PT1551412E - COMPOSIÇÕES FARMACjUTICAS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS ASSOCIADAS ÀS NEUROTROFINAS - Google Patents

COMPOSIÇÕES FARMACjUTICAS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS ASSOCIADAS ÀS NEUROTROFINAS Download PDF

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Enrico Garaci
Maria Torcia
Antonio Guarna
Frederico Cozzolino
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Description

DESCRIÇÃO
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS ASSOCIADAS ÀS NEUROTROFINAS
Campo da invenção A presente invenção refere-se a composições farmacêuticas compreendendo derivados de 3-aza-biciclo[3.2.1]octano de fórmula geral (I), a seguir relatado, ou suas misturas, úteis no tratamento de patologias nas quais as funções das neurotrofinas, particularmente do Factor de Crescimento do Nervo (NGF), estão alteradas.
Estado da técnica
Numerosas proteínas e factores de polipeptídeos regulam o crescimento celular e/ou a sobrevivência. 0 primeiro desses fcatores, que foi identificado e caracterizado funcionalmente é NGF. Mais tarde, outras proteínas pertencentes à mesma família NGF foram identificadas por exercerem sua actividade em diferentes populações de células nervosas. Todas essas proteínas são referidas colectivamente como "neurotrofinas".
NGF, mediante interacção com receptores específicos da superfície, evita a morte celular neuronal durante o desenvolvimento embrionário e em toda a vida adulta. A 1 administração de NGF foi comprovada ser vantajosa em condições patológicas, como doenças degenerativas e isquémicas do Sistema Nervoso Central (SNC), lesões da coluna vertebral, e na toxicidade de aminoácidos excitantes. De facto, juntamente com outros factores neurotróficos, a NGF promove a regeneração neuronal e suporta funções neuronais.
Os usos terapêuticos de NGF foram limitados pela sua fraca capacidade para atravessar a barreira sangue-cérebro, em parte devido ao tamanho molecular do factor nativo. Assim, o desenvolvimento de compostos não-peptidicos capazes de imitar especificamente as actividades do ligante natural é uma abordagem útil para evitar a tais limitações. Exemplos relevantes de tais compostos são: a) ésteres de forbol, que imitam NGF presumivelmente modificando a actividade PKCc; b) gangliosideo e outros compostos lipídicos não relacionados, que promovem o crescimento neurítico de gânglios da raiz dorsal, ou outros neurónios simpáticos; c) Triap (1,1,3-triciano-2-amino-l-propeno), um composto pequeno capaz de suportar a sobrevivência e induzir o crescimento neurítico nas células PC12. Em todos os casos acima, a actividade das moléculas não é mediada pelas interacções com receptores de NGF. 0 desenvolvimento de novos compostos não peptídicos capazes de interagir com receptores específicos, comportando-se, assim, como agonistas ou antagonistas, de neurotrofinas humanas é de extrema importância, uma vez que podem ser usadas como medicamentos para o tratamento de distúrbios relacionados com uma actividade deficiente ou excessiva de neurotrofinas. 2
Re stimo da invenção
Agora, os requerentes descobriram inesperadamente que os derivados de 3-aza-biciclo[3.2.1]octano de fórmula geral (I), conforme relatado a seguir, são activos como agonistas das neurotrofinas humanas, são, portanto, úteis para a preparação de composições farmacêuticas para o tratamento de doenças nas quais as funções das neurotrofinas, particularmente as funções NGF, estão envolvidas por defeito.
May, M. et al.: "Cholinomimetic Activities of Some Analogs of cis-2-Methyl-4-dimethylaminomethyl-l,3-dioxolane Methiodide", Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 57, n° 3, 1968, páginas 511-513 revela um sal de amónio de um derivado azabiciclo-octano semelhante à fórmula (I) em que R1-R3 e X significam hidrogénio. 0 composto tem actividade de libertação de acetilcolina. Um uso no tratamento médico não é mencionado, são apenas registadas as contracções isométricas no jejuno de ratos. É, portanto, um sujeito da presente invenção uma composição farmacêutica compreendendo como principio activo pelo menos um entre os derivados de 3-aza-biciclo[3.2.1]octano de fórmula geral (I), 3
em que:
Ri é H, R2 é seleccionado do grupo consistindo em H, Ci-8 alquilo, C2-8 alquenilo, C2-s alquinilo, grupos cicloalquilo incluindo, mas não estão limitados a, ciclopropil, ciclobutyl, ciclopentil, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canpanilo, ad-amantanilo, fenilo, bifenilo, naftilo, fenilo, bifenilo, naftil-Ci-s alquilo, piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina-Ci-8 alquilo, amino-Ci-s alquilo, amino-fenilo, bifenilo, naftilo-Ci_8 alquiloxi-fenil, bifenil, naftilo, hidroxi-fenilo, bifenilo, naftilo, hidroxi-Ci-8 alquilo, carboxi-Ci-s alquilo, metiloxicarbonil-C1-8 alquilo, carboxiarilo, carboalquiloxi-fenilo, bifenilo, naftilo, alquilocarbamoil-fenilo, bifenilo, naftilo, e (cadeias laterais de aminoácidos), ou
Ri e R2, em conjunto, são C1-4 alquilo, C2-4 alquenilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, para formar uma ponte de 3, 4, 5, 6 termos, R3 é são seleccionados do grupo consistindo em H, Ci-8 alquilo, C2-8 alquenilo, C2-8 alquinilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, fenilo, bifenilo, naftiol, fenilo, bifenilo, naftil-Ci_8 alquilo, 4 piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina-Ci-e alquilo, RR'NCi-8 alquilo, RR'N-fenilo, bifenilo, naftilo, RO-Ci-β alquilo, R0(0)C-Ci-8 alquilo, R(0) C-Ci_8 alquilo, RC(0)0-Ci_8 alquilo, RC (0) N (R) Ci-8 alquilo, RO-fenilo, bifenilo, naftilo, RO(0)C-fenilo, bifenilo, naftilo, R(0)C-fenilo, bifenilo, naftil-RC(0)0-fenil, bifenilo, naftilo, RC(0)N(R)-fenilo, bifenilo, naftilo,-CH (aminoácidos de cadeia lateral)C02R, -CH (aminoácidos de cadeia lateral) C(0)NR, -CH(C02R) - aminoácidos de cadeia lateral, CH(C0NRR') - aminoácidos de cadeia lateral, Fmoc, Boc e Cbz, R6 é seleccionado do grupo consistindo em H, Ci-e alquilo, Ci-8 alquenilo, Ci_8 alquinilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, fenilo, bifenilo e naftilo, fenil, bifenil e naftil-Ci-e alquilo, piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina-Ci-8 alquilo; -C(0)R ,-C(0)0R, -C(0)NRR', CH20R, CH2NRR',-C (O)NH-CH (aminoácido de cadeia lateral)C(0)OR, CH2NR- Fmoc, CH2NR-Boc e CH2NR-CBz, R e R', iguais ou diferentes entre si, são seleccionados a partir do grupo consistindo em H, Ci-8 alquilo, C2-8 alquenilo, C2-8 alquinilo, grupos cicloalquilo incluindo, mas não limitados a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, fenilo, bifenilo e naftilo, piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina, fenilo, bifenilo, naftil-Ci_8 alquilo; piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina-Ci-8 alquilo; grupo protector, -C (0)CH-(aminoácido de cadeia lateral)-NHT, -NH-CH (aminoácidos de cadeia lateral) COOT e -CH (aminoácidos de cadeia lateral) COOT, 5 onde T é seleccionado entre H e Ci-e alquilo; X é 0 e é uma ligação dupla, e em que os grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, fenilo, bifenilo, naftiol e os grupos heterociclicos acima relatados, são possivelmente substituídos com um ou mais metades escolhidas do grupo consistindo em azoto, ciano, nitro, amino, hidroxi, ácido carboxílico, carbonilo e Ci-6 alquilo.
Ainda outro assunto da invenção é a utilização de derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula geral (I) acima relatados para a preparação de composições farmacêuticas úteis para o tratamento de: i) distúrbios neurodegenerativos do sistema nervoso central, como a Doença de Alzheimer (AD), Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA), doença de Huntington, neuropatias, dano neural causado por hipóxia, isquemia ou trauma, induzindo a apoptose de células nervosas; ii) imunodeficiências adquiridas relacionadas com a redução da biodisponibilidade do NGF, tais como a imunodeficiência do envelhecimento; iii) as doenças em que a estimulação da neoangiogénese acaba por ser vantajosa, como enfarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, ou vasculopatias periféricas; 6 como ceratite de iv) determinadas patologias do olho, etiologia diversa, glaucoma, doenças degenerativas ou inflamatórias da retina.
Ainda outro assunto da invenção é a utilização de derivados de 3-aza-biciclo[3.2.1]octano de fórmula geral (I) e suas misturas, para a preparação de meio de cultura e armazenamento útil para a conservação de córneas explantadas destinadas a transplante, e o uso para a promoção do crescimento in vivo, in vitro, ou o ex vivo e/ou sobrevivência de células neurais.
Um assunto da invenção é também a utilização de derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula geral (I) e suas misturas, rotulados com reagentes adequados (agentes de contraste, radioisótopos, agentes fluorescentes etc.), e processados com qualquer procedimento útil para fins de imagens médicas, para a análise de imagens de tecidos e órgãos que contenham receptores de neurotrofina, seja in vitro ou in vivo, em particular para a monitorização do uso e eficácia dos medicamentos, bem como para o diagnóstico de doenças de mamíferos em que os receptores de neurotrofina estão envolvidos. das composições serão relatadas em
As características e vantagens farmacêuticas de acordo com a invenção detalhes na descrição abaixo. 7
Breve descrição dos desenhos A Figura 1 mostra o efeito dos presentes compostos na sobrevivência celular PC12 em condições livres de soro, usando hrNGF como padrão interno de acordo com um parágrafo da "Biological Activity" a seguir relatado. Os resultados foram expressos como a sobrevivência induzida por compostos/sobrevivência espontânea * 100 para os compostos indicados no eixo x. A Figura 2 mostra o efeito dos presentes compostos na actividade proliferativa da linhagem de células PC3, em condições livres de soro, avaliadas por meio de hrNGF como padrão interno de acordo com um parágrafo da "Biological Activity". Os resultados são expressos em termos de índice de estimulação ou seja, como a relação entre a incorporação de 3H-timidina (média ± SD) de culturas estimuladas e incorporação de 3H-timidina de culturas não estimuladas, para os compostos indicados no eixo x. A Figura 3 ilustra a capacidade dos presentes compostos (I) para induzir a produção VGF de células PC12, avaliados conforme a seguir descrito num parágrafo da "Biological Activity" em comparação com hrNGF. O controlo é de 68 Kda VGF.
As Figuras 4a e 4b mostram a capacidade dos presentes compostos para deslocar o 125I-NGF que se liga às células PC12, por uma curva de deslocamento obtida pela análise da radioactividade da ligação das células resultantes na presença dos presentes compostos ou na presença de hrNGF com software adequado (Graphit 4) de acordo com um parágrafo da "Biological Activity". 8 A Figura 4a mostra a curva de deslocamento obtida com os presentes compostos 9 usados como concorrente. A análise dos dados revelou um Kd de 165 nM ± 0,05. A Figura 4b mostra a curva de deslocamento obtida usando hrNGF como concorrente. A análise dos dados revelou um Kd de 114 pM ± 0,01. A Figura 5 mostra a capacidade dos presentes compostos 272, 325, 9 e 91 de induzir autofosforilação Trk-A, usando hrNGF como padrão interno de acordo com um parágrafo da "Biological Activity". A Figura 6 mostra os resultados obtidos para os presentes compostos 9 e 325 e para a combinação dos mesmos dois compostos, num ensaio de sobrevivência PC12 na condição de soro livre, de acordo com um parágrafo da "Biological Activity". Os resultados foram expressos como a sobrevivência induzida por compostos/sobrevivência espontânea * 100.
