PT100700A - Composicao farmaceutica a base de compostos inibidores da renina - Google Patents

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Madhu K Vadnere
John J Wieland
Mary Jo Leveque
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Description

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MEMÓRIA DESCRITIVA A presente é uma continuação em parte do pedido de patente E.U.A. ns de série 680 811, apresentado em 9 de Abril de 1991 que é aqui incorporada como referência. É também uma continuação em parte do pedido de patente E.U.A. na de série 632 595 apresentado em 4 de Janeiro de 1991. È também uma continuação em parte do pedido de patente E.U.A. nB de série 683 663 apresentado em 15 de Abril de 1991 que é aqui incorporado como referência.
Campo Técnico É descrita uma composição farmacêutica para compostos péptido-miméticos que são inibidores da renina. Em particular, a composição compreende uma solução do inibidor da renina, que está encapsulada numa cápsula de gelatina mole.
Antecedentes do Invento A possibilidade de administrar oralmente agentes terapêuticos de péptido ou semelhante a péptido é, de há muito, um objectivo da investigação farmacêutica. Por exemplo, muitos esforços têm sido feitos para desenvolver uma forma de dosagem oral para a insulina. Infelizmente estes esforços não têm tido sucesso.
As propriedades que tornam os péptidos difíceis para administração oral incluem a sua susceptibilidade à degradação enzimática no tracto digestivo e ao facto dos péptidos não serem facilmente transportados do sistema digestivo para a corrente sanguínea. Em consequência destes problemas, é difícil conseguir os desejados níveis no sangue, de péptidos ou agentes terapêuticos semelhantes a péptidos com doses orais relativamente baixas e com um número relativamente baixo de doses orais por dia.
Os métodos usados para vencer a capacidade dos péptidos para serem degradados enzimaticamente e para melhorar a sua absorção na corrente sanguínea a partir do tracto digestivo têm 74 192 4805.PG.02 3
incluído a feitura de análogos que são menos semelhantes aos péptidos quanto à estrutura e que têm uma menor dimensão (isto é, peso molecular). Estes métodos são considerados bem sucedidos quando o análogo de péptido atinge níveis satisfatórios no sangue depois de administração oral. Às supra mencionadas técnicas têm sido aplicadas para preparar análogos do substrato peptídico do enzima renina. Foram preparadas moléculas pequenas semelhantes a péptido que mostram eficácia no abaixamento da pressão sanguínea. Por exemplo, o composto I (abaixo representado) diminui a pressão sanguínea em cães exauridos de sal, depois de administração oral ou intravenosa. Contudo, a biodisponibilidade em dose oral (para cães em jejum) do sal di-hidrocloreto, do composto I como pó embalado numa cápsula e de cerca de 17-30% e num comprimido é de cerca de 40%. Para poder administrar-se o composto na dose mais baixa possível e com a mais baixa frequência de administração seria preferível que a biodisponibilidade oral do composto 1 e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis fosse mais alta que a exibida por uma forma sólida convencional de dosagem.
*5/ (I)
Descricão do Invento
De acordo com o presente invento obtem-se uma composição farmacêutica que compreende uma solução de um composto da fórmula (II) 74 192 4805.PG.02 4-
(II)
onde 1*2 é 4-piperazinilo, l-metil-4-piperazinilo, 1-metil-l-oxo--4-piperazinilo, 2-oxo-4-piperazinilo, 4-morfolinilo, 4-tiomor-folinilo ou l-metil-4-homopiperazinilo; R2 é benzilo, p-metoxibenzilo7 2-feniletilo, 1-naftilmetilo ou 2-naftilmetilo? R3 é 4-tiazolilo, 2-amino-4-tiazolilo, 2-tiazolilo, 5-tiazolilo, 1-pirazolilo, 3-pirazolilo, 1-imidazolilo, n--propilo, isopropilo, CH3S- ou CH3SCH2-; R4 é alquilo inferior ou ciclopropilo; R5 é hidrogénio ou alquilo inferior; e X é CH2 ou NH; ou um seu sal, éster ou pró-droga farmaceuticamente aceitável num solvente farmaceuticamente aceitável, sendo a referida solução capsulada numa cápsula de gelatina elástica mole (SEC). Quando formulado como ima solução numa cápsula de gelatina elástica mole, o composto de fórmula (II) demonstra uma biodisponibilidade oral melhorada, quando comparado com o mesmo composto administrado como uma forma de dosagem sólida convencional (por exemplo, comprimido ou cápsula cheia com sólidos e análogos).
Os solventes farmaceuticamente aceitáveis para utilização na composição SEC deste invento são polietilenoglicol com peso molecular de cerca de 200 a cerca de 600, propilenoglicol, óleos vegetais (por exemplo, óleo de açafroa, amendoim, milho, soja, amêndoa, laranja, azeite ou óleos Neobee M5 e análogos), óleo mineral, miristato de isopropilo, polisorbato 80 ou glicerina e análogos. A composição do invento também pode compreender vários aditivos como co-solventes (por exemplo, água, etanol ou
74 192 4805.PG.02 -5- propilenoglicol e análogos), anti-oxidantes (por exemplo, BHT, BHA, gaiato de propilo ou alfa-tocoferol e análogos), agentes estabilizadores (por exemplo, glicerina e análogos), agentes de solubilização, agentes de aromatização, opacificantes (por exemplo, dióxido de titânio e análogos) ou agentes corantes. Além disso, a composição do invento pode incluir um plastificador, por exemplo, glicerina, sorbitol ou propilenoglicol e análogos.
Uma composição típica do invento compreende um composto de fórmula (II) dissolvido num solvente farmaceuticamente aceitável com uma concentração de cerca de 0,07 mg/ml a cerca de 500 mg/ml, preferivelmente de cerca de 5,0 mg/ml a cerca de 400 mg/ml, sendo a referida solução encapsulada numa cápsula de gelatina elástica mole. O co-solvente constitui de cerca de 0% a cerca de 10% em volume do solvente.
Uma composição preferida do invento compreende uma solução de um composto de fórmula (II) com uma concentração de cerca de 5,0 mg/ml a cerca de 400 mg/ml em polietilenoglicol que tem um peso molecular de cerca de 400, sendo a referida solução encapsulada numa cápsula de gelatina elástica mole.
Outra composição preferida do invento compreende uma solução do composto de fórmula (III) ou de um seu sal, éster ou pró-droga farmaceuticamente aceitável com uma concentração de cerca de 5,0 mg/ml a cerca de 400 mg/ml em polietilenoglicol que tem um peso molecular de cerca de 400, sendo a referida solução encapsulada numa cápsula de gelatina elástica mole.
(III)
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Uma composição mais preferida do invento compreende uma solução do sal hidrocloreto do composto de fórmula (I) com uma concentração de cerca de 5#0 mg/ml a cerca de 400 mg/ml num solvente que compreende 98% de polietilenoglicol que tem um peso molecular de cerca de 400 e 2% de glicerina, sendo a referida solução encapsulada numa cápsula de gelatina elástica mole.
Os compostos das fórmulas I, II e III contêm dois ou mais átomos de carbono assimétrico e, portanto, podem existir como diastereómeros puros, misturas de diastereómeros, racematos diastereoméricos ou misturas de racematos diastereoméricos. 0 -presente invento inclue no seu âmbito todas as formas isoméricas. Os termos configuração "R" e "S" aqui usados são definidos pelo IUPAC 1974 Recommendations for Section E, Fundamental Stereochemistry, Pure Àppl. Chem (1976) 45, 13-30. A expressão "alquilo inferior" como aqui usado refere-se a radicais com cadeia linear ou ramificada que contêm de l a 7 átomos de carbono incluindo mas não se limitando a metilo, eti-lo, n-prolilo, isoprolilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, n-pentilo, 1-metilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 2-metilpentilo, 2,2-dimetilpropilo, n-hexilo e análogos. O termo "halogéneo" ou "halogeneto" como aqui usado refere-se a F, Cl, Br ou I. 0 termo "haloalquilo" como aqui usado, refere-se a um radical alquilo inferior em que um ou mais dos átomos de hidrogénio estão substituídos por halogéneo, incluindo mas não se limitando a clorometilo, trifluorometilo, l-cloro-2--fluoroetilo e análogos.
Os termos "alcoxi" e "tioalcoxi" como aqui usados referem--se a R3qO- e R3qS-, respectivamente, onde R30 é um grupo alquilo inferior ou benzilo. 0 termo "haloalcoxi" como aqui usado refere-se a R310- onde R31 é um grupo haloalquilo. 74 192 4805.PG.02 -7-
O termo "aminocarbonilo" como aqui usado refere-se a -C(0)NH2. O termo "alquiaminocarbonilo" como aqui usado refere-se a -C(0)NR32 onde R32 é alquilo inferior. O termo "dialquilaminocarbonilo" como aqui usado refere-se a -C(0)NR33R34 onde R33 e R34 são independentemente escolhidos entre alquilos inferiores. O termo "alcoxicarbonilo" como aqui usado refere-se a -C(0)0R35 onde R35 é alquilo inferior.
