PT2129377E

PT2129377E - Formulações líquidas de sais de 4-[2-(4- metilfenilsulfanil)fenil]piperidina

Info

Publication number: PT2129377E
Application number: PT08715616T
Authority: PT
Inventors: Tine Bryan Stensboel; Heidi Lopez De Diego; Gudrun Lasskogen
Original assignee: Lundbeck & Co As H
Priority date: 2007-03-20
Filing date: 2008-03-14
Publication date: 2011-12-23
Also published as: AU2008228637B2; EP2388004A1; AU2008228637A1; HRP20110844T1; KR20090130000A; US20100105730A1; CO6220958A2; EA200970869A1; TWI405588B; EP2129377B1; ATE526966T1; CL2008000797A1; IL200959A0; MY148695A; AR065796A1; NZ579717A; JP2010521500A; BRPI0808820A2; RS52050B; DK2129377T3

Description

ΡΕ2129377 1

DESCRIÇÃO FORMULAÇÕES LÍQUIDAS DE SAIS DE 4-[2-(4-METILFENILSULFANIL)FENIL]PIPERIDINA"

Campo da invenção A presente invenção relaciona-se com uma composição farmacêutica liquida.

Fundamentos da invenção 0 pedido de patente internacional publicado como em WO 2003/029232 revela e.g. o composto 4-[2-(4-metil-fenilsulfanil)fenil]piperidina (composto I) como uma base livre e o correspondente sal de adição de HC1. O composto é reportado ser um inibidor do transportador da serotonina e do receptor da serotonina 2C (5-HT2c) , e é referido ser útil para o tratamento de transtornos afectivos, e.g. depressão e ansiedade.

Foi descoberto que o composto I é também um antagonista potente do receptor da serotonina 3 (5-HT3) e do receptor da serotonina 2A (5-HT2a) portanto o composto I poderá ser utilizado para o tratamento de um ampla gama de indicações incluindo a dor e deficiência cognitiva. Este perfil farmacológico foi também revelado em WO 2007/144006. 2 ΡΕ2129377

Para muitos compostos farmacêuticos a administração oral de um comprimido, cápsula, pilula ou semelhante destinada a ser engolida é a forma preferida de administração. Contudo, alguns pacientes, e.g. pacientes idosos poderão ter dificuldades em engolir, e soluções liquidas poderão ser uma alternativa adequada evitando a necessidade de engolir comprimidos, cápsulas, pílulas, etc. Uma solução líquida providencia adicionalmente uma possibilidade de um regime de dosagem flexível. De modo a limitar o volume de uma solução líquida é necessário ter uma concentração elevada da substância activa na solução, que de novo requer uma solubilidade elevada da substância activa. A presente invenção está relacionada com formulações líquidas do composto I.

Sumário da invenção

Os presentes inventores descobriram surpreendentemente que o sal de adição de ácido DL-láctico (= DL-lactato), o sal de adição de ácido glutárico (= gluterato), o sal de adição de ácido L-aspártico (= L-aspartato) e o sal de adição de ácido glutâmico (= glutamato) de 4 — [2 — (4 — metilfenilsulfanil)fenil]piperidina são excepcionalmente solúveis. Concordantemente, a presente invenção relaciona-se com uma formulação líquida compreendendo o sal de adição do ácido DL-láctico, o sal de adição do ácido glutárico, o sal de adição do ácido L-aspártico ou o sal de adição do 3 ΡΕ2129377 ácido glutâmico de 4-[2-(4-metilfenilsulfanil)fenil]piperi-dina.

Numa concretização, a invenção relaciona-se com a utilização de sais da presente invenção no fabrico de uma composição farmacêutica liquida para o tratamento de certas doenças.

Numa concretização, a invenção relaciona-se com sais da presente invenção para utilização no tratamento de certas doenças, em que ditos sais estão numa formulação liquida.

Numa concretização, a presente invenção rela-ciona-se com um reservatório compreendendo uma formulação liquida da presente invenção, em que referido reservatório está equipado com um agregado de gotas.

Figuras

Figura 1: Níveis de acetilcolina no córtex pré-frontal e hipocampo ventral após administração do composto I Figura 2: Níveis de dopamina no córtex pré-frontal após administração do composto I

Descrição detalhada da invenção A formulação com a qual a presente invenção está relacionada são todas formulações farmacêuticas. 4 ΡΕ2129377 A Tabela 2 nos exemplos mostra a solubilidade de vários sais de 4-[2-(4-metilfenilsulfanil)fenilpiperidina.

Como evidenciado pelos dados, o ácido DL-láctico, o ácido L-aspártico, o ácido glutâmico, e os sais de adição de ácido glutárico têm solubilidade excepcionalmente elevada. Por conveniência, esses sais são referidos como os sais da presente invenção. 0 ácido DL láctico é também conhecido como ácido DL-2-hidroxipropiónico, e este forma um sal de adição de ácido 1:1 com a 4-[2-(4-metilfenilsulfanil)fenil]piperidina que é utilizada na presente invenção. 0 ácido glutárico é também conhecido como ácido 1,5-pentanodióico, e este forma um sal de adição de ácido 1:1 com a 4-[2-(4-metilfenilsulfanil)fenil]piperidina que é utilizada na presente invenção. 0 ácido L-aspártico forma um sal de adição de ácido 1:1 com a 4-[2- (4-metilfenilsulfanil)fenil]piperidina que é utilizada na presente invenção. 0 ácido glutâmico forma um sal de adição de ácido 1:1 com a 4-[2-(4-metilfenilsulfanil)fenil]piperidina que é utilizada na presente invenção. A 4-[2-(4-metilfenilsulfanil)fenil]piperidina poderá ser preparada como revelado em WO 2003/029232. 5 ΡΕ2129377

Alternativamente, a 4-[2-(4-metilfenilsulfanil) fenil]piperidina poderá ser preparada como descrito nos exemplos. Os sais da presente invenção poderão ser preparados pela adição do ácido adequado seguida por precipitação, cuja precipitação poderá ser provocada por e.g. arrefecimento, remoção de solvente, adição de outro solvente ou de uma sua mistura. Os exemplos revelam vias especificas para a obtenção dos sais.

As formulações liquidas poderão ser pretendidas para administração oral ou parentérica.

As formulações liquidas para administração parentérica, que incluem soluções para infusão, são em vários aspectos semelhantes a outras formulações liquidas, mas são adicionalmente caracterizadas por serem estéreis e isotó-nicas. A formulação oral liquida da presente invenção poderá ser apresentada como um xarope, um elixir, uma solução oral, uma suspensão, ou uma formulação oral concentrada .

Uma vantagem destas formas de administração é que o paciente não ter de engolir uma forma sólida, que poderá ser difícil, em particular para pacientes idosos ou para pacientes com traumas na boca ou garganta. 6 ΡΕ2129377

Os xaropes e elixires são tipicamente líquidos aromatizados, adoçados contendo uma substância farmacêutica activa. Os xaropes têm um teor de açúcar elevado, e os elixires também contêm frequentemente álcool. Uma solução oral é uma solução da substância activa. Uma suspensão é um sistema de duas fases compreendendo partículas sólidas dispersas num líquido. A administração de xaropes, elixires, soluções e suspensões orais envolvem tipicamente a ingestão de quantidades relativamente elevadas de líquido, i . e . 10-50 mL.

Em contraste a estes, as formulações orais concentradas da presente invenção são administradas ao paciente medindo um volume predeterminado das referidas formulações a partir de um dosificador adequado, adicio nando o volume resultante a um copo de líquido (bebida, e.g. água, sumo ou semelhante) após o que o paciente bebe o líquido. Por conveniência, o volume doseado é pequeno, e.g. menos que 2 mL, tal como menos que 1 mL, tal como inferior a 0,5 mL. Numa concretização particular, as formulações concentradas orais da presente invenção são administradas ao paciente por doseamento de um número pré-determinado de gotas da referida formulação a partir de um dosificador adequado, e.g. um reservatório com um agregado de gotas, adicionando as gotas a um copo de líquido (água, sumo ou semelhante) após o que o paciente bebe o líquido. Neste contexto, um agregado de gotas é um agregado equipado com um reservatório que faz com que o líquido no interior de referido reservatório possa ser dispensado a partir de referido reservatório em gotas discretas. 7 ΡΕ2129377 A concentração dos sais da presente invenção em formulações orais concentradas é determinada pelo número de gotas (ou o volume) que é desejado recolher e pela quantidade de sais que é desejado administrar. É geralmente considerado que o doseamento de cerca de 10-20 de gotas é um óptimo compromisso entre segurança/eficácia do tratamento por um lado e conveniência por outro. Se a concentração dos sais da presente invenção for muito elevada, i.e. se só for doseado um pequeno número de gotas, isto poderá comprometer a segurança ou eficácia do tratamento com um número de gotas baixo, uma ou duas gotas mais ou menos que o desejado irá aumentar significativamente a incerteza na dose fornecida. Por outro lado, se a concentração dos sais da presente invenção é muito baixa, o número de gotas a ser doseado é elevado, que é inconveniente para o paciente ou o clinico.

