PT1583756E - Tiofenocarboxamidas como inibidores da enzima ikk-2 - Google Patents

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PT1583756E
PT1583756E PT04701632T PT04701632T PT1583756E PT 1583756 E PT1583756 E PT 1583756E PT 04701632 T PT04701632 T PT 04701632T PT 04701632 T PT04701632 T PT 04701632T PT 1583756 E PT1583756 E PT 1583756E
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Andrew David Morley
Jeffrey P Poyser
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Astrazeneca Ab
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Description

DESCRIÇÃO "TIOFENOCARBOXAMIDAS COMO INIBIDORES DA ENZIMA IKK-2"
Campo da Invenção A presente invenção refere-se a derivados de tiofenocarboxamida, processos e intermediários utilizados na sua preparação, composições farmacêuticas que os contêm e à sua utilização em terapia.
Antecedentes da Invenção A familia de NF-κΒ (factor nuclear kB) é composta de homo- e heterodimeros da familia Rei de factores de transcrição. Um papel chave destes factores de transcrição é induzir e coordenar a expressão de um largo espectro de genes pró-inflamatórios incluindo citocinas, quimiocinas, interferões, proteínas MHC, factores de crescimento e moléculas de adesão celular (para revisão ver Verma et al.r Genes Dev. 9:2723-35, 1995; Siebenlist et al., Ann. Rev. Cell. Biol. 10:405-455, 1994; Bauerle e Henkel, Ann. Rev. Immunol., 12:141-179, 1994; Barnes e Karin,
NewEngl. J. Med., 336:1066-1071, 1997). O complexo dímero da familia Rei mais frequentemente encontrada é composto de p50 NFkB e p65 RelA (Baeuerle e
Baltimore, Cell 53:211-217, 1988; Baeuerle e Baltimore, Genes
Dev. 3:1689-1698, 1989). Em condições de repouso os dímeros NF-κΒ são retidos no citoplasma com um membro da familia IkB das 1 proteínas inibidoras (Beg et al., Genes Dev., 7:2064-2070, 1993; Gilmore e Morin, Trends Genet. 9:427-433, 1993; Haskil et al.,
Cell 65:1281-1289, 1991). Contudo, após activação celular através de uma variedade de citocinas ou outros estímulos externos, as proteínas IkB ficam fosforiladas em dois resíduos críticos de serina (Traenckner et al., EMBO J., 14:2876, 1995) e são então apontadas para ubiquitinação e degradação mediada com proteossoma (Chen, Z.J. et al., Genes e Dev. 9:1586-1597, 1995; Scherer, D.C. et al., Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A. 92:11259-11263, 1996; Alkalay, I. et al., Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A. 92:10599-10603,1995). O NF-κΒ libertado é, então, capaz de se translocar para o núcleo e activar a transcrição de genes (Beg et al., Genes Dev., 6:1899-1913, 1992).
Verificou-se que uma grande variedade de estímulos externos era capaz de activar NF-κΒ (Baeuerle, P.A., e Baichwal, V.R., Adv. Immunol., 65:111-136,1997). Embora a maior parte dos activadores NF-κΒ resulte em fosforilação de IkB, é óbvio que várias vias levam a este evento chave. A activação de NF-kB mediada com receptor baseia-se em interaeções específicas entre as moléculas de receptor e adaptador/sinalizador (com exemplo, TRADD, RIP, TRAF, MyD88) e cinases associadas (IRAK, NIK) (Song et al., Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A. 94:9792-9796, 1997; Natoli et al., JBC 272:26079-26082, 1997). Os stresses ambientais tais como a luz UV e radiação γ parecem estimular NF-κΒ através de mecanismos alternativos, menos definidos.
As publicações recentes elucidaram parcialmente a activação NF-κΒ. Este trabalho identificou três enzimas chave que regulam as interaeções específicas IkB/NF-kB: a cinase que induz NF-kB (NIK) (Boldin et al., Cell 85:803-815, 1996), cinase-1 de IkB (IKK-1) (Didonato et al., Nature 388:548, 1997; Regnier et al., 2
Cell 90:373 1997) e cinase-2 de ΙκΒ (IKK-2) (Woronicz et al., Science 278:866, 1997; Zandi et al., Cell 91:243, 1997). NIK parece representar um mediador comum das cascadas de sinalização de NF-κΒ desencadeadas pelo factor de necrose do tumor e interleucina-1, e é um potente indutor da fosforilação de ΙκΒ. Contudo, NIK é incapaz de fosforilar ΙκΒ directamente.
Pensa-se que IKK-1 e IKK-2 se situam imediatamente a jusante de NIK e que são capazes de fosforilar directamente todos os três sub-tipos de ΙκΒ. IKK-1 e IKK-2 são 52% idênticos ao nivel dos aminoácidos mas parecem possuir especificidades semelhantes para o substrato; contudo, as actividades enzimáticas parecem ser diferentes: IKK-2 é várias vezes mais potente do que IKK-1. Os dados da expressão, acoplados com estudos de mutagénese, sugerem que IKK-1 e IKK-2 são capazes de formar homo- e heterodimeros através dos seus motivos "fecho-éclair" de leucina C-terminal, com a forma heterodimérica a ser preferida (Mercúrio et al., Mol. Cell Biol., 19:1526, 1999; Zandi et al., Science; 281:1360, 1998; Lee et al, Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A. 95:9319, 1998). NIK, IKK-1 e IKK-2 são todas cinases de serina/treonina. Dados recentes mostraram que as cinases de tirosina desempenham também um papel na regulação da activação de NF-κΒ. Vários grupos mostraram que a activação de NF-κΒ induzida com TNF-a pode ser regulada através de proteinas fosfatases de tirosina (PTP) e cinases de tirosina (Amer et al., JBC 273:29417-29423, 1998; Hu et al., JBC 273:33561-33565, 1998; Kaekawa et al.,
Biochem. J. 337:179-184, 1999; Singh et ai., JBC 271 31049- 31054, 1996). O mecanismo de acção destas enzimas parece estar na regulação do estado de fosforilação de ΙκΒ. Com exemplo, 3 ΡΤΡ1Β e uma cinase de tirosina não identificada parecem controlar directamente a fosforilação de um resíduo de lisina (K42) em Ik B-α, que com sua vez possui uma influência crítica na acessibilidade dos resíduos adjacentes de serina como alvos para fosforilação com IKK. Vários grupos mostraram que IKK-1 e IKK-2 fazem parte de uma estrutura de 'sinalossoma' em associação com proteínas adicionais incluindo IKAP (Cohen et al., Nature 395:292-296, 1998; Rothwarf et al., Nature 395:297-300, 1998), MEKK-1, fosfatase da cinase MAP putativa (Lee et al., Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A. 95:9319-9324, 1998), assim como NIK e IkB. Os dados são agora emergentes para sugerir que embora IKK-1 e IKK-2 se associassem com nik, estas são diferencialmente activados, e podem representar deste modo um importante ponto de integração para o espectro de sinais que activam NF-κΒ. Note-se que se verificou que, MEKK-1 (um dos componentes do sinalossoma putativo e um alvo para a luz UV, moléculas de sinalização induzidas com LPS e pequenas GTPases) activa IKK-2 mas não IKK-1. Do mesmo modo, a fosforilação de NIK de IKK-1 resulta num aumento dramático da actividade de IKK-1 mas apenas num pequeno efeito em IKK-2 (para revisão, ver Mercúrio, F., e Manning, A.M., Current Opinion in Cell Biology, 11:226-232, 1999). É provável que a inibição da activação de NF-κΒ tenha uma vasta utilidade no tratamento de doença inflamatória.
Existe evidência acumulada de que a sinalização de NF-kB desempenha um papel significativo no desenvolvimento de cancro e metástases. A expressão anormal de c-Rel, NF-kB2 ou ΙκΒΟί tem sido descrita em vários tipos de tumor e linhas de células tumorais, e não existem dados que mostrem que ocorre a 4 sinalização constitutiva de NF-κΒ através de IKK-2 numa vasta gama de linhas de células tumorais. Esta actividade tem sido ligada a vários defeitos a montante na sinalização do factor de crescimento, tal como o estabelecimento de ansas autócrinas ou a presença de produtos de oncogene e. g., Ras, AKT, HeR2, que estão envolvidos na activação do complexo IKK. Crê-se que a actividade constitutiva de NF-κΒ contribui para a oncogénese através da activação de uma vasta gama de genes antiapoptóticos e. g., Al/Bfi-1, IEX-1, XI AP, levando à supressão das vias de morte celular, e sobre-regulação de transcrição de ciclina Dl que promove a morte celular. Outros dados indicam que esta via está provavelmente envolvida na regulação da adesão celular e proteases da superfície celular. Isto sugere um possível papel adicional para a actividade de NF-κΒ no desenvolvimento de metástases . A evidência que confirma o envolvimento da actividade de NF-κΒ na oncogénese inclui a inibição de crescimento de células tumorais in vitro e in vivo sob a expressão de uma forma modificada de ΙκΒα (super-repressor
IkBoí) .
Adicionalmente à sinalização constitutiva de NF-κΒ observada em muitos tipos de tumor, foi reportado que NF-κΒ é também activado em resposta a certos tipos de quimioterapia. Verificou-se que a inibição da activação de NF-κΒ através da expressão da forma super-repressora de IkBoc em paralelo com o tratamento de quimioterapia estimulava o efeito antitumoral da quimioterapia em modelos de xenoenxerto. A actividade de NF-κΒ está, deste modo, também implicada na quimiorresistência indutível. 0 pedido de patente WO 01/58890 divulga certos derivados de tiofenocarboxamida que são úteis como inibidores de ΙΚΚ-2.
Divulga-se agora um outro grupo de derivados de 5 tiofenocarboxamida que possui perfis de actividade farmacológica desejados, com benéficas propriedades farmacocinéticas.
Divulgação da Invenção
De acordo com a presente invenção, é proporcionado um composto de fórmula (I)
Qv -WH» RÍv
. T là W- -u CR*Rrt em que: R1 representa H ou CH3; R2 representa H, halogéneo, ciano, alquilo Cl a 2, trifluorometilo ou alcoxilo Cl a 2; n representa um número inteiro 1, 2 ou 3; m representa um número inteiro 0, 1, 2 ou 3; 6 R3 representa H, alcenilo C2 a 4 ou alquilo Cl a 4; sendo o referido grupo alquilo, opcionalmente, ainda substituído com CN, alcoxilo Cl a 4, alquil-SC>2- Cl a 4 ou um ou mais átomos de flúor; ou R3 representa grupo alquileno Cl a 4 que forma um anel azacíclico de 4 a 7 membros em virtude de estarem adicionalmente ligados seja ao anel aromático, Ar, ou ao grupo ligante, -CR4R5-(CR4R5) n- R4 e R5 representam independentemente H ou alquilo Cl a 2; ou o grupo CR4R5 em conjunto representa um anel carbocíclico de 3 a 6 membros que incorpora opcionalmente um heteroátomo seleccionado de 0 ou S; e cada R4, cada R5 e cada grupo CR4R5 é seleccionado independentemente;
Ar representa um anel fenilo ou um anel heteroaromático de 5 ou 6 membros contendo um a três heteroátomos seleccionados independentemente de 0, N e S; sendo o referido anel fenilo ou heteroaromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados independentemente de halogéneo, ciano, alquilo Cl a 2, trif luorometilo, alcoxilo Cl a 2, NR6R7, -CONR6R7, -C00R6, -NR6COR7, -S (0) PR6, -S02NR6R7 e -NR6S02R7; R6 e R7 representam independentemente H, alcenilo C2 a 4 ou alquilo Cl a 4; sendo os referidos grupos alquilo ou alcenilo, opcionalmente, ainda substituídos com um ou mais átomos de halogéneo; p representa um número inteiro 0, 1 ou 2; 7 e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Certos compostos de fórmula (I) são capazes de existir em formas esteroisoméricas. Deve entender-se que a invenção inclui todos os isómeros geométricos e ópticos dos compostos de fórmula (I) e suas misturas, incluindo racematos. Os tautómeros e suas misturas formam também um aspecto da presente invenção.