Descrição detalhada da invenção
Na presente invenção a expressão "cadeia lateral de aminoácidos" significa as metades da cadeia lateral de ocorrência natural de aminoácidos L ou D ou de aminoácidos raros ou que não ocorrem naturalmente.
Se não for especificado em contrário, os termos alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo e 9 heterociclo, como usado no presente invenção, devem ser entendidos como segue: - Ci-8 alquilo, C 2-8 alquenilo e C 2-8 alquinilo referem-se a radicais alquilo lineares ou ramificados, tendo apenas ligações simples, pelo menos uma ligação dupla, pelo menos uma ligação tripla, respectivamente. Exemplos de grupos alquilicos de acordo com a presente invenção incluem, mas não estão limitados a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo. Exemplos de grupos alquenilo de acordo com a presente invenção incluem, mas não estão limitados a etenilo, propenilo, 1-butenilo, cis-2-butenilo, trans-2-butenilo, 2-metil-l-propenilo, 1-pentenilo, cis-2-pentenilo, trans-2-pentenilo, 2-metil-2-butenilo. Exemplos de grupos alquinilo de acordo com a presente invenção incluem, mas não estão limitados a, etinilo, propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo, 1-pentinilo, 3-metil-l-butinilo; - pelo termo "cicloalquilo" um anel contendo átomos de carbono entende-se, como tendo geralmente 3 a 8 membros, e de preferência 5 a 6 membros. Exemplos de grupos cicloalquilo incluem, mas não estão limitados a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo; - o termo "arilo" indica um grupo contendo um ou mais anéis insaturados, cada anel tendo 5 a 8 membros, de preferência 5 ou 6 membros. Exemplos de grupos arilo incluem, mas não estão limitados a, fenilo, bifenilo e naftilo; - o termo "heterociclo" refere-se a heterociclos saturados ou aromáticos contendo um ou mais heteroátomos, e de preferência uma ou mais átomos de N. Exemplos de 10 heterociclos incluem, mas não estão limitados a, piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina; - o termo "arilalquilo" indica um grupo tendo um alquilo e um arilo substituinte como acima definido. Como exemplo, arialquilo inclui, mas não está limitado a, etilfenilo, isobutilfenilo, benzílico, etilbenzilico, propilbenzilico, isopropilbenzilico, butilbenzilico, isobutilbenzilico, cicloexilbenzilico, estirenilo e bifenilo.
Na presente invenção os grupos fluorenilmetoxicarbonilo, t-butiloxicarbonilo, carboxibenzilico, benzilo, fenilo e acetilo são indicados usando os termos comuns Fmoc, Boc, Cbz, Bn, Ph e Ac respectivamente.
De acordo com a presente invenção os grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo e heterociclicos podem ser substituídos com um ou mais metades, e de preferência uma ou duas metades escolhidas do grupo consistindo em azoto, ciano, nitro, amino, hidroxi, ácido carboxílico, carbonilo e Ci-6 alquilo. 0 termo "halógeneo" refere-se flúor, cloro, bromo e iodo.
Os compostos 1-23 e 190-217 de fórmula geral (I), de acordo com a invenção nas Tabelas 1-2 a seguir resultam de especial interesse pela sua actividade agonista contra as neurotrofinas e, em particular, NGF humana e, portanto, são os compostos preferencialmente utilizados para a preparação das composições farmacêuticas de acordo com a invenção. Os compostos 24-189 e 218-321 são exemplos de referência. 11 TABELA 1
12 (continuação)
sto X R. *a r3 «4 25 S H H PhCHg (R) -CONHÍCH^Hg 26 s H H PhCHa (/¾ -CONH(CHg)gOH 27 o Ph H PhCHg i/V) -COgMe 2S 0 Ph H PhCHg (S) -COgMe 29 0 Ph H CH(Ph)s ífí) -COgMe 30 0 Ph H ÕH(Ph)g (3} -COgMe 31 o NOg-Ph H Ph (S)-CO sMe 32 H H H H {&) -CQgH 33 H H H H (5) -COgH 34 H H H H {R -COgMe 35 H H H H (S) CCgMO 36 H H H PhCH2 (fi) -COaH 37 H H H PílCHg (S) "COgH 3S H H H Fmoc {Ri -COgH 39 H H H Fmoc (S} -COgH 40 H H H PhCHjj (H) -COgMe 41 H H H PftCHg (S> -COsMe 42 H H H Soe (R) -COgMe 43 H H H Boc (S) -CO:,;M» 44 H H H Fmoc (R) -COgMe 46 H H H Ftnoc iS) -CCgM* 45 H H H H (R) -CONHMe 47 H H H H íS; -CONHMe 48 H H H Ac (R) -CONHMe 49 H H H Ac (S) -CONHMe 50 H H H PhCHg iR) -CONHMe 51 H H H PhCHj, <S) -CONHMe 52 H H H Fmoc {R} -CONHMe S3 H H H Fmoc (S) -CONHMe 54 H H H PhCHg (/¾ -CON(CHz)s 56 H H H PhCHj ÍR) --CONHcycíohexyi 58 H H H PilCHg (/¾ -CONfCHgt 57 H H H PhCHg {R)-CONH(CHa)gOH 58 H H H H (R) -CHgOH 59 H H H H (6) -CHgOH 80 H H H Fmoc íS) -CHgOH 81 H H H Fmoc (R) -CHgOH 62 H H H Boc {Ri -CHgOH 13 (continuação) DStO X «1 R? «3 83 H H H 8oe (S) -GHgOH S4 H H H PhCHg {R) -GHgOH m H H H PhCHg (S) -GHgOH 88 H H (S) -CHgQBn PhCHg (R) -cog m 6? H H (S> -CH.?08n PhCHg (Si -COgMe 68 H H (R) -GHgOBn PhCHg (R) -COgMe 89 H H m-CHgOBn PhCHg (Sí -COgMe 70 H H (S) -CHgOBn PhCHg (#=?} -CHgOH 71 H H (S) -GHgOBn PhCHg (S) -GHgOH 72 H H (R) -CHgOBn PhCHg (Ri -CHgOH 73 H H {Ri -GHgOBn PhCHg (S) -CHgOH 75 H H (S) -COOH Fmoc (R) -COgMe 76 H H (S) -COOH Fmoc (5) -COgMe 77 H H (fl) -COOH Fmoc (R) -cosm 78 H H (fi) -COOH Fmoc (S) -COgMe 78 H H (5} -GHgOBn Fmoc (R) -COgMe 89 M H SS) -CH-.OBn fmoc (SJ -COgMe 81 H H (Ri -GHgOBn Fmoc ifí) -COgMe 82 H H (R) GHgOBn Fmoc (S} -COgMe 83 H H (S; -GHgOBn H (R, -COgMe 84 H H (S) ~CHg08n H (S) -COgMe 85 H H HV) -GHgOBn H (R) -COgMe 86 H H (R) -GHgOBn H (5) -COgMe 87 H H (S) -CHgOH H {Ri -COgMe 88 H H s-S) -ch..oh H (S> -COgMe 89 H H ÍR) -CHgOH H {Ri -COgMe 90 H H (R) -GHgOH H (S) -COgMe 91 H H (S) -CHgOH fmoc (H) -COgMe 92 H H ($) -CHgOH Fmoc (S) -COgMe 93 N H (R) -GHgOH Fmoc (fí} -COgMe 94 H H (R} -CHKOH Fmoc (5) -COgMe 95 H H iS) -CHgOH Fmoc (fi) -COgMe 96 H H iS; -GHgOH Fmoc (.S) -COgMe 97 H H {R} -CHgOH fmoc (R) -COgMe 98 H H (R) --GHgOH Fmoc (S) -COgMe 99 H H {$) -OHgQH PhCHg iS) -COgMe 100 H H (R) -GHgOH PhCHg (R) -COgMe Í01 H H (ff) -CHgOH PhCHg (R) -CO:gMe 14 (continuação)
sto X R, :RS Rs 102 H H (Ri -CH;,OH pncHg (S) -COjiMe 103 H H (S) -CHjOH Frpoe {ff} -CHgOH 104 H H (S) -CHgOH Fmoc (S) -CHgOH 105 H H í'i; -CHgOH Fmoc {ff) -CHgOH 106 H H (ff) -CHgOH Fmoc (S) -CHgOH 107 H H (Si -CHgOH PhCHg íff) -CHgOH 108 H H i&i -CHgOH PhCHg (S) -CHgOH 109 ff H (f5) -CHgOH PhCHg {ff} -CHgOH 1-10 H H {ff} -CHgOH PhCHg ÍS) -CHgOH 111 H H ssCHg PhCHg i/7; -COgMe 112 H H =CH? PhCHg {S} -COgMe 113 H H =CHa PhCHg {ff} -CHgOH 114 ff H -CHg PhCHg (Si -CHgOH 115 H H (S)-CHaCH(Ms)g Fmoc {ff} -CHgOH 118 H H {S5--CHgCB{Me}g PhCHg «S> -CHgOH 117 H H {S)-CHgCH(SV1e)g H (Ri -CHgOH 118 H Ph H H m - COgMs 119 ff Ph H Fmoc (Ri -COgMe 120 H Ph H PhCHg (R) -COgMe 121 H Pb H CH{Ph)g (ff! -COgMe 122 H Ph H H (S) -COgMe 123 H Ph H Fmoc {S} -COaMe 124 H Ph H PhCHg (Si -COgMe 125 H Ph H CH(Ph}g (S) -COgMe 126 H p-rtvcçH., H Ph (S)-CODMe 127 ff p-NHa-Ci5H4 H Ph {Sj-COQff 128 ff p-NHrCeH4 ff Ph ÇS}-CON HC HgCOgM: e 129 H P-MH í Asp{0:3u}· c6h4 H Ph (8!-COgMe 130 H ρ-ΝΗ- (ΆβρίΟ^Η h3)-c6h4 H Ph (S}-COgH 131 H p-MH- {AspíO^uPNHg) c6h4 H Ph (S)-CONH- Lys íHHBoci-CMe 132 H p-NH- (Asp (GH}-NHg)-GeH4 H Ph {S}-CONH-Lys-OMe 133 H p-Ncyc6H4 H Ph {S)-COOH 134 H P'NOj-CgH4 H Ph (S)-COCMe 135 H p-NOa-C^4 H Ph (S)-COHHCHgCOgMe 136 H Ph H H {ff} -CHgOH 15 (continuação) sto X R, Rg Rg 137 H pn H Fmoc (Ri -CHjjOH 138 H Ph H PhCH? (Ri -CH-.OH 139 H Ph H CHÍPh)g (fi) -CHjjOH 140 H Ph H H (5) -CHgOH 141 H Ph H Fmoc {S; -CH.