PT1153600E - Preparações de protecção solar e de cuidado para a pele contendo enzimas reparadoras do adn - Google Patents
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Description
ΕΡ 1 153 600 /PT DESCRIÇÃO "Preparações de protecção solar e de cuidado para a pele contendo enzimas reparadoras do ADN" 0 invento refere-se a preparações de protecção solar, assim como a outros produtos para o cuidado da pele relacionado com a radiação solar, apresentando um teor de enzimas reparadoras do ADN. Há muito tempo que se conhece o efeito prejudicial dos ultravioletas da radiação solar na pele. Para a protecção da pele, não apenas contra a radiação UV-A como também contra a radiação UV-B, foram desenvolvidas numerosas substâncias filtrantes físicas e químicas que atenuam o efeito dos raios solares incidentes.
Os filtros de protecção solar físicos, distribuídos na pele, actuam como pequenos espelhos que reflectem e dispersam a radiação UV.
Os filtros de protecção solar químicos transformam a radiação UV incidente na pele em energia térmica. Os filtros de protecção solar químicos podem apresentar não apenas propriedades lipófilas como também hidrófilas, distinguindo-se de acordo com estas propriedades, os filtros solúveis em óleo e os solúveis em água. Uma vez que a pele humana apresenta não apenas zonas lipófilas como também hidrófilas, é útil que um produto de protecção solar contenha não só substâncias filtrantes solúveis em óleo como também outras solúveis em água, para que o efeito se estenda sobre uma área tão vasta quanto possível. A finalidade das substâncias filtrantes físicas e químicas é unicamente o de reflectir ou, respectivamente, absorver, a radiação solar tão completamente quanto possível, em todo o caso, no entanto, num grau de tal modo satisfatório que impeça lesões da pele. Apesar dos produtos comerciais actualmente em uso atingirem amplamente este objectivo no caso de serem aplicados conformemente, não pode ser excluído que com a sua utilização, apesar disso, a radiação solar atinja a pele provocando lesões. Estas lesões podem ser uma simples 2
ΕΡ 1 153 600 /PT irritação da pele, p. ex. uma queimadura solar ligeira, mas podem também manifestar-se em lesões celulares. É sabido que sobretudo pela radiação UV-B são originadas lesões no ADN que provocam mutações celulares e uma imunossupressão na pele e, portanto, cancro da pele. As lesões do ADN na pele humana são reparadas por uma complexa coacção de diferentes enzimas. Uma vez que este processo não necessita de luz, o mesmo é também denominado "dark repair". Em algumas algas, marsupiais e numa espécie de armadilho foi recentemente descoberto um sistema de reparação de lesões celulares que funciona sob a acção da luz, com a participação de diferentes enzimas.
Das patentes US 5 296 231, 5 190 762 e 5 272 079, assim como da EP 0 423 214 (correspondente à DE 689 17 729) conhecem-se processos para o isolamento de enzimas reparadoras do ADN. Uma vez que as lesões da pele através de luz UV ocorrem na epiderme, na proximidade da camada basocelular inferior, é útil incorporar as enzimas reparadoras do ADN num veiculo que consegue transportar as enzimas através das camadas cutâneas que se encontram em cima da camada basocelular (stratum corneum, stratum lucidum, stratum granulosum e stratum spinosum), ao local de acção propriamente dito. Como veiculo particularmente apropriado foram descritas no estado da técnica citado anteriormente, preparações lipossómicas em que as enzimas reparadoras do ADN estão incluídas em lipossomas. Os lipossomas que se conhecem, usualmente usados no sector dos produtos cosméticos e medicamentos, não são adequados para a administração de enzimas reparadoras do ADN. No entanto são obtidas uma óptima penetração dos lipossomas através das camadas cutâneas e uma óptima actividade das enzimas no caso dos lipossomas serem formados só por meio de fosfolípidos. Lipossomas deste género, contendo enzimas reparadoras do ADN, são comercializados pela empresa AGI DERMATICS, por exemplo sob o nome comercial de "Photosomen ". Neste produto trata-se de lipossomas como as que acabam de ser descritos, nos quais está incluído um extracto do organismo marítimo Anacystis nidulans, o qual apresenta um elevado teor da enzima fotoliase, reparadora do ADN.
