PT1379146E

PT1379146E - Preparação para a prevenção da alteração do metabolismo ósseo

Info

Publication number: PT1379146E
Application number: PT02707337T
Authority: PT
Inventors: Adrianus Lambertus Be Helvoort; Klaske Van Norren; Marjan Gros-Van Hest; Mirian Lansink
Original assignee: Nutricia Nv
Priority date: 2001-03-23
Filing date: 2002-03-22
Publication date: 2009-09-02
Also published as: DE60232140D1; US20040152640A1; ES2325652T3; EP1379146A1; ATE429826T1; WO2002076241A1; EP1379146B1; DK1379146T3

Description

(11) Número de Publicação: PT 1379146 E (51) Classificação Internacional: A23L 1/30 (2007.10) A61K 36/00 (2007.10)

(12) FASCÍCULO DE PATENTE DE INVENÇÃO (22) Data de pedido: 2002.03.22 (30) Prioridade(s): 2001.03.23 EP 01201101 (43) Data de publicação do pedido: 2004.01.14 (45) Data e BPI da concessão: 2009.04.29 170/2009 (73) Titular(es):

N.V. NUTRICIA

POSTBUS 1 2700 MA ZOETERMEER NL (72) Inventor(es):

ADRIANUS LAMBERTUS BERTHOLDUS VAN HELVOORTNL KLASKE VAN NORREN NL

MARJAN GROS-VAN HEST NL

Ml RI AN LANSINK NL (74) Mandatário:

MARIA MANUEL RAMOS LUCAS

LARGO DE S. DOMINGOS N ° 1 2910-092 SETÚBAL PT

(54) Epígrafe: PREPARAÇÃO PARA A PREVENÇÃO DA ALTERAÇÃO DO METABOLISMO ÓSSEO (57) Resumo:

DESCRIÇÃO

PREPARAÇÃO PARA A PREVENÇÃO DA ALTERAÇÃO DO METABOLISMO

ÓSSEO A presente invenção refere-se a uma preparação para a prevenção e/ou para o tratamento das doenças relacionadas com a alteração do metabolismo ósseo.

Apesar de que parece uma substância inerte mineral, o osso é um tecido vivo dinâmico conjuntivo que está em constante renovação. Ele contém células e fibras de colagénio especializadas incrustadas num mineral cristalino. Os minerais, as células, as fibras e substâncias fundamentais formam a matriz orgânica ou "osteóide". 0 mineral ósseo é um complexo de sal constituído por fosfato de cálcio, citrato, boro, sódio, zinco, magnésio e flúor. A maioria dos ossos do esqueleto contém dois tipos de tecido ósseo: osso compacto e osso trabecular. 0 osso muda constantemente com uma combinação de formação óssea por osteoblastos e de reabsorção óssea por osteoclastos. Quando os níveis de cálcio no sangue são baixos, a reabsorção óssea aumenta para satisfazer os valores de cálcio requeridos em qualquer parte do corpo. A alteração do metabolismo ósseo pode ser caracterizado por um desequilíbrio entre a formação e a reabsorção óssea. Isto pode dar-se em relação a diferentes tipos de doenças. Por exemplo: osteoporose, osteopenia, doença de Paget, metástase osteolítica nos pacientes com cancro, osteodistrofia na doença hepática e o metabolismo ósseo alterado provocado pela insuficiência renal ou pela hemodiálise, fracturas ósseas, cirurgia óssea, gravidez, 1/13 anorexia nervosa e nas pessoas imobilizadas, desnutridas e com perda de peso. A doença mais comum na população com idade avançada é a osteoporose. Esta doença é caracterizada pela extensa perda de osso que conduz a um aumento na fragilidade do osso e numa maior possibilidade de fractura. Esta causa uma dor considerável, incapacidade, desfiguração e perda de independência e supõe um custo e carga para os serviços sanitários. A nivel internacional dão-se por ano mais de 1.5 milhão de fracturas resultantes da osteoporose. Há dois tipos de osteoporose reconhecidos. A primeira aparece normalmente em idades compreendidas entre os 50 e os 75 anos e afecta seis vezes mais as mulheres (osteoporose pós-menopáusica) que os homens. A perda de osso aumenta com o envelhecimento. A maioria das fracturas dá-se no osso trabecular, especialmente no pulso e na coluna vertebral. O segundo tipo é conhecido como osteoporose senil e afecta tanto a homens como a mulheres maiores de 7 5 anos e não implica mais do que a perda de osso normal. Os factores de risco para os dois tipos de osteoporose são a alta ingestão de cafeina, o consumo de álcool, o baixo peso corporal e a baixa ingestão de cálcio. A causa da osteoporose pós-menopáusica mais importante e bem documentada é a deficiência de estrogénios. Com a menopausa, os ovários deixam de produzir esta hormona a qual está directamente relacionada com a perda de teor mineral ósseo. Um tratamento muito eficaz para os sintomas pós-menopáusicos, incluindo a osteoporose, é o tratamento de substituição hormonal (TSH) e esta substituição de estrogénios previne eficazmente o desenvolvimento da 2/13 osteoporose. Devido a que a TSH pode ter graves efeitos secundários, por exemplo a estimulação do crescimento do tecido mamário, os suplementos nutricionais para a prevenção da osteoporose ganharam muita popularidade.