Numa forma de realização, n na fórmula (I) representa o número inteiro 1.
Noutra forma de realização, R1 na fórmula (I) representa H.
Noutra forma de realização, R2 na fórmula (I) representa H.
Noutra forma de realização, m na fórmula (I) representa o número inteiro 1.
Noutra forma de realização, cada R4 e cada R5 na fórmula (I) representa H.
Ainda noutra forma de realização -CR4R5-(CR4R5)n- está ligado a R3 para formar um anel azaciclico aromático de 5 membros em conjunto com R3 e o átomo de azoto a que R3 está ligado.
Noutra forma de realização, R3 é hidrogénio ou alquilo Cl a 4 ou R3 representa um grupo alquileno Cl-4 que forma um anel azaciclico de 4 a 7 membros em virtude de estar adicionalmente ligado a qualquer anel aromático, Ar, ou ao grupo ligante
Ainda noutra forma de realização, R3 é hidrogénio ou metilo ou R3 representa um grupo alquileno Cl to 2 que forma um anel azacíclico aromático de 5 membros em virtude de estar adicionalmente ligado a qualquer anel aromático, Ar, ou ao grupo ligante -CR4R5-(CR4R5)n_.
Ainda noutra forma de realização, R3 é hidrogénio ou metilo ou R3 representa um grupo metileno que forma um anel pirrolidina com o azoto a que está ligado, -(CR4R5)m_ e Ar em virtude de estar adicionalmente ligado ao anel aromático, Ar, quando -(CR4R5)m_ é metileno ou R3 representa um grupo etileno que forma um anel pirrolidina em virtude de estar adicionalmente ligado ao grupo -CR4R5- em -CR4R5-(CR4R5)n_, em que n é 1.
Numa forma de realização, R6 e R7 representam independentemente hidrogénio ou alquilo Cl a 4.
Noutra forma de realização, R6 e R7 representam independentemente hidrogénio ou metilo ou etilo.
Numa forma de realização, Ar é não substituído ou substituído com halogéneo.
Numa forma de realização, Ar é opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 substituintes.
Noutra forma de realização, Ar é opcionalmente substituído com 1 ou 2 substituintes.
Ainda noutra forma de realização, Ar é opcionalmente substituído com 1 substituinte. 9
Noutra forma de realização Ar, é não substituído.
Noutra forma de realização, Ar na fórmula (I) representa opcionalmente substituído fenilo.
Noutra forma de realização, Ar na fórmula (I) representa opcionalmente substituído piridilo.
Numa forma de realização, o grupo carboxamido na fórmula (I) está ligado à posição 3 do anel tiofeno.
Noutra forma de realização, o grupo carboxamido na fórmula (I) está ligado à posição 2 do anel tiofeno.
Numa forma de realização, a presente invenção refere-se a compostos de fórmula (I), em que nem, cada um, representa o número inteiro 1; R1 e R2 cada um representa H; cada R4 e cada R5 representa H; Ar representa fenilo ou piridilo opcionalmente substituído; e R3, R6, R7 e p são como definido acima.
Numa forma de realização a presente invenção refere-se a compostos de fórmula (I) em que nem, cada um, representam o número inteiro 1; R1 e R2 cada um representa H; cada R4 e cada R5 representa H; Ar representa fenilo ou piridilo opcionalmente substituído; R3 é hidrogénio ou metilo ou R3 representa um grupo alquileno Cl a 2 que forma um anel azacíclico aromático de 5 membros em virtude de estar adicionalmente ligado a qualquer anel aromático, Ar, ou ao grupo ligante -CR4R5-(CR4R5) n_; R6 e R7 representam independentemente hidrogénio ou alquilo Cl a 4 e p é como definido acima. 10
Numa forma de realização, a presente invenção refere-se a compostos de fórmula (I) em que nem, cada um, representa o número inteiro 1; R1 e R2 cada um representa H; cada R4 e cada R5 representa H; Ar representa fenilo ou piridilo opcionalmente substituído; R3 é hidrogénio ou metilo ou R3 representa um grupo alquileno Cl a 2 que forma um anel azacíclico aromático de 5 membros em virtude de estar adicionalmente ligado a qualquer anel aromático, Ar, ou ao grupo ligante -CR4R5-(CR4R5) n_; e existem 1 ou 2 substituintes opcionais em Ar quando é fenilo e estes são independentemente seleccionados a partir de halogéneo e quando Ar é um grupo piridilo é não substituído.
Numa forma de realização a presente invenção refere-se a compostos de fórmula (I) em que nem, cada um, representa o número inteiro 1; R1 e R2 cada um representa H; cada R4 e cada R5 representa H; Ar representa fenilo ou piridilo opcionalmente substituído; R3 é hidrogénio ou metilo ou R3 representa um grupo alquileno Cl a 2 que forma um anel azacíclico aromático de 5 membros em virtude de estar adicionalmente ligado a qualquer anel aromático, Ar, ou ao grupo ligante -CR4R5-(CR4R5) n_; e R6, R7 e p são como definido acima.
Os compostos de fórmula (I) e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis possuem a vantagem de serem inibidores da enzima IKK-2. A invenção proporciona, ainda, um processo para a preparação de compostos de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável, seu enantiómero ou racemato. 11
De acordo com a invenção é, também, proporcionado um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização como medicamento.
Um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável é, deste modo, útil na preparação de um medicamento, para o tratamento ou profilaxia de doenças ou estados, em que é benéfica a inibição da actividade de IKK-2.
Um aspecto mais particular da invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento, para o tratamento ou profilaxia de doença inflamatória.
Assim, um método de tratamento, ou de redução do risco de, doenças ou estados em que a inibição da actividade de IKK-2 é benéfica pode ser efectuada pela administração a uma pessoa em sofrimento, ou em risco da referida doença ou estado, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Mais particularmente, um método de tratamento ou de redução do risco de doença inflamatória numa pessoa em sofrimento ou em risco da referida doença, pode ser efectuado pela administração à pessoa de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Os compostos particulares da invenção incluem os aqui exemplificados: 12 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2—{2—[{N-(2-clorobenzil)-N-metil}amino]etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2—{2 —[{N-(4-clorobenzil)-N-metil}amino]etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-(benzilamino)etoxi}fenil] tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2—{2—[N-benzil-N-metilamino] etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-(l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2—{[1-(4-fluorobenzil) pirrolidin-3-il]oxi]fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2-{[l-benzilpirrolidin-3-il]oxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]—5—[2—{2—[(4-fluorobenzil)amino] etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2—{2 —(piridin-3-ilmetilamino) etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2—{2 —(piridin-2-ilmetilamino) etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2-[(aminocarbonil)amino]-5-[2—{2 —(piridin-4-ilmetilamino) etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 2- [(aminocarbonil)amino]-5-[2 —{2 —[N-(piridin-3-ilmetil)-N-metilamino]etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida; 3- [(aminocarbonil)amino]-5-[2-(2-(1,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)etoxi}fenil]tiofeno-2-carboxamida; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. A menos que seja indicado o contrário, o termo "alquilo Cl a 4" aqui referido denota um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo de 1 a 4 átomos de carbono. Exemplos destes 13 grupos incluem metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butil e t-butilo. 0 termo "alquilo Cl a 2" é para ser interpretado de modo análogo. A menos que seja indicado o contrário, o termo "alcenilo C2 a 4" aqui referido denota um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo 2 a 4 átomos de carbono incorporando, pelo menos, uma dupla ligação carbono-carbono. Exemplos destes grupos incluem etenilo e propenilo. A menos que seja indicado o contrário, o termo "alquileno Cl a 4" aqui referido denota um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo 1 to 4 átomos de carbono e oferecendo duas valências livres. Exemplos destes grupos incluem metileno e etileno. A menos que seja indicado o contrário, o termo "alcoxilo Cl a 4" aqui referido denota um grupo alcoxilo de cadeia linear ou ramificada possuindo 1 a 4 átomos de carbono. Exemplos destes grupos incluem metoxilo, etoxilo e isopropoxilo. 0 termo "alcoxilo Cl a 2" é para ser interpretado de modo análogo. A menos que seja indicado o contrário, o termo "halogéneo" aqui referido denota fluoro, cloro, bromo e iodo.
Exemplos de um anel azaciclico de 4 a 7 membros incluem pirrolidina e piperidina.
Exemplos de um anel heteroaromático de 5 ou 6 membros contendo um a três heteroátomos independentemente seleccionado de 0, N e S incluem piridilo, pirimidina, furano, tiofeno, isoxazole, triazole e pirazole. 14
Exemplos de um anel carbocíclico de 3 a 6 membros que incorpora opcionalmente um heteroátomo seleccionado de 0 e S incluem ciclopropilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, tetra-hidrofuranilo, tetra-hidropiranilo, tetra-hidrotienilo, pirrolidinilo e piperidinilo.
De acordo com a invenção é também proporcionado um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável, seu enantiómero ou racemato que compreende: (a) reacção de um composto de fórmula (II):
(10 em que R1, R2, R3, R4, R5, Ar, m e n são as definido na fórmula (I), com um isocianato; ou (b) reacção de composto de fórmula (III) 15
LG em que R1, R2, R4, R5 e n são como definido na fórmula (I) e LG representa um grupo de saida, com uma amina (R3NH (CR4R5)m-Ar), em que R3, R4, R5, Ar e m são como definido na fórmula (I); ou (c) reacção de composto de fórmula (IV) .Metei {IV} \, (CR*K% em que R2, R3, R4, R5, m, n e Ar são como definido na fórmula (I), com um composto de fórmula (V) 16
em que R1 é como definido na fórmula (I) e LG representa um grupo de saída; ou (d) reacção de composto de fórmula (VI)
em que R2, R3, R4, R5, m, n e Ar são como definido na fórmula (I) e LG representa um grupo de saída, com um composto de fórmula (VII)
em que R1 é como definido na fórmula (I); 17 e sempre que necessário, convertendo o composto resultante de fórmula (I) ou outro seu sal, num seu sal f armaceuticamente aceitável; ou convertendo o composto resultante de fórmula (I) num outro composto de fórmula (I); e sempre que desejado, convertendo o composto resultante de fórmula (I) num seu isómero óptico.
No processo (a), os reagentes de isocianato adequados incluem trimetilsililisocianato, tricloroacetilisocianato e isocianato de sódio. A reacção com trimetilsililisocianato pode ser efectuada num solvente, tal como diclorometano/dimetilformamida a uma temperatura elevada adequada, com exemplo, à temperatura de refluxo da mistura de reacção. A reacção com isocianato de sódio pode ser efectuada num sistema de solvente adequado, tal como ácido acético aquoso à temperatura ambiente. A reacção do tricloroacetilisocianato pode ser efectuada num sistema de solvente adequado, tal como acetonitrilo à temperatura ambiente e subsequentemente tratando a mistura com amónia para produzir compostos de fórmula geral (I) . Numa forma de realização preferida, o isocianato é tricloroacetilisocianato.
No processo (b), os compostos de fórmula (III) são feitos reagir em conjunto com aminas sob condições de reacção apropriadas. Isto pode acontecer ou na presença ou ausência de base. Estas bases podem ser inorgânicas ou orgânicas. Os grupos de saida adequados incluem iodo, bromo, cloro, sulfonato e triflato.
