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido branco (19 mg, 24%). (LC/MS: Tr 4,03, [M+H]+ 342,67). EXEMPLO 34* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(3-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 3-metoxi-benzóico (39 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido branco (20 mg, 25%). (LC/MS: Tr 3,97, [M+H]+ 354,68). EXEMPLO 35* Síntese de (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(2-nitro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 2-nitrobenzóico (43 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido branco (17 mg, 20%). (LC/MS: Tr 3,67, [M+H]+ 369,66). EXEMPLO 36* síntese de (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(4-nitro- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 4-nitrobenzóico (43 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido branco (15 mg, 18%). (LC/MS: Tr 3,98, [M+H]+ 369,63). EXEMPLO 37* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[(3-metil-furan-2-carbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 3-metil-2-furóico (32 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido branco (15 mg, 20%). (LC/MS: Tr 3,86, [M+H]+ 328,68). EXEMPLO 38* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[(furan-2-carbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 2-furóico (29 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido branco (18 mg, 25%). (LC/MS: Tr 3,56, [M+H]+ 314,64). EXEMPLO 39* Síntese_de_( 4-Fluoro-f enil) -amida_do_ácido 4-[(3H-imidazole-4-carbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido lH-imidazole-4-carboxílico (29 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido branco (16 mg, 22%). (LC/MS: Tr 2,59, [M+H]+ 314,65). EXEMPLO 40* Síntese de (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(4-fluoro- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 4-fluorobenzóico (36 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido de cor creme (23 mg, 29%). (LC/MS: Tr 4,00, [M+H]+ 342,67). EXEMPLO 41 * Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 2,6-difluorobenzóico (40 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido de cor creme (25 mg, 30%). (LC/MS: Tr 3,76, [M+H]+ 3 6 0,66) . EXEMPLO 42* Síntese de (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(3-nitro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 3-nitrobenzóico (43 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido de cor creme (15 mg, 18%). (LC/MS: Tr 3,94, [M+H]+ 369,65). EXEMPLO 43* Síntese de [3-(4-Fluoro-fenilcarbamoil)-lH-pirazol-4-il]- amida do ácido lH-indole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido indole-3-carboxílico (41 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido cor de ferrugem (14 mg, 17%). (LC/MS: Tr 3,60, [M+H] + 363,66) . EXEMPLO 44* Síntese_de_( 4-Fluoro-f enil) -amida_do_ácido 4-(4-hidroximetil-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 32 utilizando ácido 4-hidroximetilbenzóico (39 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido branco (19 mg, 23%). (LC/MS: Tr 3,12, [M+H]+ 354,68). EXEMPLO 45* Síntese de (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(3-metil-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 3-metilbenzóico (35 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido esbranquiçado (21 mg, 27%) . (LC/MS: Tr 4,13, [M+H]+ 338, 71) . EXEMPLO 46* Síntese de (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(2-metil-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do
Exemplo 32 utilizando ácido 2-metilbenzóico (35 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido esbranquiçado (20 mg, 26%). (LC/MS: Tr 4,05, [M+H]+ 338,69). EXEMPLO 4 7* Síntese de (4-Fluorofenil)-amida do ácido 4-(4-metil- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 32 utilizando ácido 4-metilbenzóico (35 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido esbranquiçado (19 mg, 24%). (LC/MS: Tr 4,16, [M+H]+ 338,70). EXEMPLO 48* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[(2-metil- tiofeno-3-carbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico
Foi adicionado ácido 2-metil-3-tiofenocarboxílico (36 mg, 0,25 mmol) a uma solução de (4-fluoro-f enil) -amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (Exemplo 2B) (50 mg, 0,23 mmol), EDO (53 mg, 0,27 mmol) e HOBt (37 mg, 0,27 mmol) em DMSO (1 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. A mistura reaccional foi adicionada, gota a gota, a água (30 mL) e o sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água e seco por sucção. O composto em epígrafe foi obtido como um sólido bege (15 mg, 19%). (LC/MS: Tr 4, 08, [M+H]+ 344,67) . EXEMPLO 49* Síntese de [3-(4-Fluoro-fenilcarbamoil)-lH-pirazol-4-il]- amida do ácido quinolina-2-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 48 utilizando ácido quináldico (44 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido castanho (16 mg, 19%). (LC/MS: Tr 4,29, [M+H]+ 375,66). EXEMPLO 50* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[(tiofeno-3-carbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico
A experiência foi realizada de um modo análogo ao do Exemplo 48 utilizando ácido tiofeno-3-carboxílico (33 mg, 0,25 mmol) como ácido de partida. O produto foi isolado como um sólido bege (15 mg, 20%). (LC/MS: Tr 3,77, [M+H]+ 330,61). EXEMPLO 51* ( 4-Fluorof enil) -amida_do_ácido_4- (2-fluoro-3-metoxi- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
Ácido 2-fluoro-3-metoxibenzóico (0,047 g, 0,28 mmol), ( 4-fluoro-fenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3- carboxílico (Exemplo 2B) (0,055 g, 0,25 mmol), EDO (0,58 g, 0,30 mmol) e HOBt (0,041 g, 0,30 mmol) foram agitados à temperatura ambiente em DMSO (1,25 mL) durante 5 horas. A mistura reaccional foi vertida para água (30 mL) e o sólido resultante foi recolhido por filtração e seco numa estufa de vácuo para dar o composto em epígrafe como um sólido cinzento (0,058 g, 63%). (LC/MS: Tr 3,99, [MH]+ 372,98). EXEMPLO 52* Síntese de 4-Fluorofenilamida do ácido 4-[2-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-benzoilamino]-lH-pirazole-3-carboxílico 52A Éster metílico do ácido 2-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-benzóico
Foi adicionado azodicarboxilato de diisopropilo (0,404 g, 2 mmol), gota a gota, a uma solução de trifenilfosfina (0,524 g, 2 mmol) em THF (10 mL) . Foi adicionado salicilato de metilo (0,304 g, 2 mmol), gota a gota, e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Foi adicionada 1,2-hidroxietilpirrolidina (0,230 g, 2 mmol), gota a gota, e a mistura reaccional foi deixada sob agitação à temperatura ambiente durante mais 1,5 horas. A solução resultante foi reduzida in vacuo e submetida a cromatografia em coluna flash, eluindo com hexano: acetato de etilo (5:1, 1:1) em seguida acetato de etilo : metanol (4:1) para dar o produto como um óleo amarelo transparente (0,104 g, 21%). (LC/MS: Tr 0,69, 1,62, [MH]+ 250,02). 52B 4-Fluorofenilamida do ácido 4-[ 2-(2-pirrolidin-l-il-etoxil-benzoilamino]-lH-pirazole-3-carboxílico
Éster metílico do ácido 2-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-benzóico (0,104 g, 0,42 mmol) foi tratado com NaOH aquoso 2 M (20 mL) e água (20 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas, em seguida reduzida in vacuo e submetida a evaporação azeotrópica com tolueno (3x5 mL) . Foi adicionada água (50 mL) e a mistura ajustada a pH 5 utilizando HC1 aquoso 1 Μ. A solução resultante foi reduzida in vacuo e submetida a evaporação azeotrópica com tolueno (3x5 mL) para dar um sólido branco, que foi combinado com (4-fluoro-fenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (Exemplo 2B) (0,055 g, 0,25 mmol), EDC (0,058 g, 0,3 mmol) e HOBt (0,041g, 0,3 mmol) e agitado à temperatura ambiente em DMSO (3 mL) durante 20 horas. A mistura reaccional foi vertida para água (30 mL) e o sólido resultante foi recolhido por filtração e seco num estufa de vácuo para dar o composto em epígrafe como um sólido cinzento (0,015 g, 14%). (LC/MS: Tr 2,18, [MH]+ 438,06). EXEMPLO 53 Síntese de_(1-Metil-piperidin-4-il) -amida do_ácido 4-(2,6-difluoro-benzilamino)-lff-pirazole-3-carboxílico
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazole-3-carboxílico (134 mg, 0,50 mmol) , 4-amino-IV-metilpiperidina (50,0 pL, 0,45 mmol), EDAC (104 mg, 0,54 mmol) e HOBt (73,0 mg, 0,54 mmol) em DMF (3 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi reduzido in vacuo, o resíduo retomado em AcOEt e lavado sucessivamente com bicarbonato de sódio aquoso saturado, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A porção orgânica foi seca (MgSCP) e reduzida in vacuo para dar (1-metil-piperidin-4-il)-amida do ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico como um sólido branco (113 mg, 69%) . (LC/MS: Tr 2,52, [M+H] + 364,19). EXEMPLO 54* Síntese de (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(ciclo-hexil-metil-amino)-lH-pirazole-3-carboxílico
Este composto foi preparado de um modo análogo ao composto de Exemplo 19 por alquilações redutivas sucessivas utilizando primeiro ciclo-hexanona e em seguida formaldeído. (LC/MS: Tr 2,77 [MH]+ 316,71) . EXEMPLO 55* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(piridin-2-ilamino)-1H-pirazole-3-carboxílico
0 composto em epígrafe foi preparado de um modo análogo ao composto do Exemplo 23. (LC/MS: Tr 2,07 [MH]+298, 03) . EXEMPLOS 56 - 81
Seguindo os processos descritos nos exemplos anteriores ou métodos análogos daqueles, ou realizando transformações químicas utilizando os compostos descritos nos exemplos acima e métodos de síntese bem conhecidos do especialista, foram preparados os compostos indicados no Quadro 3.