-.OH 142 H Ph H PfiCHa i$) -CH..OH 143 H Ph H CH(Ph)s (S) -CHgOH 144 H H (S) -Me Fmoc (fí} -COgH 145 H H {S} -Me Fmoc (S) -CO-.H 146 H H (R) -Me Fmoc (Ri -CO:>> > 147 H H {Ri -Me Fmoc (S) -COgH 148 H H (Sl-Me Fmoc (Ri -COgMe 149 H H (Si -Me Fmoc (S) -COgMe 150 H H ¢7¾. -Me Fmoc (R) -COgMe 151 H H (Ri -Me Fmoc (5) -COgMe 182 H H (S) -Me PUCHj (Ff) -COgMe 153 H H {S5 -Me PhCHg ÍS) -COgMe 154 H H (Ri -Me PhCHg {R} -OOaMe 155 H H (R) -Me PhCHj : 35 -COgMe 156 H H (S) -Me Fmoc (Ri -CHgOH 15? H H (S 'Me Fmoc (Si -CHgOH 158 H H (R) -Me Fmoc (Ri -CHgOH 159 H H (R) -Me Fmoc (S) -CHgOH ISO H H {S} -Me PhCRg (Ri -CHgOH 161 H H {Si -Me PhCHa (3} -CHgOH 162 H H ÍR; -Me PhCHg (Ri -CH-.OH 163 H H (fl) -Me Pr,c«.> {S} -CHjOH 164 H H (Si -PíiCHj Fmoc ¢1¾ -COgH 165 H H {Si -PhCHg Fmoc :S) -COgH 166 H H (R} -PtiCHg Fmoc m -COgH 167 H H (Ri -PhCHg Fmoc (Si 'COgH 168 H H (Si -PhCHg Fmoc {/?} -COgMe 169 H H ÍS? -PhCHj Fmoc ;S} -COgMe 170 H H {Rj -PhCHg Fmoc (R: -COgMe 171 H H (Ri -PhCHg Fmoc (S) -COgMe 172 H H -PiiCHj, PhCHg (Ri -COgMe 173 H H {$) -PhCHjt PhCHg i$i -COgMe 174 H H (Ri -PhGHg PhCHg (Ri -COgMe 16 (continuação) sto X R1 R;, % 17S H H (ff) -PhCHg PhCHg (S) -COgMe 176 H H (R) -PhCHg H {fJ) -CQgMe 177 H H (R) -PhCHg H (6) -COgMe 178 H H (S) -PhCHg H (H; -COgMe 179 H H (8) -PhCHg H (S) -COgMs 180 H H (¾ -PhCHg Frrsoc (fí) -CHgOH 181 H H fS) -PhCHg Frtioc (S) -CHgOH 182 H H m -PaCHg Fmoe (R) -CHgOH 183 H H {«} -PhCHg Frrtoc iS) -CHgOH 184 H H (5) -PhCHg PhCHg íR) -CHgOH 185 H H (S) -PhCHg PhCHg (5; -CHgOH 186 H H (R) -PhCHg PhCHg {fí) -CHgOH 187 H H (R) -PhCHg PhCHg (S) -CHgOH 188 H H (S)-PhCHg PhCH;, (R)-CQQB 183 0 p-MQgPh H Ph COHHí'CHg)6NHg TABELA 2
Ra/1 / # \ R3-"N ê ? \ £ Ϊ X 0) nposto X S, % «3 Re ISO 0 H H PhCHg {Ri COg.Me 191 0 H H PhCHg (S) -COgMe 182 0 H (Sí -m PhCHg m -cogMe 133 o H (S) -Me PhCHg {&) -COgMe '134 0 H (fí)-m PhCHg (R) -COgMe ias 0 H (Ri -Me PhCHg (8) -COgMe 198 0 H (Si -PhCHg PhCHg (R) -COg&le 137 0 H {S) -PhCHg PhCHg (S) COgMe 198 o H {Ri -PhCHg PhCHg ifi} -COgMe 139 0 H (fi) -PhCHg PhCH, {Si COgMe 200 0 H (83 -CHaOH(^0)g PhCHg {8} -COgMe 201 0 H (Sí -CHgCH(Me)g PhCHg {S) -COgMe 17 (continuação) sto X *1 b£ Ra b8 202 | 0 H (tf) -CtfgCtf (Me)g PhCHg (tf) -COgMe 203 0 H (tf) -CHzCH(Me}2 PhCHg (tf) -COgMe 204 o H H PhCHg (tf) -CONHMe 205 0 H H PhCHg (S) -CONHMe 206 | 0 H (5) -Me PhCHg ífí) -CGNHMie 207 0 H (tf) -Me PhCHg (tf) “CONHMe 208 0 H (tf) -Me PhCHa (tf) -CONHMe 209 o H (tf) -Me PhCHg (tf! -CONHMe 210 0 H (tf) -PhCHg PhCHg (/•V) -CONHMe 211 0 H (S) -PhCHg PnCH., (S) -CONHMe 212 0 H (tf) -PhCtfg PhCHg (tf) --CONHMe 213 0 H (tf) -PhCtfg PhCHg (tf) -CONHMe 214 o H (tf! -Ctf;;Ctf(Me);> PhCHg (tf) -CONHMe 215 0 H (tf) -CtfaCH(Mô)g PhCHg (5) -CONtf Me 216 0 tf (tf) -CtfgCtf (Me)g PhCH.> (tf) -CONHMe 217 0 tf (tf) -CHzGH{Me)z PhCHg (tf) -CONHMe 218 | H tf tf Fmoc (tf) -COgtf 219 tf H tf Fmoc (f?) -CO^Me 220 H H tf Fmoc (tf) -COgH 2.21 H tf tf Fmoc (S) -COgMe 222 H H íS}-Me Fmoc (tf) -COgtf 223 | H H Fmoc (tf) “COgMe 224 H H (S)-Me PhCHg (tf) -COgMe 22S H H (tf)- Me Fmoc (tf) -COgtf 226 H H (tf)-Me Fmoc (tf) -COgMe 227 H tf (fí)-Me PhCHg (tf) -COgMe 228 H H (S)-Me Fmoc (tf; -C0gH 229 H H (S)-Me Fmoc (S) -COgMe 230 H H (5)-Me PhCHg (S) -COgMe 231 H H (tf)"Me Fmoc (tf) -COgH 232 H H {ff)-Me Fmoc (tf) -COgMe 233 H H (tf)-Me PhCHg (tf) -COaMe 234 | H H (tf)· PhCHg Fmoc (tf) -COgH 235 | H H (55- PnCH;? Fmoc (tf) -COgMe 236 H H {S> PhCHg PhCHg {;tf) -COgMe 237 H H (tf)- PhCHg Fmoc (tf) -COgH 238 H H (tf)-· PhCtfg Fmoc (tf) -COgMe 239 H H (tf)- PhCtfg PhCHg (tf -COgMe 18 (continuação)
>to X R, Rg % 240 H H (3)- PhCH.;, Fmoc (S) -COgH 241 H H (Si PhCHg Fmoc (S) -COgMe 242 H H (ò> PhCHg PhCHg (S) -COgMe 243 H H (ff)· PhCH- Fmoc (3) -COgH 244 H H (ff)- PhCH, Fmoc (S) COgMe 245 M H (fl>- PhCHj PhCHg (S) -COgMe 245 H H {Ff}- CHgOH Fmoc (S) -CG^Me 24? H H (ff>- CHgOH PhCHg {$) -COgMe 248 H H (ff)- CHgOSn Fmoc (S) -COgMe 249 H H (ff)- CHgOBn PhCHg (S; -COgMe 250 H H (ff)-· CHgOH Fmoc (ff) -COgMe 251 H H (R)- CHsOH PhCHg (ff) -COgMe 252 H H (ff}- CHgOBn Fmoc {R} -COaMe 253 H H (ff)- CHgOBn PhCHg (ff) -COgMe 254 H H íS>- CHgOH Fmoc (S) -COgMe 255 H H (S)- CHgOH PhCHg (Si -COgMe 258 H H ¢3)-CHgOBn Fmoc (S) -COgMe 25? H H (S)· CHgOBn PhCHg (S) -COgMe 258 H H (S)- CHgOH Fmoc (ff) -COgMe 250 H H (S)- CHgOH PhCHg (fl)-COgMe 280 H H (S}' CHgOBn Fmoc (ff) -COgMe 281 H H (ò> CHgOBn PhCHg {R} -COgMe 262 H H {6>CHaCH(Me)g Bn (ff) -COgMe 283 H H (í?|-CHgCH(M8)g Bn ¢/¾ -COgMe 284 H H (â)-CH2CH(Me)2 Bn (S) -COgMe 265 H H (ff)-CHaCH(Me)2 Bn (S) -COsMe 286 H H (S}-CHgCH{Me}g Fmoc (RI -COgMe 287 H H ÇfiVCH2CH(Me)g Fmoc {ff} -COgMe 268 H H {SVCHgCHíMen Fmoc (S) -COgMe 283 H H (^-CHgCH(Me}g Fmoc (S) -COgMe 270 H H (5) Me H (ff) -CHgOH 271 H H {S)-Mô Bn (ff) -CHgOH 272 H H (5}-Me Fmoc (ff) -CHgOH 273 H H (ff)-Me H (ff) -CHgOH 274 H H (ff)-Mê Bn (ff) -CHgOH 275 H H (ff)-Me Fmoc (ff) -CHgOH 27 B H H {S)-Me H (3) -CHgOH 27 7 H H (6>Me Bn (S) -CHgOH 19 (continuação) os to X Rj Ra r3 ^ I 278 H H (SVMè Fmoc (S) -CHgOH j 279 H H (R-M& H (S5 -CHgOH J 280 H H (R~M s Bn (S) -CHgOH 1 281 H H Fmoc (5) -CHgOH j 282 H H (S)-GHgCH(Me)g H (R) -CHgOH j 283 H H (S)-CHaCH(Me)g 8n (R -CHgOH j 284 H H {S}-CH2CH(Me}£ Fmoc iR) -CHgOH j 285 H H {F?)-CHgCH(Me)g H (R) -CHgOH | 286 H H («KHjCHtMek Bn (R -CHgOH 1 287 H H (fíS-CH2CH(!ye)2 Fmoc («} -CHgOH 288 H H {5>0Η?0Η;ΜβΧ, H (S) -CHgOH { 289 H H {S)-CH2OH(Me}2 Bn (¾ -CHgOH [ 290 H H (S)-CH2CH(ye}2 Fmoc (R -CHgOH 291 H H ^-CHgCH{Me)s H (S) -CHgOH | 292 H H (^CHaCHÍNefe Bn (S) -CHgOH j 293 H H (fí)-CH2CH(Me}2 Fmoc (R -CHgOH [ 294 H H ;S! -PhCBg H (¾ -CHgOH | 295 H H (Si -PhCHg Bn {R -CH,,OH 1 296 H H (S) -PhCHg Fmoc {R -CHgOH 1 297 H H (Ri -PhCHj H (Ri -CHgOH | 298 H H (Ri -PhCHg Bn (¾ -CHgOH § 299 H H {«) -PhCHg Fmoc (R -CHgOH j 300 H H {$) -PhCHj H (S) -CHgOH | 301 H H (Si -PhCHg Bn (S) -CHgOH { 302 H H (S) -PhCHg Fmoc (Si -CHgOH j 303 H H (R) -PhCHg H (S) -CHgOH j 304 H H (R) -PhCHg Bn (S) -CHgOH j 305 H H (Ri -PhCHg Fmoc (S) -CHgOH | 308 H H iR)· CH.jOH Fmoc (Si -CHgOH 1 307 H H (Ry CH2OH PhCHg (S) -CHgOH | 308 H H (Ry GHgOBn Fmoc (S) -CHgOH 309 H H (R- CHgOBn PhCHg (S) -CHgOH j 310 H H iR)· CHgOH Fmoc (R -CHgOH | 311 H H (Ri" CHgOH PhCBg (R) -CHgOH J 312 H H (Rh GHgOBn Fmoc (R -CHgOH J 313 H H (R}~ CH.jOBn PhCHg iR -CHgOH 1 314 H H ÍS}· CHgOH Fmoc ( S) -CHgOH j 31S H H (S)- CHgOH PhCBg (S) -CHgOH j 20 (continuação)
>sto X «1 % Re 316 H H (5)- CHgOSr, Fmoc (S) -CHgOH 31? H H {.S)- CHgOBr. PhCH2 (S) -CHgOH 318 H H (S)- CHgOH Fmoc (fl) -CHgOH 318 H H (5)- CHgOH PhCHg («Ϊ -CHgOH 320 H H (SV CHgOSr Frrsoç (ff) -CHgOH 321 H H (S>- CHgOSr, PhCHj (ff) -CHgOH
Os compostos citados acima estão realmente já descritos em J. Org. Chem. 1999, 64, 7347, Organic Letters, 2000, 2, 3987-3990, Bioorganic & Med Chem 2001, 9, 1625-1632, Eur. J. Org. Chem. 2002, 873-880, e no pedido de patente europeia n° 00.104.135,9-2.117 e no Pedido internacional n° WO 01/64686; em tais documentos os métodos de preparação dos compostos são também descritos.
