PT1914239E

PT1914239E - BACTéRIAS GRAM-NEGATIVAS ATENUADAS

Info

Publication number: PT1914239E
Application number: PT07018562T
Authority: PT
Inventors: Jacqueline Elizabeth Shea; Helen Rachel Crooke; Robert Graham Feldman; Sylvain Gabriel Goutebroze; Franaois-Xavier Le Gros
Original assignee: Merial Sas
Priority date: 2002-04-05
Filing date: 2002-04-05
Publication date: 2010-07-30
Also published as: EP1914239A1; ES2346915T3; DE60236698D1; EP1350796B1; PT1350796E; DE60230717D1; ATE420105T1; EP1350796A1; EP1914239B1; ATE470674T1; DK1350796T3; ES2320419T3; CY1108972T1

Description

DESCRIÇÃO "BACTÉRIAS GRAM-NEGATIVAS ATENUADAS"

CAMPO DA INVENÇÃO

Esta invenção refere-se a bactérias Gram-negativas atenuadas vivas que podem ser utilizadas em composições imunogénicas ou em composições de vacina para a prevenção de infecções bacterianas. As bactérias atenuadas podem actuar como um vector de expressão para expressar imunogénios de outros agentes patogénicos. Os polipéptidos codificados pelas sequências de nucleótidos ou genes que se verificou serem alvos apropriados para a atenuação das bactérias, podem ser utilizados como compostos imunogénicos especialmente em composições imunogénicas ou em composições de vacina.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Está bem estabelecido que microrganismos atenuados vivos podem ser vacinas altamente eficazes; as respostas imunes induzidas por essas vacinas são frequentemente de uma magnitude maior e de uma duração mais longa do que aquelas produzidas por imunogénios não replicativos. Uma explicação para isto pode ser que as estirpes atenuadas vivas estabelecem infecções limitadas no hospedeiro e mimetizam as fases iniciais da infecção natural. Além disso, ao contrário de preparações mortas, as vacinas vivas são capazes de induzir potentes respostas mediadas por células 1 que podem ser associadas com a sua capacidade para replicar em células apresentadoras de antigénio, tal como macrofágos.

Existe uma longa história de utilização de vacinas atenuadas vivas em animais e humanos, especialmente utilizando técnicas de mutagénese química. Contudo, as vacinas atenuadas empiricamente podem reverter a virulência.

As modernas técnicas de biologia molecular, em conjunto com o conhecimento crescente da patogénese bacteriana, conduziram à identificação de diversos genes que estão envolvidos no crescimento e sobrevivência dos microrganismos in vivo. Isto tem proporcionado novos alvos génicos para atenuação e para o conceito de que futuras estirpes de vacina podem ser atenuadas "racionalmente", através da introdução de mutações definidas que não revertem em genes seleccionados conhecidos por estarem envolvidos na virulência, ver por exemplo, documentos WO-A-O0/61724, WO-A-OO/68261 e EP-A-0889120 .

Embora tenham sido produzidas muitas estirpes atenuadas em laboratórios, apenas algumas se qualificaram como potenciais candidatos a vacina para utilização em animais. Isto pode ser devido, em parte, à necessidade de equilibrar a imunogenicidade da vacina com a possibilidade do microrganismo reverter, tornando-se reactivo e patogénico. É claro que a selecção de genes apropriados para atenuação, os quais irão resultar num candidato a vacina adequado, não é simples e não pode ser facilmente prevista. Muitos factores podem influenciar a aceitabilidade de um mutante atenuado como uma vacina e, consequentemente, é requerido esforço de investigação para identificar e seleccionar genes atenuáveis 2 adequados. Muitas experiências de atenuação foram conduzidas apenas in vitro e os seus resultados não podem ser extrapolados in vivo, especialmente em relação à patogenicidade residual dos mutantes resultantes para os animais vacinados. É deste modo desejável caracterizar genes envolvidos na atenuação e, nesta base, desenvolvidas bactérias atenuadas assim como vacinas atenuadas tendo, em particular, um grau elevado de imunogenicidade e que apresentam um bom perfil de segurança com poucos ou nenhuns efeitos colaterais.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se à identificação de sequências de nucleótidos e genes envolvidos na atenuação de um microrganismo. As mutações introduzidas nestas sequências de nucleótidos e genes produzem novos mutantes atenuados. Estes mutantes são úteis para a produção de composições imunogénicas atenuadas vivas ou vacinas atenuadas vivas que têm um grau elevado de imunogenicidade. A presente invenção proporciona um mutante de uma bactéria Gram-negativa, em que a referida bactéria tem uma mutação numa sequência de nucleótidos que codifica um polipéptido que tem uma identidade que é igual ou superior a 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleótidos SEQ ID N° 90, resultando a referida mutação em virulência atenuada da bactéria.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição imunogénica compreendendo um mutante atenuado de 3 acordo com a presente invenção, e um diluente, veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Além disso, a presente invenção proporciona uma vacina compreendendo um mutante atenuado de acordo com a presente invenção, e um diluente, veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. A presente invenção proporciona, noutro aspecto, a utilização de um mutante de uma bactéria Gram-negativa, de acordo com a presente invenção, na produção de uma composição imunogénica atenuada viva ou na preparação de uma composição de vacina atenuada viva. A presente invenção proporciona, noutro aspecto, uma bactéria Gram-negativa de acordo com a presente invenção, uma composição imunogénica de acordo com a presente invenção ou uma vacina de acordo com a presente invenção, para utilização na imunização contra ou prevenção de infecção bacteriana num animal.

Num aspecto adicional, presente invenção proporciona a utilização de um mutante de uma bactéria Gram-negativa de acordo com a presente invenção, uma composição imunogénica de acordo com a presente invenção ou uma vacina de acordo com a presente invenção, para a preparação de um medicamento para a imunização contra ou prevenção de infecção bacteriana num animal.

Num primeiro aspecto, a descrição proporciona bactérias contendo uma mutação atenuada numa sequência de nucleótidos ou gene, em que a mutação modifica, reduz ou suprime a expressão e/ou a actividade biológica de um polipéptido ou proteína 4 codificada por um gene, resultando em virulência atenuada da bactéria.

A mutação não está necessariamente localizada dentro de um gene para suspender a sua função, conduzindo à atenuação. A mutação pode também ser realizada em sequências de nucleótidos envolvidas na regulação da expressão do gene, em particular, regiões que regulam a iniciação da transcrição, tradução e terminação da transcrição. Assim, estão também incluídos promotores e regiões de ligação a ribossoma (em geral estes elementos reguladores encontram-se, aproximadamente, entre 60 e 250 nucleótidos a montante do codão de iniciação do gene; Doree S M et al., J. Bacteriol . 2001, 183 (6) : 1983-9; Pandher K et al., Infect. Imm. 1998, 66(12): 5613-9; Chung J Y et al., FEMS Microbiol letters 1998, 166: 289-296), terminadores de transcrição (em geral o terminador está localizado dentro de aproximadamente 50 ácidos nucleicos a jusante do codão de terminação do gene; Ward C K et al., Infect. Imm. 1998, 66 (7): 3326-36). No caso de um operão, essas regiões reguladoras podem estar localizadas a uma maior distância a montante do gene. Por vezes, uma mutação numa região intergénica pode também conduzir à atenuação.

Uma mutação dentro dessas sequências reguladoras associadas com o gene de modo que a mutação desta sequência de nucleótidos modifique, iniba ou suprima a expressão e/ou a actividade biológica do polipéptido ou da proteína codificada pelo gene, resultando em virulência atenuada da bactéria seria equivalente a uma mutação dentro de um gene aqui identificado. 5 A atenuação reduz ou suprime a patogenicidade das bactérias e a gravidade dos sinais clínicos ou lesões, diminui a taxa de crescimento das bactérias e previne a morte. A invenção refere-se a bactérias Gram-negativas, mais particularmente da família Pasteurellaceae, especialmente Pasteurella multocida, Pasteurella haemolytica, Pasteurella anatipestifer e Actinobacillus pleuropneumoniae. A bactéria preferida é Pasteurella multocida. A Pasteurella multocida é uma bactéria Gram-negativa que é o agente causador de várias doenças de animais de produção e um patogéneo humano oportunista. É o agente etiológico de pasteurelose grave, tal como a cólera aviária em aves de capoeira e selvagens, septicemia hemorrágica bovina e rinite atrófica dos suínos (Hunt ML et al., Vet Microbiol 2000, 72 (1-2) : 3-25) . Os isolados podem ser agrupados serologicamente com base nos antigénios capsulares em serogrupos (A, B, D, E e F) ou em 16 serotipos com base em antigénios LPS somáticos.

As potenciais sequências de nucleótidos envolvidas na atenuação de bactérias foram identificadas utilizando Signature Tagged Mutagenesis (STM). Este método foi descrito em detalhe no documento WO-A-96/17951.

Resumidamente, o método de STM envolve a inserção de um transposão único, marcado com assinatura, no genoma de um microrganismo. No locus da inserção, a sequência de nucleótidos do genoma é interrompida e a mutação resultante é verificada para a atenuação. A sequência da região interrompida (e. g., gene ou grelha de leitura aberta (ORF)) para cada mutante atenuado é determinada através de amplificação por PCR (reacção 6 em cadeia da polimerase) , clonagem e sequenciação das regiões do ADN que flanqueiam o transposão. 0 método de STM, descrito no documento WO-A-96/17951, foi adaptado para ser funcional em Pasteurella multocida. Estas adaptações são, particularmente, a utilização do transposão TnlO em vez do Tn5, a utilização para selecção de um meio CDM sem leucina em vez de uma selecção de resistência à estreptomicina. São apresentados mais detalhes nos exemplos.

Uma selecção adicional de genes envolvidos na atenuação dos potenciais genes identificados pelo método de STM é baseada na ausência de mortalidade após inoculação das bactérias mutantes em animais. Para a aplicação veterinária, um aspecto vantajoso da descrição compreende a implementação de uma selecção experimental directamente no animal alvo, em vez de um modelo animal. Este método permite uma selecção mais exacta para mutações apropriadas das bactérias mutantes. Para Pasteurella multocida, as experiências são realizadas directamente em perus, um dos seus hospedeiros alvo naturais. Os perus são inoculados intramuscularmente com uma quantidade suficiente de agrupamentos de mutantes de P. multocida marcados com assinatura (e. g., 0,5 mL, 107 CFU por animal). Os mutantes que não são re-isolados numa determinada altura após a inoculação são considerados como potencialmente atenuados. Os mutantes que não são re-isolados são distinguidos daqueles no agrupamento que são re-isolados através de amplificação por PCR e análise dos marcadores de assinatura. Cada mutante potencialmente atenuado é depois injectado através da via intramuscular em perus (e. g., 0,5 mL, 104 CFU por animal). A mortalidade dos perus é registada diariamente durante 7 dias após a inoculação. Os mutantes que não conduzem à morte são considerados como atenuados. 7

As sequências de nucleótidos que flanqueiam inserção do transposão são designadas SEQ ID N°: 1, 14, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, • 39, 42 60, 63, 66, 69, 72, 73, 77, 80, 83, 86, 89. o locus 4, 5, 8, 51, 54, da11, 57,

Foram caracterizados os genes onde ocorreu a inserção do transposão. A sua sequência de nucleótidos em Pasteurella multocida estirpe PM70 é designada SEQ ID N°: 2, 6, 9, 12, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67, 70, 75, 78, 81, 84, 87, 90. A mutação atenuante pode ser realizada dentro destas sequências de nucleótidos ou genes, assim como nas suas sequências complementares. A mutação atenuante pode também ser realizada em sequências de nucleótidos envolvidas na região reguladora dos referidos genes. O termo "complementar" significa aqui a sequência de nucleótidos da outra cadeia no genoma de cadeia dupla, cobrindo assim a cadeia anti-sentido como complementar da cadeia de sentido e inversamente. O termo "nucleótido" abrange também desoxirribonucleótido (que constitui os ácidos desoxirribonucleicos ou ADN), ribonucleótido (que constitui os ácidos ribonucleicos ou ARN) e ribonucleótido mensageiro (ARNm).

Mais genericamente, podem ser introduzidas mutações atenuantes no genoma de uma bactéria, em particular, uma bactéria Gram-negativa, mais particularmente, um membro da família Pasteurellacaea, e. g., P. multocida, P. haemolytica, P. anatipestifer, A. pleuropneumoniae e, de um modo mais preferido, no genoma de qualquer uma das várias estirpes de P. multocida em, pelo menos, uma sequência de nucleótidos que codifica para uma sequência de aminoácidos que tem, pelo menos, cerca de 70% de identidade, pelo menos, cerca de 75% de identidade, pelo menos, cerca de 80% de identidade, pelo menos, cerca de 85%, pelo menos, cerca de 90% de identidade e, pelo menos, cerca de 95, 96, 97, 98 ou 99% ou mais de identidade para uma das sequências de aminoácidos codificadas por uma sequência de nucleótidos identificada como SEQ ID N°: 2, 6, 9, CN \—1 \—1 19 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67 70, 75, 78, 81, 84, 87, 90. Isto abrange a degeneração do código genético. A percentagem de identidade entre duas sequências de aminoácidos pode ser estabelecida pelo pairwise blast do NCBI (National Center for Biotechnology Information) e a matriz blosum62, utilizando os parâmetros convencionais. O verbo "codificado" aqui utilizado, não significa que a sequência de nucleótidos está limitada a uma sequência codificante efectiva, mas abrange também todo o gene, incluindo as suas sequências reguladoras que são sequências não codificantes. A descrição refere-se à mutação das sequências de nucleótidos ou genes que codificam polipéptidos ou proteínas que têm a mesma função biológica. A semelhança de função pode ser verificada através da conservação dos sítios activos. Isto pode ser realizado através uma pesquisa DART (Domain Architecture Retrieval Tool) no NCBI. A presente invenção proporciona assim mutantes atenuados de uma bactéria como acima descrita, compreendendo uma mutação atenuante como acima definida.

Os mutantes podem compreender mais do que uma mutação, a qual pode resultar em graus aditivos ou sinérgicos de atenuação e pode resultar numa melhor prevenção da reversão da atenuação. 9

Estas mutações múltiplas podem associar mutação(ões) em sequências de nucleótidos ou genes conhecidos pelas suas propriedades atenuantes, tal como os genes aro, por exemplo, aroA (Homchampa P. et al., Veterinary Microbiology, 1994, 42: 35-44) e mutações nas sequências de nucleótidos ou genes de acordo com a descrição.

As mutações podem ser introduzidas no microrganismo utilizando qualquer técnica conhecida, tal como, por exemplo, tecnologia do ADN recombinante, de modo a introduzir uma mutação bem definida no gene seleccionado. Uma tal mutação pode ser uma inserção de sequência de ácido nucleico heterólogo, uma delecção, uma substituição, digamos uma substituição de, pelo menos, um nucleótido por outro ou uma sua combinação. Numa primeira forma de realização preferida, a mutação é uma mutação de delecção, onde a interrupção do gene é provocada pela delecção de parte e, de um modo preferido, pela delecção de toda a sequência de ácido nucleico do gene. A delecção de ácidos nucleicos evita a reversão à patogenicidade. Numa segunda forma de realização preferida, a mutação é uma inserção realizada num locus que corresponde aos loci de inserção de transposão descritos nos exemplos. Estes loci são, em particular, aqueles localizados entre: nucleótidos 180-181 na SEQ ID N°: 2, 77-78 ou 1027- -1028 na SEQ ID N° : 6, 416-417 na SEQ ID N° : 9, 389-390 na SEQ ID N° : 12, 381-382 na SEQ ID N° : 16 , 219-220 na SEQ ID N° : 19, 1353-1354 na SEQ ID N° : 22 !, 136-137 na SEQ ID N° : 25, 384-385 na SEQ ID N° : 28 , 222-223 na SEQ ID N° : 31, 217-218 na SEQ ID N O · 34, 1411-1412 na SEQ ID N° : 37, 943-944 na SEQ ID N° : 40, 855-856 na SEQ ID N° : 43, 369-370 na SEQ ID N° : 46, 111-112 na SEQ ID N °: 49, 443-444 na SEQ ID N° : 52, 4-5 na SEQ ID N° : 55, imediatamente antes do nucleótido 1 na 10 61, na na na 81, na SEQ ID N° : 58, 573-574 na SEQ ID N° : 61, 875-876 SEQ ID N°: 64, imediatamente antes do nucleótido 1 SEQ ID N° : 67, 218-219 na SEQ ID N° : 70, 1072-1087 SEQ ID N°: 75, 64-65 na SEQ ID N°: 78, 282-283 na SEQ ID N°: 1431-1432 na SEQ ID N°: 84, 974-975 na SEQ ID N°: 87, 802-803 SEQ ID N°: 90 .

Os mutantes de delecção incluem aqueles em que é removida toda ou uma parte de uma sequência especifica do gene. Num aspecto, a mutação resulta na delecção de, pelo menos, um ácido nucleico, pelo menos, de cerca de 10%, pelo menos, cerca de 20%, pelo menos, cerca de 30%, pelo menos, cerca de 40%, pelo menos, cerca de 50%, pelo menos, cerca de 60%, pelo menos, cerca de 70%, pelo menos, cerca de 80%, pelo menos, cerca de 90%, pelo menos, cerca de 95%, pelo menos, cerca de 98% ou, pelo menos, de cerca de 99% do referido gene. De um modo preferido, todo o gene é removido.

Os métodos para introduzir as mutações nas regiões genómicas especificas são bem conhecidos e serão evidentes para o especialista. Por exemplo, o gene inteiro a ser mutado ou um fragmento é clonado num vector e modificado de modo a suprimir a sua expressão e/ou actividade biológica. O fragmento de ADN modificado é re-introduzido no genoma bacteriano por recombinação genética, de um modo preferido, por recombinação homóloga entre o cromossoma bacteriano e o vector. Como um exemplo, o vector pode ser um plasmideo suicida como descrito em Cardenas (Cardenas M et al., Vet Microbiol 2001, 3 de Maio; 80(1): 53-61). Vantajosamente, este vector compreende ainda entre os dois braços flanqueadores uma sequência poli-stop (6 codões de terminação, um em cada grelha de leitura) para bloquear qualquer possível tradução. 11 0 microrganismo atenuado da invenção, e. g., P. multocida, pode ainda compreender, pelo menos, uma sequência de ácido nucleico heterólogo introduzida no seu genoma, em que a referida sequência de ácido nucleico heterólogo codifica, de um modo preferido, para um imunogénio de um agente patogénico virai, parasitico ou bacteriano que é diferente do microrganismo atenuado. Esta sequência heteróloga pode codificar um imunogénio de outra estirpe de P. multocida. Um imunogénio é uma proteína, polipéptido ou péptido que é capaz de induzir uma resposta imune contra o agente patogénico ou um antigénio segregado.

As sequências de ácidos nucleicos heterólogos que são adequadas para esta utilização num tal vector serão evidentes para o especialista (Fedorova ND e Highlander SK, Infect Immun 1997, 65(7): 2593-8) e incluem, por exemplo, aquelas provenientes de membros da família Pasteurellaceae (especialmente Pasteurella multocida, Pasteurella haemolytica, Pasteurella anatipestifer, Actinobacillus pleuropneumoniae) ou de bactérias como E. coli, Salmonella, Campylobacter. A sequência heteróloga é introduzida de forma a ser expressa pelo microrganismo no hospedeiro quando administrada de modo a desenvolver uma resposta imune contra o microrganismo atenuado e o referido imunogénio expresso. A sequência heteróloga é introduzida, de um modo preferido, com os elementos reguladores a permitir a sua expressão, tal como um promotor. As sequências de nucleótidos úteis para o direccionamento e secreção da proteína também podem ser adicionadas.

Numa forma de realização, a sequência heteróloga é introduzida dentro da sequência de nucleótidos seleccionada ou 12 do gene seleccionado utilizado para a atenuação, em particular, introduzida num dos loci correspondentes aos loci de inserção do transposão aqui identificados.

Para melhorar a expressão, a utilização de codão pode ser adaptada ao vector bacteriano utilizado.

Os mutantes atenuados da invenção podem também compreender uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína terapêutica, um alergénio, um factor do crescimento ou uma citocina.

De acordo com um aspecto adicional da invenção, os microrganismos atenuados são utilizados para produzir composições imunogénicas atenuadas vivas ou para composições de vacina atenuadas vivas. De acordo com um aspecto particular, o microrganismo atenuado é P. multocida. Vantajosamente, como descrito anteriormente, o microrganismo pode actuar como um vector recombinante para imunizar animais ou um humano contra infecções provocadas por outros agentes diferentes de Pasteurella.

As composições imunogénicas ou composições de vacina compreendem o mutante atenuado e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável e, opcionalmente, um estabilizador e/ou um adjuvante. 0 termo "composição imunogénica" abrange aqui qualquer composição capaz de, uma vez injectada em animais ou num humano, induzir uma resposta imune contra o patogéneo alvo. 0 termo "composição de vacina" ou "vacina" abrange aqui qualquer 13 composição capaz, uma vez injectada em animais ou num humano, induzir uma resposta imune protectora contra o patogéneo alvo. 0 veiculo farmaceuticamente aceitável pode ser água ou soro fisiológico, mas também pode compreender, e. g., meio de cultura de bactérias.

As bactérias atenuadas vivas de acordo com a invenção podem ser liofilizadas, de um modo preferido, com um estabilizador. A liofilização pode ser realizada de acordo com processos de liofilização convencionais bem conhecidos. Os estabilizadores farmaceuticamente aceitáveis podem ser hidratos de carbono (e. g., sorbitol, manitol, lactose, sacarose, glucose, dextrano, trealose), glutamato de sódio (Tsvetkov T et al., Cryobiology 1983, 20(3): 318-23; Israeli E et al., Cryobiology 1993, 30(5): 519-23), proteínas, tais como peptona, albumina, lactalbumina ou caseína, agentes contendo proteína, tal como leite magro (Mills CK et al., Cryobiology 1988, 25 (2): 148-52; Wolff E et al.,

Cryobiology 1990, 27(5): 569-75) e tampões (e. g., tampão fosfato, tampão fosfato de metal alcalino).

Pode ser utilizado um adjuvante para tornar solúveis as preparações liofilizadas.

Os exemplos de adjuvantes são emulsões de óleo-em-água, água-em-óleo-em-água baseadas em óleo mineral e/ou óleo vegetal e agentes tensioactivos não iónicos, tais como copolímeros de bloco, Tween®, Span®. Outros adjuvantes adequados são, por exemplo, a vitamina E, saponinas e Carbopol®, hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio ("Vaccine Design, The subunit and adjuvant approach", Pharmaceutical Biotechnology, vol. 6, 14

Editado por Michael F. Powell e Mark J. Newman, 1995, Plenum Press New York) .

As bactérias atenuadas vivas podem ser armazenadas a -70 °C num meio contendo glicerol.

Opcionalmente, a composição imunogénica ou vacina pode ser combinada com um ou mais imunogénios seleccionados de outros microrganismos patogénicos ou vírus numa forma inactivada ou viva.

Outro aspecto da descrição é a utilização das sequências de nucleótidos ou genes de acordo com a descrição, para a expressão e a produção de imunogénios. Numa primeira forma de realização, os polipéptidos codificados por estas sequências de nucleótidos ou genes podem ser utilizados como imunogénios de subunidade em composições imunogénicas ou vacinas.

Os polipéptidos preferidos são aqueles que têm as sequências de aminoácidos identificadas como SEQ ID N°: 3, 7, 10, 13, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65 , 68, 71, 76, 79, , 82, 85, 88, 91, ou aqueles codificados pelas sequências de nucleótidos SEQ ID N °: 2, 6, 9, 12, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67, 70, 75, 78, 81, 84, 87, 90. A descrição abrange os polipéptidos equivalentes de uma outra bactéria, em particular, uma bactéria Gram-negativa, mais particularmente, um membro da família Pasteurellacaea, e. g., P. multocida, P. haemolytica, P. anatipestifer, A. pleuropneumoniae e, de um modo mais preferido, no genoma de qualquer uma de várias estirpes de P. multocida. Estão assim incluídos como 15 equivalentes, os polipéptidos cujas sequências de aminoácidos têm, pelo menos, cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos, cerca de 80%, pelo menos, cerca de 85%, pelo menos, cerca de 90%, pelo menos, cerca de 95% e, pelo menos, cerca de 96, 97, 98 ou 99% de identidade com uma das sequências de aminoácidos identificadas como SEQ ID N° : 3, 7, 10, 13, 17, O C\l 23, 26, 29 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65, oo QO 71, 76, 79 82, 85, 88, 91 e/ou polipéptidos que têm a(s) mesma(s) função(ões) biológica(s) do que os polipéptidos identificados acima com SEQ. Os critérios para estabelecer a identidade ou a mesma função biológica foram acima descritos. A descrição também abrange os fragmentos imunogénicos destes polipéptidos, tendo, pelo menos, uma cadeia de 10 aminoácidos do polipéptido, pelo menos 20, em particular, pelo menos 30, de um modo preferido, pelo menos 50 e, de um modo mais preferido, pelo menos 70.

Os polipéptidos ou fragmentos são produzidos, de um modo preferido, por expressão in vitro. As sequências de nucleótidos de acordo com a descrição (e. g-r SEQ ID N°: 2 , 6, 9, 12, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67, 70, 75, 78 , 81, 84, 87, 90) ou os seus fragmentos são introduzidos num vector, ligado operativamente a elementos reguladores, tais como promotor, região de ligação ao ribossoma e terminador e codão de iniciação e codão de terminação. Os vectores preferidos são plasmideos úteis para expressão in vitro em bactérias, i. e., Escherichia coli (Mahona F et al., Biochimie 1994, 46 (1) : 9-14; Watt Μ A et al., Cell Stress Chaperones 1997, 2(3): 180-90; Frey J Res. Microbiol. 1992, 143(3): 263-9). 16

Estes polipéptidos podem também ser sintetizados quimicamente (Luo Y et al., Vaccine 1999, 17(7-8): 821-31).

Um objecto da descrição é assim uma composição imunogénica ou vacina compreendendo, pelo menos, um polipéptido ou fragmento de acordo com a descrição (composição imunogénica de subunidade ou vacina) ou, pelo menos, um vector de expressão in vivo como acima descrito (composição imunogénica recombinante viva ou vacina) e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável e opcionalmente um adjuvante. Os exemplos desses ingredientes foram descritos acima em relação à vacina viva.

Numa segunda forma de realização, estas sequências de nucleótidos ou os seus fragmentos podem ser introduzidos em vectores recombinantes para produzir composições imunogénicas recombinantes vivas ou vacinas capazes de expressar in vivo no hospedeiro, o polipéptido codificado por esta sequência de nucleótidos ou fragmento. 0 vector de expressão in vivo pode ser um vector de polinucleótidos ou plasmídeo (documento EP-A2-1001025; Chaudhuri P Res. Vet. Sei. 2001, 70 (3), 255-6), vírus (e. g., adenovírus, poxvírus, tais como da varicela aviária (documentos US-A-5174993, US-A-5505941 e US-A-5766599) ou da varicela de canários (documento US-A-5756103)) ou bactérias, i. e., Escherichia coli ou Salmonella sp.

Os polipéptidos e fragmentos da descrição também podem ser utilizados em terapia.

Os referidos polipéptidos e fragmentos também podem ser utilizados como reagentes na reacção anticorpo-antigénio. Outros 17 objectos da descrição são assim um método de diagnóstico para detectar a infecção por bactéria Gram-negativa, assim como kits (e. g., ELISA) incluindo, pelo menos, um polipéptido ou fragmento de acordo com a descrição.

Os anticorpos contra os polipéptidos ou fragmentos acima podem ser utilizados como um reagente de diagnóstico ou em imunização ou vacinação passiva ou em terapia. Outros objectos da descrição são uma preparação de anticorpo compreendendo um anticorpo especifico para um polipéptido ou um fragmento de acordo com a descrição e métodos de diagnóstico utilizando o mesmo. Os anticorpos podem ser policlonais ou monoclonais. Os métodos para produzir anticorpos são bem conhecidos do especialista na técnica. Se forem desejados anticorpos policlonais, um animal seleccionado (e. g., murganho, coelho, cabra, cavalo, etc.) é imunizado com um polipéptido ou um

fragmento. 0 soro do animal imunizado é recolhido e tratado de acordo com processos conhecidos e possivelmente purificado. Ver, e. g., Jurgens et al. J. Chrom., 1985, 348: 363-370. A metodologia geral para produzir anticorpos monoclonais por utilização da tecnologia de hibridoma é bem conhecida. As linhas celulares imortais produtoras de anticorpos podem ser criadas por fusão celular e também por outras técnicas, tais como transformação directa de linfócitos B com ADN oncogénico ou transfecção com virus Epstein-Barr. Ver, e. g., J. E. Liddell "A practical guide to monoclonal antibodies" ed. John Wiley and sons, 1991, p.188; S. J. de StGroth et al. J. Immunol. Methods, 1980, 35(1-2), 1-21.

As sequências de nucleótidos de acordo com a descrição e os seus fragmentos podem ser utilizados como uma sonda para hibridação, e. g., num método de diagnóstico. 18

De um modo preferido, são utilizadas condições de hibridação restringentes. Pode-se referir aquelas descritas por Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), 1.101-1.104. A hibridação sob condições restringentes significa que um sinal positivo de hibridação é ainda observado após lavagem durante 1 hora com tampão 1 x SSC e 0,1% de SDS a 55 °C, de um modo preferido, a 62 °C e, de um modo muito preferido, a 68 °C, em particular, durante 1 hora em tampão 0,2 x SSC e 0,1% de SDS a 55 °C, de um modo preferido, a 62 °C e, de um modo muito preferido, a 68 °C.

As sequências de nucleótidos de acordo com a descrição e os seus fragmentos podem ser utilizados como iniciadores para PCR ou semelhantes, em particular para a detecção de bactérias Gram-negativas em qualquer meio, por exemplo, amostras de tecido, fluidos biológicos, água, alimentos.

De um modo preferido, são utilizados fragmentos de sequências de nucleótidos que têm, pelo menos, 20, pelo menos 30, pelo menos 50, pelo menos 70 ou, pelo menos, 100 ácidos nucleicos de sequências de nucleótidos ou genes de acordo com a descrição, em particular de SEQ ID N°: 2, 6, 9, 12, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67, 70, 75, 78, 81, 84, 87, 90.

Além disso, a presente descrição refere-se a métodos para imunizar contra ou prevenir a infecção bacteriana em animais, de um modo preferido, para espécies de aves, coelhos, bovinos e suínos e, de um modo mais preferido, para espécies de aves em galinhas, perus e patos (isto inclui reprodutoras, para assar e poedeiras) ou num humano. De acordo com estes métodos, é 19 administrada (1) uma composição ou vacina imunogénica atenuada viva, (2) uma composição ou vacina imunogénica de subunidade, (3) uma composição ou vacina imunogénica recombinante viva ou suas combinações. A administração pode ser realizada, especialmente, por injecção intramuscular (IM), intradérmica (ID) ou subcutânea (SC) ou por administração intranasal, intratraqueal ou oral. A composição imunogénica ou a vacina de acordo com a invenção é administrada por seringa, instrumento sem agulha (como, por exemplo, Pigjet, Avijet, Dermojet ou Biojector (Bioject, Oregon, EUA)), pulverizador, água para beber, gotas para os olhos.

As administrações preferidas para a composição ou vacina imunogénica atenuada viva são in ovo, através das vias oral (e. g., água para beber, pulverizador de corpo inteiro), ocular (e. g., gotas para os olhos, pulverizador de corpo inteiro), traqueal (e. g., pulverizador), intradérmica, subcutânea (SC) ou intramuscular (IM). A quantidade de microrganismos atenuados vivos pode ser determinada e optimizada pelo especialista. Contudo, geralmente pode ser administrado num animal aproximadamente 104-109 CFU, de um modo preferido, aproximadamente 105-108 CFU e, de um modo mais preferido, aproximadamente 106-107 CFU numa unidade de dosagem única.

Através da via intramuscular, pode ser administrado num animal de aviário aproximadamente 104-107 CFU, de um modo preferido, aproximadamente 105-106 CFU numa unidade de dosagem unitária. 0 volume de uma única unidade de dosagem pode ser entre 0,2 mL e 0,5 mL e, de um modo preferido, 0,3 mL. Através 20 da via oral, traqueal ou ocular pode ser administrado a um animal de aviário aproximadamente 105-108 CFU, de um modo preferido, aproximadamente 106-107 CFU numa unidade de dosagem unitária. Para a administração com pulverizador, o volume é dependente do dispositivo e do tamanho das gotas, desde cerca de 30 a cerca de 600 mL para 1000 animais e, de um modo preferido, 0,2 mL por animal.

Para animais bovinos e suínos, as vias preferidas são IM e SC. Pode ser administrado ao animal aproximadamente 104-109 CFU, de um modo preferido, aproximadamente 105-108 CFU numa unidade de dosagem unitária. O volume de uma única unidade de dosagem pode ser entre 0,2 mL e 5,0 mL e, de um modo preferido, entre 0,5 mL e 2,0 mL e, de um modo mais preferido, 1,0 mL.

Nos coelhos podem ser administrados através da via IM ou SC aproximadamente 104-108 CFU, de um modo preferido, aproximadamente 105-107 CFU numa unidade de dosagem unitária. O volume de uma única unidade de dosagem pode ser entre 0,2 mL e 0,5 mL e, de um modo preferido, 0,5 mL. Podem também ser administrados através da via ID aproximadamente 104-108 CFU, de um modo preferido, aproximadamente 105-107 CFU numa unidade de dosagem unitária. O volume de uma única unidade de dosagem pode ser entre 0,1 mL e 0,2 mL.