EXEMPLO 82* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[(4-amino-l-metil-lH-imidazole-2-carbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico
Foi adicionado ácido trifluoroacético (200 pL) a uma suspensão, mantida sob agitação, de éster terc-butilico do ácido {2-[3-(4-fluoro-fenilcarbamoil)-lH-pirazol-4-ilcarbamoil]-1- metil-lH-imidazol-4-il}-carbâmico (30 mg) em diclorometano (5 mL) , em seguida agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O solvente foi evaporado, em seguida reevaporado com tolueno (2 x 10 mL). O resíduo foi triturado com éter dietílico e o sólido resultante recolhido por filtração. O sólido foi lavado com éter dietílico, em seguida seco sob vácuo para dar 15 mg de ( 4-fluoro-fenil)-amida do ácido 4-[(4-amino-l-metil-lH- imidazole-2-carbonil)-amino]-lH-pirazole-3-carboxílico como um sólido esbranquiçado. (LC/MS: [M+H]+ 343,72). EXEMPLO 83 Síntese de Ácido 4-{ [ 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazole-3-carbonil]-amino}-ciclo-hexanocarboxílico 83A._Éster etílico do ácido_4-{ [4-(2,6-difluoro- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carbonil]-amino}-ciclo-hexanocarboxí lico
Foi lentamente adicionado cloreto de tionilo (0,32 mL, 4, mmol) a uma mistura de ácido 4-aminociclo-hexanocarboxílico (572 mg, 4,00 mmol) em EtOH (10 mL) e agitado à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi reduzida in vacuo, submetendo a evaporaçao azeotrópica com tolueno, para dar o éster etílico correspondente (650 mg) como um sólido pálido. A mistura do éster etílico (103 mg, 0,60 mmol), ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico (134 mg, 0,50 mmol), EDC (115 mg, 0,60 mmol) e HOBt (81 mg, 0,60 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi reduzido in vacuo, o resíduo retomado em AcOEt e lavado sucessivamente com bicarbonato de sódio aquoso saturado, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A porção orgânica foi seca (MgSCh) e reduzida in vacuo para dar éster etílico do ácido 4-{ [ 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carbonil]-amino}-ciclo-hexanocarboxílico (112 mg). 83B. Ácido 4-{[4-(2,6-difluoro-benzoilamino-lH-pirazole-3-carbonil]-amino}-ciclo-hexanocarboxílico
Uma mistura do éster (45 mg) (de 83A) em MeOH (2,5 mL) e NaOH aquoso 2 M (2,5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Os voláteis foram removidos in vacuo, foi adicionada água (10 mL) e a mistura ajustada a pH 5 utilizando HC1 aquoso 1 Μ. O precipitado formado foi recolhido por filtração e purificado por cromatografia em coluna utilizando AcOEt/MeOH (1:0 - 9:1) para dar ácido 4-{ [ 4-(2,6-difluoro- benzoilamino)-ΙΗ-pirazo le-3-carbonil]-amino}-ciclo- hexanocarboxilico (11 mg) como um sólido branco e mistura de isómeros cis/trans. (LC/MS: Tr 2,78 e 2,96, [M+H]+ 393,09). EXEMPLOS 84 - 152
Processo Geral A
Preparação de Amida a partir do Ácido Pirazole Carboxílico
Uma mistura do ácido benzoilamino-17í-pirazole-3-carboxí lico apropriado (0,50 mmol)), EDAC (104 mg, 0,54 mmol), HOBt (73,0 mg, 0,54 mmol) e a amina correspondente (0,45 mmol) em DMF (3 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi reduzida in vacuo, o resíduo retomado em AcOEt e lavado sucessivamente com bicarbonato de sódio aquoso saturado, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A porção orgânica foi seca (MgSCh) e reduzida in vacuo para dar o produto desejado.
Processo Geral B
Preparação de Amida a partir de Amino-Pirazole
A uma solução, mantida sob agitação, da amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico apropriada (0,23 mmol), EDAC (52 mg; 0,2 7 mmol) e HOBt (3 7 mg; 0,2 7 mmol) em 5 mL de N,N-dimetilformamida foi adicionado o ácido carboxílico correspondente (0,25 mmol) e a mistura foi então deixada à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura
reaccional foi evaporada e o resíduo purificado por LC/MS preparativa para dar o produto.
Processo Geral C
Desprotecção do Azoto Endocíclico da Piperidina por Remoção do Grupo terc-Butoxicarbonilo
Um produto do Processo A ou Processo B contendo um grupo piperidina que tem um grupo de protecção N-terc-butoxicarbonilo (t-Boc) (40 mg) foi tratado com acetato de etilo/HCl saturado, e agitado à temperatura ambiente durante 1 hora. Um sólido precipitou da mistura reaccional, o qual foi filtrado, lavado com éter e em seguida seco para dar 25 mg de produto (LC/MS: [M+H]+364).
Processo L
Preparação de Materiais de Partida de Amina 0 método que se segue foi utilizado para preparar as seguintes aminas: 4-tiomorfolina-4-il-ciclo-hexilamina; 4-(1,1-dioxo-tiomorfoiina-4-il)-ciclo-hexilamina; N- (tetra-hidro-piran-4-il)-ciclo-hexano-1,4-diamina; 4-(4-metil-piperazin-l-il)-ciclo-hexilamina; 1'-metil-[1,4']bipiperidinil-4-ilamina; e 4-morfo1in-4-il-ciclo-hexilamina.
Uma solução de N-4-Boc-aminociclo-hexanona (0,5 g, 2,3 mmol) em THF (10 mL) foi tratada com a amina apropriada, e. g., tiomorfolina (0,236 g, 2,3 mmol), e triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,715 g, 2,76 mmol) e ácido acético (0,182 mL). A reacção foi agitada de um dia para o outro, à temperatura ambiente, em seguida diluída com CH2CI2 e lavada com carbonato de sódio saturado. A camada orgânica foi seca sobre MgSCg e evaporada para dar um sólido branco que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. O sólido branco foi tratado com HCl/AcOEt saturado, agitado à temperatura ambiente durante 1 hora, evaporado até à secura e em seguida reevaporado com tolueno. As aminas resultantes foram isoladas como o sal de cloridrato. (LC/MS: Tr 1,75, [M+H]+ 201).
Seguindo os Processos Gerais A, B, C e L, modificados onde especificado, foram preparados os compostos indicados no Quadro 4 .
EXEMPLOS 153 - 165
Processo Geral D
Preparação de 4-Hidroxi-ciclo-hexilamida do ácido 4-amino-pirazol-3-ilcarboxílico Protegido
Passo D (i):
Uma mistura de ácido 4-nitro-3-pirazolecarboxílico (4,98 g, 31,7 mmol), tra/is-4-aminociclo-hexanol (3,65 g, 31,7 mmol)), EDAC (6,68 g, 34,8 mmol)) e HOBt (4,7 g, 34,8 mmol) em DMF (120 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi reduzida in vacuo, o resíduo retomado em CH2CI2 e lavado sucessivamente com ácido cítrico a 5%, bicarbonato de sódio aquoso saturado, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Foi determinado que o produto estava principalmente na lavagem de ácido cítrico, a qual foi basificada e extraída com AcOEt. A camada orgânica foi seca sobre MgSCh, filtrada e evaporada para dar um sólido branco, o qual foi triturado com CHCI3 para dar 1,95 g de 4-hidroxi-ciclo-hexilamida do ácido 4-nitro-lH-pirazole-3-carboxílico. (LC/MS: Tr 1,62, [M+H]+ 255).
Passo D (ii):
Introdução do Grupo de Protecção Tetra-hidro-piran-2-ilo
Uma solução de 4-hidroxi-ciclo-hexilamida do ácido 4-nitro-lH-pirazole-3-carboxílico (1,95 g; 7,67 mmol) numa mistura de THF (50 mL) e clorofórmio (100 mL) foi tratada com 3,4-di-hidro-2H-pirano (1,54 mL, 15,34 mmol) e mono-hidrato de ácido p-toluenossulfónico (100 mg). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente, de um dia para o outro e, em seguida, foi adicionada pirano em excesso (0,9 mL) do total para levar reacção até à conclusão. A mistura reaccional foi diluída com CH2CI2 e lavada sucessivamente com bicarbonato de sódio aquoso saturado, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução resultante foi reduzida in vacuo e submetida a cromatografia em coluna Biotage, eluindo com hexano (2 comprimentos de coluna) seguida de 30% de acetato de etilo: hexano (10 comprimentos de coluna), 70% de acetato de etilo: hexano (10 comprimentos de coluna) para dar 1,25 g de [4-(tetra-hidro-piran-2-iloxi)-ciclo-hexil]-amida do ácido 4-nitro-l-(tetra-hidro-piran-2-il-lH-pirazole-3-carboxílico. (LC/MS:
Tr 2,97, [M+H]+423) .
Passo D (iii):
Uma solução de [4-(tetra-hidro-piran-2-iloxi)-ciclo-hexil]-amida do ácido 4-nitro-l-(tetra-hidro-piran-2-il)-lH-pirazole-3-carboxílico (0,3 g; 0,71 mmol) em metanol (25 mL) foi tratada
com paládio a 10% sobre carvão (30 mg), em seguida hidrogenada à temperatura e pressão ambiente, de um dia para o outro. O catalisador foi removido por filtração e lavado três vezes com metanol. 0 filtrado foi evaporado para dar 0,264 g do produto necessário. (LC/MS: Tr 2,39, [M+H]+ 393).
Processo Geral E
Processo para Remoção de um Grupo de Protecção Tetra-hidropiran-2-ilo A uma suspensão de [ 4-(tetra-hidro-piran-2-iloxi)-ciclo-hexil]-amida do ácido 4-(2-metoxi-benzoilamino)-1-(tetra-hidro-piran-2-il-lH-pirazole-3-carboxílico (0,125 g, 0,23 mmol) em Et OH (10 mL) foi adicionado hidrato de ácido p-toluenossulfónico (90 mg, 0,46 mmol) . A mistura reaccional foi aquecida a 70 °C durante 30 min. A reacção foi diluída com AcOEt e lavada sucessivamente com bicarbonato de sódio aquoso saturado, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução resultante foi reduzido in vacuo para dar um sólido branco, que continha vestígios de hidrato de ácido p-toluenossulfónico. O sólido foi então retomado em AcOEt e lavado com NaOH 1 M e em seguida com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução resultante foi reduzida in vacuo e, em seguida, triturada com éter/hexano para dar 10 mg do produto necessário. (LC/MS: Tr 2,29, [M+HJ+359)
Processo Geral F
Preparação de uma Ureia a partir de uma Amida do ácido 4-amino-pirazole-3-carboxílico A uma solução de [4-(tetra-hidro-piran-2-iloxi)-ciclo- hexil]-amida do ácido 4-amino-l-(tetra-hidro-piran-2-il-lH- pirazole-3-carboxílico (80 mg, 0,2 mmol) em tolueno (2 mL) foi adicionado fenilisocianato (929 mg, 0,24 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 70 °C durante 1 hora. A reacção foi diluída com AcOEt e lavada sucessivamente com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução resultante foi reduzido in vacuo para dar óleo amarelo. Este foi utilizado sem mais purificação. (LC/MS: Tr 2,28, [M+H]+ 344).
Processo Geral G
Conversão de um grupo 4-Amino-pirazole num grupo 4-(Morfolina-4-carbonilamino)-pirazole A uma solução de [4-(tetra-hidro-piran-2-iloxi)-ciclo- hexil]-amida do ácido 4-amino-l-(tetra-hidro-piran-2-il-lH- pirazole-3-carboxí lico (0,1 g, 0,255 mmol) em CH2CI2 (5 mL) a -10 °C foi adicionada, gota a gota, uma solução de fosgénio a 20% em tolueno. A mistura reaccional foi agitada a -10 °C durante 15 min e em seguida foi adicionada morfolina
(0,765 mmol). A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 1 hora, em seguida agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A reacção foi diluída com CH2CI2 e lavada sucessivamente com bicarbonato de sódio saturado e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução resultante foi reduzida in vacuo para dar um óleo amarelo que foi utilizado sem mais purificação. (LC/MS: Tr 1,68, [M+H]+33 8) .