Conhecem-se a estrutura e o modo de acçao da enzima fotoliase. Devido à incidência da radiação UVB na pele humana, 3
ΕΡ 1 153 600 /PT dá-se uma formação de dímeros de ciclobutanopirimidinas (CPD), os principais fotoprodutos do ADN nos núcleos celulares, acompanhada por uma série de efeitos imunossupressores, p. ex. a supressão de uma resposta imunitária proporcionada pela célula, por exemplo um eczema de contacto alérgico ou a inibição da molécula-chave imunológica ICAM-1. Sob a acção de energia luminosa, os cofactores FADH e MTHF compreendidos pela enzima fotoliase, cindem os ciclobutanopirimidinas e o ADN é reposto no seu estado original.
Uma vez que muitas enzimas reparadoras do ADN e, especialmente, a fotoliase desenvolvem o seu efeito sob a acção da luz, seria em principio desejável incorporá-las em formulações de protecção solar ou noutros produtos de cuidado para a pele relacionados com a radiação solar, para, assim, de forma precoce originar a reparação do ADN. Devido à observada boa penetração na pele das preparações lipossómicas de enzimas reparadoras do ADN, seria desejável incorporar os lipossomas de tipo comercial contendo as enzimas reparadoras do ADN, nas preparações desse género. No entanto, os fabricantes destas preparações lipossómicas avisam explicitamente que estas apresentam diversas incompatibilidades. Assim por exemplo, segundo um folheto informativo sobre o produto, não devem ser expostas às seguintes condições e substâncias: solventes orgânicos ou álcool - uma base de óleo etilenoglicol ou glicerina 5% agentes tensioactivos ou emulsionantes presentes numa concentração superior à sua concentração critica de formação de micelas
- temperatura superiores a 25°C valores de pH inferiores a 6,0 ou superiores a 8,0 uma pressão osmótica fortemente diferente do valor fisiológico e processos formadores de espuma 0 facto de os lipossomas que se conhecem serem inaptos para uma administração eficaz de enzimas reparadoras do ADN, assim como as conhecidas incompatibilidades dos lipossomas concebidos especificamente para este objectivo, fizeram com que parecesse impossível incorporar lipossomas contendo enzimas reparadoras do ADN em formulações de protecção solar 4
ΕΡ 1 153 600 /PT ou formulações de cuidado para a pele, uma vez que de um modo geral estas têm por base emulsões de óleo em água ou de água em óleo e apresentam além disso, frequentemente um teor de álcool e/ou agentes tensioactivos ou emulsionantes. Um outro inconveniente das preparações lipossómicas que se conhecem, consiste em estas terem de apresentar um elevado teor de lipossomas contendo uma enzima reparadora do ADN, o qual é de, pelo menos, 1%. De acordo com o folheto informativo sobre o produto, os lipossomas contendo enzimas reparadoras do ADN devem ser incorporados em formulações cosméticas em quantidades de, pelo menos, 1%. As composições que se conhecem no estado da técnica contendo uma enzima reparadora do ADN, apresentam igualmente um teor de lipossomas de, pelo menos, 1%. Stege e outros (PNAS, 15 de Fevereiro de 2005, vol. 97, n°4, páginas 1790-1795) descreve uma loção com lipossomas contendo 1% em peso de fotoliase, para a aplicação tópica na pele irritada por UV-B, na qual os lipossomas contendo a fotoliase foram incorporados num hidrogel a 1%, sem a adição de um protector solar. O problema a resolver pelo invento é o de apresentar preparações cosméticas estáveis no armazenamento, tendo uma eficácia aceitável com um teor diminuído de lipossomas contendo uma enzima reparadora do ADN.
Este problema é resolvido através das preparações definidas na reivindicação independente.
As reivindicações dependentes definem formas de realização úteis do invento.
Nas investigações que estiveram na base do presente pedido de patente verificou-se, inesperadamente, que, ao contrário das informações explícitas dadas pelo fabricante, os lipossomas em princípio habituais contendo enzimas reparadoras do ADN e obteníveis comercialmente, podem ser incorporados em formulações com base numa emulsão de óleo em água (O/W) ou de água em óleo (W/O) eventualmente alcoólica ou num hidrogel alcoólico, sem os lipossomas sofrerem uma decomposição.
Além disso verificou-se nos ensaios realizados in vitro e in vivo pela requerente, que as composições de acordo com o 5 ΕΡ 1 153 600 /PT pedido de patente continuam a apresentar uma actividade enzimática mesmo no caso de o teor de lipossomas contendo enzima reparadora ser de 0,1 a 0,75% em peso.
As preparações de acordo com o invento podem ser formuladas sob a forma de emulsão O/W ou W/O eventualmente alcoólica, sob a forma de um gel hidro-disperso ou sob a forma de um gel hidro-disperso eventualmente alcoólico.