Com dosagens diárias de sais da presente invenção de 5 mg, uma formulação oral concentrada com uma concentração de 5 mg da substância activa por mL poderia ser adequada. Uma concentração de 5 mg por mL e um número de gotas de 20 gotas/mL tornaria possível de administrar 20 gotas para uma dose de 5 mg.

Com dosagens diárias de sais da presente invenção de 5 mg, uma formulação oral concentrada com uma concentração de 10 mg de substância activa por mL poderia ser adequada. Uma concentração de 10 mg por mL e um número de ΡΕ2129377 gotas de 20 gotas/mL tornaria possível de administrar 10 gotas para uma dose de 5 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 10 mg, uma formulação oral concentrada com uma concentração de 20 mg de substância activa por mL poderia ser adequada. Uma concentração de 20 mg por mL e um número de gotas de 20 gotas/mL tornaria possível de administrar 10 gotas para uma dose de 10 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 20 mg, uma formulação oral concentrada com uma concentração de 40 mg de substância activa por 30 mL poderia ser adequada. Uma concentração de 40 mg por mL e um número de gotas de 20 gotas/mL tornaria possível de administrar 10 gotas para uma dose de 20 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 30 mg, uma formulação oral concentrada com uma concentração de 60 mg de substância activa por mL poderia ser adequada. Uma concentração de 60 mg por mL e um número de gotas de 20 gotas/mL tornaria possível de administrar 10 gotas para uma dose de 30 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 40 mg, uma formulação oral concentrada com uma concentração de 80 mg de substância activa por mL poderia ser adequada. Uma concentração de 80 mg por mL e um número de gotas de 20 gotas/mL tornaria possível de administrar 10 gotas para uma dose de 40 mg. 9 ΡΕ2129377

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 50 mg, uma formulação oral concentrada com uma concentração de 100 mg de substância activa por mL poderia ser adequada. Uma concentração de 100 mg por mL e um número de gotas de 20 gotas/mL tornaria possível de administrar 10 gotas para uma dose de 50 mg.

Numa concretização, a formulação em gotas oral concentrada é administrada a partir de um aparelho com uma caneta ou seringa como dispositivo de doseamento. Exemplos de tais aparelhos de administração são providenciados em e.g. WO 03/061508, US 2004/0186431, US 2003-089743. Estes aparelhos contêm a formulação oral concentrada da presente invenção numa câmara selada, e.g. um cartucho e possuem meios de providenciar uma quantidade calibrada da solução oral concentrada. De modo a limitar o tamanho do dispositivo, o volume da solução oral concentrada é pequeno (0,01-1 mL) que de novo requer que os sais sejam altamente solúveis. Esta caneta ou seringa como dispositivos de doseamento são convenientes para o paciente no sentido em que poderão ser transportados e.g. num bolso do peito, e uma concepção adequada dos dispositivos poderá servir para que não se note que é um dosificador de um fármaco.

Com dosagens diárias de sais da presente invenção de 5 a 10 mg, uma formulação oral concentrada com uma concentração de 100 mg de substância activa por mL seria adequada. Isto deveria significar que são fornecidos 0,05 10 ΡΕ2129377 mL para uma dose de 5 mg e que são fornecidos 0, 1 mL para uma dose de 10 mg.

Com dosagens diárias de compostos da presente invenção de 20-50 mg, uma formulação oral concentrada com uma concentração de 200 mg de substância activa por mL seria adequada. Isto significaria que são fornecidos 0,1 mL para uma dose de 20 mg e que são fornecidos 0,25 mL para uma dose de 50 mg.

Concordantemente, as formulações orais concentradas da presente invenção compreendem aproximadamente 5-250 mg/mL de sais da presente invenção. Exemplos particulares incluem aproximadamente 10-100 mg/mL, aproximadamente 20-200 mg/mL, aproximadamente 150-200 mg/mL, aproximadamente 20-80 mg/mL, aproximadamente 30-70 mg/mL, e aproximadamente 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 100 mg/mL. Numa concretização, a formulação oral em gotas da presente invenção compreende pelo menos 5 mg/mL de sais da presente invenção. Numa concretização, a formulação oral em gotas da presente invenção compreende pelo menos 10 mg/mL de sais da presente invenção. Numa concretização, a formulação oral em gotas da presente compreende pelo menos 20 mg/mL de um sal da presente invenção. Numa concretização, a formulação oral em gotas da presente compreende pelo menos 30 mg/mL de um sal da presente invenção. Numa concretização, a formulação oral em gotas da presente compreende pelo menos 50 mg/mL de um sal da presente invenção. Numa concretização, a formulação oral em gotas da presente compreende pelo menos 80 mg/mL de um sal da presente invenção. 11 ΡΕ2129377

Em adição aos sais do presente pedido, as soluções orais do presente pedido, e em particular as formulações orais concentradas poderão compreender solventes, tampões, tensioactivos, modificadores da tensão superficial, modificadores da viscosidade, conservantes, anti-oxidantes, corantes, substâncias que mascaram o sabor, aromatizantes, etc.

Exemplos de solventes incluem água e outros solventes, que são misciveis com água ou agentes solubili-zantes, e são adequados para propósitos orais. Exemplos de solventes adequados são etanol, propilenoglicol, glicerol, polietilenoglicóis, poloxâmeros, sorbitol, álcool benzí-lico. A solubilidade aquosa da substância activa poderá adicionalmente ser intensificada pela adição a solução de um co-solvente farmaceuticamente aceitável, uma ciclo-dextrina ou um seu derivado.

Poderá ser utilizado um sistema tampão para manter o pH da formulação num intervalo de pH óptimo. Um sistema de tampão é uma mistura de quantidades adequadas de um ácido fraco tal como o ácido acético, fosfórico, succi-nico, tartárico, láctico ou cítrico e suas bases conjugadas. Idealmente, o sistema tampão tem capacidade suficiente para permanecer no intervalo de pH pretendido após a diluição com uma bebida neutra, ligeiramente acídica ou ligeiramente básica. 12 ΡΕ2129377

Tensioactivos são substâncias, que solubilizam compostos activos, que são insuficientemente solúveis num meio aquoso, usualmente com a formação de micelas. Preferencialmente o tensioactivo utilizado deveria ser não iónico devido a menor toxicidade. Poderão ser utilizadas concentrações elevadas de tensioactivos para permitir a diluição durante a administração sem precipitação. Exemplos de tensioactivos incluem, tweens, spans e mono- e digli-céridos. Poderão ser incluídos modificadores da tensão superficial para ajustar o número de gotas para as formulações de gota orais. Um exemplo de modificadores de tensão superficial é o etanol, que diminui a tensão superficial e aumenta o número de gotas.

Poderão ser incluídos modificadores da viscosidade para ajustar a velocidade da gota para uma formulação oral concentrada. A velocidade da gota para uma formulação a ser doseada em gotas discretas a partir de um recipiente equipado com uma agregado de gotas deveria por conveniência não exceder 2 gotas por segundo. Exemplos de modificadores de viscosidade incluem etanol, hidroxietilcelulose, carbo-ximetilcelulose de sódio, metilcelulose, álcool poliviní-lico, polivinilpirrolidona, polietilenoglicol e glicerina.

Poderão ser adicionados agentes conservantes para prevenir o crescimento de microorganismos tais como bactérias, leveduras e fungos em formulações líquidas, que são susceptíveis de serem utilizadas repetidamente. 13 ΡΕ2129377

Os conservantes adequados deveriam ser aceitáveis farmaceuticamente, estáveis em termos fisico-quimicos e efectivos no intervalo de pH desejado. Exemplos de agentes conservantes incluem etanol, ácido benzóico, ácido sórbico, metilparabeno, propilparabeno e álcool benzilico.

Uma vez que uma substância de fármaco é mais sensivel à degradação química na forma dissolvida que na forma sólida, poderá ser necessário incluir um antioxidante na formulação líquida. Exemplos de antioxidantes incluem propilgalato, palmitato de ascorbilo, ácido ascórbico, sulfito de sódio, ácido cítrico e EDTA.