Para outros tipos de osteoporose, ainda não foi definida qual a sua causa principal. Devido a que as pessoas com idade avançada têm normalmente na sua dieta, baixas quantidades de cálcio, os niveis de cálcio no corpo são baixos. 0 corpo, no entanto, necessita um nivel de cálcio no sangue estável para variadíssimas funções importantes, como por exemplo a sinalização celular aumentando assim a reabsorção óssea para manter os niveis adequados deste mineral no caso de uma ingestão de cálcio insuficiente. 0 procedimento comum para reduzir a perda de osso é a utilização de suplementos nutricionais com fitoestrogénios. Estes compostos são derivados de fontes botânicas, como por exemplo da soja ou cimicifuga racemosa e têm uma estrutura molecular que é parecida com a do estrogénio. Os fitoestrogénios podem ser classificados como isoflavonas (genisteina, daidzeina), lignanos e coumestanos. 0 mecanismo de acção dos fitoestrogénios ainda não foi resolvido. É possivel que sua actividade esteja relacionada com o facto de que eles se ligam aos receptores de estrogénio de forma similar ao estrogénio, sendo os seus efeitos comparáveis à TSH convencional. Também é possivel que ajam directamente nos osteoclastos e osteoblastos via um mecanismo receptor de estrogénio independente. 0 Pedido de Patente WO-A-01/03687 ensina um método para inibir ou reduzir a biossintese ou bioactividade das hormonas sexuais esteróides endógenas nos seres humanos pela administração de uma combinação de 3/13 fitosterol/fitosteróis e fitoestrogénio(s). 0 fitoestrogénio é seleccionado de classes de lignanos, isoflavonas, flavonas e coumestano. Foi demonstrado que o uso destas combinações provêm a vantagem de um risco mais baixo em relação a vários cancros, enquanto que ao mesmo tempo conserva as vantagens para a saúde cardiovascular e óssea. 0 Pedido de Patente WO-A-91/11117 descreve suplementos dietéticos que compreende vitaminas e minerais juntamente com outros componentes vantajosos entre os quais os bioflavonóides e os que protegem das doenças do coração e de cancro assim como os imunoestimuladores. 0 Pedido de Patente WO-A-98/50026 descreve uma composição para o tratamento dos sintomas menopáusicos e da osteoporose por meio de um membro de um pequeno subgrupo de isoflavonas (que compreendem daidzeína, genisteína, biochanina e formononetina) que se distinguem pela sua capacidade de se ligarem aos receptores de estrogénio nos animais (incluindo células humanas).

Do Pedido de Patente europeia EP-A-807.435 é conhecido o uso da luteolina como inibidor indirecto da HMG-CoA reductase para o tratamento da aterosclerose, infartos de coração e outras doenças cardiovasculares. A luteolina ajuda a regular o nível de colesterol no sangue.