Nos processos (c) e (d), os compostos de fórmulas (IV) e (V) ou de fórmulas (VI) e (VII) são feitos reagir em conjunto sob catálise proporcionada com um complexo de um metal de transição 18 tal como paládio ou níquel. Em compostos de fórmulas (IV) e (VII), sob condições apropriadas, "metal" pode ser um metal ou semi-metal, tal como magnésio, zinco, cobre, estanho, silício, zircónio, alumínio ou boro. Os grupos de saída adequados incluem iodo, bromo, cloro, triflato ou fosfonato.
Deve ser entendido pelos especialistas da técnica que nos processos da presente invenção, certos grupos funcionais, tais como grupos hidroxilo ou amino nos reagentes de partida ou compostos intermediários, podem necessitar de ser protegidos pelos grupos de protecção. Deste modo, a preparação dos compostos de fórmula (I) pode envolver, numa fase adequada, a adição e remoção de um ou mais grupos de protecção. A protecção e desprotecção de grupos funcionais é descrita em 'Protective Groups in Organic Chemistry', editado com J. W. F. McOmie, Plenum Press (1973), e 'Protective Groups in Organic Syntesis', 3a edição, T. w. Greene & P. G. M. Wuts, Wiley-Interscience (1999) . A presente invenção inclui compostos de fórmula (I) na forma de sais, em particular, sais de adição ácida. Os sais adequados incluem os formados com os ácidos orgânicos e inorgânicos. Tais sais de adição ácida serão normalmente farmaceuticamente aceitáveis embora sais de ácidos não farmaceuticamente aceitáveis possam ser de utilidade n a preparação e purificação do composto em questão. Assim, os sais preferidos incluem os formados a partir dos ácidos clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, cítrico, tartárico, láctico, pirúvico, acético, succínico, fumárico, maleico, metanossulfónico e benzenossulfónico. 19
Os sais de compostos de fórmula (I) podem ser formados com reacção com a base livre, ou um sal, seu enantiómero ou racemato, com um ou mais equivalentes do ácido apropriado. A reacção pode ser efectuada num solvente ou meio em que o sal é insolúvel ou num solvente em que o sal é solúvel, com exemplo, água, dioxano, etanol, tetra-hidrofurano ou éter dietílico ou uma mistura de solventes, que podem ser removidos sob vácuo ou com liofilização. A reacção pode também ser um processo metatético ou pode ser efectuada numa resina de troca iónica.
Os compostos de fórmula (II) podem ser preparados com química convencional descrita na literatura [com exemplo, J. Heterociclic Chem., 36, 333 (1999)], ou pela reacção de compostos de fórmula (viu) :
em que R1, R2, R3, R4, R5, Ar, m e n são como definido na fórmula (I), e LG representa um grupo de saida, com amónia. Os grupos adequados LG incluem halogéneo, em particular, cloro.
Os compostos de fórmula (VIII) em que LG é halo podem ser preparados a partir do correspondente composto de fórmula (IX): 20
em que R1, R2, R3, R4, R5, Ar, m e n são como definido na fórmula (I), pelo tratamento com o agente de halogenação, tal como cloreto de tionilo.
Os compostos de fórmulas (III), (IV), (V), (VI), (VII) e (IX) são ou comercialmente disponíveis ou podem ser preparados utilizando química convencional como aqui exemplificado.
Certos novos compostos intermediários formam um aspecto da invenção.
Os compostos de fórmula (I) possuem actividade como fármacos, em particular como inibidores da enzima IKK-2, e podem ser utilizados no tratamento (terapêutico ou profiláctico) de estados/doenças em animais humanos e não humanos, em que a inibição de IKK-2 é benéfica. Exemplos de tais estados/doenças incluem doenças inflamatórias ou doenças com uma componente inflamatória. As doenças em particular incluem artrites inflamatórias incluindo artrites reumatóide, osteoartrite, espondilite, síndrome de Reiters, artrite psoriática, lúpus e doença de reabsorção óssea; esclerose múltipla, doença 21 inflamatória dos intestinos incluindo Doença de Crohn; asma, doença pulmonar obstrutiva crónica, enfisema, rinite, miastenia grave, Doença de Gravei, rejeição de aloenxerto, psoriase, dermatite, distúrbios alérgicos, doenças do complexo imunitário, caquexia, ARDS, choque tóxico, falha cardíaca, enfartes do miocárdio, aterosclerose, lesão de reperfusão, SIDA, cancro e distúrbios caracterizados com resistência a insulina, tais como diabetes, hiperglicémia, hiperinsulinémia, dislipidemia, obesidade, doença do ovário poliquistico, hipertensão, doença cardiovascular e Sindrome x.
Os papéis de NF-κΒ descritos na oncogénese e quimiorresistência sugerem que a inibição desta via através da utilização de um inibidor de ΐκκ-2, tal como uma pequena molécula de inibidor de IKK-2, pode proporcionar uma nova monoterapia para o cancro e/ou uma importante terapia adjuvante para o tratamento de tumores quimiorresistentes e na indução sinergistica de apoptose como um resultado de terapia de combinação com um inibidor de IKK-2 com terapias convencionais ou outros novos agentes. São particularmente interessantes, doenças seleccionadas de asma, artrites reumatóide, psoriase, doença inflamatória dos intestinos incluindo Doença de Crohn, esclerose múltipla, doença pulmonar obstrutiva crónica, doença de reabsorção óssea, osteoartrite, diabetes/controlo da glicémia e cancro.
Deste modo, a presente invenção proporciona um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como aqui anteriormente definido para utilização em terapia. 22
Num outro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como aqui anteriormente definido, na preparação de um medicamento para utilização em terapia.
Ainda num outro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como aqui anteriormente definido na preparação de um medicamento para o tratamento de doença inflamatória, assim como para doenças e estados listados acima.
No contexto da presente descrição, o termo "terapia" inclui também "profilaxia" a menos que se especifique indicações do contrário. Os termos "terapêutico" e "terapeuticamente" devem ser entendidos do mesmo modo. É esperado que a profilaxia seja particularmente relevante para o tratamento de pessoas que sofreram um episódio prévio, ou que são de outro modo consideradas como estando em risco aumentado para a doença ou estado em questão. As pessoas em risco de desenvolver uma doença ou estado particular incluem geralmente as que possuem uma história familiar de doença ou estado, ou as que foram identificadas através de teste ou rastreio genético como sendo particularmente susceptiveis a desenvolver a doença ou estado. A invenção proporciona ainda um método de tratamento de uma doença mediada com IKK-2 que compreende a administração a um doente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como anteriormente definido. 23 A invenção proporciona também um método de tratamento de uma doença inflamatória, especialmente asma, artrites reumatóides ou esclerose múltipla, num doente em sofrimento ou em risco da referida doença, que compreende administrar ao doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como definido anteriormente.
Para as utilizações terapêuticas acima mencionadas a dosagem administrada variará, obviamente, com o composto empregue, o modo de administração, o tratamento desejado e o distúrbio indicado.
Os compostos de fórmula (I) e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser utilizados com si só, mas serão geralmente a administrados na forma de uma composição farmacêutica em que o composto/sal (ingrediente activo) da fórmula (I) está em associação com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Dependendo do modo de administração, a composição farmacêutica compreenderá de modo preferido de 0,05 a 99 %p (percentagem em peso), de modo mais preferido de 0,05 a 80 %p, ainda de modo mais preferido de 0,10 a 70 %p, e de modo ainda mais preferido de 0,10 a 50 %p, de ingrediente activo, sendo todas as percentagens em peso, baseadas na composição total. A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como anteriormente definido, em associação com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. 24 A invenção proporciona ainda um processo para a preparação de uma composição farmacêutica da invenção que compreende misturar um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como anteriormente definido, com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
As composições farmacêuticas podem ser administradas topicamente (e. g., ao pulmão e/ou vias respiratórias ou na pele) na forma de soluções, suspensões, aerossóis de heptafluoroalcano e formulações de pó secas; ou sistemicamente, e. g., através de administração oral na forma de comprimidos, cápsulas, xaropes, pós ou grânulos, ou com administração parentérica na forma de soluções ou suspensões, ou com administração subcutânea ou com administração rectal na forma de supositórios ou transdermicamente. Os processos convencionais para a selecção e preparação de formulações farmacêuticas adequadas são descritas em, com exemplo, "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", Μ. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988.
Num aspecto da invenção a composição pode ser adaptada para administração com inalação ou insuflação. Com exemplo, a composição pode ser administrada numa forma adequada para inalação, com exemplo como um pó finamente dividido ou um liquido aerossol, tal como um aerossol formado a partir de uma solução ou suspensão, predominantemente, aquosa, ou para administração com insuflação, com exemplo, como um pó finamente dividido.
Deve ser considerado que distribuição com inalação ou insuflação, proporciona concentrações mais elevadas do fármaco no local necessário, nomeadamente o epitélio de superfície do 25 pulmão, do que os rapidamente conseguidos a seguir a absorção sistémica do fármaco. Doses mais pequenas podem, deste modo, ser utilizadas para distribuir o fármaco localmente nas células especificas que são para ser controladas. Deste modo, são reduzidos quaisquer efeitos colaterais sistémicos adversos do fármaco e os efeitos benéficos do tratamento podem ser realizados mais rapidamente.
Tal administração pode utilizar um gás comprimido para expelir o fármaco a partir de um recipiente, com exemplo, pode ser utilizada uma formulação de aerossol compreendendo liquido fino ou partículas de sólido, deslocados com um gás propulsor sob pressão. 0 aerossol contém o fármaco que é dissolvido, ressuspenso ou emulsificado numa mistura de um veículo fluido e um propulsor. Os propulsores convencionais podem ser utilizados, com exemplo, hidrocarbonetos ou outros gases adequados ou as suas misturas. Os dispositivos convencionais de aerossol com dose medida de e de distribuição activada pela respiração (MDI) podem ser empregues. Alternativamente, o fármaco pode ser administrado utilizando um nebulizador convencional, que produz partículas finas de líquido de tamanho, substancialmente, uniforme contendo o fármaco disperso como pequenas gotas que podem penetrar no tracto respiratório do doente. Alternativamente, uma composição de pó contendo o fármaco, com ou sem um lubrificante, veículo ou propulsor, pode ser utilizado. Com exemplo, uma mistura de pó do composto e uma em pó adequada, tal como lactose ou amido podem ser apresentadas numa forma de dosagem unitária que pode ser administrada com o auxílio de um inalador.
Contudo, certos doentes podem produzir copiosas quantidades de muco nos pulmões e estes doentes podem não ser tratáveis 26 inicialmente com inalação. Nesse evento, pode ser preferido distribuir a composição farmacêutica da presente invenção com injecção ou oralmente.
As composições da invenção podem ser obtidas através de processos convencionais utilizando excipientes farmacêuticos convencionais que são bem conhecidos na técnica. Deste modo, as composições desenvolvidas para utilização oral podem conter, com exemplo, um ou mais agentes de coloração, adoçante, aromatizante e/ou de conservação. A invenção é ilustrada pelos seguintes exemplos: São utilizadas as seguintes abreviaturas: DCM Diclorometano DMF N,N-Dimetilformamida THF tetra-hidrofurano A menos que seja indicado o contrário, as soluções orgânicas foram secas utilizando sulfato de magnésio anidro. A menos que seja indicado o contrário, as colunas de troca de catiões foram eluidas utilizando misturas amónia/metanol.