Os compostos das fórmulas I, II e III podem ser usados na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis derivados de ácidos orgânicos e inorgânicos. Estes sais incluem mas não se limitam aos seguintes: acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropionato, dodecil-sulfato, etanossulfonato, gluco-heptonato, glicerofosfato, hemissulfato, heptonato, hexanoato, fumarato, hidrocloreto, hidrobrometo, hidro-iodeto, 2-hidroxi-etanossulfonato, lactato, maleato, metanossulfonato (mesilato), nicotinato, 2-naftale-nossulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, perssulfato, fosfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartarato, tiocianato, tosilato e undecanoato.
Exemplos de ácidos que podem ser empregados para formar sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis incluem ácidos inorgânicos como ácido clorídrico, o ácido sulfúrico e o ácido fosfórico e ácidos orgânicos como o ácido oxálico, o ácido maleíco, o ácido succínico, o ácido metanossulfónico e o ácido cítrico. Outros sais incluem sais de metais alcalinos ou metais alcalino-terrosos como o sódio, o potássio, o cálcio ou o magnésio ou com bases orgânicas.
Os compostos do presente invento também podem ser usados na forma de pró-drogas que incluem ésteres. Exemplos destes ésteres
74 192 4805.PG.02 -8-incluem um composto de fórmula (II) substituído com hidroxilo gue foi acilado com um resíduo aminoácido bloqueado ou não bloqueado, uma função fosfato, ou um resíduo hemi-succinato. Os ésteres de aminoácido de particular interesse são a glicina e a lisina; contudo também podem ser usados outros resíduos de aminoácidos. Estes ésteres servem como pró-drogas dos compostos do presente invento e servem para aumentar a solubilidade destas substâncias no tracto gastrintestinal. As pró-drogas são convertidas metabolicamente in vivo no composto progenitor de fórmula (II). A preparação dos ésteres pró-droga é realizada fazendo reagir um composto de fórmula (II) substituído com hidroxilo com um derivado aminoacilo, fosforilo ou hemi-succinilo activado. O produto resultante é depois desprotegido para dar o desejado éster pró-droga. Outras pró-drogas incluem um composto de fórmula (II) substituído com hidroxilo onde o grupo hidroxilo é funcionalizado com um substituinte de fórmula -CH(R20)OC(O)R21 ou -CH(R20)0C(S)R21 onde R21 é alquilo inferior, haloalquilo, alcoxi, tioalcoxi ou haloalcoxi e R2q é hidrogénio, alquilo inferior, haloalquilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo ou dialquilaminocarbonilo. Estas pró-drogas podem ser preparadas por condensação do grupo hidroxilo com um aldeído activado seguida de acilação do hemi-acetal intermediário. A composição e a preparação da cápsula de gelatina elástica mole é bem conhecida na arte. A composição de uma cápsula de gelatina elástica mole inclui tipicamente de cerca de 30% a cerca de 50% em peso de gelatina NF, de cerca de 20% a cerca de de 30% em peso de um plastificador e de cerca de 30% a cerca de 40% em peso de água. Os plastificadores úteis na preparação de cápsulas de gelatina elástica mole são a glicerina, o sorbitol ou o propilenoglicol e análogos, ou suas combinações. Uma cápsula de gelatina elástica mole preferida tem uma composição que inclui gelatina NF (cerca de 38,3% em peso), glicerina (96% activa; cerca de 29,0% em peso) e água (cerca de 32,7%). 0 material da cápsula de gelatina elástica mole pode incluir também aditivos como conservantes, opacificantes,
74 192 4805.PG.02 -9 pigmentos, aromas e análogos.
Podem ser usados vários processos para fabricar e encher as cápsulas de gelatina elástica mole, por exemplo, um processo de cápsula sem costura, um processo rotativo (desenvolvido por Scherer) ou um processo que utiliza uma máquina Liner, uma máquina Accogel ou análogas. Aliás podem ser usadas diversas máquinas industriais para fabricar as cápsulas.
Os exemplos seguintes servirão para ilustrar melhor o invento. EXEMPLO 1
Preparação de uma Composição de Gelatina Elástica Mole aue
Inclui o Composto II A composição da cápsula elástica mole que inclui o composto de fórmula (II) é preparada misturando quantidades apropriadas do solvente e, opcionalmente do co-solvente e/ou de outros aditivos. Borbulha-se azoto durante várias horas através da mistura. Enquanto a mistura é mantida numa atmosfera de azoto, a mistura é aquecida a cerca de 40°C e a quantidade desejada do composto de fórmula (II) é dissolvida. As cápsulas de gelatina elástica mole são então enchidas com esta solução. A operação de enchimento é feita em atmosfera de azoto.
Usando o processo acima descrito, foram preparadas composições que incluem um composto de fórmula (I) numa cápsula de gelatina elástica mole (composição: gelatina NF/38,3% em peso, glicerina/96% activa, 29,0% em peso, água/32,7% em peso) que tem um volume de 0,1 ml, sendo a referida cápsula enchida com uma solução do composto I com as concentrações de 0,7 mg/ml, 7 mg/ml e 21 mg/ml, respectivamente, num solvente que compreende 98% em volume de PEG 400 e 2% em volume de glicerina.
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Preparação de uma Composição de Gelatina Elástica Mole aue
Inclui o Composto III
Usando o processo do exemplo 1, podem ser preparadas composições do composto III que incluem soluções do composto III encapsuladas em gelatina elástica mole.
EXEMPLO 2B
Preparação de uma Composição de Gelatina Elástica Mole aue
Inclui o Composto do Exemplo 9
Usando o processo do Exemplo 1, podem ser preparadas composições do composto do Exemplo 9 que incluem soluções do composto III encapsuladas em gelatina elástica mole. EXEMPLO 3 f 2S)-2-benzil-3-(l-metil-pjperazin-4-il-sulfonil)propionil-(L)--(4-tiazolil)Ala-amida de f2S.3R.4S)-2-amino-l-ciclo-hexil-3.4--di-hidroxi-6-meti1-heptano
EXEMPLO 3A S-hidroxi^-metileno-l-fenilpropionato de metilo
Uma mistura de benzaldeído (82,1 ml, 0,81 mol) acrilato de metilo (109,1 ml, 1,211 mol), l,4-diazabiciclo(2,2,2)octano (13,6 g, 0,12 mol) e ácido acético (1,4 ml, 0,024 mol) foi deixada em agitação a 35'C durante 60 horas, ponto este em que se determinou, por -^H RMN, que a reacção estava 70% completa. Adicionou-se então acrilato de metilo (20,9 ml, 0,23 mol) e deixou-se a solução reagir a 35°C durante mais 48 h. A mistura foi diluída com éter dietílico (1,0 1) e foi lavada com duas porções de 200 ml de tampão de fosfato a pH 7. Depois de concentração no vácuo, a mistura remanescente foi destilada sob 74 192 4805.PG.02 -11-
pressão reduzida (10,6 kPa) para dar 6,5 g de benzaldeído gue não reagiu e 130,0 g (90%) do produto desejado como um óleo incolor: p.e. 130°C (12 mm); IV (película) 1718, 1440 cm-1; ^-H RMN (CDC13) δ 3,67 (S, 3H), 5,52 (s largo, 1H), 5,83-5,85 (m,
EXEMPLO 3B (Z)-l-bromo-2-carbometoxi-3-fenil-2-propeno
Num balão de Morton de 2 1 com três tubuladuras, equipado com um termómetro, um agitador mecânico e um funil de adição foi adicionado o composto resultante do Exemplo 3A (305,9 g, 1,585 mol) seguindo-se a adição de HBr a 48% (505 ml; 4,46 mol) numa porção. 0 balão foi mergulhado num banho de água e gelo, altura em que se adicionou, gota a gota, durante 90 min. ácido sulfúrico concentrado (460 ml, 8,62 mol) e a temperatura interna da mistura de reacção foi mantida a 23-27eC durante o processo de adição. Após remoção do banho de água e gelo, deixou-se a mistura em agitação à temperatura ambiente durante a noite. A solução foi depois transferida para uma ampola de decantação e deixou-se a camada orgânica separar-se da camada ácida. Os ácidos foram drenados e a camada orgânica foi diluída com 2 1 de uma solução 1:1 de acetato de etilo/hexano, lavada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (1 1), seca sobre sulfato de sódio, e concentrada para dar 400 g (99%) do produto desejado como um óleo amarelo claro que foi usado sem qualquer purificação adicional: p.e. 180°C (12 mm); IV (película) 1718, 712 cm"1; % RMN (CDCI3) δ 3,89 (s, 3H), 4,40 (s, 2H), 7,38-7,45 (m, 3H), 7,56-7,60 (m, 2H), 7,83 (s, 1H); 13C RMN (75 MHZ, CDCI3) δ 26,77, 52,47, 128,63, 128,87, 129,61, 134,20, 142,95, 166,62. 74 192 4805.PG.02 -12-
EXEMPLO 3C
Sal de Sódio do Ácido (Z)-2-carbometoxi-3-fenil-2-propeno-l- -sulfónico
Num balão de fundo redondo com três tubuladuras de 12 lf equipado com um agitador mecânico, termómetro e funil de adição, verteu-se o produto resultante do Exemplo 3B (400 g, 1,57 mol) e metanol (4 1). A mistura foi aquecida a 50 eC e adicionou-se uma solução de sulfito de sódio (199 g, 1,57 mol) dissolvido em água (4 1) durante 75 min. enquanto a temperatura interna do balão era mantida a-50°C. Depois de completada a adição, a solução límpida foi deixada em agitação a 50°C durante mais 45 min.. A mistura de reacção em solução foi levada para o passo seguinte sem purificação adicional. 0 composto pode ser isolado por concentração para dar um pó amorfo que é contaminado com um equivalente de brometo de sódio: IV (KBr) 1711, 1628, 1215 cm"1; RMN (DMSO D-6) δ 3,70 (s, 3H), 3,77 (s, 2H), 7,33-7,41 (m, 3H), 7,48 (s, 1H), 7,87-7,89 (m, 2H) ? 13C RMN (75 MHZ, DMSO D--6) S 49,88, 51,93, 127,36, 128,33, 128,91, 129,82, 134,75, 139,06, 168,60.