Os novos derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula geral (I) podem ser preparados com o seguinte processo. Os novos compostos da fórmula geral (I) descrita pela primeira vez no presente pedido podem ser preparados de acordo com o procedimento descrito como a seguir e representado no seguinte Esquema 1: 21
Esquema 1
ch2oh 8 â,b
a: W* W - OMe, Bt »H. Rs = H.oBo b: W« W » 0, Rf eAr' = c: W* H. W = OH. B ( ~ H . ÇOOMe 0"VC00H —Y~ò Ô vv w Çj 9^c
Rj O OOOtóo 9c
W« H. W » OH. R, * H W W Bâ O—\
Ra O COOMe íõ
W» W » O. R,» H
Aldeídos alfa amino protegidos (3a) ou cetonas alfa amino (3b) ou álcoois alfa amino (3c) reagiram com derivados ativados de ácido tartárico como por exemplo diacetiloxitartérico anidro 4 (R, R o S, S), ou com derivados de ácido tartárico como por exemplo, o mono-metilester protegido 6 (R, R ou S, S), na presença de agentes de acoplamento e activação - ou por aminação redutiva com derivativos de eritorolactole protegido 5 (R, R preparados a partir de D-arabinose ou S, S preparado a partir de L-arabinose). As amidas correspondentes 7 e 9 (no esquema 1 são mostrados apenas os enantiómeros R, R, mas os enantiómeros S,S foram preparados analogamente) ou amina 8 (no esquema 1 são mostrados apenas os enantiómeros R, S, mas os enantiómeros S, R foram preparados de forma análoga). No caso do álcool amida 9 o aldeído ou cetona correspondente 10 são obtidos por oxidação. Quando R3 é H na amina 8, pode ser feita uma protecção Fmoc. A ciclização posterior de compostos 7, 8 e 10 (Esquema 1) 22 ocorre pelo tratamento com SOCI2 e MeOH (condição de reacção i) seguido de tratamento com ácido' sulfúrico adsorvido em S1O2 em refluxo de tolueno (condições de reacção ii) ou pelo tratamento com ácido acético trifluoro (TFA) puro ou em cloreto de metileno (condições de reacção iii) . Assim, foram preparados a partir de amidas 7 e 10, os compostos I em que X = 0 e R6 = COOMe na configuração exo. No caso de amina 8 foram preparados os compostos I, em que X = Η, H e o grupo R_6 = -CH2 OH na configuração endo. A configuração R, R ou S, S de estereocentros na ponte C-l e em C-7 (contendo o grupo carboxilico ou hidroximetilo) está dependente do ácido tartárico ou de eritrolactole de partida. Os compostos I podem ser modificados de acordo com o Esquema 2.
Esquema 2
|{X* h,H, Bs -COOH) I (X* H,H, R, - COOMe) í(X» O, R§» COOMe)
BtNHBs \
NaBH4 .//8 H; R7NHRg 8H3/8MS ,,
I (X** Η,Η, Βδ * CONRíRg) ! (X« H,H, R6 « CHjOH) 1 {X» Oj Rg ** CONR7fí8) 23
Os compostos de fórmula (I) (tipo amida) , onde X = 0 podem ser reduzidos, usando o complexo BH3 dimetil sulfeto, quer para os ésteres amino correspondentes I (X = Η, H, R6 = COOMe), ou para o amino álcool correspondente I (X = Η, H e Rg = CH2OH). Tais compostos podem ser desprotegidos para o átomo de azoto. A hidrólise de ésteres amino I (X = Η, H, Rg = COOMe) pode ser feita tanto em condições ácidas ou básicas, dando ao aminoácido correspondente I (X = Η, H, Rg = COOH). 0 aminoácido também é obtido por oxidação Jones ou usando PDC em DMF, a partir do álcool I (X = Η, H e R g = CH2OH), também após a mudança do grupo benzilico para Boc ou Fmoc. Pela activação do grupo carboxilico é formada uma ligação amida com uma amina NHR7R8 ou um aminoácido.
Os presentes derivados 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula geral (I) na forma livre ou na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser utilizados para a preparação de composições farmacêuticas seguintes os métodos usuais de preparação farmacêutica.
Tais composições farmacêuticas podem ser formuladas de maneira convencional, e podem incluir uma ou mais excipientes e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. A administração de tais formulações é viável através de qualquer via convencional, como parenteral, na forma de solução ou suspensão, oral, ocular, nasal, tópica, etc. A formulação de derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula (I) de acordo com a invenção incluem comprimidos, cápsulas, pílulas, pastilhas, soluções, 24 dispersões, suspensões, formulações de lipossomas, microesferas, nanoesferas, cremes e pomadas, emulsões e aerossóis, que também podem ser preparados de uma forma que permita uma liberação controlada ou retardada do composto activo.
Tais composições farmacêuticas podem compreender pelo menos um entre os compostos presentes de fórmula (I), ou suas misturas, como principio activo, possivelmente em combinação com o princípio activo ou outros co-adjuvantes, seleccionados de acordo com as condições patológicas.
As composições farmacêuticas compreendendo os compostos da invenção são adequadas para o tratamento farmacêutico de condições patológicas relacionadas com a actividade de neurotrofinas.
Os presentes derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano derivados de fórmula geral (I) com actividade agonista de neurotrofina, especialmente de NGF, pois têm a propriedade de interagir com o complexo receptor NGF em níveis de afinidade definida. Os compostos agonistas têm a propriedade de induzir o sinal biológico das neurotrofinas. Os compostos agonistas de neurotrofina são adequados para, por exemplo, a preparação de composições farmacêuticas úteis no tratamento de: (i) doenças neurodegenerativas, inflamatórias, tóxicas, traumáticas, vasculares ou do sistema nervoso central, periférico, ou autónomo (tais como Doença de Alzheimer 25 (AD) , Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA), doença de Huntington, esclerose múltipla, epilepsia, síndrome de Down, surdez nervosa, doença de Ménière), danos neurais secundários à hipóxia isquemia, queimaduras, quimioterapia, compostos tóxicos de origem diversas (incluindo álcool), infecções, trauma (incluindo o trauma cirúrgico), axotomia de motoneurónios originários, neuropatias sensoriais, motoras, ou sensório-motoras, ou disfunções autonômicas secundárias a diversas patologias (como diabetes, insuficiência renal, ou outras doenças sistémicas), doenças genéticas, patologias nervosas de origem diversa, algumas patologias oculares (como neuropatias do nervo óptico, degeneração da retina, oftalmoplegia, glaucoma), doenças da córnea de origem diversa (como úlceras neurotróficas, distúrbios da córnea), pós-infecciosos ou pós-traumáticos), patologias derivadas da motilidade reduzida do trato gastro-intestinal ou de atonia da bexiga (como cistite intersticial, ou cistite diabética), patologias neoplásicas endócrinas (como prolactinoma), condições clinicas em que a estimulação dos processos de aprendizagem é vantajoso (em particular, nas demências e nas condições pós-traumáticas), além de todas as condições patológicas provenientes de processos apoptóticos de células neurais; ii) doenças de imunodeficiência adquirida devido a biodisponibilidade reduzida ou ausente de NGF (tal como a imunodeficiência do envelhecimento); iii) condições em que a estimulação da deneoangiogénese pode ser vantajosa (como enfarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, aneurisma cerebral, úlceras gastroduodenais, cicatrização de feridas, vasculopatias periféricas); 26 iv) patologias oculares (como as patologias da córnea de origem diversa e glaucoma).
Os presentes derivados de 3-aza-biciclo [3.2. 1] octanom da fórmula geral (I), acima relatado, também são adequados para a preparação de meio de cultura e armazenamento úteis para a conservação de córneas explantadas destinadas a transplante.
Além disso, quando marcados com reagentes adequados (agentes de contraste, radioisótopos, agentes fluorescentes, etc.), e possivelmente tratados com qualquer outro procedimento útil para fins de imagens médicas, os presentes derivados de 3-aza-biciclo [3.2. 1] octano da fórmula geral (I), podem ser utilizados para a análise de imagens de tecidos e órgãos que contenham receptores de neurotrofinas, seja in vitro ou in vivo. Em particular, tais compostos marcados podem ser usados tanto para o acompanhamento da utilização e eficácia de fármacos como para o diagnóstico de doenças em mamífero nas quais os receptores de neurotrofina estão envolvidos.
Em geral, agonística agonística substituir os presentes compostos tendo actividade de neurotrofina, em particular actividade NGF, foram comprovados ser adequados para a neurotrofina NGF e a actividade biológica.
Além disso, os presentes compostos agonísticos de neurotrofina podem ser usados para promover o crescimento 27 in vivo, in vitro, ou ex vivo e/ou sobrevivência de células neurais, incluindo, mas não limitados a: dopaminérgicos, colinérgicos, neurónios sensoriais, células estriatais, células corticais, células do corpo estriado, hipocampo, cerebelo, bolbos olfactivos, células do peri-aqueduto, células dos núcleos da rafe, do locus coeruleus, do gânglio da raiz dorsal, neurónios simpáticos, motoneurónios inferiores, células do tronco nervoso, ou células de qualquer forma decorrentes da placa neural.
Os exemplos a seguir são relatados para dar um exemplo EXEMPLO 1
Preparação do composto metil 3-benzil-2-oxo-(1 S, 5 S, 7 R)-6,8-dioxa-3-azabiciclo [3.2.1] octano-7-exo-carJboxilato de fórmula (I), em que X = O, Ri = H, R2 = Bn, R6 = (R) - COOMe) (Composto 1)
Uma solução de anidrido tartárico R, R 4 (4 g) (preparado conforme relatado por Lucas HJ, Baumgarten W., J. Am.Chem.Soc., 1941, 63, 1654) em diclorometano anidro (23 ml) e 3a (onde X = X = OMe, Ri = H, R2 = H, R3 = Bn) (3 g) , preparado conforme relatado (Kermak, WO; Perkin, WH; Robinson, RJ Chem. Soc., Trans, 1922, 121, 1872) foram reagidos em rt por 15 h. Após a evaporação do solvente 7a (7 g), é obtido como um óleo. Ao produto bruto 7a em CH3OH (40 ml), é adicionado cloreto de tionila em gotas (0,8 ml) a 0°C e, em seguida, a mistura aquecida a 60°C por 15 h. Após a evaporação do solvente, o produto bruto dissolvido 28 em tolueno (8 ml) é rapidamente adicionado a uma suspensão de refluxo (1,6 g) H2SO4/S1O2 (H2SO4 30% em peso) em tolueno (12,5 ml). Após 15 min, um terço do solvente é destilado e a mistura quente restante é NaHCCd. Após a evaporação do purificado por cromatografi titulo (2,8 g). 1H NMR (CDC13) δ 7,32-7,16 (] 1H) , 4,96 (S, 1H), 4,74 (s, 3H) , 3, 34 (dd, Ji = 12,0 Hz, 12,0 Hz, 1H) . P.f. 82, [a]25 filtrada num bloco curto da solvente, o produto bruto foi dando o composto puro do , 5H) , 5, 84 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 4,52 (s, 2H) , 3,77 (s, J2 = 2,0 Hz, 2H) , 3, 08 (J = 3 = - 49 (c 1.0, CHCI3) EXEMPLO 2
Preparação de metilo (IR, 5R, 7S)-3-benzil-2-oxo-6,8-dioxa-3-azabiciclo [3.2.1] octano-7-exo-carboxilato (composto de fórmula (I), onde X = O, Ri = R2 = H, R3 = Bn, R6 = (S)- COOMe) (Composto 191)
Seguindo o mesmo procedimento do Exemplo 1, a partir de anidrido tartárico S, S 4, é obtido o composto do titulo. 1H NMR (CDC13) δ 7,40-7,10 (m, 5H) , 5,85 (d, J = 2,0 1H) , 4,97 (s, 1H) , 4,74 (s, 1H) , 4,52 (s, 2H) , 3,79 3H) , 3,34 (dd, Ji = 12,0 Hz, J2 = 2,0 Hz, 2H) , 3,09 12, 0 Hz, 1H). P.f. 83, [a]25 D = + 48 (c 1.0, CHCI3)
Hz, (s, (J = 29 EXEMPLO de Referência 3
Preparação de metilo (IS, 55, 7 R)—3—benzil—6,8—dioxa—3— azabiciclo [3.2.1] octano-7-exo-carboxilato (composto de fórmula (I), onde X = Ri = R2 = H, R3 = Bn, R6 = (R)-COOMe) (Composto 40)
Uma solução de BH3.Me2S (1 M, 2,5 ml) foi adicionada lentamente a 0°C a uma solução em THF anidro (65 ml) de composto de fórmula (I), onde X = 0, Rx = H, R2 = H, R3 = Bn, Rõ = (R)-COOMe (composto 1) (2,8 g) , preparada como descrito acima no Exemplo 1. A mistura foi agitada por 18 h no r.t. e, em seguida, foram adicionados etanol (3 ml), solução de NaOH (3M, 2 ml) e H20 (150 ml) . Após a extracção com éter dietilico, a fase orgânica foi separada e evaporada dando, depois da cromatografia, o composto puro do titulo (2 g) como um óleo incolor. 1H NMR (CDC13) δ 7,30-7,23 (m, 5H) , 5,62 (s, 1H) , 4,78 (s,
1H) , 4,60 (s, 1H) , 3,74 (s, 3H) , 3,55 (pd, 2H) , 2,84 (d, J = 13 Hz, 1H) , 2,76 (d, J= 10 Hz, 1H) , 2,50 (dd, Ji = 10Hz, J2 = 2 Hz, 1H) , 2,30 (d, J = 11 Hz, 1H) . [a]25 D = -60 (c 1.0, CHCI3) . 30 EXEMPLO de referência 4
Preparação de metilO (IS, 5S, 7R)-6,8-dioxa-3-azabiciclo [3.2.1] octano-7-exo-carboxilato (composto de fórmula (I), onde X = Ri = R2 = R-3 = H, R6 = (R)-COOMe) (Composto 34) A uma suspensão de composto de fórmula (I), onde X = Rx = R.2 = H, R3 = Bn, R6 = (R)-COOMe) (composto 40) (2 g) , preparada como descrito acima no Exemplo 3 e Pd/C 10% (1,3 g) em metanol (40 ml), é adicionado formiato de amónio (2,4 g). A mistura deixada no refluxo durante 1 h, foi filtrada em Celite e lavados com CH3OH. A solução é evaporada para dar o composto do titulo (1,3 g), como um óleo incolor. 2h NMR ( CDC13) δ 5,53 (s, 1H) , 4,72 (s, 1H) , 4, 49 (s, 1H) 3, 71 (s, 3H) , 3,17 ( !dd, Ji = 13, 6 Hz, J2 = 1/8 Hz, 1H) 2, 83 (m, 2H) , 2,68 (d , J = 13, 6 Hz, 1H) , 2,55 (br, 1H) [a]25 D = - 55 (c 0,7, CHCI3) . EXEMPLO de Referência 5
Reparação de ácido (IS, 5S, 7R)-6,8-dioxa-3-azabiciclo [3.2.1] octano-7-exo-carboxílico (composto de fórmula (I), onde X = Ri = R2 = R3 = H, Rg = (R)-COOH) (Composto 32) 0 composto de fórmula (I), onde X = Rx = R2 = R3 = H, R6 = (R)-COOMe (Composto 34) preparado como descrito no Exemplo 4 (0,5 g) foi dissolvido numa solução de HC1 (4N, 12 ml). 31
Após 18 h em r.t., a solução foi evaporada obtendo-se o título do composto como um sal de HC1 (0,5 g).