Os fitoestrogénios e em particular as isoflavonas são por exemplo descritos por Alekel, D.L. et al, 2000, "Isoflavone-rich soy protein isolate attenuates bone loss in the lumbar spine of perimenopausal women", Am J Clin Nutr.72:844-52; Messina, M. and Messina V., 2000, "Soyfoods, soybean isoflavones, and bone health: a brief 4/13 overview", J Ren Nutr. 10:63-8. Erdman J.W. et al, 2000, "Provacative relation between soy and bone maintenance.

Am J Clin Nutr. 2000; 72:679-680.

No Pedido de Patente WO 98/50054 é descrito que os extractos vegetais podem ser utilizados para o tratamento de doenças ou condições caracterizadas pelo aumento de reabsorção óssea. Exemplos descritos são allium (cebola, alho), petroselinum (salsa), brassica (bróculo) e extractos de eruca (arugula ou rúcula). No Pedido de Patente WO 00/20014 são descritos os extractos de lycopersicon (tomate). No Pedido de Patente WO 00/20015 são mencionados os extractos de anethum (endro).

Foi recentemente descoberto que um grupo especifico de componentes naturais pode ser usado para o tratamento e/ou para a prevenção das doenças acima mencionadas relacionadas com a alteração do metabolismo ósseo. Assim, a presente invenção provê o uso da apigenina e/ou da luteolina combinada com o cálcio, a vitamina D e/ou a vitamina K para o fabrico de uma preparação para o tratamento e/ou para a prevenção de uma doença relacionada com a alteração do metabolismo ósseo.

Os componentes da invenção (apigenina, luteolina) são preferencialmente obtidos de fontes naturais. Também podem ser usadas misturas destas. Mais adequados são os análogos funcionais como formas glicosiladas e os extractos de plantas que contêm estes componentes. Os componentes de acordo com a invenção são utilizados numa quantidade entre 0.1 mg e 1 g, preferencialmente entre 5 e 700 mg, mais preferencialmente entre 25 e 500 mg por dose diária. 5/13 A preparação para o tratamento e/ou para a prevenção de uma doença relacionada com a alteração do metabolismo ósseo de acordo com a presente invenção pode ser uma preparação farmacêutica, como por exemplo um comprimido, uma cápsula, uma saqueta ou um supositório ou uma preparação nutricional, assim como um suplemento nutricional, uma alimentação por sonda, um alimento completo ou uma preparação para melhorar a saúde. A preparação é adequada para o tratamento destas doenças em mamiferos incluindo os seres humanos.

As preparações ainda preferencialmente contêm um ou mais dos seguintes elementos: a. cálcio; b. minerais ósseos, tais como magnésio e o boro; c. ácido gama-linolénico; d. vitaminas como a vitamina D e a vitamina K; e. estrogénios ou um ou mais compostos que imitem os efeitos dos estrogénios utilizados no Tratamento de Substituição de Estrogénios; f. bifosfonatos e g. isoflavonas. 0 cálcio é adicionado para aumentar a deposição de cálcio nos ossos. A fonte de cálcio pode ser qualquer composto inorgânico ou orgânico adequado que contenha cálcio. Exemplos são os sais de cálcio inorgânico, por exemplo 6/13 cloreto de cálcio, fosfato de cálcio, sulfato de cálcio, óxido de cálcio, hidróxido de cálcio ou carbonato de cálcio. Exemplos de compostos de cálcio orgânico são o leite em pó ou caseinato de cálcio, citrato de cálcio, malato de cálcio, malato de citrato de cálcio ou lactato de cálcio. Preferencialmente a quantidade de cálcio é de 200 a 1500 mg por dose diária.

Os minerais ósseos são adicionados para fortalecer os ossos. Preferencialmente a preparação contém entre 100 mg e 500 mg de magnésio e entre 2 mg e 6 mg de boro por dose diária. O ácido gama-linolénico é utilizado para regular o metabolismo do cálcio, preferencialmente numa quantidade entre 25 mg e 100 mg por dose diária.

As vitaminas são adicionadas como cofactores para optimizar o metabolismo ósseo. Preferencialmente, a dose diária de vitamina K deverá estar entre 25 μρ e 5 mg de vitamina K. A vitamina D é utilizada para aumentar a absorção do cálcio no intestino. Preferencialmente está presente na preparação com entre 5 μρ e 20 μρ (entre 200 UI e 800 UI) por dose diária.