EXEMPLO 3D
Sal de Sódio do Ácido 2-θ8^3θΐη6ίοχϊ-3-£6ηι1ρΓορηηο-1-5η1£όηίοο A 8 1 de uma mistura 1:1 de metanol/água contendo o composto resultante do Exemplo 3C adicionaram-se 60 g de níquel de Raney W-24. A suspensão resultante foi submetida a uma pressão de 344,7 kPa (50 psi) de hidrogénio e deixou-se em agitação num agitador de Parr durante 24 horas, altura em que se adicionou mais 20 g de catalisador de níquel Raney. Após 6 horas sob 344,7 kPa (50 psi) de hidrogénio, o catalisador foi removido por filtração e a solução foi concentrada até à secura. Ao sólido branco seco foi adicionado acetato de etilo (6 1) e heptano (41) e a solução foi vigorosamente agitada com um agitador mecânico durante a noite. A suspensão branca foi removida por filtração dando 530 g (88%) do produto desejado
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como um pó amorfo que foi contaminado com aproximadamente um equivalente de NaBr. O composto foi usado sem qualquer purificação adicional: IV (KBr) 1740, 1215, 1050 cm-1; ^ RMN (DMSO D-6) δ 2,48-2,54 (m, 1H), 2,74-2,87 (m, 2H), 2,91--3,04 (m, 2H), 3,48 (s, 3H), 7,12-7,32 (m, 5H); 13C RMN (75 MHz, D20/DMS0 D-6) δ 38,18, 44,80, 52,67, 52,82, 127,42, 129,13, 129,34, 138,14, 176,84.
EXEMPLO 3E
Cloreto de 2-carbometoxi-3-fenil-l-propanossulfonilo
Verteu-se num balão de fundo redondo de 3 1 o composto resultante do Exemplo 3D (530 g, 1,39 mol) e tolueno (520 ml) seguindo-se a adição de PClg (317 g, 1,52 mol). A mistura foi aquecida a 50°C com agitação durante 45 min.. Foi depois diluída com tolueno (11) e foi filtrada através de celite. Após concentração no vácuo foram obtidos 371 g (96%) do produto desejado como um óleo castanho claro: IV (película); 1740, 1380, 1170 cm-1; 1H RMN (CDC13) δ 2,92 (dd, 1H, J = 8,1, 14,0), 3,17 (dd, 1H, J = 6,6, 14,0), 3,41-3,50 (m, 1H), 3,67 (dd, 1H, J = 3,3, 14,3), 3,72 (s, 3H), 4,20 (dd, 1H, J = 8,8, 14,3), 7,15--7,18 (m, 2H), 7,25-7,35 (m, 3H); 13C RMN (75 MHz, CDCI3) δ 37,26, 42,88, 52,65, 64,89, 127,49, 128,87, 128,92, 135,61, 171,79.
EXEMPLO 3F 2-benzil-3-(l-metil-PÍperazin-4-ilsulfonil)propionato de metilo
Verteu-se num balão de fundo redondo de l 1 o composto resultante do Exemplo 3E (84,5 g, 0,305 mol) e diclorometano (305 ml). A mistura foi arrefecida a 0°C num banho de água e gelo e adicionou-se, gota a gota, com agitação vigorosa durante 90 min. uma solução de N-metilpiperazina (35,5 ml, 32,1 g) dissolvida em diclorometano (305 ml). Completada a adição, o banho de água e gelo foi removido e a mistura foi agitada durante mais 4 h enquanto aquecia até à temperatura ambiente. A
74 192 4805.PG.02 -14-solução foi então vertida numa âmpola de separação contendo 1 1 de una solução aquosa a 5% de NaOH. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre carbonato de potássio. A concentração no vácuo deu um óleo que foi filtrado através de 200 g de sílica-gel usando hexano/acetato de etilo a 4:1 como eluente. A concentração deu 84,3 g (81%) do produto desejado como um óleo amarelo: IV (película); 1735, 1165, 955 cm-1; ^-H RMN (CDCI3) S 2,30 (s, 3H), 2,42 (t, 4H, J - 4,8), 2,88 (dd, 1H, J = 7,7, 14,0), 2,93 (dd, 1H, J = 3,7, 14,0), 3,06 (dd, 1H, J = 7,0, 13,6), 3,18-3,27 (m, 5H), 3,43 (dd, 1H, J = 8,82, 13,9), 3,67 (s, 3H), 7,14-7,17 (m, 2H), 7,24-7,34 (m, 3H); 13C RMN (75 MHZ, CDCI3) δ 37,91, 42,22, 45,36, 45,83, 49,61, 52,21, 54,36, 127,06, 128,66, 128,92, 129,06, 136,79, 173,33.
EXEMPLO 3G Ácido (2S) 2-benzil-3-fl-metil-piperazin-4-ilsulfonil)propiónico 0 éster racémico resultante do Exemplo 3F (135 g, 397 mmol) foi suspenso em acetona (300 ml) e água (900 ml). Enquanto era agitado vigorosamente a uma temperatura de 35°C adicionou-se uma preparação em bruto de Subtilisina Carlsberg (10 ml, Alcalase 2,4 1, Novo Laboratories). Foi usada uma solução de hidróxido de sódio (6 M) para manter a reacção a um pH de 7,5-8,0. Passados 3 dias, a acetona foi removida sob pressão reduzida e a fase aquosa foi extractada com CHC13 (1 1) para remover o éster que não reagiu. A fase aquosa foi ajustada para pH 7 com HC1 3 M e foi dessalifiçada por eluição através de uma coluna de Amberlite XAD-16 (2 kg, pré-lavada em sequência com água, metanol e água) usando um gradiente de água para água/metanol. A evaporação do solvente deu 46 g (70%) de um sólido branco: p.f. 184,5eC; TLC (25% de acetato de etilo/25% de água/25% de ácido acético/25% de n-butanol) Rf = 0,43;
Analise (C^gH22N204S'0,25 H2O)
Calculada: C, 54,44; H, 6,85; N, 8,47.
Verificada: C, 54,77; H, 6,53; N, 8,39.
74 192 4805.PG.02 (2-bromoalil^ acetamidomalonato de dietilo A uma mistura agitada de acetamidomalonato de di-etilo (217 g, 1,0 mol), 2,3-dibromopropeno (240 g, 1,2 mol) e tetra--hidrofurano anidro (2,50 1), sob azoto, foi adicionado hidreto de sódio (26,4 g, 1,1 mol) em várias porções. A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e depois aquecida em refluxo. Depois de aquecimento durante 18 horas, a lama resultante foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada por sucção através de uma curta camada de sílica-gel. O resíduo sólido foi lavado com tetra-hidrofurano (2 x 50 ml) e os filtrados foram combinados e concentrados. 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (2,0 1), lavado com água e salmoura e depois seco sobre MgS04. A filtração e a concentração deram um óleo amarelo que solidificou após secagem. O sólido resultante foi recristalizado com uma mistura de acetato de etilo/hexano quente para dar 301 g (89%) do produto desejado: p.f. 85-87°C. ΧΗ RMN (300 MHZ, CDCI3) δ 1,28 (t, J = 7,4 Hz, 6H), 2,04 (s, 3H), 3,57 (s, 2H), 4,27 (m, 4H), 5,55 (bs, 1H), 5,61 (bs, 1H), 6,82 (largo, 1H); IV (KBr) 1745, 1635 cm-1. Análise calculada para C12Hi8BrN05Í c· 42,87; H, 5,40; Br, 23,77; N, 4,12. Verificada: C, 43,25; H, 5,56; Br, 22,97; N, 4,12. EXEMPLO 31 (3-bromo-2-oxo-propil)acetamidomalonato de dietilo A uma solução agitada fria (0°C) do composto resultante do Exemplo 3H (280 g, 0,83 mol) numa mistura 2:1 de acetonitrilo/água (1,68 1) foi adicionada N-bromo-succinimida sólida (193 g, 1,08 mol) em três porções durante um período de 15 min.. A resultante mistura cor de laranja foi agitada a 0°C durante um período adicional de 1 h e depois deixou-se aquecer até à temperatura ambiente. Após 4 h, a mistura de reacção foi tratada com tio-sulfato de sódio aquoso a 10%, diluída com
74 192 4805.PG.02 -16- acetato de etilo e lavada, em sequência, com água, NaHS04 aquoso a 10% (3 X), água e salmoura. A secagem (MgS04) e a concentração deram um sólido amarelo que foi recristalizado com uma mistura de acetato de etilo e hexano para dar 247 g (85%) do composto desejado como um sólido branco: p.f. 97-98,5°C. RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,25 (t, J = 7,5 Hz, 6H), 2,01 (s, 3H), 3,87 (s, 2H), 3,93 (s, 2H), 4,25 (q, J = 7,5 Hz, 4H), 7,0 (largo, 1H); IV (KBr) 1760, 1732, 1634 e 1209 cm”1. Análise calculada para c12H18BrN06: c' 40/93'* H/ 5,15; Br, 22,62; N, 3,98. Verificada: C, 41,05; H, 5,23; Br, 23,28; N, 3,93. EXEMPLO 3J (4-tiazolilmetil)acetomidomalonato de dietilo
Um balão de fundo redondo com 3 tubuladuras, de 5 1, equipado com agitador mecânico, rolha e um tubo de secagem foi carregado com o composto resultante do Exemplo 31 (325 g, 0,92 mol) e lavado com azoto. Uma solução recentemente preparada de tioformamida em tetra-hidrofurano (0,8 M, 1,25 1) foi adicionada de uma só vez. A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A lama resultante foi depois diluída com éter (1,25 1) e arrefecida a 0eC. 0 sólido foi então recolhido por filtração com sucção e lavado com éter frio (3 X) para dar o composto em epígrafe como o sal hidrobrometo. Este material foi transferido para uma âmpola de separação de 4 1, transformado em lama com acetato de etilo (2 1) e basifiçado por adição lenta de NaOH aquoso 2 Μ. A camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura e, depois, seca sobre MgS04. A filtração e a concentração deram um óleo amarelo claro que solidificou por secagem para dar 242 g do composto desejado. Este material foi recristalizado com uma mistura de acetato de etilo/hexano para dar 185,6 g (64%) de material puro: p.f. 104-106°C. Análise calculada para α13Η18Ν2058: C, 49,67; H, 5,77; N, 8,91; S, 10,20. Verificada: C, 49,90? H, 5,72; N, 8,97; S, 10,29.