As emulsões O/W ou W/O compreendem em principio uma fase de óleo, água, assim como uma enzima reparadora do ADN, ou lipossomas contendo a mesma, e eventualmente álcool. Nestes casos, a fase de óleo pode ser formada por gorduras, óleos, ceras dissolvidas ou outros componentes lipófilos. Como óleos podem estar contidos, com vantagem, óleo de parafina, triglicéridos de cadeia média como, por exemplo, miritol 318, octildodecanol, miristato de isopropilo, óleo de jojoba, óleo de coco ou óleo de rícino. A fase aquosa das emulsões de acordo com o invento é usualmente formada por água, eventualmente em mistura com álcool desnaturado.
Os géis hidro-dispersos de acordo com o invento compreendem por princípio uma fase de óleo, um espessante adequado, água, assim como um teor eficaz de uma enzima reparadora do ADN ou lipossomas que a contêm. A fase de óleo, por sua vez, pode ser formada por gorduras, óleos, ceras dissolvidas ou outros componentes lipófilos, sendo que como óleos podem estar contidos, com vantagem, os óleos mencionados anteriormente no contexto das emulsões.
Os hidrogéis de acordo com o invento compreendem, por princípio, além da enzima reparadora do ADN ou dos lipossomas que a contêm água, um espessante adequado, assim como, eventualmente, álcool. Como espessante para os géis hidro-dispersos e hidrogéis de acordo com o invento podem ser utilizados todos os espessantes usualmente utilizados, preferindo-se no entanto derivados do poli(ácido acrílico), como por exemplo poliacrilatos do grupo dos assim chamados carbopoles, copolímeros de ácido acrílico, como por exemplo Pemulen TR1 ou goma xantana. O teor de espessante nos géis de acordo com o invento é de 0,05 a 20% em peso, de preferência 6 ΕΡ 1 153 600 /PT 0,1 a 3% em peso e, de particular preferência, 0,5 a 1% em peso.
Como lipossomas contendo uma enzima reparadora do ADN, as preparações de acordo com o invento compreendem de preferência os lipossomas comercializados pela empresa AGI DERMATICS, de particular preferência os que são comercializados sob a designação de "Photosomen A nomenclatura da INCI para os "Photosomen " é: "Plankton Extract and Lecithin". Os lipossomas contendo a enzima podem estar contidos numa quantidade de 0,05 a 0,75% em peso, em relação à composição completa. De acordo com uma forma de realização preferida, os lipossomas contendo a enzima estão contidos numa concentração de 0,2 a 0,75% em peso, sendo o mais preferido em concentrações de 0,25 a 0,5% em peso.
Além disso, as preparações de acordo com o invento podem também compreender, pelo menos, um emulsionante adequado. Inesperadamente verificou-se que os lipossomas contendo a enzima reparadora do ADN podem também ser formulados de forma estável no caso do emulsionante estar contido nas preparações de acordo com o invento numa concentração superior à sua concentração critica de formação de micelas. Como emulsionantes são utilizados, de preferência, de acordo com o invento sistemas emulsionantes compatíveis com a pele, com base em agentes tensioactivos derivados de açúcares, p. ex. diestearato de poligliceril-3-metilglucose, p. ex. comercializados sob o nome comercial de "Tego Care".
De particular preferência, as preparações de acordo com o invento contêm além disso, pelo menos, um filtro de protecção solar. Nas preparações de acordo com o invento podem estar contidos filtros de UV solúveis em óleo, filtros de UV hidrossolúveis, filtros de protecção solar físicos, assim como combinações destes. Como filtros de UV solúveis em óleo adequados devem ser mencionados: ésteres do ácido cinâmico, por exemplo o p-metoxicinamato de isoamilo (Neo Heliopan 1000) ou metoxicinamato de octilo (Neo Heliopan AV); 7
ΕΡ 1 153 600 /PT - ácidos p-aminobenzóicos, seus ésteres e derivados, por exemplo o p-dimetilaminobenzoato de 2-etil-hexilo (Escalol 507) ; benzofenonas, por exemplo benzofenona-3 (Neo Heliopan BB); - derivados de benzilidenocânfora, por exemplo 4-metilbenzilidenocânfora (Eusolex 6300); dibenzoilmetanos, por exemplo butilmetoxidibenzoilmetano (Parsol 1789); octiltriazona (Uvinul T 150) e octocrileno (Neo Heliopan 303).