Exemplo 1 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2—{2 —[{N-(2-clorobenzil)-N-metil}amino]etoxi}fenil]-tiofeno-3-carboxamida a) N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-(2-clorobenzil)metilamina (1,75 g) foi agitado em THF (15 mL) sob árgon. A solução 27 foi arrefecida a -78 °C e n-butil-lítio (3,4 mL, solução a 1,6 M em hexano) foi adicionada gota a gota. A mistura de reacção foi agitada a -78 °C durante 30 min, e foi adicionado tri-isopropilborato (1,88 g). A mistura foi agitada durante 1 h à temperatura ambiente e os solventes evaporados a pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em dimetoxietano (25 mL) e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (12 mL) adicionado, seguido com 2-[(aminocarbonil) amino]-5-bromotiofeno-3-carboxamida (0,35 g) . Foi borbulhado árgon na mistura em agitação em refluxo durante 5 min e foi adicionado Pd(PPh3)4 (0,1 g) . A mistura foi agitada durante mais 2 h em refluxo sob árgon, arrefecida e o dimetoxietano evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi agitado com água (10 mL) e DCM (30 mL) durante 30 min e filtrado. O sólido foi lavado com água, DCM e metanol produzindo o composto do título como um sólido bege (0,204 g). MS (ES) 459 (M+H)+. RMN de XH (DMSO-D6) 2,25 (s, 3H), 2,9 (t, 2H), 3,65 (s, 2H), 4,0 (t, 2H), 6,8 (s, 2H), 6,95 (t, 1H) , 7,1 (d, 1H), 7,1-7,25 (m, 4H), 7,3 (m, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,6 (m, 2H) , 7,7 (s, 1H), 10,9 (s, 1H) . b) N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-(2-clorobenzil) metilamina Ν-2-clorobenzilmetilamina (3,0 g), l-bromo-2-(2-cloroetoxi)benzeno (4,0 g), iodeto de potássio (0,165 g) e carbonato de potássio (7,0 g) foram aquecidos em DMF (45 mL) com agitação a 115 °C durante 18 h. A mistura foi arrefecida, o sólido foi removido com filtração e a solução de DMF foi evaporada, re-dissolvida em acetato de etilo, adsorvida em sílica gel, evaporada e submetida a 28 cromatografia em misturas de acetato de etilo-iso-hexano produzindo o produto como um óleo (1,7 g) . MS (ES) 354 (M+H)+. RMN de (CDC13) 2,4 (s, 3H), 3,0 (t, 2H) , 3,75 (s, 2H) , 4,2 (t, 2H), 6,7-6,9 (m, 2H) , 7,15-7,3 (m, 3H) , 7,3 (d, 1H) , 7,5-7,6 (m, 2H).
Exemplo 2 2-[(Aminocarbonil)aminol-5-[2-{2-[{N-(4-clorobenzil)-N-metil}amino]etoxi}fenil]-tiofeno-3-carboxamida a) O composto do titulo foi preparado a partir de N-[2-(2-bromofenoxi)etil]-N-(4-clorobenzil)metilamina de modo semelhante ao do Exemplo l(a). Após arrefecimento, o solvente foi evaporado e o resíduo foi agitado com D CM e água. A camada de DCM foi submetida a cromatograf ia em sílica em misturas metanol-DCM, e as fracções relevantes foram evaporadas numa cola que foi triturada com éter para produzir o composto do titulo como um sólido. MS (ES) 459 (M+H)+. RMN de XH (DMSO-D6) 2,2 (s, 3H), 2,9 (t, 2H), 3,55 (s, 2H), 4,2 (t, 2H), 6,8 (bs, 2H), 6,9 (t, 1H) , 7,05 (d, 1H) , 7,2 (m, 2H), 7,3 (s, 4H), 7,5-7,7 (m, 2H), 7,75 (s, 1H). b) N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-(2-clorobenzil)metilamina Isto foi preparado a partir de cloreto de 2-(2-bromofenoxi)etilo e N-metil-4-clorobenzilamina de modo semelhante ao do Exemplo 1(b) e purificado com 29 cromatografia em sílica gel eluindo com DCM, produzindo o composto do título como um óleo. RMN de XH (CDC13) 2,35 (s, 3H), 2,9 (t, 2H) , 3,6 (s, 2H) , 4,1 (t, 2H), 6,8-6,9 (m, 2H) , 7,2-7,3 (m, 4H), 7,5 (d, 2H) .
Exemplo 3 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-(benzilamino)etoxi} fenil]tiofeno-3-carboxamida a) N-[2-(2—{3—(Aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien-5-il}fenoxi)etil]-N-benzilcarbamato de terc-butilo (0,16 g) foi dissolvido em DCM (3 mL); foram adicionados tioanisole (0,5 g) e ácido trifluoroacético (1 mL) . A mistura foi agitada durante 30 min foi, então, adicionada água (5 mL) e a mistura extraída com DCM. O DCM foi adicionado a uma coluna de troca iónica SCX e eluída com metanol a 30%-DCM para remover o tioanisole, então com misturas amónia metanólica-DCM. O solvente foi evaporado e o resíduo recristalizado a partir de metanol produzindo o composto do título como um sólido branco (0,04 g). MS (ES) 411 (M+H)+. RMN de (DMSO-D6) 2,9 (t, 2H) , 3,8 (s, 2H), 4,1 (t, 2H) , 6,9 (s, 2H), 7,0 (t, 1H), 7,05 (d, 1H) , 7,15-7,35 (m, 8H), 7,6 (d, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,8 (S, 1H), 10,9 (s, 1H) . 30 b) N-[2-(2—{3—(aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien-5-il}fenoxi)etil]-N-benzilcarbamato de terc-butilo
Isto foi preparado a partir de N-benzil-N-[2-(2-bromofenoxi)etil]carbamato de terc-butilo de modo semelhante ao do Exemplo l(a), excepto que a camada de DCM foi submetida a cromatografia duas vezes em sílica em misturas DCM-metanol produzindo o composto do título como um sólido resinoso. MS (ES) 511 (M+H)+. RMN de (DMSO-D6) 1,35 (s, 9H), 3,6 (t, 2H) , 4,2 (t, 2H), 4.5 (s, 2H), 6,5 (bs 2H), 6,9-7,4 (m, 10H), 7,5 (d, 1H), 7.6 (s, 1H), 10,9 (s, 1H). c) N-benzil-N-[2-(2-bromofenoxi)etil]carbamato de terc-butilo .
Uma solução de dicarbonato de di-t-butilo (0,96 g) em DCM (4 mL) foi adicionada durante 5 min a uma solução em agitação de N-benzil-N-[2-(2-bromofenoxi)etil]amina (1,3 g) em DCM (16 mL) e a mistura foi agitada durante 1,5 h, depois concentrada em 6 mL, e diluída com iso-hexano (12 mL) . A solução foi submetida a cromatografia em sílica em misturas de iso-hexano-DCM produzindo o composto do título como um óleo descorado (0,9 g). MS (ES) 350 (M+H-56)+. RMN de XH (DMSO-D6, 100 °C) 1,4 (s, 9H), 3,5 (t, 2H), 4,15 (t, 2H), 4,55 (s, 2H), 6,9 (t, 1H), 7,1 (d, 1H), r 1,2- -7,35 (m, 6H), 7,55 (d, 1H). 31 d) N-Benzil-N-[2-(2-bromofenoxi)etil]amina
Isto foi preparado a partir de benzilamina e l-bromo-2-(2-cloroetoxi)benzeno pelo o método do Exemplo l(b). 0 material obtido após cromatografia em silica em misturas DCM-amónia metanólica foi agitado em DCM e um sólido removido com filtração. A evaporação dos licores mãe produziram o composto do título como um óleo. RMN de ΧΗ (DMSO-D6) 2,9 (t, 2H), 3,2-3,3 (bs, 1H), 3,8 (s, 2H), 4,1 (t, 2H), 6,9 (t, 1H), 7,1 (d, 1H), 7,2-7,35 (m, 6H), 7,55 (d, 1H) .
Exemplo 4 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-[N-benzil-N-metilamino] etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida a) 0 composto do titulo foi preparado a partir de N-benzil-N-[2-(2-bromofenoxi)etil]metilamina, de modo semelhante ao do Exemplo 1(a) excepto que após evaporação do dimetoxietano, o resíduo aquoso foi extraído com DCM (100 mL) . O último foi então extraída com ácido acético aquoso a 5%, os extractos de ácido acético foram ajustados a pH 8 com 10 N de solução de hidróxido de potássio e o precipitado resultante recolhido com filtração, lavado com água e digerido em metanol (5 mL), produzindo o composto do título como um sólido. MS 425 (M+H)\ 32 RMN de XH (DMSO-D6) 2,2 (s, 3H), 2,9 (t, 2H) , 3,55 (s, 2H) 4,25 (t, 2H), 6,8 (s, 2H), 7,0 (t, 1H), 7,1 (d, 1H), 7,2 7,3 (m, 7H) , 7,6 (d, 2H), 7,8 (S, 1H) , 11,0 (S, 1H) . b) N-Benzil-N-[2-(2-bromofenoxi)etil]metilamina.
Isto foi preparado a partir de l-bromo-2-(2-cloroetoxi)benzeno e N-metilbenzilamina, de modo semelhante ao do Exemplo l(b), excepto que a mistura foi agitada a 65 °C durante 16 h. MS (ES) 320(M+H) +. RMN de XH (CDC13) 2,4 (s, 3H), 2,9 (t, 2H), 3,7 (s, 2H) , 4,1 (t, 2H), 6,7-6,9 (m, 2H), 7,15-7,4 (m, 6H), 7,5 (d, 1H) .
Exemplo 5 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-(1,3-di-hidro-2fl-isoindol-2-il)etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida a) O composto do título foi preparado a partir de 2—[2—(2 — bromofenoxi)etil]isoindolina, de modo semelhante ao do Exemplo 1 (a), excepto que o sólido bruto obtido foi dissolvido em DCM e este foi extraído com ácido acético aquoso a 5%; os extractos de ácido acético foram ajustados a pH 9 com solução de hidrogenocarbonato de sódio e 0 precipitado resultante recolhido com filtração. MS (ES) 423,2 (M+H)+. RMN de (DMSO-D6) 3,2 (t, 2H), 3,9 (S, 4H) , 4,2 (t, 2H) σ'» co (bs, 2H), 7,0 (t, 1H) , 7,1-7,3 (m, 7H), 7,5-7,7 (m 2H) , 7, 75 (s, 1H) . 33 b) 2-[2-(2-Bromofenoxi)etil]isoindolina
Isto foi preparado, de modo semelhante ao do Exemplo l(b), excepto que a mistura foi agitada a 100 °C durante 16 h e o produto foi purificado com cromatografia em sílica em misturas de acetato de etilo-iso-hexano. MS (ES) 318 (M+H)+. RMN de XH (CDC13) 3,2 (t, 2H) , 4,1 (s, 4H), 4,2 (t, 2H), 6,8 (t, 1H), 6,9 (d, 1H), 7,2 (s, 4H), 7,3 (t, 1H), 7, 5 (d, 1H) .