EXEMPLO 3K 74 192 4805.PG.02 Éster etílico de N-acetil-3-f4-tiazolil^-DL-alanina A uma solução agitada do composto resultante do Exemplo 3J (185,6 g, 0,59 mol) numa mistura de tetra-hidrofurano (620 ml) e etanol (310 ml) foi adicionado, gota a gota, LiOH aquoso 2 M (325 ml, 0,65 mol), durante 20 min.. Depois de agitação à temperatura ambiente durante 2,5 h, a mistura de reacção foi concentrada e a mistura aquosa resultante foi extractada com éter (3 X 200 ml), ajustada a pH 3 com HC1 3 M e concentrada sob pressão reduzida. A água residual foi removida por evaporação com porções de tolueno (2 X 200 ml). 0 resíduo foi diluído com tolueno (1,5 1) e a lama resultante foi aquecida em refluxo com separação da água residual (ratoeira de Dean-Stark). Passadas 3 h, a mistura de reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com acetato de etilo (1,5 1) e filtrada por sucção através de Si02 (60 g). Os sólidos foram lavados com acetato de etilo adicional (4 X 500 ml) e as porções orgânicas combinadas foram concentradas para dar um óleo amarelo claro que solidificou após secagem (0,5 torr) para dar 119,6 g (84%) do composto desejado: p.f. 58-62°C.
EXEMPLO 3L Éster etílico de N-acetil-3-f4-tiazolill-L-alanina e N-acetil-3--f 4-tiazolil)-D-alanina
Um balão de fundo redondo com 3 tubuladuras, de 5 1, equipado com um agitador mecânico foi carregado com o composto resultante do Exemplo 3K (210 g, 0,87 mol), água distilada (1,6 1) e KCl aquoso 1 M (0,8 1). A solução homogénea foi ajustada para pH 7 com NaOH 0,1 M e depois foi tratada com Subtilisina Carlsberg (1,8 g) dissolvida em KCl aquoso 0,1 M (25 ml). A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente com NaOH 1,0 M que é adicionado conforme o necessário para manter o pH a 6,57-7,25. Passadas 4 horas, tinham sido consumidos 430 ml da base e julgou-se a reacção completa. A mistura de reacção foi 74 192 4805.PG.02 18-
então extractada com clorofórmio (4 X 1,5 1), a fase aquosa foi acidificada cuidadosamente até pH 4 com HC1 2 M e depois concentrada sob pressão reduzida. A água residual foi removida por evaporação consecutiva com tolueno (3 X 500 ml) e etanol (3 X 500 ml). 0 resíduo foi tomado em etanol morno e filtrado por sucção para remover os sais inorgânicos. Os sólidos foram lavados com etanol morno (3 X 400 ml) e os filtrados foram concentrados para dar 92,6 g (50%) de N-acetil-3-(4-tiazolil)-L-alanina como um sólido branco: p.f. 186 °C.
As fracções combinadas de clorofórmio provenientes das extracções foram lavadas com NaHC03 aquoso saturado, água e salmoura e depois foram secas sobre MgS04. A filtração e a concentração deram 103 g (49%) de éster etílico de N-acetil-3--(4-tiazolil)-D-alanina. Este material pode ainda ser purificado por recristalização com acetato de etilo/hexano: p.f. 79-80,5°C.
EXEMPLO 3M
Epimerização do éster etílico de N-acetil-3-f4-tiazolil)-D- -alanina
Um balão de fundo redondo de 2 1 equipado com um agitador magnético, condensador de refluxo e admissão de azoto foi carregado com sódio (0,96 g, 0,045 mol) e etanol (900 ml) e a mistura foi deixada em refluxo até o sódio ser consumido. A resultante solução de etóxido de sódio foi ligeiramente arrefecida e juntou-se o éster etílico de N-acetil-3-(4--tiazolil)-D-alanina do Exemplo 3L (102 g, 0,42 mol). A mistura de reacção foi então aquecida até ao refluxo. Passadas 3 horas, a solução foi arrefecida até à temperatura ambiente, extinta com ácido acético glacial (0,045 mol) e concentrada para remover o etanol. O resíduo foi diluído com acetato de etilo, lavado com água e salmoura e seco sobre MgS04. A filtração e a concentração deram um óleo amarelo que foi purificado por recristalização com uma mistura de acetato de etilo e hexano quente para dar 89 g (87%) de material idêntico ao obtido no Exemplo 3K.
Di-hidrocloreto de 3-(4-tiazoliH-L-alanina
Um balão de fundo redondo de 2 1 equipado com um agitador magnético foi carregado com N-acetil-3-(4-tiazolil)-L-alanina do Exemplo 3L (92,6 g, 043 mol) e HCl 6 Μ (1 1). A solução resultante foi aquecida em refluxo. Passadas 3 horas deixou-se a mistura arrefecer até à temperatura ambiente. A solução foi então concentrada sob pressão reduzida, evaporada com tolueno (3 X 200 ml) e seca sob vácuo durante a noite para dar 120 g de um sólido ligeiramente húmido. Este material foi usado na reacção seguinte sem mais purificação. EXEMPLO 30 N-Boc-3-f 4-tiazolill-L-alanina
Um balão de Erlenmeyer de 4 1 equipado com um agitador mecânico foi carregado com o composto resultante do Exemplo 3N (125,9 g) e tetra-hidrofurano (1,5 1) e a mistura foi ajustada a pH 6,6 com bicarbonato de sódio aquoso saturado. A solução resultante foi depois ajustada a pH 8,9 com NaOH 3 M e adicionou-se uma solução de di-carbonato de di-terc-butilo (117,8 g, 0,51 mol) em tetra-hidrof urano (150 ml). A mistura de reacção foi vigorosamente agitada à temperatura ambiente durante 40 h. O tetra-hidrof urano foi removido sob vácuo, o pH do resíduo foi ajustado a 2,0 com HCl 3,0 M e a mistura foi extractada com acetato de etilo (3 X 300 ml). Os extractos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados para dar 150 g de um sólido branco. A recristalização com acetato de etilo/hexano 1:1 quente (1,06 1) deu 107,6 (82% do composto resultante do Exemplo 3L) do composto desejado: p.f. 115 °c; [<*]D = +129,8 (c = 104, CHCI3).
Análise calculada para C11H16N202: C, 48,53; H, 5,88; N, 10,29. Verificada: C, 48,58; H, 5,91; N, 10,17.