[a]25 D -38,3 (cl.l, H20) ; XH NMR (D20) δ 5,95 (s, 1H) , 5,06 (s, 1H) , 5,04 (s, 1H) , 3,58 (m , 2H) , 3,34 (m, 2H)/ EXEMPLO de referência 6 dioxa-3-azabiciclo '*V [3.2.1] octano-7—exo—carboxilato (composto de fórmula (I), onde X = Ri = R2 = H, R3 = Boc, Re = (R)-COOMe) (Composto 42) DIPEA (0,8 ml) e (B0C)20 (1,1 g) foram adicionados a uma solução em CH2C12 anidro (9 ml) e etanol (3 ml) do composto de fórmula (I) onde X = Ri = R2 = R3 = H, Rê = (R)-COOMe (Composto 34) (0,8 g) , preparada como descrito no Exemplo 4. A mistura de reacção foi deixada por 18 h em r.t., o solvente foi evaporado e o resíduo foi tratado com uma solução de NaHSC>3 (5%) e extraído com éter dietílico. Após a evaporação do solvente, o produto bruto foi purificado por cromatografia para dar o composto título (0,8 g), como um sólido branco. NMR (CDCI3) δ 5,64 e 5, 58 ( rotâmeros) (s, 1H), 4, 65 e 4, 60 (rotâmeros) (s, 1H), 4,51 ( s, 1H), 3, 72 ( s, 3H), 4,00- 3, 60 (m, 2H), 3,20 (m, 1H ), 2,92 (m, 1H), 1,43 (s, 9H) . 32 EXEMPLO 7 de referência
Preparação de (IS, 5S, 7R)-3-ter-butoxicarbonil-6,8-dioxa-7-exo-hidroximetil-3-azabiciclo [3.2.1] octano (composto de fórmula (I), onde X = Ri = R2 = H, R3 = Boc, R6 = (R)-CH2OH) (Composto 62)
Para uma solução em MeOH (15 ml) do composto de fórmula (I), onde X = Ri = R2 = H, R3 = Boc, Rs = (R)-COOMe) (Composto 42) (0,8 g) preparado como descrito no Exemplo 6, a 0°C, foi adicionado NaBH4 (0,6 g) em pequenas porções. Depois de 10 min a r.t., a mistura foi evaporado e o produto bruto foi purificado por cromatografia para dar o composto do titulo (0,5 g) como um óleo incolor. [a]25 D -30 (c 1, 0, MeOH) . !h NMR (CDC13) δ 5,50 e 5,44 (rotâmeros) (s, 1H), 4, 32 e 4, 27 ( rotâmeros) (s, 1H), 4,18 (m, 1H), 3,88-3,67 (m, 2H ) , 3, 56 ( d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,21 (m, 1H) , 2,96 (m, 1H), 1/ 92 (b, 1H) , 1,43 (s, 9H) . EXEMPLO de referência 8 33
Preparação de (1 S, 5 S, 7 R)-3-(9 Fluorenilmetoxicarbonil) -l-endo-hidroximetil-6,8-dioxa-3-aza-biciclo [3.2.1] octano (composto de fórmula (I ) , onde X = Ri = R2 = H, R3 = Fmoc, Re = (R)-CH2OH) (Composto 61)
Para uma solução de 2, 3-0-isopropilideno-D-eritrose (R, R) 5 (1,8 g) em THF (preparada a partir de D-arabinose, conforme relatado por Thompson, DK; Hubert, CN; Wightman, RH Tetrahedron 1993, 49, 3827-3840) 2,2-dietoxietilamina 3a (onde W = W = OEt, Ri = R2 = R3 = H) (1,7 ml) a 0°C, foi adicionado NaBH (OAc)3 (3,1 g) em pequenas porções. Depois de 18h em r.t., a mistura é diluída com uma solução saturada de NaHCCq e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi evaporada dando um óleo, que foi cromatografado para dar o produto 8a (onde W = W = OEt, Ri = R2 = R3 = H) como um óleo amarelado (1,9 g).
[a]20 D -8,4 (c 0,54, CHC13), 2H NMR (CDC13) δ 4,83 (br, 2 H) , 4,59 (t, J = 5,5 Hz, 1 H) , 4,32 (m, 2 H ), 3,75-3,45 (m, 6 H) , 3, 05-2, 83 (m, 2 H) , 2,79 (d, J = 5,5 Hz, 2H) , 1,44 (s, 3 H), 1,34 (s, 3 H) , 1.21 (t, J= 7,0 Hz, 6 H).
Para uma solução de 8a (onde W = W = OEt, Ri = R2 = R3 = H) (1,7 g) em acetona (40 ml) foram adicionados Fmoc-O-Su (2,1 g) e uma solução aquosa de Na2C03 (0, 75 g em 40 ml) a 0°C. A mistura foi deixada em r.t. por 18 h, e extraída com CH2C1 2, em seguida, o solvente foi evaporado e o resíduo foi cromatografado para dar o produto 8a (onde W = W = OEt, Ri = R2 = H, R3 = Fmoc) como um óleo amarelado (2,2 g). 34 Q O <N £5 -34 (c 0,38, MeOH) , 2H NMR (CDCI3) 57 .73 (d, J = 7,3 Hz, H 2) , 7,56 (m, 2 H) , 7,34 (m, 4 H ) , 4, 63 (m, 2 H) , 4,47-4, 14 ( m, 3 H) , 4.19 (t, J = 4,9 Hz, 1H) , 3, 74-3, 02 (m, 10 H) , 1,42 £ 0 \—1 1 12 H) ; 0 Composto 8 (onde W = W = OEt, Ri = R2 = H, R3 = Fmoc) (1,9 g) dissolvido em ácido trifluoroacético (8 ml) foi deixado de lado por 18 horas em r.t. Após a evaporação da TFA, o composto bruto, dissolvido em MeOH, foi filtrado sobre um bloco curto de NaHC03, então o solvente foi evaporado e o resíduo foi cromatografado para dar o título como um produto sólido branco (1 g). M.p. 41 - 4 2 ° C; [a]20 D -32 (c 0,5, CHC13) , 2H NMR (CDC13) 57.77 (d, J= 7,0 Hz, 2 H) , 7,57 (d, J= 7.0Hz, 2 H) , 7,38 (m, 4 H) , 5,51 (s, 1H) , 4, 92-2, 95 (m, 12 H) . EXEMPLO de referência 9
Preparação do ácido (S 1, 5 S, 7 S)- 3-(9
Fluorenilmetoxicarbonil)-6,8-dioxa-3-aza-biciclo_[3.2.1] octano-7-endo carboxilico (composto de fórmula (I ), onde X = Ri = R2 = H, R3 = Fmoc, R6 = (S)-COOH) (Composto 39)
Para uma solução do composto de fórmula (I), onde X = Ri = R2 = H, R3 = Fmoc, Rõ = (R)-CH2OU (composto 61) (0,9 g) , elaborada de acordo com o Exemplo 8, em acetona (75 ml) foi adicionado o reagente de Jones a 0°C, [preparado pela adição lenta de H2SO4 (2,8 ml) para uma solução de Cr03 (1,5 35 g) em H20 (20 ml) a 0°C]. A mistura foi deixada por 18 h em r.t. e, em seguida foi adicionada com isopropanol, filtrada em Celite e evaporada. O produto bruto dissolvido em EtOAc (45 ml) foi extraído com 10% de NaHC03 em água. Após a separação, a fase aquosa foi acidificada a pH 1 com HC1 e extraída com EtOAc. A evaporação da fase orgânica deu um produto bruto que foi cromatograf ado para dar o composto do título (0,7 g) como um sólido branco. M.p. 79-82 °C; [a]20 D -53 (c 0,5, CHC13) , 2H NMR (CDC13) 57.75 (m, 2H); 7,53 (d, J = 7,0 Hz, 2H); 7,38 (m, 4H); 5,56 (s, 1H) , 4,74-4,45 (m, 4H) ; 4,23-3,91 (m, 4H) ; 3,29-3,11 (m, 2H). EXEMPLO de Referência 10
Preparação de ácido (1 R, 5 R, 7 R)~ 3-(9 Fluorenilmetoxicarbonil) -6,8-dioxa-3-aza-biciclo [3.2.1] octano-7-endo carboxilico (composto de fórmula (I ) , onde X = Ri = R2 = H, R3 = Fmoc, R6 = (R)-COOH) (Composto 218)
Uma solução de (1 R, 5 R, 7 S)~3-(9 fluorenilmetoxicarbonil)-7-endo-hidroximetil-6, 8-dioxa-3-aza-biciclo [3.2.1] octano (composto de fórmula ( I), onde X = Ri = R2 = H, R3 = Fmoc, R6 = (S)~CH2OH) (1,8 g) , preparada a partir de (S, S) eritrose 5 (obtidos a partir de L-arabinose ) com o mesmo procedimento acima descrito no Exemplo 8 para o seu enantiómero, foi tratado como acima descrito no Exemplo 9 para o seu enantiómero, para dar 1,4 36 g do composto título como um sólido branco. M.p. 71-81°C; [a]20 D 52,9 (c 0,50, CHC13) . EXEMPLO de referência 11
Preparação de metil 3-benzil-5-fenil-2-oxo-(IS, 5S, 7R)~ 6,8-dioxa-3-azabiciclo [3.2.1] octano-7-exo-carboxilato (composto de fórmula (I) , onde X = O, Ri = Ph, R2 = H, R3 = Bn, R6 = (R)-COOMe) (Composto 27)
Para uma solução de 3b (2, 4 g) (onde X = 0, Ri — Ph, R2 — H, R3 = Bn) (preparada de acordo com o procedimento relatado por R Simonoff e WH Hartung, J. Am. Pharm. Assoe., 35, 306, 1946) em CH2C12 seco (20 ml), foram adicionados (R, R) 6 derivado de ácido tartárico (2,49 g, 5,33 mmol) e DIPEA (5,4 ml). A mistura foi agitada em r.t. por 2 h, o solvente foi evaporado para dar um óleo que foi extraído em acetato de etilo. A solução foi lavada com solução de 5% KHSCq, e 5% de NaHCC>3 em água. Após a evaporação do solvente o resíduo foi purificado por cromatografia para dar 8b (onde X = 0, Ri = Ph, R2 = H, R3 = Bn) (3,2 g) como um óleo incolor. 2H NMR δ 7,90-7, 85 (m, 2 H) , 7,61-7,22 (m, 8 H), 5,39 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,11 (d, J = 5,1 Hz, 1H) , 4,88- 4,10 (m, 4 H) / 3, 80 (s, 3 H) , 1,49 (s, 3 H) , 1,31 (s, 3 H) .