Processo Geral H
Preparação de N-Óxidos A uma suspensão do composto do Exemplo 53 (7,7 mg, 0,02 mmol) em CH2CI2 (0,5 mL) foi adicionado ácido meta-cloroperbenzóico (MCPBA) (3,6 mg, 0,02 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e em seguida evaporada. O resíduo foi purificado por LC/MS preparativa, para dar 3 mg do produto necessário. (LC/MS: Tr 1,83, [M+H]+ 380)
Processo Geral I
Remoção de um Grupo de Protecção benziloxicarbonilo
Uma solução do composto de Exemplo 130 (0,2 g; 0,39 mmol) em AcOEt (40 mL) foi tratada com paládio a 10% sobre carvão (20 mg), em seguida hidrogenada à temperatura e pressão ambiente durante 3 horas. O catalisador foi removido por filtração e lavado três vezes com AcOEt. O filtrado foi evaporado e o resíduo foi submetido a cromatografia utilizando 10% de MeOH-CH2CI2 em seguida 20% de MeOH-CH2Cl2 para dar 80 mg do produto necessário. (LC/MS: Tr 1,88, [M+HJ+378).
Processo Geral J
Mesilação de uma Amina A uma solução do composto do Exemplo 163 (20 mg, 0,05 mmol) em CH3CN (3 mL) foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (0,0045 mL, 0,058 mmol) seguido de base de Hunig (0,018 mL, 0,1 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e foi então evaporada. O resíduo foi purificado por LC/MS preparativa para dar 8 mg do produto necessário. (LC/MS: Tr 2,54, [M+H]+ 456).
Seguindo os Processos A a L foram preparados os compostos indicados no Quadro 5.
Processo Geral M
Formação do grupo pirazole 4-amida
Foi adicionado ácido 4-nitropirazole-3-carboxílico (7,3 g; 15,9 mmol) a uma solução, mantida sob agitação, de 4-amino-l-Boc-piperidina (10,2 mg; 51 mmol), EDC (10,7 g; 55,8 mmol) e HOAt (55,8 g; 19,1 mmol) em DMF (100 mL), e em seguida agitada à temperatura ambiente, de um dia para o outro. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o residuo triturado com água (250 mL) . O sólido creme resultante foi recolhido por filtração, lavado com água, em seguida seco sob vácuo para dar 13,05 g de éster terc-but ilico do ácido 4- [ (4-nitro-lH-pirazole-3-carbonil)-amino]-piperidina-1-carboxílico (LC/MS: Tr 2,50, [M+H]+ 340). Éster terc-butílico do ácido 4-[ (4-nitro-lH-pirazole-3-carbonil)-amino]-piperidina-l-carboxílico (13,05 g) foi dissolvido em etanol/DMF (300 mL/75 mL), tratado com paládio a 10% sobre carvão (500 mg), em seguida hidrogenado à temperatura e pressão ambiente de um dia para o outro. O catalisador foi removido por filtração através de Celite e o filtrado evaporado e reevaporado com tolueno. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash eluindo com AcOEt, em seguida 2% de MeOH/AcOEt depois 5% de MeOH/AcOEt. As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas para dar 8,78 g de éster terc-butilico do ácido 4-[(4-amino-lH-pirazole-3-carbonil)-amino]-piperidina-l-carboxilico como uma espuma castanha. (LC/MS: Tr 1,91, [M+H]+ 310). A uma solução, mantida sob agitação, de éster terc-butilico do ácido 4-[(4-amino-lH-pirazole-3-carbonil)-amino]-piperidina-l-carboxilico (200 mg; 0,65 mmol), EDAC (150 mg; 0,78 mmol) e HOBt (105 mg; 0,78 mmol) em 5 mL de N, N-dimet ilf ormamida foi adicionado o ácido carboxilico correspondente (0,25 mmol) e a mistura foi então deixada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional foi diluída com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e o produto recolhido por filtração e seco sob vácuo. O composto protegido com Boc foi dissolvido em HCl/AcOEt saturado e agitado à temperatura ambiente durante 3 horas. O produto foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco sob vácuo.
Processo Geral N
Preparação de 1-terc-Butil-piperidin-4-ilamina
Passo N (i) A uma solução de 1-etil-4-oxopiperidina (25 g, 0,197 mol) em acetona (250 mL) À TA num banho de água foi adicionado iodeto de metilo (15,5 mL, 0,25 mol) a uma velocidade de tal de modo a manter a temperatura abaixo de 30 °C. A mistura foi filtrada e o precipitado lavado com acetona e seco para produzir iodeto de 1-etil-l-metil-4-oxopiperidínio (45 g) (LC/MS: Tr 0,38, [M+H]+ 143) .
Passo N (ii) A uma solução de t-butilamina (78,2 mL, 0,74 mol) em tolueno (400 mL) foi adicionada uma solução de iodeto de 1-etil-l-met il-4-oxopiperidínio (40g, 0,148 mol) e bicarbonato de sódio (1,245 g, 0,014 mol) em água (60 mL) . A mistura reaccional foi aquecida a 78 °C durante 6 horas e em seguida deixada arrefecer até à temperatura ambiente. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi lavada com AcOEt. Os orgânicos foram combinados e lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (MgS04) , filtrados e reduzidos in vacuo para produzir 1-terc-butil-4-oxopiperidina (14g) (LC/MS: Tr 0,39, [M+H]+ 156) .
Passo N (iii)
Uma solução de 1-terc-butil-4-oxopiperidina (3,6 g, 23,1), benzilamina (5,1 mL, 46,8 mmol), ácido acético (1,5 mL) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (7,38 g, 34,8 mmol) foi agitada ao ambiente durante 2 dias. A mistura reaccional foi reduzida in vacuo, o resíduo partilhado entre K2CO3 aquoso e AcOEt. A porção orgânica foi seca (Na2SC>4) , filtrada e reduzida in vacuo. Ο resíduo foi submetido a cromatografia utilizando CH2Cl2/Me0H/NH40H (87/12/1) como o eluente para produzir N-benzil-l-terc-butilpiperidin-4-amina (l,5g) (LC/MS: Tr 0,45, [M+H]+ 247) .
Passo N (iv)
Uma solução de N-benzil-l-terc-butilpiperidin-4-amina (1,56 g) e paládio a 10% sobre carvão (2 g) em MeOH (250 mL) foi hidrogenada num agitador de Parr a 50 psi durante 16 horas. A solução foi filtrada e a mistura reaccional reduzida in vacuo, para produzir 1-terc-butilpiperidin-4-amina (0,64 g) (LC/MS: Tr 02,31, sem [M+H]+) . EXEMPLO 165* Síntese de [5-fluoro-2-(1-metil-piperidin-4-iloxi)-fenil]-amida do ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico 165A. Síntese de éster metílico do ácido 4-nitro-lH-pirazole-3-carboxílico
Foi lentamente adicionada cloreto de tionilo (2,90 mL, 39,8 mmol) a uma mistura de ácido 4-nitro-3-pirazolecarboxílico (5,68 g, 36,2 mmol) em EtOH (100 mL) à temperatura ambiente e a mistura agitada durante 48 h. A mistura foi reduzida in vacuo e seca através de azeótropo com tolueno para proporcionar éster etílico do ácido 4-nitro-lH-pirazole-3-carboxílico como um sólido branco (6,42 g, 96%). (RMN de ΤΗ (400 MHz, DMSO-d6) δ 14,4 (s, 1H), 9,0 (s, 1H), 4,4 (q, 2H), 1,3 (t, 3H)). 165B. Síntese de éster etílico do ácido 4-amino-lH- pirazole-3-carboxílico
Uma mistura de éster etílico do ácido 4-nitro-lH-pirazole-3-carboxílico (6,40 g, 34,6 mmol) e Pd a 10%/C (650 mg) em EtOH (150 mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 20 h. A mistura foi filtrada através de um tampão de Celite, reduzida in vacuo e seca através de azeótropo com tolueno para proporcionar éster etílico do ácido 4-amino-lH-pirazole-3- carboxílico como um sólido cor-de-rosa (5,28 g, 98%) . (RMN de ΤΗ (400 MHz, DMSO-de) δ 12,7 (s, 1Η) , 7,1 (s, 1 Η), 4,8 (s, 2H), 4,3 (q, 2H), 1,3 (t, 3H)). 165C. Síntese de éster etílico do ácido 4-(2,6-difluoro- benzoilamino) -ΙΗ-pirazole-3-carboxilico
Uma mistura de ácido 2,6-difluorobenzóico (6,32 g, 40,0 mmol), éster etílico do ácido 4-amino-lH-pirazole-3- carboxilico (5,96 g, 38,4 mmol), EDC (8,83 g, 46,1 mmol) e HOBt (6,23 g, 46,1 mmol) em DMF (100 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h. A mistura foi reduzida in vacuo, adicionada água e o sólido formado recolhido por filtração e seco ao ar para dar éster etílico do ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico como o componente principal de uma mistura (15,3 g). (LC/MS: Tr 3,11, [M+H]+ 295,99). 165D. Síntese de ácido 4-2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazole-3-carboxílico
Uma mistura de éster etílico do ácido 4-(2,6-difluoro- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico (10,2 g) em NaOH aquoso 2 M/MeOH (1:1, 250 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. Os materiais voláteis foram removidos in vacuo, adicionada água (300 mL) e a mistura agitada a pH 5, utilizando HC1 aquoso 1 Μ. O precipitado resultante foi recolhido por filtração e seco através de azeótropo com tolueno para proporcionar ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico como um sólido cor-de-rosa (5,70 g). (LC/MS: Tr 2,33, [M+H]+ 267,96). 165E. Síntese de 5-fluoro-2-(1-metil-piperidin-4-iloxi)-fenilamina
3,4-Dinitrofluorobenzeno (1,86 g, 10 mmol) e 4-hidroxi-l-metilpiperidina (1,38 g, 12 mmol) em THF (20 mL) foram dissolvidos e agitados à temperatura ambiente, enguanto era adicionado hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 0,40 g, 10 mmol) em várias porções peguenas. A mistura reaccional foi agitada durante um hora e, em seguida, reduzida in vacuo, partilhada entre acetato de etilo e água, e a fase orgânica lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgSCh) e reduzida in vacuo. O resíduo resultante foi submetido a cromatografia em coluna, eluindo com 5% de MeOH/DCM para dar um sólido amarelo (1,76 g, proporção 2:1 de 4-(3,4-dinitro-fenoxi)-1-metil-piperidina e um 4-(4-fluoro-2-nitro- fenoxi)-1-metil-piperidina).