Os seguintes exemplos ilustram a descrição. Nenhum pretende limitar o seu âmbito de aplicabilidade. 21

EXEMPLOS

Exemplo 1: Construção de uma biblioteca de mutantes de transposão de P. multocida marcados com assinatura (rastreio de STM)

Construção dos transformantes marcados SMlOXpir pLOF/km

Os marcadores foram produzidos como descrito em Hensel et al., (Science, 1995, 269:400-403). Inicialmente foram seleccionados os plasmídeos pUTminiTn5Km2 marcados que contêm marcadores que hibridam bem, mas não hibridam de forma cruzada um com o outro. Verificou-se que o transposão mini-Tn5 no vector pUTminiTn5Km2 marcado não transpõe em várias estirpes de Pasteurella multocida. Em contraste, foi demonstrado que o transposão mini-TnlO funciona em P. multocida (lee et al., Vet Microbiol, 1996, 50:143-8). Os marcadores pré-seleccionados foram, deste modo, transferidos dos vectores pUTminiTn5 no plasmídeo pLOF/Km contendo mini-TnlO (Herrero et al., J. Bacteriology, 1990, 172: 6557-6567). Os marcadores foram amplificados por PCR utilizando iniciadores que se ligam ao vector pUTminiTn5Km2, em ambos os lados do sitio Kpnl, no qual os marcadores foram clonados. Estes iniciadores incluem sequências para enzima de restrição Sal I. Os produtos de PCR foram depois digeridos com SalI e clonados no sítio SalI de uma versão modificada do vector pLOF/Km, no qual um sítio Sal I substituiu o sitio único de clonagem SfiI. Os plasmídeos pLOF/Km marcados foram depois transformados em E. coli estirpe SMlOXpir (Kmr, thi, thr, leu, tonA, lacY, supE, recA: : RP4-2-Tc: :MuXpir) (Miller V.L. et al., J. Bacteriol., 1988, 170: 2575-83). Esta 22 tal como pLOF/Km, em estirpe pode mobilizar plasmídeos, bactérias receptoras por conjugação. Métodos de selecção e contra-selecção 0 processo de conjugação requer um método de selecção para o receptor P. multocida, o qual adquiriu o plasmideo pLOF/KM e um método de contra-selecção contra o dador E. coli de SMIOÀpir.

No método de selecção, o receptor P. multocida é seleccionado para a utilização de canamicina, a qual é codificada pelo transposão mini-TnlO.

Inicialmente para a contra-selecção contra o dador E. coli em conjugações, foi utilizado um mutante espontaneamente resistente à estreptomicina da Pasteurella estirpe P-1059. Contudo, parece que esta estirpe foi atenuada em virulência para os perus e, deste modo, não foi aqui utilizada. As estirpes de Pasteurella Multocida podem crescer num meio quimicamente definido (CDM) (Hu et al., Infection and Immunity 1986, 804-810). Uma versão modificada deste meio quimicamente definido contendo agar mas não contendo leucina foi utilizada para permitir contra-selecção contra o dador E. coli. A estirpe de Pasteurella foi capaz de crescer neste meio, cuja composição é apresentada na tabela 1, enquanto a estirpe SMIOÀpir de E. coli, que é um auxotrófica para a leucina não. 23

Tabela 1:

Componente Concentração G/litro Agar Nobre 20 Na2HP04·12Η20 32,31 kh2po4 1,368 NaCl 1, 196 Glucose 6,0 Cloridrato de L-Arginina 0,24 Cloridrato de L-cisteína 0,12 L-serina 0,2 Ácido L-glutâmico 0, 15 L-isoleucina 0,064 L-fenilalanina 0,095 Ácido L-aspártico 1,6 L-tirosina 0,08 Cloridrato de tiamina 0,0002 MgS04·7H20 0,246 Pantotenato de cálcio 0,004 Nicotinamida 0,01 Ácido orótico 0,003

Passagem da estirpe de P.multocida em meio CDM (USDA número

Uma ampola liofilizada da estirpe de P. multocida P-1059, disponível na American Type Culture Collection, de acesso ATCC 15742) foi restabelecida através da adiçao de 200 pL de BHI (infusão cérebro-coração) e uma fracção da suspensão riscada numa placa de agar BHI e a placa incubada a 37 °C de um dia para o outro. O material de colónia desta placa foi utilizado para inocular uma cultura em caldo BHI, a qual foi incubada com agitação a 3 7 °C de um dia para o outro. Foi adicionado glicerol a uma concentração final de 15% v/v e as fracções foram armazenadas congeladas a -80 °C. Uma amostra de uma destas fracções congeladas foi riscada numa placa de agar BHI e incubada de um dia para o outro. O material de colónia desta placa BHI foi depois riscado em placas de agar CDM com a composição apresentada na tabela 1 e incubada a 37 °C durante 3 dias. O material de colónia desta placa CDM foi inoculado numa cultura de caldo BHI e incubada com agitação a 37 °C de um dia para o outro. Foi adicionado glicerol a esta cultura a uma concentração final de 15% v/v e as fracções congeladas a -80 °C. Esta estirpe foi denominada 16084 (CDM).

Construção do banco de mutantes

Os transformantes de SMlOXpir pLOF/km marcados foram conjugados com a estirpe 16084 (CDM) de P. multocida. Para minimizar o isolamento de mutantes colaterais (mutantes com o transposão localizado na mesma posição que surgiram devido à replicação do mutante durante o processo de conjugação) cada transformante SMlOXpir marcado foi conjugado com a estirpe de P. multocida em, pelo menos, três conjugações separadas. Os mutantes de transposão de Pasteurella foram seleccionados em placas de agar CDM suplementadas com canamicina a 50 pg/mL. Os mutantes resistentes à canamicina para cada dos transposões marcados foram depois riscados, para formar colónias isoladas, duas vezes em placas de agar BHI com canamicina a 50 pg/mL. 25

Foram depois inoculadas colónias isoladas em culturas em caldo de BHI, cultivadas de um dia para o outro a 37 °C com agitação. Foi depois adicionado glicerol a uma concentração final de 15% v/v e os mutantes armazenados a -80 °C em frasquinhos individuais.

Exemplo 2: Rastreio do banco de mutantes Pasteurella marcados com assinatura para mutantes atenuados em virulência para perus.

As culturas dos mutantes de P. multocida foram cultivadas para inoculação de perus, por mistura de 20 pL de cada dos stocks de glicerol dos mutantes obtidos no exemplo I com 200 pL de meio de cultura BHI, suplementado com 50 pg/mL de canamicina e colocando em placas de microtitulação de 96 poços. Estas placas de microtitulação foram incubadas em condições estáticas durante cerca de 18 horas a 37 °C. Depois, fracções de 10 pL das culturas de 18 horas de cada mutante foram misturadas com 200 pL de meio de cultura BHI suplementado com 50 pg/mL de canamicina numa placa de microtitulação nova e a placa incubada a 37 °C durante aproximadamente 4 horas. As culturas foram paradas na fase exponencial do crescimento e 100 pL das culturas de cada mutante foram transferidos para uma placa de microtitulação nova e utilizadas para determinação da densidade óptica (OD) a 650 nm.

Os inócuos ou agrupamentos de entrada foram formados por mistura dos 100 pL restantes das culturas de 4 horas. Cada agrupamento de entrada consistiu em 48 mutantes diferentes. O titulo destas suspensões agrupadas foi determinado por análise de FACS (citometria de fluxo) de fracções de 1000 pL. As 26 fracções (1 mL) da suspensão reunida foram depois diluídas em água fisiologicamente tamponada para obter uma suspensão com um título de 2.107 cfu/mL. Grupos de 5 perus com três semanas de idade foram depois inoculados intramuscularmente com fracções de 0,5 mL desta suspensão (107 cfu por animal). O estado serológico dos perus antes da inoculação foi determinado por rastreio, para a presença de anticorpos contra Pasteurella, nas amostras de sangue recolhidas um dia antes da inoculação. As células do restante dos agrupamentos de entrada foram recolhidas por centrifugação e o ADN cromossomal extraído dos sedimentos celulares.

Aproximadamente 14 horas após a inoculação, foram recolhidas amostras de 1 mL de sangue de 3 dos 5 perus. Foram plaqueadas diluições em série (IO-1 a 1CT7) das amostras de sangue em placas de agar Columbia suplementadas com 5% de sangue de ovelha. As placas foram incubadas a 37 °C durante 24 horas, após as quais aproximadamente 10000 colónias de Pasteurella foram ressuspensas em meio BHI. Estas suspensões, as quais são denominadas agrupamentos de saída, foram depois centrifugadas e o ADN cromossomal extraído do sedimento celular.

Os mutantes de Pasteurella que estavam presentes no agrupamento de entrada, mas que não foram re-isolados dos perus, foram identificados através de amplificação por PCR dos marcadores de assinatura presentes em amostras de ADN dos agrupamentos de entrada e saída e hibridação dos produtos de PCR amplificados contra transferências em gota carregadas com ADN que codifica os marcadores de assinatura, como descrito em Hensel et al. (Science 1995, 269:400-403). Estes mutantes foram considerados como potencialmente atenuados em virulência. Esta atenuação foi confirmada por rastreio para a ausência de 27 mortalidade após infecções únicas dos potenciais mutantes em perus.

Exemplo 3: Confirmação da atenuação em virulência para perus dos mutantes de P. multocida.

Os mutantes de transposão identificados como potencialmente atenuados no exemplo 2 ou os mutantes que têm capacidade limitada para crescer em cultura, foram restabelecidos por mistura de 20 pL dos stocks de glicerol com 200 pL de meio de cultura BHI suplementado com 50 pg/mL de canamicina em placas de microtitulação. Estas placas de microtitulação foram incubadas em condições estáticas durante 18 horas a 37 °C. Depois, fracções de 10 pL de cada mutante destas culturas foram retiradas e misturadas com 200 pL de meio BHI, suplementado com 50 pg/mL de canamicina numa placa de microtitulação nova e esta placa incubada em condições estáticas durante cerca de 4 horas. As culturas foram paradas na fase exponencial do crescimento e 100 pL das culturas de cada mutante foram transferidos para uma placa de microtitulação nova e utilizada para determinação da densidade óptica (OD) a 650 nm. As culturas de cada um dos mutantes foram depois diluídas 1 para 10000 em água fisiologicamente tamponada para obter uma concentração de aproximadamente 2.104 cfu/mL. As fracções (0,5 mL) destas diluições foram depois inoculadas intramuscularmente em 2 perus com cinco semanas de idade (104 cfu por animal). O estado serológico de alguns animais de cada grupo de perus foi determinado a partir de amostras de sangue recolhidas no dia anterior à inoculação. Os perus foram monitorizados durante os 7 dias seguintes para a mortalidade. Dos mutantes testados, 72 não resultaram em mortalidade em nenhuma das duas aves inoculadas. Estes 72 mutantes foram considerados atenuados em virulência. 28

Exemplo 4: Caracterização dos mutantes de inserção de transposão identificados após rastreio em perus

Os sítios de inserção de transposão no genoma de mutantes de P. multocida atenuados foram identificados por clonagem do ADN que flanqueia um lado da inserção do transposão, por PCR Inversa ou PCR iniciada arbitrariamente.

Estes mutantes foram restabelecidos a partir dos stocks de glicerol a -80 °C por riscagem de uma fracção em placas de agar BHI com 50 pg/mL de canamicina. As colónias isoladas foram depois utilizadas para inocular culturas em caldo de BHI, a partir das quais foi preparado o ADN cromossomal.

Para a PCR Inversa, o ADN cromossomal foi digerido com uma enzima de restrição que tem um sitio de reconhecimento com 4 pares de bases, tais como Tsp509l, aTaql ou Rsal. O ADN é depois ligado num volume grande para incentivar a ligação intra-molecular. O ADN que flanqueia o transposão é depois amplificado a partir deste molde de ADN ligado utilizando iniciadores que se dirigem para fora que emparelham com a sequência conhecida do transposão. Estes produtos de PCR Inversa são depois clonados e sequenciados.

Para a PCR iniciada arbitrariamente, o ADN cromossomal foi utilizado como um molde num primeiro ciclo de reacção de PCR com um iniciador que se dirige para fora que emparelha com o transposão e um iniciador arbitrário. O iniciador arbitrário tem 5 bases conhecidas na extremidade 3' e depois 10 bases aleatórias. As 20 bases na extremidade 5' do iniciador têm 29 sequência conhecida. A temperatura de emparelhamento deste primeiro ciclo de reacção de PCR é ajustada inicialmente num valor muito baixo, sendo a temperatura de emparelhamento aumentada em ciclos subsequentes. Uma porção dos produtos deste primeiro ciclo de PCR é depois utilizada como um molde num segundo ciclo de PCR. Este segundo ciclo de PCR utiliza outro iniciador que se dirige para fora, o qual emparelha com o transposão numa posição que está mais próxima da extremidade do transposão do que o iniciador utilizado no primeiro ciclo de PCR. 0 outro iniciador utilizado neste segundo ciclo de PCR tem a mesma sequência que as 20 bases da sequência conhecida na extremidade 5' do iniciador arbitrário utilizado no primeiro ciclo de PCR. Os produtos de PCR desta segunda PCR são depois clonados e sequenciados.

As sequências obtidas foram depois analisadas para identificar as grelha de leitura aberta (ORF), as quais podem ser interrompidas pelo transposão e também foram utilizadas para procurar sequências semelhantes, actualmente disponíveis na base de dados do EMBL e na sequência do genoma de Pasteurella multocida estirpe PM70, determinada pela Universidade do Minnesota (May BJ et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2001, 98(6): 3460-5).

Para informação, nas seguintes sequências de nucleótidos, N corresponde a qualquer ácido nucleico (A ou C ou G ou T).

Mutante 1G4

A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 1 (oligómero com 775). O 30 transposão é introduzido imediatamente na extremidade 5' desta sequência.

Um codão de iniciação está localizado nas posições 179-181.

Quatro outros genes e proteínas de Pasteurellaceae foram identificados por blast realizados com uma sequência de 60 aminoácidos codificada por SEQ ID N°: 1.

Estirpe Gene (ref. do Proteína (ref. % de identidade Genbank) do Genbank) P. multocida PhyA PhyA 100% ao longo de taxon 747 (AF 06 7175) (AAC67248) 60 aminoácidos P. multocida PM0773 PhyA 98% ao longo de PM7 0 (AE 0 06115) (AAK02857) 60 aminoácidos P. multocida PhyA PhyA 98% ao longo de P4218 (AF 3 0 2 4 6 7) (AAK17919) 60 aminoácidos P. multocida PhyA PhyA 95% ao longo de P934 (AF 3 0 2 4 6 5) (AAK17907) 60 aminoácidos A posição do transposão no mutante 1G4 corresponde à posição 8507-8508 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006115 do Genbank. O transposão interrompe um homólogo do gene PM0773 de PM70, PhyA. Prevê-se que o gene PhyA esteja envolvido na síntese da cápsula. A sequência de nucleótidos de PM0773 é aqui identificada como SEQ ID N°: 2 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 3.

Mutantes 1G8 e 9D1 31

No mutante 1G8, o transposão é introduzido imediatamente na extremidade 3' da sequência SEQ ID N°: 4 (oligómero com 226). Esta sequência tem duas grelhas de leitura aberta (+2 e -2) que potencialmente codificam proteínas mais longas. A ORF aqui descrita está na grelha 2. 0 transposão introduzido no mutante 9D1 está imediatamente na extremidade 3' da sequência SEQ ID N°: 5 (oligómero com 87).

Os transposões nos mutantes 1G8 e 9D1 interrompem um homólogo do gene PM70, PM0871. As posições dos transposões nestes mutantes correspondem às posições 9849-9850 (mutante 1G8) ou 8899-8900 (mutante 9D1) da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006125 do Genbank. A sequência de nucleótidos de PM0871 é aqui identificada como SEQ ID N°: 6 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 7.

Outro gene/proteina de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N°: 7. Isto é, Haemophilus influenzae HI1586 (números de acesso U32832 e AAC23234 do Genbank) . Foi encontrada uma identidade de 72% ao longo de 507 aminoácidos entre PM0871 e HI1586.

Mutante 2F2 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 8 (oligómero com 78). O transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência. Esta sequência tem três grelhas de leitura aberta (+1, +2 e -1) que potencialmente codificam proteínas mais longas. A ORF aqui descrita está na grelha +2. 32 0 transposão no mutante 2F2 interrompe um gene homólogo do gene PM70, PM1727. Este transposão está localizado numa posição que corresponde a 644-645 da sequência de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006210 do Genbank (PM1727). A sequência de nucleótidos de PM1727 é aqui identificada como SEQ ID N°: 9 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 10. Outro gene/proteina de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N° : 10. Isto é Haemophilus influenzae HI0621 (números de acesso U32744 e AAC22281 do Genbank) . Foi encontrada uma identidade de 77% ao longo de 183 aminoácidos entre PM1727 e HI0621. Ο PM1727 é um membro de uma superfamília de hidrolases, em particular, está relacionado com fosfatases do fosfato de histidinol.

Mutante 3A2 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 11 (oligómero com 467). O transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência.

Um codão de terminação está localizado nas posições 428-430. O transposão no mutante 3A2 está localizado numa posição que corresponde a 5103-5104 da sequência de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006094 do Genbank (PM0586). A sequência de nucleótidos de PM0586 é aqui identificada como SEQ ID N° : 12 e a sua sequência de aminoácidos como 33 SEQ ID N°: 13. Outros dois genes e proteínas de Pasteurellaceae foram identificados por blast realizados com SEQ ID N°: 13.

Estes genes e proteínas são AI PlpD de Pasteurella haemolytica (números de acesso AF058703 e AAC32565 do Genbank) e 31 kDa de Haemophilus somnus (números de acesso L07795 e AAA24941 do Genbank) . Foi encontrada uma identidade de 73% ao longo de 276 aminoácidos entre PM0586 e PlpD de P. haemolytica e 71% ao longo de 273 aminoácidos entre PM0586 e 31 kDa de H. somnus.

PlpD e PM0586 são membros da família da proteína ompA.

Mutante 3D3

As sequências de ADN que flanqueiam ambos os lados do sítio de inserção do transposão são apresentadas na SEQ ID N°: 14 (oligómero com 204, transposão na extremidade 5') e SEQ ID N°: 15 (oligómero com 35, transposão na extremidade 5')·

Um codão de terminação está localizado nas posições 7-9 da SEQ ID N°: 14 e nas posições 33-35 da SEQ ID N°: 15.

Outro gene/proteína de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N° : 14 e com a sua sequência de aminoácidos codificada (65 aminoácidos). Foi encontrada uma identidade de 100% ao longo de 65 aminoácidos com a proteína PM0064. A posição do transposão no mutante 3D3 corresponde às posições 4778-4779 ou 4787-4788 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006042 do Genbank, posições deduzidas a partir de SEQ ID N° : 14 e 15, respectivamente. Esta diferença é provavelmente devida à inserção do transposão, resultando na duplicação de alguns 34 nucleótidos no sítio da inserção do transposão. A posição 4788 está localizada no gene PM0064. A posição 4778 está 6 pb a jusante do codão de terminação de PM0064. A sequência de nucleótidos de PM0064 é aqui identificada como SEQ ID N°: 16 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 17.

Outros genes e proteínas de bactérias Gram-negativas foram identificados por blast realizados com SEQ ID N°: 17.

Estirpe Gene (ref. do Genbank) Proteína (ref. do Genbank) % de identidade Haemophilus HI0017 Hl0 017 81% ao longo de influenzae (U32687) (AAC21695) 127 aminoácidos Escherichia Yf iD yf iD 81% ao longo de coli K12 (AE000344) (AAC75632) 127 aminoácidos Salmonella STY2839 yf iD 81% ao longo de typhi (AL 6 2 72 75) (CAD02795) 127 aminoácidos Salmonella STM2646 yf iD 81% ao longo de typhimurium (AE 0 0 8 8 2 0 ) (AAL21540) 127 aminoácidos Serratia liquefaciens OrfX (X66505) Orf X (CAA47136) 79% ao longo de 127 aminoácidos Yersinia YPO2705 YPO2705 79% ao longo de pestis (AJ 414153) (CAC92944) 127 aminoácidos Vibrio VC2361 VC2361 73% ao longo de cholerae (AE 0 0 4 3 0 6 ) (AAF95504) 127 aminoácidos

Mutante 3D8 35 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 18 (oligómero com 75). 0 transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência.

A posição do transposão no mutante 3D8 corresponde às posições entre 7769-7770 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006080 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM0445. A sequência de nucleótidos de PM0445 é aqui identificada como SEQ ID N°: 19 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 20.

Mutante 3E1 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 21 (oligómero com 229). O transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência. A posição do transposão no mutante 3E1 corresponde às posições entre 9195-9196 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006133 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM0940. A sequência de nucleótidos de PM0940 é aqui identificada como SEQ ID N°: 22 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 23.

Outros genes e proteínas de bactérias Gram-negativas foram identificados por blast realizados com SEQ ID N°: 17. 36

Estirpe Gene (ref. do Genbank) Proteína (ref. do Genbank) % de identidade Haemophilus HI0075 nrdD 87% ao longo de influenzae (U32693) (AAC21751) 713 aminoácidos Escherichia nrdD nrdD 76% ao longo de coli K12 (AE 000495) (AAC77195) 709 aminoácidos Salmonella STY4791 nrdD 76% ao longo de typhi (AL 6 2 72 83) (CAD06912) 709 aminoácidos Salmonella STM4452 nrdD 76% ao longo de typhlmurium (AE 0 0 8 9 0 8 ) (AAL23272) 709 aminoácidos Yersinia YP03464 nrdD 75% ao longo de pestis (AJ 41415 7) (CAC92683) 709 aminoácidos Vibrio VCA0511 VCA0511 74% ao longo de cholerae (AE 0 0 4 3 81) (AAF96414) 709 aminoácidos

Mutante 3H2 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 24 (oligómero com 58). 0 transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência. Esta sequência tem duas grelhas de leitura aberta ( + 1 e -3) que potencialmente codificam proteínas mais longas. A ORF aqui descrita está na grelha +1. Outro gene de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N° : 24 e com a sua sequência de aminoácidos codificada (19 aminoácidos) . Foi encontrada uma identidade de 100% ao longo de 19 aminoácidos com a proteína PM1951. A posição do transposão no mutante 3H2 37 corresponde às posições entre 9418-9419 da sequência de Pasteurella multoclda PM70, número de acesso AE006231 do Genbank (PM1951, uvrA). A sequência de nucleótidos de PM1951 é aqui identificada como SEQ ID N°: 25 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 26. Outros genes e proteínas de bactérias Gram-negativas foram identificados por blast realizados com SEQ ID N°: 26.

Estirpe Gene (ref. do Genbank) Proteína (ref. do Genbank) % de identidade Haemophilus influenzae UvrA (U32711) UvrA (AAC21915) 89% ao longo de 943 aminoácidos Escherichia UvrA UvrA 80% ao longo de coli K12 (AE 0 0 0 4 7 9) (AAC77028) 940 aminoácidos Yersinia UvrA UvrA 80% ao longo de pestis (AJ414142) (CAC 89185) 943 aminoácidos Vibrio UvrA UvrA 80% ao longo de cholerae (AE 0 0 412 7) (AAF93567) 940 aminoácidos Salmonella UvrA UvrA 80% ao longo de typhi (AL627282) (CAD09238) 941 aminoácidos Salmonella UvrA UvrA 80% ao longo de typhimurium (AE 008 8 9 8) (AAA27250) 941 aminoácidos Pseudomonas UvrA UvrA 75% ao longo de aeruginosa (AE 0 0 4 8 4 0) (AAG07622) 943 aminoácidos A UvrA é uma nuclease de excisão ABC de reparaçao do ADN.

Mutante 4D6 38 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 27 (oligómero com 54). 0 transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência. Esta sequência tem duas grelhas de leitura aberta (+1 e -2) que potencialmente codificam proteínas mais longas. A ORF aqui descrita está na grelha +1. A posição do transposão no mutante 4D6 corresponde às posições entre 6492-6493 da sequência de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006036 do Genbank. 0 transposão interrompe um gene homólogo do PM70, PM0032 ou hktE. A sequência de nucleótidos de PM0032 é aqui identificada como SEQ ID N°: 28 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N° : 29. Outro gene/proteína de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N° : 29. Isto é a catalase de Actinobacillus actinomycetemcomitans (números de acesso AF162654 e AAF17882 do Genbank). Foi encontrada uma identidade de 85% ao longo de 482 aminoácidos entre PM0032 e a catalase de A. actinomycetemcomitans.

HktE é uma catalase.

Mutante 4F4 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 30 (oligómero com 172). O transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência.

Quatro outros genes e proteínas de Pasteurellaceae foram identificados por blast realizados com a sequência de 57 aminoácidos codificada por SEQ ID N°: 30. 39

Estirpe Gene (ref. do Proteína (ref. % de identidade Genbank) do Genbank) P. multocida HyaC HyaC 96% ao longo de taxon 747 (AF 06 7175) (AAC67251) 57 aminoácidos P. multocida PM0776 AAK02860 96% ao longo de PM7 0 (AE 0 0 6116 ) 57 aminoácidos P. multocida FcbC FcbC 91% ao longo de P4218 (AF 3 0 2 46 7) (AAK17922) 57 aminoácidos P. multocida DcbC DcbC 88% ao longo de P934 (AF 3 0 2 4 6 5) (AAK17904) 57 aminoácidos A posição do transposão no mutante 4F4 corresponde às posições entre 5272-5273 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006116 do Genbank. 0

transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM0776. A sequência de nucleótidos de PM0776 é aqui identificada como SEQ ID N°: 31 e a sua sequência de aminoácidos como

SEQ ID N° : 32. Estas proteínas são desidrogenases de UDP glucose.

Mutante 4F12 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 33 (oligómero com 226). 0 transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência. A posição do transposão no mutante 4F12 corresponde às posições entre 9263-9264 da sequência de Pasteurella multocida 40 ΡΜ70, número de acesso AE006038 do Genbank. 0 transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM0048 ou fadR. A sequência de nucleótidos de PM0048 é aqui identificada como SEQ ID N° : 34 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 35. 0 FadR é um homólogo de uma proteína de E. coli que é um regulador de transcrição do metabolismo dos ácidos gordos que afecta vários genes de biossíntese de ácidos gordos (fab) e de degradação de ácidos gordos (fad).

Mutante 4G11 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 36 (oligómero com 214). 0 transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência.

Um outro gene de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N°: 36 e com a sua sequência de aminoácidos codificada (70 aminoácidos). Foi encontrada uma identidade de 100% ao longo de 70 aminoácidos com a proteína PM1024. A posição do transposão no mutante 4G11 corresponde às posições entre 3532-3533 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006143 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM1024 ou HtpG. A sequência de nucleótidos de PM1024 é aqui identificada como SEQ ID N°: 37 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 38.

Outros genes e proteínas de bactérias Gram-negativas foram identificados por blast realizados com SEQ ID N°: 38. 41

Estirpe Gene (ref. do Genbank) Proteína (ref. do Genbank) % de identidade Actinobacillus actinomycetem comitans HtpG (U26968) HtpG (AAC44732) 88% ao longo de 625 aminoácidos Haemophilus influenzae HtpG (U32695) HtpG (AAC21778) 86% ao longo de 625 aminoácidos Escherichia HtpG HtpG 76% ao longo de coli K12 (AE000153) (AAC73575) 621 aminoácidos Yersinia HtpG HtpG 76% ao longo de pestis (AJ 414155) (CAC92355) 622 aminoácidos Salmonella STY0531 HtpG 76% ao longo de typhi (AL627267) (CAD04972) 621 aminoácidos Salmonella HtpG HtpG 75% ao longo de typhimurium (AE008718) (AAL19441) 621 aminoácidos A HtpG é uma proteína de choque térmico.

Mutante 5D5 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 39 (oligómero com 252). 0 transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência. A posição do transposão no mutante 5D5 corresponde às posições entre 5695-5696 da sequência do genoma de Pasteurella 42 multocida PM70, número de acesso AE006188 do Genbank. 0 transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM1517 ou PIpE). A sequência de nucleótidos de PM1517 é aqui identificada como SEQ ID N°: 40 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 41.

Prevê-se que a PIpE seja uma lipoproteina de membrana.

Mutante 5F11 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 42 (oligómero com 546). O transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência.

Um codão de terminação está localizado nas posições 148-150 . A posição do transposão no mutante 5F11 corresponde às posições entre 572-573 do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006150 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM1087 ou NifR3. A sequência de nucleótidos de PM1087 é aqui identificada como SEQ ID N°: 43 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 44. Outro gene/proteina de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N°: 44. Isto é HI0979 de Haemophilus influenzae (números de acesso U32778 e AAC22639 do Genbank). Foi encontrada uma identidade de 78% ao longo de 332 aminoácidos entre PM1087 e HI0979. O NifR3 é um gene regulador da nitrogenase. 43

Mutante 5G9 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N° : 45 (oligómero com 43) . 0 transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência. Esta sequência tem três grelhas de leitura aberta (+2, +3 e -1) que potencialmente codificam proteínas mais longas. A ORF aqui descrita está na grelha +2.

Quatro outros genes e proteínas de Pasteurellaceae foram identificados por blast realizados com a sequência de 14 aminoácidos codificada por SEQ ID N°: 45.

Estirpe Gene (ref. do Proteína (ref. % de identidade Genbank) do Genbank) P. multocida FcbE FcbE 100% ao longo de P4218 (AF 302 46 7) (AAK17920) 14 aminoácidos P. multocida PM0774 HyaE 100% ao longo de PM7 0 (AE 0 0 6116 ) (AAK02858) 14 aminoácidos P. multocida HyaE HyaE 100% ao longo de taxon 747 (AF 06 7175) (AAC67249) 14 aminoácidos P. multocida DcbE DcbE 71% ao longo de P934 (AF 3 0 2 4 6 5) (AAK17906) 14 aminoácidos A posição do transposão no mutante 5G9 corresponde às posições entre 573-574 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006116 do Genbank. 0 transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM0774 ou HyaE. 44 A sequência de nucleótidos de PM0774 é aqui identificada como SEQ ID N°: 46 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 47. Estes genes estão envolvidos na síntese da cápsula.

Mutante 6E5 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 48 (oligómero com 279). 0 transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência.

Um codão de iniciação está localizado nas posições 169-171. A posição do transposão no mutante 6E5 corresponde às posições entre 6673-6674 do genoma de Pasteurella multocida PM7 0, número de acesso AE006182 do Genbank. 0 transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM1459 ou pgtB. A sequência de nucleótidos de PM1459 é aqui identificada como SEQ ID N°: 49 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 50. PgtB é uma proteína reguladora do transporte de fosfoglicerato.

Mutante 6E6 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 51 (oligómero com 93). O transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência.

Um codão de terminação está localizado nas posições 12-14. 45

A posição do transposão no mutante 6E6 corresponde às posições entre 9051-9052 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006096 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM0605. A sequência de nucleótidos de PM0605 é aqui identificada como SEQ ID N°: 52 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 53.

Mutante 6F12 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 54 (oligómero com 772). O transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência.

Um codão de iniciação está localizado nas posições 2-4. A posição do transposão no mutante 6F12 corresponde às posições entre 5362-5363 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006192 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM1556 ou gene comF. A sequência de nucleótidos de PM1556 é aqui identificada como SEQ ID N°: 55 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 56. A ComF é a proteína de competência F.

Mutante 6G4 46 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 57 (oligómero com 700). O transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência. A posição do transposão no mutante 6G4 corresponde às posições entre 3758-3759 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006206 do Genbank. A inserção é entre os genes PM1696 e PM1697. 0 transposão é introduzido entre a região do promotor e o codão de iniciação de PM1696. 0 codão de iniciação de PM1696 está localizado nas posições 26-28 na SEQ ID N°: sequência 57. A sequência de nucleótidos de PM1696 é aqui identificada como SEQ ID N°: 58 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 59 .

Outros genes e proteínas de bactérias Gram-negativas foram identificados por blast realizados com SEQ ID N°: 59.

Estirpe Gene (ref. do Genbank) Proteína (ref. do Genbank) % de identidade Haemophilus HI0266 Hl 0 2 6 6 87% ao longo de influenzae (U32713) (AAC21932) 184 aminoácidos Salmonella STY3386 STY3386 71% ao longo de typhi (AL627278) (CAD07732) 185 aminoácidos Salmonella STM3207 ygiH 71% ao longo de typhimurium (AE 0 08 84 7) (AAL22081) 185 aminoácidos 47

Mutante 6H1 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 60 (oligómero com 188). O transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência. A posição do transposão no mutante 6H1 corresponde às posições entre 4139-4140 da sequência do genoma de Pasteurella

multocida PM70, número de acesso AE006119 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM0806 ou gene speF. A sequência de nucleótidos de PM0806 é aqui identificada como SEQ ID N°: 61 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 62.

Outros dois genes de Pasteurellaceae e Vibrionaceae foram identificados por blast realizados com a SEQ ID N°: 62. Estes genes são speF de Haemophilus influenzae (números de acesso U32740 e AAC22248 do Genbank) e ornitina descarboxilase de Vibrio cholerae (AE004431 e AAF96957). Foi encontrada uma identidade de 83% ao longo de 719 aminoácidos entre PM0806 e speF de H. influenzae. A SpeF é uma ornitina descarboxilase.

Mutante 6H6 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 63 (oligómero com 101). O transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência. Esta sequência tem duas grelhas de leitura aberta (+1 e -1) que potencialmente codificam proteínas mais longas. A ORF aqui 48 descrita está na grelha +1. A posição do transposão no mutante 6H6 corresponde às posições entre 983-984 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006155 do Genbank. 0 transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM1138. A sequência de nucleótidos de PM1138 é aqui identificada como SEQ ID N°: 64 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 65.

Mutante 7A7 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 66 (oligómero com 222). 0 transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência. A posição do transposão no mutante 7A7 corresponde às posições entre 7853-7854 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006170 do Genbank (na região intergénica entre PM1321 e PM1322). 0 transposão é introduzido entre a região terminadora e o codão de terminação de PM1322. 0 codão de terminação está localizado nas posições 25-27 na sequência SEQ ID N°: 66. A sequência de nucleótidos de PM1322 é aqui identificada como SEQ ID N°: 67 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 68.

Mutante 7F8 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 69 (oligómero com 55). 0 transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência. 49

Esta sequência tem três grelhas de leitura aberta ( + 1, +3 e -3) que potencialmente codificam proteínas mais longas. A ORF aqui descrita está na grelha +3. A posição do transposão no mutante 7F8 corresponde às posições entre 8292-8293 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006224 do Genbank. 0

transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM1866. A sequência de nucleótidos de PM1866 é aqui identificada como SEQ ID N°: 70 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 71.