Exemplo 6 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{[1-(4-fluorobenzil) pirrolidin-3-il]oxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida a) O composto do título foi preparado a partir de 3-(2-bromofenoxi)-1-(4-fluorobenzil)pirrolidina, de modo semelhante ao do Exemplo l(a), excepto que a mistura de reacção concentrada foi partilhada entre DCM e carbonato de sódio saturado. A camada de solvente foi lavada (solução salina), seca e evaporada para deixar um óleo que foi purificado com cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 455 (M+H)+. RMN de XH (DMSO-D6) 2,0 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,55 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 3,0 (m, 1H), 3,7 (m, 2H), 5,0 (m, 1H), 6,8 (br, 2H) ; 6,95 (m, 2H) , 7,1 (m, 2H), 7,2 (br, 1H), 7,3 (m, 2H), 7,6 (m, 2H), 7,8 (s, 1H) , 10,95 (s, 1H) . b) 3-(2-Bromofenoxi)-1-(4-fluorobenzil)pirrolidina
Foi adicionado hidreto de sódio (0,144 g, dispersão em óleo a 60%) em porções, a uma solução em agitação de 2- 34 bromofenol (0,52 g) em dimetilacetamida (10 mL). Após agitação durante 15 min, uma solução de 1-(4-fluorobenzil)pirrolidin-3-il metanossulfonato (3,7 mmol) em dimetilacetamida (10 mL) foi adicionada em porções e a mistura resultante foi aquecida a 75 °C durante 18 h. O solvente foi evaporado e o resíduo dissolvido em acetato de etilo/água. A fase do solvente foi lavada duas vezes (solução salina), seca e evaporada para deixar um óleo que foi purificado com cromatografia de troca de catiões produzindo o composto do título (0,6 g). MS (ES) 350 (M+H)+. RMN de (DMSO-D6) 1,6 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,7 (m, 2H), 3,1 (m, 1H), 3,6 (s, 2H), 4,8 (m, 1H), 6,8 (m, 2H), 7,0 (m, 2H), 7,2 (m, 3H) , 7,55 (dd, 1H) . c) 1-(4-Fluorobenzil)pirrolidin-3-ilmetanossulfonato Uma solução de 1-(4-fluorobenzil)pirrolidin-3-ol (0,72 g) e trietilamina (0.62 mL) em tolueno (50 mL) foi arrefecida a 0 °C e foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (0,34 mL) gota a gota com agitação. A mistura foi deixada aquecer à temperatura ambiente e agitada durante mais 4 h. A mistura de reacção foi filtrada e o filtrado evaporado para deixar um óleo que foi utilizado imediatamente. d) 1-(4-Fluorobenzil)pirrolidin-3-ol
Uma solução de 3-pirrolidinol (1,74 g) e brometo de 4-fluorobenzilo (4,9 g) em acetona foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. Após evaporação do solvente, o resíduo foi tratado com solução de hidróxido de potássio a 30% p/v e extraída duas vezes com acetato de 35 etilo. A fase de solvente combinada foi lavada com solução salina e seca. A evaporação do solvente produziu um óleo que foi purificado utilizando cromatografia de troca de catiões para produzir o composto do titulo (0,72 g) . MS (ES) 196 (M+H)+. RMN de XH (CDC13) 1,75 (m, 1H), 2,2 (m, 2H), 2,3 (m, 2H), 2,5 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 3,6 (s, 2H), 4,35 (m, 1H), 7,0 (m, 1H), 7,25 (m, 2H).
Exemplo 7 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{[l-benzilpirrolidin-3-il]oxijfenil]tiofeno-3-carboxamida a) O composto do titulo foi preparado a partir de 1-benzil-3-(2-bromofenoxi)pirrolidina, de modo semelhante ao do Exemplo 6(a). MS (ES) 437 (M+H)\ RMN de 1 H (DMSO- •D6 ) 2.0 (m, 1H), 2,2 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,7 (m, 2H), 3, 0 (m, 1H), 3, 6 (m, 2H) , 5, 0 (m, 1H), 6,8 (br, 2H) , 6, 95 (m , 2H), 7, 2 (m, 3H) , 7,3 (m, 5H), 7,7 (s, 1H) , 7,8 (m, 1H) / 10,91 (s, 1H) . b) l-Benzil-3-(2-bromofenoxi)pirrolidina O composto do titulo foi preparado a partir de l-benzilpirrolidin-3-ilmetanossulfonato e 2-bromofenol de modo semelhante ao do Exemplo 6 (b) e purificado utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 334 (M+H)+. 36 RMN de XH (DMSO-D6) 2,0 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,7 (m, 3H), 3,15 (m, 1H), 3,7 (s, 2H), 4,8 (m, 1H), 6,8 (m, 2H), 7,25 (m, 6H) , 7,5 (m, 1H). c) l-Benzil-pirrolidin-3-ilmetanossulfonato O composto do título foi preparado a partir de l-benzilpirrolidin-3-ol, de modo semelhante ao do Exemplo 6 (c) . MS (ES) 256 (M+H)+.
Exemplo 8 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-[(4-fluorobenzil)amino] etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida a) O composto do título foi preparado tratando N-[2-(2-(3-(aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien-5-il}fenoxi) etil]-N-[4-fluorobenzil]carbamato de terc-butilo com ácido trifluoroacético aquoso a 10% durante 2 h à temperatura ambiente seguido com purificação utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 429 (M+H)\ RMN de :Η (DMSO-D6) 2,9 (m, 2H), 3,8 (s, 2H), 4,15 (m, 2H), 6,85 (br, 2H), 6,95 (m, 1H), 7,05 (m, 3H), 7,2 (m, 2H) , 7,35 (m, 2H), 7,6 (m, 2H), 7,75 (s, 1H), 10,92 (s, 1H) . 37 b) N-[2-(2—{3—(Aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien 5-il}fenoxi)etil]-N-[4-fluorobenzil]carbamato de_terc- butilo O composto do título foi preparado a partir de N-[2-(2-bromofenoxi)etil]-N-[4-fluorobenzil]carbamato de terc-butilo, de modo semelhante ao do Exemplo l(a), excepto que a mistura de reacção concentrada foi partilhada entre DCM e carbonato de sódio saturado. A camada de solvente foi lavada (solução salina), seca e evaporada para deixar um óleo. 0 produto puro foi obtido com cromatografia em sílica eluindo com misturas de DCM/metanol. MS (ES) 529 (M+H)+. RMN de XH (DMS0-D6) 1,35 (s, 9H), 3,6 (m, 2H), 4,1 (m, 2H), 4,4 (m, 2 H), 6,8 (m, 2H), 7,1 (m, 2H), 7,25 (m, 3H), 7,6 (m, 6H), 10,98 (s, 1H). c) N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-[4-fluorobenzil]carbamato de terc-butilo
Uma solução de dicarbonato de di-terc-butilo (1,86 g) em DCM (5 mL) foi adicionada durante 5 min a uma solução em agitação de N-[2-(2-bromofenoxi)etil]-N-[4- fluorobenzil] amina (2,5 g) em DCM (20 mL) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A reacção foi diluída com DCM e então lavada com água. Após secagem, o solvente foi evaporado para produzir um óleo (2,9 g) . MS (ES) 424 (M+H)+. 38 d) N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-[4-fluorobenzil]amina 0 composto do título foi preparado a partir de l-bromo-2-(2-cloroetoxi)benzeno e 4-fluorobenzilamina, de modo semelhante ao do Exemplo 1(b). MS (ES) 324 (M+H)+.
Exemplo 9 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-(piridin-3-ilmetilamino)etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida a) 0 composto do título foi preparado a partir de N—[2—(2— {3-(aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien-5-il} fenoxi)etil]-N-[piridin-3-ilmetil]carbamato de terc-butilo, de modo semelhante, ao do Exemplo 8(a). A purificação foi realizada utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 412 (M+H)+. RMN de (DMSO-D6) 3,3 (m, 2H), 4,2 (m, 2H), 4,3 (m, 2H) , 6.9 (br, 2H), 7,1-7,3 (m, 5H) , 7,7 (m, 2H) , 7,8 (s, 1H) , 7.9 (m, 1H), 8,5 (m, 1H), 8,6 (s, 1H), 10,95 (s, 1H) . b) N-[2-(2—{3 —(Aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien- 5-il}fenoxi)etil]-N-[piridin-3-ilmetil] carbamato de terc-butilo
O composto do título foi preparado a partir de N—[2—(2— bromofenoxi)etil]-N-[piridin-3-ilmetil]carbamato de terc-butilo, de modo semelhante ao do Exemplo l(a). A 39 purificação foi realizada utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 512 (M+H)+. c) N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-[piridin-3-ilmetil]carbamato de terc-butilo. 0 composto do titulo foi preparado a partir de N—[2 —(2 — bromofenoxi)etil]-N-[piridin-3-ilmetil]amina, de modo semelhante ao do Exemplo 8(c). A purificação foi realizada utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 407 (M+H)+. RMN de :H (DMSO-D6) 1,5 (S, 9H) , 3,6 (m, 2H) , 4,2 (m, 2H) , 4,8 (s, 2H), 6,8 (m, 2H) , 7,2 (m, 2H), 7,55 (m, 1H) , 7,6 (m, 1H), 8,5 (m, 1H), 8,6 (s, 1H). d) N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-[piridin-3-ilmetil]amina O composto do titulo foi preparado a partir de l-bromo-2-(2-cloroetoxi)benzeno e (piridin-3-ilmetil)amina, de modo semelhante ao do Exemplo 8(d). MS (ES) 307 (M+H)+. RMN de 1H (DMSO-D6) 3,1 (m, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,2 (m, 2H), 6,8 (m, 2H), 7,2 (m, 3H), 7,55 (m, 1H), 7,6 (m, 1H), 8,55 (m, 1H). 40
Exemplo 10 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-(piridin-2-ilmetilamino) etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida a) O composto do título foi preparado a partir de N-[2-(2-{3-(aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien-5-il} fenoxi)etil]-N-[piridin-2-ilmetil]carbamato de terc-butilo, de modo semelhante ao do Exemplo 8 (a). A purificação foi realizada utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 412 (M+H)+. RMN de (DMSO-D6) 3,4 (m, 2H), 4,4 (m, 4H) , 6,9 (br, 2H) , 7,1-7,3 (m, 6H), 7,7 (m, 2H), 7,8 (s, 1H), 7,9 (m, 1H), 8,5 (m, 1H), 8,6 (m, 1H), 10,95 (s, 1H) . b) N-[2-(2—{3 —(Aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien-5-il}fenoxi)etil]-N-[piridin-2-ilmetil] carbamato de terc-butilo O composto do título foi preparado a partir de N-[2-(2-bromofenoxi)etil]-N-[piridin-2-ilmetil]carbamato de terc-butilo, de modo semelhante ao do Exemplo 1(a). A purificação foi realizada utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 512 (M+H)+. c) N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-[piridin-2-ilmetil]carbamato de terc-butilo O composto do titulo foi preparado a partir de N—[2 —(2 — bromofenoxi)etil]-N-[piridin-2-ilmetil]amina, de modo 41 semelhante ao do Exemplo 8(c). A purificação foi realizada utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 407 (M+H)+. RMN de (DMSO-D6) 1,5 (s, 9H), 3,8 (m, 2H), 4,2 (m, 2H) , 4,8 (s, 2H), 6,8 (m, 3H), 7,2 (m, 2H), 7,5 (m, 1H), 7,6 (m, 1H) , 8, 5 (m, 1H) . d) N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-[piridin-2-ilmetil]amina O composto do titulo foi preparado a partir de l-bromo-2-(2-cloroetoxi)benzeno e (piridin-2-ilmetil)amina, de modo semelhante ao do Exemplo 8(d). MS (ES) 307 (M+H)+. RMN de XH (DMSO-D6) 3,1 (m, 2H) , 4,05 (s, 2H) , 4,2 (m, 2H), 6,8 (m, 2H) , 7,2 (m, 3H) , 7,55 (m, 1H), 7,6 (m, 1H), 8,55 (m, 1H).