Poderão ser utilizados agentes de coloração em algumas formulações para introduzir uma uniformidade de aparência ao produto. Algumas substâncias activas poderão adicionalmente ser muito sensíveis à luz e isto poderá revelar a necessidade de adição de agentes de coloração às formulações de gotas para as proteger da luz e com o propósito de estabilização. Os agentes de coloração adequados incluem por exemplo tartrazina e amarelo-alaranjado.

Os agentes edulcorantes poderão mascarar o gosto desagradável associado a algumas formulações ou para atingir um sabor desejado. Exemplos de agentes edulcorantes são sacarina, sal de sódio de sacarina, glicose, sorbitol, glicerol, acesulfame de potássio e neo-hesperidina di-hidrocalcona. 0 sabor poderá ser adicionalmente optimizado pela adição de uma ou mais substâncias aromatizantes. Subs- 14 ΡΕ2129377 tâncias aromatizantes adequadas são aromas de frutas tais como aroma de cereja, framboesa, groselha negra, limão ou morango ou outros aromas tais como as licoroso, anis, menta, caramelo, etc.

Exemplos particulares de uma formulação oral concentrada que poderá ser administrada com um agregado de gotas são (4-[2-(4-metilfenilsulfanil)-fenil]piperidina = Composto I) 0,73 % de glutarato do Composto I correspondente a 0,5 % da base livre do Composto I Água q.s. até 100 % 1,58 % de glutamato do Composto I correspondente

a 1 % da base livre do Composto I 0,08 % de metilpara-hidroxibenzoato 0,02 % de propilpara-hidroxibenzoato Água q.s. até 100 % 2,94 % de L-aspartato do Composto I corres

pondente a 2 % da base livre do Composto I 0,08 % de metilpara-hidroxibenzoato 0,02 % de propilpara-hidroxibenzoato 7 % de etanol Água q.s. até 100 % 10,54 % de DL-lactato do Composto I correspon dente a 8 % da base livre do Composto I 0,08 % de metilpara-hidroxibenzoato 0,02 % de propilpara-hidroxibenzoato Água q.s. até 100 % 15 ΡΕ2129377

Um exemplo particular de uma formulação oral concentrada, que poderá ser administrado com uma caneta ou seringa como dispositivo de doseamento, é 26,36 % de DL-lactato do Composto I correspon dente a 20 % da base livre do Composto I 0,08 % de metilpara-hidroxibenzoato 0,02 % de propilpara-hidroxibenzoato Água q.s. até 100 % O perfil farmacêutico dos sais da presente invenção é revelado nos exemplos. Em resumo, os sais da presente invenção são inibidores do transportador de serotonina e do receptor de serotonina 2C (5-HT2c) e antagonistas do receptor de serotonina 3 (5-HT3), do receptor de serotonina 2A (5-HT2a) e do receptor adrenérgico al e parece que originam um aumento no nivel extracelular de acetilcolina no córtex pré-frontal e hipocampo ventral e no nivel de dopamina no córtex pré-frontal. Adicionalmente, os sais da presente invenção são efectivos no tratamento de dor como mostrado nos exemplos. Espera-se que o perfil farmacológico em combinação com os dados pré-clinicos seja reflectido na utilidade clínica dos sais da presente invenção. Consequentemente, crê-se que os sais da presente invenção sejam úteis no tratamento de doenças incluindo patologias de estado de espírito, patologia depressiva principal, patologia de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipo-lar, patologia de ansiedade social, patologia compulsiva 16 ΡΕ2129377 obsessiva, patologia de pânico, patologia de tensão pós-traumática, abuso, patologia de alimentação, patologia do sono, doença de Alzheimer, demência, dor crónica, depressão associada a deficiência cognitiva, depressão associada a psicose, deficiência cognitiva em esquizofrenia, depressão ou ansiedade associada a dor, perturbações comportamentais nos idosos, ADHD, depressão resistente ao tratamento de melancolia e depressão com sintomas residuais. tal como o

Os receptores 5-HT2c estão localizados e.g. nos neurónios dopaminérgicos onde a activação exerce uma influência inibidora tónica na libertação de dopamina, e os antagonistas de 5-HT2c irão efectuar um aumento no nivel de dopamina. Os dados apresentados nos exemplos mostram que o composto I origina, de facto, um aumento nos níveis extra-celulares de dopamina no cérebro. Com este conhecimento poderá ser formulada a hipótese de que os antagonistas de 5-HT2c são particularmente bem adequados para o tratamento de depressão que é refractária ao tratamento com inibidores de reabsorção selectiva de serotonina. Esta hipótese encontra suporte em vários estudos clínicos mostrando uma combinação de mirtazipina e SSRI que é superior a SSRI sozinho para o tratamento de pacientes com depressão com uma resposta clínica inadequada (depressão resistente ao tratamento, TRD, ou depressão refractária) [Psychother. Psychosom.,75, 139-153, 2006]. A mirtazapina é também um antagonista de 5-HT2 e de 5-HT3, que indica que os compostos exercendo inibição à reabsorção de serotonina em combinação com antagonismo a 5-HT2 e 5- HT3, 17 ΡΕ2129377 composto I, são úteis para o tratamento de TRD, i.e. irá aumentar a taxa de remissão para pacientes sofrendo de depressão resistente a tratamento.

Os dados apresentados nos exemplos mostram que o composto I origina um aumento no nível extracelular de acetilcolina no cérebro. Existe uma evidência clínica de longa data que o aumento dos níveis de acetilcolina no cérebro é uma forma de tratar a doença de Alzheimer e a deficiência cognitiva em geral, cf. a utilização de ini-bidores de acetilcolina esterase no tratamento de doença de Alzheimer. À luz deste conhecimento, crê-se que o composto I seja útil no tratamento da doença de Alzheimer e da deficiência cognitiva, e também de patologias de estado de espírito, tais como depressão associada a doença de Alzheimer e deficiência cognitiva.

Um segmento de pacientes com depressão irá responder ao tratamento com e.g. SSRI na medida em que irão melhorar em escalas de depressão clinicamente relevantes, tais como MADRD e HAMD, mas em que permanecem outros sintomas, tais como perturbações do sono e deficiência cognitiva. No presente contexto, estes pacientes são referidos como respondedores parciais e como sofrendo de depressão com sintomas residuais. Devido aos efeitos discutidos acima nos níveis de acetilcolina, espera-se que o composto I seja útil no tratamento da deficiência cognitiva em adição à depressão. Os estudos clínicos demonstraram que o composto prazosina, que é um antagonista 18 ΡΕ2129377 de receptor adrenérgico oí-1 reduz as perturbações do sono [Raskind, Biol. Psychiatry, 2006 in press]. Além disso, crê-se também que o antagonismo a 5-HT2A e 5-HT2C dos compostos da presente invenção tenha um efeito sedativo, melhorador do sono [Neuropharmacol, 33, 467-471, 1994], por conseguinte os compostos da presente invenção são úteis para o tratamento de respondedores parciais (depressão com sintomas residuais) , ou reformulando que o tratamento de pacientes com depressão com o composto I irá reduzir a fracção de respondedores parciais. O composto da invenção poderá ser administrado numa quantidade de cerca de 0,001 até cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia.

Uma dosagem oral típica está na gama de desde cerca de 0,001 até cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia, preferencialmente desde cerca de 0,01 até cerca de 50 mg/kg de peso corporal por dia, administrada numa ou mais dosagens tal como 1 a 3 dosagens. A dosagem exacta irá depender da frequência e do modo de administração, do sexo, idade, peso e estado geral do sujeito tratado, da natureza e da gravidade do estado tratado e de quaisquer doenças concomitantes a serem tratadas e de outros factores evidentes para aqueles peritos na técnica.

Uma dosagem oral típica para adultos está na gama de 1-100 mg/dia de um composto da presente invenção, tal como 1-30 mg/dia, ou 5-25 mg/dia. Esta poderá ser tipica- 19 ΡΕ2129377 mente atingida pela administração de 0,1-50 mg, tal como 1-25 mg, tal como 1, 5, 10, 15, 20 25, 30, 40, 50 ou 60 mg do composto da presente invenção uma vez ou duas vezes ao dia.