Mutante 9C8

As sequências de ADN que flanqueiam ambos os lados do sitio de inserção do transposão são apresentadas na SEQ ID N°: 72 (oligómero com 598, transposão na extremidade 5') e SEQ ID N°: 73 (oligómero com 561, transposão na extremidade 5').

Um codão de terminação está localizado nas posições 26-28 da SEQ ID N°: 72. As sequências SEQ ID N°: 72 e 73 estão combinadas conjuntamente e limitadas à ORF. A sequência resultante é designada SEQ ID N°: 74 (oligómero com 575). A posição do transposão no mutante 9C8 corresponde às posições entre 2224-2225 ou 2210-2211 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006132 do Genbank, posições deduzidas a partir das SEQ ID N°: 72 e 73, respectivamente. Ambas as posições estão dentro do gene PM0926 (fimA). A sequência de nucleótidos de PM0926 é aqui identificada 50 como SEQ ID N°: 75 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 76.

Outro gene/proteína de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N° : 76. Isto é FimA de Haemophilus influenzae (números de acesso AF053125 e AAC08991 do Genbank). Foi encontrada uma identidade de 77% ao longo de 171 aminoácidos entre PM0926 e FimA de H. influenzae.

FimA é uma adesina, uma proteína fimbrial.

Mutante 10G11 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do

transposão é apresentada na SEQ ID N° : 77 (oligómero com 70). O transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência. Um codão de iniciação está localizado nas posições 62-64.

A posição do transposão no mutante 10G11 corresponde às posições entre 2938-2939 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006056 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM0220 (rpL31_l). A sequência de nucleótidos de PM0220 é aqui identificada como SEQ ID N°: 78 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 79 . A RpL31_l é uma proteína ribossomal 50S.

Mutante 11E8 51 A sequência de ADN que flanqueia o sitio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 80 (oligómero com 506). O transposão está imediatamente na extremidade 5' desta sequência.

Um codão de iniciação está localizado nas posições 195-197 da SEQ ID N°: 80.

A posição do transposão no mutante 11E8 corresponde às posições entre 282-283 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006085 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM0488. A sequência de nucleótidos de PM0488 é aqui identificada como SEQ ID N°: 81 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 82.

Mutante 12A1 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 83 (oligómero com 243). O transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência.

Um outro gene de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N°: 83 e com a sua sequência de aminoácidos codificada (81 aminoácidos). Foi encontrada uma identidade de 100% ao longo de 81 aminoácidos com a proteína PM0063. A posição do transposão no mutante 12A1 corresponde às posições entre 2880-2881 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006042 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, gene PM0063 ou lepA. A sequência de nucleótidos de PM0063 é aqui identificada como SEQ ID N°: 84 e a sua sequência de aminoácidos como 52 SEQ ID N°: 85. Gram-negativas SEQ ID N°: 85 .

Outros genes e proteínas foram identificados por blast de bactérias realizados com

Estirpe Gene (ref. do Proteína (ref. % de identidade Genbank) do Genbank) Haemophilus HI0016 LepA 95% ao longo de influenzae (U32687) (AAC21694) 598 aminoácidos Yersinia YP02716 LepA 88% ao longo de pestis (AJ 414153) (CAC92955) 597 aminoácidos Escherichia LepA LepA 89% ao longo de coli K12 (AE000343) (AAC75622) 597 aminoácidos Salmonella STY2829 LepA 89% ao longo de typhi (AL627275) (CAD02785) 597 aminoácidos Salmonella LepA LepA 89% ao longo de typhimurium (AE 0 0 8 817) (AAL21477) 597 aminoácidos Vibri o VC2463 LepA 84% ao longo de cholerae (AE 0 0 4 316 ) (AAF95605) 597 aminoácidos Pseudomonas PA0767 LepA 75% ao longo de aeruginosa (AE 0 0 4511) (AAG04156) 594 aminoácidos A LepA é uma proteína de membrana de ligação a GTP.

Mutante 12B3 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 86 (oligómero com 147). 0 transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência. 53 A posição do transposão no mutante 12B3 corresponde às posições entre 4028-4029 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006152 do Genbank. O transposão interrompe um gene homólogo de PM70, PM1112 ou gene deaD. A sequência de nucleótidos de PM1112 é aqui identificada como SEQ ID N°: 87 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 88 .

Outro gene/proteina de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N°: 88. Isto é HI0231 de Haemophilus influenzae (números de acesso U32709 e AAC21900 do Genbank). Foi encontrada uma identidade de 80% ao longo de 605 aminoácidos entre PM1112 e HI0231. A DeaD é uma helicase de ARN.

Mutante 13E1 A sequência de ADN que flanqueia o sítio de inserção do transposão é apresentada na SEQ ID N°: 89 (oligómero com 187). O transposão está imediatamente na extremidade 3' desta sequência. Esta sequência tem duas grelhas de leitura aberta (+1 e -3) que potencialmente codificam proteínas mais longas. A ORF aqui descrita está na grelha -3. A posição do transposão no mutante 13E1 corresponde às posições entre 2173-2174 da sequência do genoma de Pasteurella multocida PM70, número de acesso AE006138 do Genbank (PM0989). A sequência de nucleótidos de PM0989 é aqui identificada como 54 SEQ ID N°: 90 e a sua sequência de aminoácidos como SEQ ID N°: 91.

Outro gene/proteína de Pasteurellaceae foi identificado por blast realizados com SEQ ID N°: 91. Isto é HI0325 de Haemophilus influenzae (números de acesso U32717 e AAC21988 do Genbank). Foi encontrada uma identidade de 79% ao longo de 414 aminoácidos entre PM0989 e HI0325.

Exemplo 5: Construção de mutantes de delecção definidos

Em primeiro lugar, o gene alvo mais as sequências de ADN flanqueadoras são amplificados por PCR utilizando polimerase de elevada fidelidade e clonados num vector de clonagem adequado. São concebidos iniciadores de PCR que removem o gene quando utilizados em PCR inversa para gerar uma construção inicial. Os iniciadores de PCR podem conter um sítio XbaI para introduzir um novo sítio de restrição e assim proporcionar um marcador para a delecção do gene. A construção de delecção é depois transferida para um vector pCVD442 suicida ou equivalente (Donnenberg et al.r Infection and Immunity, 1991, 59: 4310-4317) para transferência ao cromossoma de Pasteurella. Esta construção é introduzida na estirpe desejada por electroporação ou conjugação e os recombinantes contendo o plasmídeo integrado no cromossoma no sítio homólogo (merodiplóides) são seleccionados utilizando o marcador de resistência ao antibiótico presente no plasmídeo. O plasmídeo pCVD442 requer a proteína Pir para a replicação. Esta proteína é codificada pelo gene pir que está presente como um lisogénio no fago lambda da estirpe dadora SMIOlambda pir, mas não no receptor P. multocida. Assim, o plasmídeo pCVD442 não replica na estirpe receptora P. multocida: as colónias 55 resistentes ao antibiótico são, deste modo, apenas obtidas se o plasmideo integrar no cromossoma. Este vector suicida também contém o gene sacB que codifica a enzima levano sacarase, a qual é tóxica para a maioria de bactérias Gram-negativas na presença de sacarose. A selecção de sacarose pode ser, deste modo, utilizada como uma contra-selecção para isolar colónias onde ocorreu um segundo evento de recombinação, resultando na perda do plasmideo do cromossoma. Este segundo evento de recombinação pode resultar em dois efeitos, regeneração do alelo de tipo selvagem ou criação de um mutante de delecção. As colónias contendo a mutação de delecção são identificadas por PCR de colónia.

Exemplo 6: Vacina e teste de eficácia

Os mutantes de delecção atenuados obtidos no exemplo 5 foram cultivados em meio de cultura CDM (Hu et al.r Infection and Immunity 1986, 804-810) sob condição de agitação durante 24 a 48 horas. A cultura foi recolhida quando o crescimento termina, o qual foi seguido por densidade óptica (OD) ou medição do pH. A concentração bacteriana foi determinada por densidade óptica e, quando necessário, a concentração foi ajustada a uma concentração final de 109 CFU por mL com meio de cultura fresco. A eficácia da vacina foi testada em perus com 3 semanas de idade por vacinação e estimulação. 56

Os perus foram verificados antes da vacinação para a ausência de anticorpos de Pasteurella através de ELISA de amostras de sangue.

Um primeiro grupo de perus foi vacinado através de injecção de 108 CFU em 0,1 mL por via ocular.

Um segundo grupo permaneceu não vacinado (grupo de controlo).

Todos os animais foram estimulados no D21 ou D23 com P. multocida estirpe P-1059 por via ocular (108 CFU em 0,1 mL por animal). A mortalidade foi observada todos os dias até ao D35.

Foi observado uma mortalidade inferior nos animais vacinados comparativamente aos controlos.

PARÁGRAFOS SUMÁRIOS A presente invenção é definida nas reivindicações e na descrição acompanhante.

Por conveniência, outros aspectos da presente descrição são aqui apresentados por meio de parágrafos numerados. 1- Mutante de uma bactéria Gram-negativa, em que a referida bactéria tem uma mutação numa sequência de nucleótidos que codifica originalmente um polipéptido que tem uma identidade que é igual ou superior a 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 57 98% ou 99% com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleótidos seleccionada do grupo consistindo de sequências de nucleótidos identificadas como SEQ ID N°: 2, 6, 9, 12, 16, Oh \—1 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67, 70, 75, 78, 81, 84, 87, 90, resultando a referida mutação em virulência atenuada da bactéria. 2- Mutante do parágrafo 1, em que a bactéria é uma Pasteurellaceae. 3- Mutante do parágrafo 2, em que a bactéria é escolhida entre o grupo de: Pasteurella multocida, Pasteurella haemolytica,

Pasteurella anatipestifer e Actinobacillus pleuropneumoniae. 4- Mutante do parágrafo 3, em que a bactéria é Pasteurella multocida. 5- Mutante de qualquer um dos parágrafos 1 a 4, em que a mutação é uma delecção na sequência de nucleótidos, ou uma inserção nela ou substituição de ácidos nucleicos. 6- Mutante do parágrafo 5, em que a mutação é a delecção de toda a sequência de nucleótidos. 7- Mutante do parágrafo 5, em que a inserção é realizada entre os nucleótidos 180-181 na SEQ ID N°: 2, 77-78 ou 1027-1028 na SEQ ID N°: 6, 416-417 na SEQ ID N°: 9, 389-390 na SEQ ID N°: 12, 381-382 na SEQ ID N°: 16, 219-220 na SEQ ID N°: 19, 1353-1354 na SEQ ID N°: 22, 136-137 na SEQ ID N° : 25, 384-385 na SEQ ID N° : 28, 222-223 na SEQ ID N° : 31, 217-218 na SEQ ID N° : 34, 1411-1412 na SEQ ID N° : 37, 943-944 na SEQ ID N°: 40, 855-856 na SEQ ID N°: 43, 369-370 na 58 SEQ ID N°: 46, 111-112 na SEQ ID N°: 49, 443-444 na SEQ ID N°: 52, 4-5 na SEQ ID N°: 55, imediatamente antes do nucleótido 1 na SEQ ID N°: 58, 573-574 na SEQ ID N°: 61, 875-876 na SEQ ID N°: 64, imediatamente antes do nucleótido 1 na SEQ ID N° : 67, 218-219 na SEQ ID N° : 70, 1072-1087 na SEQ ID N°: 75, 64-65 na SEQ ID N°: 78, 282-283 na SEQ ID N°: 81, 1431-1432 na SEQ ID N°: 84, 974-975 na SEQ ID N°: 87, 802-803 na SEQ ID N°: 90 . 8- Mutante de qualquer um dos paráqrafos 1 a 7, que compreende uma sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica para um imunogénio de um agente patogénico virai, parasítico ou bacteriano, para uma proteína terapêutica, para um alergénio, para um factor de crescimento ou para uma citocina. 9- Composição imunogénica compreendendo um mutante atenuado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 8 e um diluente, veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. 10- Composição imunogénica do parágrafo 9 compreendendo ainda um adjuvante. 11- Vacina compreendendo um mutante atenuado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 8 e um diluente, veiculo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. 12- Vacina do parágrafo 11 compreendendo ainda um adjuvante. 13- Composição imunogénica compreendendo um polipéptido que tem uma identidade que é igual ou superior a 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleótidos seleccionada do 59 grupo consistindo de sequências de nucleótidos identificadas como SEQ ID N°: 2, 6, 9, 12, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67, 70, 75, 78, 81, 84, 87, 90 e um diluente, veiculo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, e opcionalmente um adjuvante. 14- Preparação de anticorpo compreendendo um anticorpo especifico para um polipéptido que tem uma identidade que é igual ou superior a 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleótidos seleccionada do grupo consistindo de sequências de nucleótidos identificadas como SEQ ID N°: 2, 6, 9, C\1 \—1 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67, 70, 75, 00 00 1-1 00 00 r- 90 . 15- Método de diagnóstico para detectar a infecção por uma bactéria Gram-negativa, utilizando um polipéptido que tem uma identidade que é igual ou superior a 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleótidos seleccionada do grupo consistindo de sequências de nucleótidos identificadas como SEQ ID N°: 2, 6, 9, 12, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67, 70, 75, ^1 co 81, CO CO 90 ou um anticorpo especifico para o referido polipéptido. 16- Utilização de uma preparação de anticorpo de acordo com o parágrafo 14 para a produção de uma composição de imunização passiva ou uma composição terapêutica contra bactérias Gram-negativas. 17- Utilização de grupo consistindo uma sequência de nucleótidos seleccionada do de sequências de nucleótidos identificados 60 como SEQ ID N°: 2, 6, 9, 12, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 67, 70, 75, 78, 81, 84, 87, 90 ou um fragmento de, pelo menos, 20 nucleótidos, como iniciadores para PCR para detecção de bactérias Gram-negativas num meio.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

<110> MERIAL <120> Bactéria Gram-negativa atenuada <160> 91 <170> Patentln Versão 3.1

<210> 1 <211> 775 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <22 0> <221> característica_diversa <222> (579) . . (579)

<223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (580) .. (580)

<223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa 61 <222> (598) .. (598) <223> A ou C ou G ou Τ <22 0> <221> característica_diversa <222> (599) .. (599) <223> A ou C ou G ou Τ <22 0> <221> característica_diversa <222> (616) .. (616) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (617)..(617) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (636) .. (636) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (637)..(637) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (667)..(667) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa 62 <222> (668) .. (668) <223> A ou C ou G ou Τ <22 0> <221> característica_diversa <222> (697) .. (697) <223> A ou C ou G ou Τ <22 0> <221> característica_diversa <222> (698) .. (698) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> ( 702) .. (702) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (703)..(703) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (707)..(707) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> ( 706) .. (706) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa 63 <222> (714) .. (715) <223> A ou C ou G ou Τ <22 0> <221> característica_diversa <222> (715) .. (716) <223> A ou C ou G ou Τ <22 0> <221> característica_diversa <222> (717) .. (718) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (718) .. (719) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (721) .. (721) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (722) .. (722) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (742)..(744) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa 64 <222> (743)..(745) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (746) .. (749) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (747) .. (750) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (755) .. (756) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (756)..(757) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> ( 767) .. (768) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (766)..(767) <223> A ou C ou G ou T <40 0> 1 gtgctttata tccccattct aaaatacatg ttctctcctt tttccatgtg acaaatggag 60 65 agaacatttt caagcgttgg gtaaaaaagc cgcttaaata aggaattttt aacatccctt 120 tagaaaaaat aagaaactct tgatacatat ttaatctaat atagtcatat aaagttgaca 180 tatcatatat taaacatgac tagttaatca ttaaatatta aacaacctca acttaataaa 240 acaaataata aacaaacaag gtaaaaaaca aactaatact gagcaaataa aaaacggatt 300 aatataataa cgatatatca acctctaaaa cagaccaaaa ataaatcaca cgagacaaaa 360 gaacaattat aatccaaata ttaattaata aataaacacc tagcgcaacg aataatcaaa 420 caaaatcaca tttagattta tttaaattaa aaatatagat tatattttaa atataatgct 480 agaattcggc accaaaattt ttctccagct gtaaattaga gataaagata tgaaaaaggt 540 tattatcatg ggacataaac agtctaacta tcaagatgtn gaaaaggttt ttcaatgtna 600 tgggatgaat ccccgcntcc atcaaaacgt gaaaaangtc cccatcgaac ttttgctgag 660 tgaggatnag atagggcaaa tctgcaaatt catccacngc cgncgcngac tcatnnanng 720 cnaatcgcca tagtagttat acnnncnnnn gtttanngtt gaccgcnnag gcgag 775

<210> 2 <211> 2091 <212> ADN <213> Pasteurella multocída <400> 2 atgtcaattt tatatgacta tattagatta aatatgtatc aagagtttct tattttttct 60 aaagggatgt taaaaattcc ttatttaagc ggttttttta cccaacgctt gaaaatgttc 120 tctccatttg tcacatggaa aaaggagaga acatgtattt tagaatgggg atataaagca 180 tcatcaaaga aagcgaggca ttttgcacaa caacatgatt taccttatgc gacgatagaa 240 gatggttttt tacgttctat tggactgggt gtggatgggt atccaccttt ctcattagtg 300 tacgatgata ttggtattta ttatgatatc aatcagcctt ctcgtttaga aaacttaatt 360 ctttctcaag atgtattact tcaggaaaaa gtcgatcaag ttgaatatgc aattgaatta 420 atttgtacac ataacctttc caaatataac cacgctattg atacaccttt acagaatacg 480 aagaggccga ttgtcttagt cgttgatcaa acatatggcg atatggcagt tactttcggg 540 aatgccgagc agagtgattt tctacatatg ttagaacgtg cgattattga aaatccaaca 600 gcagaaatct ggttaaaaac ccatcctgat gtaatgtgtg gtaaaaaaca aggctattta 660 acggaatatc agcaatttcc aagagtaaaa gtattatcag aagattttaa ttctatctca 720 ctactaaagc atgttgataa agtttattgc gtgacatctc acactgggtt tgaggccctt 780 ttgttaggaa aaactgtcgt gacttttggg gctgcctggt tttctggttg gggattgacg 840 gatgatcggc atgcgtatat tcgtcagcta aaacagagta agagaagagc gaagcgttca 900 66 ttgttgcagt tattctatgc tgcttatttc caatattgtc gttatattaa tcctaatacg 960 ggtaaatcag gcacattgtt tgatgtcatt gattatctga ttcaagcaaa aaaagtaacc 1020 aatcagttag ctggtgatat ttattgtgtg ggtatgcgct tttggaaacg taaagtggtt 1080 caaccctttt ttcaatttcc acgctgtcgt ttacattttg tgctgaatgt gcatgagcta 1140 aagcgatgta ttcacgagaa atctcaggct aaaatagtgg tgtggggaca ttcacacatt 1200 gaagtggttg aatatgccaa gcaacagcaa cttcctcttt tgagaatgga agatggtttt 1260 ttacgttcag ttgggttagg gtctaattta acgccaccga tatcattagt tttagatgac 1320 gttggcattt attttgacgc ccaatctcgt tcccgattag aggatattct acagcatcaa 1380 tcctttactc taaaggattt acagcgcgca gaaacgttaa agaaaacact gattgagcaa 1440 catattggta agtataatgt gggacataca cacttatgcc taacacacat cagacaaaat 1500 aaacttttag ttgtgggaca agtggaaaat gatgcttcaa ttcaatatgg ttcaccgcat 1560 attcgtacga atgcagagtt attatgtacg gtcagaaaaa ataatcccca agcctatatt 1620 atttataaac ctcatcctga tgtggttgca ggcaatcgta aaaacacaga tcgtctagat 1680 gattatcgac agtatgctga tttcgtggtt gagaaagcca atatattgga ttgcattaac 1740 caagtggatg aagtgcatac gatgacctct ttagcggggt ttgaagcgtt actgcgcgag 1800 aaaaaagtac attgttatgg cttgcctttt tattctaact gggggctaac agtggatcat 1860 ctttctctaa accgaagaag tcggaagtta agtcttttag aattaattgc tggcgtgctg 1920 atttattacc cacaatatat tgacccaaaa acaaaaacaa tgatcgatgt gcagcgagcg 1980 gttgatattc tgatcgagca acgtcgaaaa ataaaaaata ataaattaca tacaaattat 2040 tttatgaaca tttttatgaa 0.1_· 1_· 3.33333 6 gtttattctg ttttgaggta g 2091

<210> 3 <211> 696 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 3

Met Ser <D 1—1 H Leu Tyr Asp Tyr Ile Arg Leu Asn Met Tyr Gin Glu Phe 1 5 10 15 Leu Ile Phe Ser Lys Gly Met Leu Lys Ile Pro Tyr Leu Ser Gly Phe 20 25 30 Phe Thr Gin Arg Leu Lys Met Phe Ser Pro Phe Vai Thr Trp Lys Lys 35 40 45 Glu Arg Thr Cys Ile Leu Glu Trp Gly Tyr Lys Ala Ser Ser Lys Lys 67 50 55 60

Ala Arg His Phe Ala Gin Gin His Asp Leu Pro Tyr Ala Thr Ile Glu 65 70 75 80 Asp Gly Phe Leu Arg Ser Ile Gly Leu Gly Vai Asp Gly Tyr Pro Pro 85 90 95 Phe Ser Leu Vai Tyr Asp Asp Ile Gly Ile Tyr Tyr Asp Ile Asn Gin 100 105 110 Pro Ser Arg Leu Glu Asn Leu Ile Leu Ser Gin Asp Vai Leu Leu Gin 115 120 125 Glu Lys Vai Asp Gin Vai Glu Tyr Ala Ile Glu Leu Ile Cys Thr His 130 135 140 Asn Leu Ser Lys Tyr Asn His Ala Ile Asp Thr Pro Leu Gin Asn Thr 145 150 155 160 Lys Arg Pro Ile Vai Leu Vai Vai Asp Gin Thr Tyr Gly Asp Met Ala 165 170 175 Vai Thr Phe Gly Asn Ala Glu Gin Ser Asp Phe Leu His Met Leu Glu 180 185 190 Arg Ala Ile Ile Glu Asn Pro Thr Ala Glu Ile Trp Leu Lys Thr His 195 200 205 Pro Asp Vai Met Cys Gly Lys Lys Gin Gly Tyr Leu Thr Glu Tyr Gin 210 215 220 Gin Phe Pro Arg Vai Lys Vai Leu Ser Glu Asp Phe Asn Ser Ile Ser 225 230 235 240 Leu Leu Lys His Vai Asp Lys Vai Tyr Cys Vai Thr Ser His Thr Gly 245 250 255 Phe Glu Ala Leu Leu Leu Gly Lys Thr Vai Vai Thr Phe Gly Ala Ala 260 265 270 Trp Phe Ser Gly Trp Gly Leu Thr Asp Asp Arg His Ala Tyr Ile Arg 275 280 285 Gin Leu Lys Gin Ser Lys Arg Arg Ala Lys Arg Ser Leu Leu Gin Leu 290 295 300 Phe Tyr Ala Ala Tyr Phe Gin Tyr Cys Arg Tyr Ile Asn Pro Asn Thr 305 310 315 320 68

Gly Lys Ser Gly Thr Leu Phe Asp Vai Ile Asp Tyr Leu Ile Gin Ala 325 330 335

Lys Lys Vai Thr Asn Gin Leu Ala Gly Asp Ile Tyr Cys Vai Gly Met 340 345 350 Arg Phe Trp Lys Arg Lys Vai Vai Gin Pro Phe Phe Gin Phe Pro Arg 355 360 365 Cys Arg Leu His Phe Vai Leu Asn Vai His Glu Leu Lys Arg Cys Ile 370 375 380 His Glu Lys Ser Gin Ala Lys Ile Vai Vai Trp Gly His Ser His Ile 385 390 395 400 Glu Vai Vai Glu Tyr Ala Lys Gin Gin Gin Leu Pro Leu Leu Arg Met 405 410 415 Glu Asp Gly Phe Leu Arg Ser Vai Gly Leu Gly Ser Asn Leu Thr Pro 420 425 430 Pro Ile Ser Leu Vai Leu Asp Asp Vai Gly Ile Tyr Phe Asp Ala Gin 435 440 445 Ser Arg Ser Arg Leu Glu Asp Ile Leu Gin His Gin Ser Phe Thr Leu 450 455 460 Lys Asp Leu Gin Arg Ala Glu Thr Leu Lys Lys Thr Leu Ile Glu Gin 465 470 475 480 His Ile Gly Lys Tyr Asn Vai Gly His Thr His Leu Cys Leu Thr His 485 490 495 Ile Arg Gin Asn Lys Leu Leu Vai Vai Gly Gin Vai Glu Asn Asp Ala 500 505 510 Ser Ile Gin Tyr Gly Ser Pro His Ile Arg Thr Asn Ala Glu Leu Leu 515 520 525 Cys Thr Vai Arg Lys Asn Asn Pro Gin Ala Tyr Ile Ile Tyr Lys Pro 530 535 540 His Pro Asp Vai Vai Ala Gly Asn Arg Lys Asn Thr Asp Arg Leu Asp 545 550 555 560 Asp Tyr Arg Gin Tyr Ala Asp Phe Vai Vai Glu Lys Ala Asn Ile Leu 565 570 575 Asp Cys Ile Asn Gin Vai Asp Glu Vai His Thr Met Thr Ser Leu Ala 580 585 590 Gly Phe Glu Ala Leu Leu Arg Glu Lys Lys Vai His Cys Tyr Gly Leu 69 595 600 605

Pro Phe Tyr Ser Asn Trp Gly Leu Thr Vai Asp His Leu Ser Leu Asn 610 615 620 Arg Arg Ser Arg Lys Leu Ser Leu Leu Glu Leu Ile Ala Gly Vai Leu 625 630 635 640 Ile Tyr Tyr Pro Gin Tyr Ile Asp Pro Lys Thr Lys Thr Met Ile Asp 645 650 655 Vai Gin Arg Ala Vai Asp Ile Leu Ile Glu Gin Arg Arg Lys Ile Lys 660 665 670 Asn Asn Lys Leu His Thr Asn Tyr Phe Met Asn Ile Phe Met Lys Leu 675 680 685 Lys Asn Vai Tyr Ser Vai Leu Arg 690 695

<210> 4 <211> 226 <212> ADN <213> Pasteurella multoclda <400> 4 agcaaaagtt cgattactac cagagacagt aagaagtgcg gttaaaatac ctaacaagaa 60 gagaaataac acaatattaa tgttatttga attaagtgcg ttatcactgt atgccaatga 120 aataatatta tttttgagat acattagcgt atgcgaaata ttaaaatctg caagcattaa 180 agcacctaca ataataccaa cactcaatga taaaataaca cggcgc 226

<210> 5 <211> 87 <212> ADN <213> Pasteurella multoclda <400> 5 cgacactatg cattcttatt gatcgtcaag tgagtttggc ggaatacggt aaatcctgga 60 70 87 ttttaggcgt gaagtcaatg ctcggtg

<210> 6 <211> 1524 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 6 atggaactta ttgattattc gacgtctatt tggtctgtcg taccccctat tttagcatta 60 ttattagcca ttgggacacg ccgtgttatt ttatcattga gtgttggtat tattgtaggc 120 gctttaatgc ttgcagattt taatatttcg catacgctaa tgtatctcaa aaataatatt 180 atttcattgg catacagtga taacacactt aattcaaata acattaatat tgtgttattt 240 ctcttcttgt taggtatttt aaccgcactt cttactgtct caggcagtaa tcgagccttt 300 gcagaatggg cacaaaaacg aattaaagat agaaaagggg ctaaattatt agccgcatcg 360 ctcgtgtttg tgactttcat tgacgattat tttcatagct tagcggtggg agcgattgcc 420 agcccagtta cagataaatt taaagtttca cgcccaaaac ttgcctatat tcttgattca 480 accgctgcgc caatgtgtgt gttgatgcct gtatcaagtt ggggcgccta tattattaca 540 cttattgcag gacttcttgc gacttattcg atcaccgagt attcccctat cggtgcattt 600 atgacaatga gtgcaatgaa cttttatgct attttttcta ttttaatggt gttctttgta 660 tcttattatt cgtttgatat tggttcaatg gcgcgtcacg aaagaatggc cctagcgcgt 720 gtaacagaag aagaaaaact ggaaagtagt aataaagggc atgttctcta tttaatttta 780 ccgattactg tcctgatttt agcaaccgtt ggtatgatga tgtacacggg ctatgaagca 840 ttagcggcgg atggaaaacc ttttgatgtg ttaggcgcgt ttgagaatac tacagtaggg 900 atttcattgg ttgtgggggg attaagtgcg gtcttgattt cgacactatg cattcttatt 960 gatcgtcaag tgagtttggc tgaatacggt aaatcctgga ttttaggcgt gaagtcaatg 1020 ctcggtgcgg tattgatttt attgtttgct tggactatta ataccatcgt tggagatgtc 1080 aaaacaggga tttatttatc ttcattagta tcggatagtt taccgattgc tttgttgcct 1140 gcgttattat ttattttaac tggaatcatg gcattctcga caggaacaag ctggggaact 1200 tttgggatta tgttaccgat cgcggcagcg attgcagcga atactgcacc agaattgatg 1260 ttaccttgtt tatccgcagt catggctggt gcagtttgtg gtgatcattg ctcaccgatt 1320 tcggatacca cgattttatc ttctaccggg gcaaaatgta atcatatcga ccatgtaaca 1380 acacagttac cttatgcgat gttaattgcg acagcgtcta ttgctggcta tttagtacta 1440 gggttcagcc agtcaggcat actgggtttt gtgacaacgg gtgtggtttt atcagtactt 1500 gtttttatat ttagaaaaaa ataa 1524 71

<210> 7 <211> 507 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 7

Met Glu 1

Ile Leu

Leu Ser

Ile Ser 50

Tyr Ser 65

Leu Phe Asn Arg

Gly Ala

Asp Tyr 130 Asp Lys 145

Thr Ala Tyr Ile

Glu Tyr

Tyr Ala 210 Phe Asp 225

Leu Ile

Ala Leu 20

Vai Gly 35

His Thr Asp Asn Leu Leu

Ala Phe 100 Lys Leu 115

Phe His

Phe Lys

Ala Pro

Ile Thr 180 Ser Pro 195

Ile Phe Ile Gly

Asp Tyr 5

Leu Leu

Ile Ile

Leu Met

Thr Leu 70

Gly Ile 85

Ala Glu

Leu Ala

Ser Leu

Vai Ser 150 Met Cys 165

Leu Ile

Ile Gly

Ser Ile

Ser Met 230

Ser Thr

Ala Ile

Vai Gly 40

Tyr Leu 55

Asn Ser

Leu Thr

Trp Ala

Ala Ser 120 Ala Vai 135

Arg Pro

Vai Leu

Ala Gly

Ala Phe 200 Leu Met 215

Ala Arg

Ser Ile 10

Gly Thr 25

Ala Leu

Lys Asn

Asn Asn

Ala Leu 90

Gin Lys 105

Leu Vai

Gly Ala

Lys Leu

Met Pro 170 Leu Leu 185

Met Thr Vai Phe His Glu

Trp Ser

Arg Arg

Met Leu

Asn Ile 60

Ile Asn 75

Leu Thr

Arg Ile

Phe Vai

Ile Ala 140 Ala Tyr 155

Vai Ser

Ala Thr

Met Ser

Phe Vai 220 Arg Met 235

Vai Vai

Vai Ile 30

Ala Asp 45

Ile Ser

Ile Vai

Vai Ser

Lys Asp 110 Thr Phe 125

Ser Pro

Ile Leu

Ser Trp

Tyr Ser 190

Ala Met 205

Ser Tyr Ala Leu

Pro Pro 15

Leu Ser

Phe Asn

Leu Ala

Leu Phe 80

Gly Ser 95

Arg Lys

Ile Asp

Vai Thr

Asp Ser 160 Gly Ala 175

Ile Thr

Asn Phe

Tyr Ser

Ala Arg 240 72

Vai Thr Glu Glu Glu Lys Leu Glu Ser Ser Asn Lys Gly His Vai Leu 245 250 255 Tyr Leu Ile Leu Pro Ile Thr Vai Leu Ile Leu Ala Thr Vai Gly Met 260 265 270 Met Met Tyr Thr Gly Tyr Glu Ala Leu Ala Ala Asp Gly Lys Pro Phe 275 280 285 Asp Vai Leu Gly Ala Phe Glu Asn Thr Thr Vai Gly Ile Ser Leu Vai 290 295 300 Vai Gly Gly Leu Ser Ala Vai Leu Ile Ser Thr Leu Cys Ile Leu Ile 305 310 315 320 Asp Arg Gin Vai Ser Leu Ala Glu Tyr Gly Lys Ser Trp Ile Leu Gly 325 330 335 Vai Lys Ser Met Leu Gly Ala Vai Leu Ile Leu Leu Phe Ala Trp Thr 340 345 350 Ile Asn Thr Ile Vai Gly Asp Vai Lys Thr Gly Ile Tyr Leu Ser Ser 355 360 365 Leu Vai Ser Asp Ser Leu Pro Ile Ala Leu Leu Pro Ala Leu Leu Phe 370 375 380 Ile Leu Thr Gly Ile Met Ala Phe Ser Thr Gly Thr Ser Trp Gly Thr 385 390 395 400 Phe Gly Ile Met Leu Pro Ile Ala Ala Ala Ile Ala Ala Asn Thr Ala 405 410 415 Pro Glu Leu Met Leu Pro Cys Leu Ser Ala Vai Met Ala Gly Ala Vai 420 425 430 Cys Gly Asp His Cys Ser Pro Ile Ser Asp Thr Thr Ile Leu Ser Ser 435 440 445 Thr Gly Ala Lys Cys Asn His Ile Asp His Vai Thr Thr Gin Leu Pro 450 455 460 Tyr Ala Met Leu Ile Ala Thr Ala Ser Ile Ala Gly Tyr Leu Vai Leu 465 470 475 480 Gly Phe Ser Gin Ser Gly Ile Leu Gly Phe Vai Thr Thr Gly Vai Vai 485 490 495 Leu Ser Vai Leu Vai Phe Ile Phe Arg Lys Lys 500 505 73

<210> 8 <211> 78 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 8 gggaaaagca gcaaatatca aaaatactgt tttagtgaaa acaggaaaac cgattacagc 60 agaaggcgta cacccacc 78