Exemplo 11 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-(piridin-4-ilmetilamino) etoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida a) O composto do titulo foi preparado a partir de N-[2-(2-{3-(aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien-5-il}fenoxi)etil]-N-[piridin-4-ilmetil]carbamato de terc- butilo, de modo semelhante ao do Exemplo 8(a). A purificação foi realizada utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 412 (M+H)+. RMN de XH (DMSO-D6) 3,45 (m, 2H), 4,3 (m, 2H), 4,4 (m, 2H), 6,9 (br, 2H), 7,2 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,4 (m, 2H), 7,6 42 (m, 2H), 7,7 (m, 1H), 7,8 (s, 1H), 7,9 (m, 1H), 8,5 (m, 1H), 8,6 (m, 1H), 9,4 (m, 1H), 11,0 (s, 1H). b) N-[2-(2—{3—(aminocarbonil)-2-[(aminocarbonil)amino]tien-5-il}fenoxi)etil]-N-[piridin-4-ilmetil] carbamato de terc-butilo O composto do título foi preparado a partir de N-[2-(2-bromofenoxi)etil]-N-[piridin-4-ilmetil]carbamato de terc-butilo, de modo semelhante ao do Exemplo l(a). A purificação foi realizada utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 512 (M+H)+. c) N-[2-(2-bromofenoxi)etil]-N-[piridin-4-ilmetil]carbamato de terc-butilo O composto do título foi preparado a partir de N—[2 —(2 — bromofenoxi)etil]-N-[piridin-4-ilmetil]amina, de modo semelhante ao do Exemplo 8(c). A purificação foi realizada utilizando cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 407 (M+H)+. RMN de XH (DMSO-D6) 1,5 (s, 9H), 3,6-3,8 (m, 2H), 4,2 (m, 2H), 4,8 (s, 2H), 6,8 (m, 3H) , 7,2 (m, 2H), 7,6 (m, 2H) , 8,55 (m, 1H). 43 d) N-[2-(2-bromofenoxi)etil]-N-[piridin-4-ilmetil]amina 0 composto do título foi preparado a partir de l-bromo-2-(2-cloroetoxi)benzeno e (piridin-4-ilmetil)amina de modo semelhante ao do Exemplo 8(d). MS (ES) 307 (M+H)+.
Exemplo 12 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2-{2-[N-(piridin-3-ilmetil)-N-metilamino]tetoxi}fenil]tiofeno-3-carboxamida a) O composto do título foi preparado a partir de N—[2—(2— bromofenoxi)etil]-N-metil-N-(piridin-3-ilmetil)amina, de modo semelhante ao do Exemplo l(a), excepto que a mistura de reacção concentrada foi partilhada entre DCM e carbonato de sódio saturado. A camada de solvente foi lavada (solução salina), seca e evaporada num óleo. O produto puro foi obtido com cromatografia de troca de catiões. MS (ES) 426 (M+H)+. RMN de 1h (DMSO-D6 CM C\1 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 3,7 (s, 2H), 4,25 (m, 2H), 6,8 (br, 2H), r 7,0 (m, 1H), LO O r- (m, 1H), 7,2 (m, 1H), 7,25 (m, 1 H) , 7, 6 (m, 2H), - 7,7 (m, 2H), 7,8 (s, 1H), 8,4 (m, 2H), 10, 95 (s, 1H) . 44 b) ilmetil)amina N-[2-(2-Bromofenoxi)etil]-N-metil-N-(piridin-3 0 composto do título foi preparado a partir de l-bromo-2-(2-cloroetoxi)benzeno e 3-(metilaminometil)piridina, de modo semelhante ao do Exemplo l(b). MS (ES) 321 (M+H)\ RMN de XH (DMSO-D6) 2,4 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 3,7 (s, 2H), 4,2 (m, 2H), 6,8 (m, 2H), 7,2 (m, 2H), 7,55 (m, 1H), 7,7 (m, 1H), 8,5 (m, 1H), 8,55 (m, 1H).
Exemplo 13 3-[(Aminocarbonil)amino]-5-[2 —{2 —(1,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)etoxi}fenil] tiofeno-2-carboxamida a) Ácido 2-bromotiofeno-4-carboxílico
Preparado de acordo com o método como descrito em J. Am. Chem. Soc., 1954, 76, 2445. MS (ES) 205 (M-H)". RMN de (DMSO-D6) 7,45 (s, 1H) , 8,22 (s, 1H) , 12,94 (bs, 1H) . b) 2-Bromo-4-(N-terc-butiloxicarbonil)aminotiofeno
Foi dissolvido ácido 2-bromotiofeno-4-carboxílico (3 g) em t-butanol seco aquecido (24 mL). Foi adicionada trietilamina (2,02 mL) seguida de difenilfosforilazida (3,12 mL). A solução foi lentamente aquecida até ao refluxo 45 e o aquecimento continuou até ao refluxo durante a noite. A mistura de reacção foi então deixada arrefecer, vertida em água (150 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL). Os extractos combinados foram secos, filtrados e evaporados. O produto bruto foi purificado com cromatografia em coluna, eluindo com acetato de etilo a 5% em hexano, para produzir um sólido branco (1,69 g) . MS (ES) 276 (M-H)". RMN de 1H (DMSO-D6) 1,44 (s, 9H) , 7,03 (s, 1H) , 7,51 (s, 1H), 9,65 (S, 1H) . c) Ácido 5-bromo-3-[(terc-butiloxicarbonil)aminoltiofeno-2-carboxílico
Foi agitado 2-bromo-4-(N-terc-butiloxicarbonil)aminotiofeno (1,68 g) em THF seco (45 mL) sob árgon e a solução foi arrefecida a -78 °C. Foi adicionado lítio diisopropilamida (7,55 mL, solução a 2 M), gota a gota, e a agitação continuou durante 3,5 h. Foi adicionado C02 pó (excesso) e a mistura foi agitada durante mais 10 min antes de deixar aquecer à temperatura ambiente. Foi adicionado água (50 mL), o THF foi removido sob vácuo e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 40 mL) . Os extractos combinados foram lavados com solução de HC1 a 1 M (50 mL), água (50 mL) e solução salina (50 mL), secos, filtrados e o solvente evaporado. 0 resíduo foi triturado com DCM e o produto recolhido com filtração como um sólido amarelo pálido (1,57 g). MS (ES) 320 (M-H)-. RMN de XH (DMSO-D6) 9,38 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 1,42 (s, 9H) . 46 d) carboxamida 5-Bromo-3-(terc-butiloxicarbonil)aminotiofeno-2-
Foi agitado ácido 5-bromo-3-[(terc-butiloxicarbonil) amino]tiofeno-2-carboxilico (0,80 g) em acetonitrilo (80 mL) . Foram adicionados hidroxibenzotriazole (1,41 g) e cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,62 g) e continuou a agitação à temperatura ambiente durante 10 min. Foi adicionada solução de amónia concentrada aquosa (8 mL) e a mistura de reacção foi aquecida até ao refluxo durante 1 h. O acetonitrilo foi removida com evaporação. Foi adicionada água (100 mL) e a mistura foi sonicada e triturada. O sólido branco resultante foi então recolhido com filtração, lavado com água e seco sob vácuo (0, 763 g) . MS (ES) 319 (M-H)”. RMN de (DMSO-D6) 1,45 (s, 9H) , 7,63 (brs, 2H), 7,78 (s, 1H), 10,40 (s, 1H). e) 3-Amino-5-bromotiofeno-2-carboxamida
Foi agitada 5-bromo-3-(terc-butiloxicarbonil)aminotiofeno-2-carboxamida (0,76 g) em DCM (30 mL). Foi adicionado ácido trifluoroacético (5 mL), a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, vertido em solução de hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (200 mL) e extraida com DCM (3 x 100 mL) . Os extractos combinados foram lavados com solução salina (150 mL), secos, filtrados e evaporados para produzir um sólido amarelo (0,511 g). 47 MS (ES) 221 (M+H)\ RMN de XH (DMSO-D6) 6,50 (bs, 2H), 6,69 (s, 1H), 6,87 (bs, 2H) . f) 3-[(Aminocarbonil)amino-5-bromotiofeno-2-carboxamida
Foi agitada 3-amino-5-bromotiofeno-2-carboxamida (0,25 g) em THF anidro (10 mL), arrefecida a 0 °C e tricloroacetilisocianato (0,148 mL) adicionado gota a gota. A mistura foi deixada aquecer à temperatura ambiente, agitada durante 1,5 h e foi adicionada amónia a 2 M em metanol (16 mL) . Após 1,5 h, os solventes foram evaporados e o residuo triturado com éter dietílico e seco sob vácuo para produzir o composto do título como um sólido amarelo (0,26 g). MS (ES) 264 (M+H)+. RMN de :Η (DMSO-D6) 6,63 (bs, 2H) , 7,41 (bs, 2H), 7,97 (s, 1H), 10,02 (s, 1H). g) 3-[(Aminocarbonil)amino]—5—[2 — {2—(1,3-di-hidro-2H- isoindol-2-il)etoxi}fenil]tiofeno-2-carboxamida O composto do título foi preparado a partir de 2—[2—(2 — bromofenoxi)etil]isoindolina e 3-[(aminocarbonil)amino]-5-bromotiofeno-2-carboxamida, de modo semelhante ao do Exemplo l(a). O produto puro foi obtido com cromatografia em sílica eluindo com misturas de DCM/metanol. MS (ES) 423 (M+H)+. 48 RMN de 3H (DMSO-D6) 3,2 (m, 2H), 3,95 (s, 4H), 4,3 (m, 2H), 6,5 (br, 2H), 7,0 (s, 1H) , 7,2 (m, 5H) , 7,3 (m, 2H) , 7,6 (m, 2H), 8,4 (s, 1H), 10,0 (s, 1H).
Avaliação Farmacológica e Farmacocinética de Compostos Ensaio de Cinase IKK-2 em Filtro
Os compostos foram testados para inibição de IKK-2 utilizando um ensaio de cinase em filtro. Os compostos de teste foram dissolvidos para 10 mM em dimetilsulfóxido (DMSO) . Os compostos foram então diluídos 1 em 40 em tampão de cinase (50 mM Tris, pH 7,4 contendo 0,1 mM de EGTA, 0,1 mM de ortovanadato de sódio e β-mercaptoetanol a 0,1%). Foram feitas diluições seriadas de 1 em 3 a partir desta solução com DMSO a 2,5% em tampão de cinase. Foram adicionados 20 pL de diluição do composto a poços de uma placa de 96 poços em duplicado. Foram adicionados 20 pL de DMSO a 2,5% em tampão de cinase em vez de composto aos poços de controlo (0% de inibição). Foram adicionados 20 pL de EDTA de 0,5 M em vez de composto aos poços do ruído de fundo (100 % de inibição).
Foram adicionados 10 pL de uma mistura de acetato de magnésio, ATP não marcado, e ATP 33P marcado a cada poço de modo que a concentração final foi de 10 mM de acetato de magnésio, 1 pM de ATP e 0,1 pCi de 33P ATP. Foram adicionados 20 pL de uma mistura de IKK-2 (0,15 pg/poço), 1-53 GST-IkB (0,5 pg/poço) e albumina de soro bovino (BSA) (8,5 pg/poço) a cada poço para iniciar a reacção. O volume final de reacção foi 50 pL. 49
As reacções de cinase foram incubadas a 21 °C durante 80 minutos e a reacção parou com precipitação da proteína pela adição de um igual volume (50 pL) de ácido tricloroacético a 20% (TCA). O precipitado foi deixado formar durante 10 minutos e então filtrado numa placa de 96 poços unifiltro GF/C. Cada filtro foi lavado duas vezes com, aproximadamente, 1 mL de TCA a 2%. A placa do filtro foi seca a 30-40 °C durante 60 minutos, foram adicionados 20 pL de cintilante a cada poço e a placa foi selada e a radioactividade foi contada num contador de cintilações de microplacas Packard Topcount.
Quando testados no ensaio acima, os compostos dos Exemplos 1 a 13 produziram valores de IC50 inferiores a 10 pM indicando que estes são esperados apresentar uma actividade terapêutica útil.