Uma amostra da mistura de produtos obtida (0,562 g) foi dissolvida em DMF (10 mL) sob uma atmosfera de azoto. Foi adicionado paládio sobre carvão (10%, 0,056 g) e a mistura reaccional foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 40 horas. Os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado reduzido in vacuo, retomado em acetato de etilo, lavado (solução aquosa saturada de cloreto de amónio, em seguida solução aquosa saturada de cloreto de sódio), seco (MgSCh) e reduzido in vacuo para dar 5-fluoro-2-(1-metil-piperidin-4-iloxi)-fenilamina) como um óleo castanho (0, 049 g, 7%) . (RMN de ΤΗ (400 MHz, MeOD-d-i) δ 6,6 (m, 2H), 6,4 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 2,7 (m, 2H), 2,3 (m, 2H), 1,9 (m, 2H) , 1,7 (m, 2H) ) . 165F. Síntese de [5-fluoro-2-(1-metil-piperidin-4-iloxi)-fenil]-amida do ácido 4-(2,6-Difluoro-benzoilamino-lH-pirazole- 3- carboxílico
5-Fluoro-2-(1-metil-piperidin4-iloxi)-fenilamina) (0,049 g, 0,22 mmol) foi combinada com ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico (0,053 g, 0,20 mmol), EDC (0,048 g, 0,25 mmol), HOBt (0,034 g, 0,25 mmol) e DMF (1 mL) e a mistura reaccional resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura reaccional foi reduzida in vacuo e purificada por LC/MS preparativa para dar [5-fluoro-2-(1-metil-piperidin-4-iloxi)-fenil]-amida do ácido 4- (2,6-Difluoro-benzoilarnino)-lH-pirazole-3-carboxílico como um sólido cor de camurça. (0,010 g, 11 %) (LC/MS: Tr 2,19, [M+H] + 474,27). EXEMPLO 166* Síntese de [5 — £luoro-2-(2-pirrodin-l-il-etoxi)-fenil]-amida do ácido 4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
3,4-Dinitrofluorobenzeno (0,93 g, 5 mmol) e 1-(2-hidroxietilpirrolidina) (0,69 g, 6 mmol) foram dissolvidos em THF (10 mL) e agitados à temperatura ambiente, enquanto era adicionado hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 0,24 g, 6 mmol) em várias porções pequenas. A mistura reaccional foi agitada durante 5 horas, diluída com acetato de etilo e os orgânicos combinados lavados com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (MgSCh) e reduzidos in vacuo. Ο resíduo resultante foi submetido a cromatografia em coluna, eluindo com 5% de MeOH/DCM para dar um óleo laranja (0,94 g, proporção 1:1 de 1-[ 2-(3,4-dinitro-fenoxi)-etil]-pirrolidina e 1-[2-(4-Fluoro-2-nitro-fenoxi)-etil]-pirrolidina.
Uma amostra da mistura de produtos obtida (0,281 g) foi dissolvida em DMF (5 mL) sob uma atmosfera de azoto. Foi adicionado paládio sobre carvão (10%, 0,028 g) e a mistura reaccional foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 20 horas. Os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado reduzido in vacuo e combinado com ácido 4-(2,6-difluoro- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico (0,134 g, 0,50 mmol),
EDC (0,116 g, 0,60 mmol), HOBt (0,081 g, 0,60 mmol) e DMF (2,5 mL) e a mistura reaccional resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura reaccional foi reduzida in vacuo e o resíduo partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL). A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgSCh) e reduzida in vacuo para dar as amidas intermediárias. Foi adicionado ácido acético (10 mL) à amida em bruto e a mistura foi aquecida a refluxo durante 3 horas e em seguida reduzida in vacuo. [ 5-Fluoro-2-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenil]-amida do ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico foi isolada do resíduo por LC/MS preparativa como um sólido esbranquiçado (0,040 g, 5,6 %). (LC/MS: Tr 2,38, [M+H]+ 474,33). EXEMPLOS 167 - 223
Seguindo os processos descrito acima foram preparados os compostos indicados no Quadro 6.
EXEMPLO 224* ( 4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(4-metil-piperazin-l-il)-lH-pirazole-3-carboxílico
Foi adicionado cloridrato de bis (2-cloroetil) metilamina (97 mg; 0,5 mmol) a uma solução, mantida sob agitação, de (4-fluoro-fenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (100 mg; 0,45 mmol), iodeto de tetrabut ilamónio (20 mg; 0,045 mmol) e diisopropiletilamina (200 uL) 1,13 mmol) em DMF (5 mL) , e a mistura resultante foi aquecida a 200 °C (100 W) durante 30 minutos num sintetizador de microondas CEM Discover™. A DMF foi removida sob vácuo, em seguida purificada por cromatografia em coluna flash, eluindo com diclorometano/metanol/ácido acético/água (90:18:3:2). As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas, tratadas com HC1 em acetato de etilo e em seguida reevaporadas com tolueno (2x20 mL) para dar um sólido esbranquiçado (27 mg). (LC/MS: Tr 1,64, [M+H]+ 378). EXEMPLO 225* ( 4-Fluoro-f enil) -amida_do_ácido_4-morfolin-4-il-lH- pirazole-3-carboxílico
0 composto foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 224, mas utilizando éter bis(2-cloroetilico) em vez de cloridrato de bis(2-cloroetil)metilamina. (LC/MS: Tr 2,48 [M+H]+ 291). EXEMPLO 226* 4-(4-Metil-piperazin-l-il)-benzilamida do ácido 4-(2,4-dicloro-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico
226A. Preparação de ácido 4-(2,4-dicloro-fenil)-1H- pirazole-3-carboxílico
Uma solução de éster etílico do ácido 4-(2,4-dicloro-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico (205 mg; 0,72 mmol) e mono- hidrato de hidróxido de litio (125 mg; 2,9 mmol) em THF/água 1:1 (10 mL) foi aquecida a 60 °C de um dia para o outro. O THF foi removido por evaporação, a fase aquosa acidificada com ácido clorídrico 1 M, em seguida extraída com acetato de etilo (20 mL) . A camada de acetato de etilo foi seca (MgSCg) , filtrada e evaporada para dar 200 mg de ácido 4-(2,4-dicloro-fenil)-1H-pirazole-3-carboxílico. (LC/MS: [M+H]+256,85) . 226B. Preparação de 4-(4-metil-piperazin-l-il)-benzilamida do ácido 4-(2,4-dicloro-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico
Uma solução de ácido 4-(2,4-dicloro-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico (70 mg; 0,27 mmol), 4-(4-metil-piperazin-l-il)-benzilamina (62 mg; 0,3 mmol), EDAC (63 mg; 0,33 mmol) e HOBt (45 mg; 0,33 mmol) em 5 mL de DMF foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas. A reacção foi evaporada e o resíduo partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada de acetato de etilo foi separada, seca (MgSCh) , filtrada, evaporada em seguida, novamente seca sob vácuo para dar 34 mg de 4-(4-metil-piperazin-l-il)-benzilamida do ácido 4-(2,4-dicloro-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico. (LC/MS: Tr 2,42 [M+HJ+444). EXEMPLO 22 7* 4-Metilsulfamoilmetil-benzilamida do ácido 4-(2,4-dicloro-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico
0 composto em epígrafe foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 226, mas utilizando (4-aminometil-fenil)-N-metil- metanossulfonamida como o material de partida. Foram isolados 6 mg de produto como um sólido branco. (LC/MS: Tr 3,56 [M+H]+440) . EXEMPLO 228*
Amida do ácido 4-fenil-lH-pirazole-3-carboxílico
228A. 2-Benzilideno-but-3-ino nitrilo A uma solução de benzaldeído (2 g; 18,9 mmol) e malononitrilo (1,37 g; 20,7 mmol) em etanol (40 mL) foram adicionadas 5 gotas de piperidina e a mistura foi aquecida a refluxo de um dia para o outro. A reacção foi arrefecida, evaporada, em seguida purificada por cromatografia em coluna flash eluindo com acetato de etilo/hexano 1:9 e as fracções contendo produto combinadas e evaporadas para dar 930 mg de 2-benzilideno-but-3-ino nitrilo. 228B. 4-fenil-5-trimetilsilanil-lH-pirazole-3-carbonitrilo
Foi adicionado n-butil-lítio (solução 2,7 M em heptano) (3,3 mL, 9 mmol) , gota a gota, a uma solução, mantida sob agitação, de trimetilsilildiazometano (solução 2 M em éter dietílico) (4,5 mL, 9 mmol) em THF anidro (10 mL) a -78 °C sob uma atmosfera de azoto, em seguida agitada durante mais 30 minutos. A esta foi adicionada, gota a gota, uma solução de 2-benzilideno-but-3-ino nitrilo (920 mg; 6 mmol) em THF anidro (5 mL), a mistura agitada durante 30 minutos a -78 °C, em seguida deixada aguecer gradualmente até à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo (30 mL) em seguida lavada com solução saturada de cloreto de amónio seguida de solução aguosa saturada de cloreto de sódio. A camada de acetato de etilo foi separada, seca (MgSCh) , filtrada e evaporada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash eluindo com acetato de etilo/hexano 1:8 em seguida 1:4 e as fracções contendo produto combinadas e evaporadas para dar 1,0 g de 4-fenil-5- trimetilsilanil-lH-pirazole-3-carbonitrilo. 228C. amida do ácido 4-fenil-lH-pirazole-3-carboxílico 4-Fenil-5-trimetilsilanil-lH-pirazole-3-carbonitrilo (500 mg; 2,1 mmol) foi dissolvido em 1 mL de etanol, tratado com hidróxido de potássio (600 mg) em água (3 mL) em seguida aquecido a 150 °C (100 W) durante 30 minutos depois 170 °C (100 W) durante 20 minutos num sintetizador de microondas CEM Discover™. A mistura reaccional foi acidificada até pHl com ácido clorídrico concentrado, diluída com água (40 mL) em seguida extraída com acetato de etilo (2 x 40 mL). As camadas de acetato de etilo combinadas foram separadas, secas (MgSCh) , filtradas e evaporadas para dar uma mistura 3:1 de ácido 4-fenil-lH-pirazole-3-carboxílico e amida do ácido 4-fenil-lH-pirazole-3-carboxílico. Um lote de 50 mg do material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash eluindo com 5% de metanol/diclorometano, e as fracções contendo produto combinadas e evaporadas para dar 15 mg de amida do ácido 4-fenil-lH-pirazole-3-carboxílico como um sólido branco. (LC/MS: Tr 2,15 [M+H]+ 188) . EXEMPLO 229* fenilamida do ácido 4-fenil-lH-pirazole-3-carboxílico