<210> 9 <211> 555 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 9 atgaaaaaag caattttttt agatcgagat ggcacattaa atattgatca tggctatgtt 60 catgaaattg atcagtttca atttattgac ggtagcattg aagcgttaca acaactgaaa 120 gcgatgggct atttattggt acttgtaaca aatcagtcag gtattgcgcg tggatatttt 180 agcgaagatc aatttttaca gctgacagaa tggatggatt ggtctcttgc agatcgtgga 240 gtggatttag atggcatcta ttattgccca caccacacag aaggaaaagg tgagtattgc 300 caagactgcg attgccgtaa gccaaaacct ggtatgttac tgcaggcaat taaggaactt 360 aatatagatc ccaatacctc ttttatggtg ggtgataaag tggaagatat gttagcaggt 420 aaaggtgcca aaattaaaaa tactgtttta gtgaaaacag gcaagcctat tacggaggat 480 ggcaaaaaac aggcaaacta tgtattagag tccattgcgg atctaccaaa actgataaaa 540 ggattaaaaa gttaa 555 <210> 10 <211> 184 74 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <40 0> 10 Met Lys Lys Ala Ile Phe Leu Asp Arg Asp Gly Thr Leu Asn Ile Asp 1 5 10 15 His Gly Tyr Vai His Glu Ile Asp Gin Phe Gin Phe Ile Asp Gly Ser 20 25 30 Ile Glu Ala Leu Gin Gin Leu Lys Ala Met Gly Tyr Leu Leu Vai Leu 35 40 45 Vai Thr Asn Gin Ser Gly Ile Ala Arg Gly Tyr Phe Ser Glu Asp Gin 50 55 60 Phe Leu Gin Leu Thr Glu Trp Met Asp Trp Ser Leu Ala Asp Arg Gly 65 70 75 80 Vai Asp Leu Asp Gly Ile Tyr Tyr Cys Pro His His Thr Glu Gly Lys 85 90 95 1>1 1-1 o Glu Tyr Cys Gin Asp Cys Asp Cys Arg Lys Pro Lys Pro Gly Met 100 105 110 Leu Leu Gin Ala Ile Lys Glu Leu Asn Ile Asp Pro Asn Thr Ser Phe 115 120 125 Met Vai Gly Asp Lys Vai Glu Asp Met Leu Ala Gly Lys Gly Ala Lys 130 135 140 Ile Lys Asn Thr Vai Leu Vai Lys Thr Gly Lys Pro Ile Thr Glu Asp 145 150 155 160 Gly Lys Lys Gin Ala Asn Tyr Vai Leu Glu Ser Ile Ala Asp Leu Pro 165 170 175 Lys Leu Ile Lys Gly Leu Lys Ser 180

<210> 11 <211> 467 <212> ADN 75 <213> Pasteurella multocida <400> 11 gagctctgca tttagtttaa gtggtgattt cttatttgac ttcaataaag attcattaac 60 agcaaaaggt aaagaagttg ttgacagcgt tgcaacacaa ttaaaagcct ctgatgcaaa 120 agaagtgaaa gtcgcaggct ttactgaccg tttaggttca gaagcgtata acttaaaact 180 ttctcaacgt cgtgcagatc gtgttaaagc gcgtttaatt gagcaaggtg ttgccgcaaa 240 tattcatgct gtaggctatg gtaaagcaca acaagtgaaa gcttgtgatg atgtacaagg 300 tgcagcatta agagactgtt tacgtcctaa ccgtcgtgtt gaaattaccg cttctggtac 360 tgtgttaaaa caaggttcac aaggtatgga agcagggaca acaggaccag caccacttta 420 tagaaaataa tttttctcaa tgaaatagaa gggcgcttta atagcgc 467

<210> 12 <211> 819 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <40 0> 12 atgaaattat ctcgcgtttt attaacagtt gttgctgcga cgacattggc tgcctgcggt 60 aatttaagta aagttactcc agaaggtaca tctgacaatt tagtgtggcc aaaaattgat 120 gaatcagtct ttaatcatga tggtagccaa tttggttctt ggccaaactg ggataacgta 180 cgcatggttg agcgtggtat gaataaagac caactttata atttgttagg tcgtccacac 240 ttctctgaag gcttatacgg tgtgcgtgaa tgggactatg tgtttaacta tcgtgagaat 300 ggtgtacata aagtatgtca atataaagtc ttatttgaca aaaatatgaa tgcacaaagt 360 ttcttctggt atccaaatgg ctgtaacggt agctctgcat ttagtttaag tggtgatttc 420 ttatttgact tcaataaaga ttcattaaca gcaaaaggta aagaagttgt tgacagcgtt 480 gcaacacaat taaaagcctc tgatgcaaaa gaagtgaaag tcgcaggctt tactgaccgt 540 ttaggttcag aagcgtataa cttaaaactt tctcaacgtc gtgcagatcg tgttaaagcg 600 cgtttaattg agcaaggtgt tgccgcaaat atccatgctg taggctatgg taaagcacaa 660 caagtgaaag cttgtgatga tgtacaaggt gcagcattaa gagattgttt acgtcctaac 720 cgtcgtgttg aaattaccgc ttctggtact gtgttaaaac aaggttcaca aggtatggaa 780 gcagggacaa caggaccagc accactttat agaaaataa 819 76 <210> 13

<211> 272 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <40 0> 13

Met Lys Leu Ser Arg Vai Leu Leu Thr Vai Vai Ala Ala Thr Thr Leu 1 5 10 15 Ala Ala Cys Gly Asn Leu Ser Lys Vai Thr Pro Glu Gly Thr Ser Asp 20 25 30 Asn Leu Vai Trp Pro Lys Ile Asp Glu Ser Vai Phe Asn His Asp Gly 35 40 45 Ser Gin Phe Gly Ser Trp Pro Asn Trp Asp Asn Vai Arg Met Vai Glu 50 55 60 Arg Gly Met Asn Lys Asp Gin Leu Tyr Asn Leu Leu Gly Arg Pro His 65 70 75 80 Phe Ser Glu Gly Leu Tyr Gly Vai Arg Glu Trp Asp Tyr Vai Phe Asn 85 90 95 Tyr Arg Glu Asn Gly Vai His Lys Vai Cys Gin Tyr Lys Vai Leu Phe 100 105 110 Asp Lys Asn Met Asn Ala Gin Ser Phe Phe Trp Tyr Pro Asn Gly Cys 115 120 125 Asn Gly Ser Ser Ala Phe Ser Leu Ser Gly Asp Phe Leu Phe Asp Phe 130 135 140 Asn Lys Asp Ser Leu Thr Ala Lys Gly Lys Glu Vai Vai Asp Ser Vai 145 150 155 160 Ala Thr Gin Leu Lys Ala Ser Asp Ala Lys Glu Vai Lys Vai Ala Gly 165 170 175 Phe Thr Asp Arg Leu Gly Ser Glu Ala Tyr Asn Leu Lys Leu Ser Gin 180 185 190 Arg Arg Ala Asp Arg Vai Lys Ala Arg Leu Ile Glu Gin Gly Vai Ala 195 200 205 Ala Asn Ile His Ala Vai Gly Tyr Gly Lys Ala Gin Gin Vai Lys Ala 210 215 220 Cys Asp Asp Vai Gin Gly Ala Ala Leu Arg Asp Cys Leu Arg Pro Asn 225 230 235 240 77

Arg Arg Vai Glu Ile Thr Ala Ser Gly Thr Vai Leu Lys Gin Gly Ser 245 250 255

Gin Gly Met Glu Ala Gly Thr Thr Gly Pro Ala Pro Leu Tyr Arg Lys 260 265 270

<210> 14 <211> 204 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <40 0> 14 tgccaattat agactttgtg tgaatgtacg agtaatcaca tcacgttgtt gttcaggtgt 60 taatgagttg aaacgtacag cgtaacctga aacacggatt gttaattgtg ggtatttttc 120 tgggttattg accgcatctt ctaaggtttc gcggcgtaat acgttaacgt ttaagtgttg 180 accaccttct actttgactg ttgg 204

<210> 15 <211> 35 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <40 0> 15 35 aggtgttttt ttaagaggta aatggatgcc aatta

<210> 16 <211> 384 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <40 0> 16 atgattaaag gtattcaaat tacccaagcg gctaatgaca atttattaaa ctcattttgg 60 ttattagata gcgaaaaagg tgaagcgcgt tgtttatgtg ctaaaggtga cttcgttgaa 120 gatcaaatcg ttgcagtaag tgaattaggt caaatcgaat atcgcgaatt accagttgat 180 78 atcgccccaa cagtcaaagt agaaggtggt caacacttaa acgttaacgt attacgccgc 240 gaaaccttag aagatgcggt caataaccca gaaaaatacc cacaattaac aatccgtgtt 300 tcaggttacg ctgtacgttt caactcatta acacctgaac aacaacgtga tgtgattact 360 cgtacattca cacaaagtct ataa 384

<210> 17 <211> 127 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <40 0> 17

Met ω 1—1 H Lys Gly Ile Gin Ile Thr Gin Ala Ala Asn Asp Asn Leu Leu 1 5 10 15 Asn Ser Phe Trp Leu Leu Asp Ser Glu Lys Gly Glu Ala Arg Cys Leu 20 25 30 Cys Ala Lys Gly Asp Phe Vai Glu Asp Gin Ile Vai Ala Vai Ser Glu 35 40 45 Leu Gly Gin Ile Glu Tyr Arg Glu Leu Pro Vai Asp Ile Ala Pro Thr 50 55 60 Vai Lys Vai Glu Gly Gly Gin His Leu Asn Vai Asn Vai Leu Arg Arg 65 70 75 80 Glu Thr Leu Glu Asp Ala Vai Asn Asn Pro Glu Lys Tyr Pro Gin Leu 85 90 95 Thr Ile Arg Vai Ser Gly Tyr Ala Vai Arg Phe Asn Ser Leu Thr Pro 100 105 110 Glu Gin Gin Arg Asp Vai Ile Thr Arg Thr Phe Thr Gin Ser Leu 115 120 125

<210> 18 <211> 75 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 18 acattcttga tgcaataagt cataacgttt tttgagaaac tggagcttat taaagaaaaa 60 79 75 gcgtacatgc cctgt

<210> 19 <211> 390 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <40 0> 19 atgacacgga ttaatctcat cgcccccgct gaactttgtg atcaacatct gttagcagaa 60 cacagagaac tgacacgtat tcccaatgct gtggcaaaag ggaaatttag cctcctcggt 120 cagccagaag attataaatt aggtacaggg catgtacgct ttttctttaa taagctccag 180 tttctcaaaa aacgttatga cttattgcat caagaatgtc gagctcgagg ttttaatgtg 240 caatatattt ggcccgacaa gttgccggag gacgataacc tctggttaga ctacatccct 300 actgagcatg ccttagccgc caatagagcg cgtattttag aaagaatgcc tgtcaaagcc 360 cgctttacac caagtaaagc tacaacttaa 390

<210> 20 <211> 129 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 20

Met Thr Arg Ile Asn Leu Ile Ala Pro Ala Glu Leu Cys Asp Gin His 1 5 10 15 Leu Leu Ala Glu His Arg Glu Leu Thr Arg Ile Pro Asn Ala Vai Ala 20 25 30 Lys Gly Lys Phe Ser Leu Leu Gly Gin Pro Glu Asp Tyr Lys Leu Gly 35 40 45 Thr Gly His Vai Arg Phe Phe Phe Asn Lys Leu Gin Phe Leu Lys Lys 50 55 60 Arg Tyr Asp Leu Leu His Gin Glu Cys Arg Ala Arg Gly Phe Asn Vai 65 70 75 80 80

Gin Tyr Ile Trp Pro Asp Lys Leu Pro Glu Asp Asp Asn Leu Trp Leu 85 90 95 Asp Tyr Ile Pro Thr Glu His Ala Leu Ala Ala Asn Arg Ala Arg Ile 100 105 110 Leu Glu Arg Met Pro Vai Lys Ala Arg Phe Thr Pro Ser Lys Ala Thr

Thr 115 120 125

<210> 21 <211> 229 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 21 cgatttcaat ccctttttgg cggagttgtt catcatcata aatatgttta tcgccgtaga 60 gggcattgat tgtttcatgg ataccaatat agcctaatga aatagaggca cgcccatttt 120 taaagatttg tgccacattg tcatcagcct ttaagcgtac accacaggca ccctccatat 180 aaagaattgg ggcaacgcga gctttggtat gttctaaacg tgcaatgcg 229

<210> 22 <211> 2142 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 22 atggcaactt tctttgtaat taaacgagat gggtcacgaa cggggtttga aatccaacgt 60 atcattaatg caattaaaaa agcggcacaa gcggtgaata ttgaagatga acgttattgt 120 catacaatgg gacagcaggt atgtaatgac atctttactc gttaccaaca agaaattgat 180 atcagccaca ttcaaaaaat cgtagaaaat accttaatgg cgggaaaata ccctgaaata 240 gcgcgagctt atatcgaata ccgccatgat cgggatctcg cgcgagaaaa acgcagtcaa 300 ctcacaaaag aaatcgaagg attaattcag caaagtaatg ttgaactcct caatgaaaat 360 gccaataaag atgcgaaagt tatcccaact caacgcgatc tcttagcggg tattgtggca 420 aaacattacg ctaaacgtta tattctgcca cgcgatgtcg tagacgcaca tgaaaaaggg 480 gaaattcatt atcacgattt agactatgcc ccatttttcc caatgtttaa ctgcatgctt 540 81 gtcgatctca aagggatgct aagcaatggt ttcaaaatgg gtaatgccga aattgaacca 600 ccgaaatcga tcacaacagc aaccgcagtc agtgcacaaa ttatcgcaca agtcgcgagc 660 catatttacg gtggtaccac gattaaccgt atagatgaaa tccttgcccc ttatgtgcaa 720 ttaagttatg aaaaacattt aaaaaatgca gcggaatgga aagttcccga accagaagcc 780 tacgcgaaag cactcattga aaaagaatgt ttcgacgctt ttcaatcctt agaatatgaa 840 gtcaatacgc tgcatacttc aaatgggcaa accccttttg tcacttttgg ctttggctta 900 ggaacgacgt ggcaatcgag acttatccag cgctcaattc tgaaaaatcg tattcgtggt 960 ttaggcaaaa atcacaaaac ccctgtcttc ccaaaactgg tgttcactat taaaaaaggc 1020 attaaccata gcccgagtga tcctaactac gacattaaac aactggcttt agaatgtgcc 1080 tccaaacgga tgtatcctga tattctcaat tatgatcagg tggtgaaagt cacgggttct 1140 tttaaagcac caatgggatg ccgtagtttc ttaggtgctt atcaggagca aggacaggaa 1200 atccatgatg gacgtaataa cttaggcgta gtgagtttga atttaccgcg tatagcaatt 1260 gaagccaacg ccacgaattc agcccaaagt gcggtcgagt tttataaaat tttagatcaa 1320 cgtcttgcga ttgccaaaaa agccttaatg acacgcattg cacgtttaga acataccaaa 1380 gctcgcgttg ccccaattct ttatatggag ggtgcctgtg gtgtacgctt aaaggctgat 1440 gacaatgtgg cacaaatctt taaaaatggg cgtgcctcta tttcgttagg ctatattggt 1500 atccatgaaa caatcaatgc cctctacggc gataaacata tttatgatga tgaacaactc 1560 cgccaaaaag ggattgaaat cgtcgaatat ttacacgaga ccgtgcaacg ttggaaacaa 1620 gaaacaggtt atgctttcag cctatattcc acaccaagtg aaaacctttg tgaccgtttc 1680 tgtcgcttgg atactaagca atttgggctt atcgaaggtg tcacagataa aggctactat 1740 actaatagct accacttaga cgtagagaaa aaagtcaatc cttatgacaa gatagatttt 1800 gaattgcctt atccaccgtt cgcaagcggc gggtttattt gctatggtga atacccaaat 1860 gttcagcata accttaaagc attagaggac gtttgggatt atagctatga cagagtgcct 1920 tactatggga ccaatacacc gattgatgaa tgctatgaat gtggtttcag tggtgaattt 1980 gaatgtacca gtaaagggtt tacttgtccg aaatgtggta accatgacag tgagaaagtc 2040 tccgtgaccc gacgtgtctg tggctatctt ggcagtccag atgccagacc atttaatgcc 2100 ggtaaacaag aagaagtcaa gcgcagagta aaacatctct aa 2142

<210> 23 <211> 713 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 23 82

Met Ala Thr Phe Phe Vai Ile Lys Arg Asp Gly Ser Arg Thr Gly Phe 1 5 10 15 Glu Ile Gin Arg Ile Ile Asn Ala Ile Lys Lys Ala Ala Gin Ala Vai 20 25 30 Asn Ile Glu Asp Glu Arg Tyr Cys His Thr Met Gly Gin Gin Vai Cys 35 40 45 Asn Asp Ile Phe Thr Arg Tyr Gin Gin Glu Ile Asp Ile Ser His Ile 50 55 60 Gin Lys Ile Vai Glu Asn Thr Leu Met Ala Gly Lys Tyr Pro Glu Ile 65 70 75 80 Ala Arg Ala Tyr Ile Glu Tyr Arg His Asp Arg Asp Leu Ala Arg Glu 85 90 95 Lys Arg Ser Gin Leu Thr Lys Glu Ile Glu Gly Leu Ile Gin Gin Ser 100 105 110 Asn Vai Glu Leu Leu Asn Glu Asn Ala Asn Lys Asp Ala Lys Vai Ile 115 120 125 Pro Thr Gin Arg Asp Leu Leu Ala Gly Ile Vai Ala Lys His Tyr Ala 130 135 140 Lys Arg Tyr Ile Leu Pro Arg Asp Vai Vai Asp Ala His Glu Lys Gly 145 150 155 160 Glu Ile His Tyr His Asp Leu Asp Tyr Ala Pro Phe Phe Pro Met Phe 165 170 175 Asn Cys Met Leu Vai Asp Leu Lys Gly Met Leu Ser Asn Gly Phe Lys 180 185 190 Met Gly Asn Ala Glu Ile Glu Pro Pro Lys Ser Ile Thr Thr Ala Thr 195 200 205 Ala Vai Ser Ala Gin Ile Ile Ala Gin Vai Ala Ser His Ile Tyr Gly 210 215 220 Gly Thr Thr Ile Asn Arg Ile Asp Glu Ile Leu Ala Pro Tyr Vai Gin 225 230 235 240 Leu Ser Tyr Glu Lys His Leu Lys Asn Ala Ala Glu Trp Lys Vai Pro 245 250 255 Glu Pro Glu Ala Tyr Ala Lys Ala Leu Ile Glu Lys Glu Cys Phe Asp 260 265 270 83

Ala Phe Gin Ser Leu Glu Tyr Glu Vai Asn Thr Leu His Thr Ser Asn 275 280 285 Gly Gin Thr Pro Phe Vai Thr Phe Gly Phe Gly Leu Gly Thr Thr Trp 290 295 300 Gin Ser Arg Leu Ile Gin Arg Ser Ile Leu Lys Asn Arg Ile Arg Gly 305 310 315 320 Leu Gly Lys Asn His Lys Thr Pro Vai Phe Pro Lys Leu Vai Phe Thr 325 330 335 Ile Lys Lys Gly Ile Asn His Ser Pro Ser Asp Pro Asn Tyr Asp Ile 340 345 350 Lys Gin Leu Ala Leu Glu Cys Ala Ser Lys Arg Met Tyr Pro Asp Ile 355 360 365 Leu Asn Tyr Asp Gin Vai Vai Lys Vai Thr Gly Ser Phe Lys Ala Pro 370 375 380 Met Gly Cys Arg Ser Phe Leu Gly Ala Tyr Gin Glu Gin Gly Gin Glu 385 390 395 400 Ile His Asp Gly Arg Asn Asn Leu Gly Vai Vai Ser Leu Asn Leu Pro 405 410 415 Arg Ile Ala Ile Glu Ala Asn Ala Thr Asn Ser Ala Gin Ser Ala Vai 420 425 430 Glu Phe Tyr Lys Ile Leu Asp Gin Arg Leu Ala Ile Ala Lys Lys Ala 435 440 445 Leu Met Thr Arg Ile Ala Arg Leu Glu His Thr Lys Ala Arg Vai Ala 450 455 460 Pro Ile Leu Tyr Met Glu Gly Ala Cys Gly Vai Arg Leu Lys Ala Asp 465 470 475 480 Asp Asn Vai Ala Gin Ile Phe Lys Asn Gly Arg Ala Ser Ile Ser Leu 485 490 495 Gly Tyr Ile Gly Ile His Glu Thr Ile Asn Ala Leu Tyr Gly Asp Lys 500 505 510 His Ile Tyr Asp Asp Glu Gin Leu Arg Gin Lys Gly Ile Glu Ile Vai 515 520 525 Glu Tyr Leu His Glu Thr Vai Gin Arg Trp Lys Gin Glu Thr Gly Tyr 530 535 540 84

Ala Phe Ser Leu Tyr Ser Thr Pro Ser Glu Asn Leu Cys Asp Arg Phe 545 550 555 560 Cys Arg Leu Asp Thr Lys Gin Phe Gly Leu Ile Glu Gly Vai Thr Asp 565 570 575 Lys Gly Tyr Tyr Thr Asn Ser Tyr His Leu Asp Vai Glu Lys Lys Vai 580 585 590 Asn Pro Tyr Asp Lys Ile Asp Phe Glu Leu Pro Tyr Pro Pro Phe Ala 595 600 605 Ser Gly Gly Phe Ile Cys Tyr Gly Glu Tyr Pro Asn Vai Gin His Asn 610 615 620 Leu Lys Ala Leu Glu Asp Vai Trp Asp Tyr Ser Tyr Asp Arg Vai Pro 625 630 635 640 Tyr Tyr Gly Thr Asn Thr Pro Ile Asp Glu Cys Tyr Glu Cys Gly Phe 645 650 655 Ser Gly Glu Phe Glu Cys Thr Ser Lys Gly Phe Thr Cys Pro Lys Cys 660 665 670 Gly Asn His Asp Ser Glu Lys Vai Ser Vai Thr Arg Arg Vai Cys Gly 675 680 685 Tyr Leu Gly Ser Pro Asp Ala Arg Pro Phe Asn Ala Gly Lys Gin Glu 690 695 700 Glu Vai Lys Arg Arg Vai Lys His Leu 705 710

<210> 24 <211> 58 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 24 attgtgatta cgggattatc gggatcaggt aaatcttctt tagcctttga taccctgt 58 <210> 25 85

<211> 2832 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 25 atggataaga ttgaggtacg tggggcgaga acccataatt taaaaaatat taatttaact 60 attcctcgtg ataaattaat tgtgattacg ggattatcgg gatcaggtaa atcttcttta 120 gcctttgata ccctgtatgc tgagggacaa cgccgttatg tagaatcctt gtcggcatat 180 gcacgtcaat tcttatccct aatggaaaag ccggatgtgg atcatattga aggattatcg 240 ccggcgattt ctattgaaca aaaatctacc tcacataatc cgcgttcaac ggtgggtacg 300 gtcaccgaaa ttcatgatta cttacgtctt ctttttgctc gagtagggga accgcgttgt 360 ccgaatcatg atgtgccttt agcggcacaa accattagcc agatggtgga taaagtattg 420 agtttgcctg aagaaagcaa aatgatgttg ctggcgccag tggtgaaaga acgtaagggt 480 gaacatgtta aattattaga gcaaattgcc gcccaaggtt atattcgagc cagaattgac 540 ggtgaaattt gtgatttatc tgatgcacct aaattagaat tacataaaaa acatactatt 600 gaagtggttg tggaccgttt taaggtgcgg tctgatttag ccacaagatt agcagaatcc 660 tttgaaacag cattggaatt atctggtggc accgctgtag ttgcttccat ggatgagcct 720 gaaacggaag aattggtctt ttcggctaat tttgcttgtc cacattgtgg gtattctgtc 780 ccagaattag aacctcgttt attttctttt aataatcccg ccggggcgtg tccgacttgc 840 gatggcttag gtgtacaaca atattttgat gaaaaacgcg tggtgcaaaa cccgagtatt 900 tcgttagcca gtggcgcagt aaaaggctgg gatcgtcgta acttctatta ctaccaaatg 960 ctcacctcct tagcgaagca ttatgaattt gatattgaat caccttttga ggcactgccg 1020 aaaaaaatcc agcagattat tttaaatggt tcaggtaagg aagaaattga gtttcaatac 1080 atgaatgatc gcggcgatgt agtcgtgcgt catcatgcat ttgaaggcat tctaaataat 1140 atggcgcgcc gttataaaga aacggaatcg ctgtctgtgc gtgaagaatt agcgaaaaat 1200 atcagtacct gtccttgcca tgattgtggg ggttcacgtt tacgtcaaga ggcacgtcat 1260 gtgtatattg gcaccaccac tttacctgat gtggcagaaa agagtattgg cgaaaccttg 1320 catttcttta gtgaattgca tttaagcggg caaagagctc aaattgccga gaaaatctta 1380 aaagaaatta aagagcgctt acaattttta gtcaatgtag ggttggatta tctttccctt 1440 tctcgttcag cagaaacctt gtctggtggg gaggcacagc gaattcgttt agccagtcaa 1500 attggtgcgg gtttagtggg ggtgatgtat gtgctagatg agccgtctat tggtttgcat 1560 caacgtgata atgagcgatt actgaataca ttgcttcact tacgtaactt agggaacacc 1620 gtgattgtgg tagaacatga tgaagatgcc attatggcgg cagatcatat tattgatatt 1680 ggtcccgggg caggagttca tggtgggcaa attgtggcag aaggttcggc aaaggcgatt 1740 atggctaatc cacactcaat tacggggaaa tttttatctg gggtcgagaa aatcgaaatt 1800 86 cccgcaaaac ggaccgcact tgataagaaa aaaatgttga aattagaagg ggcaacgggg 1860 aataatctga aatcagtgaa tttagccatt ccagtaggat tgtttacctg tgtgacaggt 1920 gtttcggggt cagggaaatc gaccttgatt aatgatacgt tgttcccatt agcacaaaat 1980 gccttgaatc gtgcggaaaa tacgcaattt gcgccttatc aatccatttc gggtttggaa 2040 ttttttgata aagtaattga tattgaccaa agtccaattg gtcgtacacc gcgttcgaat 2100 cctgccactt atactggctt atttacgccg attcgagaat tatttgcggg cgtgcctgag 2160 tcgagagccc ggggttataa tcccggacgt tttagtttta atgtacgcgg tggacgctgt 2220 gaggcctgtc aaggcgatgg tgtgattaaa gtagagatgc actttttgcc cgatgtgtat 2280 gtgccttgtg agcaatgtaa gggaaaacgt tataatcgag agaccttaga gatccgttac 2340 aaaggtaaaa cgattcatca agtgttagaa atgacggtag aagaagcgcg cgagtttttt 2400 gatgcgattc cgcagatcgc ccgtaaatta caaactttaa tggatgttgg tttatcctat 2460 attcgtttag gacaatcttc gaccacgtta tcgggtgggg aagcgcaacg agtgaaatta 2520 gcaacggagc tttcaaaacg tgatacaggg aaaactttgt atgtattaga tgaaccgacg 2580 acaggtttac attttgctga tattaaacag ctattaacag tcttgcatcg tttacgtgat 2640 caaggcaata cgatagtggt gattgagcac aatttagatg tgatcaaaac agccgattgg 2700 attattgatt taggtcctga aggggggaat ggcggtggac aaattattgc cacaggcaca 2760 ccagaacagg tcgctgaagt gaaaggttca cataccgcac gcttcttaaa aacgctttta 2820 caaaagcgct aa 2832 <210> 26 <211> 943 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 26 Met Asp Lys Ile Glu Vai Arg Gly Ala Arg Thr His Asn Leu Lys Asn 1 5 10 15 Ile Asn Leu Thr Ile Pro Arg Asp Lys Leu Ile Vai Ile Thr Gly Leu 20 25 30 Ser Gly Ser Gly Lys Ser Ser Leu Ala Phe Asp Thr Leu Tyr Ala Glu 35 40 45 Gly Gin Arg Arg Tyr Vai Glu Ser Leu Ser Ala Tyr Ala Arg Gin Phe 50 55 60 Leu Ser Leu Met Glu Lys Pro Asp Vai Asp His Ile Glu Gly Leu Ser 87 65 70 75 80

Pro Ala Ile Ser Ile Glu Gin Lys Ser Thr Ser His Asn Pro Arg Ser 85 90 95 Thr Vai Gly Thr Vai Thr Glu Ile His Asp Tyr Leu Arg Leu Leu Phe 100 105 110 Ala Arg Vai Gly Glu Pro Arg Cys Pro Asn His Asp Vai Pro Leu Ala 115 120 125 Ala Gin Thr Ile Ser Gin Met Vai Asp Lys Vai Leu Ser Leu Pro Glu 130 135 140 Glu Ser Lys Met Met Leu Leu Ala Pro Vai Vai Lys Glu Arg Lys Gly 145 150 155 160 Glu His Vai Lys Leu Leu Glu Gin Ile Ala Ala Gin Gly Tyr Ile Arg 165 170 175 Ala Arg Ile Asp Gly Glu Ile Cys Asp Leu Ser Asp Ala Pro Lys Leu 180 185 190 Glu Leu His Lys Lys His Thr Ile Glu Vai Vai Vai Asp Arg Phe Lys 195 200 205 Vai Arg Ser Asp Leu Ala Thr Arg Leu Ala Glu Ser Phe Glu Thr Ala 210 215 220 Leu Glu Leu Ser Gly Gly Thr Ala Vai Vai Ala Ser Met Asp Glu Pro 225 230 235 240 Glu Thr Glu Glu Leu Vai Phe Ser Ala Asn Phe Ala Cys Pro His Cys 245 250 255 Gly Tyr Ser Vai Pro Glu Leu Glu Pro Arg Leu Phe Ser Phe Asn Asn 260 265 270 Pro Ala Gly Ala Cys Pro Thr Cys Asp Gly Leu Gly Vai Gin Gin Tyr 275 280 285 Phe Asp Glu Lys Arg Vai Vai Gin Asn Pro Ser Ile Ser Leu Ala Ser 290 295 300 Gly Ala Vai Lys Gly Trp Asp Arg Arg Asn Phe Tyr Tyr Tyr Gin Met 305 310 315 320 Leu Thr Ser Leu Ala Lys His Tyr Glu Phe Asp Ile Glu Ser Pro Phe 325 330 335 Glu Ala Leu Pro Lys Lys Ile Gin Gin Ile Ile Leu Asn Gly Ser Gly 88 340 345 350

Lys Glu Glu Ile Glu Phe Gin Tyr Met Asn Asp Arg Gly Asp Vai Vai 355 360 365 Vai Arg His His Ala Phe Glu Gly Ile Leu Asn Asn Met Ala Arg Arg 370 375 380 Tyr Lys Glu Thr Glu Ser Leu Ser Vai Arg Glu Glu Leu Ala Lys Asn 385 390 395 400 Ile Ser Thr Cys Pro Cys His Asp Cys Gly Gly Ser Arg Leu Arg Gin 405 410 415 Glu Ala Arg His Vai Tyr Ile Gly Thr Thr Thr Leu Pro Asp Vai Ala 420 425 430 Glu Lys Ser Ile Gly Glu Thr Leu His Phe Phe Ser Glu Leu His Leu 435 440 445 Ser Gly Gin Arg Ala Gin Ile Ala Glu Lys Ile Leu Lys Glu Ile Lys 450 455 460 Glu Arg Leu Gin Phe Leu Vai Asn Vai Gly Leu Asp Tyr Leu Ser Leu 465 470 475 480 Ser Arg Ser Ala Glu Thr Leu Ser Gly Gly Glu Ala Gin Arg Ile Arg 485 490 495 Leu Ala Ser Gin Ile Gly Ala Gly Leu Vai Gly Vai Met Tyr Vai Leu 500 505 510 Asp Glu Pro Ser Ile Gly Leu His Gin Arg Asp Asn Glu Arg Leu Leu 515 520 525 Asn Thr Leu Leu His Leu Arg Asn Leu Gly Asn Thr Vai Ile Vai Vai 530 535 540 Glu His Asp Glu Asp Ala Ile Met Ala Ala Asp His Ile Ile Asp Ile 545 550 555 560 Gly Pro Gly Ala Gly Vai His Gly Gly Gin Ile Vai Ala Glu Gly Ser 565 570 575 Ala Lys Ala Ile Met Ala Asn Pro His Ser Ile Thr Gly Lys Phe Leu 580 585 590 Ser Gly Vai Glu Lys Ile Glu Ile Pro Ala Lys Arg Thr Ala Leu Asp 595 600 605 Lys Lys Lys Met Leu Lys Leu Glu Gly Ala Thr Gly Asn Asn Leu Lys 89 620 610 615 Ser Vai Asn Leu Ala Ile Pro Val 625 630 Vai Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr 645 Leu Ala Gin Asn Ala Leu Asn Arg 660 Tyr Gin Ser Ile Ser Gly Leu Glu 675 680 Asp Gin Ser Pro Ile Gly Arg Thr 690 695 Thr Gly Leu Phe Thr Pro Ile Arg 705 710 Ser Arg Ala Arg Gly Tyr Asn Pro 725 Gly Gly Arg Cys Glu Ala Cys Gin 740 Met His Phe Leu Pro Asp Vai Tyr 755 760 Lys Arg Tyr Asn Arg Glu Thr Leu 770 775 Ile His Gin Vai Leu Glu Met Thr 785 790 Asp Ala Ile Pro Gin Ile Ala Arg 805 Gly Leu Ser Tyr Ile Arg Leu Gly 820 Gly Glu Ala Gin Arg Vai Lys Leu 835 840 Thr Gly Lys Thr Leu Tyr Vai Leu 850 855 Phe Ala Asp Ile Lys Gin Leu Leu 865 870 Gin Gly Asn Thr Ile Vai Val Ile