Os filtros de UV solúveis em óleo mencionados podem estar contidos nas preparações de acordo com o invento em quantidades entre 1 e 10% em peso. Como filtros de UV solúveis em água adequados devem ser mencionados o ácido 2-fenilbenzimidazol-5-sulfónico (Neo Heliopan Hydro) e seus sais, assim como benzofenonas, como por exemplo benzofenona-4 (Uvinul MS 40). Estas substâncias filtrantes podem estar contidas nas preparações de acordo com o invento em quantidades entre 1 e 10% em peso.
Além das substâncias filtrantes químicas que acabam de ser mencionadas, as preparações de acordo com o invento podem conter adicionalmente filtros de protecção solar físicos em quantidades entre 1 e 10% em peso, como por exemplo dióxido de titânio ou óxido de zinco. Nestes casos é particularmente vantajoso que os filtros de protecção solar físicos estejam presentes sob uma forma hidrófoba, isto é, se a superfície for realizada sob a forma repelente da água. Isto pode ser feito, p. ex., por se revestir as partículas dos pigmentos com uma camada superficial hidrófoba de silicone. Pigmentos deste género podem ser adquiridos comercialmente, por exemplo da empresa Tayca, sob o nome comercial MT 100 T.
As receitas exemplares que se seguem, ilustram o exemplo, sendo os componentes designados de acordo com a nomenclatura da INCI. 8
ΕΡ 1 153 600 /PT
Exemplo 1; Detecção da actividade da fotoliase in vitro e in vivo
Para as pesquisas in vitro foi utilizado um sistema read out foto-imunológico estabelecido em trabalhos prévios, no qual se dá uma inibição da expressão da molécula-chave imunológica ICAM-1, devido à formação de CPD no ADN de células cutâneas humanas (fibroblastos) ou células apresentadoras de antigénio (monócitos). No entanto, no caso das células irradiadas com UVB serem tratadas após a exposição à radiação, com fotossomas, a inibição da expressão de ICAM-1 pode ser impedida através da reparação dos CDP que o tratamento com os fotossomas implica. Desta maneira, o impedimento deste efeito imunossupressores induzido por UVB é uma medida para a actividade dos fotossomas existentes numa dada preparação. Nos ensaios in vitro verificou-se além disso em primeiro lugar, por meio de séries de diluição, se, e em que concentração, as preparações têm um efeito citotóxico.
De maneira análoga foi realizada a detecção da actividade in vivo. Também neste caso se utilizou a inibição da expressão de ICAM-1 na pele humana irradiada com UVB, resultante da geração de CPD no ADN dos queratinócitos, como sistema de medição foto-imunológico. As preparações a testar contendo fotossomas foram aplicadas topicamente nas áreas cutâneas irradiadas e a sua capacidade de impedir a inibição da expressão de ICAM-1 foi tomada como medida para a actividade da fotoliase contida nestas preparações.
Os ensaios in vitro e in vivo foram realizados com preparações de composição seguinte:
Componente Teor (% em peso) Pemulen TR1 0,5 NaOH 0, 19 EDTA sódico 0,1 Pantenol 1,0 Glicina 1,0 Fenoxietanol O »·. ι—1 Tocoferol 0,2 Fotossoma variável Água Ad 100 9
ΕΡ 1 153 600 /PT Ο teor de fotossomas (fotoliase incluída em lipossomas) era de 0,1, 0,25, 0,5% em peso.
As soluções assim produzidas, com teores de fotossomas de 0,1, 0,25 e 0,5% em peso, foram sujeitas aos ensaios in vitro e in vivo descritos anteriormente e a sua actividade de fotoliase foi verificada. Como padrão serviu uma preparação de fotossomas com um teor de fotossomas de 1% em peso. Para todas as três composições ensaiadas conseguiu ser provada uma actividade de fotoliase de quase 100%, não apenas in vivo como também in vitro.
Lisboa,
Claims (6)
- ΕΡ 1 153 600 /PT 1/1 REIVINDICAÇÕES 1. Preparação estável de protecção solar que tem um teor de 0,05 a 0,75% em peso de lipossomas contendo uma enzima de reparação do ADN.
- 2. Preparação de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a enzima de reparação ser a fotoliase.
- 3. Preparação de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a enzima de reparação ser uma endonuclease.
- 4. Preparação de acordo com uma das reivindicações anteriores, caracterizada por estar formulada sob a forma de um gel hidro-disperso ou um hidrogel.
- 5. Preparação de acordo com uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada por compreender um veiculo à base de uma emulsão, eventualmente alcoólica, de óleo em água ou de água em óleo e, adicionalmente, pelo menos um emulsionante.
- 6. Preparação de acordo com a reivindicação 5, caracterizada por o emulsionante estar contido numa concentração superior à sua concentração critica de formação de micelas. Lisboa,
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