Ensaio de cinase IKK-1 em Filtro A selectividade de compostos foi avaliada pelo teste para inibição de IKK-1 utilizando um ensaio de cinase em filtro. As condições do ensaio foram idênticas ao ensaio de cinase em filtro para IKK-2, excepto que foi adicionada uma mistura de IKK-1 (0,25 pg/poço) e 1-53 GST IkB (9 pg/poço) a cada poço para iniciar a reacção.
Inibição da produção de TNFa induzida com LPS em PBMC O efeito dos compostos de teste na activação do factor nuclear kappa B (NFkB) em células foi avaliada pela medida da inibição da produção do factor de necrose de tumor alfa (TNFa) 50 com células mononucleadas humanas de sangue periférico (PBMC) estimuladas pelo lipopolissacárido bacteriano (LPS).
Sangue humano (250 mL), anticoagulado com heparina, foi recolhido a partir de voluntários saudáveis. Fracções de sangue (25 mL) foram aplicadas em 20 mL de Lymphoprep (Nycomed) em tubos de centrífuga de propileno de 50 mL. Os tubos foram centrifugados (Sorvai RT600B) a 2 500 rpm durante 30 minutos. A camada nebulosa contendo PBMCs foi recolhida com uma pipeta de
Pasteur de ponta fina, transferida em 8 tubos de centrífuga de propileno limpos (aproximadamente 10 mL com tubo) e diluídos para 50 mL com salino tamponado com fosfato (PBS) . Estes tubos foram centrifugados a 2 000 rpm durante 8 minutos. Foi adicionado PBS (10 mL) a cada precipitado celular e as células foram gentilmente re-ressuspensas. As células foram misturadas em 4 tubos de centrífuga, o PBS foi adicionado a cada tubo para perfazer o volume até 50 mL e os tubos foram centrifugados a 1400 rpm durante 8 minutos. Os precipitados celulares foram de novo re-ressuspensos em 10 mL de PBS, misturados em 2 tubos de centrífuga, o volume foi trazido até 50 mL com PBS e os tubos centrifugados a 900 rpm durante 10 minutos.
Os precipitados celulares finais foram gentilmente re-ressuspensos em 10 mL de meio de cultura de tecidos (RPMI contendo 1% de soro humano inactivado pelo calor, L-glutamina e penicilina e estreptomicina), combinada em 1 tubo e o volume foi trazido até 30 mL com meio RPMI. As células foram contadas e a suspensão de células foi diluída para 2,6 x 106 células/mL.
Os compostos de teste foram dissolvidos em DMSO para 10 mM e diluídos 1 em 250 (40 μΜ) com meio RPMI. Os compostos foram então diluídos em série 1 em 3 com 0,4% de DMSO em meio RPMI. 51
Fracções das diluições do composto de teste (50 pL) foram transferidas para os poços de uma placa de 96 poços. Os poços de controlo continham 0,4% de DMSO em RPMI em vez do composto.
As fracções da suspensão de células (100 pL) foram adicionadas a cada poço e as placas incubadas a 37 °C durante 30 minutos. Foram adicionados 50 pL de 40 pg/mL de LPS (Sigma, L-4130) a poços para estimular a produção de TNFa pelas células e as placas foram incubadas durante a noite a 37 °C. Foi adicionado meio RPMI (50 pL) aos poços do controlo negativo em vez de LPS. O volume final de incubação foi de 200 pL.
As placas foram centrifugadas durante 4 minutos a 1 200 rpm e os sobrenadantes foram removidos para medida da concentração de TNFa. A viabilidade de precipitado celular restante foi medida utilizando o reagente WST-1 (Boehringer Mannheim, 1044807) . Foram adicionados 100 pL de meio RPMI contendo 10 pL de reagente WST-1 a cada poço e as placas foram incubadas durante 0,5 a 3 h. A absorvência a 450 nm foi então medida utilizando um espectrofotómetro de placas de 96 poços. O TNFa nos sobrenadantes (recolhidos de fresco ou armazenados a -20°C) foi medido utilizando um ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA). A placa de ELISA foi preparada com revestimento dos poços de uma placa de 96 poços com um anticorpo monoclonal de ovelha anti-TNFa humano (100 pL de 1 pg/mL de anticorpo diluídos em tampão de revestimento; 0,5 M de tampão carbonato/bicarbonato, pH 9,6 contendo 0,2 g/L de azida de sódio) e incubando durante a noite a 4 °c. Os poços brancos não foram revestidos. Os poços foram lavados uma vez com BSA a 0,1% em PBS contendo Tween a 0,05% (PBS/Tween), depois incubadas durante 1 h à temperatura ambiente com BSA a 1% em 52 tampão de revestimento (200 pL) . Os poços foram então lavados 3 vezes com BSA a 0,1% em PBS/Tween.
As amostras de sobrenadante da incubação dos PBMC foram diluídas 1 em 3 com BSA a 1% em PBS/Tween. Foram adicionados fracções de 100 pL destas diluições à placa de ELISA. Outros poços continham 100 pL de TNFa padrão (10, 3,3, 1,1, 0,37, 0,12, 0,04, 0,014 e 0 ng/mL). A placa de ELISA foi incubada à temperatura ambiente durante 2 h antes dos poços serem lavados 3 vezes com BSA a 0,1% em PBS/Tween. Um anticorpo de coelho anti- TNFa humano (100 pL de uma solução 2,5 pg/mL) foi adicionado a cada poço e a placa foi incubada à temperatura ambiente durante 1,5 h. Os poços foram então lavado 3 vezes com BSA a 0,1% em PBS/Tween. Foi adicionado anti-igG de coelho de cabra conjugado com peroxidase de rábano (ICN, 674371; 100 pL de uma diluição de 1 em 10000) a cada poço e a placa foi incubada à temperatura ambiente durante 1,5 h. Os poços foram lavados 3 vezes com BSA a 0,1% em PBS/Tween. O substrato da peroxidase foi preparado dissolvendo um comprimido de 1 mg de TMB (Sigma, T-5525) em 100 pL de DMSO (100 pL) e adicionando isto e 36 pL de UHPO (BDH, 30559; comprimido de 1 g dissolvido em 25 mL de água destilada) a 10 mL de citrato a 0,1 M/tampão acetato, pH6. Foram adicionados 100 pL de substrato a cada poço e a placa foi incubada no escuro à temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos. A reacção foi interrompida pela adição de 25 pL de ácido sulfúrico a 2 M a cada poço. A absorvência a 450 nm foi medida num espectrofotómetro de placas de 96 poços. 53
Avaliação da Permeabilidade e Potencial de Efluxo de
Composto utilizando Monocamadas de Células CACO-2.
As células Caco-2 são uma linha celular derivada a partir de células humanas de cancro do cólon. As células Caco-2 retêm muitas das propriedades do tracto gastro-intestinal humano, incluindo as junções apertadas e proteínas de transporte (e. g., transportador pgp), e são utilizados primariamente para avaliar o potencial dos compostos serem absorvidos após administração oral. Neste protocolo de ensaio, os transportes na direcção apical para a basolateral (direcção A-B) assim como na direcção oposta (direcção B-A) são determinados para avaliar a permeabilidade e potenciais de efluxo dos compostos de teste.
As células são semeadas a uma densidade de 100000 células/poço em filtros de 1 pm em cada poço de placas de 24 poços (Beckton- Dickinson, UK) e cultivadas até que uma monocamada de células intacta é formada ao longo de cada poço (14 dias).
Quando estão prontas para utilização as monocamadas intactas são avaliadas utilizando a medida da Resistência Trans-Epitelial (TEER) em cada poço. Se as TEERs são aceitáveis, cada composto de teste é adicionado a tampão a pH 7,4 para uma concentração de 10 μΜ em qualquer das câmaras superior (Apical; A) ou inferior (Basolateral; B) dos poços individuais das placas de 24 poços em duplicado, resultando em medições em replicado da permeabilidade de cada composto através das monocamadas nas direcções A-B e B-A. Quatro compostos de referência são incubados ao lado dos compostos de teste para efeitos de controlo de qualidade (baixa, média e elevada permeabilidade, mais um substrato de efluxo conhecido). 54
Após misturar, uma fracção da câmara dadora é imediatamente tomada para análise (TO). As placas são então incubadas durante 120 min a 37 °C, após os quais uma outra fracção é tirada a partir da câmara dadora (utilizada para avaliar a recuperação ao longo da duração da experiência), enquanto é tirada uma fracção semelhante a partir da câmara receptora nesta altura (amostra T120) .
Todas as manipulações das amostras são efectuadas num robot Tecan Genesis RS200.
Todas as amostras são analisadas utilizando LC-electrospray MS (modos + e -), e as áreas dos picos são utilizadas para quantificar cada agente de teste. A partir dos dados obtidos a taxa de transferência (Papp) de cada composto através da monocamada é calculada em qualquer das direcções A-B ou B-A. A partir dos dados Papp(A-B), a potencial absorção humana é categorizada como BAIXA (Papp<=0,5 x 106. cm2. sec-1), PARCIAL (Papp>0,5 <=2,9 x 106.cm2.sec_1) ou ELEVADA (Papp>2,9 x 106.cm2.sec-1), enquanto a partir da proporção Papp(B-A)/Papp(A-B), o potencial para efluxo do composto de teste é avaliada, quando a proporção á5 é categorizada como ELEVADA, e <5 é categorizada como BAIXA. 55
Resultados
Composto Inibição de IKK-2 (μΜ) Ensaio de Caco-2 Papp (cm2.sec-1 x IO-6) Proporção Papp(B-A) /Papp(A-B) Exemplo 4 0,04 13, 4 0, 83 Exemplo 5 0,15 14,3 0,66 Exemplo 7 0,04 15, 7 1,07 Exemplo 13 1,43 23, 6 1,26 Exemplo 82, WO 01/58890 0,26 0,1 a 0,4 64 a 472 2- [(Aminocarbonil)amino]-5-(2-[{1- metilpirrolidin-3-il}oxi]fenil)-3-tiofenecarboxamida 0,01 2,19 8,14 2- [(Aminocarbonil)amino]-5-(2-{ [ 1—(2 — metoxietil)pirrolidin-3-il]oxi}fenil)- 3-tiofenecarboxamida 0,03 1, 86 5,88
Lisboa, 20 de Novembro de 2007 56

Claims (16)

  1. REIVINDICAÇÕES Composto de fórmula (I) D*, >NR, , T Vy* ÁÍ. . Λ. s·'- sfi ’ v b 'f (D "'“t À m ~ í CR^6 ^ (CROR^ (CR*R%-Ar em que: R1 representa H ou CH3; R2 representa H, halogéneo, ciano, alquilo Cl a 2, trifluorometilo ou alcoxilo Cl a 2; n representa um número inteiro 1, 2 ou 3; m representa um número inteiro 0, 1, 2 ou 3; R3 representa H, alcenilo C2 a 4 ou alquilo Cl a 4; sendo o referido grupo alquilo opcionalmente, ainda substituído com CN, alcoxilo Cl a 4, alquil-SC>2- Cl a 4 ou um ou mais átomos de flúor; ou R3 representa grupo alquileno Cl a 4 que forma um anel azacíclico de 4 a 7 membros em virtude de estar adicionalmente ligado ao anel aromático, Ar, ou ao grupo ligante -CR4R5- (CR4R5)n-; R4 e R5 representam independentemente H ou alquilo Cl a 2; ou o grupo CR4R5 em conjunto representa um anel carbocíclico de 3 a 6 membros que incorpora opcionalmente 1 um heteroátomo seleccionado de 0 ou S; e cada R4, cada R5 e cada grupo CR4R5 é seleccionado independentemente; Ar representa um anel fenilo ou um anel heteroaromático de 5 ou 6 membros contendo um a três heteroátomos seleccionados independentemente de 0, N e S; sendo o referido anel fenilo ou heteroaromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados independentemente de halogéneo, ciano, alquilo Cl a 2, trifluorometilo, alcoxilo Cl a 2, NR6R7, -CONR6R7, -COOR6, -NR6COR7, -S(0)pR6, -S02nr6r7 e -NR6S02R7; R6 e R7 representam independentemente H, alcenilo C2 a 4 ou alquilo Cl a 4; sendo os referidos grupos alquilo ou alcenilo opcionalmente, ainda substituído com um ou mais átomos de halogéneo; p representa um número inteiro 0, 1 ou 2; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  2. 2. Composto de fórmula (I), de acordo com a Reivindicação 1, em que n representa o número inteiro 1.