Uma solução de 8b (3,2 g) (onde X = 0, Ri = Ph, R2 = H, R3 = Bn) em tolueno (80 ml) foi rapidamente adicionada a uma suspensão de H2S04/Si02 (30% p/p, 1,4 g) em tolueno em refluxo (120 ml) . Após 15 min um terço do solvente foi 37 destilado e a mistura quente restante foi filtrada num bloco curto de NaHCC>3. Após a evaporação do solvente o resíduo foi purificado por cromatografia para dar 2,4 g do composto título como um sólido incolor. M.p. 113-114 °C. [a]25 D -64,0 (c 1, CDC13) . 2Η NMR 7,62-7,59 (m, 2 H), 7,41-7,24 (m, 8 H) , 5,16 (s, 1H) , 4,92 (s, 1H), 4, 61 (m, 2 H), 3,74 ( s, 3 H) , 3,46 (m, 2 H) . EXEMPLO de referência 12
Preparação de metil 3-benzil-5-fenil(IS, 5S, 7R)-6,8-dioxa-3-azabiciclo [3.2.1] octano-7-exo-carboxilato composto de fórmula (I), onde X = R2 = H, Ri = Ph, R3 = Bn, R6 = (R)-COOMe) (Composto 120)
Para uma solução em THF seco (25 ml) do composto de fórmula (I), onde X = 0, Ri = Ph, R2 = H, R3 = Bn, R6 = (R)-COOMe) (composto 27), preparada como descrito no Exemplo 11 (2,5 mmol), a 0°C, foi adicionado gota a gota BH3.Me2S (10 M 0,5 ml, 4,9 mmol). A mistura foi deixada de lado por 16 horas e depois foram adicionados EtOH (1 ml), 3 M de NaOH (1 ml) e H20 (20 ml) . Após a extracção com éter dietílico, e evaporação do solvente, o resíduo foi purificado por cromatograf ia para dar 1 g do composto do título como um sólido incolor. M.p. 97 ° C. [a]25 D = 13,0 (c 1, CHC13) . ^ NMR δ 7,72-7,58 (m, 2 H) , 7,52-7,19 (m, 8 H) , 5,00 (s, 1 H) , 4,86 (s, 1 H) , 3,75 (m 2 H) , 3,78 (s, 3 H) , 3,62 (m, 2 H) , 3.16 (d, J = 11,2, 4 H) , 2.93 (d, J= 11,6, 2 H) , 2,63 (d , J = 11,0, 2 H) . 38 EXEMPLO 13
Preparação de metilo (1 S, 4 S, 7 R)-3,4-Dibenzil-2-oxo-6,8-dioxa-3-azabiciclo [3,2,1] octano-7-exo-carJboxilato (compostos de fórmula (I) , onde X = O, Ri = H, R2 = (S) Bn, R.3 = Bn, R6 = (R)-COOMe) Composto 12)
Para uma solução de L-fenilalaninol 3c (onde W = H, W = OH, Ri = H, R2 = Bn, R3 = H) (5 g) em MeOH (150 ml) foi
adicionado benzaldeido (3,3 ml). A mistura de reacção foi agitada em r.t. por 1 h, em seguida, foram adicionados em pequenas porções 1,2 g de NaBH4f em 2 horas a 0°C. O solvente foi evaporado e o resíduo extraído com 50 ml de HC1 a pH = 2. A solução aquosa foi extraída com Et20, tratada com Na2C03 até pH = 9 e, em seguida, extraída com CHC13. A fase orgânica evaporada deu N-benzil-(L)- fenilalaninol como um sólido branco (7 g) 3-C (onde W = H, W = OH, Ri = H, R2 = Bn, R3 = Bn) ^ NMR (CDC13) δ, ppm: 7,34-7, 06 (m, 10 H) , 3,73 (s, 2 H) , 3,31 (dd, J = 6,2, 12,5 Hz, 1 H), 3,00-2,81 (m, 1H), 2,80- 2,66 (m, 2 H) . 2,62 (dd, J= 6,2, 12,5 Hz, 1 H)
Para uma solução de N-benzil-(L)-fenilalaninol 3c (2,8 g) em 23 ml de CHC13 a 0°C, foram adicionados DIPEA (4 ml) , HoBt (2,1 ml) e uma solução de éster metilico de (2 R , 3 R)-2,3-0- ácido isopropilidentartárico (6) (2,4 g) em 23 ml de CHC13. Em seguida, foi adicionado 1,7 g de DIPC. Após 72 horas a r.t., o solvente foi evaporado e o resíduo do produto bruto foi purificado por cromatografia para dar um 39 sólido amarelado (2,4 g) 9c (onde W = H, W = OH, Ri = H, R2 = Bn, R3 = Bn).
[a] 25 - 72 = 0,5, CHC1; 1
H NMR (CDCl 3) , δ, ppm: (mistura de ro tâmero s 2 : 1) δ princ ipais 7, 40-7, 05 (m, 10 H) , 5 ,28 (d, J = 6,0 Hz , i H) , 4,81 - (d, J = = 6, 0 Hz, 1 H), 4,75 (d, J = 16 ,4 Hz, 1 H) , 4, 0 (d, J = 1 6, 4 Hz, 1 H) , 3,79 (s, 3 H) , 3, 70 (m, 1 H) , 3, 60 (m, 1 H) , 3 , 46 (m, 1 H) , 3,04 (m, 1 H) , 1, 52 (s, 3 H) , 1, 49 (s, 3 H) . 0 composto 9c (onde W = H, W = OH, Ri = H, R2 = : Bn, R 3 =
Bn) foi oxidado a 10 (onde W = O, W = O, Ri = H, R2 = Bn, R3 = Bn) por oxidação Swern. 4,5 g de álcool (9c) em 20 ml de CH2C12 foram oxidados como de costume pelo tratamento com cloreto de oxalil, DMSO e DIPEA. Depois como usual o composto (10) (5 g) foi obtido como um sólido amarelo. NMR (CDC13) δ ppm: 9, 44 (s, 1 H) , 7, 40 -7 , 00 (m , 10 H ) , 5, 33 ( d, J = 6,2 Hz, 1 H ) , 4,92 ( d, J = 6, 2 Hz, 1 H) , 4, 89 (d , J = 18,7 Hz, 1 H) , 3, 79 (s, 3 H) , 3, 53 (dd, J = 9, 8, 4, 3 Hz -1 1 H), 3, 44 (d, J = 18,7 Hz, 1 H) r 3,41 (dd, J = 13 ,9, 4, 3 Hz, 1 H), 3,12 ( dd, J = = 13,9, 9, 8 Hz, 1 H) , 1, 54 (s , 3 H) , 1,45 (s , 3 H) . O produto foi adicionado em tolueno (15 ml), a uma suspensão de 2,5 g de Si02 e H2S04 em 30 ml de refluxo de tolueno; Após 30 min, após 15 min um terço do solvente foi destilado e a restante mistura quente foi filtrada num bloco curto de NaHC03. Após a evaporação do solvente o 40 resíduo foi purificado por cromatografia para ar 3,2 g do composto título. !h NMR ( CDCls) δ ppm: 7 1 o 7,15 (m, 8 H) , 7,03 (m, 2 H) f 5, 51 ( s, 1 H) , 5, 33 (d, j = 15, 0 Hz, 1 H) , 4,97 (s, 1 H) f 4, 71 ( S, 1 H) , 4, 03 (d, j = 15, 0 Hz, 1 H) , 3, 75 (s, 3 H) r 3, 32 ( dd , J = 10, 7, 3,7 Hz, 3 H) , 3, 15 (dd , J = 13, 5, 3, 1 Hz , i H) , 2,75 (dd, J = 13,5 10,7 Hz, 1 H) EXEMPLO de referência 14
Preparação de (1 S, 4 S, 7 R)-3r4-Dibenzil-6,8-dioxa-7-exo-hidroximetil 3-azabiciclo [3,2,1] octano (composto de fórmula (I), onde X = Ri = H, R2 = Bn (S), R3 = Bn, R6 = (R)-CH 2 OH) (Composto 184)
Para uma solução em 100 ml de THF anidro do composto de fórmula (I), onde X = 0, Ri = H, R2 = Bn (S), R3 = Bn, R6 = (R)-COOMe (composto 12) (4 g) , preparado como descrito no Exemplo 13, foi adicionada uma solução de BH3SME2 (3 ml, 10 M) em THF. Depois de 38 horas em r.t. a mistura de reacção foi tratada com EtOH seco (6ml) e 10% de NaOH (6 ml), então diluída com 50 ml de água e extraída com Et20. Após a evaporação do solvente o resíduo foi purificado por cromatograf ia para dar 1,7 g do composto título como um sólido amarelado. [a]25 D -59 (C = 0,2, CHC13) ΧΗ NMR (CDCls) δ ppm: 7,40-7, 00 (m, 10 H) , 5,11 (s, 1 H) , 4,39 (t, J= 5,1 Hz, 1 H ), 4,24 (s, 1H) , 3,81 (d, J= 13,6 41
Hz, 1 Η), 3,63 (d, J = 13,6 Hz, 1 H) 3,52 (m, 2 H) , 3,00 (m, 1 H) 3, 00-2,80 (m, 2 H) , 2,94 (d, J = 11,6 Hz, 1 H) , 2,45 (dd, J = 11,6, 1,8 Hz, 1H) EXEMPLO de referência 15
Preparação de um dímero da fórmula (II) onde Ri = Ri' = H, R? = R3 = R2' = Bn, Rg = (R)-COOMe (Composto 348) 0,1 ml de DIPEA foram adicionados a uma solução em 0,3 ml de CH2CI2 do composto de fórmula (I), onde X = Ri = H, R2 = (S)-Bn, R3 = Bn, R6 = (R) -COOH (Composto 188) (0,1 g) obtido por hidrólise do éster metilico correspondente (Composto 172) de acordo com o procedimento do Exemplo 5. Então, foram adicionados 0,2 g de PyBroP a 0°C e 0,05 g (0,209 mmol) do composto de fórmula (I), onde X = Ri = R3 = H, R2 = (S)-Bn, R6 = (R) -COOMe (Composto 178) . A mistura foi agitada durante a noite, o solvente evaporado e o resíduo dissolvido em 50 ml de AcOEt. Após a evaporação do solvente o resíduo foi purificado por cromatografia para dar 0,07 g do composto título como um sólido branco. 42 EXEMPLO de referência 16
Preparação de um dimero da fórmula (III) onde X = O, Ri = Ri'= p—N02Ph, R2 = R2' = H, R3 = R3'= Ph. Q' = (CONH(CH2)6 CONH) (Composto 441) 20 mg de (IR, 5S, 7R)-5-(4-Nitro-fenil)-3-fenil-6,8-dioxa- 3-aza-biciclo [3.2.1] octano-7-carboxílico ácido éster metílico de fórmula (I) (Composto 31) (0,054 mmol) foram adicionados a 125,5 mg (1,08 mmol, 20 eq) de 1, 6-diamino-hexano e a mistura aquecida a 65°C durante a noite. O produto bruto é purificado por cromatografia (CH2Cl2-MeOH, 20:1 + NEt3 1%), obtendo-se 8 mg (0,018 mmol, 34%) de um sólido amarelo correspondente a (IR, 5S, 7R)-5-(4-nitro- fenil)-3-fenil-6,8-dioxa-3-aza-biciclo [3.2.1] octano-7-(6-amino-hexil)-amida, ou seja, o composto de fórmula (I), onde X = 0, Ri p-N02Ph, R2 = H, R3 = Ph, R6 = CONH (CH2) 6 NH2 (Composto 189) (Rf = 0,32) e 4 mg (0,0051 mmol, 10%) de um sólido laranja correspondente para o composto dimérico de fórmula (III) do titulo (Rf = 0,67) . - Composto 189: 1H NMR (CDC13, δ): 8,32 (d, 2 H, J = 8,4
Hz), 7,83 (d, 2 H, J = 8,8 Hz), 7,30-7,22 (m, 2 H), 6.90 - 6,79 (m, 3 H) , 6,25 (m, 1 H) , 5,05 (s, 1 H) , 4,74 (s, 1 H) , 3,81-3,70 (m, 2 H) , 3.28 (d, 1 H, J = 9,8 Hz), 3,20-3,10 (m, 2 H) , 2.92 (d, 1 H, J = 11,6 Hz), 2,61 (m, 2H) , 1,78- I, 15 (m, 10 H) . - composto dimérico de fórmula (III) do titulo: 1H NMR (CDC13, δ): 8,31 (d, 4 H, J = 8,8 Hz), 7,82 (d, 4 H, J = 10 Hz), 7,31-7,24 (m, 4 H) , 6,91-6,80 (m, 6 H) , 6,25 (m, 2 H) , 5,05 (s, 2 H) , 4,75 (s, 2 H) , 3,81-3,71 (m, 4 H) , 3,29 (d, 2 H, J = 11,6 Hz), 3,20-3,10 (m, 4 H) , 2.92 (d, 2 H, J = II, 6 Hz), 1,54 (m, 4 H) , 1,23 (m, 4 H) . 43
ACTIVIDADE BIOLÓGICA A actividade biológica de 3-aza-biciclo (3.2.1) octanas da fórmula (I) foi avaliada em ensaios diferentes: indução de sobrevivência de células PC12 em condições livres de soro, a indução da actividade proliferativa na linha de células PC3 do carcinoma da próstata, a indução da síntese VGF do polipeptídeo, o deslocamento da ligação 1251-NGF ao receptor de superfície específico, e indução de autofosforilação Trk-A. Em todos esses ensaios foi usado (hr) NGF humano recombinante como padrão interno.