Gly Leu Phe Thr Cys Val Thr Gly 635 640 Leu Ile Asn Asp Thr Leu Phe Pro 650 655 Ala Glu Asn Thr Gin Phe Ala Pro 665 670 Phe Phe Asp Lys Val Ile Asp Ile 685 Pro Arg Ser Asn Pro Ala Thr Tyr 700 Glu Leu Phe Ala Gly Val Pro Glu 715 720 Gly Arg Phe Ser Phe Asn Val Arg 730 735 Gly Asp Gly Val Ile Lys Val Glu 745 750 Val Pro Cys Glu Gin Cys Lys Gly 765 Glu Ile Arg Tyr Lys Gly Lys Thr 780 Val Glu Glu Ala Arg Glu Phe Phe 795 800 Lys Leu Gin Thr Leu Met Asp Val 810 815 Gin Ser Ser Thr Thr Leu Ser Gly 825 830 Ala Thr Glu Leu Ser Lys Arg Asp 845 Asp Glu Pro Thr Thr Gly Leu His 860 Thr Val Leu His Arg Leu Arg Asp 875 880 Glu His Asn Leu Asp Val Ile Lys 90 885 890 895

Thr Ala Asp Trp Ile Ile Asp Leu Gly Pro Glu Gly Gly Asn Gly Gly 900 905 910 Gly Gin Ile Ile Ala Thr Gly Thr Pro Glu Gin Vai Ala Glu Vai Lys 915 920 925 Gly Ser His Thr Ala Arg Phe Leu Lys Thr Leu Leu Gin Lys Arg 930 935 940

<210> 27 <211> 54 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 27 caggacttag tgggtaacaa cacaccagtc ttctttatcc gtgatccatt gaaa 54

<210> 28 <211> 1455 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 28 atgtctaaat gcccatttga ccatggttca aaaaccttaa cgaatgcagc tggtgcacct 60 attgttgaaa acgacaacac catgtctgcg ggtcctaaag gtccattact tttacaagat 120 gtttggttcc aagagaaatt agcacacttt gcacgtgagc gtattcctga gcgtgttgtt 180 catgcaaaag gttcagcagc gtacggtaca ttcactgtga cacacgatat cagcaaatac 240 accaaagcgg atttattcaa tggtatcggt aaacaaacac aagtcttatt acgtttctca 300 acagtagcgg gtgagcgcgg tgcggcagac gctgagcgtg atgtgcgtgg tttcgcatta 360 aaattctaca ctgaacaagg taactgggac ttagtgggta acaacacacc cgtattcttt 420 atccgtgatc cattgaaatt cccagatttc attcatactc aaaaacgtaa tccacaaact 480 aacttgcgtg atgcaaacgc ggcatgggat ttctggtcac gtcatcctga atcattacac 540 caaatcatga ttcttttcag tgatcgtggt attccaactg acttacgtca tatgaacggt 600 91 tacggtagcc atacatatag ctttattaac gcacaaaatg agcgtttctg ggtgaaattc 660 cacttcaaaa cacaacaagg tcacaaattc tatactaatg aagaagcggc taaagtggtg 720 ggtgaaaacc gtgagtcaag ccaacaagat ttatacgaag cgattgagcg tggcgaattc 780 ccacgttgga atgttcaagt gcaaatcatg ccagaagcag atgcacacaa acataactat 840 gcgtttgact taactaaagt atggccacac aaagattatc cgatgatcga agtgggtgta 900 ttagagttaa accaaaaccc aattaactac ttcgcagaag tggaacaagc tgcgtttgca 960 ccttctaaca tcgtaccggg aattggtttc tcaccagacc gtatgttaca aggtcgtctt 1020 ttctcatacc aagacgcgca acgttatcgt ttaggggtta accatcacca aatcccagtg 1080 aacgcaccaa aatgcccata ccacaccact caccgtgatg gcgcaatgcg tgtagataac 1140 aatggtggta cacaccctaa ctatgcaccg aaccgttttg atacttatgt gccgactcac 1200 caacaagagc ctgcattaga gttagagcgt tcagcagcac actttaactt ccgtgagtat 1260 gatgaagact actacacaca acctgccgca ctttacaact tattcgatgt ggatcaaaaa 1320 gcacgtgtgg cagccaactt cgcagcgggc ttagcaggtg ttacagaacc tgcgattgtt 1380 gaaagacaat tagcccactt cgacaaagta agcaaagaat tagctgatgc aattcgtgcg 1440 aacttagcga aataa 1455 <210> 29 <211> 484 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 29 Met Ser Lys Cys Pro Phe Asp His Gly Ser Lys Thr Leu Thr Asn Ala 1 5 10 15 Ala Gly Ala Pro Ile Vai Glu Asn Asp Asn Thr Met Ser Ala Gly Pro 20 25 30 Lys Gly Pro Leu Leu Leu Gin Asp Vai Trp Phe Gin Glu Lys Leu Ala 35 40 45 His Phe Ala Arg Glu Arg Ile Pro Glu Arg Vai Vai His Ala Lys Gly 50 55 60 Ser Ala Ala Tyr Gly Thr Phe Thr Vai Thr His Asp Ile Ser Lys Tyr 65 70 75 80 Thr Lys Ala Asp Leu Phe Asn Gly Ile Gly Lys Gin Thr Gin Vai Leu 85 90 95 92

Leu Arg Phe Ser Thr Vai Ala Gly Glu Arg Gly Ala Ala Asp Ala Glu 100 105 110 Arg Asp Vai Arg Gly Phe Ala Leu Lys Phe Tyr Thr Glu Gin Gly Asn 115 120 125 Trp Asp Leu Vai Gly Asn Asn Thr Pro Vai Phe Phe Ile Arg Asp Pro 130 135 140 Leu Lys Phe Pro Asp Phe Ile His Thr Gin Lys Arg Asn Pro Gin Thr 145 150 155 160 Asn Leu Arg Asp Ala Asn Ala Ala Trp Asp Phe Trp Ser Arg His Pro 165 170 175 Glu Ser Leu His Gin Ile Met Ile Leu Phe Ser Asp Arg Gly Ile Pro 180 185 190 Thr Asp Leu Arg His Met Asn Gly Tyr Gly Ser His Thr Tyr Ser Phe 195 200 205 Ile Asn Ala Gin Asn Glu Arg Phe Trp Vai Lys Phe His Phe Lys Thr 210 215 220 Gin Gin Gly His Lys Phe Tyr Thr Asn Glu Glu Ala Ala Lys Vai Vai 225 230 235 240 Gly Glu Asn Arg Glu Ser Ser Gin Gin Asp Leu Tyr Glu Ala Ile Glu 245 250 255 Arg Gly Glu Phe Pro Arg Trp Asn Vai Gin Vai Gin Ile Met Pro Glu 260 265 270 Ala Asp Ala His Lys His Asn Tyr Ala Phe Asp Leu Thr Lys Vai Trp 275 280 285 Pro His Lys Asp Tyr Pro Met Ile Glu Vai Gly Vai Leu Glu Leu Asn 290 295 300 Gin Asn Pro Ile Asn Tyr Phe Ala Glu Vai Glu Gin Ala Ala Phe Ala 305 310 315 320 Pro Ser Asn Ile Vai Pro Gly Ile Gly Phe Ser Pro Asp Arg Met Leu 325 330 335 Gin Gly Arg Leu Phe Ser Tyr Gin Asp Ala Gin Arg Tyr Arg Leu Gly 340 345 350 Vai Asn His His Gin Ile Pro Vai Asn Ala Pro Lys Cys Pro Tyr His 355 360 365 Thr Thr His Arg Asp Gly Ala Met Arg Vai Asp Asn Asn Gly Gly Thr 93 370 375 380

His Pro Asn Tyr Ala Pro Asn Arg Phe Asp Thr Tyr Vai Pro Thr His 385 390 395 400 Gin Gin Glu Pro Ala Leu Glu Leu Glu Arg Ser Ala Ala His Phe Asn 405 410 415 Phe Arg Glu Tyr Asp Glu Asp Tyr Tyr Thr Gin Pro Ala Ala Leu Tyr 420 425 430 Asn Leu Phe Asp Vai Asp Gin Lys Ala Arg Vai Ala Ala Asn Phe Ala 435 440 445 Ala Gly Leu Ala Gly Vai Thr Glu Pro Ala Ile Vai Glu Arg Gin Leu 450 455 460 Ala His Phe Asp Lys Vai Ser Lys Glu Leu Ala Asp Ala Ile Arg Ala 465 470 475 480 Asn Leu Ala Lys

<210> 30 <211> 172 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 30 atttctcacg cattttttcg gtaaaaccaa cgggaatcgt tgattttata ataatcgttg 60 cttgtggatt gattgagagg gtttgttcaa tgacagcttc aacagtggat gtattaaaat 120 aacctgtttc ggtattatag tctgttggcg ttgcgatgat gacaaagtcc tg 172

<210> 31 <211> 1173 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 31 atgaagaaaa ttacaattgc tggggctggc tatgttggtt tatccaatgc agtattatta 60 94 gctcaacacc acaatgtgat cttattagat attgatcaaa ataaagttga tttaattaat 120 aataaaaaat cgcccatcac agataaagaa atcgaagatt tcttacaaaa taaatcactg 180 acaatgatgg caacaacaga taaagaagtg gcattaaaaa acgcagactt tgtcatcatc 240 gcaacgccaa cagactataa taccgaaaca ggttatttta atacatccac tgttgaagct 300 gtcattgaac aaaccctttc aatcaatcca caagcaacga ttattataaa atcaacaatt 360 cccgttggtt ttaccgaaaa catgcgtgaa aaatttaata ccccaaatct tatcttttca 420 cctgaatttc taagagaggg aaaagccctt tacgataatt tgtatccaag cagaattatt 480 gttggcagta cttcttatca agcaaaagta tttgccgata tgttgacaca gtgtgccaga 540 aaaaaagatg taactgtttt atttacacac aatactgagg ccgaagctgt taaattattt 600 gcaaatacgt atctcgcaat gcgagttgcc ttttttaatg aattagatac ttatgcgagt 660 cttcaccatt taaatacaaa agacattatc aatggtattt ctactgatcc tcgcattggt 720 acacactaca ataacccaag tttcggctat ggcggttatt gtttacccaa agacactaaa 780 cagttactgg ctaactatgc tgacgtgcct caaaatctca ttgaagccat tgtcaaatct 840 aatgaaacca gaaaacgttt cattactcat gatgtattaa ataagaaacc taaaactgtt 900 ggtatttatc gtttaatcat gaagtcaggt tctgataact tcagagcttc tgctattctc 960 gatattatgc cgcatctcaa agaaaacggt gttgagattg tgatttatga gccaacctta 1020 aatcaacagg catttgagga ctaccccgtt attaatcaac tctctgaatt tattaatcgc 1080 tctgatgtca ttctcgctaa tcgttctgag ccagatttaa atcaatgttc ccataaaatc 1140 tatacaagag atatttttgg cggtgatgct taa 1173 <210> 32 <211> 390 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 32 Met Lys Lys Ile Thr Ile Ala Gly Ala Gly Tyr Vai Gly Leu Ser Asn 1 5 10 15 Ala Vai Leu Leu Ala Gin His His Asn Vai Ile Leu Leu Asp Ile Asp 20 25 30 Gin Asn Lys Vai Asp Leu Ile Asn Asn Lys Lys Ser Pro Ile Thr Asp 35 40 45 Lys Glu Ile Glu Asp Phe Leu Gin Asn Lys Ser Leu Thr Met Met Ala 50 55 60 95

Thr Thr Asp Lys Glu Vai Ala Leu Lys Asn Ala Asp Phe Vai Ile Ile 65 70 75 80 Ala Thr Pro Thr Asp Tyr Asn Thr Glu Thr Gly Tyr Phe Asn Thr Ser 85 90 95 Thr Vai Glu Ala Vai Ile Glu Gin Thr Leu Ser Ile Asn Pro Gin Ala 100 105 110 Thr Ile Ile Ile Lys Ser Thr Ile Pro Vai Gly Phe Thr Glu Asn Met 115 120 125 Arg Glu Lys Phe Asn Thr Pro Asn Leu Ile Phe Ser Pro Glu Phe Leu 130 135 140 Arg Glu Gly Lys Ala Leu Tyr Asp Asn Leu Tyr Pro Ser Arg Ile Ile 145 150 155 160 Vai Gly Ser Thr Ser Tyr Gin Ala Lys Vai Phe Ala Asp Met Leu Thr 165 170 175 Gin Cys Ala Arg Lys Lys Asp Vai Thr Vai Leu Phe Thr His Asn Thr 180 185 190 Glu Ala Glu Ala Vai Lys Leu Phe Ala Asn Thr Tyr Leu Ala Met Arg 195 200 205 Vai Ala Phe Phe Asn Glu Leu Asp Thr Tyr Ala Ser Leu His His Leu 210 215 220 Asn Thr Lys Asp Ile Ile Asn Gly Ile Ser Thr Asp Pro Arg Ile Gly 225 230 235 240 Thr His Tyr Asn Asn Pro Ser Phe Gly Tyr Gly Gly Tyr Cys Leu Pro 245 250 255 Lys Asp Thr Lys Gin Leu Leu Ala Asn Tyr Ala Asp Vai Pro Gin Asn 260 265 270 Leu Ile Glu Ala Ile Vai Lys Ser Asn Glu Thr Arg Lys Arg Phe Ile 275 280 285 Thr His Asp Vai Leu Asn Lys Lys Pro Lys Thr Vai Gly Ile Tyr Arg 290 295 300 Leu Ile Met Lys Ser Gly Ser Asp Asn Phe Arg Ala Ser Ala Ile Leu 305 310 315 320 Asp Ile Met Pro His Leu Lys Glu Asn Gly Vai Glu Ile Vai Ile Tyr 325 330 335 Glu Pro Thr Leu Asn Gin Gin Ala Phe Glu Asp Tyr Pro Vai Ile Asn 96 340 345 350

Gin Leu Ser Glu Phe Ile Asn Arg Ser Asp Vai Ile Leu Ala Asn Arg 355 360 365

Ser Glu Pro Asp Leu Asn Gin Cys Ser His Lys Ile Tyr Thr Arg Asp 370 375 380

Ile Phe Gly Gly Asp Ala 385 390

<210> 33 <211> 226 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 33 gcaccaaagt gaataatatt tgggaaacct cgggcttgaa tattttagag gtattagtac 60 gtttagatag caccaagtta cctagtttca tttctaacat cctgtccgcg cgaaccaata 120 tttcggcaat ctatattcaa aaagccttca aagtagaacc acagaaatca ctcgaagcgt 180 ttaaggatct tgatactcta gcagatacag cagaagctta tactaa 226

<210> 34 <211> 726 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 34 atgaataatg atcaacctct tttaaaagca cagagtccgg ctggtttagc ggaagaatat 60 attgtcagaa gtatctggaa taatcatttc ccaccaggct ccgatttgcc ggctgaacgt 120 gagttggcag agaaaattgg ggtgacgcgt accacgttac gtgaagtgct acaacgcctg 180 gcgcgtgacg gttggttgaa tattcaacat gggaaaccaa ccaaagtgaa taatatttgg 240 gaaacttcgg gcttgaatat tttagaggta ttagtacgtt tagatagcac caagttacct 300 agtttcattt ctaacatcct gtccgcgcga accaatattt cggcaatcta tattcaaaaa 360 gccttcaaag tagaaccaca gaaatcactc gaagcgttta aggatcttga tactctagca 420 97 gatacagcag aagcttatac taattttgat tatgatcttt tccgtaaatt agcatttgca 480 tctgataatc ctgtgtatgg tttgatttta aatagtttga aagggttata tacacgtgta 540 gggttgtttt attttgccaa tccatcggcg cgtgagttag cgaaacgctt ttatctttcg 600 ctaaagacgt tgtgtcaaac acagcaagtg aacgatgtca aagagtgtat ccgtcaatat 660 ggtaaagaca gtggggtgat ttgggcaaat atgcaggcat atttaccggc taattttaat 720 gaatag 726

<210> 35 <211> 241 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 35

Met Asn Asn Asp Gin Pro Leu Leu Lys Ala Gin Ser Pro Ala Gly Leu 1 5 10 15 Ala Glu Glu Tyr Ile Vai Arg Ser Ile Trp Asn Asn His Phe Pro Pro 20 25 30 Gly Ser Asp Leu Pro Ala Glu Arg Glu Leu Ala Glu Lys Ile Gly Vai 35 40 45 Thr Arg Thr Thr Leu Arg Glu Vai Leu Gin Arg Leu Ala Arg Asp Gly 50 55 60 Trp Leu Asn Ile Gin His Gly Lys Pro Thr Lys Vai Asn Asn Ile Trp 65 70 75 80 Glu Thr Ser Gly Leu Asn Ile Leu Glu Vai Leu Vai Arg Leu Asp Ser 85 90 95 Thr Lys Leu Pro Ser Phe Ile Ser Asn Ile Leu Ser Ala Arg Thr Asn 100 105 110 Ile Ser Ala Ile Tyr Ile Gin Lys Ala Phe Lys Vai Glu Pro Gin Lys 115 120 125 Ser Leu Glu Ala Phe Lys Asp Leu Asp Thr Leu Ala Asp Thr Ala Glu 130 135 140 Ala Tyr Thr Asn Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Arg Lys Leu Ala Phe Ala 145 150 155 160 Ser Asp Asn Pro Vai Tyr Gly Leu Ile Leu Asn Ser Leu Lys Gly Leu 165 170 175 98

Tyr Thr Arg Vai Gly Leu Phe Tyr Phe Ala Asn Pro Ser Ala Arg Glu 180 185 190 Leu Ala Lys Arg Phe Tyr Leu Ser Leu Lys Thr Leu Cys Gin Thr Gin 195 200 205 Gin Vai Asn Asp Vai Lys Glu Cys Ile Arg Gin Tyr Gly Lys Asp Ser 210 215 220 Gly Vai Ile Trp Ala Asn Met Gin Ala Tyr Leu Pro Ala Asn Phe Asn 225 230 235 240

Glu

<210> 36 <211> 214 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 36 acaaccgctg gcgtatccgt taaacggtgg gttaagcgca cttctttcac gcgctcacca 60 agcaaggttt tcacacgttc cacaaaagaa gcatattgct catcttgtgc tttttgactg 120 tcttcctctt tatccgctaa atcacctaga tctaaatccg ctttactgat ggtttgcagt 180 ggcttaccgt caaattccgt taagtaactt aaca 214

<210> 37 <211> 1896 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 37 atgtcgacga atgatccatt tctgatgcgg gatggggatt gataatggca atcaagaaac ctctctattc cagataaatt taaaagtgcg ttgggatgac gcgtggtttt caataaagaa gcgttttaaa tattcgtttt gcgtgatgaa caatcagaag attttcttac gccttgtctg gatgaagaga gtaatcgatc tcaaacaact gtgaattaat tgccagagct aaggtacctt atttaggtac tcttcaacta 60 ttccaatgcc 120 ttatgaaggt 180 aaccattagt 240 cattgccaaa 300 99 tcgggtacca aagaattttt aagtgcatta ggacaagatc aagccaaaga tagccaatta 360 attggtcagt ttggggtcgg tttttattcc gcctttattg tggcagataa agtcactgtg 420 aaaacgcgtg cagcaggcgt aagtgcagat aaagcggtgc tttgggaatc ggcaggcgaa 480 ggtgagtatt ctgtggcgga tattgacaaa aaagaacgcg gtaccgaaat tacccttcac 540 ttacgtgaag atgaaaaagc ctttttaaat gattggcgct tacgtgaaat tatcggcaaa 600 tattcggatc atattggttt gccagtagaa attctagcca aagaatatga cgatgaaggc 660 aaagaaaccg gcattaaatg ggaaaaaatc aataaagcgc aagccttgtg gacacgtgca 720 aaaaatgaga tttcggagga agaatatcaa gagttctata agcatttaag tcatgatttt 780 accgatccgt tactttgggc acacaataaa gtagaaggaa atcaagaata taccagttta 840 ctttatgtgc cagcaaaagc cccttgggat ttatttaatc gcgaacataa acacggctta 900 aagctgtatg tgcaacgtgt ctttattatg gatgatgcgc aagtctttat gccaaattat 960 ctgcgtttta tgcgtggttt attagattcc aatgatttgc cactgaatgt atcgcgcgaa 1020 attttacaag ataacaaagt cacgagtgct ttacgtaaag ccctaacgaa acgtgcattg 1080 caaatgctcg aaaaattagc caaagacgat gcagagaaat accaacgctt ttggcaagag 1140 tttggtttgg tgttaaaaga aggtccagca gaagattttg caaataaaga aacgattgca 1200 aaattattac gttttgcttc aacacacaat gacagcagcc aacaaagcgt gtcgttagaa 1260 gactatgtgg cacgtatgaa agaaggacaa aaggcgattt attatattac ggcagatact 1320 tatgtcgccg cgaaaaactc accgcactta gaattgttca ataagaaagg cattgaagta 1380 ttattgttgt ccgatcgtat tgatgaatgg atgttaagct acttaacgga atttgatggt 1440 aagccactgc aaaccatcag taaagcggat ttagatctag gtgatttagc ggataaagag 1500 gaagacagtc aaaaagcaca agatgagcaa tatgcttctt ttgtggaacg tgtgaaaacc 1560 ttgcttggcg agcgcgtgaa agaagtgcgc ttaactcacc gtttaacgga tacgccagcg 1620 gttgtttcga cgggtgatga ccagatgacc acccaaatgg cgaaattgtt cgctgcggcg 1680 ggtcaagcga tgccagaggt taaatacacc ttcgaattaa atccagaaca tggtttagta 1740 caaaaagtag cagaaattgc cgatgagcag caatttgccg attggattga attgctactt 1800 gaacaagcaa tgttggctga gcgtggtagc cttgaaaatc cagttgcctt tattaaacgc 1860 atgaacacct tgttaagtaa actcacaagt cattaa 1896

<210> 38 <211> 631 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 38 100

Met Ser Thr Asn Gin Glu Thr Arg Gly Phe Gin Ser Glu Vai Lys Gin 1 5 10 15 Leu Leu Gin Leu Met Ile His Ser Leu Tyr Ser Asn Lys Glu Ile Phe 20 25 30 Leu Arg Glu Leu Ile Ser Asn Ala Ser Asp Ala Ala Asp Lys Leu Arg 35 40 45 Phe Lys Ala Leu Ser Vai Pro Glu Leu Tyr Glu Gly Asp Gly Asp Leu 50 55 60 Lys Vai Arg Ile Arg Phe Asp Glu Glu Lys Gly Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Asp Asn Gly Ile Gly Met Thr Arg Asp Glu Vai Ile Asp His Leu Gly 85 90 95 Thr Ile Ala Lys Ser Gly Thr Lys Glu Phe Leu Ser Ala Leu Gly Gin 100 105 110 Asp Gin Ala Lys Asp Ser Gin Leu Ile Gly Gin Phe Gly Vai Gly Phe 115 120 125 Tyr Ser Ala Phe Ile Vai Ala Asp Lys Vai Thr Vai Lys Thr Arg Ala 130 135 140 Ala Gly Vai Ser Ala Asp Lys Ala Vai Leu Trp Glu Ser Ala Gly Glu 145 150 155 160 Gly Glu Tyr Ser Vai Ala Asp Ile Asp Lys Lys Glu Arg Gly Thr Glu 165 170 175 Ile Thr Leu His Leu Arg Glu Asp Glu Lys Ala Phe Leu Asn Asp Trp 180 185 190 Arg Leu Arg Glu Ile Ile Gly Lys Tyr Ser Asp His Ile Gly Leu Pro 195 200 205 Vai Glu Ile Leu Ala Lys Glu Tyr Asp Asp Glu Gly Lys Glu Thr Gly 210 215 220 Ile Lys Trp Glu Lys Ile Asn Lys Ala Gin Ala Leu Trp Thr Arg Ala 225 230 235 240 Lys Asn Glu Ile Ser Glu Glu Glu Tyr Gin Glu Phe Tyr Lys His Leu 245 250 255 Ser His Asp Phe Thr Asp Pro Leu Leu Trp Ala His Asn Lys Vai Glu 260 265 270 Gly Asn Gin Glu Tyr Thr Ser Leu Leu Tyr Vai Pro Ala Lys Ala Pro 101 275 280 285

Trp Asp Leu Phe Asn Arg Glu His Lys His Gly Leu Lys Leu Tyr Vai 290 295 300 Gin Arg Vai Phe Ile Met Asp Asp Ala Gin Vai Phe Met Pro Asn Tyr 305 310 315 320 Leu Arg Phe Met Arg Gly Leu Leu Asp Ser Asn Asp Leu Pro Leu Asn 325 330 335 Vai Ser Arg Glu Ile Leu Gin Asp Asn Lys Vai Thr Ser Ala Leu Arg 340 345 350 Lys Ala Leu Thr Lys Arg Ala Leu Gin Met Leu Glu Lys Leu Ala Lys 355 360 365 Asp Asp Ala Glu Lys Tyr Gin Arg Phe Trp Gin Glu Phe Gly Leu Vai 370 375 380 Leu Lys Glu Gly Pro Ala Glu Asp Phe Ala Asn Lys Glu Thr Ile Ala 385 390 395 400 Lys Leu Leu Arg Phe Ala Ser Thr His Asn Asp Ser Ser Gin Gin Ser 405 410 415 Vai Ser Leu Glu Asp Tyr Vai Ala Arg Met Lys Glu Gly Gin Lys Ala 420 425 430 Ile Tyr Tyr Ile Thr Ala Asp Thr Tyr Vai Ala Ala Lys Asn Ser Pro 435 440 445 His Leu Glu Leu Phe Asn Lys Lys Gly Ile Glu Vai Leu Leu Leu Ser 450 455 460 Asp Arg Ile Asp Glu Trp Met Leu Ser Tyr Leu Thr Glu Phe Asp Gly 465 470 475 480 Lys Pro Leu Gin Thr Ile Ser Lys Ala Asp Leu Asp Leu Gly Asp Leu 485 490 495 Ala Asp Lys Glu Glu Asp Ser Gin Lys Ala Gin Asp Glu Gin Tyr Ala 500 505 510 Ser Phe Vai Glu Arg Vai Lys Thr Leu Leu Gly Glu Arg Vai Lys Glu 515 520 525 Vai Arg Leu Thr His Arg Leu Thr Asp Thr Pro Ala Vai Vai Ser Thr 530 535 540 Gly Asp Asp Gin Met Thr Thr Gin Met Ala Lys Leu Phe Ala Ala Ala 102 545 550 555 560 Gly Gin Ala Met Pro Glu Vai Lys Tyr Thr Phe Glu Leu Asn Pro Glu 565 570 575 His Gly Leu Vai Gin Lys Vai Ala Glu Ile Ala Asp Glu Gin Gin Phe 580 585 590 Ala Asp Trp Ile Glu Leu Leu Leu Glu Gin Ala Met Leu Ala Glu Arg 595 600 605 Gly Ser Leu Glu Asn Pro Vai Ala Phe Ile Lys Arg Met Asn Thr Leu 610 615 620 Leu Ser Lys Leu Thr Ser His 625 630

<210> 39 <211> 252 <212> ADN <213> Pasteurella multocida caaaatggta 60 aagctctctg 120 ctttccccaa 180 actgataaaa 240 252 <400> 39 gagttggttc aaattcatgg gagaaggccg caggacccga aatacgttgt agaatatatt tgagatttat gaatttaata caacatgaca tc gctcagtatg aggcataacc ttaacgccac atggagctga gcaatgtgag gagggtacga ataaaaataa attttatcaa tcttactata tgatctattt ccctcatgat cgcagaaaag

<210> 40 <211> 1008 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 40 atgaaacaaa tcgttttaaa aacaagctta ttgatgaccc tctcttcatt attagttgca 60 tgtagcggcg gtggcggtag cgctggaaat cgtgctgacc gtgtagagga aaaagcacaa 120 103 ccggttcaat caaatagtga gccttcttcc gctccaatca aaaatcctac taataccgct 180 acgaatgatt ctcttcatga caaactttca atgtcttctc atgacacatc caaagaaaat 240 agtcaacaat cctcctttaa agcccctcta gaacaagaaa aaaaccaacc tgcacaagaa 300 aatctcactt ggacaggtta tcatgtttca gaagtgggaa atgcgagtaa taatgtagat 360 aaagataacg ttacggtatt cactttcgta aaatataatt ctcaatacaa tgatgatcca 420 gtttttgata aaacaaaaac acaaagtaaa acaatatcat tagttgacgg aaaaaatgag 480 aataaagagg attattataa ctttacgtta aaagacgctt tattttatta tggaagttat 540 ggacaacctt cagcagatta caaaaaagta gaaaaaaatt atatttatgc aattaaacca 600 gatgcaataa ataatgagaa cctcaatgca ctaactgcaa cttattatca agaagatggt 660 tttatatatt ccgtattaag tgatgtaaat cgagttggtt cagaatatat tcctcagtat 720 ggcaatgtga ctcttacttt ccgaaatggc aagatttatg gtgaaatcta cagatataat 780 agaggacgtg atgatttgtt tcagctctca ggagaaggac aaaacttaac tataacacca 840 cacaaggaca atccccataa actatcccct acaggacccg acaacatggc aatggagctg 900 aattttatca acgcagaaaa aactgataaa aaatacgttg ttggtgtagg aaaagctgaa 960 aaatattatg ggttattatt tgctgaaaaa agtcaccaag cacaataa 1008 <210> 41 <211> 335 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 41 Met Lys Gin Ile Vai Leu Lys Thr Ser Leu Leu Met Thr Leu Ser Ser 1 5 10 15 Leu Leu Vai Ala Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gly Asn Arg Ala 20 25 30 Asp Arg Vai Glu Glu Lys Ala Gin Pro Vai Gin Ser Asn Ser Glu Pro 35 40 45 Ser Ser Ala Pro Ile Lys Asn Pro Thr Asn Thr Ala Thr Asn Asp Ser 50 55 60 Leu His Asp Lys Leu Ser Met Ser Ser His Asp Thr Ser Lys Glu Asn 65 70 75 80 Ser Gin Gin Ser Ser Phe Lys Ala Pro Leu Glu Gin Glu Lys Asn Gin 85 90 95 104

Pro Ala

Gly Asn

Phe Vai 130 Thr Lys 145

Asn Lys

Tyr Gly

Asn Tyr

Asn Ala 210 Vai Leu 225

Gly Asn

Tyr Arg

Gly Gin

Ser Pro 290 Ala Glu 305

Lys Tyr

Gin Glu 100 Ala Ser 115

Lys Tyr

Thr Gin

Glu Asp

Ser Tyr 180 Ile Tyr 195

Leu Thr

Ser Asp

Vai Thr

Tyr Asn 260 Asn Leu 275

Thr Gly Lys Thr Tyr Gly

Asn Leu

Asn Asn

Asn Ser

Ser Lys 150 Tyr Tyr 165

Gly Gin

Ala Ile

Ala Thr

Vai Asn 230 Leu Thr 245

Arg Gly

Thr Ile

Pro Asp

Asp Lys 310 Leu Leu 325

Thr Trp

Vai Asp 120

Gin Tyr 135

Thr Ile

Asn Phe

Pro Ser

Lys Pro 200 Tyr Tyr 215

Arg Vai

Phe Arg

Arg Asp

Thr Pro 280 Asn Met 295

Lys Tyr Phe Ala

Thr Gly 105

Lys Asp

Asn Asp

Ser Leu

Thr Leu 170 Ala Asp 185

Asp Ala

Gin Glu

Gly Ser

Asn Gly 250 Asp Leu 265

His Lys

Ala Met

Vai Vai

Glu Lys 330

Tyr His Asn Vai

Asp Pro 140 Vai Asp 155

Lys Asp

Tyr Lys

Ile Asn

Asp Gly 220 Glu Tyr 235

Lys Ile

Phe Gin

Asp Asn

Glu Leu 300 Gly Vai 315

Ser His

Vai Ser 110 Thr Vai 125

Vai Phe

Gly Lys

Ala Leu

Lys Vai 190 Asn Glu 205

Phe Ile

Ile Pro

Tyr Gly

Leu Ser 270 Pro His 285

Asn Phe Gly Lys Gin Ala

Glu Vai Phe Thr Asp Lys Asn Glu 160 Phe Tyr 175 Glu Lys Asn Leu Tyr Ser Gin Tyr 240 Glu Ile 255 Gly Glu Lys Leu Ile Asn Ala Glu 320 Gin 335

<210> 42 <211> 546 <212> ADN 105 <213> Pasteurella multocida <22 0> <221> característica_diversa <222> (428) .. (428) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (470) .. (470) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (497)..(497) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (499) .. (499) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (504)..(504) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (507)..(507) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (512) .. (512) 106 <223> A ou C ou G ou Τ <220> <221> característica_diversa <222> (519)..(519)

<223> A ou C ou G ou T <400> 42 gcttggtatt tacagggaat ccaacctaat cccgttttta gacaggcttt taatgcaatt 60 actgatccca aagaacaatt aattgcttta gaaggttttt ttaatttgat tctgatggat 120 aaagaaaaaa atgttagaac aacaacgtaa tcctgctgat gcactaactg tatcagtgtt 180 aaattcacaa tctcaagtca caaataaacc attgcgtgat tctgtgaaac aagcattgag 240 aaattatttg tcgcagttag atggccaaga tgtcaatgag ctttatgaat tagtattagc 300 agaagttgag catcctatgt tagatatggt tatgcaatat acacgtggaa atcaaactcg 360 tgcagcgaca atgttaggga ttaaccgtgg cactttacgt aagaaattaa aaaagtacgg 420 tatgggtnaa cggaccattg tagtatttaa actagttttg gttatagaan ggcggactta 480 ggtccgcctt tttaatntnc attnccnttt cntttttcna aacaatgatt tttacgccct 540 caaatg 546