Os estrogénios ou um ou mais compostos que imitam os efeitos do estrogénio utilizados para substituir o estrogénio podem também ser incluídos na preparação para o tratamento e/ou para a prevenção da osteoporose. Exemplos destes compostos são os fitoestrogénios, como a genisteína, os lignanos ou os coumeranos ou as preparações farmacêuticas como 17p-e stradiol, estrogénios esterifiçados, estrona sulfato, estrogénio equino conjugado e etinilestradiol. Para os fitoestrogénios a quantidade 7/13 destes compostos é entre 5 e 100 mg. Para as preparações farmacêuticas a quantidade activa é definida pelas instruções dos fabricantes.

Um ou mais bifosfonatos são utilizados para inibir a reabsorção óssea osteoclástica. Exemplos destes compostos são o alendronato e o risedronato. Preferencialmente a quantidade destes compostos é entre 5 mg e 50 mg.

As isoflavonas podem ser obtidas (isoladas) da soja ou da cimicifuga racemosa ou podem ser isoflavonas sintéticas. As isoflavonas podem ser adicionadas numa quantidade entre 10 e 75 mg por dose diária.

As preparações da invenção podem conter ainda outras fontes de energia, tais como gorduras e hidratos de carbono, proteínas, vitaminas, minerais, fibras, aromatizantes, conservantes, corantes, adoçantes, etc.

Os componentes activos de acordo com a invenção podem ser utilizados como substâncias puras mas podem também ser na forma de extractos de plantas ou partes delas. A morina pode por exemplo ser usada na forma de extractos de jaca (Artocarpus heterophyllus) e amoreira branca (Morus alba) . A luteolina pode por exemplo ser usada em forma de extractos de cascas de amendoim (Arachís hypogaea) , de alcachofra (Cynara scolymus) e de aipo (Apium graveolens) . A apigenina pode por exemplo ser utilizada na forma de extractos de camomila (Matricaria recutíta) ou aipo (Apium graveolens) .

Os extractos podem ser utilizados por métodos conhecidos na técnica, por exemplo extraindo a matéria-prima com água ou com um dissolvente de qualidade alimentar ou suas misturas. 8/13 0 dissolvente com qualidade alimentar preferido é o etanol. Após a extracção, a fase liquida que contém os ingredientes activos pode ser concentrada ou seca por evaporação ou por criodessecação.

Os extractos de petroselinum (salsa), eruca (arugula ou rúcula), lycopersicon (tomate) e anethum (endro) estão excluidos da invenção.

Os componentes e as preparações da presente invenção podem ser utilizados particularmente nas doenças caracterizadas pela alteração do metabolismo ósseo. A doença pode ser osteoporose, osteopenia, doença de Paget, metástase osteolítica nos pacientes com cancro, osteodistrofia nas doenças hepáticas ou alteração do metabolismo ósseo provocada pela insuficiência renal ou pela hemodiálise, fractura óssea, cirurgia óssea, gravidez, anorexia nervosa e nas pessoas imobilizadas, desnutridas e com perda de peso. A invenção será agora ilustrada com os exemplos seguintes e com a figura 1 anexa que mostra a actividade da fosfatase alcalina nas células da medula óssea de rato após uma exposição de 3 semanas aos componentes da invenção.

Exemplos 1. Formulações 9/13

Suplemento nutricional 1

Componentes Quantidade por porção Apigenina 15 mg

Luteolina 15 mg

Suplemento nutricional 2:

Componentes Quantidade por porção

Morina 10 mg

Apigenina 20 mg

Luteolina 5 mg

Suplemento nutricional 3:

Componentes Quantidade por porção Cálcio 800 mg Extracto de amoreira branca (com morina glicosilada) 10 mg Extracto de camomila (com apigenina glicosilada) 10 mg Extracto de alcachofra (com luteolina glicosilada) 10 mg As quantidades de componentes aglicões activos estão expressos como

Suplemento nutricional 4:

Componentes Quantidade por porção Cálcio 800 mg Vitamina D3 200 IU Morina 10 mg Apigenina 10 mg Luteolina 100 mg