Uma "quantidade terapeuticamente efectiva" de um composto como utilizado aqui significa uma quantidade suficiente para curar, aliviar ou suspender parcialmente as manifestações clinicas de uma dada doença e suas complicações numa intervenção terapêutica compreendendo a administração do referido composto. Uma quantidade adequada para se conseguir isto é definida como "quantidade terapeuticamente efectiva". O termo também inclui quantidades suficientes para curar, aliviar ou suspender parcialmente as manifestações clinicas de uma dada doença e suas complicações num tratamento compreendendo a administração do referido composto. As quantidades efectivas para cada propósito irão depender da gravidade da doença ou lesão assim como do peso e estado geral do sujeito. Entender-se-á que a determinação de uma dosagem adequada poderá ser conseguida utilizando experimentação de rotina, através da construção de uma matriz de valores e testando diferentes pontos na matriz, o que está tudo incluído nas competências normais de um clínico experimentado. 0 termo "tratamento" e "tratar" como utilizado aqui significa a gestão e cuidado de um paciente com o propósito de combater um estado, tal como uma doença ou uma patologia. O termo pretende incluir o espectro total de tratamentos para um determinado estado do qual o paciente 20 ΡΕ2129377 está a sofrer, tal como a administração do composto activo para aliviar os sintomas ou complicações, para atrasar a progressão da doença, patologia ou estado, para aliviar ou atenuar os sintomas e complicações, e/ou para curar ou eliminar a doença, patologia ou estado assim como para prevenir o estado, em que prevenção é para ser entendida como a gestão e cuidado de um paciente com o propósito de combater a doença, estado, ou patologia e inclui a administração dos compostos activos para prevenir o inicio dos sintomas ou complicações. No entanto, o tratamento profiláctico (preventivo) e terapêutico (curativo) são dois aspectos separados da invenção. O paciente a ser tratado é preferencialmente um mamífero, em particular um ser humano.

Numa concretização, a invenção relaciona-se com a utilização de um sal da presente invenção para o fabrico de uma formulação liquida para o tratamento de uma doença seleccionada a partir de patologias de estado de espirito, patologia depressiva principal, patologia de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipolar, patologia de ansiedade social, patologia compulsiva obsessiva, patologia de pânico, patologia de tensão pós-traumática, abuso, patologia de alimentação, patologia do sono, doença de Alzhei-mer, demência, dor crónica, depressão associada a deficiência cognitiva, depressão associada a psicose, deficiência cognitiva em esquizofrenia, depressão ou ansiedade associada a dor, perturbações comportamentais nos idosos, ADHD, depressão resistente ao tratamento de melancolia e depressão com sintomas residuais. Numa concretização, a 21 ΡΕ2129377 referida formulação líquida é uma formulação oral concentrada .

Numa concretização, a presente invenção relaciona-se com sais da presente invenção para utilizar no tratamento de uma doença seleccionada a partir de patologias de estado de espírito, patologia depressiva principal, patologia de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipolar, patologia de ansiedade social, patologia compulsiva obsessiva, patologia de pânico, patologia de tensão pós-traumática, abuso, patologia de alimentação, patologia do sono, doença de Alzheimer, demência, dor crónica, depressão associada a deficiência cognitiva, depressão associada a psicose, deficiência cognitiva em esquizofrenia, depressão ou ansiedade associada a dor, perturbações comportamentais nos idosos, ADHD, depressão resistente ao tratamento de melancolia e depressão com sintomas residuais. Numa concretização, a referida formulação líquida é uma formulação de gotas orais concentrada.

Os sais da presente invenção poderão ser administrados quer sozinhos ou em combinação com outro composto terapeuticamente activo, em que os dois compostos poderão ser quer administrados simultaneamente ou sequencialmente. Exemplos de compostos terapeuticamente activos que poderão ser vantajosamente combinados com o composto I incluem sedativos ou hipnóticos, tais como benzodiazepinas/ anti-convulsivos, tais como lamotrigina, ácido valpróico, topi-ramato, gabapentina, carbamazepina; estabilizadores do 22 ΡΕ2129377 estado de espirito tais como lítio; fármacos dopaminér-gicos, tais como agonistas de dopamina e L-Dopa; fármacos para tratar ADHD, tais como atomoxetina; psicostimulantes, tais como modafinilo, cetamina, metilfenidato e anfetamina; outros antidepressivos, tais como mirtazapina, mianserin e buproprion; hormonas, tais como T3, estrógeno, DHEA e testosterona; antipsicóticos atípicos, tais como olanzapina e aripiprazole; antipsicóticos típicos, tais como halo-peridol; fármacos para tratar doenças de Alzheimer, tais como inibidores de colinesterase e memantina, folato; S-Adenosil-Metionina; moduladores imunológicos, tais como interferons; opiatos, tais como buprenorfinas; antagonistas de receptor 1 de angiotensina II (antagonistas de ATI); inibidores de ACE; estatinas; e antagonista adrenérgico de alfa 1, tais como prazosina. A utilização dos termos "um" e "um" e "o" e similares referentes no contexto da descrição da invenção são para ser construídos para cobrir ambos o singular e o plural, a menos que seja indicado o contrário aqui ou claramente contradito pelo contexto. Por exemplo, a frase "o composto" é para ser entendida como se referindo a vários "compostos" da invenção ou a aspecto particular descrito, a menos que seja indicado o contrário. A menos que seja indicado o contrário, todos os valores exactos providenciados aqui são representativos de valores correspondentes aproximados (e.g., todos os valores exactos providenciados a título de exemplo com respeito a 23 ΡΕ2129377 um factor particular ou medidos podem ser considerados como providenciando também uma medida correspondente aproximada, modificada por "cerca de," quando adequado). A descrição feita aqui de qualquer aspecto ou aspecto da invenção utilizando termos tais como "compreendendo", "possuindo," "incluindo," ou "contendo" com referência a um elemento ou elementos pretende providenciar suporte para um aspecto similar ou aspecto da invenção que "consiste em", "consiste essencialmente em", ou "compreende substancialmente" esse elemento ou elementos particulares, a menos que seja estabelecido o contrário ou claramente contradito pelo contexto (e.g., uma composição descrita aqui como compreendendo um elemento particular deverá ser entendida como também descrevendo uma composição consistindo desse elemento, a menos que seja estabelecido o contrário ou claramente contradito pelo contexto).

Exemplos

Exemplo 1 Perfil farmacológico

Exemplo IA Inibição de reabsorção de serotonina (5-HT) e de norepinefrina (NE)

Alíquotas de composto de teste e preparação de sinaptossoma cortical de rato foram pré-incubadas durante 10 min/37 °C, e em seguida adicionadas [3H]NE ou [3H]5-HT (concentração final de 10 nM) . A absorção não específica 24 ΡΕ2129377 foi determinada na presença de talsupram ou citalopram 10 μΜ e a absorção total foi determinada na presença de tampão. As aliquotas foram incubadas durante 15 minutos a 37 °C. Após a incubação, as [3H]NE ou [3H]5-HT tomadas por sinaptossomas foram separadas por filtração através de um Unifilter GF/C, pré-embebido em PEI a 0,1 % durante 30 minutos, utilizando um programa Tomtec Cell Harvester. Os filtros foram lavados e contados num contador Wallac MicroBeta. A NET o composto I exibe um valor de IC50 de 23 nM. A SERT o composto I exibe um valor de IC50 de 8 nM.

Exemplo 1B Antagonismo a 5-HT2a O composto I foi testado relativamente às afinidades para os receptores de serotonina e descobriu-se que exibe um perfil antagonistico com afinidade para os receptores 5- HT2a (K± 54 nM) . A afinidade é calculada a partir de Y = 100/(1 + 10 (x_logIC5o)) em que Y denota a % de ligação e X denota a concentração de composto. Foram utilizadas 5 concentrações do composto (1, 10, 30, 100, 1000 nM) para calcular o valor de IC50. Ki foi calculado a partir da equação de Cheng Prusoff K± = (IC50/ (1+ ( [L] /Kd) ) . A afinidade foi determinada relativamente a MDL Pharmaservices número de catálogo 271650.