Efeito de compostos na sobrevivência das células PC12 em condições livres de soro A actividade biológica de 3-aza-biciclo (3.2.1) octanas da fórmula (I) foi testada como capacidade de induzir a sobrevivência de células PC12 em condições livres de soro usando hrNGF como padrão interno.
As células PC12 foram destacadas dos frascos de tecido com PBS-EDTA (solução salina fisiológica adicionada com ácido etilendiaminotetraacético) e lavadas uma vez com PBS para evitar quantidades residuais de soro. As células foram então diluídas em meio RPMI-1640 sem vermelho de fenol suplementado com penicilina e estreptomicina e cultivadas em placas de 96 poços na concentração final de 5 x 103/poço. A curva padrão foi realizada pela adição de culturas com diferentes concentrações de hrNGF em 44 triplicado, na faixa entre 1-25 ng/ml. Os compostos foram adicionados ao invés, em triplicado, nas concentrações finais de 1, 10, 100 μΜ. As células foram então cultivadas por 60 horas a 37°C numa atmosfera húmida de 5% C02. Então 10 μύ de (3-[4,5-dimetiltiazol-2il]-2,5-difeniltertrazolim brometo (MTT, 0,5 mg/ml em isopropanol) foram adicionados a cada poço e as placas, foram deixados, protegidos da luz, a 37°C por 4 horas. No final da incubação, foram adicionados 100 μΐ de 50% de dimetilformamida (em 20% SDS, pH 7,4) a cada poço. A reacção colorimétrica foi detectada com um leitor de placas de 96 poços, registando a absorvância a 570 nm. Os resultados foram expressos como a sobrevivência induzida por compostos/sobrevivência espontânea * 100 A Figura 1 mostra os resultados obtidos com 10 μΜ dos compostos mais representativos e com 1 nM de hrNGF.
Efeito de compostos na actividade proliferativa da linha celular PC3 A capacidade de 3-aza-biciclo (3.2.1) octanas da fórmula (I) e suas formas diméricas de fórmula (II) e (III) com substituições relatados na Tabela 1-4 para induzir a proliferação da linhagem de células PC3, em condições livres de soro, foi testada usando hrNGF como padrão interno.
As células PC3 foram cultivadas em triplicado, em placas de 24 poços na concentração final de 104 células/ml (volume 45 final de 500 μΐ) em meio RPMI 1640, na presença ou ausência de 1, 10, 100 μΜ de compostos ou de diferentes concentrações (entre 1-25 ng/ml) de hrNGF como padrão interno. As células foram incubadas por 60 horas em atmosfera humidificada 5% C02. No final da incubação 0,5 pCi de 3H-timidina foram adicionados a cada poço por 8 horas. As células foram então lavadas 6 vezes com PBS, lisadas com 0,1% Triton-X100 em 0,1 M de tampão fosfato, e a radioactividade foi registada num contador de cintilação β. Os resultados foram expressos como a relação entre incorporação de 3H-timidina (média ± SD) de culturas estimuladas e incorporação de 3H-timidina de culturas não estimuladas. A Figura 2 mostra os resultados obtidos com 10 μΜ de compostos seleccionados ou com 1 nM de hrNGF como padrão interno.
Indução da produção VGF por células PC12 A capacidade de 3-aza-biciclo (3.2.1) octanas da fórmula (I) foi testada também como a capacidade de induzir a produção de VGF por células PC12. 5 x 106 de células PC12 foram cultivadas na presença ou ausência de 1, 10, 100 μΜ de compostos ou de 4 nM de hrNGF como padrão interno por 24 horas em atmosfera humidificada, 5% C02. Células foram lisadas em 0,25% NP-40 em PBS suplementado com 1 mM de PMSF (f enil-metil) e 1 mM de leupeptina e a concentração de proteínas foi medida em cada amostra por ensaio de Bradford. Quantidades iguais de proteínas (30 mg) foram carregadas em 8% de gel de poliacrilamida SDS, electroforese, apagadas em membrana de nitrocelulose e coradas com anticorpos monoclonais anti-VGF seguido por 46 conjugado com peroxidase IgG anti-rato. A reacção foi visualizada por Enhanced Chemiluminiscent Reagent (ECL, Amersham), seguindo a instrução do fabricante.
A Figura 3 mostra os resultados obtidos com 10 μΜ dos compostos seleccionados (n. 91, 9, 323, 270) ou com 10 nM de hrNGF. VGF é induzida pelos compostos seleccionados, bem como por hrNGF.
Deslocamento de 125I-NGF ligando a células PC12 A capacidade dos compostos seleccionados para deslocar a ligação do NGF ao receptor de superfície específica foi avaliada através das técnicas clássicas de ligação do ligante iodado.
As células PC12 foram destacadas dos frascos de tecido com PBS-EDTA, lavadas com meio HKR (10 mM Hepes, 125 mM NaCl, 4,8 mM KCI, 1,3 mM CaCl2, 1,2 mM MgS04, 1,2 mM KH2P04, lg/1 de glicose, lg/1 BSA) e incubadas em triplicado em meio HKR com 0,1 nM I-NGF na presença ou ausência de concentrações variáveis dos compostos a serem testados ou de hrNGF como padrão interno. A curva de deslocamento foi obtida através da análise da radioactividade das células resultantes ligadas na presença dos compostos ou de hrNGF com software adequado (Graphit 4). 47 A Figura 4 mostra uma curva de deslocamento obtida com o composto n° 9 usado como concorrente. A análise dos dados revelou um Kd de 165 nm ± 0,05. A Figura 4b mostra a curva de deslocamento obtida usando hrNGF como concorrente. A análise dos dados revelou um Kd de 114 pM ± 0,01 como já relatado.
Autofosforilação Trk-A
Para avaliar a capacidade dos compostos 3-aza-biciclo (3.2.1) octanas da fórmula (I) para induzir autofosforilação Trk-A, células PC12 foram cultivadas em meio suplementado com 5% de FBS por 4 8 horas, lavadas e equilibradas no meio livre de soro por 2 horas. 2,5 x 106 células foram então estimuladas com 10 μΜ de compostos seleccionados por 30 minutos ou com 10 nM de hrNGF como controlo positivo. As células foram então lisadas com 0,5% Triton-X100 em PBS suplementado com inibidores da protease (PMSF, aprotinina, pepstatina, leupeptina) e inibidores da fosfatase. Concentrações de proteína em cada amostra foram avaliadas por ensaio Bradford e quantidades iguais (50 pg) de proteínas foram carregadas em gel de poliacrilamida SDS, electroforese e apagadas em membrana de nitrocelulose. As membranas foram cruzadas com coelho anti-(Tyr 490 e Tyr 674/675) Trk-A fosforilada (Cell Signaling Technology) utilizada na diluição final de 1:1000. Após a lavagem, as membranas foram coradas com conjugado HRP de IgG anti-coelho e a reacção foi visualizada usando reagentes ECL seguindo as instruções de fabricação. 48 A Figura 5 mostra os resultados obtidos com os compostos 272, 325, 9, 91 e com hrNGF utilizado como padrão interno. Os compostos seleccionados são capazes de induzir autofosforilação Trk-A desencadeando assim a transdução de sinais biológicos.
Actividade sinérgica A actividade sinérgica de múltiplas combinações de 3-aza-biciclo (3.2.1) octanas da fórmula (I) foi avaliada no ensaio de sobrevivência PC12 em condições livres de soro.