Uma solução de ácido 4-fenil-lH-pirazole-3-carboxílico (75 mg; 0,4 mmol) (preparado de acordo com o Exemplo 228C), anilina (45 pL; 0,48 mmol), EDAC (92 mg; 0,48 mmol) e HOBt (65 mg; 0,48 mmol) em 5 mL de DMF foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A reacção foi evaporada, em seguida purificada por cromatografia em coluna flash eluindo com acetato de etilo/hexano 1:3 em seguida 1:2. As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas para dar 30 mg de fenilamida do ácido 4-fenil-lH-pirazole-3-carboxílico como um sólido branco. (LC/MS: Tr 3,12 [M+HJ+264). EXEMPLO 230* 4-(4-Metil-piperazin-l-il)-benzilamida do ácido 4-fenil-lH-pirazole-3-carboxílico
O composto foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 229, mas utilizando 4-(4-metil-piperazin-l-il)-benzilamina como o material de partida. Foram isolados 6 mg de produto como um sólido branco. (LC/MS: Tr 2,05 [M+H]+ 376). EXEMPLO 231* (6-Metoxi-piridin-3-il) amida do ácido 4-fenil-lH-pirazole- 3-carboxilico
O composto foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 230, mas utilizando 3-amino-6-metoxipiridina como um fragmento de amina. 100 mg de produto foram isolados como um sólido castanho pálido. (LC/MS: Tr 3,17 [M+HJ+295). EXEMPLO 232* 4- ( 4-Metil-pinerazin-l-il) -benzilamida_do_ácido 4-(3-Benziloxi-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico
0 composto foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 226. 0 produto foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 2,65 [M+H]+ 482). EXEMPLO 233* 4- ( 4-Metil-piperazin-l-il) -benzilamida_do_ácido 4-(3-hidroxi-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico
Uma solução de 4-(4-metil-piperazin-l-il)-benzilamida do ácido 4-(3-benziloxi-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico (25 mg; 0,05 mmol) em metanol (5 mL) , foi tratada com paládio a 10% sobre carvão (10 mg), em seguida hidrogenada à temperatura e pressão ambiente de um dia para o outro. 0 catalisador foi removido por filtração através de Celite e o filtrado evaporado. A purificação por LC/MS preparativa deu 8 mg do produto necessário como um sólido creme. (LC/MS: Tr 1,67 [M+H]+392). EXEMPLO 234* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(5-metil-3H-imidazol-4-il)-lH-pirazole-3-carboxílico
0 composto foi preparado de um modo análogo ao Exemplo 226, mas utilizando 4-metil-5-formilimidazole como o material de partida no passo de condensação. 0 produto (6 mg) foi isolado como um sólido branco. (LC/MS: Tr 2,00 [M+H]+ 286) . EXEMPLO 235* (4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-lH-pirazole-3-carboxílico
Uma mistura de (4-fluoro-fenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (100 mg) e argila de Montemorilonite KSF (100 mg) em acetonilacetona (1 mL) foi aquecida a 120 °C (50 W) durante 15 minutos num sintetizador de microondas CEM discover. A mistura reaccional foi diluída com 5% de metanol/diclorometano, filtrada e evaporada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash eluindo com acetato de etilo/hexano 1:2 e as fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas para dar 65 mg da molécula alvo como um sólido castanho pálido. (LC/MS: Tr 3,75 [M+H]+ 299). EXEMPLO 236*
Fenilamida do ácido 4-(3-hidroximetil-fenil)-lH-pirazole-3-carboxílico
236A. fenilamida do ácido 4-iodo-lH-pirazole-3-carboxílico
Uma solução aquosa de nitrito de sódio ( 760 mg) em 2 mL de água foi adicionada, gota a gota, a uma suspensão, mantida sob agitação, de fenilamida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (2 g; 10 mmol) em ácido clorídrico concentrado (20 mL) a 0 °C, em seguida agitada a 0 °C durante mais 60 minutos. A mistura reaccional foi diluída com acetona (10 mL) , em seguida tratada com iodeto de potássio (1,8 g) e iodeto de cobre(II) (2,1 g) e agitada à temperatura ambiente durante 90 minutos. A mistura reaccional foi diluída com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e acetato de etilo, em seguida lavada com solução saturada de tiossulfato de sódio. A camada de acetato de etilo foi separada, seca (MgSCg) , filtrada e evaporada para dar 680 mg de fenilamida do ácido 4-iodo-lH-pirazole-3-carboxílico. 236B. fenilamida do ácido 4-iodo-l-(4-metoxi-benzil)-1H- pirazole-3-carboxílico
Uma solução de fenilamida do ácido 4-iodo-lH-pirazole-3-carboxilico (670 mg; 2,14 mmol) em acetonitrilo (10 mL) foi tratada com carbonato de potássio (360 mg; 2,57 mmol)) seguida de cloreto de 4-metoxibenzilo (320 pL; 2,35 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, em seguida evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio; a camada de acetato de etilo foi separada, seca (MgSCh) , filtrada e evaporada. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash eluindo com acetato de etilo/hexano 1:3 e as fracções contendo produto combinadas e evaporadas para dar 660 mg de fenilamida do ácido 4-iodo-l-(4-metoxi-benzil)-lH-pirazole-3-carboxílico. 236C. fenilamida do ácido 4-(3-hidroximetil-fenil)-4- metoxi-benzil)-lH-pirazole-3-carboxílico
Uma mistura de 4-iodo-l-(4-metoxi-benzil)-lH-pirazole-3-carboxílico fenilamida do ácido (50 mg; 0,11 mmol), bis(tri-terc-butilfosfina)paládio (12 mg), carbonato de potássio (100 mg; 0,66 mmol) e ácido 3-(hidroxmetil)benzenoborónico (21 mg; 0,14 mmol) em etanol/tolueno/água (4 mL: 1 mL: 1 mL) foi aquecida a 120 °C (50 W) durante 15 minutos num sintetizador de microondas CEM Discover. A reacção foi evaporada e o resíduo partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada de acetato de etilo foi separada, seca (MgSCh) , filtrada e evaporada e o material em bruto purificado por cromatografia em coluna flash eluindo com acetato de etilo/hexano 1:2 em seguida 2:1. As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas para dar 60 mg de fenilamida do ácido 4-(3-hidroximetil-fenil)-1-(4-metoxi-benzil)-lH-pirazole- 3- carboxílico. 236D. Fenilamida do ácido 4-(3-hidroximetil-fenil)-1H-pirazole-3-carboxílico
Uma mistura de fenilamida do ácido 4-(3-hidroximetil-fenil)-1-(4-metoxi-benzil)-lH-pirazole-3-carboxílico (20 mg) e anisole (20 pL) em ácido trifluoroacético (1 mL) foi aquecida a 120 °C (50 W) durante 15 minutos num sintetizador de microondas CEM Discover. A reacção foi evaporada, em seguida purificada por cromatografia em coluna flash eluindo com acetato de etilo/hexano 2:1. As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas para dar 5 mg de produto. (LC/MS: Tr 2,55 [M+H]+ 294). EXEMPLO 237
Preparação de cloridrato de piperidin-4-ilamida do ácido 4- (2,6-dicloro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico 237A._ácido_4- (2,6-dicloro-benzoilamino) -lH-pirazole-3- carboxílico
Foi adicionado cuidadosamente cloreto de 2,6-diclorobenzoílo (8,2 g; 39,05 mmol) a uma solução de éster metilico do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (preparado de um modo análogo ao 165B) (5 g; 35,5 mmol) e trietilamina (5,95 mL; 42,6 mmol) em dioxano (50 mL) em seguida agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura reaccional foi filtrada e o filtrado tratado com metanol (50 mL) e solução de hidróxido de sódio 2 M (100 mL) , aquecida a 50 °C durante 4 horas e em seguida evaporada. Foram adicionados 100 mL de água ao resíduo, em seguida acidificado com ácido clorídrico concentrado. O sólido foi recolhido por filtração, lavado com água (100 mL) e seco por sucção para dar 10,05 g de ácido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico como um sólido violeta pálido. 237B. éster terc-butílico do ácido 4-{[4-(2,6-dicloro-benzoilamino ) -lH-pirazole-3-carbonil]-amino}-piperidina-1-carboxílico
Uma mistura de ácido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino)-1H-pirazole-3-carboxílico (6,5 g, 21,6 mmol), 4-amino-l-BOC- piperidina (4,76 g, 23,8 mmol), EDC (5,0 g, 25,9 mmol) e HOBt (3,5 g, 25,9 mmol) em DMF (75 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura reaccional foi reduzida in vacuo e o resíduo partilhado entre acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (100 mL) . A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgSCh) e reduzida in vacuo. O resíduo foi retomado em 5% de MeOH-DCM (~30 mL) . O material insolúvel foi recolhido por filtração, e lavado com DCM e seco in vacuo para dar éster terc-butílico do ácido 4-{[4-(2,6-dicloro- benzoilamino ) -lH-pirazole-3-carbonil]-amino}-piperidina-1-carboxílico (5,38 g) como um sólido branco. O filtrado foi reduzido in vacuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna utilizando eluição gradiente de AcOEt/hexano 1:2 até
AcOEt para dar mais éster terc-butílico do ácido 4-{[4-(2,6- dicloro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carbonil]-amino}-piperidina-1-carboxílico (2,54 g) como um sólido branco. 23 7C ._piperidin-4-ilamida do_ácido_4-(2,6-dicloro- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
Uma solução de éster terc-butilico do ácido 4—{ [4-(2,6- dicloro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carbonil]-amino}-piperidina-1-carboxí lico (7,9 g) em MeOH (50 mL) e AcOEt (50 mL) foi tratada com HCl-AcOEt sat. (40 mL) em seguida agitada à t.a. de um dia para o outro. O produto não cristaliza devido à presença de metanol e, por conseguinte, a mistura reaccional foi evaporada e o resíduo triturado com AcOEt. O sólido esbranquiçado resultante foi recolhido por filtração, lavado com AcOEt e seco por sucção num funil poroso para dar 6,3 g de piperidin-4-ilamida do ácido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino)-1H-pirazole-3-carboxílico como o sal de cloridrato. (LC/MS: Tr 5,89, [M+H]+ 382/384) . EXEMPLO 238* ( 4-Fluoro-fenil)-amida do ácido 4-metanossulfonilamino-lH-pirazole-3-carboxílico