Em células mamíferas expressando receptores 5-HT2A humano o composto I exibe propriedades antagonísticas 25 ΡΕ2129377 competitivas. 0 composto liga-se a receptores 5-HT2A com um Ki de < 100 nM e num ensaio funcional os compostos antagonizam a libertação evocada por 5-HT de Ca2+ a partir de armazenamentos intracelulares com um Kb de 67 nM. Uma análise de Schild revelou antagonismo competitivo com um Kb de 100 nM. A experiência foi levada a cabo como se segue. 2 ou 3 dias antes da experiência as células CHO que expressam 250 fmol/mg de receptores 5-HT2A humano são colocadas em placas a uma densidade suficiente para originar uma camada monoconfluente no dia da experiência. As células são carregadas com corante (Ca 2+-kít (conjunto) da Molecular Devices) durante 60 minutos a 37 °C num incubador com 5 % de C02 a uma humidade de 95 %. A fluorescência de partida foi monitorizada num contador de placas de imagem fluorométrica ou FLIPR384 da Molecular Devices (Sunnyvale, CA) com um comprimento de onda de excitação de 488 nm e uma gama de emissão de 500 a 560 nm. A intensidade do laser foi fixada a um nivel adequado para se obter valores de partida de aproximadamente 8000-10000 unidades de fluorescência. A variação na fluorescência de partida deverá ser inferior a 10 %. Os valores de EC50 são avaliados utilizando concentrações crescentes de composto de teste cobrindo pelo menos 3 décadas. Os valores de pA2 são avaliados desafiando curvas de resposta à dose completa de 5-HT com quatro concentrações diferentes de composto (150, 400 1500 e 4000 nM) . Os valores de Kb foram também avaliados desafiando 2 décadas de concentrações de substâncias de teste com EC50 26 ΡΕ2129377 de 5-HT. As substâncias de teste são adicionadas às células 5 minutos antes de 5-HT. Os valores de Ki foram calculados utilizando a equação de Cheng-Prusoff.

Exemplo 1C antagonismo de receptor 5-HT3A

Em oócitos que expressam receptores 5-HT3A homo-méricos humanos 5-HT activa correntes com um EC50, de 2600 nM. Esta corrente pode ser antagonizada com antagonistas de 5-HT3 clássicos tais como ondansetron. O ondansetron exibe um valor de Ki inferior a 1 nM neste sistema. O composto I exibe antagonismo potente em baixas concentrações (0,1 nM — 100 nM) (IC50 ~ 10 nM/ Kb ~ 2 nM) e propriedades agonisti-cas quando aplicado em concentrações superiores (100 — 100000 nM) (EC50 ~ 2600 nM) atingindo uma corrente máxima de aproximadamente 70-80 % da corrente máxima produzida pelo próprio 5-HT. Em oócitos que expressam receptores 5-HT3A homoméricos de rato, 5-HT activa correntes com um EC50 de 3,3 μΜ. As experiências foram levadas a cabo como se segue. Os oócitos foram removidos cirurgicamente a partir de fêmeas Xenepus laevis maduras anestesiadas em 0,4 % de MS-222 durante 10 — 15 min. Os oócitos foram em seguida digeridos à temperatura ambiente durante 2-3 horas com colagenase 0,5 mg/mL (tipo IA Sigma-Aldrich) em tampão OR2 (NaCl 82,5 mN, KC1 2,0 mM, MgCl2 1,0 mM e HEPES 5,0 mM, pH 7,6). Os oócitos desprovidos da camada folicular foram seleccionados e incubados durante 24 horas em tampão de Solução Salina de Barth Modificada [NaCl 88 mM, KC1 1 mM, HEPES 15 mM, NaHC03 2,4 mM, CaCl2 0,41 mM MgS04, 0, 82 mM, 27 ΡΕ2129377

Ca(N03)2 0,3 mM] suplementado com piruvato de sódio 2 mM, penicilina 0,1 U/L e estreptomicina 0,1 yg/L. Os oócitos do estágio IV-IV foram identificados e injectados com 12-48 nl água isenta de nuclease contendo 14-50 pg de cARN que codifica receptores 5-HT3A humanos e incubados a 18 °C até serem utilizados para registos após injecção). Os oócitos com expressão de receptores 5-HT3 humano foram colocados num banho de 1 mL e sujeitos a perfusão com tampão de Ringer (NaCl 115 mM, KC1 2,5 mM, HEPES 10 mM, CaCl2 1,8 mM, MgCl2 0,1 mM, pH 7,5) . As células foram espetadas com eléctrodos de 0,5-1 ΜΩ conectados com agar contendo KC1 3 M e tensão fixada a —90 mV por um amplificador GeneClamp 500B. Os oócitos foram continuamente sujeitos a perfusão com tampão de Ringer e os fármacos foram aplicados no perfusado. Foram aplicadas soluções agonistas de 5-HT durante 10 — 30 seg. As potências dos antagonistas de receptor de 5-HT3 foram examinadas através da medição da resposta à concentração contra a estimulação de 5-HT 10 yM.

Exemplo 1D antagonismo ao receptor ot1A O composto I foi testado relativamente a afinidades para o receptor a3A e foi descoberto que exibe um perfil antagonístico com afinidade média para receptores de oíia (Ki = 34 nM) .

No dia das experiências as membranas (ver adiante para a descrição da preparação de membranas) foram descongeladas e homogeneizadas em tampão utilizando um 28 ΡΕ2129377

Ultra Turrax e diluídas para a concentração desejada (5 pg/ poço ~ 5 pg/900 pL, armazenadas em gelo até à utilização). A experiência é iniciada através da mistura de 50 pL de composto de teste, 50 pL de [3H]-Prazosin e 900 pL de membranas, e a mistura é incubada durante 20 minutos a 25 °C. A ligação não específica é determinada na presença de 10 pM de WB-4101 e a ligação total é determinada na presença de tampão. Após a incubação, o ligando ligado é separado do não ligado por filtração através de um Unifilter GF/B, pré-embebido em 0,1 % PEI durante 30 minutos, utilizando um programa Tomtec Cell Harvester (D4.2..4). 96 poços. Os filtros são lavados 3 vezes com 1 ml de tampão arrefecido em gelo, secos a 50 °C e são adicionados 35 pL de líquido de cintilação/poço aos filtros. É contada a radioactividade ligada numa Wallac OY 1450 MicroBeta. A afinidade é calculada a partir de Y = 100/(1+ 10 <x_logIC5o)) em que Y denota 20 % de ligação e X denota a concentração de composto. Foram utilizadas as concentrações de composto cobrindo 2 décadas para calcular o valor IC50· 0 Ki foi calculado a partir da equação de Cheng Prusoff Ki = (IC50/ (1+ ( [L] /Kd) ) .

Num ensaio funcional os compostos da presente invenção antagonizam a libertação evocada por adrenalina de Ca2+ a partir de armazenamentos intracelulares e um ensaio funcional revelou que os compostos foram antagonistas.

Estas experiências foram levadas a cabo essencialmente como descrito adiante. 29 ΡΕ2129377

Todas as células foram cultivadas em meio DMEM suplementado com BCS a 10 %, L-glutamina 4 mM (ou 2 mM no caso de COS-7), e 100 unidades/mL de penicilina mais 100 pg /mL de estreptomicina, a 37 °C, in 5% de C02.

Vinte e quatro horas antes dos ensaios, as células CHO que expressam os receptores de alfaiA-7 humanos foram semeadas em placas de microtitulação de paredes pretas de 384 poços revestidas com poli-D-lisina. O meio de cultura foi aspirado e as células foram carregadas com corante com Fluo-4 1,5 μΜ em tampão de ensaio composto por Solução de Sal Balanceada de Hank (NaCl 138 mM, KC1 5 mM, CaCl2 1,3 mM, MgCl2 0,5 mM, MgS04 0,4 mM, KH2P04 0,3 mM, Na2HP04 0,3 mM, glucose 5,6 mM) mais HEPES 20 mM pH 7,4, BSA a 0,05 % e probenicida 2,5 mM (50 pL /poço) durante 1 hora em 5 % de C02 a 37 °C. Após ser descartado o excesso de corante, as células foram lavadas em tampão de ensaio e colocas em camadas com um volume final igual a 45 pL/poço (ou 30 pL/poço para ensaio de antagonista) . No caso da avaliação de antagonista, foi adicionado antagonista ou veiculo neste ponto como uma aliquota de 15 pL em tampão contendo 4 % de DMSO a 4 x a concentração final (DMSO final = 1 %), seguido por uns 20 min de incubação. A fluorescência de partida foi monitorizada num contador de placas de imagem fluorométrica ou FLIPR™ da Molecular Devices (Sunnyvale, CA) com um comprimento de onda de excitação de 488 nm e uma gama de emissão de 500 a 560 nm. A energia do laser de excitação foi ajustada de modo a que as leituras de fluorescência de partida fossem de 30 ΡΕ2129377 aproximadamente 8000 unidades de fluorescência (RFU). As células foram em seguida estimuladas à temperatura ambiente com agonistas diluídos em tampão de ensaio (15 pL) , e as RFU foram medidas a intervalos de 1,5 segundo durante um período de 2,5 min. A variação máxima na fluorescência foi calculada para cada poço. As curvas de resposta-concentração derivadas a partir da variação máxima na fluorescência foram analisadas por regressão não linear (equação de Hill). Para determinações antagonísticas, após 20 min de incubação de composto (como acima), foram adicionadas concentrações fixas de agonista convencional de serotonina.