Suplemento nutricional 5: 10/13

Componentes Quantidade por porção Cálcio como Calcimate® 800 mg Vitamina D3 200 IU Magnésio 200 mg Boro 2 mg Morina 5 mg Apigenina 25 mg Luteolina 20 mg Ácido gama-linolénico 25 mg

Suplemento nutricional 6:

Componentes Quantidade por porção Cálcio como Calcimate® 800 mg Vitamina D3 200 IU Magnésio 200 mg Boro 2 mg Isoflavonas 30 mg Apigenina 50 mg Ácido gama-linolénico 25 mg Vitamina Kl 500 yg

Suplemento nutricional 7:

Componentes Quantidade por porção Cálcio 800 mg Vitamina D3 200 IU Cimicifuga racemosa com isoflavonas 40 mg Extracto de soja com isoflavonas glicosiladas 30 mg Morina 10 mg Apigenina-7-glucosídeo 10 mg Luteolina-4' glucosideo 10 mg As quantidades dos componentes activos e das isoflavonas estão expressas como aglicões

Efeito estimulante nas células da medula óssea do rato 11/13 A experiência seguinte é ilustrada na figura 1 que mostra a actividade da fosfatase alcalina nas células da medula óssea de rato depois de 3 semanas de exposição aos componentes da invenção.

Experiência

As células da medula óssea foram isoladas de ratos fêmea NMRI com seis meses de idade. Depois da lavagem, as células foram diluídas num meio a-MEM sem vermelho de fenol (1% p/s, 15% de carvão tratado de FCS) e semeado em placas com 24 poços (1.25*106 células/poço). Depois de 24 horas de incubação (37 °C, 5% CO2) as células foram expostas aos componentes activos (1*10~5, 1*10“6 e 1*10“7 M) juntamente com o ácido ascórbico (50 μρ/ιηΐ) e β-glicerolf osf ato (1 mM). Os meios de exposição eram renovados de 3 em 3 dias.

Passadas 2 e 3 semanas de incubação, as células foram lavadas com PBS e armazenadas a -20 °C. Após a lise as quantidades de ADN e as actividades da fosfatase alcalina foram determinadas como o abaixo descrito. As quantidades de ADN foram medidas para determinar o número de células e a actividade da fosfatase alcalina foi utilizada como um marcador para a diferenciação dos osteoblastos.

Lise 300 μΐ de tampão de lise (1 x SSC/0.01% SDS) foram adicionados às células congeladas. Após 1 hora de incubação (37 °C) as placas foram sonificadas durante 10 minutos e as suspensões das células foram usadas para as medições da actividade ALP. 12/13

Ensaio da actividade da fosfatase alcalina (ALP)

25 μΐ de lisado de célula foram transferidos em duplicado a placas de 96 poços. 25 μΐ de l*SSC/0.01%SDS serviu como controlo negativo. 175 μΐ de tampão de ensaio ALP (10 mM glicina, 0.1 mM MgCl2, 0.01 mM ZnCl2, 6 mM P nitrofenilfosfato, pH 10.5) foi adicionado a cada poço. A actividade ALP foi medida a um comprimento de onda de 405 nm à temperatura ambiente durante 10 minutos e de 30 em 30 segundos. Os resultados deste ensaio são mostrados na figura 1, que mostra a actividade da fosfatase alcalina nas células da medula óssea de rato após terem sido expostas durante 3 semanas aos componentes activos. A actividade é expressa como produção p-nitrofenol em nmol/minuto/poço. (média ± sem, 2 experiências independentes medidas em duplicado) A figura 1 mostra que as incubações das células da medula óssea dos ratos com 1 mM de apigenina e luteolina resultaram num sinal maior da fosfatase alcalina nos osteoblastos diferenciados. A estimulação é mais pronunciada do que o efeito da isoflavona genisteina cuja prevenção de perda de osso foi demonstrada in vivo (rato e humano). Resultados idênticos foram obtidos com a morina (os dados não são mostrados).