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EXEMPLO
Boc-L-(4-tiazolil)Ala-amida de (2S.3R.4S)-2-amino-l-ciclo-hexil- -3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano (2S, 3R, 4S) -2- [ (terc-butiloxicarbonil) amino] -1-ciclo-hexil--3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano (5,05 g, 14,7 mmol, Luly et al., J. Org. Chem. 1988, 53, 6109) foi agitado durante 90 min. em HC1 4 M em etanol e depois evaporado. Adicionou-se éter e evaporou-se 3 vezes e o resíduo foi seco sob alto vácuo. A este resíduo adicionou-se 1-hidroxibenzotriazolo (5,57 g, 41,2 mmol), o ácido resultante do Exemplo 30 (4,00 g, 14,7 mmol), dimetilformamida (60 ml) e N-metilmorfolina (3,40 ml, 30,9 mmol). A mistura foi arrefecida a -23°C, tratada com cloreto de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (4,03 g, 21,0 mmol). Passadas 2 h a -23 °C e 21 h à temperatura ambiente a mistura foi vertida numa solução saturada de NaHC03 e extractada com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, depois seca sobre Na2S04 e evaporada para dar um sólido branco que foi recristalizado com cloreto de metileno/éter 1:15 (v/v) (colheitas múltiplas) dando 6,28 g (86%) do produto desejado como um sólido branco em flocos: p.f. 159-160°C; TLC (15% CH3OH/85% CHC13) Rf = 0,63; λΕ RMN (CDC13) δ 8,78 (1H, d), 7,14 (1H, d), 6,18 (2H, d largo), 4,44 (1H, dd), 4,27 (1H, m), 4,10 (1H, m), 3,37 (1H, dd), 3,30-3,12 (3H, m), 1,89 (1H, septet), 1,46 (9H, s), 0,94 (3H, d), 0,88 (3H, d). Análise calculada para C25H43N3°5S: c, 60,33; H, 8,71; N, 8,44. Verificada: C, 60,43; H, 8,68; N, 8,51. EXEMPLO 30 H-L-f 4-tiazolil)Ala-amida de (2S.3R.4S)-2-amino-l-ciclo-hexil- -3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano
Adicionou-se ácido trifluoroacético (50 ml), lentamente, através de uma cânula, a uma solução do composto resultante do Exemplo 3P (6,27 g, 12,6 mmol) em cloreto de metileno (50 ml) a 0°C. A mistura de reacção foi agitada durante
c 74 192 4805.PG.02 -21-3 h a 0°C e concentrada in vacuo (banho a 40eC) para dar um óleo que foi basifiçado até pH 10-11 com K2C03 aquoso. 0 produto foi extractado com clorofórmio, seco sobre Na2S04, filtrado e concentrado para dar uma espuma. À recristalização com cloreto de metileno/hexano 1:4 (v/v) deu 5,00 g (100%) do produto desejado como um sólido branco fofo: p.f. 111-112"C; TLC (15% CH3OH/85% CHC13) Rf = 0,46; 1H RMN (CDCl3) 6 8,77 (1H, d), 7,40 (1H, d largo), 7,13 (1H, d), 4,54 (1H, m), 4,25 (1H, m), 3,80 (1H, dd), 3,33 (1H, dd), 3,25-3,12 (3H, m), 0,95 (3H, d), 0,86 (3H, d).
Análise calculada para C20H35N3O3S: C, 60,42; H, 8,87; N, 10,57. Verificada: C, 60,05; H, 8,65; N, 10,42.
EXEMPLO 3R (2S)-2-benzil-3-(l-metilPÍperazin-4-ilsulfonilλpropionil-(l·)-—f4-tiazolil^Ala-amida de (2S.3R,4Sl-2-amino-l-ciclo-hexil-3.4- -di-hidroxi-6-metil-heptano
Ao ácido resultante do Exemplo 3G (1,000 g, 3,064 mmol), a amina resultante do Exemplo 3Q (1,100 g, 2,792 mmol) e 1--hidroxibenzotriazolo (1,022 g, 7,563 mmol) em dimetilformamida (20 ml) foi adicionada N-metilmorfolina (0,35 ml, 3,2 mmol). A mistura foi arrefecida a -23°C e tratada com hidrocloreto de l-(3-dimetilaminopropil)-3~etiicarbodiimida (0,760 g, 3,96 mmol). Passadas 2 h a -23°C e 14 h à temperatura ambiente, a mistura de reacção foi vertida numa solução saturada de NaHC03 (100 ml) e extractada com acetato de etilo (2 X 50 ml), que foi lavada com água (2 X 50 ml) e salmoura (50 ml) e depois seca sobre Na2S04 e evaporada para dar 1,94 g. Recristalização em etanol (15 ml)/ /hexano (90 ml) deu 1,559 (79%) de um sólido branco: p.f. 169-170eC; TLC (10% CH3OH/90% CHC13) Rf = 0,40; % RMN (CDC13) δ 8,73 (1H, d), 7,43 (1H, d), 7,37-7,16 (6H, m) , 6,23 (1H, d), 4,63 (1H, dd), 2,30 (3H, s), 0,95 (3H, d), 0,87 (3H, d).
Análise calculada para C35H55N506S2*0,75 H20: C, 58,43; H, 7,91; N, 9,73. Verificada: C, 58,51; H, 7,74; N, 9,60. 74 192 4805.PG.02 -22- EXEMPLO 4 22-
Preparação alternativa de N-Boc-3-f 4-tiazolil)-L-alanina EXEMPLO 4A (2-BromoaliHacetoamidoacetato de etilo A uma solução do produto do Exemplo 3H (3,36 g, 10,0 mmol) em dimetilformamida (10 ml) foi adicionado cloreto de sódio (586 mg, 10,0 mmol), água (360 μΐ, 20 mmol) e ácido clorídrico 4 N em dioxano (0,12 ml, 0,5 mmol). 0 recipiente de reacção foi posto sob uma pressão positiva de azoto. A mistura de reacção foi aquecida em refluxo durante 24 horas e depois concentrada in vacuo. O resíduo obtido foi diluído com água (5 ml) e extractado com éter (3 X 15 ml). Os extractos orgânicos combinados foram descorados com carvão vegetal (0,5 mg) secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados in vacuo para dar o produto em epígrafe (2,51 g, 95%) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,29 (t, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,99 (m, 2H), 4,22 (q, 2H), 4,79 (m, 1H), 5,53 (d, 1H), 5,68 (m, 1H), 6,44 (d, 1H); IV (película) 1195, 1220, 1370, 1540, 1660, 1740, 2990, 3050 e 3300 cm"1. EM (DCI/NH3) m/e 264/266 (M+H)+, 281/283 (M+H+NH3)+.
Análise calculada para CgH14N03Br: C, 40,92; H, 5,34; N, 5,30. Verificada: C, 42,04; N, 5,48; N, 5,26.
EXEMPLO 4B N-Boc-f 2-bromoalil)qlicina
Uma lama do produto do Exemplo 4A (16,2 g, 61,3 mmol) em solução de cloreto de potássio 0,1 N (300 ml) que continha tampão de fosfato 0,2 M a pH 7,0 (30 ml) foi tratada com uma solução de subtilisina Carlsberg (4 mg) numa solução de cloreto de potássio 0,1 N (3 ml). 0 pH foi mantido entre 6,5 e 7,25 por adição de uma solução de hidróxido de sódio 2,0 N por meio de um "pH-Stat". Passados 25 minutos a velocidade da hidrólise baixou
74 192 4805.PG.02 -23- notavelmente e o D-éster que não reagiu foi extractado com cloreto de metileno (3 X 150 ml). A fase aquosa resultante foi tratada com acetato de cobalto (II) (6 mg) e Acylase I (80 mg). A mistura de reacção foi agitada durante 4 horas e verificou-se que a reacção estava completa. 0 pH da mistura de reacção foi ajustado a 10 por adição de carbonato de sódio sólido. A solução resultante foi tratada com dicarbonato de di-terc-butilo (6,55 g, 30 mmol) dissolvido em THP (100 ml) e agitada vigorosamente durante 16 horas. A solução aquosa foi lavada com hexano (200 ml) para remover qualquer reagente protector que não reagiu. A camada aquosa foi ajustada a pH 2,5 por adição de hidrogenossulfato de potássio sólido e extractado com acetato de etilo (2 X 200 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 ml), seca sobre sulfato de magnésio e concentradas in vacuo para dar o composto em epígrafe (7,30 g, 81%) como um sólido cristalino amarelo claro. [a]p a 25°C = -9,86° (MeOH), c = 1,085. RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,48 (s, 9H), 2,91 (m, 2H), 4,52 (m, 1H) , 5,19 (d, 0,5H), 5,53 (m, 1H), 5,71 (s, 1H), 6,79 (d, 0,5H), 11,3 (s, 1H); IV (CDCI3) 1150, 1250, 1400, 1500, 1620, 1640, 1710, 3000, 3350 e 3520 cm-1. (DCI/NH3) m/e 311/313 (M+H+NH3)+. Análise calculada para CioHi6N04Br: C, 42,12; H, 5,66; N, 4,91. Verificada: C, 41,38; H, 5,59; N, 4,75.
EXEMPLO 4C Ácido (2R)-N-Boc-2-amino-5-bromo-4-oxopentanóico A uma solução do produto do Exemplo 4B (2,00 g, 6,80 mmol) em água (30 ml) e tetra-hidrofurano (15 ml) arrefecida a 0eC foi adicionada N-bromossuccinimida (1,45 g, 8,16 mmol) em três porções durante 20 minutos. Depois de completada a adição, o banho de gelo foi removido e a solução foi agitada durante 4 horas. 0 tetra-hidrof urano foi removido in vacuo e o produto foi extractado com acetato de etilo (3 X 35 ml). Os extractos orgânicos foram combinados e lavados com solução de cloreto de sódio a 5% (25 ml) e salmoura (25 ml), secos sobre sulfato de
74 192 4805.PG.02 -24- magnésio e concentrados in vacuo para dar o composto em epígrafe (1,70 g, 81%) % RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,45 (s, 9H), 3,30 (m, 2H), 3,93 (s, 2H), 4,61 (m, 1H), 5,51 (d, 1H). EM (DCI/NH3) m/e 310/312 (M+H)+, 327/329 (M+H+NH3)+.