Exemplo 2A, 4-[2-(4-metilfenilsulfanil)fenil]piperidina, sal de HBr

Brometo de 2-(4-tolilsulfanil)-fenilo

Num reactor coberto com azoto agitado N-metil-pirrolidona, NMP (4,5 L) foi purgada com azoto durante 20 minutos. Foi adicionado 4-metilbenzenetiol (900 g, 7,25 mol) e seguidamente 1,2-dibromobenzeno (1709 g, 7,25 mol) . Foi finalmente adicionado terc-butóxido de potássio (813 g, 7,25 mol) como o último reagente. A reacção foi exotérmica provocando uma elevação da temperatura da mistura reac-cional até 70 °C. A mistura reaccional foi seguidamente 2,5 L) . A mistura foi agitada aquecida até 120 °C durante 2—3 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente. Foi adicionado acetato de etilo (4 L) e solução aquosa de cloreto de sódio (15 %, 31 ΡΕ2129377 durante 20 minutos. A fase aquosa foi separada e extraída com outra porção de acetato de etilo (2 L) . A fase aquosa foi separada e as fases orgânicas foram combinadas e lavadas com solução de cloreto de sódio (15 %, 2,5 L) . A fase orgânica foi separada, seca com sulfato de sódio e evaporada à pressão reduzida até um óleo vermelho que contém 20 — 30 % de NMP. O óleo foi diluído até duas vezes o volume com metanol e a mistura foi sujeita a refluxo. Foi adicionado mais metanol até ser obtida uma solução vermelho claro. A solução foi arrefecida lentamente até à temperatura ambiente enquanto era semeada. O produto cristaliza como cristais creme, que foram isolados por filtração e lavados com metanol e secos 40 °C num forno de vácuo até peso constante. 4-Hidroxi-4-(2)-(4-tolilsulfanil)fenil)-piperidin-1-carboxilato de etilo

Num reactor coberto agitado sob azoto foi suspenso brometo de 2-(4-tolilsulfanil)-fenilo (600 g, 2,15 mol) em heptano (4,5 L). À temperatura ambiente foi adicionado BuLi 10 M em hexano (235 mL, 2,36 mol) durante 10 minutos. Só foi notada uma pequena reacção exotérmica. A suspensão foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e seguidamente arrefecida até —40 °C. Foi adicionada 1-carbetoxi-4-piperidona (368 g, 2,15 mol) dissolvida em THF (1,5 L) a uma velocidade não superior que a temperatura reaccional que foi mantida a abaixo de -40 °C. Quando a reacção foi completada, esta foi aquecida até 0 °C e foi adicionado HC1 1 Μ (1 L) mantendo a temperatura inferior a 32 ΡΕ2129377 10 °C. A fase aquosa ácida foi separada e extraída com acetato de etilo (1 L). As fases orgânicas foram combinadas e extraídas com solução de cloreto de sódio (15 %, 1 L) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada até uma massa semicristalina. Esta foi misturada com éter etílico (250 mL) e removida por filtração, seca num forno de vácuo a 40 °C até peso constante. 4-(2-(4-tolilsulfanil)fenil)-piperidin-1-carboxilato de etilo Ácido trifluoroacético (2,8 kg, 24,9 mol) e trietilsilano (362 g, 3,1 mol) foram carregados num reactor com uma agitação eficiente. Foi adicionado 4-hidroxi-4-(2-(4-tolilsulfanil)fenil)-piperidin-l-carboxilato de etilo (462 g, 1,24 mol) através de um funil de pós em porções. A reacção foi ligeiramente exotérmica. A temperatura subiu até 50 ° C. Após a adição estar finalizada a mistura reaccional foi aquecida até 60 °C durante 18 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente. Foi adicionado tolueno (750 mL) e água (750 mL) . A fase orgânica foi isolada e a fase aquosa foi extraída com outra porção de tolueno (750 mL) . As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com solução de cloreto de sódio (15 %, 500 mL) e secas sobre sulfato de sódio. O sulfato de sódio foi removido por filtração, o filtrado evaporado a pressão reduzida até um óleo vermelho que foi adicionalmente processado no passo seguinte. 33 ΡΕ2129377

Bromidrato de 4-(2-(4-tolilsulfanil)fenil)-píperidina 0 4- (2- (4-tolilsulfanil)fenil)-piperidin-l-car- boxilato de etilo bruto como um óleo vermelho do exemplo 3 foi misturado num reactor de agitação com ácido bromidrico em ácido acético (40 %, 545 mL, 3,11 mol) . A mistura foi aquecida a 80 °C durante 18 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente. Durante o arrefecimento o produto cristalizou. Após 1 hora à temperatura ambiente foi adicionado éter etílico (800 mL) a mistura reaccional, e a mistura foi agitada durante mais uma hora. 0 produto foi removido por filtração, lavado com éter etílico e seco num forno de vácuo a 50°C até peso constante.

Exemplo 2B 4-[2-(4-metilfenilsulfanil)fenil]píperidina, sal de HBr A 442 gramas de éster etílico do ácido 4- (2-p-tolilsulfanil-fenil)-piperidino-l-carboxílico agitado e levemente aquecido (approx. 45 °C) como um óleo foram adicionados 545 mL de HBr a 33 % em peso em AcOH (5,7 M, 2,5 eqv.). Esta mistura originou uma reacção exotérmica de 10 °C. Após a adição final a mistura reaccional é aquecida até 80 °C e deixada durante 18 horas. É retirada uma amostra e analisada por HPLC e se não estiver completa deverá ser adicionado mais HBr a 33 % em peso em AcOH. De outro modo a mistura é arrefecida até 25 °C fazendo o produto bromidrato de 4-(2-p-tolilsulfanil-fenil)-piperi-dina precipitar. Após uma hora a 25 °C a suspensão espessa 34 ΡΕ2129377 é adicionada a 800 mL de éter dietilico. A agitação é continuada durante outra hora antes do produto ser isolado por filtração, lavado com 400 mL de éter dietilitico e seco em vácuo a 40 °C durante a noite. O bromidrato do composto I foi isolado como um sólido branco.

Exemplo 2C Recristalização de 4-[2-(4-metilfenilsulfa-nil)fenil]piperidina, sal de HBr

Uma mistura de 10,0 gramas de sal de HBr, e.g. preparado como acima, foi aquecida ao refluxo em 100 mL de H20. A mistura tornou-se límpida e totalmente dissolvida a 8 0 - 90 °C. À solução límpida foi adicionado 1 grama de cravão e o refluxo foi continuado durante 15 minutos antes de filtrado e deixado a arrefecer espontaneamente até à temperatura ambiente. Durante o arrefecimento ocorre a precipitação de um sólido branco e a suspensão foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. A filtração e secagem em vácuo a 40 °C durante a noite produziu 6,9 gramas (69 %) do sal de adição de ácido de 4-[2-(4- metil-fenilsulfanil)fenili-piperidina.

Exemplo 3_4- [2- (4-metilfenilsulfanil)fenil]piperidina, sais adicionais

Preparação de soluções mãe de base livre A uma mistura de 500 mL de acetato de etilo e 200 mL de H20 foram adicionados 50 gramas de sal de HBr produzindo uma pasta de duas fases. A esta pasta foram 35 ΡΕ2129377 adicionados aproximadamente 25 mL de NaOH conc. que causou a formação de uma solução límpida de duas fases (o pH foi medido a 13-14). A solução foi agitada vigorosamente durante 15 minutos e a fase orgânica foi separada. A fase orgânica foi lavada com 200 mL de H20, seca sobre Na2SC>4, filtrada e evaporada em vácuo a 60 °C produzindo a base livre com um rendimento de 38 gramas (99 %) como um óleo quase incolor.

Dissolvendo 10 gramas de óleo e ajustando o volume até 150 mL utilizando acetato de etilo produziu uma solução mãe 0,235 M em acetato de etilo a partir da qual foram utilizadas alíquotas de 1,5 mL (100 mg de base livre) .

Dissolvendo 10 gramas de óleo e ajustando o volume até 100 mL usando EtOH 96 % em volume produziu uma solução mãe a 0,353 M em EtOH a partir da qual foram utilizadas alíquotas de 1,0 ml (100 mg de base livre).