Lisboa, 13/13

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Uso da apigenina e/ou da luteolina, combinada com o cálcio, a vitamina D e/ou a vitamina K, para o fabrico de uma preparação para o tratamento e/ou para prevenção de uma doença relacionada com a alteração do metabolismo ósseo num mamifero.
2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por este compreender o uso de luteolina.
3. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por a doença ser a osteoporose, a osteopenia, a doença de Paget, a metástase osteolítica em pacientes com cancro, osteodistrofia na doença hepática ou alteração do metabolismo ósseo provocada pela insuficiência renal ou pela hemodiálise, fractura óssea, cirurgia óssea, gravidez, anorexia nervosa e nos pacientes imobilizados, desnutridos e com perda de peso.
4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a preparação compreender um ou mais extractos seleccionados do grupo constituído por cascas de amendoim (Arachis hypogaea), alcachofra (Cynara scolymus) , aipo (Apíum graveolens) e camomila (Matricaría recutita) .
5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por a preparação ser uma preparação farmacêutica, como por exemplo um comprimido, uma cápsula, uma saqueta ou um supositório ou uma preparação nutritiva, como por exemplo um suplemento nutritivo, uma alimentação por sonda, um alimento completo ou uma preparação para melhorar a saúde. 1/4
6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por este estar combinado com isoflavonas.
7. Preparação contendo a. apigenina e luteolina e b. um ingrediente que provê uma quantidade eficaz de cálcio, de vitamina D e/ou de vitamina K.
8. Preparação de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por a preparação compreender ainda uma quantidade eficaz de isoflavonas.
9. Preparação de acordo com a reivindicação 8, caracterizada por as isoflavonas serem isoladas da soja ou da cimicifuga racemosa.
10. Preparação de acordo com qualquer uma das reivindicações de 7 a 9, caracterizada por esta compreender extractos seleccionados do grupo constituido por cascas de amendoim (Arachis hypogaea) , alcachofra (Cynara scolymus) aipo (Apíum graveolens) e camomila (Matricaria recutita) .
11. Preparação de acordo com qualquer uma das reivindicações de 7 a 10, caracterizada por esta ainda compreender um ou mais elementos seleccionados do grupo constituido por magnésio, boro e ácido gama-linolénico.
12. Preparação de acordo com qualquer uma das reivindicações de 7 a 11, caracterizada por esta ainda compreender estrogénios ou um ou mais estrogénios que 2/4 imitam os compostos utilizados na Tratamento de Substituição de Estrogénios.
13. Preparação de acordo com qualquer uma das reivindicações de 7 a 12, caracterizada por esta ainda compreender um ou mais bifosfonatos.
14. Uso de uma preparação de acordo com qualquer uma das reivindicações de 7 a 13, caracterizada por esta ser usada no fabrico de uma preparação para o tratamento e/ou para a prevenção de uma doença relacionada com a alteração do metabolismo ósseo.
15. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por a doença ser a osteoporose, a osteopenia, a doença de Paget, a metástase osteolitica nos pacientes com cancro, osteodistrofia na doença hepática ou alteração do metabolismo ósseo provocada pela insuficiência renal ou pela hemodiálise, fractura óssea, cirurgia óssea, gravidez, anorexia nervosa e em pacientes imobilizados, desnutridos e com perda de peso. Lisboa, 3/4 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo titular tem como único objectivo ajudar o leitor e não forma parte do documento de patente europeia. Ainda que na sua elaboração foi tido o máximo cuidado, não se podem excluir erros ou omissões e a este respeito a EPO declina qualquer responsabilidade. Documentos de Pedidos de Patente citados na descrição • WO 0103687 A [0010] · WO 9850054 A [0015] • WO 9111117 A [0011] · WO 0020014 A [0015] • WO 9850026 A [00012] · WO 0020015 A [0015] • EP 807435 A [00013] Literatura citada na descrição que não é Pedido de Patente • ALEKEL, D.L. et al. Isoflavone-rich soy protein isolate attenuates bone loss in the lumbar spine of perimenopausal women Am J Clín Nutr., 2000, vol. 72, 844-52 [0014] • MESSINA, M.; MESSINA V. Soyfoods, soybean isoflavones, and bone health: a brief overview J Ren Nutr., 2000, vol. 10, 63-8 [0014] • ERDMAN J.W. et al. Provacative relation between soy and bone maintenance Am J Clín Nutr., 2000, vol. 72, 679-680 [0014] 4/4