Uma solução de (4-fluorofenil)-amida do ácido 4-amino-lH-pirazole-3-carboxílico (50 mg) (Exemplo 2B) e anidrido metanossulfónico (45 mg) em piridina (1 mL) foi agitada à temperatura ambiente, de um dia para o outro, em seguida evaporada e purificada por cromatografia em coluna flash eluindo com AcOEt/hexano 2:1. A evaporação das fracções contendo o produto deu 20 mg do composto em epígrafe. (LC/MS: Tr 2,87; [M+H+] 299) . EXEMPLOS 239 a 245
Os compostos dos Exemplos 239 a 245 foram preparados utilizando os métodos descritos acima ou métodos muito análogos àqueles. EXEMPLO 239 [1-(2-Fluoro-etil) -piperidin-4-il] -amida_do_ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
EXEMPLO 240* (6-Cloro-piridin-3-il)-amida do ácido 4-(2,6-dicloro- benzoilamino-lH-pirazole-3-carboxílico
(6-Amino-piridin-3-il)-amida do ácido 4-(2,6-dicloro- EXEMPLO 241 * benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
EXEMPLO 242* 6-Metoxi-piridin-3-il) -amida_do_ácido_4(2,6-dicloro- benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
EXEMPLO 243
Ciclo-hexilamida do ácido 4-[3-cloro-5-(4-metil-piperazin-1-il)-benzoilamino]-lH-pirazole-3-carboxílico
EXEMPLO 244 [l-(2,2-Difluoroetil) -piperidin-4-il] -amida_do_ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico
EXEMPLO 245
Ciclo-hexilamida do ácido 4-[3-(4-metil-piperazin-l-il)-benzoilamino]-lH-pirazole-3-carboxílico
ACTIVIDADE BIOLÓGICA EXEMPLO 246
Medição da Actividade inibidora da Cinase CDK2 (IC50)
Os compostos da fórmula (II) foram testados quanto à actividade inibidora de cinase utilizando o protocolo seguinte ou o protocolo de cinase CDK2/ciclina A activada descrito no Exemplo 241. São diluídos 1,7 pL de CDK2/Ciclina A activa (Upstate
Biotechnology, 10U/pL) em tampão de ensaio (250 pL de tampão de ensaio com potência 10X (MOPS 200 mM pH 7,2, β-glicerofosfato 250 mM, EDTA 50 mM, MgCÍ2 150 mM) , 11,27 pL de ATP 10 mM, 2,5 pL
de DTT 1 M, 25 pL de ortovanadato de sódio 100 mM, 708,53 pL H2O) , e 10 pL misturados com 10 pL de mistura de substrato de histona (60 pL de histona Hl de bovino (Upstate Biotechnology, 5 mg/mL) , 940 pL de H2O, 35 pCi de γ33Ρ-ΑΤΡ) e adicionados a placas de 96 poços juntamente com 5 pL de várias diluições do composto de ensaio em DMSO (até 2,5%) . A reacção é deixada prosseguir durante 5 horas antes de ser parada com um excesso de ácido ortofosfórico (30 pL a 2%). Ο γ33Ρ-ΑΤΡ que permanece por incorporar na histona Hl é separado da histona Hl fosforilada numa placa de filtração MAPH da Millipore. Os poços da placa MAPH são humedecidos com ácido ortofosfórico a 0,5%, e em seguida os resultados da reacção são filtrados com uma unidade de filtração a vácuo Millipore através dos poços. Após filtração, o resíduo é lavado duas vezes com 200 pL de ácido ortofosfórico a 0,5%. Uma vez os filtros secos, são adicionados 25 pL de agente de cintilação Microscint 20, e em seguida contados num Packard Topcount durante 30 segundos. A % de inibição da actividade de CDK2 é calculada e representada graficamente para determinar a concentração de composto de ensaio necessária para inibir 50% da actividade de CDK2 (IC50) ·
Por meio do protocolo indicado acima, foi determinado que os compostos dos Exemplos 2C a 87, 89-92, 94, 96-101, 104-105, 165, 166, 224, 225, 227, 229, 231, 233, 234 e 236 têm, cada, valores de IC50 inferiores a 20 pM ou proporcionam pelo menos 50% de inibição da actividade de CDK2 a uma concentração de 10 pM. Os compostos dos Exemplos 88, 93, 226, 228, 230 e 235 têm, cada,
valores de IC50 inferiores a 750 pM EXEMPLO 247
Ensaios de Selectividade de CDK
Os compostos da fórmula (II) são testados quanto à actividade inibidora de cinase contra um número de cinases diferentes utilizando o protocolo geral descrito no Exemplo 239, mas modificado como indicado abaixo.
As cinases são diluídas até uma solução-mãe de trabalho lOx em MOPS 20 mM, pH 7,0, EDTA 1 mM, 0,1% de γ-mercaptoetanol, 0,01% de Brij-35, 5% de glicerol, 1 mg/mL de BSA. Uma unidade é igual à incorporação de 1 nmol de fosfato por minuto em 0,1 mg/mL de histona Hl, ou péptido substrato de CDK7 a 30 °C com uma concentração final de ATP de 100 uM. O substrato para todos os ensaios de CDK (excepto CDK7) é histona Hl, diluída até uma solução-mãe de trabalho 10X em MOPS 20 mM, pH 7,4 antes da utilização. O substrato para a CDK7 é um péptido específico obtido de Upstate diluído até uma solução-mãe de trabalho 10X em água desionizada.
Processo de Ensaio para CDKl/ciclina B, CDK2/ciclina A, CDK2/ciclina E, CDK3/ciclina E, CDK5/p35, CDK6/ciclina D3:
Num volume de reacção final de 25 pL, a enzima (5-10 mU) é incubada com MOPS 8 mM, pH 7,0, EDTA 0,2 mM, 0,1 mg/mL de histona Hl, MgAcetato 10 mM e [γ-33Ρ-ΑΤΡ] (actividade específica aprox 500 cpm/pmol, concentração conforme necessário). A reacção é iniciada pela adição de Mg2+ [γ-33Ρ-ΑΤΡ] . Após incubação durante 40 minutos à temperatura ambiente a reacção é parada pela adição de 5 pL de uma solução de ácido fosfórico a 3%. São aplicados 10 mL da reacção num tapete de filtração P30 e lavados 3 vezes durante 5 minutos em ácido fosfórico 75 mM e uma vez em metanol antes da secagem e contagem.
No ensaio de CDK3/ciclina E, o composto do Exemplo 150 teve um IC50 inferior a 20 μΜ.
No ensaio de CDK5/p35, os compostos dos Exemplos 41 e 150 tiveram um IC50 inferior a 20 μΜ.
No ensaio de CDK6/ciclina D3, o composto do Exemplo 150 teve um IC50 inferior a 20 μΜ.
Processo de ensaio para CDK7/ciclina H/MAT1
Num volume de reacção final de 25 pL, a enzima (5-10mU) é incubada com MOPS 8 mM, pH 7,0, EDTA 0,2 mM, péptido 500 μΜ, MgAcetato 10 mM e [γ33Ρ-ΑΤΡ] (actividade especifica aprox 500 cpm/pmol, concentração conforme necessário) . A reacção é iniciada pela adição de Mg2+[γ-33Ρ-ΑΤΡ] . Após incubação durante 40 minutos à temperatura ambiente a reacção é parada pela adição de 5 pL de uma solução de ácido fosfórico a 3%. São aplicados 10 mL da reacção num tapete de filtração P30 e lavados 3 vezes durante 5 minutos em ácido fosfórico 75 mM e uma vez em metanol antes da secagem e contagem. EXEMPLO 248 A. Ensaio de Medição da Actividade Inibidora de Cinase na CDK2/Ciclina A Activada (IC50)
Os compostos da fórmula (II) foram testados quanto à actividade inibidora de cinase utilizando o seguinte protocolo. CDK2/Ciclina A activada (Brown et al., Nat. Cell Biol., 1, pp438-443, 1999; Lowe, E.D., et al Biochemistry, 41, ppl5625- 15634, 2002) é diluída até 125 pM em tampão de ensaio com potência de 2,5X (MOPS 50 mM, pH 7,2, β-glicerofosfato 62,5 mM, EDTA 12,5 mM, MgCl2 37,5 mM, ATP 112,5 mM, DTT 2,5 mM, ortovanadato de sódio 2,5 mM, 0,25 mg/mL de albumina de soro bovino) e 10 pL foram misturados com 10 pL da mistura de substrato de histona (60 pL de histona Hl de bovino (Upstate Biotechnology, 5 mg/mL) , 940 pL de H20, 35 pCi de γ33Ρ-ΑΤΡ) e adicionados a placas de 96 poços juntamente com 5 pL de várias diluições do composto de ensaio em DMSO (até 2,5%) . A reacção é deixada prosseguir durante 2 a 4 horas antes de ser parada com um excesso de ácido ortofosfórico (5 pL a 2%) . Ο γ33Ρ-ΑΤΡ que permanece por incorporar na histona Hl é separado da histona Hl fosforilada numa placa de filtração MAPH da Millipore. Os poços da placa MAPH são humedecidos com ácido ortofosfórico a 0,5% e em seguida os resultados da reacção são filtrados com uma unidade de filtração a vácuo da Millipore através dos poços. Após filtração, o resíduo é lavado duas vezes com 200 pL de ácido ortof osf órico a 0,5%. Uma vez os filtros secos, são adicionados 20 pL de agente de cintilação Microscint 20 e, em seguida, contados num Packard Topcount durante 30 segundos. A % de inibição da actividade de CDK2 é calculada e representada graficamente para determinar a concentração de composto de ensaio necessária para inibir 50% da actividade de CDK2 (ICso) ·
Por meio do protocolo anterior, foi determinado que os compostos dos Exemplos 95, 96, 99-104, 106-121, 123-125, 130-137, 139, 142-145, 147-150, 152-156, 158-160, 162-164, 167-173, 177-179, 181-182, 184-190, 194, 196-204, 208-213 e 215 têm valores de IC50 inferiores a 20 μΜ. Os compostos dos Exemplos 122, 126-129, 140, 141, 146, 157 e 161 têm, cada, valores de IC50 inferiores a 750 μΜ e a maioria tem valores de IC50 inferiores a 100 μΜ. B. Ensaio em CDKl/Ciclina B.
O ensaio em CDKl/Ciclina B é idêntico a CDK2/Ciclina A acima excepto que é utilizada CDKl/Ciclina B (Upstate Discovery) e a enzima é diluída até 6,25 nM. No ensaio em CDK1 realizado como descrito acima ou por meio do protocolo indicado no Exemplo 240, os compostos dos Exemplos 2C, 41, 48, 53, 64, 65, 66, 73, 76, 77, 91, 95, 102, 106, 117, 123, 125, 133, 137, 142, 150, 152, 154, 167, 186, 187, 189, 190, 193, 194, 196, 199, 202-204, 207, 208-213, 215 e 218-223 foram determinados como tendo valores de IC50 inferiores a 20 μΜ e os compostos dos
Exemplos 188 e 206 foram determinados como tendo valores de IC50 inferiores a 100 μΜ. EXEMPLO 249
Processo de Ensaio para CDK4
Os ensaios para a actividade inibidora de CDK4 foram realizados por Proqinase GmbH, Freiburg, Alemanha utilizando o seu Ensaio de Actividade 33PanQinase® registado. Os ensaios foram realizados em FlashPlates™ de 96 poços (PerkinElmer). Em cada caso, o cocktail de reacção (50 pL de volume final) é constituído por; 20 pL de tampão de ensaio (composição final HEPES-NaOH 60 mM, pH 7,5, MgCl2 3 mM, Na-ortovanadato 3 pM, DTT 1,2 mM, 50 pg/mL de PEG2000, 5 pL de solução de ATP (concentração final [γ—33PJ-ATP 1 pM (aprox 5xl05 cpm por poço)), 5 pL de composto de ensaio (em DMSO a 10%), 10 pL de substrato/ 10 pL de solução de enzima (pré-misturados) . As quantidades finais de enzima e substrato foram como abaixo.