Formação de sais utilizando soluções mãe de base livre

As dadas alíquotas foram colocadas em tubos de ensaio e enquanto agitadas foi adicionada a quantidade adequada de ácido como indicado na Tabela 1. Se o ácido foi um líquido este foi adicionado tal qual de outro modo este foi dissolvido num dado solvente antes da adição. Após a mistura e precipitação, a agitação foi continuada durante a noite e o precipitado recolhido por filtração. A Tabela 2 36 ΡΕ2129377 mostra a solubilidade dos sais de 4-[2-(4- metilfenilsul-fanil)-fenil]piperidina.

Tabela 1

Acido (Base:Ácido) EM (g/mol) Quantidade de ácido (mg ou pL) Sol vente CHN (exp.) CHN (teoria) ácido Paimitico, ácido hexadecanóico 1:1 256,42 90,5 EtQAc 75,36 9,77 2,46 75,64 9,9 2,6 Ácido DL-Láctico, ácido DL-2-hidroxipropiónico 1:1 90,1 31,8 EtQAc 66,88 7,26 3,52 67,53 7,29 3,75 Ácido adípico, ácido 1,6-hexanodióico 1:1 146,14 51,6 EtQAc 66,08 7,23 2,98 67,1 7,27 3,26 Ácido adípico, ácido 1,6-hex-anodióico 2:1 146,14 25,8 EtQAc 70,66 7,32 3,82 70,75 7,35 3,93 Ácido fumárico 1:1 116,01 40,9 EtOH 65,71 6,41 3,35 6,14 6,31 3,51 Ácido glutárico, ácido 1,5-pentanodióico 1:1 132,12 46,6 EtQAc 66,09 6,97 3,2 66,48 7,03 3,37 Ácido malónico 1:1 104,1 36,7 EtQAc 65,04 6,53 3,54 65,09 6,5 3,62 Ácido oxálico 1:1 90,1 31,8 EtQAc 64,28 6,41 3,61 64,32 6,21 3,75 Ácido sebacoínico, ácido 1,8-octanodióico 2:1 202,02 35,6 EtQAc 71,79 7,86 3,58 71,83 7,86 3,64 Ácido succínico, ácido 1,4-butanodióico, 2:1 118,1 20,8 EtQAc 65,65 6,86 3,4 65,80 6,78 3,49 (sal formado 1:1) Ácido L-málico, ácido L-2-hidroxi butanodióico 1:1, α 134,1 47,3 EtQAc 62,87 6,20 3,22 63,29 6,52 3,36 Ácido L-málico, ácido L-2-hidroxi butanodióico 1:1, β 134,1 47,3 EtQAc 62,99 6,66 3,13 63,29 6,52 3,36 Ácido D-tartárico, ácido D-2,3-di-hidroxi butanodióico 1:1 150,1 53,0 EtOH 60,67 6,4 3,07 60,95 6,28 3,23 Ácido L-aspártico 1:1 133,1 47,0 EtOH 59,31 6,7 7,1 (contém excesso de ácido) 63,43 6,78 6,73 ΡΕ2129377 37 (continuação)

Acido (Base:Ácido) EM (g/mol) Quantidade de ácido (mg ou |1L) Sol vente CHN (exp.) CHN (teoria) Ácido glutâmico 1:1 165,15 58,3 EtOH 56,38 6,88 7,35 56,46 6,94 7,06 (contém excesso (para 1:1- sal e de ácido) ácido- mono- hidratado 1:1) Ácido cítrico 2:1 192,13 33,9 EtQAc 65,93 6,72 3,44 66,46 6.64 3,69 HCl/Et20 1:1 2 M 176,4 EtOH Ácido fosfórico 1:1 14,7 M 24,0 EtQAc 55,79 6,47 3,43 56,68 6,34 3,67

Tabela 2

Acido (Base:Ácido) Solubilidade (mg/mL) ácido paimítico, ácido hexadecanóico 1:1 0,4 Ácido DL-láctico, ácido DL-2-hidroxipropiónico 1:1 > 150 Ácido adípico, ácido 1,6-hexanodióico 1:1 2,5 Ácido adípico, ácido 1,6-hexanodióico 2:1 1,0 Ácido fumárico 1:1 0,2 Ácido glutárico, ácido 1,5-pentanodióico 1:1 13 Ácido malónico 1:1 (a) 5,2 Ácido oxálico 1:1 1,1 Ácido sebacoínico, ácido 1,8-octanodióico 2:1 0,7 Ácido succínico, ácido 1,4-butanodióico, 2:1 2,0 Ácido L-málico, ácido L-2-hidroxibutanodióico 1:1, β 2,8 Ácido D-tartárico, ácido D-2,3-di-hidroxibutanodióico 1:1 1,8 Ácido L-aspártico 1:1 39 Ácido glutâmico 1:1 >35 Ácido cítrico 2:1 0,5 Ácido fosfórico 1:1 6,0 HC1 4,5 HBr 2,4 38 ΡΕ2129377

Exemplo 4 Efeito em níveis de ace2tilcolina A experiência foi montada para avaliar os efeitos do composto I nos níveis extracelulares de acetilcolina no córtex pré-frontal e hipocampo ventral de ratos movendo-se livremente.

Foram utilizados ratos Sprague-Dawley machos, pesando inicialmente 275-300 g. Os animais foram instalados sob um ciclo luz/escuro de 12 horas regular condições controladas de temperatura interior (21 ± 2 °C) e humidade (55 ± 5 %) com alimentação e água da torneira disponível ad libitum.

Experiências de cirurgia e microdiálise

Os ratos foram anestesiados com Hypnorm/Dormicum (2 mL /kg) e foram implantadas estereotaxicamente cânulas de guia intracerebral (CMA/12) no hipocampo, com o objec-tivo de posicionar a ponta da sonda de diálise no hipocampo ventral (coordenadas: 5,6 mm posterior a bregma, lateral — 5,0 mm, 7,0 mm ventral relativamente a dura ou no córtex frontal (coordenadas: 3,2 mm anterior a bregma; lateral, 0,8 mm; 4,0 mm ventral relativamente a dura). Foram utilizados parafusos âncora e cimento acrílico para fixação das cânulas guia. A temperatura corporal dos animais foi monitorizada através de uma sonda rectal e mantida a 37 °C. Os ratos foram deixados a recuperar da cirurgia durante 2 dias, instalados em gaiolas separadas. No dia da experiência foi inseria uma sonda de microdiálise (CMA/12, 0,5 mm de diâmetro, 3 mm de comprimento) através da cânula de guia. 39 ΡΕ2129377

As sondas foram conectadas através de um suporte giratório de canal duplo a uma bomba de micro-injecção. A perfusão da sonda de microdiálese com solução de Ringer filtrada (NaCl 145 mm, KC1 3 mM, MgCl2 1 mM, CaCl2 1,2 mM contendo neostigmina 0,5 μΜ) iniciou-se um pouco antes da inserção da sonda no cérebro e continuou durante a duração da experiência a um caudal constante de 1 pL /min. Após 180 min de estabilização, as experiências foram iniciadas. Os dialisados foram recolhidos a cada 20 min. Após as experiências os animais foram sacrificados, os seus cérebros removidos, congelados e cortados em fatias para verificação da colocação da sonda.

Análise de dialisado de acetilcolina A concentração de acetilcolina (ACh) nos dialisados foi analisada através de HPLC com detecção electro-química utilizando uma fase móvel consistindo em hidrogeno-fosfato de dissódio 100 mM, ácido octanossulfónico 2,0 mM, cloreto de tetrametilamónio 0,5 mM e MB a 0, 005 % (ESA) , pH 8,0. Um reactor enzimático de pré-coluna (ESA) contendo colina oxidase imobilizada eliminou colina da amostra injec-tada (10 pL) antes da separação de ACh na coluna analítica (ESA ACH-250); caudal 0,35 mL/min, temperatura: 35 °C. Após a coluna analítica, a amostra passou através de um reactor de fase sólida de pós-coluna (ESA) contendo acetilcolina-esterase imobilizada e colina oxidase. O último reactor converteu ACh em colina e subsequentemente colina em 40 ΡΕ2129377 betaina e H202 · O último foi detectado electroquimicamente através da utilização de um eléctrodo de platina (Célula analítica: ESA, modelo 5040).

Apresentação de dados

Nas experiências de injecção única o valor médio de 3 amostras ACh consecutivas precedendo imediatamente a administração de composto serviram como o nível de partida para cada experiência e os dados foram convertidos para uma percentagem de partida (valores de pré-injecção basal média normalizada para 100 %) . Os dados são apresentados na Figura la e lb.

Os dados apresentados na figura la e lb mostram um aumento dependente da dose nos níveis de acetilcolina extracelular no cérebro. Espera-se que esta descoberta pré-clínica se traduza num melhoramento do conhecimento numa situação clínica útil e.g. no tratamento de deficiência cognitiva e de doenças caracterizadas por uma deficiência cognitiva.