EXEMPLO 4D Ácido (2R)-N-Boc-2-amino-3-(4-tiazolil)propanóico À uma solução do produto do Exemplo 4C (91 mg, 0,293 mmol) em tetra-hidrofurano (5 ml) foi adicionada tioformamida (17,7 mg,-0,29 mmol). [A tioformamida foi preparada fazendo reagir um pequeno excesso de penta-sulfureto de fósforo com formamida em tetra-hidrofurano. A solução resultante foi diluída com hexanos e filtrada através de um tampão de sílica-gel e armazenada a -25’C]. A solução resultante foi deixada em repouso durante dezasseis horas e depois concentrada in vacuo para dar um resíduo que foi submetido a partição entre éter dietílico e bicarbonato de sódio aquoso. A camada aquosa foi lavada com éter (2 X 10 ml) e cloreto de metileno (10 ml) ajustou-se o pH a 2,3 com hidrogenossulfato de potássio sólido e extractou-se com éter (3 X 20 ml). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio e concentrados in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido cristalino branco (55 mg, 71%).½ RMN (300 MHz, CDCI3) δ 1,48 (8, 9H), 3,48 (m, 2H), 4,52 (m, 1H), 5,61 (m, 1H), 7,18 (d, 1H), 8,91 (d, 1H). EXEMPLO 5
Preparação alternativa do ácido (2R)-N-Boc-2-amino-5-bromo-4--oxopentanóico EXEMPLO 5A f2-cloroaliliacetamidomalonato de dietilo A uma suspensão de hidreto de sódio a 95% (17,2 g, 680 mmol) em tetra-hidrofurano (1,2 1) foi adicionado 2,3- 74 192 4805.PG.02 -25-
r^65iic«x»^8S Λ’ΤΑΪϊ*' -dicloropropeno (100 g, 900 mmol), acetamidomalonato de di-etilo (146 g, 672 mmol) e brometo de tetrabutilamónio (6,00 g). A suspensão espessa resultante foi aquecida em refluxo sob azoto durante 20 horas. A mistura de reacção foi concentrada in vacuo e o resíduo resultante foi submetido a partição entre água (200 ml) e uma mistura de éter (300 ml) e cloreto de metileno (100 ml). A fase orgânica foi lavada com solução de cloreto de sódio a 5% (200 ml) e salmoura (200 ml), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada in vacuo. O sólido resultante (195 g) foi dissolvido em hexanos quentes (1300 ml) e deixado arrefecer até à temperatura ambiente e repousar durante a noite para dar o composto em epígrafe como um sólido cristalino (157 g, 80%) p.f. 76,3°C. RMN (300 MHz, CDCI3) δ 1,29 (t, 6H), 2,05 (s, 3H), 3,48 (s, 2H), 4,28 (m, 4H), 5,18 (m, 1H), 5,29 (m, 1H), 6,92 (bs, 1H); IV (CDC13) 1140, 1180, 1200, 1240, 1270, 1300, 1500, 1630, 1680, 1740, 2950, 2990 e 3300 cm"1. EM (DCI/NH3) m/e 292/294 (M+H)+, 309/311 (M+H+NH3)+. Análise calculada para Ci2H18N05cl; C, 49,41; H, 6,22; N, 4,80. Verificada: C, 49,18; H, 6,29; N, 4,75. EXEMPLO 5B (2-cloroalil)acetamidoacetato de etilo 0 produto do Exemplo 5A (137 g, 500 mmol) foi hidrolisado e descarboxilado pelo procedimento descrito no Exemplo 2A para dar o composto em epígrafe (105,4 g, 96%) como um óleo amarelo claro que cristalizou após repouso. ^ RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,31 (t, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,79 (m, 2H), 4,22 (q, 2H), 4,79 (m, 1H), 5,23 (m, 1H), 5,29 (m, 1H), 6,61 (m, 1H); IV 1200, 1220, 1280, 1300, 1370, 1440, 1550, 1638, 1659, 1740, 2890, 2990, 3050 e 3300 cm-1. EM (DCI/NH3) m/e 220/222 (M+H)+, 237/239 (M+H+NH3)+. Análise calculada para C9H14N03C1: c, 49,21; H, 6,42; N, 6,38. Verificada: C, 46,58; H, 6,05; N, 6,02.
Ácido (2R)-N-Boc-2-amino-5-bromo-4-oxopentanóico 74 192 4805.PG.02 0 produto do Exemplo 5B é tratado pelo procedimento de acordo com os Exemplos 4B e 4C para proporcionar o produto desej ado. EXEMPLO 6
Preparação Alternativa do Ácido 2(S) Benzil-3-fl-metilpiperazin- -4-ilsulfonil)propiónico
EXEMPLO 6A
Sal de sódio do ácido 2-carbometoxi-3-fenilpropano-l-sulfónico A uma solução etanólica 0f3 M do produto do Exemplo 3B (Z)--l-bromo-2-carbometoxi-3-fenil-2-propeno (0,98 equivalentes molares), adicionou-se durante uma hora a 50°C, uma solução aquosa 1,4 M de sulfito de sódio (1,0 equivalente molar). A mistura foi agitada durante 10 horas a 50eC e depois o etanol foi removido sob pressão reduzida, a 50°C. Juntou-se acetato de etilo (3 kg para 1 kg de brometo) e a mistura foi agitada durante mais 15 minutos e deixada em repouso durante 10 minutos. As camadas separaram-se e a camada aquosa foi lavada como anteriormente com duas partes alíquotas adicionais de acetato de etilo (1 kg para 1 kg de brometo).
Adicionou-se níquel Raney (1 kg para 10 kg de solução aquosa) à solução aquosa que depois foi posta sob vácuo e purgada com azoto seguido de hidrogénio (3 X) e posta sob uma pressão de 275,76 kPa (40 psi) de hidrogénio durante 6,5 a 9,5 horas. 0 níquel Raney foi removido por filtração usando pressão de azoto e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida a 55eC. Uma solução aquosa de acetona a 10% (0,3 kg para 1 kg de brometo de partida) foi adicionada ao resíduo obtido e a mistura
74 192 4805.PG.02 -27- foi aquecida a 50°C durante 30 minutos. Acetona adicional (3 kg para 1 kg do brometo de partida) foi adicionada lentamente durante uma hora para realizar a cristalização do produto. Após agitação durante uma hora, o produto foi removido por filtração e lavado com acetona para dar o produto em epígrafe ((60-65%). P.f. 255°C (dec). Obteve-se uma segunda colheita adicionando mais acetona (2,5 kg para l kg de brometo de partida), arrefecendo a -20°C durante 10-12 horas e removendo a segunda colheita por filtração. Desta maneira foi obtido um rendimento adicional de 13-40% do composto em epígrafe.
EXEMPLO 6B 2-Benzil-3-fl-metilpiperazin-4-ilsulfonil^propionato de metilo 0 produto do Exemplo 6A (1 equivalente molar) foi misturado com pentacloreto de fósforo (1,5 equivalentes molares) e aqueceu-se a 70-75°c durante 3-4 horas. A mistura de reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e depois diluída com tolueno (16,7 equivalentes molares) e adicionada a uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% (4 kg para l kg de pentacloreto de fósforo) enquanto a temperatura era mantida abaixo de 40°C. A mistura foi agitada durante 5 minutos, deixada assentar durante 15 minutos e depois as fases ficaram separadas. A lavagem com cloreto de sódio foi repetida como acima se descreveu. A fase de tolueno foi arrefecida a 5°C e juntou-se N-metilpiperazina (3 equivalentes molares em 3 equivalentes molares de tolueno) mantendo a temperatura abaixo de 15°C. A mistura foi agitada durante 4-6 horas e depois lavada com hidróxido de sódio aquoso a 8% (2 X 3,4 kg de pentacloreto de fósforo). As lavagens básicas combinadas foram re-extractadas com tolueno (0,25 kg para 1 kg de solução de hidróxido de sódio). Os extractos de tolueno combinados foram lavados com água (1 kg para 1 kg de pentacloreto de fósforo) e o tolueno foi removido por destilação sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafre (65-70%) como um óleo viscoso que cristaliza após repouso. EM (DCI/NH3) m/e 341 (M+H)+.