<210> 43 <211> 1005 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 43 atgacagtgc ggataggttc ttatcagctt aaaaatcgca tttttcttgc tcctatggct 60 ggcatcactg accaaccatt tcggcgaatc tgcactcatt atggggcagg tttaactttt 120 tctgaaatga tgtcaacgaa tccgcaagtc tggcataccg aaaaatcgaa actgcgcttg 180 gctcatcatc aagaagcagg aattaatgct gtgcaaatag ctggttgtga tcccgatgag 240 atggcgaaag ctgctcaaat caatgtagaa tatggggcag aaattattga tatcaatatg 300 ggctgcccag ccaaaaaagt gaatcgtaaa atggcgggct ctgcgctgtt acaatatcct 360 gatttggtca aacaaattct taataaagtt gtgaaatctg ttactgtacc agtgacatta 420 aagataagaa caggctggga taaagacaac cgaaattgtt tagaaatcgc taaaattgca 480 gagcaatgtg gtattcaagc actgaccatc cacggacgaa caaggagttg tatgtttgag 540 107 ggggaggctg aatatgacaa tatcaaggcg gtcaaagagc aactttctat tccgattatt 600 gccaatggcg atattacttc cgctgaaaaa gcaaagtatg ttcttgatta taccaacgca 660 gatgcaataa tgatcggacg tggttcatta ggcaatccgt ggcttttccg agttatggaa 720 agcttaattg aaaaagactc gattgtttta gagccaagtt taaacgagaa atgtaatgtg 780 attttacagc atatccaaga actgcatcaa ttttatggtg tggagaaagg atgtcgtatt 840 gcacgtaaac acgttgcttg gtatttacag ggaatccaac ctaatcccgt ttttagacag 900 gcttttaatg caattactga tcccaaagaa caattaattg ctttagaagg tttttttaat 960 ttgattctga tggataaaga aaaaaatgtt agaacaacaa cgtaa 1005

<210> 44 <211> 334 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 44

Met Thr Vai Arg Ile Gly Ser Tyr Gin Leu Lys Asn Arg Ile Phe Leu 1 5 10 15 Ala Pro Met Ala Gly Ile Thr Asp Gin Pro Phe Arg Arg Ile Cys Thr 20 25 30 His Tyr Gly Ala Gly Leu Thr Phe Ser Glu Met Met Ser Thr Asn Pro 35 40 45 Gin Vai Trp His Thr Glu Lys Ser Lys Leu Arg Leu Ala His His Gin 50 55 60 Glu Ala Gly Ile Asn Ala Vai Gin Ile Ala Gly Cys Asp Pro Asp Glu 65 70 75 80 Met Ala Lys Ala Ala Gin Ile Asn Vai Glu Tyr Gly Ala Glu Ile Ile 85 90 95 Asp Ile Asn Met Gly Cys Pro Ala Lys Lys Vai Asn Arg Lys Met Ala 100 105 110 Gly Ser Ala Leu Leu Gin Tyr Pro Asp Leu Vai Lys Gin Ile Leu Asn 115 120 125 Lys Vai Vai Lys Ser Vai Thr Vai Pro Vai Thr Leu Lys Ile Arg Thr 130 135 140 Gly Trp Asp Lys Asp Asn Arg Asn Cys Leu Glu Ile Ala Lys Ile Ala 108 150 155 160 145

Glu Gin Cys Gly Ile Gin Ala Leu Thr Ile His Gly Arg Thr Arg Ser 165 170 175 Cys Met Phe Glu Gly Glu Ala Glu Tyr Asp Asn Ile Lys Ala Vai Lys 180 185 190 Glu Gin Leu Ser Ile Pro Ile Ile Ala Asn Gly Asp Ile Thr Ser Ala 195 200 205 Glu Lys Ala Lys Tyr Vai Leu Asp Tyr Thr Asn Ala Asp Ala Ile Met 210 215 220 Ile Gly Arg Gly Ser Leu Gly Asn Pro Trp Leu Phe Arg Vai Met Glu 225 230 235 240 Ser Leu Ile Glu Lys Asp Ser Ile Vai Leu Glu Pro Ser Leu Asn Glu 245 250 255 Lys Cys Asn Vai Ile Leu Gin His Ile Gin Glu Leu His Gin Phe Tyr 260 265 270 Gly Vai Glu Lys Gly Cys Arg Ile Ala Arg Lys His Vai Ala Trp Tyr 275 280 285 Leu Gin Gly Ile Gin Pro Asn Pro Vai Phe Arg Gin Ala Phe Asn Ala 290 295 300 Ile Thr Asp Pro Lys Glu Gin Leu Ile Ala Leu Glu Gly Phe Phe Asn 305 310 315 320 Leu Ile Leu Met Asp Lys Glu Lys Asn Vai Arg Thr Thr Thr 325 330

<210> 45 <211> 43 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 45 gcaaaatttt tggggatggt ctgatcctaa tgcaattcaa ata 43 109 <210> 46

<211> 1869 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <4Ο Ο> 46 atgaaaaagg ttattatcat tggacataaa cagtctaact atcaagatgt tgaaaaggtt 60 tttcaatgtt atgggatgaa tcccccgctt ccatcaaaac gtgaaaaaat gtcccccatc 120 gaaattggcc atgtacttaa taaagtatta ccaagtcttg agcacacacc taaaaatgta 180 tctttacttt ctaataagaa aagcaaaata aaaaaaggga attcagccaa aaataaatct 240 cataagcacg ctaaaacgaa cacaatacaa acgacttcga gcatctggga taacttatct 300 ctcgatttga tgctcgcgaa tatcgagcaa aatttttggg gatggtctga tcctaatgca 360 attcaaatat tagattattg ggctaacctt gacccaaaca ttcatttcgt ctttgtttat 420 gataagccag aaaatttatt ccaatatcat agcttagaag aggctctcaa attagataaa 480 cacaccgtac aagaaaaatt tgaagagtgg caaacctaca atgaaaaaat cctaacttac 540 tttaataaat ataaagatcg tagtgtatta ctgaatacac aacaactcca aaatacgaaa 600 aaaacatcac tgtctgaaat ttataaacat atttctgcac ctgatgcatt agtcaaaaaa 660 ctgaatgaac cttctctaaa taaagagatg gaaattattg aagtaaacca agatttatct 720 caccaagaag aatgtccact gtctaacttt attgttagcc aaattataaa aaattctcct 780 actgttacgc aggtatatga agaattacag tcgcatgctg atctgcctta tatttcagaa 840 caaaaattag taaatgatgc cgattttgct ctccttgcat ggaaagatat gattcaaaaa 900 aaagtcgatg taaatcaata tcaacatgaa aaagaattag aacttagcac aataaaagaa 960 cgtcaattag aggtcacaga gagatatcaa ttgacggaac aaaaactgtc agaaacacaa 1020 aaagaaatcg aacaaattaa agatgaaaat agaaaagtaa aatctgaaaa agcaaaactc 1080 actgcatctg ttcaatcaac gagcaaaata ctttctgaga aagaaaaaga gatttcttgc 1140 ataaaaagtg 3. â â â [_. â C â 3 3 gattaaagaa gaaaaaatta aaattgatga agcataccac 1200 ttaaccaaga aaaccttgtc ggataaagaa aaagccctca aaacgcatca agatgaaatt 1260 gaagcgctca agataatttt taatgaaaat atttccgtac aagaagatat gcaagaaaaa 1320 tttcaggaag ccaataaaag ââââCâciCJcici cttgaacaag agctaaaagc catatcggat 1380 aagaaagcat tattagaaac agaaaacagc caaaaaaccc aagtatctga gtctttagaa 1440 aatgaaaata aagtgttatt agctcaactc caactcattc aagaagaatt agaaaaactt 1500 tatattgaca atcaagtatt aaaagctaaa ccacgccttt acggtgcagc tgatcgcata 1560 aaaaaccaat taacttatcg actaggttac aaaatacaaa gacatggaag aagtctattt 1620 ggtctcattt ttcttccttt catcttattt ttcacctatc tgggctttaa aagagagatg 1680 aaaaagtacg agtggaatac gctcccacca attcatgaat atgaagatgc gcatgaagcc 1740 110 aatcgcatta aaagccattt atcttataaa ttgggcgtcc tctttttgca agaaatcaac 1800 aatccgttta agtggcttac tctcccttat aaactgatta aagaaggtaa acgattcaag 1860 caaggttaa 1869

<210> 47 <211> 622 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 47

Met Lys Lys Vai Ile Ile Ile Gly His Lys Gin Ser Asn Tyr Gin Asp 1 5 10 15 Vai Glu Lys Vai Phe Gin Cys Tyr Gly Met Asn Pro Pro Leu Pro Ser 20 25 30 Lys Arg Glu Lys Met Ser Pro Ile Glu Ile Gly His Vai Leu Asn Lys 35 40 45 Vai Leu Pro Ser Leu Glu His Thr Pro Lys Asn Vai Ser Leu Leu Ser 50 55 60 Asn Lys Lys Ser Lys Ile Lys Lys Gly Asn Ser Ala Lys Asn Lys Ser 65 70 75 80 His Lys His Ala Lys Thr Asn Thr Ile Gin Thr Thr Ser Ser Ile Trp 85 90 95 Asp Asn Leu Ser Leu Asp Leu Met Leu Ala Asn Ile Glu Gin Asn Phe 100 105 110 Trp Gly Trp Ser Asp Pro Asn Ala Ile Gin Ile Leu Asp Tyr Trp Ala 115 120 125 Asn Leu Asp Pro Asn Ile His Phe Vai Phe Vai Tyr Asp Lys Pro Glu 130 135 140 Asn Leu Phe Gin Tyr His Ser Leu Glu Glu Ala Leu Lys Leu Asp Lys 145 150 155 160 His Thr Vai Gin Glu Lys Phe Glu Glu Trp Gin Thr Tyr Asn Glu Lys 165 170 175 Ile Leu Thr Tyr Phe Asn Lys Tyr Lys Asp Arg Ser Vai Leu Leu Asn 180 185 190 111

Thr Gin Gin Leu Gin Asn Thr Lys Lys Thr Ser Leu Ser Glu Ile Tyr 195 200 205 Lys His Ile Ser Ala Pro Asp Ala Leu Vai Lys Lys Leu Asn Glu Pro 210 215 220 Ser Leu Asn Lys Glu Met Glu Ile Ile Glu Vai Asn Gin Asp Leu Ser 225 230 235 240 His Gin Glu Glu Cys Pro Leu Ser Asn Phe Ile Vai Ser Gin Ile Ile 245 250 255 Lys Asn Ser Pro Thr Vai Thr Gin Vai Tyr Glu Glu Leu Gin Ser His 260 265 270 Ala Asp Leu Pro Tyr Ile Ser Glu Gin Lys Leu Vai Asn Asp Ala Asp 275 280 285 Phe Ala Leu Leu Ala Trp Lys Asp Met Ile Gin Lys Lys Vai Asp Vai 290 295 300 Asn Gin Tyr Gin His Glu Lys Glu Leu Glu Leu Ser Thr Ile Lys Glu 305 310 315 320 Arg Gin Leu Glu Vai Thr Glu Arg Tyr Gin Leu Thr Glu Gin Lys Leu 325 330 335 Ser Glu Thr Gin Lys Glu Ile Glu Gin Ile Lys Asp Glu Asn Arg Lys 340 345 350 Vai Lys Ser Glu Lys Ala Lys Leu Thr Ala Ser Vai Gin Ser Thr Ser 355 360 365 Lys Ile Leu Ser Glu Lys Glu Lys Glu Ile Ser Cys Ile Lys Ser Glu 370 375 380 Asn Thr Lys Ile Lys Glu Glu Lys Ile Lys Ile Asp Glu Ala Tyr His 385 390 395 400 Leu Thr Lys Lys Thr Leu Ser Asp Lys Glu Lys Ala Leu Lys Thr His 405 410 415 Gin Asp Glu Ile Glu Ala Leu Lys Ile Ile Phe Asn Glu Asn Ile Ser 420 425 430 Vai Gin Glu Asp Met Gin Glu Lys Phe Gin Glu Ala Asn Lys Arg Lys 435 440 445 Gin Glu Leu Glu Gin Glu Leu Lys Ala Ile Ser Asp Lys Lys Ala Leu 450 455 460 112

Leu Glu Thr Glu Asn Ser Gin Lys Thr Gin Vai Ser Glu Ser Leu Glu 465 470 475 480 Asn Glu Asn Lys Vai Leu Leu Ala Gin Leu Gin Leu Ile Gin Glu Glu 485 490 495 Leu Glu Lys Leu Tyr Ile Asp Asn Gin Vai Leu Lys Ala Lys Pro Arg 500 505 510 Leu Tyr Gly Ala Ala Asp Arg Ile Lys Asn Gin Leu Thr Tyr Arg Leu 515 520 525 Gly Tyr Lys Ile Gin Arg His Gly Arg Ser Leu Phe Gly Leu Ile Phe 530 535 540 Leu Pro Phe Ile Leu Phe Phe Thr Tyr Leu Gly Phe Lys Arg Glu Met 545 550 555 560 Lys Lys Tyr Glu Trp Asn Thr Leu Pro Pro Ile His Glu Tyr Glu Asp 565 570 575 Ala His Glu Ala Asn Arg Ile Lys Ser His Leu Ser Tyr Lys Leu Gly 580 585 590 Vai Leu Phe Leu Gin Glu Ile Asn Asn Pro Phe Lys Trp Leu Thr Leu 595 600 605 Pro Tyr Lys Leu Ile Lys Glu Gly Lys Arg Phe Lys Gin Gly 610 615 620

<210> 48 <211> 279 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 48 accgcttcct gagctacgcc aaattctcac tgccttacca gtatccgcag aacaagcaga 60 aaatgatgat tacttaaccc attttaatcg cagccaagaa ttacttaatt ggcaacattt 120 ttttattgcc cagcaacttg ctttcgttaa cgcattggaa aatcaagaat gaaaaaatgg 180 ttgaaacatt tagatttgag cactggctta caactgtctt ttctgatcag tgggctactt 240 tgtctgtttg tcggtggcgt cgggctttat acttggcac 279 113

<210> 49 <211> 1983 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 49 atgaaaaaat ggttgaaaca tttagatttg agcactggct tacaactgtc ttttctgatc 60 agtgggctac tttgtctgtt tgtcggtggc gtcgggcttt atacttggca gcaacaacgc 120 acggaaatca atttcgcact cgataaagat tttcctaaag tgcaagctgc gtttcaaaca 180 gaagaacaaa ttaatatcct ccatcatgcc tttatccatt tggtcaatgt caaaaacacc 240 aatgagaaag tcgaacgtta caaccatgca aagcaacagc tttcgacgtt aaaagaactg 300 atcattgaat tagacgaaaa tttagatgag gatttgatgg cattattaca acaacaagcc 360 tcacttttag aacaaatatc acaaaatatc acaggtacgc ttacgttaaa cgatgaactg 420 aataaaacca tttctcaaat caactggtta cataatgatt ttcacaatga attcaccgca 480 cttttgcaag aaatgagctg gcaacaatct actctggcta acaatattgt tcaacagcca 540 C0.C0.0.C0.0.0.C aaaaaatcga acaattaaaa aaactacaac aagaattatt gttagtttac 600 gatttcacta cttatgaaga gcaaattatc acggaattac gcacccagat aacagagcca 660 actgaaagca atgtcattcg actacacaat tatttgagct atttatcgtt attaattact 720 aaccgaattc agttgcttgg tcttcattcc tccacgtcaa ccattaaaca aattttagat 780 gaactgatta actttggctt aaacccacaa gcactccccg ccctatttgc aatccgtacc 840 gaactgaacc aacaacgaga acagctgatt caacaaagtg ataagatatt cgaggcattt 900 cgcgagcaaa tcagtactca aattggtaac agtaaacaac aattacattt actgcataat 960 attgtcgaaa aaagtactac attcaacggc gcattaattt tattggtgat gctatttgcg 1020 ggaatttttg tcatcggtat taacttcttt tatattcgtt tacgtctctt aaaacgtttt 1080 caacaactta accacgccgt agttcaatta accaatggcg agcccaacgt caaaatcgcc 1140 atttatggca atgatgaatt agggcggatt gctaaattat tgcgcttatt tctgttcgaa 1200 atgaatcaca aaacagaaga gttaaaatcg cgtaatcaag ttctcttaga ggaaatcgaa 1260 caccgtattg aagtacaaac cgcattagaa aatgcccaaa atgaactaac ccaagccgca 1320 aaactggctg ctgtcggtaa aaccttgact tcgattagcc atgaaattac acaaccactt 1380 aatgccatga acgcttattt gtttagtgcg aaaaaagccg tgagtaaaca aaacagtgag 1440 gcagcacttg aatacttaaa taaaatcaat catttagttg aacgcacggc gctgattgtc 1500 aaacgcttac ggcaattctc acgccaaggg agcggcaaaa tacaagctgt caatttaatg 1560 gattgtattc aaagcgcgtg ggaattattg gaatcacaac ataaaccgcg tcaaagtcag 1620 ctcatcacgc ccacagattt accactcgta ttaggtgaag atgtccttat cgaacaagtg 1680 tttgtcaatc tcttcctcaa tgctttagaa gccattgaac acacaccgcc ccaaattcat 1740 114 attgacgttg ggttggccct ggtttaggac gcctctactc taa acagcgataa taactgacaa tgtccattag tcacccataa tgcggaagac gttattgcaa tcaatccatc tgcattagtg ctctgtttat cctttttcga atggagcaat atattaaaat ggatcaccga gcagtaaatc gtcaaggatc ttaaggtggc caatggtcaa gatcaattta attgaccatt tcaacatgtt 1800 1860 1920 1980 1983

<210> 50 <211> 660 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 50

Met Lys Lys Trp Leu Lys His Leu Asp Leu Ser Thr Gly Leu Gin Leu 1 5 10 15 Ser Phe Leu Ile Ser Gly Leu Leu Cys Leu Phe Vai Gly Gly Vai Gly 20 25 30 Leu Tyr Thr Trp Gin Gin Gin Arg Thr Glu Ile Asn Phe Ala Leu Asp 35 40 45 Lys Asp Phe Pro Lys Vai Gin Ala Ala Phe Gin Thr Glu Glu Gin Ile 50 55 60 Asn Ile Leu His His Ala Phe Ile His Leu Vai Asn Vai Lys Asn Thr 65 70 75 80 Asn Glu Lys Vai Glu Arg Tyr Asn His Ala Lys Gin Gin Leu Ser Thr 85 90 95 Leu Lys Glu Leu Ile Ile Glu Leu Asp Glu Asn Leu Asp Glu Asp Leu 100 105 110 Met Ala Leu Leu Gin Gin Gin Ala Ser Leu Leu Glu Gin Ile Ser Gin 115 120 125 Asn Ile Thr Gly Thr Leu Thr Leu Asn Asp Glu Leu Asn Lys Thr Ile 130 135 140 Ser Gin Ile Asn Trp Leu His Asn Asp Phe His Asn Glu Phe Thr Ala 145 150 155 160 Leu Leu Gin Glu Met Ser Trp Gin Gin Ser Thr Leu Ala Asn Asn Ile 165 170 175 115

Vai Gin Gin Pro His Asn Lys Gin Lys Ile Glu Gin Leu Lys Lys Leu 180 185 190 Gin Gin Glu Leu Leu Leu Vai Tyr Asp Phe Thr Thr Tyr Glu Glu Gin 195 200 205 Ile Ile Thr Glu Leu Arg Thr Gin Ile Thr Glu Pro Thr Glu Ser Asn 210 215 220 Vai Ile Arg Leu His Asn Tyr Leu Ser Tyr Leu Ser Leu Leu Ile Thr 225 230 235 240 Asn Arg Ile Gin Leu Leu Gly Leu His Ser Ser Thr Ser Thr Ile Lys 245 250 255 Gin Ile Leu Asp Glu Leu Ile Asn Phe Gly Leu Asn Pro Gin Ala Leu 260 265 270 Pro Ala Leu Phe Ala Ile Arg Thr Glu Leu Asn Gin Gin Arg Glu Gin 275 280 285 Leu Ile Gin Gin Ser Asp Lys Ile Phe Glu Ala Phe Arg Glu Gin Ile 290 295 300 Ser Thr Gin Ile Gly Asn Ser Lys Gin Gin Leu His Leu Leu His Asn 305 310 315 320 Ile Vai Glu Lys Ser Thr Thr Phe Asn Gly Ala Leu Ile Leu Leu Vai 325 330 335 Met Leu Phe Ala Gly Ile Phe Vai Ile Gly Ile Asn Phe Phe Tyr Ile 340 345 350 Arg Leu Arg Leu Leu Lys Arg Phe Gin Gin Leu Asn His Ala Vai Vai 355 360 365 Gin Leu Thr Asn Gly Glu Pro Asn Vai Lys Ile Ala Ile Tyr Gly Asn 370 375 380 Asp Glu Leu Gly Arg Ile Ala Lys Leu Leu Arg Leu Phe Leu Phe Glu 385 390 395 400 Met Asn His Lys Thr Glu Glu Leu Lys Ser Arg Asn Gin Vai Leu Leu 405 410 415 Glu Glu Ile Glu His Arg Ile Glu Vai Gin Thr Ala Leu Glu Asn Ala 420 425 430 Gin Asn Glu Leu Thr Gin Ala Ala Lys Leu Ala Ala Vai Gly Lys Thr 435 440 445 116

Leu Thr Ser Ile Ser His Glu Ile Thr Gin Pro Leu Asn Ala Met Asn 450 455 460 Ala Tyr Leu Phe Ser Ala Lys Lys Ala Vai Ser Lys Gin Asn Ser Glu 465 470 475 480 Ala Ala Leu Glu Tyr Leu Asn Lys Ile Asn His Leu Vai Glu Arg Thr 485 490 495 Ala Leu Ile Vai Lys Arg Leu Arg Gin Phe Ser Arg Gin Gly Ser Gly 500 505 510 Lys Ile Gin Ala Vai Asn Leu Met Asp Cys Ile Gin Ser Ala Trp Glu 515 520 525 Leu Leu Glu Ser Gin His Lys Pro Arg Gin Ser Gin Leu Ile Thr Pro 530 535 540 Thr Asp Leu Pro Leu Vai Leu Gly Glu Asp Vai Leu Ile Glu Gin Vai 545 550 555 560 Phe Vai Asn Leu Phe Leu Asn Ala Leu Glu Ala Ile Glu His Thr Pro 565 570 575 Pro Gin Ile His Ile Asp Vai Asp Ser Asp Asn Ala Glu Asp Leu Cys 580 585 590 Leu Trp Ile Thr Asp Asn Gly Gin Gly Trp Pro Leu Thr Asp Lys Leu 595 600 605 Leu Gin Pro Phe Ser Ser Ser Lys Ser Ile Asn Leu Gly Leu Gly Leu 610 615 620 Ser Ile Ser Gin Ser Ile Met Glu Gin Cys Gin Gly Ser Leu Thr Ile 625 630 635 640 Ala Ser Thr Leu Thr His Asn Ala Leu Vai Ile Leu Lys Phe Lys Vai 645 650 655

Ala Gin His Vai 660

<210> 51 <211> 93 <212> ADN <213> Pasteurella multocida 117 <400> 51 atagaaatgg tttatttcca aatttcctca aatttcacct tggcttttaa gaattttggc 60 gttgccacta aattacagta gctgttttgt gct 93

<210> 52 <211> 525 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 52 atgacacaac aagcgatctt tgccggcggc tgtttttggt gcgttgaggc agtatttaat 60 caaattaaag gcgttgaaaa agcgacttca ggttatatta acgggacgac tgaaaatcca 120 acttacaaag aagtatgtac cggtgaaacg ggtcatgcgg aagcggtaaa agtggaattc 180 gatgcgacag tgattagtta tgaaaaatta ttagacatct tcttttctat ccataatcca 240 acccaattaa atcaccaggg cgaagatgtg ggaacgcaat atcgcacagg gatttactat 300 ttaaatgatg aacaagaaca gctggcaaat aagaaaattg cagaattaca accgcacttt 360 gccgaaaaaa ttgtcactga agtgctgcca gcacaaactt tttatcccgc agaagattat 420 caccaaggct atttattgca gaacccacaa aacagctact gtaatttagt ggcaacgcca 480 aaattcttaa aagccaaggt gaaatttgag gaaatttgga agtaa 525

<210> 53 <211> 174 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 53

Met Thr Gin Gin Ala Ile Phe Ala Gly Gly Cys Phe Trp Cys Vai Glu 1 5 10 15 Ala Vai Phe Asn Gin Ile Lys Gly Vai Glu Lys Ala Thr Ser Gly Tyr 20 25 30 Ile Asn Gly Thr Thr Glu Asn Pro Thr Tyr Lys Glu Vai Cys Thr Gly 35 40 45 118

Glu Thr Gly His Ala Glu Ala Vai 50 55 Ile Ser Tyr Glu Lys Leu Leu Asp 65 70 Thr Gin Leu Asn His Gin Gly Glu 85 Gly Ile Tyr Tyr Leu Asn Asp Glu 100 Ile Ala Glu Leu Gin Pro His Phe 115 120 Leu Pro Ala Gin Thr Phe Tyr Pro 130 135 Leu Leu Gin Asn Pro Gin Asn Ser 145 150 Lys Phe Leu Lys Ala Lys Vai Lys 165

Lys Vai Glu Phe Asp Ala Thr Vai 60 Ile Phe Phe Ser Ile His Asn Pro 75 80 Asp Vai Gly Thr Gin Tyr Arg Thr 90 95 Gin Glu Gin Leu Ala Asn Lys Lys 105 110 Ala Glu Lys Ile Vai Thr Glu Vai 125 Ala Glu Asp Tyr His Gin Gly Tyr 140 Tyr Cys Asn Leu Vai Ala Thr Pro 155 160 Phe Glu Glu Ile Trp Lys 170

<210> 54 <211> 772 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <220> <221> característica_diversa <222> (537)..(537) <223> A ou C ou G ou Τ <220> <221> característica_diversa <222> (540)..(540) <223> A ou C ou G ou Τ 119 <220>

<221> característica_diversa <222> (545)..(545) <223> A ou C ou G ou T

<22 0> <221> característica_diversa <222> (581) .. (581) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (613)..(614) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (665)..(665) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (668) .. (668) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (685) .. (686) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (700)..(704) <223> A ou C ou G ou T 120 <22 0>

<221> característica_diversa <222> (721) .. (723) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (732) .. (732) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (734)..(734) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> ( 737) .. (738) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> ( 748) .. (748) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (752) .. (752) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (755)..(755) <223> A ou C ou G ou T 121 <22 0> <221> característica_diversa <222> ( 770) . . (772) <223> A ou C ou G ou Τ <400> 54 gcataggtat cctttgcttg acataaaatg actacaggct aaagcacagg atattaaaag 60 ggcaaaagaa taagttactt ttgcgacacg catcgcaaaa gtaaaataaa tttagtcaat 120 caatttagct tgttttaaga aatactcaat gccatgttct ttgatcggta aggtgacatg 180 atcggctact gtttttagct gatgatgtgc attccccatt gcaacaccca ctcctgccgt 240 gcttaacatt tcaatatcat tcaagccatc accaaatgcc atcacatttt ccattgcaaa 300 gccaaaatgt tgaattgcac aagcgatacc cgtagctttt gagatttttt catcaaataa 360 atcaaccgag tatttatgcc agcgtaccga ttgtaatcct ttcagtacac cagaatcttg 420 gacaaattga tcttgcgtag catcataaaa agccagtatc tgaaaaacat catgactgtt 480 taaaatagtc tttatctaca tgataatgcc cttttagcgg atccaatgca tcacganctn 540 gatcngttat cgctgaaact gcggtatctg tcggtgacac ntgcgcataa caatctgatg 600 ttgatcacaa aannacgaac tctggatttt gcttagataa ggatctccga tggctatcta 660 tactnatntg acatcatgta cacanncatg tcgtgccatn nnnnacttag cgaagtgcag 720 nnnccgtcat cngncannca gacatcantc cnacntgcta ttaggataan nn 772 <210> 55 <211> 687 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 55 atgcggggat ttggtttttg ttgtgttcac tgccagcaac cgttagccat tgcacatcat 60 ggattatgta gtcgctgtaa tcagcaaatc agacgttttg cttattgtgg ccattgtggt 120 aaggaattaa cacgagatgc actacgttgt gggcattgtt tacaacataa agccagttgg 180 gatcgcatgg tgatcgttgg tcactatgtc gatcccttat cttgtttaat tcaccgtttt 240 aaattccaac atgccttctt tttagaccgt actttagcac gcctgctatt attagcgctc 300 tatcatgcaa gacgtactca tggacttatt tggccagaag tacttttgcc ggtgccttta 360 catcgtttac gtcattggca acgtggttac aatcaatctg cgttgattgc aaactatctt 420 gcgcattggc taaagatacc ctgcgatcat gattttctac agcgtattaa acatactcat 480 122 acgcaacgtg gtttaagtgc aacggaacga agaaaaaatt tacgccacgc atttcgtctt 540 catccaaaaa gtcaaacgca tcgctatcaa tctgttgcat taattgatga tgtaattaca 600 acaggtgcaa cgttgaatga gttggcactc ttattaaaaa aagcaggtgt tgagcatatt 660 caagtttggg gattagcaaa aacgtaa 687

<210> 56 <211> 228 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 56

Met Arg Gly Phe Gly Phe Cys Cys Vai His Cys Gin Gin Pro Leu Ala 1 5 10 15 Ile Ala His His Gly Leu Cys Ser Arg Cys Asn Gin Gin Ile Arg Arg 20 25 30 Phe Ala Tyr Cys Gly His Cys Gly Lys Glu Leu Thr Arg Asp Ala Leu 35 40 45 Arg Cys Gly His Cys Leu Gin His Lys Ala Ser Trp Asp Arg Met Vai 50 55 60 Ile Vai Gly His Tyr Vai Asp Pro Leu Ser Cys Leu Ile His Arg Phe 65 70 75 80 Lys Phe Gin His Ala Phe Phe Leu Asp Arg Thr Leu Ala Arg Leu Leu 85 90 95 Leu Leu Ala Leu Tyr His Ala Arg Arg Thr His Gly Leu Ile Trp Pro 100 105 110 Glu Vai Leu Leu Pro Vai Pro Leu His Arg Leu Arg His Trp Gin Arg 115 120 125 Gly Tyr Asn Gin Ser Ala Leu Ile Ala Asn Tyr Leu Ala His Trp Leu 130 135 140 Lys Ile Pro Cys Asp His Asp Phe Leu Gin Arg Ile Lys His Thr His 145 150 155 160 Thr Gin Arg Gly Leu Ser Ala Thr Glu Arg Arg Lys Asn Leu Arg His 165 170 175 Ala Phe Arg Leu His Pro Lys Ser Gin Thr His Arg Tyr Gin Ser Vai 180 185 190 123

Ala Leu Ile Asp Asp Vai Ile Thr Thr Gly Ala Thr Leu Asn Glu Leu 195 200 205 Ala Leu Leu Leu Lys Lys Ala Gly Vai Glu His Ile Gin Vai Trp Gly 210 215 220 Leu Ala Lys Thr 225

<210> 57 <211> 700 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <22 0> <221> característ ica_diversa <222> (498) .. (498 ) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característ ica_diversa <222> (540)..(540 ) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característ ica_diversa <222> (562) .. (562 ) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característ ica_diversa <222> (565) .. (565 ) <223> A ou C ou G ou T <22 0> 124

<221> característica_diversa <222> (572)..(573) <223> A ou C ou G ou T

<22 0> <221> característica_diversa <222> (577)..(577) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (584)..(584) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (587)..(588) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (591) .. (592) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (594)..(595) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (599) .. (599) <223> A ou C ou G ou T 125 <22 0>

<221> característica_diversa <222> (604)..(604) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (619) .. (619) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (623) .. (623) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (625)..(625) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (627)..(627) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (633) .. (633) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (638) .. (638) <223> A ou C ou G ou T 126 <22 0>

<221> característica_diversa <222> (644)..(645) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (653) .. (653) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (657)..(657) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (661) .. (661) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (664)..(664) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (666) .. (666) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (671)..(671) <223> A ou C ou G ou T 127 <22 0>

<221> característica_diversa <222> (673)..(674) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (678)..(678) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (682) .. (682) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (686) .. (687) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (694)..(694) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (696) .. (697) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (699) .. (700) <223> A ou C ou G ou T 128 <400> 57 tgccgaccac tccaaaggac aaaaaatgag cctatttgcg attttctatc tgttcctggc 60 gtatttatta ggatctgttt ctagtgcaat tttattgtgt cgtttagcgg ggttgcctga 120 tcctagagaa agtggttctc ataatcccgg tgcaaccaat gtattgcgta ttggtgggcg 180 ttgggtggca ttgagtgtac tcctgtttga tatgctcaaa ggtatgttac ctgtttggtt 240 aggctattat cttggtttga ctcattttga gttagggatg gtggcattag gtgcttgttt 300 agggcacatt ttcccaatct tctttaaatt taaaggcgga aaaggggtag caacggcatt 360 tggtgctatt gcgccgattt catggggtgt cgcaggcagt atgctgggca cttggttatt 420 gattttcttc gtgagtggtt attcttcgct cagtgcagtg atgaccgcgc ttctggtacc 480 tttctatgtg tggtggtnta agcccgagtt tactttccct gtcgcttagt gtgttgcttn 540 tcgattatcg ccatcatgac anatncagcg tnngtgngtg ggcnagnnga nnanngtgna 600 atanactgaa ââCââââciriCJ" atnantnagc tanttacnaa aaanngacag acngtcnttt 660 natncncgtt nanntatnga cntatnngat ggcntnncnn 700

<210> 58 <211> 606 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 58 atgagcctat ttgcgatttt ctatctgttc ctggcgtatt tattaggatc tgtttctagt 60 gcaattttat tgtgtcgttt agcggggttg cctgatccaa gagaaagtgg ttctcataat 120 cccggtgcaa ccaatgtctt gcgtattggt gggcgttggg tggcattgag tgtactcctg 180 tttgatatgc ttaaaggtat gttacctgtt tggttaggct attatcttgg tttgactcat 240 tttgaattag ggatggtggc attaggtgct tgtttagggc acatttttcc aatcttcttt 300 aaatttaaag gcggaaaagg ggtggcaacg gcatttggtg ctattgcgcc gatctcatgg 360 ggtgtcgctg gcagtatgct aggcacttgg ttattgattt tcttcgtgag tggttattct 420 tcgctcagtg cggtgatgac cgcgcttctg gtacctttct atgtgtggtg gtttaagccc 480 gagtttactt tccctgtcgc tttagtgtgt tgcttgttga tttatcgcca tcatgacaat 540 attcagcgtt tgtggcgtgg gcaagaagac aaagtgtgga ataaactgaa dddCdddddd 600 gattaa 606 <210> 59 129