Exemplo 5 Efeito nos níveis de dopamina respectivamente,

Uma única injecção de composto I aumentou dependentemente da dose os níveis de dopamina extracelular (DA) no córtex frontal do rato. O composto da presente invenção a 8,9 mg/kg e 18 mg/kg s.c., intensificou os níveis de DA em aproximadamente 100 % e 150 %, 41 ΡΕ2129377 acima dos níveis de linha de base como ilustrado na Figura 2. As quantidades foram calculadas como a base livre. Método

Foram utilizados ratos Sprague-Dawley machos, inicialmente pesando 275-300 g. Os animais foram instalados sob um ciclo luz/escuro de 12 horas regular sob condições controladas de temperatura interior (21 ± 2 °C) e humidade (55 ± 5 %) com alimentação e água da torneira disponível ad libitum. Para as experiências de três dias, foram utilizadas minibombas osmóticas de tratamento (Alzet, 2ML1). As bombas foram cheias sob condições assépticas e implantadas subcutaneamente sob anestesia com Sevoflurane. As experiências foram levadas a cabo com as minibombas a bordo. Foram recolhidas amostras de sangue para medir os níveis de composto de teste no plasma após 3 dias de tratamento no final das experiências.

Experiências de cirurgia e microdiálise

Os animais foram anestesiados com Hypnorm/Dor-micum (2 mL /kg) e foram implantadas estereotaxicamente cânulas de guia intracerebral (CMA/12) no hipocampo, com o objectivo de posicionar a ponta da sonda de diálise no hipocampo ventral (coordenadas: 5,6 mm posterior a bregma, lateral —5,0 mm, 7,0 mm ventral relativamente a dura ou no córtex frontal (coordenadas: 3,2 mm anterior a bregma; lateral, 3,0 mm; 4,0 mm ventral relativamente a dura). 42 ΡΕ2129377

Foram utilizados parafusos âncora e cimento acrílico para fixação das cânulas guia. A temperatura corporal dos animais foi monitorizada através de uma sonda rectal e mantida a 37 °C. Os ratos foram deixados a recuperar da cirurgia durante 2 dias, instalados em gaiolas separadas. No dia da experiência foi inseria uma sonda de microdiálise (CMA/12, 0,5 mm de diâmetro, 3 mm de comprimento) através da cânula de guia.

As sondas foram conectadas através de um suporte giratório de canal duplo a uma bomba de micro-injecção. A perfusão da sonda de microdiálese com solução de Ringer filtrada (NaCl 145 mm, KC1 3 mM, MgCl2 1 mM, CaCl2 1,2 mM) iniciou-se um pouco antes da inserção da sonda no cérebro e continuou durante a duração da experiência a um caudal constante de 1 (1,3) pL /min. Após 180 min de estabilização, as experiências foram iniciadas. Os dialisados foram recolhidos a cada 20 (30) min.

Após as experiências os ratos foram sacrificados, os seus cérebros removidos, congelados e cortados em fatias para verificação da colocação da sonda.

Análise de dialisados A concentração de dopamina nos dialisados foi analisada através de HPLC com detecção electroquímica. As monoaminas foram separadas por cromatografia de fase líquida reversa (ODS 150 x 3 mm, 3 μΜ) . Dopamina: fase 43 ΡΕ2129377 móvel consistindo em NaH2P04 90 mM, citrato de sódio 50 mM, ácido 1-octanossulfónico sódico 367 mg/L, EDTA 50 μΜ e 8 % acetonitrilo (pH 4,0) a um caudal de 0,5 mL /min. A detecção electroquimica foi conseguida utilizando um detector coulométrico; potencial colocado a 250 mV (célula oclusiva a 350 mV) (Coulochem II, ESA).

Exemplo 6 Efeito na dor neuropática

Para demonstrar uma eficácia contra dor neuropática, o composto I foi testado no modelo formalina de dor neuropática [Neuropharm., 48, 252-263, 2005; Pain, 51, 5-17, 1992]. Neste modelo, os murganhos recebem uma injecção de formalina (4,5 %, 20 pL) na superfície da planta do membro posterior esquerdo e depois são colocados individualmente em copos de precipitação de vidro (2 L de capacidade) para observação. A irritação provocada pela injecção de formalina produz uma resposta comportamental bifásica característica, como quantificado pela quantidade de tempo passado a lamber o membro lesionado. A primeira fase (~ 0-10 minutos) representa a irritação química directa e nocicepção, enquanto que a segunda (~ 20-30 minutos) pensa-se que represente a dor de origem neuropática. As duas fases são separadas por um período quiescente no qual o comportamento regressa ao normal. Medindo a quantidade de tempo passado a lamber o membro lesionado nas duas fases avalia-se a eficácia dos compostos de teste para reduzir os estímulos dolorosos. 44 ΡΕ2129377

Foram testados oito murganhos C57/B6 (ca. 25 g) por grupo. A Tabela 3 adiante mostra a quantidade de tempo passado a lamber o membro lesionado nas duas fases, í.e. 0-5 minutos e 20-30 minutos após a injecção de formalina. A quantidade de composto administrada é calculada como a base livre.

Tabela 3

Veículo 1,0 mg/kg 2,5 mg/kg 10 mg/kg 0-5 minutos(seg) 42 37 30 37 20-30 minutos(seg) 41 43 26 6

Os dados na Tabela 3 mostram que o composto I tem pouco efeito na primeira fase representando a irritação química directa e nocicepção. Mais notavelmente, os dados também mostram um decréscimo claro e dependente da dose no tempo passado a lamber os membros na segunda fase indicando um efeito o composto I no tratamento de dor neuropática.

Lisboa, 7 de Dezembro de 2011

Claims

1 ΡΕ2129377 REIVINDICAÇÕES 1. Uma formulação farmacêutica líquida compreendendo um sal de 4-[2-(4-metilfenilsulfanil) fenil]pipe-ridina seleccionado a partir do sal de adição de ácido DL-láctico, do sal de adição de ácido glutárico, do sal de adição de ácido L-aspártico e do sal de adição de ácido glutâmico.

2. A formulação líquida de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal é o sal de adição de ácido DL-láctico.

3. A formulação líquida de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal é o sal de adição de ácido glutárico.

4. A formulação líquida de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal é o sal de adição de ácido L-aspártico.

5. A formulação líquida de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal é o sal de adição de ácido glutâmico.

6. A formulação líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, em que a concentração do referido sal é superior a 5 mg/mL. 2 ΡΕ2129377

7. Um sal de 4-[2- (4-metilfenilsulfanil)fe-nil]piperidina seleccionado a partir do sal de adição de ácido DL-láctico, do sal de adição de ácido glutárico, do sal de adição de ácido L-aspártico e do sal de adição de ácido glutâmico par utilizar no tratamento de uma doença seleccionada a partir de patologias de estado de espirito, patologia depressiva principal, patologia de ansiedade geral, depressão atípica, depressão bipolar, patologia de ansiedade social, patologia compulsiva obsessiva, patologia de pânico, patologia de tensão pós-traumática, abuso, patologia de alimentação, patologia do sono, doença de Alzheimer, demência, dor crónica, depressão associada a deficiência cognitiva, depressão associada a psicose, deficiência cognitiva em esquizofrenia, depressão ou ansiedade associada a dor, perturbações comportamentais nos idosos, ADHD, depressão resistente ao tratamento de melancolia e depressão com sintomas residuais, em que o referido sal está numa formulação farmacêutica líquida. 8. 0 sal de acordo com a reivindicação 7, cujo sal é o sal de adição de ácido DL-láctico de 4— [2— (4— metilfenilsulfanil)fenil]piperidina. 9. 0 sal de acordo com a reivindicação 7, cujo sal é o sal de adição de ácido glutárico de 4-[2-(4-metilf enilsulf anil) fenil]piperidina.

10. O sal de acordo com a reivindicação 7, cujo sal é o sal de adição de ácido L-aspártico de 4— [2— (4 — metilfenilsulfanil)fenil]piperidina. 3 ΡΕ2129377 11. 0 sal de acordo com a reivindicação 7, cujo sal é o sal de adição de ácido glutâmico de 4-[2-(4-metil-fenilsulfanil)fenil]piperidina. 12. 0 sal de acordo com qualquer uma das reivindicações 7-11, em que a referida formulação liquida compreende mais de 5 mg/mL do referido sal.

13. Um contentor equipado com um agregado de gota, cujo contentor compreende uma formulação liquida de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-6. Lisboa, 7 de Dezembro de 2011