74 192 4805.PG.02 -28-
EXEMPLO 6C Ácido f 2S)-2-Benzil-3-(l-metilpiperazin-4-il sulfonil)propiónico 0 produto do Exemplo 6B (69 kg, 20 mol) em acetona (420 kg)/água (960 kg) foi ajustado a pH 8,0 usando hidróxido de sódio 1 N. Juntou-se Alcalase™ (Novo Industries, Dinamarca) (Subtilisina Carlsberg) (6,9 1) e o pH foi mantido entre 7,9 e 8,4 por adição de hidróxido de sódio l N. Quando 80% da quantidade teórica de hidróxido de sódio ficou consumida, a reacção foi extinta por adição de acetato de etilo. A mistura de reacção fo-i concentrada até metade do volume original sob pressão reduzida e depois lavada com acetato de etilo (2 X 700 kg). O volume da fase aquosa foi concentrado para metade e o pH ajustado para 5,2. A mistura de reacção foi tratada com resina XAD-16 (50 kg), agitada durante 18 horas e aplicada a uma coluna de resina XAD-16 (50 kg). A coluna foi eluída com água (500 kg) e depois com 35% de etanol em água (1000 kg) para dar um resíduo que foi tratado com isopropanol (270 kg) e aquecido a 75eC. Depois do arrefecimento até à temperatura ambiente e, subsequentemente, até -5°C, obteve-se material cristalino. O sólido foi removido por filtração, lavado com isopropanol frio (30 kg) e seco a 50°C para dar o composto em epígrafe (13 kg, 49%). EM (DCI/NH3) m/e 327 (M+H)+. Este composto pode ser recristalizado com isopropanol/água 1:1. EXEMPLO 7
Preparação Alternativa de 2(S^-2-benzil-3-(l-metilpjperazin-4--ilsulfonil}propionil-L-(4-tiazolil)Ala-amida de (2S.3R.4S^-2--amino-l-ciclo-hexil-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano
EXEMPLO 7A (2S.3R.4S\-2-ami no-l-ciclo-hexil-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano
Uma solução a 3,5% de 2S-l-butiloxicarbonilamido-l-ciclo--hexil-3R,4S-di-hidroxi-6-metil-heptano em ácido clorídrico
74 192 4805.PG.02 -29- etanólico 4 N foi preparada a 0-5eC. Após 4 horas a 0-5*0, borbulhou-se azoto através da mistura de reacção para remover o ácido clorídrico dissolvido. O solvente foi removido sob pressão reduzida a 50 "C para dar um sólido que foi dissolvido em acetato de etilo e água. Adicionou-se carbonato de potássio para ajustar o pH da mistura entre 10 e 11 e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extractada com porções adicionais de acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre sulfato de magnésio e concentrados sob pressão reduzida a 50°C para dar um sólido. O sólido foi cristalizado dissolvendo-o numa quantidade mínima de etanol a 40 °C e depois adicionou-se lentamente, água até a proporção de etanol para a água ser de 40/60 (p/p). A solução foi arrefecida a 0-5*C durante 2 horas e o produto foi recolhido por filtração. O sólido foi depois seco sob vácuo a 45°C para dar o composto em epígrafe como um sólido branco cristalino (65-72%). P.f. 106--108*C. EM (DCI/NH3) m/e 244 (M+H)+.
EXEMPLO 7B
Boc-L-f4-tiazolil^-Ala-amida de (2S.3R.4S)-2-amino-l-ciclo-he-xil-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano A uma solução do produto do Exemplo 7A (14,25 g, 58,5 mmol), N-boc-L-(4“tiazolil)alanina (17,45 g, 64,4 mmol) e hidrato de 1-hidroxibenzotriazolo (H0BT) (9,86 g, 64,4 mmol) dissolvidos em dimetilformamida (DMF) (33 ml) e arrefecida a 0-5*C num banho de gelo, foi adicionada, gota a gota, durante 30 minutos, uma solução de 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) (14,5 g, 70,3 mmol) dissolvida em DMF (27 ml). Passada uma hora, deixou-se a mistura de reacção aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 24 horas. A reacção foi extinta por adição de ácido cítrico (1,14 g, 6,0 mmol) e etanol (1,31 ml, 1,05 g, 22,0 mmol). A mistura foi agitada durante 1 hora e juntou-se depois acetato de etilo (285 ml). Após mais 30 minutos, o produto sólido secundário foi removido por filtração e lavado com acetato de etilo (48 ml). Juntou-se mais acetato de etilo (1,9 1) e a fase orgânica foi lavada com cloreto de sódio
74 192 4805.PG.02 a 1% (713 ml)/ ácido cítrico a 5% contendo cloreto de sódio a 1% (2 X 713 ml), bicarbonato de sódio a 8% (2 X 713 ml) e cloreto de sódio a 20% (2 X 713 ml) e concentrada sob pressão reduzida para dar um sólido branco sujo. 0 sólido foi dissolvido em isopropanol (200 ml) com aquecimento, tratado com carvão activado a 50°C durante uma hora e filtrado através de Celite. O filtrado foi diluído com isopropanol (50 ml) e agitado à temperatura ambiente com um agitador mecânico durante 15 horas. A suspensão do sólido foi arrefecida a 0-5°C com um banho de gelo e agitada a esta temperatura durante 3 horas. 0 sólido foi removido por filtrção a frio, lavado com isopropanol/heptano a 1:1 frio (100 ml) e seco numa estufa de vácuo a 50eC durante 48 horas para dar o composto em epígrafe como um sólido branco com um rendimento de 85%. P.f. 156-158°C. EM (DCI/NH3) m/e 498 (M+H)+.
EXEMPLO 7C H-L-í4-tiazolil)Ala-amida de (2S. 3R.4S)-2-amino-l-ciclo-hexil- -3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano
Foi preparada uma solução a 12% do produto do Exemplo 7B, a 15-25°C, em ácido clorídrico aquoso 3 N. Após 4 horas a 15-25°C, a mistura de reacção foi extinta vertendo-a numa mistura de hidróxido de sódio 4%/cloreto de sódio 15%/aeetato de etilo. 0 pH da mistura foi levado para 10-12 por adição de hidróxido de sódio a 10%. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extractada com acetato de etilo (2 X). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com cloreto de sódio a 25% (2 X), secos sobre sulfato de magnésio, tratados com carvão activado a 50°C durante uma hora e filtrados através de Celite. 0 filtrado foi concentrado sob pressão reduzida a 45°C até um sólido. O sólido foi cristalizado por dissolução numa quantidade mínima de acetato de etilo (5 X em peso) e trituração com heptano até a relação do acetato de etilo para o heptano ser 30/70 (p/p). A solução foi arrefecida a 0-5"C, agitada durante duas horas e depois filtrada. 0 sólido foi seco numa estufa de vácuo a 45°C durante 60 horas ou até a perda na secagem ser inferior a 0,1%.
74 192 4805.PG.02 -31- O composto em epígrafe foi obtido como um sólido branco cristalino com um rendimento de 70-82%. P.f. 109-112°C. EM (DCI/NH3) m/e 398 (M+H)+.
EXEMPLO 7D (2S)-2-Benzil-3-(l-metilpÍperazin-4-ilsulfonil)propionil-L-( 4--tiazolil)Ala-amida de f2S.3R.4S)-2-amino-l-ciclo-hexil-3.4-di--hidroxi-6-metil-heptano 0 produto do Exemplo 7C (3,00 g, 7,6 mmol), o produto do Exemplo 4C, o ácido 2S-benzil-3-(l-metilpiperazin-4--ilsulfonil)propiónico, (2,59 g, 7,9 mmol), e HOBT (1,27 g, 8,3 mmol) foram dissolvidos em DMF (30 ml). Depois de agitação à temperatura ambiente durante l hora, a mistura de reacção foi arrefecida a 0-5eC num banho de gelo e tratada, por adição gota a gota durante um período de 30 minutos, de uma solução de DCC (1,72 g, 8,3 mmol) dissolvido em DMF (8 ml). Passada 1 hora, a mistura de reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 24 horas. A mistura de reacção foi extinta com ácido cítrico (0,15 g, 0,26 mmol) e etanol (0,17 ml, 3,04 mol) e agitada durante 1 hora. Juntou-se acetato de etilo (60 ml) e a mistura foi agitada durante mais uma hora. 0 produto secundário foi removido por filtração e lavado com acetato de etilo (10 ml). O filtrado foi diluído com acetato de etilo (400 ml) e lavado com uma solução bicarbonato de sódio a 5% (2 X 100 ml), uma solução de cloreto de sódio a 1% (100 ml) e uma solução de cloreto de sódio a 20% (100 ml). 0 solvente foi removido sob pressão reduzida para dar um sólido branco sujo. O sólido foi dissolvido em isopropanol (80 ml) com aquecimento, tratado com carvão activado a 55°C durante 1 hora, filtrado através de Celite e agitado à temperatura ambiente com um agitador mecânico durante 12 horas. A suspensão branca do sólido foi arrefecida a 0-5°C num banho de gelo durante 3 horas e filtrado a frio. O sólido obtido foi lavado com heptano/isopropanol frio a 1:1 (25 ml) e seco numa estufa de vácuo a 55°C durante 48 horas para obter o composto em epígrafe (4,32 g, 81%) como um sólido branco. P.f. 169-170°C. EM (DCI/NH3) m/e 706 (M+H)+. 74 192 4805.PG.02
EXEMPLO 8 N-(4-morfolinilsulfonil^-('L)-fenilalanil-(L)-( 2-amino-4-tiazo-lillalanil amida de (2S.3R.4S)-2-amino-l-ciclo-hexil-3.4-di- -hidroxi-6-metil-heptano O composto em epígrafe pode ser preparado de acordo com o procedimento descrito no Pedido de Patente Europeia Na. EP 399556, publicado em 28 de Novembro de 1990. EXEMPLO 9 fS^-α-Γ(S)-a-rt-butilsulfonil)metil1hidrocinamido1-N-r(1R.2S, 3R)-l-ciclo-hexilmetil-3-ciclopropil-2.3-di-hidroxipropillimida- zol-4-ilpropionamida O composto em epígrafe pode ser preparado de acordo com o procedimento descrito no Pedido de Patente Europeia Ns EP 332008, publicado em 13 de Setembro de 1989. EXEMPLO 10 (2S)-2-Benzil-3-(l-metil-pjperazin-4-ilsulfonil^propionil-f L)--f4-tiazolil)Ala-amida do sal hidrocloreto de (2S.3R.4S)-2-ami-no-l-ciclo-hexil-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano
Cloreto de acetilo (3,27 g, 41,65 mmol) foi adicionado a etanol (150 ml) a 5°C. A mistura foi agitada durante 2 horas a 5°C e adicionada a uma suspensão do produto do Exemplo IR (30 g, 42,5 mmol) em etanol (150 ml) a 5°C. Passadas 2 horas, a mistura foi filtrada e o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno (300 ml) e o produto desejado foi precipitado por adição quer de heptano/acetato de etilo a 3: 1 (1500 ml) quer éter dietílico (1500 ml) ou éter t-butilmetilíco (1500 ml). Análise calculada para C35H56N506S2C1*0,5 H20: C, 55,94; H, 7,65; N, 9,32; Cl, 4,72; S, 8,53. Verificada: C, 56,06; H, 7,58? N, 9,30; Cl, 4,95? S, 8,17. 74 192 4805.PG.02 -33-
EXEMPLO 11
Comparações de Biodisponibilidade
As composições seguintes que incluem o composto I foram preparadas e determinou-se a biodisponibilidade de cada composição em cães em jejum.