<211> 201 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 59 Met Ser Leu Phe Ala Ile Phe Tyr Leu Phe Leu Ala Tyr Leu Leu Gly 1 5 10 15 Ser Vai Ser Ser Ala Ile Leu Leu Cys Arg Leu Ala Gly Leu Pro Asp 20 25 30 Pro Arg Glu Ser Gly Ser His Asn Pro Gly Ala Thr Asn Vai Leu Arg 35 40 45 <D 1—1 H Gly Gly Arg Trp Vai Ala Leu Ser Vai Leu Leu Phe Asp Met Leu 50 55 60 Lys Gly Met Leu Pro Vai Trp Leu Gly Tyr Tyr Leu Gly Leu Thr His 65 70 75 80 Phe Glu Leu Gly Met Vai Ala Leu Gly Ala Cys Leu Gly His Ile Phe 85 90 95 Pro Ile Phe Phe Lys Phe Lys Gly Gly Lys Gly Vai Ala Thr Ala Phe 100 105 110 Gly Ala Ile Ala Pro Ile Ser Trp Gly Vai Ala Gly Ser Met Leu Gly 115 120 125 Thr Trp Leu Leu Ile Phe Phe Vai Ser Gly Tyr Ser Ser Leu Ser Ala 130 135 140 Vai Met Thr Ala Leu Leu Vai Pro Phe Tyr Vai Trp Trp Phe Lys Pro 145 150 155 160 Glu Phe Thr Phe Pro Vai Ala Leu Vai Cys Cys Leu Leu Ile Tyr Arg 165 170 175 His His Asp Asn Ile Gin Arg Leu Trp Arg Gly Gin Glu Asp Lys Vai 180 185 190 Trp Asn Lys Leu Lys Asn Lys Lys Asp 195 200 130 <210> 60

<211> 188 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 60 atcccaccga taaaaccaaa tggattacgc gcagtttcca aataaacagg ggtagcacca 60 gcttgaatta atgcaccatg atggatagat ttgtgattgt tacgatcaaa gagcacaaga 120 tcacccggtg acgaagta tgagtaacgc attggtgacg actttatttg cagaagatgt cccatttaag 180 188 <210> 61 <211> 2163 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 61 atgctaaatt taaaaattgc atatagccca ttaattcgac cttattttca tacaaataga 60 gaactcgttt ctgttcaaga aacagatttc accgacattg gtgcaattat cctgagttct 120 gaagatattg aagattatat tgatagtata caagcaactg aatttaatat tccggtcttt 180 gttgctgtca ttgaaggtca atttttagat cctcaattct ttgacaaagt ctatcacgtt 240 caagatctca acaactacga catcaaccta tacagtcgcc aaattgaaac tgcggcgcgg 300 ttttacgaag aaaaaatcct cccacctttc tttaaaatgc taagtgaata tgtggaaatg 360 gggaattctg cttttgattg tccgggacac caaggtggac aatatttccg taaacatcct 420 gcaggacgtt atctctatga tttctacggt gaaaatattt tccgctcaga tatctgtaat 480 gccgatgtaa aattaggcga tttgctaatc catgaaggag ccgcttgtga tgctcaaaaa 540 cacgctgctc aagtctttaa tgctgataaa acctacttcg tcttaaatgg gacatcttct 600 gcaaataaag tcgtcaccaa tgcgttactc acaccgggtg atcttgtgct ctttgatcgt 660 aacaatcaca aatctatcca tcacggtgca ttaattcaag ctggtgctac ccctgtttat 720 ttggaaactg cgcgtaatcc atttggtttt atcggtggga tcgatagcca ttgttttgat 780 gaagattatt tgaaatcttt aattaaagat gttgcgcctg aaaaactaac acaagcacgt 840 cctttccgtt tagccgttat tcagctcggc acttatgacg gaaccatcta taatgcgcgc 900 caagtcgtag ataaaattgg tcatttatgt gactacatct tgtttgattc tgcgtgggta 960 ggttatgaac aattcattcc aatgatgaaa gattgctcac cgctcttgct tgaattaaat 1020 131 gaaaatgatc ccggcatcat cgtgacacaa tcagtacaca aacaacaagc cggcttctca 1080 caagcctcac aaattcacaa aaaagacaag cacattaaag gtcaacagcg ctactgtaat 1140 cataaacgct ttaataatgc attcatgtta cacgcctcca ccagcccatt ctaccctctt 1200 tttgccacac ttgatgtcaa tgcaaaaatt caaggtaccc ctgcgggtat tcgtttatgg 1260 catgactgtg tcaaaatcgg gatagaagca cgtaaaatgg tgctgaatag ttgtgatctg 1320 atcaaaccgt ttattccgcc ttatgtcaat ggcaaaaaat ggcaagacta cgatacagaa 1380 gaaatggcaa atgatttaac attcttcaaa ttccatgctg atgataaatg gcatcaattt 1440 gaaggctatg tagataacca atattttgtt gatccatgta aattcatgct aacgacgccg 1500 ggtattgata ttgaaacagg tgaatacgaa gacttcggtg tccctgctac gattcttgct 1560 aattatttac gtgaaaacgg cattattccg gaaaaatgtg acttaaactc aattctcttc 1620 ttattaacgc cagcagaaac cctcaccaaa atgcaaagtt tggttgcaca aattgcggca 1680 tttgaacaac acatcaaaaa agattcctta ctaaaagaag tcttaccaag tgtttatcac 1740 aacaatgaaa aacgctatga aggttatacc atccgtcgtc tttgccaaga aatgcatgat 1800 ttgtatgtca gccgtaacgt gaaaacttta caacgcaact tattcagaaa agcgaccttg 1860 cctgaatatg tgatgaatcc acatcaagct aatcttgaat ttgttcgtaa tcgtgtagaa 1920 ctggttccac taaccgaaat cgttaatcgc attgcggcag aaggagcact tccttatcca 1980 ccgggtgtgc tttgtgtcgt accgggtgaa aaatggagtc agactgcaca ggaatatttc 2040 ttagcactcg aagaaggcat taatttatta ccaggtttcg caccagaaat tcaaggggta 2100 tatctacaac aagatgcaga tggacgtatt cgtgcttatg gctacgtatt aactgaaaac 2160 taa 2163 <210> 62 <211> 720 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <40 0> 62 Met Leu Asn Leu Lys Ile Ala Tyr Ser Pro Leu Ile Arg Pro Tyr Phe 1 5 10 15 His Thr Asn Arg Glu Leu Vai Ser Vai Gin Glu Thr Asp Phe Thr Asp 20 25 30 Ile Gly Ala Ile Ile Leu Ser Ser Glu Asp Ile Glu Asp Tyr Ile Asp 35 40 45 Ser Ile Gin Ala Thr Glu Phe Asn Ile Pro Vai Phe Vai Ala Vai Ile 132 60 50 55 Glu Gly Gin Phe Leu Asp Pro Gin 65 70 Gin Asp Leu Asn Asn Tyr Asp Ile 85 Thr Ala Ala Arg Phe Tyr Glu Glu 100 Met Leu Ser Glu Tyr Vai Glu Met 115 120 Gly His Gin Gly Gly Gin Tyr Phe 130 135 Leu Tyr Asp Phe Tyr Gly Glu Asn 145 150 Ala Asp Vai Lys Leu Gly Asp Leu 165 Asp Ala Gin Lys His Ala Ala Gin 180 Phe Vai Leu Asn Gly Thr Ser Ser 195 200 Leu Leu Thr Pro Gly Asp Leu Vai 210 215 Ser Ile His His Gly Ala Leu Ile 225 230 Leu Glu Thr Ala Arg Asn Pro Phe 245 His Cys Phe Asp Glu Asp Tyr Leu 260 Pro Glu Lys Leu Thr Gin Ala Arg 275 280 Leu Gly Thr Tyr Asp Gly Thr Ile 290 295 Lys Ile Gly His Leu Cys Asp Tyr 305 310 Gly Tyr Glu Gin Phe Ile Pro Met

Phe Phe Asp Lys Vai Tyr His Vai 75 80 Asn Leu Tyr Ser Arg Gin Ile Glu 90 95 Lys Ile Leu Pro Pro Phe Phe Lys 105 110 Gly Asn Ser Ala Phe Asp Cys Pro 125 Arg Lys His Pro Ala Gly Arg Tyr 140 Ile Phe Arg Ser Asp Ile Cys Asn 155 160 Leu Ile His Glu Gly Ala Ala Cys 170 175 Vai Phe Asn Ala Asp Lys Thr Tyr 185 190 Ala Asn Lys Vai Vai Thr Asn Ala 205 Leu Phe Asp Arg Asn Asn His Lys 220 Gin Ala Gly Ala Thr Pro Vai Tyr 235 240 Gly Phe Ile Gly Gly Ile Asp Ser 250 255 Lys Ser Leu Ile Lys Asp Vai Ala 265 270 Pro Phe Arg Leu Ala Vai Ile Gin 285 Tyr Asn Ala Arg Gin Vai Vai Asp 300 Ile Leu Phe Asp Ser Ala Trp Vai 315 320 Met Lys Asp Cys Ser Pro Leu Leu 133 325

Leu Glu Leu Asn Glu Asn Asp Pro 340 His Lys Gin Gin Ala Gly Phe Ser 355 360 Asp Lys His Ile Lys Gly Gin Gin 370 375 Asn Asn Ala Phe Met Leu His Ala 385 390 Phe Ala Thr Leu Asp Vai Asn Ala 405 Ile Arg Leu Trp His Asp Cys Vai 420 Met Vai Leu Asn Ser Cys Asp Leu 435 440 Vai Asn Gly Lys Lys Trp Gin Asp 450 455 Asp Leu Thr Phe Phe Lys Phe His 465 470 Glu Gly Tyr Vai Asp Asn Gin Tyr 485 Leu Thr Thr Pro Gly Ile Asp Ile 500 Gly Vai Pro Ala Thr Ile Leu Ala 515 520 Ile Pro Glu Lys Cys Asp Leu Asn 530 535 Ala Glu Thr Leu Thr Lys Met Gin 545 550 Phe Glu Gin His Ile Lys Lys Asp 565 Ser Vai Tyr His Asn Asn Glu Lys 580 330 335 Gly Ile Ile Vai Thr Gin Ser Vai 345 350 Gin Ala Ser Gin Ile His Lys Lys 365 Arg Tyr Cys Asn His Lys Arg Phe 380 Ser Thr Ser Pro Phe Tyr Pro Leu 395 400 Lys Ile Gin Gly Thr Pro Ala Gly 410 415 Lys Ile Gly Ile Glu Ala Arg Lys 425 430 Ile Lys Pro Phe Ile Pro Pro Tyr 445 Tyr Asp Thr Glu Glu Met Ala Asn 460 Ala Asp Asp Lys Trp His Gin Phe 475 480 Phe Vai Asp Pro Cys Lys Phe Met 490 495 Glu Thr Gly Glu Tyr Glu Asp Phe 505 510 Asn Tyr Leu Arg Glu Asn Gly Ile 525 Ser Ile Leu Phe Leu Leu Thr Pro 540 Ser Leu Vai Ala Gin Ile Ala Ala 555 560 Ser Leu Leu Lys Glu Vai Leu Pro 570 575 Arg Tyr Glu Gly Tyr Thr Ile Arg 585 590 134

Arg Leu Cys Gin Glu Met His Asp Leu Tyr Vai Ser Arg Asn Vai Lys 595 600 605 Thr Leu Gin Arg Asn Leu Phe Arg Lys Ala Thr Leu Pro Glu Tyr Vai 610 615 620 Met Asn Pro His Gin Ala Asn Leu Glu Phe Vai Arg Asn Arg Vai Glu 625 630 635 6 4 0 Leu Vai Pro Leu Thr Glu Ile Vai Asn Arg Ile Ala Ala Glu Gly Ala 645 650 655 Leu Pro Tyr Pro Pro Gly Vai Leu Cys Vai Vai Pro Gly Glu Lys Trp 660 665 670 Ser Gin Thr Ala Gin Glu Tyr Phe Leu Ala Leu Glu Glu Gly Ile Asn 675 680 685 Leu Leu Pro Gly Phe Ala Pro Glu Ile Gin Gly Vai Tyr Leu Gin Gin 690 695 700 Asp Ala Asp Gly Arg Ile Arg Ala Tyr Gly Tyr Vai Leu Thr Glu Asn 705 710 715 720 <210> 63 <211> 101 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 63 gaaaaattag , agaaacaaat agaatcactc aatctacaag aagattgttt tcttttagga 60 aataaagata , atccgtatcc attaataaaa aatgctaagc t 101

<210> 64 <211> 1179 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 64 atgaatattc tatttgtaca taaaagcctt gtcgtcggag gcgctgaaag aattctaatt 60 135 aactatttaa atattctatc tggatttaat gaattcaaag ttacattact tttactagaa 120 aataaaggtg aagataacaa aaacatcaat caaatcaata aaaatattaa tatagatttt 180 attctagaca atagtgagtc aagaaaatat actgaatttg aaaataaaat aaatcagcgc 240 agcatcttca gaaaaatata taaatataaa ctatcaaaaa ttaataagat agaagaaaat 300 agaataaaaa aatacattaa aaacaaggaa tttgatttaa ttgttaattt taactcacac 360 cttgatttct tcttatcaaa caatcaaatt aacatcccga taattcgttg gatacacggt 420 caagctcatt tagatgactg gtgcaacaga agagaatggt accaaaacat tcttcctaaa 480 cacacttatt tctttgcaat tacaaaagaa atgcaaaaaa atgctcaaaa aatcttacta 540 tcttacggga tccaagaaga aagaatacat atcttataca atcctattga tattaatttt 600 gtccaggaac aatcaatcaa aaatactcat gacattcatc ataaacaata cttaattaac 660 gtttctcgtt tagatataga taagaatcat gaacaaatga ttaatattta ttatcaatta 720 aaaaaacgag gtatccaaga aaaattatat attgttgggg atggtgagtg tcgagaaaaa 780 ttagagaaac aaatagaatc actcaatcta caagaagatt gctttctttt aggaaataaa 840 gataatccgt atccattaat aaaaaatgct aagctattct tacacacctc tttgaaagag 900 gggttaccga cagttatcct agaaagcatg gcctgcggta cacctgtaat atccatggac 960 tgccctaccg gtccgaaaga aattctccga ggaggagaat ttggaggatt agtaaattta 1020 ggtgacgaga atgcttttat dCddddddCà ctctctttcc ttcaaaatca agatgaatac 1080 aaccattatt gtaataaatt agaacaagct atttctcctt ttcgctttga agaaatcagc 1140 actatactct tatctcattt acaaaaattc aatagttaa 1179 <210> 65 <211> 392 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 65 Met Asn Ile Leu Phe Vai His Lys Ser Leu Vai Vai Gly Gly Ala Glu 1 5 10 15 Arg Ile Leu Ile Asn Tyr Leu Asn Ile Leu Ser Gly Phe Asn Glu Phe 20 25 30 Lys Vai Thr Leu Leu Leu Leu Glu Asn Lys Gly Glu Asp Asn Lys Asn 35 40 45 Ile Asn Gin Ile Asn Lys Asn Ile Asn Ile Asp Phe Ile Leu Asp Asn 50 55 60 136

Ser Glu Ser Arg Lys Tyr Thr Glu Phe Glu Asn Lys Ile Asn Gin Arg 65 70 75 80 Ser Ile Phe Arg Lys Ile Tyr Lys Tyr Lys Leu Ser Lys Ile Asn Lys 85 90 95 Ile Glu Glu Asn Arg Ile Lys Lys Tyr Ile Lys Asn Lys Glu Phe Asp 100 105 110 Leu Ile Vai Asn Phe Asn Ser His Leu Asp Phe Phe Leu Ser Asn Asn 115 120 125 Gin Ile Asn Ile Pro Ile Ile Arg Trp Ile His Gly Gin Ala His Leu 130 135 140 Asp Asp Trp Cys Asn Arg Arg Glu Trp Tyr Gin Asn Ile Leu Pro Lys 145 150 155 160 His Thr Tyr Phe Phe Ala Ile Thr Lys Glu Met Gin Lys Asn Ala Gin 165 170 175 Lys Ile Leu Leu Ser Tyr Gly Ile Gin Glu Glu Arg Ile His Ile Leu 180 185 190 Tyr Asn Pro Ile Asp Ile Asn Phe Vai Gin Glu Gin Ser Ile Lys Asn 195 200 205 Thr His Asp Ile His His Lys Gin Tyr Leu Ile Asn Vai Ser Arg Leu 210 215 220 Asp Ile Asp Lys Asn His Glu Gin Met Ile Asn Ile Tyr Tyr Gin Leu 225 230 235 240 Lys Lys Arg Gly Ile Gin Glu Lys Leu Tyr Ile Vai Gly Asp Gly Glu 245 250 255 Cys Arg Glu Lys Leu Glu Lys Gin Ile Glu Ser Leu Asn Leu Gin Glu 260 265 270 Asp Cys Phe Leu Leu Gly Asn Lys Asp Asn Pro Tyr Pro Leu Ile Lys 275 280 285 Asn Ala Lys Leu Phe Leu His Thr Ser Leu Lys Glu Gly Leu Pro Thr 290 295 300 Vai Ile Leu Glu Ser Met Ala Cys Gly Thr Pro Vai Ile Ser Met Asp 305 310 315 320 Cys Pro Thr Gly Pro Lys Glu Ile Leu Arg Gly Gly Glu Phe Gly Gly 325 330 335 Leu Vai Asn Leu Gly Asp Glu Asn Ala Phe Ile Gin Lys Thr Leu Ser 137 340 345 350

Phe Leu Gin Asn Gin Asp Glu Tyr Asn His Tyr Cys Asn Lys Leu Glu 355 360 365 Gin Ala Ile Ser Pro Phe Arg Phe Glu Glu Ile Ser Thr Ile Leu Leu 370 375 380 Ser His Leu Gin Lys Phe Asn Ser 385 390

<210> 66 <211> 222 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 66 agcagagtaa gttctttttg cttgttaagt aacaaagctt attgtgacga cacgcgggtc 60 taaattgtgt tttccccagc gagtagcgta aagtaatctt gtccagcaag gatagcgatc 120 ccgacagaca tcgcttatgt aatggactga gcgtaatcta attgccgcat gccatgtttc 180 aatttctttg aactcttgta tcgtccatga aaattcaggg cg 222

<210> 67 <211> 831 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 67 atgtctgaca aaatttcacc caataagata tctgcgcttt cttctacttt attaatcact 60 ctttgggcaa aagcagttga atatgataaa gccaatccat tactgaaaga tcgcgaagca 120 gcaagaatga aaaaacagat tgactatgac tttcaaaagt ttgaatctgc tcatttatca 180 caagtgggat gttgtggacg cgcaaaatta tttgatcaag aaagcttaaa atttctttca 240 cagcaccaag acgcggttgt tgtgcagctt ggtgcgggct tagatgcacg ctttgaacgc 300 ttaggcaaac cacaagtcag tgcgtggtat gatttagact tacctgaagt catcaatata 360 cgtcgccaac ttttaccaga aacgagtaat cattatttgg ctgactcact tttcaataca 420 138 gattggatga ttgatgtttt cctaacagca cacgatgcac gagatcaaag agcgatgtct ggaaaacaca aaacagttag ttcctaaaga caatgatttt tcaaaaaaat aaattgaaac gtcgggatcg atttagaccc tcaacataac acaagtcaaa cgatattgtg agacagtcaa atggcatgcg ctatccttgc gcgtgtcgtc aaacccgttt cagtttattg cccccaatgg gaacgccctg gcaattaaat tggacaagat acaataagct tattaattct cctctgtggc cagtcggtcg aattttcatg tacgctcagt tactttacgc ttgttactta tgaaggcgta 480 tgaaaactta 540 tagtaaatac 600 gacaatacaa 660 ccattacata 720 tactcgctgg 780 a 831

<210> 68 <211> 276 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 68

Met Ser Asp Lys Ile Ser Pro Asn Lys Ile Ser Ala Leu Ser Ser Thr 1 5 10 15 Leu Leu Ile Thr Leu Trp Ala Lys Ala Vai Glu Tyr Asp Lys Ala Asn 20 25 30 Pro Leu Leu Lys Asp Arg Glu Ala Ala Arg Met Lys Lys Gin Ile Asp 35 40 45 Tyr Asp Phe Gin Lys Phe Glu Ser Ala His Leu Ser Gin Vai Gly Cys 50 55 60 Cys Gly Arg Ala Lys Leu Phe Asp Gin Glu Ser Leu Lys Phe Leu Ser 65 70 75 80 Gin His Gin Asp Ala Vai Vai Vai Gin Leu Gly Ala Gly Leu Asp Ala 85 90 95 Arg Phe Glu Arg Leu Gly Lys Pro Gin Vai Ser Ala Trp Tyr Asp Leu 100 105 110 Asp Leu Pro Glu Vai Ile Asn Ile Arg Arg Gin Leu Leu Pro Glu Thr 115 120 125 Ser Asn His Tyr Leu Ala Asp Ser Leu Phe Asn Thr Asp Trp Met Lys 130 135 140 Thr Vai Ser Gin His Asn Lys Pro Vai Leu Leu Ile Leu Glu Gly Vai 145 150 155 160 139

Leu Met Phe Phe Pro Lys Glu Gin Vai Lys Gin Phe Ile Ala Ser Vai 165 170 175 Ala Glu Asn Leu Pro Asn Ser Thr Met Ile Phe Asp Ile Vai Pro Pro 180 185 190 Met Ala Vai Gly Arg Ser Lys Tyr His Asp Ala Leu Lys Lys Ile Asp 195 200 205 Ser Gin Glu Arg Pro Glu Phe Ser Trp Thr Ile Gin Glu Ile Lys Glu 210 215 220 Ile Glu Thr Trp His Ala Ala Ile Lys Leu Arg Ser Vai His Tyr Ile 225 230 235 240 Ser Asp Vai Cys Arg Asp Arg Tyr Pro Cys Trp Thr Arg Leu Leu Tyr 245 250 255 Ala Thr Arg Trp Gly Lys His Asn Leu Asp Pro Arg Vai Vai Thr Ile 260 265 270

Ser Phe Vai Thr 275

<210> 69 <211> 55 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 69 tcgatgaaaa acgccattat ggtcatggaa tcagctgcaa aattctcact ccaca 55

<210> 70 <211> 1314 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 70 atggtattac actatacccc tcatcaatcc gccccacgca acacaacatt cgttgcggaa 60 attcttgatc ttgattatca aggacgtggt gtagccaaag tacaaggcaa aacgtggttc 120 140 attgaaaatg cactgccaca agaaaaagtg gaagtgcgca ttgtcgatga aaaacgccat 180 tatggtcatg ggatcagctg caaaattctc actccacatc cagatcgcca gtcagcaaaa 240 tgtgcttact atgcccagtg cggtggttgc caaagtcaac atattccaat tgacatgcaa 300 cgtcaggcta aacaacaagc cttattccaa cgcttacaac aattacaacc tcaagcgacc 360 ttcatgccca tgatcgtcgc agcgccttgg cattatcgcc gtcgtgtgcg tttaagcgtg 420 cggtttcatc ccaaaagcaa acaacttgcg atgggtttgc gtcagagaaa tactcaacaa 480 atcgtgaatc tgcagcattg tgatgtgctt gaaatcccct taagtcaact cttacctaaa 540 ctacatttgt tgttttcaac atggtccctg cctaaaaacc tagggcatgt ggagttagtg 600 catgcggata atggaattgc gatgttatta cgccatacag gaaatttagc gcaaactgac 660 cgcactttat taaccaattt tgcgcaacaa gaaaacttaa tgttgtttgt acaagatgat 720 caacagatca cccaactaca tggcgaggca ccttactaca tactacgcga tggcaccaaa 780 ttacagtttg atatccgtga ctttatccaa gtgaatgctg ttgtaaatca gaaaatgatt 840 gatactgctc ttgagtggtt ggaactcaca tcgaacgata acgtattaga tttgttttgt 900 ggtatgggaa acttcaccct cccaatcagt cgtcaggtca atcaggttgt gggcattgaa 960 ggcgtaggag aaatggtgga gaaagcaaaa cgaaatgcgg aacaaaatca atgtgataat 1020 gtccaattct atcaggcgaa tttagatcaa ccttttgtgc aacaacattg ggcgagccaa 1080 cattttaata aaattttact ggacccacca cgtacaggcg cggcatttgc cttacatgcc 1140 ttatgtgaat tgggcgcaga aaaaatctta tatgtttcct gcaatcctgc tacattagta 1200 cgtgatacag cgattttatt acaatttaac taccgactta agaaagtcgc aatgatcgat 1260 atgttcccca atacaggaca tttagaatcc atcagtttat ttgaaaaaga atag 1314

<210> 71 <211> 437 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 71

Gin Ser Ala Pro Arg Asn Thr Thr 10 15 Asp Tyr Gin Gly Arg Gly Vai Ala 25 30 Ile Glu Asn Ala Leu Pro Gin Glu 45 Glu Lys Arg His Tyr Gly His Gly

Met Vai Leu His Tyr Thr Pro His 1 5

Phe Vai Ala Glu Ile Leu Asp Leu 20

Lys Vai Gin Gly Lys Thr Trp Phe 35 40

Lys Vai Glu Vai Arg Ile Vai Asp 141 50 55 60

Ile Ser Cys Lys Ile Leu Thr Pro His Pro Asp Arg Gin Ser Ala Lys 65 70 75 80 Cys Ala Tyr Tyr Ala Gin Cys Gly Gly Cys Gin Ser Gin His Ile Pro 85 90 95 Ile Asp Met Gin Arg Gin Ala Lys Gin Gin Ala Leu Phe Gin Arg Leu 100 105 110 Gin Gin Leu Gin Pro Gin Ala Thr Phe Met Pro Met Ile Vai Ala Ala 115 120 125 Pro Trp His Tyr Arg Arg Arg Vai Arg Leu Ser Vai Arg Phe His Pro 130 135 140 Lys Ser Lys Gin Leu Ala Met Gly Leu Arg Gin Arg Asn Thr Gin Gin 145 150 155 160 Ile Vai Asn Leu Gin His Cys Asp Vai Leu Glu Ile Pro Leu Ser Gin 165 170 175 Leu Leu Pro Lys Leu His Leu Leu Phe Ser Thr Trp Ser Leu Pro Lys 180 185 190 Asn Leu Gly His Vai Glu Leu Vai His Ala Asp Asn Gly Ile Ala Met 195 200 205 Leu Leu Arg His Thr Gly Asn Leu Ala Gin Thr Asp Arg Thr Leu Leu 210 215 220 Thr Asn Phe Ala Gin Gin Glu Asn Leu Met Leu Phe Vai Gin Asp Asp 225 230 235 240 Gin Gin Ile Thr Gin Leu His Gly Glu Ala Pro Tyr Tyr Ile Leu Arg 245 250 255 Asp Gly Thr Lys Leu Gin Phe Asp Ile Arg Asp Phe Ile Gin Vai Asn 260 265 270 Ala Vai Vai Asn Gin Lys Met Ile Asp Thr Ala Leu Glu Trp Leu Glu 275 280 285 Leu Thr Ser Asn Asp Asn Vai Leu Asp Leu Phe Cys Gly Met Gly Asn 290 295 300 Phe Thr Leu Pro Ile Ser Arg Gin Vai Asn Gin Vai Vai Gly Ile Glu 305 310 315 320 Gly Vai Gly Glu Met Vai Glu Lys Ala Lys Arg Asn Ala Glu Gin Asn 142 325 330 335 Gin Cys Asp Asn Vai Gin Phe Tyr Gin Ala Asn Leu Asp Gin Pro Phe 340 345 350 Vai Gin Gin His Trp Ala Ser Gin His Phe Asn Lys Ile Leu Leu Asp 355 360 365 Pro Pro Arg Thr Gly Ala Ala Phe Ala Leu His Ala Leu Cys Glu Leu 370 375 380 Gly Ala Glu Lys Ile Leu Tyr Vai Ser Cys Asn Pro Ala Thr Leu Vai 385 390 395 400 Arg Asp Thr Ala Ile Leu Leu Gin Phe Asn Tyr Arg Leu Lys Lys Vai 405 410 415 Ala Met Ile Asp Met Phe Pro Asn Thr Gly His Leu Glu Ser Ile Ser 420 425 430 Leu Phe Glu Lys Glu 435

<210> 72 <211> 598 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <22 0> <221> característica_diversa <222> (412) .. (412) <223> A ou C ou G ou Τ <22 0> <221> característica_diversa <222> (451) .. (451) <223> A ou C ou G ou Τ <22 0> <221> característica_diversa 143 <222> (471) .. (471) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (503) .. (503) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (546) .. (546) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (562)..(564) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (576)..(576) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (588) .. (590) <223> A ou C ou G ou T <22 0> <221> característica_diversa <222> (595)..(595) <223> A ou C ou G ou T <40 0> 72 tcagtacttt gcttgcttaa gcaagtaaaa agtgcggtca tttttagcaa aaataaaggg 60 144 cttctgtttg gaagcccttt gtgtattgca agttagtctt ttttatgagt gtattcttta 120 tacatcgctt caatttgtgc tttatagcgt tccaaaatca ctttacgacg gagtttcaat 180 gtcggagtaa tttcttccat ttttgtggta aatgcctgag gtaataaagt gaatttttta 240 atttgctcaa agctaggcaa ttctttttgt aaatcattaa tacgctgttc aaacatttga 300 agaatatcag aatgtttaat gagttctaaa cgatcgtgat attttatatt taattgtttg 360 gcgtattctt caagactatt aaagcaaggc acaataagcg ctgagacata tnttttggca 420 tccgcaatga ctgcaatttg ttcaataaat ntatctttac ccactttggt ntcaatatat 480 tgtggagcaa tatattttcc atnggaggtt ttcattaact ctttgatacg atctgtaata 540 tataantacc ttgtggatca annncccagc atcacnagtt tttaaaannn gtctnctg 598 <210> 73 <211> 561 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <22 0> <221> característica_< liversa <222> (560) .. (561) <223> A ou C ou G ou ' Γ <40 0> 73 gagcaaagta gctgtccgcc gtatattgta agaagttggc ataagaatta acgcctaact 60 tgaccgcatc gcccatcgga tctaaacgac ctacatgtac gccggtacct ttacttaaac 120 tttcaattac ttttggtgtg aattgtggct ccgcaaataa gcaattcact ttatgttctt 180 taatttcccg cttaattttc gctaacgtct tagctcccgg cgccaccaac ggattaattg 240 tgaaataacc ggtttgtttt aagccataag cattattgaa ataactatac gcatcatgga 300 aaacataaaa ccctttttct ttaactggtg cgagttgctg tttaattttc tcgctttgtt 360 cagctaaagt gcggttaaat tctgccaaat tttgcgcaat tttctctttt ctctctggat 420 aagcttccgt taaacgtgtt gctaagcgtg tcgcgacaat tttgctaatc tctggcgaat 480 accacacatg ccagttagta ctgtgatcat gctcgtgttc atgtgcgtgg tcatgtttat 540 gctcatggtc gtgtttgtgn n 561 <210> 74 145

<211> 575 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <22 0> <221> característica_diversa <222> (574)..(575) <223> A ou C ou G ou Τ <400> 74 ttacttgctt aagcaagcaa agtagctgtc cgccgtatat tgtaagaagt tggcataaga 60 attaacgcct aacttgaccg catcgcccat cggatctaaa cgacctacat gtacgccggt 120 acctttactt aaactttcaa ttacttttgg tgtgaattgt ggctccgcaa ataagcaatt 180 cactttatgt tctttaattt cccgcttaat tttcgctaac gtcttagctc ccggcgccac 240 caacggatta attgtgaaat aaccggtttg ttttaagcca taagcattat tgaaataact 300 atacgcatca tggaaaacat aaaacccttt ttctttaact ggtgcgagtt gctgtttaat 360 tttctcgctt tgttcagcta aagtgcggtt aaattctgcc aaattttgcg caattttctc 420 ttttctctct ggataagctt ccgttaaacg tgttgctaag cgtgtcgcga caattttgct 480 aatctctggc gaataccaca catgccagtt agtactgtga tcatgctcgt gttcatgtgc 540 gtggtcatgt ttatgctcat ggtcgtgttt gtgnn 575 <210> 75 <211> 1101 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 75 atggcacgtt tcattaagac attgaaaaaa accgcattag cggcaagtat tgcttcttta 60 gcaactgtgg caaatgcgac gattgtgact tcgattaaac cattaggttt tattgcttca 120 tcgattgctg atggggtaac agacactgaa gtattagttc ctgcgggtgc ttcaccacat 180 gattacagct taaaaccctc agatatacaa aaattacagg gggcggaatt aatcctgtgg 240 gtcggggaag acattgatgc tttccttgat aaaacattac gtccaatgcc ttttaaaaag 300 gtgttaagta ttgctgattt tgcggaaatt ggtggtttgc ttgaaggtga agcacatgat 360 cataaacatg agcatgatca tactcacaaa cacgaccacg atcacaaaca cgaccacgat 420 146 cacaaacacg accacgatca caaacatgag cacgatcata aacacgacca cgatcacaaa 480 catgaccacg atcacaaaca cgaccatgct cacaagcatg agcacgatca caaacacgac 540 catgagcata aacatgacca cgcacatgga cacgagcatg atcacagtac taactggcat 600 gtgtggtatt cgccagagat tagcaaaatt gtcgcgacac gcttagcaac acgtttaacg 660 gaagcttatc cagagaaaaa agagaaaatt gcgcaaaatt tggcagaatt taaccgtact 720 ttagctgaac aaagcgagaa aattaaacag caactcgcac cagttaaaga aaaagggttt 780 tatgttttcc atgatgcgta tagctatttc aataatgctt atggcttaaa acaaaccggt 840 tatttcacaa ttaatccgtt ggtggcgccg ggagctaaga cgttagcgaa aattaagcag 900 gaaattaaag aacataaagt gaattgctta tttgcggagc cacaattcac accaaaagta 960 attgaaagtt taagtaaagg taccggtgta catgtaggtc gtttagatcc gatgggcgat 1020 gcggtcaagt taggcgttaa ttcttatgcc aacttcttac aatatacggc ggacagctac 1080 tttgcttgct taagcaagta a 1101