As células PC12 foram semeadas em placas de 96 poços na concentração de 5 x 103/poço e cultivadas em triplicado, na presença ou ausência de 5 μΜ de compostos seleccionados ou da combinação de vários dos mesmos compostos na concentração final de 10 μΜ. 0,5 nM de hrNGF foi usado como padrão interno. Após 60 horas a 37°C numa atmosfera humidificada, 5% de C02, 10μ1 de (3-[4,5-dimetiltiazol-2il]-2.5-difeniltertrazolim brometo (MTT, 0,5 mg/ml em isopropanol) foram adicionados a cada poço e placas, foram deixados, protegidos da luz, a 37°C por 4 horas. No final da incubação, 100 μΐ de 50% de dimetilformamida (em 20% SDS, pH 7,4) foram adicionados a cada poço. A reacção colorimétrica foi detectada com um leitor de placas de 96 poços, registando a absorvância a 570 nm. Os resultados foram expressos como a sobrevivência induzida por compostos/sobrevivência espontânea * 100. A Figura 6 mostra como combinações seleccionadas de 2 compostos (91 e 325) 49 induzem uma maior actividade de sobrevivência do que a adição das actividades induzidas por um único composto. 50

Claims (13)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica compreendendo como· principio activo pelo menos um entre os derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula geral (I), ou as suas misturas
    (D em que Ri é H, R2 é seleccionado do grupo consistindo em H, Ci_8 alquilo, C2_8 alquenilo, C2_8 alquinilo, grupos cicloalquilo incluindo, mas não estão limitados a, ciclopropil, ciclobutyl, ciclopentil, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canpanilo, ad-amantanilo, fenilo, bifenilo, naftilo, fenilo·, bifenilo, naftil-Ci-s alquilo, piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina-Ci-8 alquilo1, amino-Ci-8 alquilo, amino-fenilo, bifenilo, naftilo-Ci-8 alquiloxi-fenil, bifenil, naftilo, hidroxi-fenilo, bifenilo, naftilo, hidroxi-Ci-8 alquilo, carboxi-Ci_8 alquilo, metiloxicarbonil-Ci-8 alquilo, carboxiarilo, carboalquiloxi-fenilo, bifenilo, naftilo, alquilocarbamoil-fenilo, bifenilo, naftilo, e (cadeias laterais de aminoácidos), ou Ri e R2, em conjunto, são C1-4 alquilo, C2-4 alquenilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, 1 cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, para formar uma ponte de 3, 4, 5, 6 termos, R3 é são seleccionados do grupo consistindo em H, Ci_8 alquilo, C2-8 alquenilo, C2-8 alquinilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, fenilo, bifenilo, naftiol, fenilo, bifenilo, naftil-Ci-s alquilo, piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina-Ci-8 alquilo, RR'NCi_8 alquilo, RR'N-fenilo, bifenilo, naftilo, RO-Ci_8 alquilo, R0(0)C-Ci-s alquilo, R(0) C-Ci_8 alquilo, RC(0)0-Ci-8 alquilo, RC(0)N(R)Ci_8 alquilo, RO-fenilo, bifenilo, naftilo, RO(0)C-fenilo, bifenilo, naftilo, R(0)C-fenilo, bifenilo, naftil-RC(0)0-fenil, bifenilo, naftilo, RC(0)N(R)-fenilo, bifenilo, naftilo,-CH (aminoácidos de cadeia lateral)CO2R, -CH (aminoácidos de cadeia lateral) C(0)NR, -CH(C02R) - aminoácidos de cadeia lateral, CH(C0NRR') - aminoácidos de cadeia lateral, Fmoc, Boc e Cbz, Re é seleccionado do grupo consistindo em H, Ci-8 alquilo, Ci_8 alquenilo, Ci_8 alquinilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, fenilo, bifenilo e naftilo, fenil, bifenil e naftil-Ci-8 alquilo, piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina-Ci_8 alquilo; -C(0)R ,-C(0)0R, - C(0)NRR', CH20R, CH2NRR',-C (O)NH-CH (aminoácido de cadeia lateral) C (0) OR, CH2NR- Fmoc, CH2NR-Boc e CH2NR-CBz, R e R', iguais ou diferentes entre si, são seleccionados a partir do grupo consistindo em H, Ci_8 alquilo, C2-8 2 alquenilo, C2-8 alquinilo, grupos cicloalquilo incluindo, mas não limitados a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, fenilo, bifenilo e naftilo, piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina, fenilo, bifenilo, naftil-Ci-8 alquilo; piridina, imidazol, pirrol, indol, triazóis, pirrolidina, piperidina-Ci^s alquilo; grupo protector, -C (0)CH-(aminoácido de cadeia lateral)-NHT, -NH-CH (aminoácidos de cadeia lateral) COOT e -CH (aminoácidos de cadeia lateral) COOT, onde T é seleccionado entre H e Ci_8 alquilo; X é 0 e é uma ligação dupla, e em que os grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, cicloexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, norbornanilo, canfanilo, adamantanilo, fenilo, bifenilo, naftiol e os grupos heterocíclicos acima relatados, são possivelmente substituídos com um ou mais metades escolhidas do grupo consistindo em azoto, ciano, nitro, amino, hidroxi, ácido carboxílico, carbonilo e Ci_6 alquilo.
  2. 2. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que os derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula (I) são seleccionados a partir dos compostos tendo as seguintes fórmulas: 3 ο
    mposto X R1 ^2 r3 Re i 0 Η Η PhCHg {R} -COgMe 2 0 Η Η PhCHg (S) -COgMe 3 0 Η Η PhCHg / \ {R)-CQU } 4 0 Η Η PhCHg (RycoN^J 5 0 Η (S) -Me PhCHg (ff) -COgMe 8 0 Η ($} -Me PhCHg (S) -COgMe 7 0 Η {R} -Me PhCHg ( ff) -COgMe 8 0 Η (/?} -Me PhCHg (S) -COgMe 9 ο Η (ff) -CHgPh PhCHg (S) -COgMe 10 0 Η (R) -CHgPh PhCHg (R) -COgMe 11 0 Η (S) -CHgPh PhCHg (S) -COgMe 12 0 Η (S) -CHgPh PhCHg (R) -COgMe 13 ο Η {S}- CHgOBn PhCHg (R) -COgMe 14 0 Η {SJ-CHgOBn PhCHg (S) -COgMe 15 0 Η (H)-CH?08n PhCHg (R) -COgMe 16 0 Η {^-CHgOBn PhCHg (S) -COgMe 17 ο Η (S)-CH2OH PhCHg (R) -COgMe 18 0 Η (S}-CHgOH PhCHg (S) -COgMe 19 0 Η (fí)-CHgOH PhCHg (.R) -COgMe 20 0 Η {fí)-CHg OH PhCHg (S) -COgMe 21 0 Η =CHg PhCHg (R} -COgMe £2 0 Η =CHg PhCHg (S) -COgMe 23 0 Η PhCHg (-S) -COgMe R2 Ρ1 R3—Ν 0 | <0 .Ο X Ri r2 r3 Re 190 Ο Η Η PhCHg (R) -COgMe 191 0 Η Η PhCHg (S) -COgMe 192 0 Η {S) -Me PhCHg (R) -COgMe 193 0 Η {&} -Me PhCHg (5) -COgMe 194 0 Η (R) -Me PhCHg (fl) -COgMe 195 0 Η (R) -Me PhCHg (S) -COgMe 198 0 Η (S) -PhCHg PhCH., •iv (fl) -COgMe 197 0 Η (S) -PhCH2 PhCHg (5) -COgMe 198 0 Η (fl) -PhCHg PhCHg (R) -COgMe 199 0 Η (fl) -PhCHg PhCHg (5) -COgMe 200 ο Η (S) -CHgCH(Me)g PhCHg (R) -COgMe 201 0 Η {S) -CH2CH(Me}2 PhCHg (S) -COgMe 202 0 Η (fl) -CHgCH(Me)g PhCHg (fl) -COgMe 203 ο Η {R} -CHgCH(Me)g PhCHg {S} -COgMe 204 ο Η H PhCHg (Rj -CONHMe 205 0 Η H PhCHg (5) -CONHMe 208 0 Η (S) -Me PhCHg (R) -CONHMe 207 0 Η (5) -Me PhCHg (5) -CONHMe 208 0 Η (jR) -Me PhCHg (R) -CONHMe 209 0 Η (fl) -Me PhCHg (S) -CONHMe 210 0 Η (S) -PhCHg PhCHg (fl) -CONHMe 211 0 Η (S) -PhCHg PhCHg (S) -CONHMe 212 ο Η (fl) -PhCH2 PhCHg (fl) -CONHMe 213 ο Η (fl) -PhCHg PhCHg (S) -CONHMe 214 0 Η (5) -CHaCH{!Vle)2 PhCHo (R) -CONHMe 215 0 Η (5) -CH2CH(Me)g PhCHg (5) -CONHMe 216 0 Η (R) -CH2CH(!Víe)g PhCHg (fl) -CONHMe 217 0 Η (R) ~CH2CH{Me)2 PhCHg (5) -CONHMe 5
  3. 3. Composição farmacêutica de acordo com as reivindicações 1-2, compreendendo ainda excipientes farmaceuticamente aceitáveis e/ou diluentes.
  4. 4. Uso de derivados 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula (I) para a preparação de composições farmacêuticas para o tratamento de: i) doenças neurodegenerativas, inflamatórias, tóxicas, traumáticas, vasculares ou do sistema nervoso central, periférico ou autónomo, danos neurais secundários à hipóxia, isquemia, queimaduras, quimioterapia, compostos tóxicos, incluindo o álcool, infecções, trauma axotomia originária dos motoneurónios, neuropatias sensoriais, motoras, ou sensório-motoras, ou disfunções autonômicas secundárias a diversas patologias, doenças genéticas, patologias nervosas de origem diversa, algumas patologias oculares, doenças da córnea de origem diversa, patologias de motilidade reduzida do trato gastro-intestinal ou de atonia da bexiga, patologias endócrinas neoplásicas, condições clinicas em que a estimulação dos processos de aprendizagem é vantajoso, e todas as condições patológicas originadas por processos de apoptose de células neurais; ii) doenças de imunodeficiência adquirda devido a biodisponibilidade reduzida ou ausente de NGF; iii) condições em que a estimulação da neoangiogénese pode ser vantajosa; iv) patologias oculares.
  5. 5. Uso de derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula (I) e suas misturas de acordo com a reivindicação 4, em que as ditas doenças 6 neurodegenerativas, inflamatórias, tóxicas, traumáticas, vasculares do sistema nervoso central, periférico ou autonômico são seleccionadas de: Doença de Alzheimer (AD), Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA), doença de Huntington, esclerose múltipla, epilepsia, sindrome de Down surdez nervosa e doença de Ménière.
  6. 6. Uso de derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula (I) e suas misturas de acordo com a reivindicação 4, em que as ditas patologias oculares são seleccionadas a partir neuropatias do nervo óptico, degeneração da retina, glaucoma e oftalmoplegia, e as ditas doenças da córnea de origem diversa são seleccionadas a partir de úlcera neurotrófica, doenças da córnea pós-traumáticas e pós-infecciosas.
  7. 7. Uso de derivados 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula (I) e suas misturas de acordo com a reivindicação 4, em que as ditas patologias de motilidade reduzida do trato gastro-intestinal ou de atonia da bexiga são seleccionadas a partir de cistite intersticial e cistite diabética.
  8. 8. Uso de derivados 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula (I) e suas misturas de acordo com a reivindicação 4, na qual as ditas condições em que a estimulação da neoangiogénese pode ser vantajosa são seleccionadas a partir de enfarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, aneurisma cerebral, cicatrização de feridas e vasculopatias periféricas.
  9. 9. Uso de derivados 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula (I) e suas misturas de acordo com a reivindicação 4, em que a dita doença da imunodeficiência adquirida é imunodeficiência do envelhecimento. 7 octano de
  10. 10. Uso de derivados 3-aza-biciclo [3.2.1] fórmula (I) e suas misturas, tal como definido nas reivindicações 1-3, para a preparação de reagentes para a promoção do crescimento e/ou in vivo, in vitro ou ex vivo de sobrevivência de células neuronais.
  11. 11. Uso de derivados 3-aza-biciclo [3.2.1] octano de fórmula (I) e suas misturas de acordo com reivindicação 10, onde as ditas células neurais seleccionadas a partir do grupo consistindo dopaminérgicos, colinérgicos, neurónios sensoriais, células do estriado, células corticais, células do corpo estriado, hipocampo, cerebelo, bulbo olfactivo, peri-aqueduto, células dos núcleos da rafe, do locus coeruleus, do gânglio da raiz dorsal, neurónios simpáticos, motoneurénios inferiores, células-tronco nervosas, e as células de qualquer forma decorrentes da placa neural.
  12. Uso de derivados 3-aza-biciclo [3.2.1 ] octano de fórmula (I) e suas misturas, tal como definido nas reivindicações 1-3, para a preparação de meio de cultura e armazenamento útil para a conservação de córneas explantadas destinados a transplante.
  13. 13. Uso de derivados de 3-aza-biciclo [3.2.1] octano da fórmula (I), tal como definido nas reivindicações 1-2, marcado com agentes de contraste, radioisótopos, agentes fluorescentes, e possivelmente processados com procedimentos úteis para fins de imagens médicas, na análise de imagem de tecidos e órgãos que contenham receptores de neurotrofina. 8
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