  3. 3. Composto de fórmula (I), de acordo com Reivindicação 1 ou Reivindicação 2, em que R1 representa H.
  4. 4 . Composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 3, em que Ar representa, fenilo opcionalmente substituído ou piridilo opcionalmente substituído.
  5. 5. Composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 4, em que cada R4 e cada R5 representa H. 2
  6. 6. Composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 5, em que m representa o número inteiro 1.
  7. 7. Processo para a preparação de um composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 6, que compreende: (a) reacção de um composto de fórmula (II):
    em que R1, R2, Reivindicação 1 * (CR* av —Ar R3, R4, R5, Ar, m e n são , com um isocianato; ou como definido na (b) reacção de composto de fórmula (III)
    3 em que R1, R2, R4, R5 e n são como definido na Reivindicação 1 e LG representa um grupo de saida, com uma amina (R3NH (CR4R5)m-Ar), em que R3, R4, R5, Ar e m são como definido na Reivindicação 1; ou (c) reacção de composto de fórmula (IV)
    ^ (CR<R% N. At em que R2, R3, R4, R5, m, n e Ar são como definido na Reivindicação 1, com um composto de fórmula (V)
    em que R1 é como definido na Reivindicação 1 e LG representa um grupo de saida; ou (d) reacção de composto de fórmula (VI) 4
    m cm$ \cR*RSk
    em que R2, R3, R4, R5, m, n e Ar são como definido na Reivindicação 1 e LG representa um grupo de saida, com um composto de fórmula (VII)
    em que R1 é como definido na Reivindicação 1; e quando necessário convertendo o composto resultante de fórmula (I), ou outro seu sal, num seu sal farmaceuticamente aceitável; ou convertendo o composto resultante de fórmula (I) num outro composto de fórmula (I); e sempre que desejado convertendo o composto resultante de fórmula (I) num isómero óptico deste.
  8. 8. Composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 5 em associação com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
  9. 9. Composição farmacêutica adaptada para administração com inalação ou insuflação compreendendo um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 em associação com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
  10. 10. Processo para a preparação de uma composição farmacêutica como reivindicado na Reivindicação 8 que compreende a mistura de um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
  11. 11. Composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, para utilização em terapia.
  12. 12. Utilização de um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, na preparação de um medicamento para utilização no tratamento ou profilaxia de doença inflamatória.
  13. 13. Utilização de um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, na preparação de um medicamento para utilização no tratamento ou profilaxia de artrites reumatóides, osteoartrite, espondilite, sindrome 6 de Reiters, artrite psoriática, lúpus e doença de reabsorção óssea; esclerose múltipla, doença inflamatória dos intestinos; asma, doença pulmonar obstrutiva crónica, enfisema, rinite, miastenia grave, doença de Graves, rejeição de aloenxerto, psoriase, dermatite, distúrbios alérgicos, doenças do complexo imunitário, caquexia, ARDS, choque tóxico, falha cardíaca, enfartes do miocárdio, aterosclerose, lesão de reperfusão, SIDA, cancro, diabetes, hiperglicémia, hiperinsulinémia, dislipidemia, obesidade, doença do ovário poliquístico, hipertensão, doença cardiovascular ou síndrome X.
  14. 14. Utilização como reivindicado na Reivindicação 13, em que a doença é artrite reumatóide.
  15. 15. Utilização como reivindicado na Reivindicação 13, em que a doença é doença pulmonar obstrutiva crónica.
  16. 16. Utilização como reivindicado na Reivindicação 12, em que a doença é cancro. Lisboa, 20 de Novembro de 2007 7
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Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0003154D0 (en) * 2000-02-12 2000-04-05 Astrazeneca Uk Ltd Novel compounds
SE0102616D0 (sv) * 2001-07-25 2001-07-25 Astrazeneca Ab Novel compounds
SE0300091D0 (sv) 2003-01-15 2003-01-15 Astrazeneca Ab Novel compounds
SE0300092D0 (sv) * 2003-01-15 2003-01-15 Astrazeneca Ab Novel compounds
ES2314443T3 (es) 2003-08-15 2009-03-16 Astrazeneca Ab Tiofenos sustituidos y sus usos.
CN100584840C (zh) * 2004-01-05 2010-01-27 阿斯利康(瑞典)有限公司 取代杂环化合物及其应用
WO2005105777A1 (en) * 2004-05-05 2005-11-10 Pharmacia & Upjohn Company Llc Substituted thiophene amide compounds for the treatment of inflammation
DK2119703T3 (da) * 2007-01-15 2013-01-14 Santen Pharmaceutical Co Ltd Nyt indolderivat med inhiberende virkning på I-B-kinase.
WO2009096198A1 (ja) * 2008-02-01 2009-08-06 Pharma Ip Limited Liability Intermediary Corporations 新規ビアリール誘導体
JP2011518814A (ja) * 2008-04-23 2011-06-30 クロマ セラピューティクス リミテッド Ｉｋｋ−ベータセリン−スレオニンプロテインキナーゼの阻害剤
EP2314575B1 (en) * 2008-07-14 2013-06-19 Santen Pharmaceutical Co., Ltd Novel indole derivative having carbamoyl group, ureido group and substituted oxy group
GB0907120D0 (en) * 2009-04-24 2009-06-03 Chroma Therapeutics Ltd Inhibitors of IKK-ß serine-threonine protein kinase
GB0913345D0 (en) 2009-07-31 2009-09-16 Astrazeneca Ab New combination 802
WO2011061527A1 (en) 2009-11-17 2011-05-26 Astrazeneca Ab Combinations comprising a glucocorticoid receptor modulator for the treatment of respiratory diseases
GB201016912D0 (en) 2010-10-07 2010-11-24 Astrazeneca Ab Novel combination
GB201021979D0 (en) 2010-12-23 2011-02-02 Astrazeneca Ab New compound
GB201021992D0 (en) 2010-12-23 2011-02-02 Astrazeneca Ab Compound

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1468012A (en) 1973-08-09 1977-03-23 Beecham Group Ltd 2-amino-3-carboxy-thiophene derivatives
DE3529247A1 (de) 1985-05-17 1986-11-20 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Verwendung von thienylharnstoffen und -isoharnstoffen als leistungsfoerdernde mittel bei tieren, neue thienylharnstoffe und -isoharnstoffe und ihre herstellung
GB2195634B (en) 1986-10-01 1990-08-15 Roussel Lab Ltd Thiophene derivatives
US5258357A (en) * 1989-10-07 1993-11-02 Basf Aktiengesellschaft Carboxamides, their preparation and their use as herbicides
US5378703A (en) * 1990-04-09 1995-01-03 Alcon Laboratories, Inc. Sulfonamides useful as carbonic anhydrase inhibitors
US5571810A (en) * 1990-06-11 1996-11-05 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Thiophene derivatives
US5514801A (en) * 1992-12-29 1996-05-07 Monsanto Company Cyclic sulfone containing retroviral protease inhibitors
US6417202B1 (en) 1996-07-11 2002-07-09 Pfizer Inc. Pyridylpyrrole compounds useful as interleukin-and TNF antagonists
PT853083E (pt) * 1997-01-06 2001-12-28 Pfizer Composto de piridilfurano e piridiltiofeno e sua utilizacao farmaceutica
US6809088B2 (en) * 1997-03-24 2004-10-26 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques (S.C.R.A.S.) Derivatives of 2-(iminomethyl)amino-phenyl, their preparation, their use as medicaments and the pharmaceutical compositions containing them
WO1998046588A2 (en) * 1997-04-11 1998-10-22 Neorx Corporation Compounds and therapies for the prevention of vascular and non-vascular pathologies
US6037340A (en) 1997-05-28 2000-03-14 Cadus Pharmaceutical Corporation Synthesis and use of thiophene- and pyrrole-based heteroaromatic compounds
DE19744026A1 (de) 1997-10-06 1999-04-08 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Pyrazol-Derivate, ihre Herstellung und ihre Verwendung in Arzneimitteln
WO1999046244A1 (en) 1998-03-12 1999-09-16 Novo Nordisk A/S Modulators of protein tyrosine phosphatases (ptpases)
CN1332943C (zh) * 1998-07-08 2007-08-22 萨诺费－阿文蒂斯德国有限公司 硫取代的磺酰基氨基羧酸n－芳基酰胺,其制备方法、用途以及含有该化合物的药物制剂
HN2000000051A (es) * 1999-05-19 2001-02-02 Pfizer Prod Inc Derivados heterociclicos utiles como agentes anticancerosos
GB0003154D0 (en) 2000-02-12 2000-04-05 Astrazeneca Uk Ltd Novel compounds
AU2001242629B2 (en) * 2000-03-29 2005-08-11 Cyclacel Limited 2-substituted 4-heteroaryl-pyrimidines and their use in the treatment of proliferative disorders
US6414013B1 (en) 2000-06-19 2002-07-02 Pharmacia & Upjohn S.P.A. Thiophene compounds, process for preparing the same, and pharmaceutical compositions containing the same background of the invention
AU2002211663A1 (en) * 2000-10-12 2002-04-22 Smith Kline Beecham Corporation Nf-$g(k)b inhibitors
US7122544B2 (en) * 2000-12-06 2006-10-17 Signal Pharmaceuticals, Llc Anilinopyrimidine derivatives as IKK inhibitors and compositions and methods related thereto
US20050238911A1 (en) 2001-03-16 2005-10-27 Sturley David K Non-powered luminous panels and devices and method of manufacture
US6713638B2 (en) * 2001-05-18 2004-03-30 Joel M. Linden 2-amino-3-aroyl-4,5 alkylthiophenes: agonist allosteric enhancers at human A1 adenosine receptors
BR0210357A (pt) * 2001-06-11 2004-06-29 Shire Biochem Inc Composto e métodos para o tratamento ou a prevenção de infecções pelo flavivìrus
SE0102617D0 (sv) 2001-07-25 2001-07-25 Astrazeneca Ab Novel compounds
SE0102616D0 (sv) * 2001-07-25 2001-07-25 Astrazeneca Ab Novel compounds
WO2003029241A1 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Smithkline Beecham Corporation Chk1 kinase inhibitors
ES2315430T3 (es) * 2001-10-04 2009-04-01 Smithkline Beecham Corporation Inhibidores de nf-kb.
WO2003028731A1 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Smithkline Beecham Corporation Chk1 kinase inhibitors
TWI281916B (en) * 2001-10-25 2007-06-01 Lilly Co Eli Antitumor compounds and methods
US6835745B2 (en) * 2002-01-15 2004-12-28 Wyeth Phenyl substituted thiophenes as estrogenic agents
US7196106B2 (en) * 2002-11-05 2007-03-27 Merck & Co., Inc Cyanothiophene derivatives, compositions containing such compounds and methods of use
SE0300091D0 (sv) 2003-01-15 2003-01-15 Astrazeneca Ab Novel compounds
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