O cocktail de reacção foi incubado a 30 °C durante 80 minutos. A reacção foi parada com 50 pL de H3PO4 a 2%, as placas foram aspiradas e lavadas duas vezes com 200 pL de NaCl a 0,9%. A incorporação de 33P foi determinada com um contador de cintilação de microplacas. Os valores de base foram subtraídos dos dados antes de calcular as actividades residuais para cada poço. As IC50 foram calculadas utilizando Prism 3.03. O composto do Exemplo 150 tem uma IC50 inferior a 5 pM neste ensaio. EXEMPLO 250
Actividade Antiproliferativa
As actividades antiproliferativas dos compostos da formula (II) são determinadas medindo a aptidão dos compostos para inibir o crescimento de células num número de linhas celulares. A inibição do crescimento de células é medido utilizando o ensaio de Azul de Alamar (Nociari, Μ. M, Shalev, A., Benias, P., Russo, C. Journal of Immunological Methods 1998, 213, 157-167). O método baseia-se na aptidão das células viáveis para reduzir a resazurina Ao seu produto fluorescente resorufina. Para cada ensaio de proliferação, as células são aplicadas em placas de 96 poços e deixadas recuperar durante 16 horas antes da adição dos compostos inibidores durante mais 72 horas. No final do período de incubação é adicionado Azul de Alamar a 10% (v/v) e incubado durante mais 6 horas antes da determinação do produto fluorescente a 535 nM ex/590 nM em. No caso de células que não estão em proliferação, as células são mantidas à confluência durante 96 horas antes da adição dos compostos inibidores durante mais 72 horas. O número de células viáveis é determinado pelo ensaio de Azul de Alamar como atrás. Todas as linhas celulares são obtidas de ECACC (European Collection of Cell Cultures) .
Nos ensaios contra a linha celular de carcinoma do cólon humano HCT 116 (ECACC n° 91091005), os compostos dos Exemplos 10, 25-27, 41, 44, 46, 48, 50, 52, 53, 60, 62, 64-67, 69, 73-77, 79, 80, 83A, 86, 90-93, 95-98, 100-104, 106, 107, 109-121, 123-125, 131-134, 136-143, 147-155, 158, 159, 162-164, 166, 167, 178, 179, 185-190, 192-205, 207-215 e 218-223 têm valores de IC50 inferiores a 20 μΜ e os compostos dos Exemplos 2C, 3, 29, 38, 39, 49, 51, 85, 89, 99, 108, 135, 160, 182, 183, 206 e 216 têm valores de IC50 inferiores a 100 μΜ. EXEMPLO 251
Medição da actividade inibidora contra a Glicogénio Sintase-Cinase-3 (GSK-3)
As actividades dos compostos da fórmula (II) como inibidores de GSK-3 foram determinadas utilizando o Protocolo A ou Protocolo B abaixo.
Protocolo A A GSK3-p (Upstate Discovery) é diluída até 7,5 nM em MOPS 25 mM, pH 7,00, 25 mg/mL de BSA, 0,0025% de Brij-35R™, 1,25% de glicerol, EDTA 0,5 mM, MgCl2 25 mM, 0,025% de β-mercaptoetanol, ATP 37,5 mM e 10 pL são misturados com 10 pL da mistura de substrato. A mistura de substrato é o péptido fosfo-glicogénio-sintase-2 12,5 pM (Upstate Discovery) em 1 mL de água com 35 pCi de γ33Ρ-ΑΤΡ. A enzima e o substrato são adicionados a placas de 96 poços juntamente com 5 pL de várias diluições do composto de ensaio em DMSO (até 2,5%) . A reacção é deixada prosseguir durante 3 horas antes de ser parada com um excesso de ácido ortofosfórico (5 pL a 2%). O processo de filtração é como para o ensaio de CDK2/Ciclina A Activada acima.
Protocolo B A GSK3p (humano) é diluída até uma solução-mãe de trabalho lOx em Tris 50 mM, pH 7,5, EGTA 0,1 mM, vanadato de sódio 0,1 mM, 0,1% de β-mercaptoetanol, 1 mg/mL de BSA. Uma unidade é igual à incorporação de 1 nmol de fosfato por minuto de péptido fosfo-glicogénio-sintase-2 por minuto.
Num volume de reacção final de 25 pL, a GSK3p (5-10 mU) é incubada com MOPS 8 mM 7,0, EDTA 0,2 MM, YRRAAVPPSPSLSRHSSPHQS(p)EDEEE 20 μΜ (péptido fosfo GS2) , MgAcetato 10 mM e [γ-33Ρ-ΑΤΡ] (actividade específica aprox 500 cpm/pmol, concentração conforme necessário). A reacção é iniciada pela adição de Mg2+[γ-33Ρ-ΑΤΡ] . Após incubação durante 40 minutos à temperatura ambiente a reacção é parada pela adição de 5 pL de uma solução de ácido fosfórico a 3%. São aplicados 10 pL da reacção num tapete de filtração P30 e lavados 3 vezes durante 5 minutos em ácido fosfórico 50mM e uma vez em metanol antes da secagem e contagem. A partir dos resultados dos ensaios de GSK3-B realizados utilizando um dos dois protocolos indicados acima, foi determinado que os compostos dos Exemplos 2C, 26, 48, 53, 65, 76, 77, 84, 86, 95, 102, 106, 119, 122, 123, 126, 127, 128, 129, 131, 134, 135, 138, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 149, 150 e 151 têm, cada, valores de IC50 inferiores a 10 μΜ.
FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS EXEMPLO 252 (i) Formulação de Comprimido
Uma composição para comprimidos contendo um composto da fórmula (II) é preparada misturando 50 mg do composto com 197 mg de lactose (BP) como diluente, e 3 mg de estearato de magnésio como um lubrificante e prensando para formar um comprimido de modo conhecido. (ii) Formulação de Cápsula
Uma formulação de cápsula é preparada misturando 100 mg de um composto da fórmula (II) com 100 mg de lactose e introduzindo a mistura resultante em cápsulas de gelatina dura opacas correntes.
(iii) Formulação Injectável I
Uma composição parentérica para administração por injecção pode ser preparada dissolvendo um composto da fórmula (II) (e. g.f numa forma de sal) em água contendo 10% de propileno glicol para dar uma concentração de composto activo de 1,5 % em peso. A solução é em seguida esterilizada por filtração, introduzida numa ampola e selada.
(iv) Formulação Injectável II
Uma composição parentérica para injecção é preparada dissolvendo em água um composto da fórmula (II) (e. g., na forma de sal) (2 mg/mL) e manitol (50 mg/mL), esterilizando a solução por filtração e introduzindo-a em frasquinhos ou ampolas seláveis de 1 mL. (iv) Formulação para Injecção Subcutânea
Uma composição para administração subcutânea é preparada misturando um composto da fórmula (II) com óleo de milho de qualidade farmacêutica para dar uma concentração de 5 mg/mL. A composição é esterilizada e introduzida num recipiente adequado. EXEMPLO 253
Determinação da Actividade Antifúngica A actividade antifúngica dos compostos da fórmula (II) é determinada utilizando o seguinte protocolo.
Os compostos são testados contra um painel de fungos incluindo Candida parpsilosis, Candida tropicalis, Candida albicans-ATCC 36082 e Cryptococcus neoformans. Os organismos de ensaio são mantidos em superficies inclinadas de Dextrose Agar Sabourahd a 4 °C. Suspensões singleto de cada organismo são preparadas cultivando a levedura de um dia para o outro a 27 °C num tambor rotativo em caldo à base de azoto para leveduras (YNB) com aminoácidos (Difco, Detroit, Mich.), pH 7,0 com ácido morfolinapropanossulfónico (MOPS) 0,05. A suspensão é em seguida centrifugada e lavada duas vezes com NaCl a 0,85% antes de submeter a ultrassons a suspensão de células lavadas durante 4 segundos (Sonicador Branson, modelo 350, Danbury, Conn.) . Os blastósporos singuletos são contados num hemocitómetro e ajustados à concentração desejada em NaCl a 0,85%. A actividade dos compostos de ensaio é determinada utilizando uma modificação de uma técnica de microdiluição de caldo. Os compostos de ensaio são diluídos em DMSO até uma taxa de 1,0 mg/mL, em seguida diluídos até 64 pg/mL em caldo YNB, pH 7,0 com MOPS (é utilizado Fluconazole como controlo) para proporcionar uma solução de trabalho de cada composto. Utilizando uma placa de 96 poços, os poços 1 e 3 até 12 são preparados com caldo YNB, são feitas diluições de dez vezes da solução do composto nos poços 2 a 11 (as gamas de concentração são 64 a 0,125 pg/mL) . O poço 1 é utilizado como um controlo da esterilidade e branco para os ensaios espectrofotométricos. O poço 12 é utilizado como um controlo de crescimento. As placas microtitulo são inoculadas em cada um dos poços 2 a 11 com 10 pL (tamanho do inoculo final é 104 organismos/mL). As placas inoculadas são incubadas durante 48 horas a 35 °C. Os valores de MIC são determinados espectrofotometricamente medindo a absorvância a 420 nm (Automatic Microplate Reader, DuPont Instruments, Wilmington, Del.) após agitação das placas durante 2 minutos com um misturador de vórtice (Vorte-Genie 2 Mixer, Scientific Industries, Inc., Bolemia, N.I.). O critério da MIC é definido como a concentração mais baixa de fármaco que exibe aproximadamente 50% (ou mais) de redução do crescimento em comparação com o poço de controlo. Com o ensaio de turvação, este é definido como a concentração mais baixa de fármaco à qual a turvação no poço é <50% do controlo (IC50) . As Concentrações
Citolíticas Mínimas (MCC) são determinadas subcultivando todos os poços da placa de 96 poços numa placa de Dextrose Agar Sabourahd (SDA), incubando durante 1 a 2 dias a 35 °C e verificando em seguida a viabilidade. EXEMPLO 254
Protocolo para a Avaliação Biológica do Controlo da
Infecção Fúngica em Plantas Inteiras in vivo
Os compostos da fórmula (II) são dissolvidos em acetona, com diluições sucessivas subsequentes em acetona para obter uma gama de concentrações desejada. Os volumes finais de tratamento são obtidos adicionando 9 volumes de Tween-20™ aquoso a 0,05% ou Triton X-100™ a 0,01%, dependendo do agente patogénico.