<210> 76 <211> 366 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 76

Met Ala Arg Phe Ile Lys Thr Leu Lys Lys Thr Ala Leu Ala Ala Ser 1 5 10 15 Ile Ala Ser Leu Ala Thr Vai Ala Asn Ala Thr Ile Vai Thr Ser Ile 20 25 30 Lys Pro Leu Gly Phe Ile Ala Ser Ser Ile Ala Asp Gly Vai Thr Asp 35 40 45 Thr Glu Vai Leu Vai Pro Ala Gly Ala Ser Pro His Asp Tyr Ser Leu 50 55 60 Lys Pro Ser Asp Ile Gin Lys Leu Gin Gly Ala Glu Leu Ile Leu Trp 65 70 75 80 Vai Gly Glu Asp Ile Asp Ala Phe Leu Asp Lys Thr Leu Arg Pro Met 85 90 95 Pro Phe Lys Lys Vai Leu Ser Ile Ala Asp Phe Ala Glu Ile Gly Gly 100 105 110 Leu Leu Glu Gly Glu Ala His Asp His Lys His Glu His Asp His Thr 147 125 115 120 His Lys His Asp His Asp His Lys 130 135 His Asp His Lys His Glu His Asp 145 150 His Asp His Asp His Lys His Asp 165 His Lys His Asp His Glu His Lys 180 His Asp His Ser Thr Asn Trp His 195 200 Lys Ile Vai Ala Thr Arg Leu Ala 210 215 Glu Lys Lys Glu Lys Ile Ala Gin 225 230 Leu Ala Glu Gin Ser Glu Lys Ile 245 Glu Lys Gly Phe Tyr Vai Phe His 260 Ala Tyr Gly Leu Lys Gin Thr Gly 275 280 Ala Pro Gly Ala Lys Thr Leu Ala 290 295 His Lys Vai Asn Cys Leu Phe Ala 305 310 Ile Glu Ser Leu Ser Lys Gly Thr 325 Pro Met Gly Asp Ala Vai Lys Leu 340 Leu Gin Tyr Thr Ala Asp Ser Tyr 355 360

His Asp His Asp His Lys His Asp 140 His Lys His Asp His Asp His Lys 155 160 His Ala His Lys His Glu His Asp 170 175 His Asp His Ala His Gly His Glu 185 190 Vai Trp Tyr Ser Pro Glu Ile Ser 205 Thr Arg Leu Thr Glu Ala Tyr Pro 220 Asn Leu Ala Glu Phe Asn Arg Thr 235 240 Lys Gin Gin Leu Ala Pro Vai Lys 250 255 Asp Ala Tyr Ser Tyr Phe Asn Asn 265 270 Tyr Phe Thr Ile Asn Pro Leu Vai 285 Lys Ile Lys Gin Glu Ile Lys Glu 300 Glu Pro Gin Phe Thr Pro Lys Vai 315 320 Gly Vai His Vai Gly Arg Leu Asp 330 335 Gly Vai Asn Ser Tyr Ala Asn Phe 345 350 Phe Ala Cys Leu Ser Lys 365 <210> 77 148

<211> 70 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 77 gctttgcatt tgagtcataa aatagtacag tacggtaatt ttctggatga ataccttttt 60 tcatattggc 70

<210> 78 <211> 267 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 78 atgaaaaaag gtattcatcc agaaaattac cgtactgtac tattttatga ctcaaatgca 60 aagcaaggtt ttttaatccg ctcttgcgcc agaaccacaa cgaccatgaa atgggaagat 120 ggtcatgaat atcctgtctt tatgtgtgat acctcctcag catcacaccc gtactataca 180 ggtaaaacac gtcaaattgc gaatgaaggt cgtgcaagcg actttgtcaa tcgctacggc 240 aaatttggca cattaaaatc aaaataa 267

<210> 79 <211> 88 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 79

Met Lys Lys Gly Ile His Pro Glu Asn Tyr Arg Thr Vai Leu Phe Tyr 1 5 10 15 Asp Ser Asn Ala Lys Gin Gly Phe Leu Ile Arg Ser Cys Ala Arg Thr 20 25 30 Thr Thr Thr Met Lys Trp Glu Asp Gly His Glu Tyr Pro Vai Phe Met 35 40 45 149

Cys Asp Thr Ser Ser Ala Ser His Pro Tyr Tyr Thr Gly Lys Thr Arg 50 55 60

Gin Ile Ala Asn Glu Gly Arg Ala Ser Asp Phe Vai Asn Arg Tyr Gly 65 70 75 80

Lys Phe Gly Thr Leu Lys Ser Lys 85

<210> 80 <211> 506 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 80 tgctccaact ctactttcaa cctatcctct gtccatgttc ttggaaacat cgtggataca 60 cctttatttc cctttttctc caaaacttcg gggcagtagg agatcaacac cctcgcttca 120 tagaccccat ttgggtattc cttaatcacc ttatctacaa tcacattgcc taagatggtg 180 tgtcttaacg ctcccatgta aaaaaatggt caatttctca aaacaaaact ttttcaaaat 240 tgaccgcact ttttcttcta actgttcctt ttcagaaaat caacaccttc acttaagaaa 300 acccctacgc atatttctcc atcagggcaa tgatagcttg agagctagga cgatgggact 360 catatttttt tatcccctca agtaattcat gttgtccatt aaaataatgt acgtttccac 420 ctttatccag catcaattta agcagatcta gcgctttcag ggacataacc tgtcattgcc 480 aatggaatca cttggtctcg atttgg 506 <210> 81 <211> 348 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 81 atgagagcgt taagacacac caccttaggc aatgtgattg tggataaggt gattaaggaa 60 tacccaaatg gggtttatga agcgagggtg ttgatcccta acccgaaagc ccaaaccgat 120 cctaccgccc cgaagttttt ggagaaaagg ggaaataaag gtgtatccac gatgtttcca 180 agaacatgga cagaggatag gttgaaagtg gagttggagc atgcgtttaa aaatggtata 240 cacgataaag ggcaagtatg gactgggata actaaatcag gtgttaaagt acaatggtat 300 agaagtgaaa aaggtgagat aaccagtgtt catccaatct tagaataa 348 150 <210> 82

<211> 115 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 82

Met Arg Ala Leu Arg His Thr Thr Leu Gly Asn Vai Ile Vai Asp Lys 1 5 10 15 Vai Ile Lys Glu Tyr Pro Asn Gly Vai Tyr Glu Ala Arg Vai Leu Ile 20 25 30 Pro Asn Pro Lys Ala Gin Thr Asp Pro Thr Ala Pro Lys Phe Leu Glu 35 40 45 Lys Arg Gly Asn Lys Gly Vai Ser Thr Met Phe Pro Arg Thr Trp Thr 50 55 60 Glu Asp Arg Leu Lys Vai Glu Leu Glu His Ala Phe Lys Asn Gly Ile 65 70 75 80 His Asp Lys Gly Gin Vai Trp Thr Gly Ile Thr Lys Ser Gly Vai Lys 85 90 95 Vai Gin Trp Tyr Arg Ser Glu Lys Gly Glu Ile Thr Ser Vai His Pro 100 105 110

Ile Leu Glu 115

<210> 83 <211> 243 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 83 gccgatatgg tacgtgtcga cattatgatc aatggtgagc gtgtcgatgc gttagcgtta 60 atcgtgcata aagataatgc accttatcgt ggtcgtgaat tagtggaaaa aatgcgtgag 120 ctcattccac gtcaacaatt tgatattgcg attcaagcgg cgattggtaa ccacattatt 180 151 gcccgttcta ccgtcaaaca attacgtaaa aacgtattag caaaatgtta tggtggtgac 240 gtg 243

<210> 84 <211> 1797 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 84 atgaagaata tacgtaactt ttctattatt gcacacattg accacggtaa atcgacactc 60 tctgaccgcc ttattcaaac ttgcggtggc ttatctgatc gtgaaatgga agcccaagtg 120 ttggattcca tggatcttga acgtgaacgt gggattacga tcaaagcaca aagtgtgacc 180 ttaaattaca aagcgaaaga tggcgaaacc tatcaattaa atttcatcga tacgccaggt 240 cacgttgact tctcttatga agtatcgcgt tctttagccg cttgtgaagg cgcattatta 300 gtggtggatg cgggacaagg tgtcgaggca caaactttgg ctaactgcta taccgcaatt 360 gaaatgaatt tagaagtggt gccgatttta aacaaaatcg acttgcccgc ggcagatcct 420 gaacgcgttg cagaagaaat tgaagacatt gtcggtattg acgcgatgga agcggtgcgc 480 tgttcagcaa aaaccggtgt gggtattgaa gatgtgttgg aagaaattgt gcataaaatc 540 cctgcacccg aaggggatcc gaatgcacca ttacaagcct tgattatcga ctcgtggttt 600 gataactact taggcgtagt atctttagtg cgcattaaaa acggcacatt acgcaaaggc 660 gataaaatca aagtgatgtc tacagggcaa tcttacaatg tggatcgtct tggtattttc 720 accccaaaac aagtcgatac caccatttta aattgtggtg aagtgggttg ggtggtgtgc 780 gccattaaag atattttagg ggcacccgtg ggtgatacgc ttacttcgca caacaatcca 840 gcttcttctg tcctgccggg ttttaagaaa gttaagccac aggtgtatgc cggtttattc 900 ccaattagct ctgatgatta tgaagcattc cgtgatgcgc tcggtaaact tagtctaaac 960 gatgcgtcat tattctatga accagaaaac tccaccgcac ttggtttcgg tttccgttgt 1020 ggtttcttag gacttctcca catggagatt attcaagagc gtttagagcg cgaatacgat 1080 cttgatctga ttaccacagc accgacagta gtgtatgaag tggaaaaaac cgacggtgaa 1140 gtgatttatg tggatagccc atcaaaatta ccgccactca acaacattac ggagattcgt 1200 gaaccgattg cagaatgtaa catgctgtta ccacaaacct acttaggtaa cgtcattacg 1260 ctctgtgtag aaaaacgcgg tgtacaaacc aatatggttt accatggtaa ccaagtggca 1320 ttgacctatg aaatcccaat gggcgaagtg gtactggatt tcttcgaccg cttaaaatca 1380 152 acttctcgtg gtacgtgtcg aaagataatg cgtcaacaat actgtcaaac

ââCfââcicicÍâC gtcgaagtac gttatgcttc acattatgat caccttatcg ttgatattgc aattacgtaa tcttacagaa cacaagaagc cttagattat caatggtgag tggtcgtgaa gattcaagcg aaacgtatta

âCâââciciCJcLcL cttcttagcg ggtttcaaac cgtgtcgatg ttagtggaaa gcgattggta gcaaaatgtt ggtaaaaaac attttacatg gtttccaagc cgttagcgtt aaatgcgtga accacattat atggtggtga gcatgaagtc tcggaaaaga cgccgatatg aatcgtgcat gctcattcca tgcccgttct cgttagccgt tttgggtaac caaataa 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1797

<210> 85 <211> 598 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 85

Met Lys Asn Ile Arg Asn Phe Ser Ile Ile Ala His Ile Asp His Gly 1 5 10 15 Lys Ser Thr Leu Ser Asp Arg Leu Ile Gin Thr Cys Gly Gly Leu Ser 20 25 30 Asp Arg Glu Met Glu Ala Gin Vai Leu Asp Ser Met Asp Leu Glu Arg 35 40 45 Glu Arg Gly Ile Thr Ile Lys Ala Gin Ser Vai Thr Leu Asn Tyr Lys 50 55 60 Ala Lys Asp Gly Glu Thr Tyr Gin Leu Asn Phe Ile Asp Thr Pro Gly 65 70 75 80 His Vai Asp Phe Ser Tyr Glu Vai Ser Arg Ser Leu Ala Ala Cys Glu 85 90 95 Gly Ala Leu Leu Vai Vai Asp Ala Gly Gin Gly Vai Glu Ala Gin Thr 100 105 110 Leu Ala Asn Cys Tyr Thr Ala Ile Glu Met Asn Leu Glu Vai Vai Pro 115 120 125 Ile Leu Asn Lys Ile Asp Leu Pro Ala Ala Asp Pro Glu Arg Vai Ala 130 135 140 Glu Glu Ile Glu Asp Ile Vai Gly Ile Asp Ala Met Glu Ala Vai Arg 145 150 155 160 153

Cys Ser Ala Lys Thr Gly Vai Gly 165 Vai His Lys Ile Pro Ala Pro Glu 180 Ala Leu Ile Ile Asp Ser Trp Phe 195 200 Leu Vai Arg Ile Lys Asn Gly Thr 210 215 Vai Met Ser Thr Gly Gin Ser Tyr 225 230 Thr Pro Lys Gin Vai Asp Thr Thr 245 Trp Vai Vai Cys Ala Ile Lys Asp 260 Thr Leu Thr Ser His Asn Asn Pro 275 280 Lys Lys Vai Lys Pro Gin Vai Tyr 290 295 Asp Asp Tyr Glu Ala Phe Arg Asp 305 310 Asp Ala Ser Leu Phe Tyr Glu Pro 325 Gly Phe Arg Cys Gly Phe Leu Gly 340 Glu Arg Leu Glu Arg Glu Tyr Asp 355 360 Thr Vai Vai Tyr Glu Vai Glu Lys 370 375 Asp Ser Pro Ser Lys Leu Pro Pro 385 390 Glu Pro Ile Ala Glu Cys Asn Met 405 Asn Vai Ile Thr Leu Cys Vai Glu 420 Vai Tyr His Gly Asn Gin Vai Ala

Ile Glu Asp Vai Leu Glu Glu Ile 170 175 Gly Asp Pro Asn Ala Pro Leu Gin 185 190 Asp Asn Tyr Leu Gly Vai Vai Ser 205 Leu Arg Lys Gly Asp Lys Ile Lys 220 Asn Vai Asp Arg Leu Gly Ile Phe 235 240 Ile Leu Asn Cys Gly Glu Vai Gly 250 255 Ile Leu Gly Ala Pro Vai Gly Asp 265 270 Ala Ser Ser Vai Leu Pro Gly Phe 285 Ala Gly Leu Phe Pro Ile Ser Ser 300 Ala Leu Gly Lys Leu Ser Leu Asn 315 320 Glu Asn Ser Thr Ala Leu Gly Phe 330 335 Leu Leu His Met Glu Ile Ile Gin 345 350 Leu Asp Leu Ile Thr Thr Ala Pro 365 Thr Asp Gly Glu Vai Ile Tyr Vai 380 Leu Asn Asn Ile Thr Glu Ile Arg 395 400 Leu Leu Pro Gin Thr Tyr Leu Gly 410 415 Lys Arg Gly Vai Gin Thr Asn Met 425 430 Leu Thr Tyr Glu Ile Pro Met Gly 154 435 440 445

Glu Vai Vai Leu Asp Phe Phe Asp Arg Leu Lys Ser Thr Ser Arg Gly 450 455 460 Tyr Ala Ser Leu Asp Tyr Gly Phe Lys Arg Phe Gin Ala Ala Asp Met 465 470 475 480 Vai Arg Vai Asp Ile Met Ile Asn Gly Glu Arg Vai Asp Ala Leu Ala 485 490 495 Leu Ile Vai His Lys Asp Asn Ala Pro Tyr Arg Gly Arg Glu Leu Vai 500 505 510 Glu Lys Met Arg Glu Leu Ile Pro Arg Gin Gin Phe Asp Ile Ala Ile 515 520 525 Gin Ala Ala Ile Gly Asn His Ile Ile Ala Arg Ser Thr Vai Lys Gin 530 535 540 Leu Arg Lys Asn Vai Leu Ala Lys Cys Tyr Gly Gly Asp Vai Ser Arg 545 550 555 560 Lys Lys Lys Leu Leu Gin Lys Gin Lys Glu Gly Lys Lys Arg Met Lys 565 570 575 Ser Leu Gly Asn Vai Glu Vai Pro Gin Glu Ala Phe Leu Ala Ile Leu 580 585 590 His Vai Gly Lys Asp Lys 595

<210> 86 <211> 147 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 86 60 120 aaaagttcga cttccgtaat cggtttttta gttaattgtt caatattgcg taataaacga cgttctcttg gttcaacaaa taacaatgca cgccctgtac gtccggcacg ccctgtacga ccaatacggt ggacataaga ctcagca 155 147 <210> 87

<211> 1833 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 87 atgactgaaa caacaatgac tttcaatgat ttaggcttgc ctgaatttct tcttaacgcc 60 gtctctgact taggctttga aaccccttct ccaattcaac aaagttgtat cccaaacctg 120 ttaaatgggc atgatgtgct aggtatggca caaactggaa gtggtaaaac cgccgccttt 180 tcactccctt tattagcaca aattgattta gataaaaaat atccacaaat gttagtgatg 240 gcaccgacac gtgagttagc catccaagta gcagatgcct gtgagcactt ttgcaaatat 300 gcgaaaaata ccaatattgt taccctttat ggtggtcaac gctatgacat tcaattgcgt 360 gctttacgcc aaggtgctca ggttgtagtg gggacacctg gtcgtatttt agatcacatt 420 cgtcgtggca ctttagattt gtctaattta cgttttatgg tgttagatga agcggacgaa 480 atgttacgta tgggctttat tgatgatgtt gaaacggtga tggcagaatt accagaacaa 540 catcagactg cacttttctc agccaccatg ccagatccaa ttcgtcgtat tactaagcgt 600 tttatgaaag atccgaaaga gattaaaatt aaatcgacgc aaacgacgaa tccagatatt 660 acacagagtt gttggtatgt gcatggtttc cgtaaaaatg atgccttatt acgtttctta 720 gaagtagaaa aatttgatgc cgcgattatc tttactcgta ctaaaacggg gacattagat 780 gtaacggaat tgttggaaaa acatggtttc cgtgccgcag cattaaatgg cgatatgaca 840 caacaattac gtgaacaaac gcttgatcgt ttaagaaatg gtagtttaga tatccttgtg 900 gcaaccgatg tggcggcgcg tggtttagat gtggagcgca ttagcctcgt agtgaactat 960 gatattccat tagatgctga gtcttatgtt caccgtattg gtcgtacagg gcgtgcagga 1020 cgtacagggc gtgcattgtt atttgttgaa ccaagagaac gtcgtttatt acgtaatatt 1080 gaacaattaa ctaaaaaacc gattacggaa gtcgaagtgc caaatcatga ggtactacaa 1140 gcttgtcgcc gtgagaaatt taaagccaaa attacagtcc aattagagca tcatgattta 1200 ggactttatc gtagcttact agaagatatg ttcaccgcgg atcaagatca ggaagatatt 1260 gcggcggcga tgttgatgtt gttgcaaggt aaacaaaagc ttattttacc agccgatcca 1320 attattgatc gtaaaacttc acgtggtgat cgtggcgagc gtcgtgaacg tggtggacgt 1380 gaaaatccac gttcagcaga gcgtcgtggt tacggtacac cgcaggcgat ggatttatat 1440 cgtattgaag taggacgttt agatggcgcg gaagtccgtc atattgttgg ggcgattgcc 1500 aatgaaggtg atatcaatag tcgttatatt ggtcatatta aattatatga tgattacacc 1560 acgattgaat taccacaagg tatgccgaaa gaattattag gtgtatttgc gaaaacacgc 1620 gtgatgaaca aacaaatgca gatgtcattt gtgggagcgt ctaatgcagg ttcaagccgt 1680 156 gatcgcgatg atttcgctga ccgccgtggt ggaaaacgta aaggacgcgg cgatgaacca 1740 cgttttgggc gtgaagatcg taaatttaaa gaaaaaagtc agcgcacttt taatgatcgc 1800 ccacgcagag aaagacgtga acgccaaaag taa 1833 <210> 8! 3 <211> 610 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 88 Met Thr Glu Thr Thr Met Thr Phe Asn Asp Leu Gly Leu Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Leu Asn Ala Vai Ser Asp Leu Gly Phe Glu Thr Pro Ser Pro Ile 20 25 30 Gin Gin Ser Cys Ile Pro Asn Leu Leu Asn Gly His Asp Vai Leu Gly 35 40 45 Met Ala Gin Thr Gly Ser Gly Lys Thr Ala Ala Phe Ser Leu Pro Leu 50 55 60 Leu Ala Gin Ile Asp Leu Asp Lys Lys Tyr Pro Gin Met Leu Vai Met 65 70 75 80 Ala Pro Thr Arg Glu Leu Ala Ile Gin Vai Ala Asp Ala Cys Glu His 85 90 95 Phe Cys Lys Tyr Ala Lys Asn Thr Asn Ile Vai Thr Leu Tyr Gly Gly 100 105 110 Gin Arg Tyr Asp Ile Gin Leu Arg Ala Leu Arg Gin Gly Ala Gin Vai 115 120 125 Vai Vai Gly Thr Pro Gly Arg Ile Leu Asp His Ile Arg Arg Gly Thr 130 135 140 Leu Asp Leu Ser Asn Leu Arg Phe Met Vai Leu Asp Glu Ala Asp Glu 145 150 155 160 Met Leu Arg Met Gly Phe Ile Asp Asp Vai Glu Thr Vai Met Ala Glu 165 170 175 Leu Pro Glu Gin His Gin Thr Ala Leu Phe Ser Ala Thr Met Pro Asp 157 180 185 190

Pro Ile Arg Arg Ile Thr Lys Arg Phe Met Lys Asp Pro Lys Glu Ile 195 200 205 Lys Ile Lys Ser Thr Gin Thr Thr Asn Pro Asp Ile Thr Gin Ser Cys 210 215 220 Trp Tyr Vai His Gly Phe Arg Lys Asn Asp Ala Leu Leu Arg Phe Leu 225 230 235 240 Glu Vai Glu Lys Phe Asp Ala Ala Ile Ile Phe Thr Arg Thr Lys Thr 245 250 255 Gly Thr Leu Asp Vai Thr Glu Leu Leu Glu Lys His Gly Phe Arg Ala 260 265 270 Ala Ala Leu Asn Gly Asp Met Thr Gin Gin Leu Arg Glu Gin Thr Leu 275 280 285 Asp Arg Leu Arg Asn Gly Ser Leu Asp Ile Leu Vai Ala Thr Asp Vai 290 295 300 Ala Ala Arg Gly Leu Asp Vai Glu Arg Ile Ser Leu Vai Vai Asn Tyr 305 310 315 320 Asp Ile Pro Leu Asp Ala Glu Ser Tyr Vai His Arg Ile Gly Arg Thr 325 330 335 Gly Arg Ala Gly Arg Thr Gly Arg Ala Leu Leu Phe Vai Glu Pro Arg 340 345 350 Glu Arg Arg Leu Leu Arg Asn Ile Glu Gin Leu Thr Lys Lys Pro Ile 355 360 365 Thr Glu Vai Glu Vai Pro Asn His Glu Vai Leu Gin Ala Cys Arg Arg 370 375 380 Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ile Thr Vai Gin Leu Glu His His Asp Leu 385 390 395 400 Gly Leu Tyr Arg Ser Leu Leu Glu Asp Met Phe Thr Ala Asp Gin Asp 405 410 415 Gin Glu Asp Ile Ala Ala Ala Met Leu Met Leu Leu Gin Gly Lys Gin 420 425 430 Lys Leu Ile Leu Pro Ala Asp Pro Ile Ile Asp Arg Lys Thr Ser Arg 435 440 445 Gly Asp Arg Gly Glu Arg Arg Glu Arg Gly Gly Arg Glu Asn Pro Arg 158 450 455 460

Ser Ala Glu Arg Arg Gly Tyr Gly Thr Pro Gin Ala Met Asp Leu Tyr 465 470 475 480 Arg Ile Glu Vai Gly Arg Leu Asp Gly Ala Glu Vai Arg His Ile Vai 485 490 495 Gly Ala Ile Ala Asn Glu Gly Asp Ile Asn Ser Arg Tyr Ile Gly His 500 505 510 Ile Lys Leu Tyr Asp Asp Tyr Thr Thr Ile Glu Leu Pro Gin Gly Met 515 520 525 Pro Lys Glu Leu Leu Gly Vai Phe Ala Lys Thr Arg Vai Met Asn Lys 530 535 540 Gin Met Gin Met Ser Phe Vai Gly Ala Ser Asn Ala Gly Ser Ser Arg 545 550 555 560 Asp Arg Asp Asp Phe Ala Asp Arg Arg Gly Gly Lys Arg Lys Gly Arg 565 570 575 Gly Asp Glu Pro Arg Phe Gly Arg Glu Asp Arg Lys Phe Lys Glu Lys 580 585 590 Ser Gin Arg Thr Phe Asn Asp Arg Pro Arg Arg Glu Arg Arg Glu Arg 595 600 605 Gin Lys 610

<210> 89 <211> 187 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 89 tctacgttaa cgccacccgt tgtattaata acattggcaa agccagaagc agcgatcatc 60 acaaaaccaa tcatcgccat taaacgtaag ccttgttgga aaatgtcatt actttctttt 120 aatttgaaaa taccacaaac agcaaaaata atcagaccgg ctaatccacc aataatagtt 180 gaactct 187 159 <210> 90

<211> 1359 <212> ADN <213> Pasteurella multocida <400> 90 atgttattaa ctaaccctgt cgtgatttcc attgtggttc tacttgcgct cagtttattg 60 cgtattaatg ttgtcatcgc actcgttatt tccgcattag tggcaggttt aactggcaat 120 ttgggcgtca gtgaaacaat aaaaacgttt acgaatggac taggcggagg tgcagaggtc 180 gccatgaatt atgcgatttt aggcgcgttt gcggttgcca tttcaaaatc aggcattact 240 gatttacttg cctataaagt cattaaacgt ttgggcaata caccaagcag tcgctcaatg 300 gcgggtttta aatattttat cttaacaatc ctcacgctgt ttgccgtttc atcgcaaaac 360 ttattacctg tccatatcgc gtttattcct attgtgattc ccccgcttct tgcgattttc 420 aataaactaa aattggatcg tcgtgccgtt gcttgtgttt taacttttgg tttaaccgcc 480 acttatatgt tattaccagt agggtttggg aaaattttta ttgaaagtat cctcgttaag 540 aatatcaatc aagccggcgc gactttaggc ttacagacat ctgtggctga agtgtcatta 600 gctatggcag tcccagtgat tggcatgatt cttggtttac tgacagcgat ctttattagc 660 tatcgtaaac cgagagaata tgccatgatg cgcagcgaaa tcagcacgca agatattgaa 720 tcacatgttg ctcaaatcaa gccgttccat gtcggcgcaa gtttagtggc aatcattgtt 780 acttttgccc ttcagctctt taccagttca accattattg gtggattagc cggtctgatt 840 atttttgctg tttgtggtat tttcaaatta aaagaaagta atgacatttt ccaacaaggc 900 ttacgtttaa tggcgatgat tggttttgtg atgatcgctg cttctggctt tgccaatgtt 960 attaatacaa cgggtggtgt aacggcgtta gttgaaacct tcagtcaagg ttttggcgca 1020 gaaaataaag ggattgcagc ctttttaatg ctgttagttg gcttatttat tactatgggg 1080 attggctcat cattctcaac ggtacctatt attgcctcta tttatgtacc actttgtctt 1140 tctcttggtt tctcaccttt agcaacggtt tcgcttattg gggtatccgc tgcgcttggt 1200 gatgcgggtt cgcctgcctc tgactcaaca ttaggaccaa cctcgggttt aaatgcagat 1260 ggtaaacatg atcatatttg ggattctgtc gtcccaacat ttatccatta taatatccca 1320 ctcattcttt tcggttggtt agccgccatg tatctgtaa 1359

<210> 91 <211> 452 <212> PRT 160 <213> Pasteurella multocida <400> 91

Met Leu Leu Thr Asn Pro Vai Vai 1 5 Leu Ser Leu Leu Arg Ile Asn Vai 20 Leu Vai Ala Gly Leu Thr Gly Asn 35 40 Thr Phe Thr Asn Gly Leu Gly Gly 50 55 Ala Ile Leu Gly Ala Phe Ala Vai 65 70 Asp Leu Leu Ala Tyr Lys Vai Ile 85 Ser Arg Ser Met Ala Gly Phe Lys 100 Leu Phe Ala Vai Ser Ser Gin Asn 115 120 Ile Pro Ile Vai Ile Pro Pro Leu 130 135 Leu Asp Arg Arg Ala Vai Ala Cys 145 150 Thr Tyr Met Leu Leu Pro Vai Gly 165 Ile Leu Vai Lys Asn Ile Asn Gin 180 Thr Ser Vai Ala Glu Vai Ser Leu 195 200 Met Ile Leu Gly Leu Leu Thr Ala 210 215 Arg Glu Tyr Ala Met Met Arg Ser 225 230

Ile Ser Ile Vai Vai Leu Leu Ala 10 15 Vai Ile Ala Leu Vai Ile Ser Ala 25 30 Leu Gly Vai Ser Glu Thr Ile Lys 45 Gly Ala Glu Vai Ala Met Asn Tyr 60 Ala Ile Ser Lys Ser Gly Ile Thr 75 80 Lys Arg Leu Gly Asn Thr Pro Ser 90 95 Tyr Phe Ile Leu Thr Ile Leu Thr 105 110 Leu Leu Pro Vai His Ile Ala Phe 125 Leu Ala Ile Phe Asn Lys Leu Lys 140 Vai Leu Thr Phe Gly Leu Thr Ala 155 160 Phe Gly Lys Ile Phe Ile Glu Ser 170 175 Ala Gly Ala Thr Leu Gly Leu Gin 185 190 Ala Met Ala Vai Pro Vai Ile Gly 205 Ile Phe Ile Ser Tyr Arg Lys Pro 220 Glu Ile Ser Thr Gin Asp Ile Glu 235 240 161

Ser His Vai Ala Gin Ile Lys Pro Phe His Vai Gly Ala Ser Leu Vai

Ala Ile

Ile Gly

Lys Leu 290 Ala Met 305

Ile Asn

Gly Phe

Vai Gly

Pro Ile 370 Ser Pro 385

Asp Ala

Leu Asn

Thr Phe

Ala Met 450

Ile Vai 260 Gly Leu 275

Lys Glu

Ile Gly

Thr Thr

Gly Ala 340 Leu Phe 355

Ile Ala

Leu Ala

Gly Ser

Ala Asp 420 Ile His 435

Tyr Leu 245

Thr Phe

Ala Gly

Ser Asn

Phe Vai 310 Gly Gly 325

Glu Asn

Ile Thr

Ser Ile

Thr Vai 390 Pro Ala 405

Gly Lys Tyr Asn

Ala Leu

Leu Ile 280 Asp Ile 295

Met Ile

Vai Thr

Lys Gly

Met Gly 360 Tyr Vai 375

Ser Leu

Ser Asp

His Asp

Ile Pro 440 250 Gin Leu 265

Ile Phe

Phe Gin

Ala Ala

Ala Leu 330 Ile Ala 345

Ile Gly Pro Leu

Ile Gly

Ser Thr 410 His Ile 425

Leu Ile

Phe Thr

Ala Vai

Gin Gly 300 Ser Gly 315

Vai Glu Ala Phe Ser Ser

Cys Leu 380 Vai Ser 395

Leu Gly Trp Asp Leu Phe

Ser Ser 270

Cys Gly 285

Leu Arg

Phe Ala

Thr Phe

Leu Met 350 Phe Ser 365

Ser Leu

Ala Ala

Pro Thr

Ser Vai 430 Gly Trp 445 255

Thr Ile

Ile Phe

Leu Met

Asn Vai 320 Ser Gin 335

Leu Leu

Thr Vai

Gly Phe

Leu Gly 400 Ser Gly 415

Vai Pro Leu Ala

Lisboa, 23 de Julho de 2010 162

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Mutante de uma bactéria Gram-negativa, em que a referida bactéria tem uma mutação numa sequência de nucleótidos que codifica um polipéptido que tem uma identidade que é igual ou superior a 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleótidos SEQ ID N° : 90, resultando a referida mutação em virulência atenuada da bactéria.
2. Mutante da reivindicação 1, em que a bactéria é uma Pasteurellaceae.
3. Mutante da reivindicação 2, em que a bactéria é escolhida entre o grupo de: Pasteurella multocida, Pasteurella haemolytica, Pasteurella anatipestifer e Actinobacillus pleuropneumoniae.
4. Mutante da reivindicação 3, em que a bactéria é Pasteurella multocida.
5. Mutante de qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que a mutação é uma delecção na sequência de nucleótidos ou uma inserção nela ou substituição de ácidos nucleicos.
6. Mutante da reivindicação 5, em que a mutação é a delecção de toda a sequência de nucleótidos.
7. Mutante da reivindicação 5, em que a inserção é realizada entre os nucleótidos 802-803 na SEQ ID N°: 90. 1
8. Mutante de qualquer uma das reivindicações 1 a 7, que compreende uma sequência de ácidos nucleicos heteróloga que codifica para um imunogénio de um agente patogénico virai, parasitico ou bacteriano, para uma proteína terapêutica, para um alergénio, para um factor de crescimento ou para uma citocina.
9. Composição imunogénica compreendendo um mutante atenuado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e um diluente, veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
10. Composição imunogénica da reivindicação 9 compreendendo ainda um adjuvante.
11. Vacina compreendendo um mutante atenuado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e um diluente, veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
12. Vacina da reivindicação 11 compreendendo ainda um adjuvante.
13. Utilização de uma bactéria Gram-negativa de acordo com qualquer umas das reivindicações 1 a 8 na produção de uma composição imunogénica atenuada viva ou na preparação de uma composição de vacina atenuada viva.
14. Bactéria Gram-negativa de acordo com qualquer umas das reivindicações 1 a 8, uma composição imunogénica de acordo com a reivindicação 9 ou 10, ou uma vacina de acordo com a reivindicação 11 ou 12, para utilização na imunização contra ou prevenção de infecção bacteriana num animal. 2
15 . Utilização de uma bactéria Gram-negativa de acordo com qualquer umas das reivindicações 1 a 8, uma composição uma na ou imunogénica de acordo com a reivindicação 9 ou 10, ou vacina de acordo com a reivindicação 11 ou 12, preparação de um medicamento para a imunização contra prevenção de infecção bacteriana num animal. Lisboa, 23 de Julho de 2010 3