Composição NB 1 O composto I foi titulado com ácido clorídrico para formar o sal di-hidrocloreto in situ. Este sal di-hidrocloreto foi dissolvido em PEG 400 e a solução foi encapsulada numa cápsula de gelatina elástica mole. Cada cápsula continha o equivalente de 100 mg do composto I.
Composição Na 2
Uma composição que compreende o sal di-hidrocloreto do composto I (110,4 mg), PEG 1450 (15 mg) e Avicel (150 mg) foi metida em cápsulas (cápsulas de gelatina dura, cinzentas, #000 para uso humano).
Composição Na 3
Uma composição que compreende o sal di-hidrocloreto do composto I (110,4 mg), PEG 1450 (150 mg) e lactose (150 mg) foi metida em cápsulas (cápsulas de gelatina dura, cinzentas, #000 para uso humano).
Composição Ne 4
Uma composição que compreende o sal di-hidrocloreto de composto I (115,9 mg), lactose (300 mg), amidoglicolato de sódio (47,6 mg), crospovidona (47,6 mg) e estearato de magnésio (5 mg) foi transformada em comprimidos.
74 192 4805.PG.02 -34-
Protocolos para Estudo da Biodisponibilidade Oral Cães (cães bigle, sexos misturados, pesando cerca de 10 kg) submetidos a jejum durante pelo menos 12 horas antes da administração. A comida foi reposta depois de ter sido recolhida a última amostra de sangue (24 horas). A água esteve sempre disponível.
Uma dose equivalente a 50 ou 100 miligramas do composto I foi administrada oralmente a cada cão, seguida de 20 ou 50 ml de água, respectivamente, através de um tubo de alimentação.
As amostras de sangue foram colhidas nos tempos seguintes: 0, 0,5, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 e 24 horas. As amostras de sangue de 3 ml de volume receberam EDTA como anti-coagulante. O plasma foi separado por centrifugação e congelado até ser analizado. As concentrações no plasma do sangue do composto I foram determinadas por HPLC. A biodisponibilidade foi calculada como se segue: % de biodisponibilidade = [(AUC)oral x D/(AUC)intravenosa] x 100. (AUC)oral e (AUC)intravenosa são as áreas sob a curva dos perfis concentração de plasma-tempo que se seguem à administração oral e intravenosa respectivamente. D é um factor de correlação para a diferença entre a administração intravenosa (3 mg/kg) e a administração oral (cerca de 10 mg/kg). 0 valor de (AUC) intravenosa usado corresponde ao valor médio para um grupo independente de 6 cães. Os dados sobre biodisponibilidade e a Cmax (concentração máxima) para as composições 1-4 estão representados na Tabela 1. (segue Tabela 1) -35- 74 192 4805.PG.02
Tabela 1
Comoosicão Ns de cães % de biodisponibilidade Média Desv. Pad. Cmax média ua/ml Desv. Pad. 1 6 90,7 17,3 3,8 1,0 2 8 17,6 21,9 1,3 1,4 3 8 27,6 32,2 1,2 0,7 4 6 43,7 30,0 2,7 2,0 Estes dados indicam gue o composto I tem uma biodisponibilidade de 2,1 a 5,2 vezes maior quando administrado oralmente como uma solução encapsulada em gelatina elástica mol quando comparado com várias composições em cápsula rígida ou comprimidos.
Os compostos de fórmula II são inibidores da renina e possuem um grau excelente de actividade e especificidade no tratamento da hipertensão no Homem e outros mamíferos. Os novos compostos do presente invento também são úteis no tratamento dos ataques congestivos cardíacos no Homem ou outros mamíferos. Os compostos de fórmula II também são úteis no tratamento de anormalidades vasculares nó Homem ou outros mamíferos, especialmente nas doenças vasculares associadas com diabetes, como a nefropatia diabética, neuropatia diabética e retinopatia diabética. Os compostos de fórmula II também são úteis no tratamento de doenças renais no Homem ou outros mamíferos, particularmente na deficiência renal aguda e crónica. Os compostos de fórmula II também são úteis no tratamento de psoriase no Homem ou outros mamíferos. À dose diária de um composto de fórmula II administrado a um ser humano ou outro mamífero em doses únicas ou divididas
74 192 4805.PG.02 -36- pode atingir quantidades de, por exemplo, 0,001 a 10 mg/kg de peso corporal diariamente ou, mais habitualmente, de 0,01 a 10 mg. As composições em dosagem única podem conter estas quantidades nos seus submúltiplos para perfazer a dose diária. A quantidade do ingrediente activo que pode ser combinada com os materiais transportadores para produzir uma forma de dosagem única depende do receptor tratado e do modo particular de administração.
Deve-se compreender, porem, que o nivel específico da dose para qualquer doente particular dependerá de vários factores que incluem a actividade do composto específico empregado, a idade, o peso corporal, o estado geral de saúde, sexo, a dieta, o tempo de administração, a via de administração, a taxa de excreção, a combinação de droga e a gravidade da doença particular a que é aplicada a terapia. O exposto é meramente ilustrativo do invento e não pretende limitar o invento aos compostos, métodos e composições descritas. Variações e alterações que são óbvias para um perito na arte são consideradas incluídas no âmbito e natureza do invento que são definidos nas reivindicações anexas.

Claims (10)

  1. 74 192 4805.PG.02 -37-
    REIVINDICACÕES 1 - Composição farmacêutica caracterizada por compreender uma solução de um composto de fórmula:
    na qual R-L é 4-piperazinilo, l-metil-4-piperazinilo, 1-metil-l-oxo--4-piperazinilo, 2-oxo-4-piperazinilo, 4-morfolinilo, 4-tiomor-folinilo ou l-metil-4-homopiperazinilo; R2 é benzilo, p-metoxibenzilo, 2-feniletilo, l-naftilmetilo ou 2-naftilmetilo? R3 é 4-tiazolilo, 2-amino-4-tiazolilo, 2-tiazolilo, 5-tiazolilo, 1-pirazolilo, 3-pirazolilo, l-imidazolilo# n--propilo, isopropilo, CH3S- ou CH3SCH2-; R4 é alquilo inferior ou ciclopropilo; R5 é hidrogénio ou alquilo inferior; e X é CH2 ou NH; ou um seu sal, éster ou pró-droga farmaceuticamonte aceitável num solvente farmaceuticamente aceitável, sendo a referida solução capsulada numa cápsula de gelatina elástica mole.
  2. 2 - Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por no composto R1 ser l-metil-4-piperazinilo, X ser CH2, R2 ser benzilo, R3 ser tiazolilo ou 2-amino-4-tiazolilo e R4 ser isobutilo.
  3. 3 - Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por no composto R^ ser 4-morfolinilo, X ser NH, R2 ser benzilo, R3 ser 2-amino-4-tiazolilo e R4 ser isobutilo.
  4. 4 Composição de acordo com a reivindicação 1, 74 192 /V- ,>á«i-*ww8Eí
    4805.PG.02 -38- caracterizada por o solvente compreender polietilenoglicol possuindo um peso molecular de cerca de 200 a cerca de 600.
  5. 5 - Composição de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por o solvente compreender ainda glicerina.
  6. 6 - Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a cápsula de gelatina elástica mole compreender cerca de 30% a cerca de 50% em peso de gelatina NF, cerca de 20% a cerca de 30% em peso de um plastificante e cerca de 30% a cerca de 40% em peso de água.
  7. 7 - Composição farmacêutica caracterizada por compreender uma solução de um composto de fórmula:
    ou de um seu sal, éster ou pró-droga farmaceuticamente aceitável num solvente farmaceuticamente aceitável, sendo a referida solução capsulada numa cápsula de gelatina elástica mole.
  8. 8 - Composição de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por o solvente compreender polietilenoglicol possuindo um peso molecular de cerca de 200 a cerca de 600.
  9. 9 - Composição de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por a cápsula de gelatina elástica mole compreender cerca de 30% a cerca de 50% em peso de gelatina NF, cerca de 20% a cerca de 30% em peso de um plastificante e cerca de 30% a cerca de 40% em peso de água. -39- 74 192 4805.PG.02
  10. 10 - Composição farmacêutica caracterizada por compreender uma solução do sal hidrocloreto de um composto de fórmula:
    num solvente farmaceuticamente aceitável que compreende polietilenoglicol possuindo um peso molecular de cerca de 400, sendo a referida solução capsulada numa cápsula de gelatina elástica mole. Lisboa, «16. J0L . 1992 Por ABBOTT LABORATORIES =0 AGENTE OFICIAL=
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