As composições são depois utilizadas para testar a actividade dos compostos da invenção contra míldio do tomateiro (Phytophthora infestans) utilizando o protocolo seguinte. São cultivados tomateiros (cultivar Rutgers) a partir da semente numa mistura de vaso à base de turfa sem solo até os rebentos terem 10-20 cm de altura. As plantas são então pulverizadas até escorrer com o composto de ensaio a uma diluição de 100 ppm.
Após 24 horas, as plantas de ensaio são inoculadas pulverizando com uma suspensão aquosa de esporângios de Phytoftora infestans, e mantidas numa câmara de orvalho de um dia para o outro. As plantas são então transferidas para a estufa até se desenvolver doença nas plantas de controlo não tratadas.
Também são utilizados protocolos semelhantes para testar a actividade dos compostos da invenção para combater a Ferrugem
Castanha do Trigo (Puccinia), Oídio do Trigo (Ervsiphe vraminis), Trigo (cultivar Monon), Septoriose das Folhas de Trigo (Septoria tritici) e Septoriose das Glumas de Trigo (Leptosphaeria nodorum).

Claims (14)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. A combinação compreende: (i) Um composto da fórmula (II):
    ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que Y é uma ligação ou uma cadeia alquileno de 1, 2 ou 3 átomos de carbono de comprimento; R1 é um grupo carbociclico ou heterocíclico possuindo desde 3 a 12 membros endociclicos, em que os grupos carbociclicos ou heterocíclicos são não substituídos ou substituídos com um ou mais grupos substituintes R10; R2 é hidrogénio ou metilo; R3 é seleccionado de grupos carbociclicos e heterocíclicos não aromáticos possuindo desde 3 a 12 membros endociclicos, em que os grupos carbociclicos ou heterocíclicos estão não substituídos ou substituídos com um ou mais grupos substituintes R10; e R10 é seleccionado de halogéneo, hidroxilo, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxilo, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino Ci-4, grupos carbociclicos e heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endociclicos; um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, Χ20(Χ2), C(X2)X2, X1C(X2)X1, S, SO, S02, NRC, S02NRc ou NRcS02; e Rb é seleccionado de hidrogénio, grupos carbociclicos e heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endociclicos, e um grupo alquilo C1-8 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxilo, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, grupos carbociclicos e heterocíclicos possuindo desde 3 a 12 membros endociclicos, Rc é seleccionado de hidrogénio e hidrocarbilo C1-4; e X1 é 0, S ou NRC e X2 é =0, =S ou =NRC; e e providenciado esde que quando o grupo substituinte R10 compreende ou inclui um grupo carbocíclico ou heterocíclico, o referido grupo carbocíclico ou heterocíclico pode ser não substituído ou pode ele próprio ser substituído com um ou mais grupos substituintes R10 e adicionalmente em que (a) esses outros grupos substituintes R10 incluir grupos carbociclicos ou heterocíclicos, que não são eles próprios ainda substituídas; ou (b) o referido outros substituintes não incluem grupos carbociclicos ou heterocíclicos, mas são de outro modo seleccionados a partir dos grupos listados acima na definição de R10; e (ii) um ou mais outros agentes terapêuticos.
  2. 2. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1, em que R2 é hidrogénio.
  3. 3. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes em que R1 é um grupo heterocíclico ou carboxilico monocíclico substituído ou não substituído em que os grupos carbocíclicos e heterocíclicos estão substituídos por um ou mais grupos subst ituintes R10 ou R10a; em que R10 é como definido na reivindicação 1 e R10a é seleccionado de halogéneo, hidroxilo, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxilo, um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, X3C(X4), C(X4)X3, X3C(X4)X3, S, S0, ou SO2, e Rb é seleccionado de hidrogénio e um grupo alquilo C1-8 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxilo e grupos carbocíclicos ou heterocíclicos monocíclicos não aromáticos possuindo desde 3 a 6 membros endocíclicos.
  4. 4. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1 em que o composto de fórmula (II) é da fórmula (IV):
    ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R1 e R2 são como aqui definidos; uma segunda ligação opcional pode estar presente entre os átomos de carbono numerados 1 e 2; um de U e T é seleccionado de CH2, CHR13, CR11R13, NR14, N(0)R15, 0 e S(0)t; e o outro de U e T é seleccionado de, NR14, 0, CH2, CHR11, C(R11)2 e C=0; r é 0, 1, 2, 3 ou 4; t é 0, 1 ou 2; R11 é seleccionado de hidrogénio, halogéneo (particularmente flúor), alquilo C1-3 (e. g., metilo) e alcoxilo C1-3 (e. g., metoxilo); R13 é seleccionado de hidrogénio, NHR14, NOH, NOR14 e Ra-Rb; R14 é seleccionado de hidrogénio e Rd-Rb; Rd é seleccionado de uma ligação, CO, C(X2)X4, SO2 e SC>2NRC; Ra, Rb e Rc são como definidos acima; e R15 é seleccionado de hidrocarbilo C1-4 saturado opcionalmente substituído com hidroxilo, alcoxilo C1-2, halogéneo ou um grupo carbocíclico ou heterocíclico monocíclico de 5 ou 6 membros, com a condição de que U e T não possam ser 0 simultaneamente.
  5. 5. Combinação de acordo com a reivindicação 4 em que o composto da fórmula (II) é da fórmula (Va):
    ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R14a é seleccionado de hidrogénio, alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro, ciclopropilmetilo, f enil-alquilo C1-2, alcoxi Ci-4-carbonilo, f enil-alcoxi-Ci-2-carbonilo, alcoxi-Ci-2-alquilo C1-2 e alquil Ci-4-sulfonilo, em que as unidades fenilo quando presentes estão opcionalmente substituídas com um até três substituintes seleccionados de flúor, cloro, alcoxilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2, e alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2; w é 0, 1, 2 ou 3; R2 é hidrogénio ou metilo; R11 e r são como definidos em qualquer uma das reivindicações 17 a 19; e R19 é seleccionado de flúor; cloro; alcoxilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2; e alquilo C1-4 opcionalmente substituído com fluoro ou alcoxilo-Ci-2.
  6. 6. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1 em que o composto de fómula (II) é o da fórmula (VIb):
    ou sais ou tautómeros ou N-óxidos ou seus solvatos; em que R20 é seleccionado de hidrogénio e metilo; R21a é seleccionado de flúor e cloro; e R22a é seleccionado de flúor, cloro e metoxilo.
  7. 7. Uma combinação de acordo com a reivindicação 6, em que o composto da fórmula (II) é piperidin-4-ilamida do ácido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino)-lH-pirazole-3-carboxílico ou um seu sal.
  8. 8. Uma combinação de acordo com qualquer reivindicação precedente, em que um ou mais outros agentes terapêuticos são selecionados de agentes anticancerigenos, incluindo: - Inibidores da topoisomerase - Agentes alquilantes - antimetabolites - Ligantes de ADN Inibidores de microtúbulos (tubulina agentes de direccionamento) - anticorpos monoclonais - inibidores de transdução de sinal - radioterapia
  9. 9. Uma combinação de acordo com qualquer reivindicação precedente, em que o um ou mais outros agentes terapêuticos são selecionados de agentes anticancerigenos, incluindo a cisplatina, ciclofosfamida, doxorubicina, irinotecano, fludarabina, 5-FU, taxanos, e mitomicina C.
  10. 10. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores em que o composto de fórmula (II) e o um ou mais outros Os agentes terapêuticos são administrados simultaneamente ou sequencialmente.
  11. 11. Uma combinação de acordo com qualquer reivindicação precedente, em que o composto da fórmula (II) e um, dois, três, quatro ou mais outros agentes terapêuticos são formulados em conjunto numa forma de dosagem contendo dois, três, quatro ou mais agentes terapêuticos.
  12. 12. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes para utilização em medicina, por exemplo para o tratamento de um cancro.
  13. 13. Uma composição farmacêutica (por exemplo formulação) compreendendo pelo menos um composto de fórmula (II) tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7 em conjunto com um ou mais transportadores f armaceuticamente aceitáveis, adjuvantes, excipientes, diluentes, agentes de enchimento, tampões, estabilizantes, conservantes, lubrificantes, e outros agentes terapêuticos ou profiláticos.
  14. 14. Um composto de fórmula (II) tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7 para utilização no tratamento de uma doença que é: - infecções virais, por exemplo virus do herpes, virus da variola, virus de Epstein-Barr, virus Sindbis, adenovirus, HIV, HPV, HCV e HCMV; prevenção do desenvolvimento de AIDS em indivíduos infectados pelo HIV; ou - tipo II ou diabetes não insulino-dependente mellitus; ou - doenças auto-imunes; ou - traumatismo craniano; ou - Acidente vascular cerebral; ou - pilepsia; ou - demência desordens neurodegenerativas, , relacionada com a SIDA por exemplo doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose amiotrófica lateral, retinite pigmentosa, atropy muscular espinal e degeneração cerebelar ou tal como, doença de Alzheimer neuronal motora, paralisia supranuclear progressiva, degeneração córtico-basal e de Pick doença; ou - doenças inflamatórias crónicas, por exemplo lúpus eritematoso sistémico, auto-imune mediada glomerulonefrite, artrite reumatóide, psoríase, doença inflamatória do intestino, e diabetes mellitus auto-imune; ou - doenças cardiovasculares, por exemplo, hipertrofia cardíaca, restenose, e aterosclerose, ou tal como a arritmia; ou - glomerulonefrite; ou - síndrome mielodisplásica; ou lesão isquêmica associada infartos do miocárdio, acidente vascular cerebral e lesão de reperfusão; ou - ou doenças do fígado relacionadas com o álcool induzida por toxinas; ou - doenças hematológicas, por exemplo, anemia crónica e anemia aplástica; ou doenças degenerativas do sistema músculo-esquelético, por exemplo, osteoporose e artrite, ou - rinossinusite aspirina-senstive; ou - ibrose cística; ou - esclerose múltipla, ou - doenças renais; ou - dor do câncer; ou - cancro, em particular RB + ve tumores.
PT101753291T 2003-07-22 2004-07-22 Compostos de 1h-pirazole 3,4-dissubstituídos e sua utilização como moduladores de cinases dependentes de ciclina (cdk) e de glicogénio sintase-cinase-3 (gsk-3) PT2256106E (pt)

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